JPH02250898A - ガストリン放出ペプチド拮抗質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ２７のアミノ酸のホルモンであるガストリン放出ペプチ
ド（Ｇ　ＲＰ）は細胞培養において小細胞肺腫瘍（ｓｍ
ａｌｌ　ｃｅｌｌ　ｌｕｎｇ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ）（
Ｓ　ＣＬ　Ｃ）細胞の成長を刺激する。ＧＲＰに対する
抗体はヌードマウスにおけるＳＣ’ＬＣ細胞の増殖を阻
止する。

プロッカード（Ｂ　ｒｏｃｃａｒｄｏ）ら、ブリティッ
シュ・ジャーナル・オブ・ファーマコロジー（Ｂｒ、　
Ｊ　、　Ｐｈａｒｍａｃ、）　（１９７５年）、５５巻
、２２１〜２２７ページは２つの天然のボンベシン（ｂ
ｏｍｂａｇｉｎ）様ペプチドと２５の関連する合成ペプ
チドの薬理学的活性をボンベシンのそれと比較している
。

マーキ（Ｍａｒｋｉ）ら、ペプチド（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ
）（１９８１年）、２巻（補遺２）、１６９〜１７７ペ
ージは２６のボンベシンのペプチド類似体とＯＲＰどの
構造活性相関を開示している。ボンベシン様効果の全能
力に必要な最小の必須残基は７位のアラニン、ヒスチジ
ン。

グルタミン又はＤ−グルタミンで置換することができる
アセチル化されたＣ末端の８−ペプチド断片により表わ
される。トリプトファン［８］とヒスチジン［１２］残
基のアラニンによる修飾はこれらのペプチドの生物学的
効力を失わせる。封鎖されたＮ末端は最大の反応に必要
である。

ムーディ（Ｍｏｏｄｙ）ら、ペプチド（Ｐｅｐｔｉｄｅ
ｓ）（１９８３年）、４巻（５号）、６８３〜６８６ペ
ージは小細胞肺腫瘍（ＳＣＬＣ）細胞中に高濃度のボン
ベシン様ペプチドと受容体が存在することを開示してお
り、ボンベシンがヒト５ＣＬＣ中で重要な制御物質とし
て機能し得ることを示唆している。

ジエンセン（Ｊ　５ｎｓｅｎ）ら、ネーチャー（Ｎａｔ
ｕｒａ）　（１９８４年５月３日）、３０９巻、６１〜
６３ページは物質Ｐ類似体もボンベシン受容体拮抗質で
あることを開示している。

ヴエーバー（Ｗｅｂａｒ）ら、ジャーナル・オブ・クリ
ニカル・インヴエスティゲーション（Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、
　Ｉｎｖａｓｔ、）　（１９８５年）、７５巻、３０６
〜３０９ページはガストリン放出ペプチド（ＧＲＰ）の
細胞分裂誘起性はボンベシンと部分的に一致するＧＲＰ
　　１４−２７で示されるそのカルボキシ末端の断片に
存在することを開示している。著者はＧＲＰ又は密接に
関連する小ペプチドは５ＣＬＣ細胞のオートクリン（ａ
ｕｔｏｃｒｉｎａ）成員因子として作用することができ
ると推測している。

キュティツタ（Ｃｕｔｔｉｔｔａ）ら、ネーチャー（Ｎ
ａｔｕｒｅ）　（１９８５年８月２９日）、３１６巻、
８２３〜８２６ページはボンベシンに対するモノクロー
ナル抗体はホルモンの細胞受容体との結合を阻止し、イ
ンビトロの５ＣＬＣのクローン成長とインビボの５ＣＬ
Ｃ異種移植片の成長を阻止し、これらはボンベシン様ペ
プチドがヒト５ＣＬＣのオートクリン成長因子として機
能し得ることを示すと開示している。

コープス（Ｃｏｒｐｓ）ら、バイオケミカル・ジャーナ
ル（Ｂｉｏｃｈａｍ、　Ｊ　、）　（１９８５年）、２
３１巻、７８１〜７８４ページは物質Ｐの類似体はボン
ベシンによりスイス（Ｓ　ｗｉｓｓ）３Ｔ３細胞に誘導
されるＤＮＡ合成の促進を阻害することを開示している
。

ベプラー（Ｂ　ｅｐｌｅｒ）ら、キャンサー・リサーチ
（Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ）　（１９８７年５
月１日）、４７巻、２３７１〜２３７５ページはウンデ
カペプチドのフィサレミン（Ｐｈｙｓａ−１ａｅｍｉｎ
）は５ＣＬＣセルラインのクローン及びマス培養の成長
をピコモルの濃度で阻止することを開示している。

バインツーエリアン（Ｈａｌｎｚ　−Ｅｒ１ａｎ）ら。

アメリカン・ジャーナル・オブ・フィジオロジ−（Ａｍ
、　Ｊ　、　Ｐｈｙｓｉｏｌ、）　（１９８７年）、２
５２巻、０４３９〜Ｇ４４２ページはボンベシンの［Ｄ
−Ｐｈｅ”１類似体は現在までに確認された唯一のボン
ベシン受容体拮抗質であり、ボンベシン受容体とのみ相
互作用することを開示している。

