JPH02291266A - 核酸の分離方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、カチオン交換剤によって蛋白から核酸を分離
する方法に関する。

分子生物学において最も一投的に用いられる方法の１つ
に、制限酵素または修飾酵素を用いたＤＮＡなどの核酸
の操作方法がある。このような操作の後で実施する次の
工程がうまく行なえるか否かは多くの嚇合この操作で用
いた酵素が完全に除去されているか否かに依っている。

フェノール抽出法が、核酸溶液から酵素を除去する方法
として最も一般的に使用されている方法である。分子ク
ａ−二ングの際に用いられている一般的方法の１つにア
ルカリホスファターゼによる核酸のデホスホリレーシ腸
ンが多）る［Ｍａｎｉａｔｉｓ，　Ｔ．，　Ｆｒｉｔｓ
ｅｈ，ｗ．？，，　ａｎｄ　ｓａｍｂｒｏｏｋ，　Ｊ．
　（　１　９　８　２　）″Ｍｏ：ｔｅｃｕ１ａｒｃｌ
ｏｎｉｎｇ：　Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎ．ｕ
ａ’ｌ”，　Ｃｏｌｄ　ＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｕｒ　
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，　Ｃｏｌｄ　ＳｐｒｉｎｇＨａ
ｒｂｏｕｒ，　Ｎｌ３Ｗｙｏｒｋ〕。デホスホリレーシ
四ン後に、デホスホリル化核酸を他の核酸分子に連結す
るには、アルカリホスファターゼを完全に除去する必要
がある。

アルカリホスファターゼの除去は、現在ではフェノール
／クロロホルム抽出次いでエタノール沈澱により行なわ
れている［Ｍａｎｉａｔｉｓ，　Ｔ．　，　Ｆｒｉｔｓ
ｃｈ，凡？，，　ａｎｄ　８ａｍｂｒｏｏｋ　Ｊ．　（
　１　９　８　２　）　Ｏｐ”ｌ。

血液、あるいはヒト．動物及び植物組織、あるいはバク
テリア及び細胞培養物などの生物学的材料からＤＮＡを
単離するためＫは、ＤＮＡを蛋白から分離する必要があ
る。ｒノムＤＮＡ’＆抽出する場合には、ｒノムＤＮＡ
がヒストン及び他の蛋白に強く結合しているため抽出が
一層困難である。

従来、蛋白及び他の不純物からＤＮＡを分離するには、
デロテイナーゼとフェノールなどの有機溶剤とを組合わ
せて使用する方法が採用されている。

この方法によって分離後に、不要な微會の有機済４１を
除去するＫは、長時間を要する透析がしばしば採用され
ている。今日では、純粋な形態にあるＤＮＡは多くの分
野で使用されている。例えば、診断薬分野ではＤ　Ｎ　
ｈｆ′ａ−プが将来重要な役割りを果すことが多くのデ
ータから指摘されている。

しかしながら、現在のＤＮＡ抽出法では、診断系分野で
ＤＮＡデロープを広く使用する際に大きな制限がある。

従って、ＤＮＡの請判ヲ簡略比し迅速に行なうことので
きる方法は、ＤＮＡ利用分野において極めて重要であり
、特にそれが自動比可能な暢合ＶＣは一層重要な方法と
なり得る。

フェノール抽出法は、核酸溶液の除タンパク法として最
も一般的に採用されている方法である。

しかしながらいくつかの欠点を有している。フェノール
を工毒性のある有機ｍ剤であり、また強い蛋白変性削で
あるため、皮膚に接触すると重大な火傷を引き起こし、
しげしげ緊急の治療を行なう必要が生じる。今日では、
多くの判造業者によって、精製することなく直接使用す
ることのできる透明な液ｆヒフェノールが提供されてい
る。しかしながラ安価な結晶形のフェノールの場合には
、使用前に再蒸留する必要がある。１た、保存中にフェ
ノールが黄色ま１こはピンク色になった場合にも再蒸留
する必夢がある。このような変色は、保存中にキノン、
ゾアシツドなどの７ェノール性酸化生成物が生じたこと
を示すものである。これらの不純物（エホスホジエステ
ル結合また（工ＤＮＡ鎖の架橋結曾の開裂ケ引き起こス
ｆこめ、除去する必快がある。実際に、フェノール抽出
法は、ＤＮＡ鎖中に切れ目を起こすことが知られている
。毒性のあるフェノールの再蒸留には長時間を要し、ま
た危険でもある。再蒸留はがスフーｒ中で特別の注意を
払って実施する必要があり、また濃縮された残渣は爆発
性であるため、蒸留フラスコ中のフェノールの量は１０
０一以下にならないようにしなければならない。また、
フェノールを工使用前には、抽出パツファーで平衡比さ
せて飽和させる必要がある。攪拌工程及び分離工程が必
曹とされるため、自動化Ｋは特に不都合である。蛋白の
多くは、白い毛房状の中間層として分離するため、ＤＮ
Ａ７含む上の水層を残す際に核酸のロスが生じる。

