JPH02288832A - 抗ｈｉｖ剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は抗ＨＩＶ剤に関する。さらに詳しくは、ポリビ
ニルアルコール系重合体を有効成分とする抗ＨＩＶ剤に
関する。

［従来の技術］ 後天性免疫不全症候群［Ａｃｑｕｉｒｅｄ　Ｉｍｍｕｎ
。

Ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　Ｓｙｎｄｒｏｍｅ　（Ａ　Ｉ　
Ｄ　Ｓ　）　］を引き起すヒト病原性レトロウィルスの
うちのヒト免疫不全症ウィルス［Ｈｕｍａｎ　１ｍｍｕ
ｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　Ｖｉｒｕｓ　（ＨＩＶ）］
の発見と同定は疫学と病理学的分野での解明に大きく貢
献し、診断法、予防法の確立に大きな道を開いた。

しかし、予防法として最も期待されるワクチンの開発に
おいては、ＨＩＶの外殻［ｅｎｖｅｌｏｐ（ｅｎｖ）］
糖蛋白をコードするｅｎｖ遺伝子の塩基配列は株ごとに
高い非相同性が認められること、また感染から発症に至
るまでのプロセスでどのような抗体がどのような防御効
果を発揮しているかが必ずしも明らかではないことから
有効なＨＩ　Ｖワクチンの開発はただちに期待できそう
にない。

一方、抗ウィルス剤についても多くの問題があり、その
開発を阻んでいる。それはＨ’ＩＶが被感染細胞のＤＮ
Ａに組み込まれている休止期の状態で存続するとともに
、突如激しく増殖して感染を拡大し、ついには個体の免
疫応答を荒廃に導き、しかもＨＩＶはこの過程で再生能
力のほとんどない重要臓器−脳、を髄−に重大な障害を
惹起することにある。したがって抗ウィルス剤は、おそ
らく患者の生涯を通じて投与されることになるであろう
から、生体に過剰な副作用をもたらすことなくウィルス
の増殖を長年月にわたって阻止しうる薬物の開発は急務
であ□る。

現在、抗ＨＩＶ剤として最も有効とされている薬剤にア
ジドチミジン［３−ａｚｉｄｏ　−２°、３ｄｉｄｅｏ
ｘｙ　ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ　（Ａ　Ｚ　Ｔ　）　］があ
る。ＡＺＴはインヴイトロ（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）での抗
ＨＩＶ活性の観察に基づいて、すてに病状の出現したＨ
ＩＶ感染患者に投与され、臨床症状の改善が認められた
との報告もある。しかし、ＡＺＴについての臨床経過は
現時点では不充分であり、長期投与下ての服用量の決定
、副作用の出現、併用薬剤との相互作用など未解決の問
題が残されている。

現在まで抗ＨＩ　Ｖ　ＩＩは、前述したＡＺＴのような
デオキシヌクレオンド構造でＨｒＶの生育阻害効果を有
する薬剤、Ｔ−４細胞内でのＨＴ　Ｖ−ＲＮＡの逆転写
酵素あるいはＲＮ　Ａ　ａｓｅ、　Ｐｒｏｔｅａｓｅな
どのＨＩＶの生育に必要な酵素に対する阻害剤、または
インターフェロンなど生体細胞から産生される薬剤、さ
らにはグリチルリチンに代表される生薬由来の物質など
が主として知られている。

［発明が解決しようとする課題］ しかしながら、上記した抗ＨＩ　Ｖ剤は必ずしも細胞毒
性が低いといえず、また副作用が少ないともいい難い。

従って本発明の目的は、薬効に優れ、細胞毒性が低く、
副作用も少ない、合成薬剤からなる抗ＨＩＶ剤を提供す
ることにある。

［課題を解決するための手段］ 本発明者らは上記問題点のない抗ＨＩＶ剤を開発すべく
水溶性物質であるポリビニルアルコール系重合体に着目
して鋭意検討を重ね、本発明に至った。すなわち本発明
は、ポリビニルアルコール系重合体を有効成分とする抗
ＨＩＶ剤である。