コイ（Ｃｏｙ）ら、ジャーナル・オブ・バイオロジカル
・ケミストリー（Ｊ、Ｂｉｏｌ。

Ｃｈａｍ、）　（１９８８年）、２６３巻（１１号）、
５０５６〜５０６０ページはＣ末端オクタペプチド領域
におけるＣ０ＮＨペプチド結合基がＣＨっＮＨ基により
置き換えられた［Ｌｅｕ１４］ボンベシン類似体を開示
している。それらの１つである［Ｌｓｕ”−ψ−ＣＨ，
ＮＨ−Ｌｅ　ｕ”］ボンベシンはスイス３Ｔ３マウス繊
維芽細胞の増殖を刺激する。

バインプルツク（Ｈｅｉｍｂｒｏｏｋ）ら、ジャーナル
・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ、　Ｂｉｏ
ｌｏ、　Ｃｈｅｍ、）　（１９８８年）、２６３巻（１
５号）、７０１６〜７０１９ページはＧＲＰ−２０−２
７，Ｎ−アセチル−ＧＲＰ−２１−２７、Ｎ−アセチル
−ＧＲＰ−２２−２７、及びＮ−アセチル−ＧＲＰ−２
３−２７を開示している。それらのすべてはＮ−アセチ
ル−ＧＲＰ−２０−２７より結合阻害及びチミジン取り
込み試験における能力が低かった。

ＧＲＰの拮抗薬として作用するペプチド誘導体を提供す
るのが本発明の１つの目的である。他の目的はこれまで
知られているペプチド誘導体より大きな能力を持つペプ
チド誘導体を提供することである。更に別の目的は本発
明のペプチド誘導体を投与することにより５ＣＬＣを処
理する方法を提供することである。別の目的はこれらの
ペプチド誘導体の製造方法を提供することである。更に
別の目的はこれまで知られているペプチド誘導体より容
易に合成されるペプチド誘導体を提供することである６
本発明のこれらの及び他の目的は次の記述から明らかに
なるであろう。

ＧＲＰ拮抗質であり、スイス３Ｔ３細胞におけるＧＲＰ
で刺激された細胞分裂誘起性を抑制する一連のペプチド
誘導体が発見された。

本発明のペプチド誘導体は次の式 （式中、Ｒ２はアルキルアシル基、アルキルスルホニル
基又はアルコキシカルボニル基であり、ＲとＲＬは同一
か又は独立に炭素原子数１〜８のアルキル基又はアルケ
ニル基；もしくはアリールアルキル基であり、ここでア
ルキル基、アルケニル基及び芳香族基は任意に炭素原子
数１〜３のアルキル基で置換され、またＲとＲ１を含む
炭素はＲまたはＳ配置のいずれかであり、そして任意の
１つの光学的に活性のアミノ酸はそのＤ異性体によって
置換されることができるか、又はグリシンはＡｌａ又は
Ｄ−Ａｌａによって置換されることができる）を持つ。

本発明のペプチド誘導体のＧＲＰ拮抗質としての活性は
放射性ＧＲＰ誘導体を使用する競争的結合分析により測
定した。スイス３Ｔ３繊維芽細胞をこの試験におけるＧ
ＲＰ受容体の供給源として使用した。これらの細胞はＧ
ＲＰ結合と反応してＤＮＡ合成の速やかな増加を示すの
で、ＧＲＰ受容体に結合する化合物はそれらのＤＮＡ合
成を促進する能力を試験することも可能である。新しい
ＤＮＡ合成は細胞分裂における早い段階の１つであり、
細胞分裂誘起性又は細胞成長の指標として広く認められ
ている１次に受容体に結合し且つ成長を促進しない化合
物につき、それらのＧＲＰで促進されるＤＮＡ合成を阻
止する能力を試験する。ＤＮＡ合成を阻止する化合物は
細胞分裂誘起拮抗質である。５ＣＬＣ細胞におけるＧＲ
Ｐ受容体に対するこれら拮抗質の効果をこれらの細胞に
おけるＧＲＰ依存性カルシウム放出の阻害を測定するこ
とにより決定した。

本発明のペプチド誘導体のペプチド部分はそれらの構成
アミノ酸から通常のペプチド合成法好ましくは同相法に
より合成することができる０次いでペプチドは逆相高速
液体クロマトグラフ（ＨＰＩＣ：）により精製される。

ペプチド合成の標準方法は、例えば次の著書、シュロー
ダ−（Ｓ　ｃｈｒｏｅｄｅｒ）ら、「ザ・ペプチド（Ｔ
ｈｅ　Ｐｅｐｔｉｄａｓ）　Ｊ　、Ｉ巻（アカデミツク
・プレス（Ａ　ｃａｄａ　ｍ　ｉｃ　Ｐ　ｒａｓｓ）　
。