ソビエト連邦特許出願ＡＳσ−Ａ−１３７３７０９（ｐ
ａｐｏｒｏｖ　ａｔ　ａｌ）　Ｖｃ｝Ｘ、塩析次いで強
酸性カチオン交換樹脂による選択によりデスオキシリボ
ヌクレオ蛋白から？スオキシリボ核酸を分離する方法が
記載されている。このイオン交換樹脂１工ＤＮＡ除タン
パク剤の形態ではなく、透析Ｋよる＠０度の減少期間中
に蛋白に対してＤＮＡと競争的に反応する吸着削の形態
にある。この方法では、最初に高頃濃度によりＤＮＡ溶
液が除タンパクされ、次いでイオン交換樹脂とｏＮｔＪ
ｌ液が接触し、該溶液のイオン強度は同時透析ＶＣより
徐々に減少する。この方法では多くの工程が必要であり
、数時間を要する。更には、この方法は、ケ９ノムＤＮ
ＤＡを少槍で迅速に調規するには不適当であり、またＤ
ＮＡから制限酵素あるい１工修飾酵素を迅速に除去丁る
には不適当である。ソビエト連邦特許出願▲Ｓσ−Ａ−
１３７３７０９には、制限酵素による消化についてのデ
ータ、あるいはＤＮＡプロープのターゲットとして使用
するための精表ＤＮＡについての吸収スペクトルまたは
適合性に関するデータが記載されていないため、この方
法によって精〜されたＤＮＡの特性が不明である。多く
の蛋白は、ソビエト連邦特許出願Ａ８［Ｔ−Ａ−１　３
　７３７０９に記載された一条件ではカチオン交換剤と
結合する。この特許出願に記載された方法では実際的な
点が無視されており、洗剤や加水分解酵素を使用するこ
とＫよってカチオン交換剤への変性蛋白の吸着が阻害さ
れることから、この特許出願Ｋ記載された方法を修正す
ることなくそのま１微生物からＤＮＡを分離する方法Ｋ
適用できるか否がＥ工不明である。

本発明の目的は、上記したような有毒な有機溶剤、高塩
濃度及び透析を使用する必要のなＣ゛、核酸試料調裂の
ための迅速で簡単な方法を提供することにある。

しかして、本発明によれば、核酸と蛋白の混合物ケ、該
蛋白の等電点未膚のｐＨでカチオン交換剤と接触せしめ
、次いで該核酸を回収することがらなる、蛋白から核酸
ケ分＠ｆる方法が提供されろ。

十分に低いジ１（等議点未満）では、蛋白はプラスＶＣ
荷電しており、カチオン９：Ｆｌ８剤上に保持される。

一方、核酸は、そのホスフェート官能基かマイナスに荷
電しているため、カチオン交換剤と反発する。核酸とイ
オン交換剤との間に（工相互作用はないため、不活性な
マトリソクスを使用することＫ．Ｋつ、核酸冫定縫的に
回収することができる。

必要により、カチオン交換剤のＰＨな上昇させて蛋白を
溶出させて除き、次いで周知の方法で採取することによ
り蛋白を回収することができる。

通常、カチオン交換剤からの蛋白の遊離を促進するため
にも塩濃度を上昇させる。しかしながべそれ以前に核酸
溶液を回収するため、透析することなく次の工程に使用
することのできる核酸のパツファ一溶液が得られる。

従って、本発明による方法は、ＤＮＡあるいはＲＮＡ操
作に関する研究、または現在フェノール抽出を必要とし
ている研究手法に適用することができる。

本発明の１つの態様によれば、核酸と蛋白の浴液な適当
なカチオン交換剤のカラムに付し、該カラムから核酸ｔ
＠出して回収する。本発明の方法は、カートリッジ、バ
ッチあるいはメンデレンシステム？用いて実施すること
もできる。