本発明でいうポリビニルアルコール系重合体（以下、ポ
リビニルアルコールをＰＶＡと略記すＪｆｌ 基であり、好ましくは水素原子である）単位を宵する重
合体であり、単独重合体、通常の共重合体、ブロック共
重合体、グラフト共重合体、ホルマール、ブチラール化
等の後反応重合体等すべての重合体を包含するものであ
る。

本発明の抗ＨＩＶ剤を構成するＰＶＡ系重合体のうち、 で示される構成単位を含む重合体が好ましい。ここでＲ
１は水素原子またはメチル基、Ｒ２はアルキル基、好ま
しくは炭素数１〜２０のアルキル基、Ｒ３は水素原子、
アルキル基、その他の鎖式炭化水素基または脂環式炭化
水素基、Ｒ４は水素原子またはイオン性基、Ｒ５は水素
原子、アルキル基、その他の鎖式炭化水素基または脂環
式炭化水素基、Ｒ６はイオン性基である。イオン性基と
してはｃｏｏｘ基（又は水素原子またはアルカリ金属）
、さらに炭化水素基と結合したｃｏｏｘ基（例えば−Ｃ
Ｈ２ＣＯＯＮａ等）等があげられる。また、Ｑ、ｍ、ｎ
は各々モル分率であり、Ｏ＜Ｑ≦１．０≦ｍ、ｎ＜１か
つＱ＋　ｍ　＋ｎ　＝　１である。

■ 示される単位を主構成単位として含む重合体、イタコン
酸変性、アクリル酸変性または３−アクリルアミドプロ
ピルトリメチルアンモニウムクロライド変性ＰＶ系重合
体が好ましい。イタコン酸変性、アクリル酸変性または
３−アクリルアミドブ＝６ ロピルトリメチルアンモニウムクロライド変性ＰＶＡ系
重合体は通常、 イタコン酸、アクリル酸、３〜アクリルアミドプロピル
トリメチルアンモニウムクロライド等による変性度は、
あまり小さいと本発明の効果が発現しにくく、またあま
り大きいとリンパ球に対して細胞毒性を示す傾向がある
ことから、５〜２０モル％であるのが好ましい。

ＰＶＡはスチレン等一部を除いて大部分のビニル化合物
と共重合可能であり、又ＰＶＡ系重合体の重合度は制御
可能である。とくに、平均重合度が２５〜３０００の範
囲ではほぼ任意に制御可能である。

本発明におけるＰＶＡ系重合体の重合度はとくに限定さ
れないが、体内への蓄積を少なくする点から２０００以
下、好ましくは２００以下、が望ましい。

いてもよく、ラクトン環を構成したものとラクトン環を
構成しないものとが同時に含まれていてもよい。

本発明の抗ＨＩＶ剤に使用されるＰＶＡ系重合体は分子
量１００００以下のものが好ましい。また、を共重合し
、完全ケン化または部分ケン化して得ることができる。

Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６は前記と同じで
ある。本発明でいう完全ケン化物とはケン化度が９８５
±１５モル％のものをいう。

が１〜２０のアルキル基である単量体が好ましい。

このような単量体を具体的に例示すれば酢酸ビニル、酪
酸ビニル、カプロン酸ビニル、カプリル酸ビニル、カプ
リン酸ビニル、ラウリン酸ビニル、ミリスチン酸ビニル
、パルミチン酸ビニル、ステアリン酸ビニル等があげら
れる。

トリメチルアンモニウムクロライド、２−アクリルアミ
ド−２−メチルプロパンスルホン酸ナトリウム、Ｎ−ブ
トキシメチルアクリルアミド等をあげることができる。

また、Ｒ４とＲ６から水がとれて環を形成した例えば無
水マレイン酸およびその誘導体もこれに含まれる。

本発明に用いられるＰＶＡ系重合体は、これ以外にも他
の単位、例えばエチレン等のコモノマー単位を本発明の
効果を阻害しない範囲で含有していてもよい。

本発明に用いられる完全ケン化または部分ケン化ＰＶＡ
系重合体を得るには、 Ｒ８ 嘩 メタノール中で公知の方法で完全または部分ケン化すれ
ばよい。又、変性ＰＶＡ系重合体を得るにコン酸、アク
リル酸、イタコン酸ソーダ、アクリル酸ソーダ等の塩、
３−アクリルアミドプロピルる単量体を共重合し、完全
または部分ケン化し、精製すればよい。重合度はメルカ
プトエタノール等の連鎖移動剤を調節することによって
調整することができる。又、共重合体の構造はＮＭＲに
よって確認することができる。