１９６５年）、又はボダンスキー（Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ
）ら、ペプチド合成（Ｐ　ｅｐｔｉｄａ　Ｓ　ｙｎｔｈ
ｅｓｉｓ）　Ｊ（インターサイエンス・パブリッシャー
ズＩ　ｎｔｅｒｓｃｉａｎｃａ　Ｐ　ｕｂｌｉｓｈａｒ
ｓ）、１９６６年）、又はマツクオーミ−（Ｍ　ｃ　Ｏ
ｍ１ｏ）　（編集）、「有機化学における保護基（Ｐ　
ｒｏｔａｃｔｉｖａＧｒｏｕｐｓ　１ｎ　Ｏｒｇａｎｌ
ｅ　Ｃｈｅｍｌｓｔｒｙ）　Ｊ　　（プレナム・プレス
）、１９７３年）、ボラニイ（Ｂ　ａｒａｎｙ　）ら、
［ザ・ペプチド（Ｔ　ｈｅ　Ｐ　ａｐ−ｔｉｄｅｓ）　
　：　　分析（Ａｎａｌｙｓｉｓ）　、合成（Ｓ　ｙｎ
−ｔｈａｓｉｓ）、生物学（Ｂ　ｉｏｌｏｇｙ）　Ｊ、
　２巻、１章（アカデミツク・プレス（Ａｃａｄｅｗｅ
ｉｃ　Ｐｒｅｓｓ）、１９８０年）に開示されている。

これらの著書の教示する内容は参考として組み入れる。

本発明の化合物は式Ｒ”−Ｈｌｓ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖ
ａｌ−Ｇｌｙのアシル化されたペンタペプチド（又は任
意の１つの光学的に活性のアミノ酸が任意にそのＤ異性
体によって置換されており、又グリシンが任意にＡｌａ
又はＤ−Ａｌａによって置換されている類似体）（ＲＲ
は前に定義したような意味を持つ、）を式 のヒスチジンアミドと反応させることにより製造される
。

本発明の光学的に活性の出発アミノ化合物は標準の分割
法を使用するラセミ性アミンの分割により製造されるか
、又は光学的に活性の前駆物質からそれらの光学的完全
性を維持する方法を使用して製造される。後者の場合、
式 の光学的に活性のアルデヒドを式φ、ｃｐ”ＣＨ，Ｒ”
Ｂｒ−ｎ　（式中Ｒ１はアルキル基又はアラルキル基で
ある。）のホスホニウム塩と反応させる。この反応はウ
ィツテイヒ（ｗｉｔｔｔｇ）反応に適する条件下、すな
わちアルキルリチウム化合物、例えば　ｎ−ブチルリチ
ウム、アルカリ金属水素化物、例えばＮａＨ又はＫＨ、
アルカリ金属アミド、例えばリチウムジエチルアミド（
ＬＤＡ）　、又はアルカリ金属へキサメチルジシラザン
、例えばカリウムへキサメチルジシラザンのような塩基
の存在下で実行する１反応はエーテル、例えばエチルエ
ーテル、又はテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）又はアルキ
ルスルホキシド、例えばジメチルスルホキシド（ＤＭＳ
Ｏ）のような極性溶媒の存在下で実行する６反応はほぼ
室温、典型的には約２０〜約２５℃で約３〜約２４時間
の間実行する１反応生成物は式 の不飽和付加物である。

■のＢＯＣ保護基を除くと式 の光学的に活性のアルケニルアミンが生成する。

弐■の不飽和付加物は接触的に水素添加して式 の飽和アルカンを得ることができる。

水素添加は大気圧又はそれ以上の圧力下。

触媒１例えばＰｄ、ＰｄＯ，Ｐｔ又はｐｔｏ。

の存在下、アルコールのような極性溶媒、例えばエチル
アルコール；エステル、例えば酢酸エチル；又はフラン
、例えばＴＨＦ中で任意の適当な条件下で実行する。水
素添加はほぼ室温で１モル当量のＨ８が吸収されるまで
実行する。

水素添加に続いて飽和化合物を回収し、ＢＯＣ保護基を
除去することによりアミノ基を遊離すると式 ％式％ のアミンが得られる。

ＲとＲ１が同一の式■の化合物は相当するケトンから水
素化ホウ素化合物、例えばナトリウムボロヒドリド又は
ナトリウムシアノボロヒドリドで還元的アミン化により
、もしくは相当するオキシムをジエチルエーテル又はテ
トラヒドロフランのような溶媒中で接触的水素添加条件
下又はリチウムアルミニウムヒドリドのような金属水素
化物で還元することにより製造することもできる。

次いで式■又は■の化合物を酢酸エチル中はぼ等モル量
のイソブチルオキシカルボニルクロリド、及びほぼ等モ
ル量のＮ−メチルモルホリンの存在下でほぼ当モル量の
ジーＢＯＣ−ヒスチジンと反応させる。この反応は約０
℃ないし約６０℃の温度で約１時間ないし約２４時間実
行、して式■ ０Ｒ のジーＢＯＣ−ヒスチジンの付加物を得る。