核酸と蛋白の溶液とイオン交換剤とを接触させる前に、
核酸と蛋白の混合物をプロテイナーゼとトモにプレイン
キュベートしてもよくそして必要に応じて更にナトリウ
ムｐデシル７エート（ＳＤＳ）とともにプレインキュベ
ートしてもよい。あるいハ、酸、アルカリ、揮発性カオ
トロピックｔｌＡＹ．ｃトを用いる他の方法、または慣
用的方法を使用し、次いで中和する方法を採用すること
もできる。

ＤＮＡもしくはＲＮＡゾロープ分析用の組織サンプルを
調勾する場合にはプレインキュベーション工程が通常必
要であり、このような工程Ｋより本発明の方法の用途範
囲が広がる。

従来使用されている液相一液相フェノール抽出法あるい
は塩析次いで透析による方法とは異なり、本発明の固相
一液相カチオン交喚システムは、生物学的材料からのＤ
ＮＡもしくはＲＮＡの自動化調書用装置に適用すること
ができる。

カチオン交換材剤、以下に記載する実施例がら証明され
るように、分離される核酸に応じて、弱いカチオン交換
剤あるいは強いカチオン父換削が用いられる。溶液を工
低モル濃度パッファ−が適当である。浴液のｐＨは通常
３．５〜６．５の範ｌｍが適当である。

本発明の１つの態様においては、分離対象であるサンプ
ルｔ１約６．０の低モル濃度…中であらかじめ平衡比さ
れたカチオン交換剤のカラムに付す。

この楊合、ｐＨ６．０でマイナスＶＣ荷電したＤＮＡｔ
Ｘ口−デイングバソファ−中ＶＣ各出し、他方、蛋白％
工保持され、ＰＨ変ｆヒ後に、例えば約９．０の一のバ
ツファーで洗浄後に初めて溶出する。以下に示す実施例
１で用いられるアルカリホス７アターゼの存在を検出す
る感受性の高いアグセイ法で評価した所、木発明による
分離を工絶対的なものと思われる。

添付した図面は、実施例１に記載したカチオン交洟カラ
ムクロマトグラフイーにより得られたアルカリホスファ
ターゼの分画のＰＡＧＩＩＨ　（　ｙｊ？リアクｌＪル
７ミ｝Ｆ／７’ル竃気泳動冫分析のオートラジオグラム
ケ示す。

以下の実施例により本発明を更に詳細に説明する。

実施例１ 本発明の方法を示すモデルとしてアルカリホスファター
ゼを用いた。このために、微顆粒状のカルボキシメチル
セルロースの弱いカチオン交換剤（　ＣＭ　５２，　Ｗ
ｈａｔｍａｎ）を用いた。Ｃ　（１）　力ｆ　−ｔ　７
　交換剤ヲシラン比パスツールぎペクトに詰めて、ペッ
ト容敬１−とした。２つのカラムを調嗜した。最初のカ
ラムに、Ｈｉｎｄ　ＩＩ１で消比したラムダＤＮＡの５
　０　０　ｎｇを一＜５．０の１Ｑ　ｍｍｏｌｅ／／ア
ンモニウムアセテートバッファ−１００マイクロリット
ル中で付した。２番目のカラム［ｔＸ，Ｂｏθｈｒｉｎ
ｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍから入手した牛小腸アルカリホ
スファメーゼ（　ＥＣ　３．１．３．１　）　１　０　
０　ＶＹｐＨ６．０ノ１　０ｍ　ｍｏｌｅ／ｅアンモニ
ウムアセテートパツファ一１００マイクロリットル中で
付した。それぞれのカラムヲ同シバツファ−１００マイ
クロリットルで溶出し、適用量より多い溶出液を１つの
フラクション（ｆ１）として回収した。その後、アンモ
ニウムアセテートの２００マイクロリットルの６つのフ
ラクシ瑳ン（ｆ２−ｆ４）　’１回収した。最後に、５
　Ｑ　ｍ　ｍｏｌｅ　／ｌ　Ｔｒｉ−ＨＣ．！．，　Ｑ
．１　ｍ　ｍｏｌ／　ｌ　ＥＤＴＡ，３　０　０　ｍ　
ｍｏ１ｅ　／ｌ　Ｎａｃｊ，　ｐＨ　９，Ｑの２００マ
イクａリットルの８つのフラクシコン（ｆ５−ｆ１＋）
を溶出させた。