本発明の抗ＨＩＶ剤は、生体細胞に対する毒性が低く、
極めて安定であり、高圧蒸気滅菌処理が可能である。又
、合成薬剤であるので大量生産が可能であり、低廉なコ
ストで製造でき、天然物由来あるいは生体由来の薬剤に
比較して高純度化することが可能である。

本発明の抗ＨＩＶ剤は、皮肉、皮下、筋肉内、静脈内、
動脈内等への注射法、経口投与法、経直腸投与法等によ
る投与が可能である。投与量は１日あたりＰＶＡ系重合
体基準で０．０５〜５ｍｇ／ｋｇであり、種々の投与形
態に応じて水性、油性製剤等として適用可能である。

以下、実施例により本発明を具体的に説明するが、本発
明はこれらにより何ら限定されるものではない。

［実施例］ （測定に使用したＨＴＶ） 米国ＮＣＩ由来のＨＩＶセルラインＨ９を感受性細胞Ｃ
ＥＭ　（ＣＣＲＰ、　ＣＥＭ、　ＦＩＯＷ　Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｉｅｓ　Ａ　Ｔ　ＣＣＮｏ、１９　Ａｃｕｔｅ
　ＬｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃＬｅｕｃｋｅｍｉａ）に
接種して増殖させ、継代培養したものの上清液。

（測定に使用したＰＶＡ系重合体および対照薬剤）測定
に使用したＰＶＡ系重合体を第１表に一括して示す。

完全ケン化ＰＶＡとしては（株）クラレ製ＰＶＡ１１７
を、部分ケン化Ｐ　Ｖ　Ａとしては（株）クラレ製ｐ　
Ｖ　Ａ　２１７を用いた。また、変性ＰＶＡ系重合体は
次の方法により製造した。

イタコン酸変性ＰＶＡ系重合体の製造（全て、部は重量
部をあられす） 酢酸ビニル（以下ＶＡＣと略記する）９６０部、メタノ
ール２３０部、イタコン酸２．３部および２−メルカプ
トエタノール（以下２−ＭＥと略記する）１６部を反応
容器中に入れ、充分に窒素置換した後外温を６５℃に上
げ、内温が６０℃に達したところで２，２“−アゾビス
イソブチロニトリル（ＡＩＢＮと略記する）４．７部を
含むメタノール１０部を加えた。その後直ちにイタコン
酸３３．３部を含むメタノール溶液１３３部と２−ＭＥ
　　１５．２部を含むメタノール溶液４３部を３時間に
わたって均一に加えた。３時間後の重合率は４７％であ
った。３時間後に容器を冷却し、減圧下に未反応のＶＡ
Ｃをメタノールとともに系外に追いだす操作をメタノー
ルを追加しながら行ない、ポリ酢酸ビニル系重合体（Ｐ
ＶＡＣ系重合体）のメタノール溶液（濃度７０％）を得
た。このメタノール溶液の一部をとり、ＰＶＡＣ濃度５
０％、［ＮａＯＨ］　／　［ｖＡ　Ｃ］　＝　０．１３
　（モル比）となるようにＮａＯＨのメタノール溶液を
加え、４０℃でケン化してケン化度９５．９モル％のイ
タコン酸変性ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）系重合体
を得た。該ポリビニルアルコール系重合体をアセチル化
してポリ酢酸ビニル系重合体とした後、アセトン溶液中
３０℃の極限粘度の測定から中島の式４式％ 学６　４５１（１９４９））を用いて算出された重合度
は２５てあった。

初期仕込みのイタコン酸、２ＭＥ、ＡＩＢＮ量及び後添
加するイタコン酸および２ＭＥ量を変更し、さらにケン
化時の［ＮａＯＨ］　／　［Ｖ　Ａ　Ｃ］モモル比を変
更する以外は上記条件に準じて種々の変性度及び重合度
のポリビニルアルコール系重合体を製造した。

