JPH02211815A - 体細胞胚連続生産方法及びその装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、野菜類の種苗を大量に増殖するための手段と
して利用される体細胞胚連続生産方法及びその装置に関
するものである。

〔従来の技術〕

植物の体細胞胚（不定胚）の増殖において、第１段階と
して植物ホルモンを含んだ液体培地にてカルスを誘導し
、その後、植物ホルモンを含まない液体培地にて上記カ
ルスから体細胞胚の再分化を行なうことはよく知られて
おり、体細胞胚はその後置床されて苗化されたり、人工
種子として利用されるなどして産業上大きな役割をにな
っている。

ところが、体細胞胚を作るとき、全てのカルスが同調、
すなわち、再分化の時期を合わすことは難しい。もし、
生長にばらつきがあると、苗の大きさや、人工種子の発
芽がそろわず、利用しにくくなる。

そこで従来は、スクリーンを通すことにより、カルスの
サイズをそろえて同調する方法がとられている。

〔発明が解決しようとする課題〕

上記従来の方法は、実験室規模ではよいが、実用生産時
において、毎日数万個の体細胞胚を得るには適当ではな
かった。例えば３０日間にわたって毎日一定量の体細胞
胚を得ようとすると、カルス用と体細胞経用の２個のタ
ンク（ファメンタ）を３０組必要となり、設備が過大に
なってしまう。

本発明は上記のことにかんがみなされたもので、２個の
タンク及び２組の分離装置でもって体細胞胚を毎日連続
して生産でき、しがちその設備費を安価にすることがで
きるようにした体細胞胚連続生産方法及びその装置を提
供することを目的とするものである。

〔課題を解決するための手段〕

上記目的を達成するために、本発明に係る体細胞胚連続
生産方法は、第１タンクにて培養したカルスを培地と共
にスクリーンユニットへ送り、このスクリーンユニット
にて再分化に適した大きさのカルスを分離すると共に、
洗浄タンク内で洗浄し、その後、この分離したカルスを
第２タンクへ送り、この第２タンクにて上記カルスを再
分化して体細胞胚に培養し、ついで、この第２タンク内
の体細胞胚を培地と共にスクリーンユニットへ送り、こ
のスクリーンユニットにて置床に適した大きさの体細胞
胚を分離すると共に、洗浄し、その後、この分離した体
細胞胚を置床装置へ送る。

また上記体細胞胚連続生産方法を実施する装置は、カル
スを培養する第１タンクと、カルスを再分化して体細胞
胚を培養する第２タンクと、第１タンク内のカルスを再
分化に適した大きさのものに分離する第１分離装置と、
第２タンク内の体細胞胚を置床に適した大きさのものに
分離する第２分離装置とからなり、上記再分離装置を、
カルス及び体細胞胚を培地と共に通してそれぞれの大き
さのものに分離するスクリーンユニットと、この分離し
たものを洗浄する洗浄タンクと、この洗浄タンクで洗浄
したものを第２タンクへ、及び置床装置へ送る送り手段
とにて構成した。

〔作　用〕

第１タンク内のカルスは、再分化に適した大きさのもの
だけが分離装置にて分離され、かつ洗浄されて第２タン
クに送られる。第２タンク内に送られたカルスはここで
再分化されて体細胞胚に生長する。その後この第２タン
ク内体細胞胚は、置床に適した大きさのものだけが分離
装置にて分離され、かつ洗浄されて置床装置へ送°られ
る。

〔実　施　例〕

本発明の実施例を図面に基ブいて説明する。

図中１はカルス培養用として用いられる第１タンク、２
は体細胞胚培養用として用いられる第２タンクである。

この両タンク１，２の底部にはそれぞれ無菌エア供給装
置に接続した散気管３．４とドレン弁５ａ、５ｂを有す
るドレン管６．７及び排出ポンプ８，９を有する排出管
１０．１１が接続されている。また上部には流入弁１２
．１３を介して培地流入管１４．１５が接続されている
。なお第１、第２タンク１゜２には撹拌用の回転機を取
付けたり、流れ制御板を設けてもよい。

上記第１タンク１にはカルス分離用の第１分離装置１１
６が、また第２タンク２には体細胞胚分離用の第２分離
装置１７が接続してあり、第１分離装置ｆｔ１６の下流
側が第２タンク２に、また第１分離装置１６１７の下流
側が置床装置１８に接続されている。

第１分離装置１６は、スクリーンユニット１９と３個の
補助タンク２０，２１．２２と洗浄タンク２３及びこれ
らを接続する管路と開閉弁とからなっている。上記スク
リーンユニット１９は第１、第２、第３スクリーン２４
ａ、　　２４ｔ）。