核酸の浴出パターン！，最初のカラムから得たフラクシ
ッンのアブロースデル電気泳動により求めた。アルカリ
ホスファターゼの溶出パターン＋Ｌ以下のようにしてそ
の活性を検出することにより求めた。２番目のカラムか
ら溶出したそれぞれの７ラクシ葺７２０マイクａリット
ルに、５’未満ラベル化合成３　０　ｍｅｒ（　２．５
　Ｘ　Ｉ　Ｑ５ｃｐｍ）　Ｉ　Ｑ−ｖイクａリットルと
アルカリホスファグーゼ反応バツファ一（　５　Ｑ　ｍ
　ｍｏｌａ　／ｌ　Ｔｒｉｓ−ＨＴＪ，　Ｑ，１ｍｍｏ
１ｅＫＤＴＡ，　ＰＨ　８．０　）とを加えた。サンプ
ル’？５０゜Ｃで６０分間インキュベートした。その後
、変性条件下でポリアクリルアミドｒＡ−電気泳動に付
し丸ｒルケオートラジオグラフイーに付し、デホスホリ
レーシ葺ンの結果であるオリがヌクレオチｐバンｐの欠
損によりアルカリホス７アターゼ活性を検出した。得ら
れる結果（工添付した第１図に示した。第１図において
、Ｃ１１エアルカリホスファターゼ、ラベル化合成オリ
ゴヌクレオチｐ及びアルカリホスファターゼ反応バノフ
ァ一’Ｙ７１口えたコントｏ−ルを示し、Ｃ２はラベル
化合成オリゴヌクレオチシとアルカリホスファターゼｆ
Ｌ応パツ７アーのみを加えたコントａ−ルを示す。オー
トラジオグラムの結果から、アルカリホスファターゼが
存在していろ楊合には（Ｃエ．８．９）デホスホリレー
ション及び遊離ラベル比ホス７エートの流動性上昇によ
りアンモニウムアセテートオリゴヌクレオチ２バンＶが
消えていることが分かる。核酸は主’Ｉｃ　ｆ３　中に
溶出し、アルカリホスフ丁ターゼはカラム中に保持され
、溶出溶媒の一と塩濃度を上昇させることＫ．Ｋつ溶出
され’）（ｆ８−９）。ラムダＨｉｎｄ　［断片は定量
的に回収された。

実施例２ Ｓ−セファロースファーストフｏ　−　（Ｐｈａｒｍａ
ｃ１ａ，Ｓｗｅｄθｎ）の強カチオン交換剤を用いて実
施例１と同様にして央施した。カラム’ｆｒ　、０．２
　ｍａ１ｅ／　ｅＦｊ　、Ｍ　留水、０．２　ｍｏｌｅ
　／　／アンモニウムアセテート（ｐ８４．８）（以後
ＡＡ（ｐＨ４．８）と言う〕及び１０ｍｍｏ１ｅ／ｚＡ
Ａ（ｐ｝１４．８）の１０ベント容駄で洗浄した。カチ
オン交換剤のラーゾバツチを、後者の溶媒を含む２０囁
エタノール中で４℃で保存した。実施例１−と同様の溶
出系を用いた。セファロース交換剤は強いため、最初に
低いｐＨ（４．８）を使用することができる。代表的な
全長サイズ及びコンフイギュレーション（即チ、直線状
、スーパーコイル状、リラックス閉環状）を示す核酸を
カチオン交換剤を用いたカラムクａマトグラフイーに付
し、それぞれの核酸を良好に回収した。更に、核ｅＲを
素早く消化し連結してクローン化しｔ４多数の蛋白、即
ち、アルプミン、グロプリン、あるいを工Ｈｉｎｄ　［
［などの制限酵素、あるいはプロテーゼなどの分子生物
学で用いる他の酵素もクロマトグラフイーに付したが、
ＡＡ　（　Ｐ”　４−８　）ではいずれも溶出しなかっ
た。これらヲ工溶出するためには高いーと塩濃度が必要
であった。従って、核酸と蛋白とを明確に分離できるこ
とが判った。

制限酵素などのＤＮＡ結合酵素（アルカリホス７アター
ゼはこれに含まれない）ＩＣついては、これらの蛋白を
ＤＮＡから解離させるためにナトリウムｒデシルスルフ
エートなどの洗剤で処理することが必要である。本発明
の他の用途として、カチオン交換剤をＤＮＡ結合蛋白（
生物学的に重要なものであってＤＮＡと結合しないもの
）間の分離に使用することができる。

