JPH02307059A - 反応容器 - Google Patents

反応容器

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JPH02307059A
JPH02307059A JP1129740A JP12974089A JPH02307059A JP H02307059 A JPH02307059 A JP H02307059A JP 1129740 A JP1129740 A JP 1129740A JP 12974089 A JP12974089 A JP 12974089A JP H02307059 A JPH02307059 A JP H02307059A
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reaction
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reaction vessel
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Toyoaki Uchida
豊明 内田
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Seiko Instruments Inc
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    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） この発明は、タンパク質あるいはペプチドのアミノ末端
からのアミノ酸配列分析を自動的に行う装置における、
２−アニリノ−５−チアゾリノンアミノ酸誘導体の逐次
生成を行う各反応を行わせる反応容器に関する。
〔発明の概要〕
本発明は、タンパク質あるいはペプチドのアミノ末端か
らのアミノ酸配列分析に用いられるエドマン反応に含ま
れる。２−アニリノ−５−チアゾリノンアミノ酸誘導体
の逐次生成を行う反応の反応動率を高めて、決定される
残基数を増やし、合わせて極微量の試料の分析を可能と
するものである。
〔従来の技術〕
従来、エドマン反応に基づきＡ　Ｔ　Ｚ　Ｍ導体を逐次
的に生成させる反応を行わせる反応容器として第５図お
よび第６図に示すようなものがある。
第５図に示す従来の反応容器は、フレーム１７内の２つ
のガラスブロック１８ａおよび１８ｂとにはさまれたメ
ンブランフィルタ−１９上のガラス１ｌｔ８ｆＥ２０に
吸着された試料に、ガラスブロック中央の流路を通して
エドマン反応の手順に従って試薬あるいは溶媒を供給さ
せるものである。
第６図に示す従来の反応容器は、三方切換コック２１を
経て真空ポンプ２２および窒素ガスボンベ２３と連結さ
れその内部を真空あるいは窒素ガスで満たされた状態に
することのできる反応室２４内にモーター２５によって
回転させることのできるガラスカップ２６と前記ガラス
カップ２６に反応に必要な試薬および溶媒を送る供給ラ
イン２７とそれらの試薬および溶媒を取り去る排出ライ
ン２８とを備えたものである。
〔発明が解決しようとする課題〕
しかしながら、前記第５図に示すような従来の反応容器
においては、ガラス濾紙２０を織っているガラス繊維の
隙間に試料が担持されるため、試薬あるいは溶媒が完全
に行きわたらず、試料との反応が不均一になり配列分析
における操り返し収率が低下することがあり、試料がａ
ｔの場合にはその傾向が著しくなることがあり分析でき
ないことがある。また、反応に使用される各種の試薬お
よび溶媒が一つの流路を通ってタンパク質試料に供給さ
れるため、それら同士の混合が生しることがある。
また、前記第６図に示すような従来の反応容器において
は、真空室内に回転する構造を持つため装置のメンテナ
ンスが煩雑であり、とりわけ１ａｆｆｌの試料を取り扱
う場合にはガラスカップが小型となり安定した回転を保
たせることが困難であった。
〔課題を解決するための手段〕
そこで本発明は前記の課題を解決するため、反応空間と