し重合条件］ 初期仕込み イタクン酸（部）２．３　２．３　４，９　１１．６２
　　Ｍ　　Ｅ（部）　　　０．８　　０．３　　０．３
　　０．３Ａ　　Ｉ　　Ｂ　　Ｎ（部）　　　４．７　
　３．９　１０．１　３１．７後添加仕込み イタコン酸／メタノール（部７部） ３３／１００　３３／１００．７０／２１０　１３５／
４０５２ＭＥ／メタノール（部７部） ７．５／３４　３．７／３７　３．７／３７　３．７／
３７重合時間（ｈｒｓ）　　　　　３　　３　　３４重
合率（モル％’）　　　４９　４６　４０　４４［ケン
化条件］ ＝１３ ［ＮａＯＨ：］　／　［Ｖ　Ａ　Ｃ］モル比０．１３　
　　　０．１７　　　　０．２７　　　　０．５２得ら
れたイタコン酸変性ＰＶＡ系重合体は下記のとおりであ
った。

変性度（モル％）　　　５　　５　　１０　　２０ケン
化度（モル％）　　９６．３　９７．６　９６Ｊ　　９
６．７アクリル　　　ＰＶＡ　　重ム　の　造（全て部
は重量部をあられす） 重合度１４５０、ケン化度９８．６モル％の分子末端に
メルカプト基を有するＰＶＡ１００部に蒸留水９５０部
を加え、９５℃でＰＶＡを溶解した。次いで窒素置換を
行ない窒素気流下に７０℃まで冷却し、予め窒素置換し
たアクリル酸２０部を加えた。重合触媒として臭素酸カ
リウム０．３９部を溶解した水溶液１００部を２時間に
わたり均等に滴下し、さらに滴下終了後、１時間７０℃
で重合を行なったところ、重合率９９．２モル％、固形
分濃度１０．２％のアクリル酸変性ＰＶＡ系重合体水溶
液が得られた。該重合体の重合度は１７００であった。

３−アクリルアミドプロピルトリメチルアンモニウムク
ロライド　性ＰＶＡ系重合　の製造（全て、部は重量部
をあられす） イタコン酸のかわりに３−アクリルアミドプロピルトリ
メチルアンモニウムクロライド（ＡＰＴＡＣ）を用い、
下記の［重合条件］及び［ケン化条件］で実施する以外
はイタコン酸変性ＰＶＡ系重合体の製造に準じて製造し
た。

［重合条件］ 初期仕込み ＡＰＴＡＣ（部）　　　　　　　　　　　　　　２２．
２２　　Ｍ　　Ｅ（部）０３２ Ａ　　Ｉ　　Ｂ　　Ｎ（部）　　　　　　　　　　　　
　　０．６４後添加仕込み ＡＰＴＡＣ／メタノール（部７部）　　９０．３／９０
．３２　　Ｍ　　Ｅ／メタノール（部７部）　　３．３
／３３．４重合時間　（ｈｒｓ）　　　　　　　　　　
　　３重合率（モル％）３６７ ［ケン化条件］ ［ＮａＯＨ］　／　［Ｖ　Ａ　Ｃ］モル比　　　　０．
０１５得られたＡＰＴＡＣ変性ＰＶＡ系重合体は下記の
とおりであった。

変性度（モル％）１０ ケン化度（モル％）　　　　　　　　　　９８．５重合
度　　　　　　　　１２０ （薬剤の抗ＨＩＶ効果の判定法） （ｉ）　　各々の薬剤を０．０２５ｇ／ｍ（！の濃度で
混合溶液培地ＲＰ　Ｍ　ｌ−１６４０水溶液に溶解し、
密栓して蒸気滅菌した。

（ｉｉ）ＨＩＶ感染細胞培地の上清液を０．４５μｍの
フィルターでか過し得られた炉液４ｍｇと、ＲＰＭ　Ｉ
　−１６４０水溶液１６ｍ（！を混合した。

（ｉｉｉ）　　（ｉ）の溶液にＣＥＭ細胞ｓｘ　１０部
個／ｍρを浮遊させ、その７　、９ｍｉ！に（１１）を
０．１＋＋１接種して炭酸ガス培養器内にて１週間培養
した。