次いでこの付加物を通常の酸性条件下で脱保護し、式Ｒ
”−Ｈｌｓ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−ａｔｙのアシル
化されたペンタペプチド（又は任意の１つの光学的に活
性のアミノ酸は任意にそのＤ異性体によって置換されて
おり、又グリシンは任意にＡｌａ又はＤ　−Ａ　ｌ　ａ
によって置換されている類似体）と反応させて式■の化
合物又は類似体（任意の１つの光学的に活性のアミノ酸
は任意にそのＤ異性体で置換されるか、又はグリシンは
任意にＡｌａ又はＤ−Ａｌａによって置換されている。

）を得る。

既知のＧＲＰのペプチド拮抗質は１４のアミノ酸を含む
ＧＲＰ類似体であるボンベシン又は１１・のアミノ酸を
含むＰ物質の構造に基づく、これらの拮抗質の大きさは
薬動力学的問題が遭遇するような大きさである。更にＰ
物質に基づく拮抗質はＰ物質受容体と交差反応性を示す
。

現在ある５ＣＬＣ治療のための化学療法剤は効果が貧弱
である。ＧＲＰとその受容体との結合を阻害することに
よる５ＣＬＣの治療は通常の化学療法を上回る利点を提
供する。

第一にペプチド誘導体の拮抗質としての使用は通常の化
学療法の著しい有毒な副作用を回避しようと意図する。

更に受容体拮抗質は有効となるために細胞に入ることを
必要としない。

本発明のペプチド誘導体はＧＲＰの成長促進活性に感受
性の細胞の成長の阻止に有効である。

次の方法は本発明のペプチド誘導体の活性の測定に使用
された。

ケー・ブラウン博士（Ｄｒ、に、Ｂｒｏｗｎ）（インス
ティテユート・オブ・アニマル・ブイジオロジー、ケン
ブリッジ、英国（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆ　　Ａｎｉｍ
ａｌ　　Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、　　Ｃａｍｂｒｉｄｇ
ｅ、　　Ｕ。

Ｋ、））から入手したスイス３７３細胞を１０％ウシ胎
児血清、２ｍＭグルタミン及び１％ペニシリン−ストレ
プトマイシンを添加したＤＭＥＭ　（Ｇ　ｉ　ｂ　ｃ　
ｏ）を含むコスタ−（Ｃｏｓｔａｒ）　　１２穴（ｗｅ
ｌｌ）平板中で集合状態に増殖させた。細胞を結合用緩
衝液［１；ｌ　　ＤＭＥＭ：ウェイマウス（Ｗａｙｍｏ
ｕｔｈｓ）ＭＢ７５２／１培地、１ｍｇ／ｍｌ　　ＢＳ
Ａ（フラクションＶ　（Ｆ　ｒａｃｔｉｏｎ　Ｖ　）、
カルバイオケミ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅ＋ｍ）　、　）添
加］で２回洗浄した。拮抗質を１０−ＭＭＣｌに溶解し
、結合用緩衝液中で適当な濃度に希釈した０次いで拮抗
質を細胞に添加し、続いて［３Ｈ−Ｐｈｅ”］　ＧＲＰ
１５−２７を３ＨＭの最終濃度となるように添加した。

１５℃で６０分間インキュベーション後上澄液を除き、
細胞単層を洗浄用緩衝液（１５０ｍＭ　ＮａＣ１゜２０
ｍＭ　Ｎａ、ＨＰＯ，，５ｍＭ　ＫＣＩ、１．８ｍＭ　
ＫＨ２ＰＯ，，１ｍｇ／ｍｌ　　ＢＳＡ）で４回洗浄し
た０次いで細胞を１ｉ＋１　／穴（ＷＳｉ２）の溶解用
緩衝液（１％トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ）　Ｘ−１００，
０，１％ＢＳＡ）で溶解し、溶液を計数のためシンチレ
ーションバイアル中に吸引移送した。各データ値を３回
の繰返しで集めた。

スイス３Ｔ３細胞を２４穴（ｗｅｌｌ）平板（Ｃｏｓｔ
ａｒ）の無血清ＤＭＥＭ中で４８時間単層培養で増殖さ
せた後、ＧＲＰ又はＧＲＰ同族体及び２３ＨＭの１Ｈ−
チミジンを添加した。

更に４８時間後、細胞単層をＰＢＳで２回洗浄し、次い
で細胞“を５ｍＭＥＤＴＡを含む１ｍｌの１０ｘトリプ
シンで除いた。細胞をスカトロン（Ｓ　ｋａｔｒｏｎ）
ヂ過装置で集め、フィルターをシンチレーションカウン
ターで計数した。

スイス３Ｔ３細胞を２４穴（ｗａｌｌ）平板（Ｃｏｓｔ
ａｒ）の無血清ＤＭＥＭ中で４８時間単層培養で増殖さ
せた後、ＧＲＰ又はＧＲＰ同族体及び２３ｎＭの１Ｈ−
チミジンを添加した。