デａティナーゼＫ以外の他のＤ口水分解酵素及び８Ｄ８
以外の他の洗剤も、本発明の方法に変比を与えることな
く使用することができる。他の洗剤を使用する場合、エ
タノール沈澱工程を省略することができるので特に有益
である。

上記した如く、実施例１及び２で回収されたＤＮＡは制
限酵素で容易に消化することができまた連結することが
できる。核酸のサイズには特に制限ハなく、３０塩基の
合成オリゴヌクレオチ−もｒノムＤＮＡも高収率で回収
することができる。

上記した如く、実施例１及び２においては、テストした
全ての蛋白については、適当な一条件下ではＤＮＡ｝エ
カチオン変換削に結合せず、他方、蛋白は結合すること
が示されている。ＤＮＡと蛋白とが１つのサンプル中に
存在しておりこれをカラムに付した場合でも、あるいは
バッチ法で処理した場合でも、多くの場合同様の結果が
得られた。

｝Ｔｉｎｄ［［などの制限酵素を使用する鳴合には、上
記した如（ＤＮＡ結合蛋白とＤＮＡとを解離させるため
にあらかじめ８Ｄ８を添加することが必要である。これ
らの知見から、生物学的オリジン由来のＤＮＡ　（実施
例１及び２で用いたあらかじめ精勾されたＤＮＡ以外の
ＤＮＡ）もカチオン交換剤を用いる本発明の方法により
精與することができる。

実施例６ 本発明の方法を、微生物及び真核もしくは原核生物組織
を含む生物学的粗サンプルからのｒノムＤＮＡの分離に
適用した。ヨーグルト、ニワトリサンプルなどの食物サ
ンプル、あるいは血液、精液などの生物学的サンプルを
使用することができる。１つの例では、Ｅ，ＣＯｌｉの
１晩培養物１．５７を、ベンチトップＫｐｐｅｎｄｏｒ
ｆ型マイクロフユージ中で約１００００．９で１分間遠
心した。上清を除去し、ペレットを、Ｔｒｔｓ−Ｈｑｊ
　１　０　ｍＭ　（　ｐ！＋　８．０）．ＮａＣＪ４　
Ｑ　ｍＭ，　ＥＤＴＡ　２　ｍＭＯ）５　Ｑ　Ｑ−Ｆイ
クａリツトル中に再懸濁せしめた。デロテイナーゼＫと
８ＤＢとを、それぞれ終濃度２００マイクログラム／一
及び０．５％で加えた。ｊ　ｍｏｌ　／　／アンモニウ
ムアセテート（Ａ．　Ａ−　）　（　ｐＨ　４．８　）
溶液を終４度’ｌ　５　ｍｍｏｌ　／　ｅとなるまで加
えることによって一を約４．８４で減少させた。Ｐ｝Ｉ
調整後、Ａ．ん　（一４．８）の１Ｑ　ｍｍｏｌθ／ｌ
中のアンモニウム型力チオン変＃Ｓ−セファデックスフ
ァーストフロ−（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）の１：１スラリ
−５００マイクａリットルを卯えた。サンプルを６０分
間ゆっくりと攬拌した。次いでチューブをランク中に置
き、カチオンビーズを静置させた。上溝を新しいチュー
ブに移し、ＤＮＡを回収してエタノール沈澱により濃縮
した。ＤＮＡの収率は、慣用的方法によって得られる結
果とほぼ同様であった。

上記の方法はＤＮＡの収率について高い再現性を有して
おり、得られるＤＮＡ｝工制限酵素により寥易に消化す
ることができた。このようにして調坂されたＤＮＡは、
ＤＮＡ７°ａ−ブのターケ１ットとして使用することが
でき１こ。

木発明の方法の汎用性乞示すために、フェノール抽出法
を用いることが困雌な生物学的オリジン由来の組織につ
いて同様の実験を実施した。

実施例４ ＤＮＡデａ−プ分析が必要な魚のひれをゾロティナーゼ
Ｋと８ＤＳの適当な溶液にＤ口えて、この組織が直ぐに
溶解するようにした。蛋白と蛋白断片とをＤＮＡ及びＲ
ＮＡとともに遊離させた。溶液の一を等電点未ｒ４（約
ｐＨ４．８）にした。前記したようにしてカチオン交換
樹脂を加えて、溶出液からサンプルを回収し、デａ−デ
分析用に供した。