（１ｖ）接種後７日目に試料を炭酸ガス培養器から取り
出した。

（ｖ）　　（ｉｉｉ）の検体を１００ＯＧにて１０分間
、遠心処理を行った後、上清液を０４５μｍのフィルタ
ーでか遇した。

（ｖｉ）Ｆ液はＨＩＶ抗原測定用に、沈渣はスライドグ
ラスに塗布して間接免疫螢光抗体法による検体とした。

（ｖｉｉ）　　（ｖｉ）の検体の対照試料（感度のチエ
ツク）としてＨＩＶ培養細胞の上清液をＲＰＭＩ１６４
０の水溶液で１０−１〜１０−６に希釈して間接免疫螢
光抗体法の測定試料とした。

Ａ、ＥＬＩＳＡ法による抗原濃度の測定デュポン社ＨＩ
Ｖ（ｐ２４）抗原測定キットを用いてＥＬＩＳＡ法によ
り下記のようにして培養上清液（炉液）中の抗原濃度を
測定し、薬剤の抗ＨＩＶ効果を評価した。

（ｉ）　　マイクロプレート上にて検体１８０μＱに５
％ＴｒｉｔｏｎＸ　１００水溶液２０ｕ（ｌを混合した
。

（１１）−夜室温にて放置した。

（山）自動水洗を３回繰り返しに。

（１ｖ）　　ビオチン化された抗体溶液１００μｇを加
えて、３７°Ｃにて２時間インキュベートした。

（Ｖ）　　再び自動洗浄した。

（ｖｌ）ホース・レーディッシュ・パーオキシダーゼ（
Ｈｏｒｓｅ　ｒａｄｉｓｈ　ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）−
ストーブトアビジン（５ｔｒｅｐｔｏａｖｉｄｉｎ）水
溶液１００μ（！を加えて１５分間インキュベートした
。

（ｖｉｉ）　　自動洗浄した後、１００μＱの色素［オ
ルト・フェニレンジアミンＪ　（０−ｐｈｅｎｙｌｅｎ
ｅｄｉａｍｉｎｅ。

０ＰＤ）基質水溶液を添加した。

（ｖｉｉ）　　４規定−硫酸水溶液５０μｇを添加して
反応を停止した。

（ｉｘ）　　４９２ｎｍの吸光度（ブランク：　６２０
ｎｍ）を測定し、検量線からＨＩＶ濃度（ｎｇ／　ｍＱ
’）を算出した。

Ｂ　間接免疫螢光抗体法による抗原濃度の測定上述の試
料溶液の遠心分離操作で得られた沈渣中にＨＩＶが存在
するか否かについて下記のように間接免疫螢光抗体法に
より判定し、判定結果から薬剤の抗ＨＩＶ効果を評価し
に０ （１）先の遠心分離操作によって得られたそれぞれの沈
渣を１ｍＱのＰＢＳにて１分間、低速回転させながら洗
浄した。

（１１）洗浄した沈渣を５０μρのＰＢＳ中にけん濁さ
せて螢光抗体測定用のスライドに１検体にっき２スポツ
トずつ塗布した。

（ｉｉｉ）　　塗布後、スライドごとメタノール中に浸
漬して固定化処理した。

（１ｖ）固定化処理したスポットにアセトンを加えて風
乾した。

（ｖ）ＨＩＶ（ｐ２４）抗体−ＰＢＳ溶液（容量比：　
１：　４０）　２０μｇを各スポットに添加した。

（ｖｌ）　　これを３７℃にて２０分間インキュベート
した後、ＰＢＳ溶液にて２０分間洗浄した。

（ｖｉｉ）　　ｖウス抗１ｇＧ抗体−ＰＢＳ溶液（容量
比：１２０）　２０μｇを各スポットに添加した。

（ｖｉｉ）　　これを３７℃にて２０分間インキュベー
トした後、ＰＢＳ溶液にて２０分間洗浄した。

（１ｘ）ストレプトアビジン（５ｔｒｅｐｔｏａｖｉｄ
ｉｎ）　／フルオレセン（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ）　
−Ｐ　Ｂ　Ｓ溶液（容量比、１・５０）　２０μＱを各
スポットに添加した。