更に４８時間後、細胞単層をＰＢＳで２回洗浄し、次い
で細胞を５ｍＭＥＤＴＡを含む１ｍｌの１０ｘトリプシ
ンで除いた。細胞をスカトロン（Ｓ　ｋａｔｒｏｎ）　
（ｐ過装置で集め、フィルターをシンチレーションカウ
ンターで計数した。

ハイキラ（）Ｉａｉｋｋｉｌａ）ら、ジャーナル・オブ
・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ、　Ｂｉｏｌ。

Ｃｈｅｗ、）（１９８７年）、２６２巻、１６４５６ペ
ージの方法により、セレニウム、インシュリン及びトラ
ンスフェリンを添加したＲＰＭＩ−１６４０（Ｒｏ　）
培地に維持した約１×１０８のＨ３４５５ＣＬＣ細胞を
静置して集め、ＲＯで洗浄した０次いでそれらを２ｍｌ
のＲＯに再懸濁し、これに１０＠細胞当たり１．２Ｈｍ
ｏｌのフラ（Ｆｕｒａ）　−２／ＡＭを添加した。３７
℃で１５分間インキュベージ３ン後、細胞をＲｏでｌｏ
ｍｌに希釈し、３７℃で１時間インキュベーションし、
次いで細胞を遠心分離し、ＨＥＰＥＳ塩類溶液（１４０
ｍＭＮａＣ１，５ｍＭＫＣｌ、５ｍＭブドウ糖、１ｍＭ
　ＣａＣ１１，１ｍＭ　ＭｇＣｌ２．２０ｍＭ　ＨＥＰ
ＥＳ、ｐＨ７，４）に２．５〜５ｘ　ｉ　ｏ”細胞／ｍ
ｌの濃度で再懸濁した。細胞は使用前２時間まで氷上に
保持した＊Ｃａ”の測定は３７℃でアミンコ（Ａｍｉｎ
ｃｏ）　５ＰＦ−５００蛍光光度計で実施した。励起波
長は３４０ｎｍ、発酵波長は５１０ｎｍであった。２ｍ
ｌの細胞懸濁液を定期的に３　ｍ　ｌのプラスチック製
キュベツト中で再懸濁した。

それらはデータを集める前３７°で少なくとも５分間平
衡化した。安定なベースラインが確立した後、被験化合
物と１１００ｎのＧＲＰとの混合物を添加し、約５分間
にわたってデータを集めた。同時にＧＲＰのチャレンジ
用量を添加し、データを更に５分間にわたって集めた１
次いで細胞を４μｌの１０％トリトン（Ｔｒｊｔｏｎ）
　Ｘ　−１００で溶解して極大蛍光値を測定した。ベー
スライン蛍光は引き続き４０μｍの２Ｍトリス（Ｔｒｌ
ｇ）（ｐ　Ｈ９、５）及び６４μＭ（７）０．２Ｍ　Ｅ
Ｇ’ｒＡを添加した後測定した。

本発明の代表的拮抗質について得られた結果を次の表に
示した。

ＪｔＡ １（Ｒ）　　　　２ＨＭ １（Ｓ）　　　１７ｎＭ 裏」−絞 方法（ＩＣ１６） ＢＣＤ ＮＲ ４９Ｍ ００　ｎＭ ＮＲ ２ｎＭ ＮＴ ２（Ｓ） １ｎＭ ＮＴ ＮＴ ＮＴ ３（Ｒ） ５ｎＭ ＮＲ ５ｎＭ ＮＴ ４（Ｒ） ４９Ｍ ＮＲ ｒｉＭ ＮＴ ５（Ｒ） ４９Ｍ ＮＴ ＮＴ ＮＴ ４９Ｍ ＮＲ ４９Ｍ ＮＴ ＮＲ−３００ｎＭ以上で反応なし ＮＴ−試験せず 次の実施例は本発明を例証するものであるが、それに限
定されるものではない、特記しない限り、すべての光学
的に活性のアミノ酸はＬ配置を持つ。すべての温度は摂
氏で表す。

３１１区−Ｌ カリウムへキサメチルジシラザン（ＴＨＦ中１．８５Ｍ
溶液の１０．８ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）をｎ−ブチルトリ
フェニルホスホニウムプロミド（７，９９ｇ、２０ｍｍ
ｏｌ）とＴＨＦ（７５ｒｎ　Ｌ　）のＯｏで攪拌してい
る混合物に１５分間にわたって添加した。添加が完了し
た後混合物をＯｏで３０分間攪拌し１次いでトルエン（
１０ｍＬ）中（Ｓ）−２−メチル−４−（ｔａｒｔ、ブ
トキシカルボニルアミノ）ペンタナール（２，０４ｇ、
９．４８ｍｍｏｌ）の溶液を１５分間にわたって添加し
た６反応混合物をＯｏで３０分間、２０〜２５＠で３０
分間、次いで４０゛で１８時間攪拌した。