上記実施例に用いた条件は極めて有効であることが判明
した。しかしながら、特異的な除タンパクのニーズに合
うように条件ケ更Ｋ変更することができる。上記した実
施例で用いた２つのタイプのカチオン交換剤に加えて各
種の他のカチオン交換剤ケ用いることができる。従って
、本発明ＶＣよれば、上記した如く直ぐ使用することの
できる力チオン交換剤ケ詰めたカラムにより、分子生物
学の実験室において用いることのできる蛋白から核酸の
有効な分離方法が提供される。本発明の方法は、毒性の
あるフェノールを蒸留する必要もなくそれで平衡１ヒさ
せる必要もない。また木発明方法を工迅速に且つ定址的
に実施することかで課、ＤＮＡに影響を与えることもな
く、更にＤＮＡをさほど希釈する必要もない。これらの
利点は当業著に容易に理解されよう。

本発明の方法は、ＤＮＡ７°ロープ分析用のＤＮＡサン
プルの調贈にも使用することができる。

本発明の方法レエ以下に示丁ような商業的有川性を有し
ているが、これらに限定されるものではな一ゝ。

１．ＤＮＡゾローブ？用いた同定のために用いるＤＮＡ
の微生物からの分離調裂； ２，　　ＤＮＡ７ｐＯ−プを由いた遺伝子分析に用いる
ヒトサンプルからのＤＮＡの分離調■；６．　動物細胞
中で発現される治療用蛋白（例えばインターフェロン、
インターロイキンなど）中の混入ＤＮＡを除去するため
の処理（但し該蛋白を工…条件下で安定であることが条
件）；４，　操作の最後において修飾酵素からＤＮＡを
しばしば分離する必委のある分子生物学研究での使用； ５．分子生物学研究に必要なデラスミＮ９調舊の際の使
用。

このような用途は、その使用意図ＶＣよって変動するが
、以下のような手段な必便とする。

（揚　正しいＰＨでサンプルを含有するシリンジに適合
することのできるカチオン交換剤充填シリンジ。この嚇
合、ＤＮＡのみが回収される（上記用途１．２．４及び
５）。

（ｂ）　　大スケール用充填カラム（上記用途１，２．
４及び５）。バソファ一条件な変化させることによって
イオン交換剤から必侵な蛋白？回収することができる（
上記用途６）。

（Ｃ）　　カチオン交換メンプレン。これは上記（ａ）
及び（鶴と同様の条件下で使用できる。

（ｄ）　　カチオン交換剤を用いたサンプルのバッチ式
処理。

【図面の簡単な説明】

第１図は、実施例ＩＫ記載したアルカリホスファターゼ
分画のオートラジオダラム分析の結果を示す写真である
。

Claims (13)

【特許請求の範囲】
1. （１）核酸と蛋白の混合物を、該蛋白の等電点未満のｐ
   Ｈでカチオン交換剤と接触せしめ、次いで該核酸を回収
   することからなる、蛋白から核酸を分離する方法。
2. （２）核酸と蛋白の溶液を適当なカチオン交換剤のカラ
   ムに付し、次いで該核酸をカラムから溶出させる請求項
   第１項記載の方法。
3. （３）カートリッジ、バッチあるいはメンブレンシステ
   ムを用いて実施する請求項第１項記載の方法。
4. （４）核酸と蛋白の混合物をカチオン交換剤に適用する
   前に、該混合物をプロテイナーゼとともにインキュベー
   トする請求項第１項−第３項のいずれか１項記載の方法
   。
5. （５）該混合物をナトリウムドデシルスルフエートとと
   もに更にインキュベートする請求項第４項記載の方法。
6. （６）核酸と蛋白の混合物を、低モル濃度バッファー中
   でカチオン交換剤と接触せしめる請求項第１項−第５項
   のいずれか１項記載の方法。
7. （７）該バッファーのｐＨが３．５−６．５である請求
   項第６項記載の方法。
8. （８）自動化により実施する請求項第１項−第７項のい
   ずれか１項記載の方法。
9. （９）ＤＮＡプローブ分析のターゲットとして用いるＤ
   ＮＡを調製するための請求項第１項記載の方法。
10. （１０）蛋白から核酸を分離する方法のためのカチオン
    交換剤の使用。
11. （１１）請求項第１項−第８項のいずれか１項記載の方
    法のためのカチオン交換剤の使用。
12. （１２）実施例に記載したと実質的に同様の請求項第１
    項記載の方法。
13. （１３）実施例に記載したと実質的に同様の請求項第９
    項記載の方法。