溶媒等の流体出入口とを有する非磁性体の反応室と、こ
の反応空間内に配置される磁性材料および試料保持材と
で構成された試料担体と、前記反応室内に配置され、前
記試料担体を磁力により浮上保持させ、垂直軸方向に移
動させる磁力手段と、前記試料担体の位置を検出するセ
ンサーと、を備えた構成とする反応容器とした。
〔作用〕
このような構成の反応容器によれば、反応空間内の試料
担体の表面にタンパク質あるいはペプチド試ギ４を一様
に分散させることができる。更に試料担体を浮上保持さ
せ、その試料担体を垂直軸方向へ移動させることにより
、試料と試薬あるいは溶媒との反応の効率を高めること
ができる。
〔実施例〕
以下、本発明の実施例について図面に基づいて説明する
。
（実施例１） 本実施例は、反応室中に試料担体を浮上保持する方法の
一例を示す。
第１図に示す反応容器１において、２は反応室であり、
この反応室２内の反応空間６にタンパク質試料を担持し
た磁性材料を持つ試料担体３が浮上保持されている。こ
の浮上保持は電磁石４　（（〃力手段）の発生する磁力
によるものであり、その位置は位置センサ５によってモ
ニターされている。
この電磁コイル４は上下２分割可能な反応室２内にあり
、反応室２内の反応空間６および試料担体３を上下から
はさむ位置に配置されている。更に反応室２には上部流
体出入ロアおよび下部流体出入口８が設けられており、
反応に要する試薬および溶媒を導入、排出できるように
なっている。
この反応室２は、リテーナ９で支えられている。
電磁石４および位置センサ５により試料担体３を垂直軸
方向に磁気浮上保持させる制御方法について、第２図の
ブロック図を基に説明する。まず電磁石４ａおよび４ｂ
の発生する磁力によって浮上している試料担体３と電磁
石４ａとの距離Ｇ、を位置センサ５ａにより検出し、試
料担体３と電磁石４ｂとの距離Ｇｚを位置センサ５ｂに
より検出する。試料担体３を電磁石４ｂおよび４ｂの中
間点に支持する場合にはこのようにして検出した２つの
距離Ｇ　＋　、Ｇ　ｚに相当する信号をブリッジ回路１
０で処理し、次に比較器１１において基準信号１２と比
較し、さらに電磁石４ａ、４ｂへの適正な電流値を信号
処理回路１３で演算して、各電流を増幅回路１４により
増幅して電磁石４ａ、４ｂの磁力の強度を制御し、距Ｉ
Ｇ、、Ｇ□を同じになるようにする。また、試料担体３
の位置を上下方向に移動させたい場合には、前述の距Ｍ
Ｇ、、ＧＺに見合う電磁石４ａ、４ｂの磁力を発生させ
る適正な電流値を信号処理回路１３で演算し各電流を増
幅回路１４へ送る。
このような反応容器においては、供給される試薬および
溶媒を効率よく試料担体上の試料に作用させることがで
きる。
（実施例２） 本実施例においては、実際には試料担体表面にタンパク
質試ｒ４を担持させて逐次的にＡＴＺ誘導体を生成させ
る方法とその誘導体の検出方法とを示す。
試料担体３は、第３図に示すように磁性材料である球形
フェライト１５の表面に試料保持材としてガラスコーテ
ィング１６を施した構造になっている。
ここにおいて前記フェライト１５の形状は球以外の方形
あるいは短筒形といったいかなる形状でもよく、又前記
フエライ目５の表面に被覆される試料保持材は、ガラス
以外にセラミックスあるいはポリフッ化ビニリヂン、ポ
リ　（メチルトルフルオロプロピルシロキサン）等の高
分子材料でもよい。
以下に述べる手順は、通常の自動気相エドマン法に準じ
ている。ポリプレン（−・キサジメトリンブロマイト′
）処理をした直径５ｍｍＣＤ試料担体３の表面に１ピコ
　（ｐ）モルのミオグロビンを含む５μｌの７０％の蟻
酸をのせ乾燥させる。これに続く、カップリング試薬、
バッファー蒸気、洗浄溶媒、切断試薬および抽出溶媒の
供給は、市販の気相自動配列分析装置の分析プログラム
（表１）に従っている。逐次的に得られたＡＴＺ誘導体
の検出には、４−アミノフルオレセイン（ＡＦ）を用い
る蛍光検出法を用いた。１５０１１ｅのブチルクロライ
ド溶液として得られたＡＴＺに、７５μｌの１％ビリシ
ーツを含むメタノール溶液容液と２５μｌの３０ピコ＜