メタノール（１ｍ　Ｌ　）と次にＨ，０（５ｍＬ）を添
加し、溶媒を減圧下４０”で除去した。

残留物を酢酸エチルとロッシェル（Ｒｏｃｈａｌｌｅ）
塩の希釈した溶液との間で分配した。酢酸エチル抽出液
をブラインで洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）Ｌ、を濾過
し濃縮した。残留物をシリカゲル上でフラッシュクロマ
トグラフし、１０％酢酸エチル−９０％ヘキサンで溶離
して２．１０　ｇの生成物を得た。

無水エタノール（７５ｍＬ）中（Ｓ）　−２−メチル−
４−（ｔａｒｔ、ブトキシカルボニルアミノ）−５〜ノ
ネン（２，０ｇ）の溶液をパール装置中で５％パラジウ
ム炭素触媒（１，０ｇ）上、２０〜２５＠、２．４ｋｇ
／ａｍ”（３４ｐｓｉ）の始発圧力で水素添加した。１
当量の水素が摂取された後（１時間）、混合物を伊過し
、減圧下で濃縮して１．７８ｇの生成物を得た。

酢酸エチル（５０ｍＬ）中（Ｓ）−２−メチル−４（ｔ
ａｒｔ、ブトキシカルボニルアミノ）ノナン（１，７ｇ
）の溶液をドライエライト（ｄｒｉａｒｌｔａ）チュー
ブを付し水浴中で冷却し。

無水塩化水素ガスで７分間飽和した。０＠で１時間、次
に室温で１時間攪拌後、溶媒を減圧下で除去し、固体残
留物をヘキサン−ｎ　−ブチルクロリドから再結晶化し
てアミン塩酸（０，５２ｇ）を得、このものはｍｐ１４
２〜１４４°であり、１３５１をで軟化した。

酸塩（０，９７ｇ、５．Ｑｍｍｏｌ）の溶液と続いて４
−メチルモルホリン（０、５５ｍ　Ｌ、５、Ｏｍｍｏｌ
）の溶液を添加し、反応物を室温で２０時間攪拌した。

１０％クエン酸、ブライン、飽和Ｎ　ａ　ＨＣＯａ溶液
及びブラインで洗浄した後、酢酸エチル抽出液を乾燥し
くＮａ、Ｓｏ、）、Ｆ’過し減圧下で濃縮した。

残留物をシリカゲル上でフラッシュクロマトグラフした
。２％メタノールと９８％クロロホルムの混液で溶離し
て純粋なりＯＣ保護ヒスチジンアミドを得た。

酢酸エチル（５０ｍＬ）中Ｎａ、Ｎｉｍ−ビスーＢＯＣ
−ヒスチジン酢酸エチルソルベード（１，９２ｇ、５．
Ｏｍｍｏｌ）、４−メチルモルホリン（０，５５ｍＬ、
５．Ｏｍｍｏｌ）及びイソブチルクロロホルメート（０
，６５ｍＬ。

５、Ｏｍｍｏｌ）の混合物を窒素ガス下水浴中で１５分
間攪拌した。酢酸エチル（１０ｍＬ）中（Ｒ）−２−メ
チル−４−アミノノナン塩酢酸エチル（２５ｍＬ）中工
程４で得られたＢＯＩＣ保護アミド（０，９０ｇ）の溶
液を水浴中で冷却し、ＭＣＩガスで５分間飽和した。

水浴温度で１時間、次いで室温で１時間攪拌後、溶媒を
減圧下で除去し、残留物を乾燥して脱保護したアミド塩
酸塩を得た。

−Ｇｌ　　　の　　゛ このペプチドはＤＣＣカップリングを添加した追加のア
ミノ酸とＢＯＣ−グリシルレジンで開始する標準の同相
法で製造した。

ＤＭＦ（３ｍＬ）中工程５で得られたヒスチジンアミド
塩酸塩（１６ｍｇ）、工程６で得られたペプチド（２３
ｍｇ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（５，４ｍ
ｇ）　、トリエチルアミン（１４μＬ）及びジシクロへ
キシルカルボジイミド（７，２ｍｇ）の溶液を窒素ガス
下室温で２０時間攪拌した。減圧下で濃縮後、残留物を
蒸溜水と混合しヂ過した。

水抽出液を酢酸エチルで２回洗浄し、伊過し凍結乾燥し
て白色粉末を得た。この生成物を調製用ＨＰＬＣで精製
して生成物を白色固体として得た。

実施例２ 工程１．（Ｓ　　−２−メチル−４−アミノ−酢酸エチ
ル（５０ｍＬ）中（Ｓ）−２−メチル−４−（ｔａｒｔ
、ブトキシカルボニルアミノ）−５−ノネン（１，０ｇ
）の溶液をドライエライトチューブを付し水浴中で冷却
し、無水塩化水素ガスで８分間飽和した。水浴中で４５
分間攪拌後、溶媒を減圧下で除去して脱保護したアルケ
ニルアミン塩酸塩を得た。

