JPH02249492A

JPH02249492A - ユビキノン９の製造方法

Info

Publication number: JPH02249492A
Application number: JP6909789A
Authority: JP
Inventors: Minoru Nishimura; 西村　実; Ryozo Iwasaki; 岩崎　亮三
Original assignee: Lion Corp
Current assignee: Lion Corp
Priority date: 1989-03-20
Filing date: 1989-03-20
Publication date: 1990-10-05

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】産呈上立■凪光互本発明は、補酵素の一種であるユビキノン９を微生物を
利用して製造する方法に関する。

ｌ米■肢皇補酵素Ｑとして知られているユビキノンは下記式（１）（但し１式中ｎは１〜１２の整数である。）で示され、
側鎖のインプレノイド単位数ｎによりＣＯＱ　ｌｙ　Ｃ
ＯＱ　ｚ　ｖ　”　”　’　”　”　ＣＯＱ　ｔ　ｔと
されている。このうちｎが９のＣｏＱ、はユビキノン９
といわれ。

脳血管障害、心不全、高血圧、糖尿病の治療薬。

抗がん剤アドリアマイシンの副作用防止薬等として有用
である。

従来、このユビキノン９を製造する方法としてキャンデ
ィダ属、シュードモナス属に属する菌（特公昭４４−１
０７５２号公報）、アクロモバクタ−属に属する菌（特
公昭４４−２６９０８号公報）、グラフィオラ属に属す
る菌（特開昭５６−１４８２９２号公報）、ロドシュー
ドモナス属に属する菌（特開昭５７−２０２２９４号公
報）、ストレプトマイセス属に属する菌の培養物（特開
昭５４−１３８１９１号公報）、イネ科植物の培養細胞
（特開昭５３−７２８９５号公報）、紅花の培養細胞（
特開昭５４−８０４９１号公報）の培養物からユビキノ
ン９を得る方法が知られている。

が　　しよ　と　るしかしながら、上記の方法は菌体又は培養細胞からのユ
ビキノン９の生成量が低かったり、培養時の菌体濃度が
低い等の問題を有し、いずれの方法も工業的に不利であ
った。

このため、従来よりユビキノン９を効率よく生産し得る
工業的に有利な製造方法の開発が望まれていた。

する　めの　　　び本発明者らは、上記要望に応えるため鋭意検討を重ねた
結果、ムコール属に属する菌を栄養培地を用いて培養し
、培養物、特にその脂質成分中からユビキノン９を分離
することにより、ユビキノン９を効率よく製造できるこ
とを知見した。

即ち、ムコール属に属する菌を栄養培地を用いて培養す
ると、意外にもかかる菌が栄養培地中で炭素源を補酵素
の一つであるユビキノン９に変換してユビキノン９を多
量に産生しながら増殖し。

しかもこのユビキノン９が培養物の脂質成分中に混在す
ること、従って増殖した菌体から脂質成分を抽出し、高
速液体クロマトグラフィー等で分離することにより、ユ
ビキノン９を採取し得ることを見い出し、本発明をなす
に至った。

従って、本発明はムコール属に属する菌を培養し、該培
養物からユビキノン９を分離することを特徴とするユビ
キノン９の製造方法を提供する。

以下１本発明につき更に詳しく説明する。

本発明において用いるムコール属の菌の種類に特に制限
はなく、この属に属するものであればいずれのものでも
使用し得るが、特にムコール・ジャバニクス（Ｍｕｅｏ
ｒ　、＄ａｖａｎｉｃｕｓ）　Ｉ　Ｆ　Ｏ４５７０。

ムコール・アンビグアス（Ｍｕｃｏｒ　ａ＊ｂｉｇｕｕ
ｓ）　Ｉ　Ｆ　０６７４２等を好適に使用し得る。

このムコール属の菌は栄養培地で培養される゛。

栄養培地中の配合成分の種類には制限がなく、種々のも
のを使用し得るが、特に培養に際して適切な炭素源、窒
素源、無機塩、更には必要に応じて増殖因子、界面活性
剤、その他の栄養源などを配合することが好ましい、こ
こで、栄養培地の成分を具体的に例示すると、炭素源と
してはグルコース等の炭水化物（培地濃度３００〜１０
ｇ７１０００ｊｌ）、ｎ−アルカン等の炭化水素（５０
〜Ｌｏｇ／１ｏｏｏｄ）、カプリン酸、カプリル酸、ラ
ウリン酸、ミリスチン酸、バルミチン酸。

ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸等の炭素数８〜
２２の脂肪酸又はそのアルキルエステルや主にパルミチ
ン酸及びオレイン酸より構成されるパーム油、主にオレ
イン酸及びリノール酸より構成される大豆油、コーン油
、落花生油、米糠油、主にオレイン酸、リノール酸及び
エルシン酸より構成されるナタネ油、主にオレイン酸及
びリシルイン酸より構成されるヒマシ油等の前記脂肪酸
（１）ｘｘテＪＬｔ　（１００〜１０　ｇ／　１０００
ｄ）など、窒素源としては尿素、ペプトン、大豆蛋白、
コーン・スチーブ・リカー等の有機窒素源や（ＮＨ９）
ｘ　Ｓ　０４−ＨＮ、ＮＯ，等の無機窒素源など、無機
塩としてはＫＨ，ＰＯ４，ＭｇＳＯ４・７Ｈ，Ｏ，Ｆｅ
ＳＯ４・７Ｈ，Ｏ。

Ｚｎ５Ｏ，・７Ｈ，Ｏ，Ｃａ（ｊ！、・２Ｈ，Ｏ，Ｃｕ
ＳＯ４・５Ｈ，Ｏ。

など、増殖因子としては酵母エキス、麦芽エキスなど、
界面活性剤としてはポリオキシエチレン（６０）ソルビ
タン脂肪酸エステルなどを挙げることができる。

本発明において、上記菌体の培養方法に限定はないが、
液体培地で振盪培養、通気攪拌培養により培養を行なう
か、或いは液体培地をスポンジ等に含浸して固体培養に
より培養を行なうことが好ましい、また、培地のＰＨは
３．５〜７．培養温度は１５〜４０℃、培養時間は２４
〜２００時間程度とすることが好適である。

培養終了後は、培養物から脂質成分を採取することが好
ましいが、この方法としては公知の手段を採用し得１例
えば培養物より菌を集菌した後、破砕助剤を用いてホモ
ジナイザーで菌体の破砕を行なうと共に、抽出溶媒によ
り脂質を抽出する方法などを好適に採用し得る。ここで
、抽出溶媒としては、非極性溶媒と極性溶媒との混合溶
媒を使用することが好ましく、具体的にはｎ−ヘキサン
とエタノールとの混合溶媒、クロロホルムとメタノール
との混合溶媒等が例示され、中でもｎ−ヘキサンとエタ
ノールとの混合溶媒が好適に使用し得る。なお、上記混
合溶媒における非極性溶媒と極性溶媒との混合比は３：
１（容量／容量、以下同様）〜１：３、特に２：１とす
ることが好ましい。

本発明において、培養物の脂質成分中からユビキノン９
を分離する方法も限定はないが、ユビキノン９が脂質成
分中の不けん化物成分に存在するので、脂質成分を上記
混合溶媒で抽出し、食塩水等で塩析した後に非極性溶媒
層を分取し、この非極性溶媒層より得られた脂質をメタ
ノール性アルカリでけん化した後、不けん化物を非極性
溶媒で抽出し、この中からユビキノン９を分離する方法
を採用し得る。また、脂質をけん化した後、ｎ−ヘキサ
ン等の非極性溶媒で抽出し、脂肪酸と不けん化物とを得
、不けん化物からユビキノン９を分離する方法も採用し
得る。

更に、不けん化物成分からユビキノン９を採取する方法
としては例えば非極性溶媒に溶かして薄層クロマトグラ
フ、カラムクロマトグラフを行なう等の方法が挙げられ
るが、中でもＯＤＳを充填剤としたカラムクロマトグラ
フを行なうことにより、ユビキノン９を収率良く採取す
ることができる。

本発明の方法で得られたユビキノン９は、医薬品原料と
して利用できるほか、化粧品、スキンクリーム、練歯磨
等の口腔用組成物などに好適に配合することができる。

見匪立羞米以上説明したように、本発明のユビキノン９の製造方法
によれば、ムコール属の菌体がユビキノン９を多量に産
生じながら高濃度に増殖するので、ユビキノン９を効率
良く得ることができ、工業的に有利である。