ｐ　：　１０−”）モルのＡＦを含むメタノール溶液を
この順に加え混合後乾燥する。次に再び前述のＡＦを含
むメタノール溶液を２５μｐ加え、１０分間静置後乾燥
する。この乾燥試料を５０μｌのメタノールに溶解して
、そのうち２５μｌを液体クロマトグラフと蛍光モニタ
ーとから構成される検出システムにより分析した。検出
条件を表２に示す。また、第４図に上記の手順によって
得られる２０種類のフェニルチオカルバミルアミノ酸誘
導体の標準混合物の分離パターンを示す。それぞれの誘
導体の量は１０〜１５フ工ムトモルであり、全ての誘導
体を同定可能であることがわかる。
」ＪＬ−Ｆと ５ｔｅｐ　　Ｆｕｎｃｔｉｏｎ　　　　　　　ｔｌａｌ
ｕｅ　　　Ｅｌａｐｓｅｄ　Ｔｉｍｅユアルより抜粋） Ｒｈ５％フェニルイソチオシアネート／ヘプタンＲ１１
２，５％トリメチルアミゾ／水 Ｒ３ニトリフルオロ酢酸 ＳＬ　：ｎ−へブタン Ｓ２；酢酸エチル Ｓｌブチルクロライド 液体クロマトグラフによる検出条件 力　　ラ　　ム　　：　資生堂　ｃａｐｃｅｌｌ　（八
〇）Ｃ１Ｂφ４．１ｗＸ１５０ｆｌ カラム温度　：４３℃ 検　出　器　：島津製作所ＲＦ−５４０分光蛍光光度計
蛍光波長　：　４９４ｆｌ 励起波長：　５）３ｆｉ 送液ポンプ　：ウォーターズ６００Ｅシステム流　　　
　速　：　　ｔｏｔａｌ　　０．８ｄ／ｗｉｎグラディ
エンド　プログラム： （／１１）　ｌＱｍＭ　リン酸ナトリウム緩衝７ｇ　液
（ｐＨ８，０） Ｄ　メタノール （０アセトニトリル 〔発明の効果〕 以上説明したように、本発明による反応容器によれば、
反応室内に試料担体を浮上保持させることによって、供
給される試薬および溶媒を効率よく試料に作用させるこ
とができ、合わせてこれら試薬あるいは溶媒同士の混合
を最小限に抑えることができる。
【図面の簡単な説明】
第１図〜第５図は本発明による反応容器の実施例を示す
図であり、第１図は反応容器の断面図、第２図は電磁石
４および位置センサ５の制御ブロック図、第３図は試料
担体の断面図、第４図はフェニルチオカルバミルアミノ
酸誘導体の標準混合゛　物の分離パターン、第５〜６図
は従来の反応容器の断面図である。 １・・・反応容器 ２・・・反応室 ３・・・試料担体 ４・・・電磁石（４ａ−４ｂ） ５・・・位置センサ（５ａ−５ｂ） ６・・・空間 ７・・・上部流体出入口（１２ａ　−１２ｂ）８・・・
下部流体出入口（１３ａ　−１３ｂ）９・・・リテーナ １０・・・プリフジ回路 １１・・・比較器 １２・・・基準信号 １３・・・信号処理回路 １４・・・増幅回路 １５・・・フェライト １６・　・・ガラスコーティング 以上

Claims (6)

    【特許請求の範囲】
  1. （１）反応空間と溶媒等の流体出入口とを有する非磁性
    体材料からなる反応室と、該反応空間内に配置される試
    料担体と、該反応室内に配置され、該試料担体を浮上保
    持、移動及び回転させる磁力手段と、該試料担体の位置
    を検出するセンサーとを具備したことを特徴とする反応
    容器。
  2. （２）前記試料担体は、少なくとも磁性材料と試料保持
    材とから構成され、前記試料保持材は、前記試料担体の
    表面に形成されていることを特徴とする請求項１記載の
    反応容器。
  3. （３）前記試料保持材は、ガラス、セラミックスあるい
    はポリフッ化ビニリヂン、ポリ（メチルトリフルオロプ
    ロピルシロキサン）等の高分子材料であることを特徴と
    する請求項２記載の反応容器。
  4. （４）前記試料担体は、球形あるいは惰球形であること
    を特徴とする請求項２記載の反応容器。
  5. （５）前記反応室は、２つあるいはそれ以上の部分に分
    割可能であることを特徴とする請求項１記載の反応容器
    。
  6. （６）前記試料担体の表面は、前記反応室内面のいかな
    る部分とも接しないことを特徴とする請求項１記載の反
    応容器。
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