Σ 酢酸エチル中Ｎα、Ｎｉｍ−ビス−ＢＯＣ−ヒスチジン
酢酸エチルツルベート（１，２７ｇ、３．２９ｍｍｏｌ
）　、４−メチルモルホリン（０，３６ｍＬ、３　、２
９　ｍ　ｍｏｌ）及びイソブチルクロロホルメート（０
，４３ｍＬ、３．２９ｍｍｏｌ）の混合物を窒素ガス下
水浴中で１５分間攪拌した。（Ｓ）−２−メチル−４−
アミノ−５−ノネン塩酸塩（０，６３ｇ、３．２９ｍ　
ｍｏｌ）と続いてＮ−メチルモルホリン（０，３６ｍＬ
、３．２９ｍｍｏｌ）を添加し１反応混合物を室温で２
０時間攪拌した。１０％クエン酸、ブライン、飽和Ｎ　
ａ　ＨＣＯｓ溶液及びブラインで洗浄した後、酢酸エチ
ル抽出液を乾燥しく　Ｎ　ａ　２　Ｓ　０４）　、’！
”過し減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲル上でフラ
ッシュクロマトグラフした。２％イソプロパツールと９
８％クロロホルムの混液で溶離して０．９４ｇの生成物
を得た。

酢酸エチル−ヘキサンから再結晶化して分析的に純粋な
生成物を得、ｍｐ　　８５．Ｑ〜９０．０＠であった。

ンアミド 酢酸エチル（５０ｍＬ）中工程２で得られたＢＯＣ保護
アミド（０，８０ｇ）の溶液を水浴中で冷却し、ＨＣ１
ガスで７分間飽和した。

水浴温度で１時間攪拌後、溶媒を減圧下で除去し、残留
物を乾燥して脱保護したアミドＨＣ１塩を得た。

ＤＭＦ（１０ｍＬ）中工程３で得られたヒスチジンアミ
ド（２６ｍｇ）、実施例１工程６で得られたペプチド（
２８ｍｇ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（８，
３ｍｇ）。

トリエチルアミン（３０μＬ）及びジシクロへキシルカ
ルボジイミド（１４，８ｍｇ）の溶液を窒素ガス下室温
で２０時間攪拌した。減圧下で濃縮後、残留物を蒸溜水
で磨砕しＦ’過した。水抽出液を凍結乾燥して白色粉末
を得た。この生成物を調製用ＨＰＬＣで精製して生成物
を白色固体として得た。

このペプチドはＤＣＣカップリングを添加した追加のア
ミノ酸とＢＯＣ−グリシルレジンで開始する標準の固相
法で製造した。これを調製用ＨＰＬＣで精製した。

した。

工程２゜ トリエチルアミンの存在下でＤＭＦ中で工程１で得られ
たペプチドをメタンスルホニルクロリドと反応させてメ
シル誘導体を得る。

工程２で得られた酸を実施例１工程５で得られたヒスチ
ジンアミドと実施例１工程７の方法によりカップリング
してこの実施例のメシル誘導体を得る。

失胤且土 工程１．０ （Ｃ）ｌ　　ＣＣ−ＮＨ−Ｈｌｓ−Ｔｒ−Ａｌａ−Ｖａ
ｌ−Ｇｌこのペプチドは無水ビバル酸で無水酢酸を置き
換え、実施例１工程６の方法により製造工程１で得られ
た酸を実施例１工程５で得られたヒスチジンアミドと実
施例１工程７の方法によりカップリングしてこの実施例
のピバロイル誘導体を得た。

叉１夏旦 工程１．０ ＣＨＣＯＣ−ＮＨ−）１ｉｓ−Ｔｒ−Ａｌａ−Ｖａｌ−
ＧＩＤＭＦ中で実施例１工程１で得られたペプチドをジ
（ｔａｒｔ、ブチル）ジカーボネートと反応させてこの
ＢＯＣペプチドを得る。

工程２゜ 工程１から得られた酸を実施例１工程５から得られたヒ
スチジンアミドと実施例１工程７の方法によりカップリ
ングしてこの実施例のＢＯＣ誘導体を得る。

工程２゜ ＣＨｘ　ＣＨ（Ｃ）１３　）２ 烹ｆｆｌ髪 メタノール（７５ｍ　ＩＩ　）中２，６−シメチルー４
−ヘプタノン（２，８４ｇ、２０ｍｍｏｌ）、酢酸アン
モニウム（１５，４ｇ、２００ｍｍｏｌ）及びナトリウ
ムシアノボロヒドリド（０，９３ｇ、１４　ｍ　ｍ　ｏ
　ｌ　）の溶液を室温で２０時間撹拌した。水浴中で冷
却後１反応混合物を濃ＭＣＩで酸性にし、減圧下３５６
で濃縮した。

残留物を酢酸エチルと水の間で分配し、水層部分を除き
、４０％ＮａＯＨ溶液で塩基性にした。生成物をエチル
エーテル中に抽出し、抽出液をブラインで洗浄し、乾燥
しく　Ｎ　ａ　＊　Ｓ　Ｏ４）　、（濾過し濃縮して１
．２２ｇの生成物を得た。ＭＣＩ塩に変換し、ＭａＯＨ
−ＥｔＯＡｃから再結晶化して純粋の１．０４ｇのＭＣ
Ｉを得、ｍｐ２４８〜５０”（分解）であった。