（Ｘ）　　これを３７℃にて１０分間インキュベートし
た後、暗所でＰＢＳ溶液にて洗浄した。

（ｘｉ）　　９０％グリセリン−１０％ＰＢＳ混合液を
ｌスポット当り１滴加えた。

（ｘｉｉ）　　紫外線照射下でそれぞれのスポットにお
ける螢光部分の有無を顕微鏡で観察した。

Ｃ２各々の薬剤のリンパ球への影響の観察ＨＩＶを接種
して一週間培養した後のＯＥＭ細胞中のリンパ球数、お
よび各々の薬剤を添加処理したＨ　Ｉ　Ｘｌを接種して
一週間培養した場合のＣＥＭ中のリンパ球数をトリパン
ブルーで染色し、計数板上にて光学顕微鏡下でカウント
して各々の薬剤のリンパ球への影響を観察した。

Ｄ、それぞれの薬剤の抗ＨＩＶ効果の判定それぞれの薬
剤の抗）（ＩＶ効果を上述したＡｌＢおよびＣの３方法
によって判定して第１表に一括して示す。

また、ＥＬ　Ｉ　ＳＡ法と間接免疫螢光抗体法の検出感
度の比較を行い、それらの測定結果を第２表に示す。

第２表から明らかなように、ＥＬＩＳＡ法で（−）と判
定される薬剤はいずれも間接免疫螢光抗体法でも（−）
となり、（比較例３．４）あたかも抗ＨＩＶ効果が優れ
ているように見受けられるが、ポジティブコントロール
におけるリンパ球数３×１０５個／’ｍＱがＯ個／ｍＱ
に激減しており、これらの薬剤はリンパ球に対して細胞
毒性があることを示唆している。本発明においては、均
一系内において不活性化し感染力を低下させることを目
的としているが、ＨＩＶ（ｐ２４）を（−）（完全に消
失）領域まで低下させるということはリンパ球に対して
も強い細胞毒性を有することになるのであろう。

第１表においてはＥＬ　ｒ　ＳＡ法と間接免疫螢光抗体
法の２つの方法を並行して判定したが、第２表に示すよ
うに、これらの２つの方法の検出感度は異なり、前者に
くらべて後者のほうが約１００倍高感度であり、後者に
よる（−）判定は元の試料にくらべてＨＩＶの感染力が
ほぼ完全に消失していることを示すものである。

先述したように、患者の血液中のＨＩＶは主にリンパ球
のサブセットＴ−４細胞に侵入して増殖、発芽を繰り返
し、これを破壊するのであるが、本実施例で示されるよ
うに、リンパ球内での抗原産生が（−）であり、しかも
リンパ球数が減少しないことは抗ＨＩ　Ｖ剤として極め
て有効な薬剤であることを示している。以上の実験結果
から本発明の効果は明らかである。

なお、ＰＶＡ　（完全ケン化物）及びＰＶＡ　（部分ケ
ン化物）は厚生省薬務局審査評監修の１日本薬局方外医
薬品成分規格Ｊ　（１９８３年）で定められた医薬品で
あり、本発明の抗ＨＩ　Ｖ剤に使用されるＰＶＡ　（完
全ケン化物、部分ケン化物）は、同規格第８１４頁〜８
１７頁に規定されている確認試験、純度試験、乾燥減量
、強熱残分等の試験に全て合格している。

また、ＰＶＡの薄性試験は急性及び慢性毒性試験につい
て「化粧品原料規準」に次のように記載さノ１ている。

（１）急性毒性試験 （ａ）　マウス３０匹を用い、１００−１５００ｍｇ／
　ｋｇを経口投与し、その後１０日間一般症状を観察し
た。投与直後はいずれも運動停止、不安状態を示したが
これは胃内への大量投与による物理的なものと考えられ
る。１．５００ｍｇ群で１例が死亡した以外異常は認め
られなかった。

（ｂ）　マウス１０匹を用い１日５００ｍｇ／ｋｇで２
０日間連続投与したが１例が死亡したほか何ら異常は認
められなかった。

（ｃ）皮下注射実験では、マウス６匹を用いて１００〜
３００ｍｇ／ｋｇを背部より１回投与し１０日間観察し
たが、死亡例はなく正常のマウスと比べ差はなかった。

（２）慢性中毒実験 マウス３０匹を用い、１００．５００．１０００ｍｇ／
　ｋｇを１日量とし２６週間経口投与し症状を観察した
が、発育、体重増加は対照と差は認められず何ら中毒症
状（ま見られなかった。つぎに実験動物を解剖して観察
し、さらに胃、腸管、心臓、肺臓、肝臓、じん臓、すい
臓、甲状腺、ひ臓を大阪医科大学で検索した結果も慢性
毒性によると思われるような病理組織学的な変化は認め
られなかった。また皮膚に対しては、氷晶および氷晶か
らつくられるアセタールは刺激および感作作用はないと
されている。