以下に実施例を示し、本発明を具体的に説明するが、本
発明は下記実施例に制限されるものではない。

〔実施例１〕直生立鹿又グルコース１００ｇ、ポリペプトン１０ｇ、ｌｌ母−ｆ
ｊＦＸｌｇ、ＫＨ，Ｐｏ、３ｇ、Ｍｇ５Ｏ，−７Ｈ，０
０，３ｇ、ＦｅＳＯ４”７Ｈ，０１０■、ＣａＣｌ２．
・２Ｈ，０１，２ｍｇ、ＣｕＳＯ４’５Ｈ，００，２ｍ
ｇ、　ＺｎＳＯ４−７Ｈ，０１，Ｏ＊を脱イオン水１ｆ
ｉに溶解した培地２Ωを３Ｑ容の培養槽に仕込んだ、こ
れにムコール・ジャバニクス（Ｍｕｃｏｒ　ｊａｖａｎ
ｉｃｕｓ）　Ｉ　Ｆ　Ｏ４５７０を接種し。

温度３０’Ｃ１通気量Ｑ、５ｖｖｍ、撹拌５００　ｒｐ
ｍで６０時間培養した。培養後、濾過により集金菌した
（菌体収量：乾燥菌体重量で３５ｇ／Ｑ）。

胤ｉ夏皿番上記菌体をｎ−へキサンとエタノール＝２７１（容量／
容量）を抽出溶媒、ガラスピーズを破砕助剤としてホモ
ジナイザーでホモジナイズし、菌体の破砕及び脂質の抽
出を行なった。この抽出液を回収して食塩水で塩析、洗
浄し、ｎ−ヘキサン層を集めて無水芒硝で脱水した後、
ｎ−ヘキサンを留去して脂質を得た。脂質は、乾燥菌体
１ｇ当たり０．３０ｇ得られた。

ユビキノン９の　　　量上記方法で得られた脂質１ｇを１０ｍＱの水に懸濁し、
メタノール８０　ｍｌ、ＮａＯＨ８ｇ、ピロガロール１
ｇを加えて１時間加熱還流した。冷却後、ｎ−ヘキサン
１００ｄと水５０ＩＩＩＱを加えて２回抽出を行なった
。更に、このｎ−へキサン層を水で３回洗浄し、無水芒
硝を加えて脱水後、ｎ−ヘキサンを留去して乾燥物を得
た。

得られた乾燥物をｎ−ヘキサン１０−に溶解し、高速液
体クロマトグラフィーでユビキノン９を分離した（カラ
ム：ＯＤＳ、４．５ＩＩＩＩＩφＸ３０Ｑｍ、展開溶媒
：エタノール／水＝９９．５１０．５（容量／容量）、
流量：０．８ｄ／ｉｎ、検出器：紫外線吸収２７５ｎｍ
）。

純品のユビキノン９（シグマ社製）を用いてＲ，Ｔ、と
絶対検量法で定量を行ない、薄層クロマトグラフ法、紫
外線吸収スペクトルで定性を行なったところ、上記脂質
中にはユビキノン９が６２００ｐｐｍ存在していた。

〔実施例２〕ムコール・ジャバニクスの代わりにムコール・アンビグ
アス（Ｍｕｃｏｒ　ａｍｂｉｇｕｕｓ）　Ｉ　Ｆ　Ｏ６
７４２を接種し、８０時間培養した以外は実施例１と同
様の方法で菌体を得た（菌体収量：乾燥菌体重量で３３
ｇ／ｆｉ）− ｍυ九炎実施例１と同様に抽出処理したところ、乾燥菌体１ｇ当
たり０．３６ｇの脂質が得られた。

ユビキノン９の　　、実施例１と同様の方法で脂質からユビキノン９を分離、
定量したところ、脂質中にユビキノン９が４４００ｐｐ
−存在していた。

出願人　　ラ　イ　オ　ン　株式会社代理人　　弁理士　小　島　隆　司

Claims

【特許請求の範囲】

１、ムコール属に属する菌を培養し、該培養物からユビ
キノン９を分離することを特徴とするユビキノン９の製
造方法。