このペプチドはこの実施例工程１のアミンを（Ｒ）−２
−メチル−４−アミノノナン塩酸塩に代えて用い、実施
例１工程４〜７の方法により製造した。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ＾２はアルキルアシル基、アルキルスルホニ
   ル基又はアルコキシカルボニル基であり、ＲとＲ＾１は
   同一か又は独立に炭素原子数１〜８のアルキル基又はア
   ルケニル基；もしくはアリールアルキル基であり、ここ
   でアルキル基、アルケニル基及び芳香族基は任意に炭素
   原子数１〜３のアルキル基で置換さ れ、またＲとＲ＾１を含む炭素はＲまたはＳ配置のいず
   れかであり、そして任意の１つの光学的に活性のアミノ
   酸はそのＤ異性体によって置換されることができるか、
   又はグリシンはＡｌａ又はＤ−Ａｌａによって置換され
   ることができる）の化合物。 ２、Ｒ＾２はアセチル基、ＣＨ＿３ＳＯ＿２、▲数式、
   化学式、表等があります▼又は▲数式、化学式、表等が
   あります▼である請 求項１記載の化合物。 ３、ＲはＣＨ＿２ＣＨ（ＣＨ＿３）＿２である請求項１
   記載の化合物。 ４、ＲはＣＨ＿２ＣＨ（ＣＨ＿３）＿２であり、Ｒ＾１
   は（ＣＨ＿２）＿ｎＣＨ＿３（式中ｎは２、３又は４で
   ある）請求項１記載の化合物。 ５、Ｒ＾２は▲数式、化学式、表等があります▼、ＣＨ
   ＿３ＳＯ＿２、 ▲数式、化学式、表等があります▼又は▲数式、化学式
   、表等があります▼であり、 ＲはＣＨ＿２ＣＨ（ＣＨ＿３）＿２であり、Ｒ＾１はＣ
   Ｈ＿２ＣＨ（ＣＨ＿３）＿２又は（ＣＨ＿２）＿ｎＣＨ
   ＿３（式中ｎは２、３又は４である）である請求項１記
   載の化合物。 ６、１）Ｒ＾２がアセチル基、ＲがＣＨ＿２ＣＨ（ＣＨ
   ＿３）＿２そしてＲ＾１が（ＣＨ＿２）＿４ＣＨ＿３で
   あるもの。 ２）Ｒ＾２がアセチル基、ＲがＣＨ＿２ＣＨ（ＣＨ＿３
   ）＿２そしてＲ＾１がＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ＿２）＿２ＣＨ
   ＿２であるもの。 ３）Ｒ＾２がＣＨ＿３ＳＯ＿２、ＲがＣＨ＿２ＣＨ（Ｃ
   Ｈ＿３）＿２そしてＲ＾１が（ＣＨ＿２）＿４ＣＨ＿３
   であるもの、 ４）Ｒ＾２が（ＣＨ＿３）＿３ＣＣ、ＲがＣＨ＿２ＣＨ
   （ＣＨ＿３）＿２そしてＲ＾１が（ＣＨ＿２）＿４ＣＨ
   ＿３であるもの、 ５）Ｒ＾２が（ＣＨ＿３）＿２ＣＯＣ、ＲがＣＨ＿２Ｃ
   Ｈ（ＣＨ＿３）＿２そしてＲ＾１が（ＣＨ＿３）＿４Ｃ
   Ｈ＿３であるもの、又は ６）Ｒ＾２がアセチル基、ＲがＣＨ＿２ＣＨ（ＣＨ＿３
   ）＿２そしてＲ＾１がＣＨ＿２ＣＨ（ＣＨ＿３）＿２で
   あるものから選ばれる請求項１記載の化合 物。 ７、式Ｒ＾３−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌ
   ｙのアシル化されたペンタペプチド、又は類似体（任意
   の１つの光学的に活性のアミノ酸が任意にそのＤ異性体
   によって置換されているか、又はグリシンが任意にＡｌ
   ａ又はＤ−Ａｌａによって置換されている）を式▲数式
   、化学式、表等があります▼ のヒスチジンアミドと反応させることからなる請求項１
   記載の化合物の製造方法。 ８、請求項１記載の化合物と医薬的に受 容可能な担体とからなる組成物であって、前記組成物は
   ＧＲＰの成長促進活性に感受性の細胞の成長の阻止に有
   効な組成物。 ９、細胞を請求項１記載の化合物のＧＲ Ｐの成長促進活性に拮抗する有効量で処理することから
   なるＧＲＰの成長促進活性に感受性の細胞の成長を阻止
   する方法。 １０、細胞の表面にＧＲＰ受容体と結合し た請求項１記載の化合物の少なくとも１つを有するＳＣ
   ＬＣ細胞。