本発明で検討したポリビニルアルコール系重合体［完全
ケン化ＰＶＡ　（実施例１）、部分ケン化ＰＶＡ（実施
例２）、イタコン酸変性ＰＶＡ　（実施例３〜７）、ア
クリル酸変性ＰＶＡ（実施例８）及びＡ　Ｐ　Ｔ　／Ａ
　Ｃ変性ＰＶＡ　（実施例９．１０）コについて、家兎
による急性毒性試験を実施した。

ｔ、Ｉ’ｉ　　　ｉ、ｔ【 濃度設定にあたっては、現在唯一の抗ＨＩＶ剤ｒＡＺＴ
Ｊの投与１４　（２５０ｍｇ／　１回の投与）を目安に
患者の体重を６０ｋｇとした際の濃度の約１０倍とした
（参考文献、ＡＩＤＳ研究、最近の動向、日本臨床１９
８７、別冊、日本臨床社）。即ち、０．０７５ｇの該ポ
リビニルアルコール系重合体を生理食塩液１５０ｍρに
溶解し、１２１°Ｃで２０分間高圧蒸気滅菌処理したも
のをさらに滅菌済みのメンブランフィルタ−で濾過し、
得られたが液を検液とした。

日本薬局方、１１改定「一般試験法３２」および医療用
具の規格基準解説（１９８５）　（ｇ集２医療用具研究
会、発行、薬業時報社）の「急性毒性試験法」の項目に
準拠し、１）発熱性物質試験、２）溶血性試験、３）皮
肉反応の３項目について実施した。

１）発熱性物質試験 体重２５〜３ｋｇの３羽の家兎に検液をｌＱｍｃ／ｋｇ
静注した。注射２時間前から１時間毎に直腸にて検温し
ｆコ。投与直後、−時間後、２時間後てもいずれも体温
上昇は００°Ｃ〜０１℃（判定基準＋０６°Ｃ）であり
、発熱性物質は陰性であった。

２）溶血性試験 検液］ＯｍＱに家兎脱繊維血０．１ｍ（！を添加し、３
７°Ｃで２４時間放置した。対照として生理食塩液を用
い、同様の操作を行った。波長４１５ｎｍにお（プる対
照液と検液の吸光度の差は００５〜０．１０であった（
判定基準０２０）。１検体につきｎ＝２で測定を行った
がいずれも合格であった。

３）反力試験 ３羽の家兎の背部を刷毛し、背骨の両側の一方に検液０
．２ｍρ／１スポット１０点、他側に生理食塩液０．２
ｍρ／スポット５点皮下注射を行い、７２時間後肉眼に
てスポットの発赤、肥厚、壊死などを対照のスポットと
比較観察したが、いずれも異常は認めら机なかった。

また、上記各ＰＶＡ系重合体につき下記の方法により毒
性試験を行なった。

毒性試験 ■、実験材料及び実験方法 １、被験物質 第１表に示される実施例１−１０の各ＰＶＡ系重合体に
ついて実施した。

２、実験動物 ４週齢のＣｒｊ：ＩＣＲ系雄マウスを購入し１週間予備
飼育した後実験に用いた。なお、各動物は予備飼育開始
時より、固形飼料および水道水を自由に摂取させた。

３　投与量および投与方法 投与量は各被験物質とも２００（総投与量１４００）、
１００　（７００）　、５０　（３５０）　ｍｇ／ｋｇ
　（公比　２）の３群とし、全投与群ともマウスを５匹
ずつ用いた。

各被験物質は注射用蒸留水で２０ｍｇ／ｍＱの濃度に溶
解し原液とし、投与容量が体重Ｌｏｇあたり０．１ｎｌ
になるように原液を希釈調製して投与した。コントロー
ル群には、注射用蒸留水を投与した。

投与回数は１日１回７日間連続投与とし、経路は、静脈
内投与とした。

４、諸検査および方法 １）一般症状 投与中および投与後約１時間は連続して詳細に観察する
と共に、投与開始日より１４日間は、毎日午前午後の２
回観察した。

また、投与期間中は毎日体重を測定した。

２）血液生化学検査 連続投与終了日の夜、各群よりマウスを２匹ずつ無作為
に抜き取り、翌朝まで絶食した後頚動脈より採血し、Ｇ
ＯＴ　（ライトマン−フランケル法）およびＢＩＪＮ　
（ウレアーゼ。

インドフェノール法）を測定しｆこ。なお、測定は市販
の体外診断用キットを用い用手法により測定した。

３）臓器の観察 血液生化学検査に供したマウスを採血直後に胸膜部を切
開し、各臓器を肉眼的に観察した。

■　実験結果 ｌ）一般症状 死亡例および外見上の異常はまったく認められなかった
。投与期間中の体重もコントロール群とほぼ同様に推移
した。

２）血液生化学検査 ＧＯＴ＋はぼ正常な値を示した。

ＢＵＮ：全群とも異常は認められなかった。

３）臓器の観察 いずれのマウスにも肉眼による観察では異常は認められ
なかった。

また、各被験物質投与群の胃および腸内官物の量もコン
トロール群と差は認められなかった。

■　、　　ま　　と　　め 各サンプルを７日間静脈内連続投与し、一般症状観察、
血液生化学検査（ＧＯＴ、ＢｔＪＮ）臓器の肉眼的観察
を行ったが、いずれの項目にも特記すべき異常は認めら
れなかった。

遠投中の体重推移、ＧＯＴおよびＢＵＮの変化はいずれ
のＰＶＡ系重合体においても殆んど同様であった。イタ
コン酸変性ＰＶＡ系重合体（実施例６）を用いた場合の
結果を第１図〜第３図に示す・　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　以下余白第 表 ［発明の効果］ 本発明によれば、ＰＶＡ系重合体からなる抗ＨＩＶ剤を
提供することができる。該ＰＶＡ系重合体は後天性免疫
不全症候群に対する薬効が高く、また毒性が低いので、
優れた抗ＨＩＶ剤として期待でき、本発明の有用性は大
きい。

【図面の簡単な説明】

第１図はイタコン酸変性ＰＶＡ系重合体をマウスに連続
投与したときの体重推移を示すグラフであり、第２図は
ＧＯＴの変化を示すグラフ、第３図はＢＵＮの変化を示
すグラフである。 手続補正書 （方式） ％式％ ２、発明の名称 抗ＨＩＶ剤 ３、補正をする者 事件との関係　　　特許出願人 倉敷市酒津１６２１番地 （１０８）株式会社　り　ラ　し 代表取締役中村向　夫 ４、代理人 倉敷市酒津２０４５の１ 株式会社　り　ラ　し　内 株式会社　り　ラ　し特許部 電話　東京０３　（２９７）　９４２７５、補正命令の
日付（全送日） 平成１年１０月１７日 ６、補正の対象 図面 ７、補正の内容

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ポリビニルアルコール系重合体を有効成分とする抗
   ＨＩＶ剤。 ２、ポリビニルアルコール系重合体が ▲数式、化学式、表等があります▼、▲数式、化学式、
   表等があります▼及び▲数式、化学式、表等があります
   ▼ で示される構成単位を含む重合体である請求項１記載の
   抗ＨＩＶ剤。（式中、Ｒ＿１は水素原子またはメチル基
   、Ｒ＿２はアルキル基、Ｒ＿３は水素原子、アルキル基
   、その他の鎖式炭化水素基または脂環式炭化水素基、Ｒ
   ＿４は水素原子またはイオン性基、Ｒ＿５は水素原子、
   アルキル基、イオン性基、その他の鎖式炭化水素または
   脂環式炭化水素基、Ｒ＿６はイオン性基、ｌ、ｍ、ｎは
   各々モル分率であり、０＜ｌ≦１、０≦ｍ、ｎ＜１かつ
   ｌ＋ｍ＋ｎ＝１である。）