２４ｃにて仕切られた第１、第２、第３、第４室２５ａ
、２５ｂ、２５ｃ、２５ｄを有しており、上記各スクリ
ーン２４ａ〜２４ｃのメツシュ径は、第１スクリーン２
４ａが例えば３關、第２クリーン２４ｂは６０μｍ１第
３スクリーン２４ｃは３０μｍ以下になっている。

上記スクリーンユニット１９の第１　室２５　ａの上流
側は、第１タンク１の底部に接続した排出管１０と、第
１補助タンク２０のポンプを含む供給装置２６にそれぞ
れ開閉弁２７．２８を介して接続されており、またこれ
の下流側は、第１タンク１の戻り管２９と第１補助タン
ク２０にそれぞれ開閉弁３０．３１を介して接続されて
いる。また第２室２５ｂの上流側は、第１タンク１の排
出管１０に開閉弁３２を介して接続され、下流側は第１
タンク１の戻り管２９に開閉弁３３を介して接続されて
いる。第３室２５ｃの上流側は第２補助タンク２１の供
給装置３４と洗浄タンク２３の上流側にそれぞれ開閉弁
３５゜３６を介して接続されており、下流側は第１タン
ク１の戻り管２９と第２補助タンク２１にそれぞれ開閉
弁３７．３８を介して接続されている。また第３室２５
ｃを開閉弁を介して下流側で洗浄タンク２３の上流側に
接続し、この洗浄タンク２３の下流側を第２補助タンク
２１または第１タンク１に接続してもよい。さらに第４
室２５ｄの上流側は第３補助タンク２２の供給装置３９
に開閉弁４０を介して接続されており、下流側は第１タ
ンク１の戻り管２９と第３補助タンク２２へそれぞれ開
閉弁４１．４２を介して接続されている。

洗浄タンク２３はスクリーン４３にて仕切られており、
これの上流側の室に上記したようにスクリーンユニット
１９の第３　’４２５　ｃの上流側と第１タンク１の戻
り管２９に接続され、下流側の室にドレン管４４と、第
２タンク２に接続した供給装置４５に開閉弁４６．４７
を介して接続されている。また上記洗浄タンク２３の上
流側の室は洗浄水供給管４８と第２タンク２の上側に開
閉弁４９．５０を介して接続されている。

第２タンク２に接続された第２分離装置１７は上記第１
分離装置１６とその構成が大略同じであり、同一部材は
同一符号で示す。

ただし、この第２分離装置１７のスクリーンユニット１
９′の各メツシュ径は、第１スクリーン２４ａ′が３ｍ
ｍ、第２スクリーン２４ｂ′は２■１１第３スクリーン
２４Ｃ′は１．５鰭となるなど、置床体選別に適合する
ようになっている。

またこの第２分離装置１７の洗浄タンク２３の下流側に
はドレン管４４のほかに置床用培地供給管５１と第３補
助タンク２２にそれぞれ開閉弁５２，５３を介して接続
されている。またこの洗浄タンク２３の上流側には第２
補助タンク２１及び供給管４８のほかに、開閉弁５４゜
５５を介して置床装置１８に接続されている。

上記構成における作用を以下に説明する。

第１タンク１には流入管１４から培地が流入されており
、この第１タンク１内でカルスが増殖される。そしてこ
の第１タンク１内のカルスはこれの排出管１０より排出
ポンプ８にて培地と共に、第１スクリーンユニツト１９
へ送られる。

このとき、まず第１段階として、開閉弁２７゜３１．３
３を開として、他の開閉弁を閉じる。

これにより、カルスが混入した培地は、第１スクリーン
ユニツト１９の第１室２５ａに流入し、第１スクリーン
２４ａを通って第２室２５ｂに至り、ここから第１タン
ク１へ戻される。これにより培地から３１以上の大きさ
のカルスが分離され、これを所定時間続けることにより
、第１タンク１内の培地から３關以上の大きさのカルス
が除去される。またこのとき、第１室２５ａ内にためら
れた３■ｍ以上のカルスは培地と共に第１補助タンク２
０内に戻される。この第１補助タンク２０内に流入した
培地は供給装置２６にて再び第１室２５ａに戻してやる
ことにより、この第１補助タンク２０内には３　＋ａ＋
ｓ以上の大きさのカルスを含んだ培地となり、この培地
量が十分少なければ、これをドレン管よりドレンしても
損失は少ない。

第１室２５ａには第１スクリーン２４ａを通る流れのほ
かに第１補助タンク２０へ流出する流れがあることによ
り、この第１補助タンク２０へ流出する流れにより、第
１スクリーン２４ａの目詰まりが防止される。

つぎに、第１タンク１の培地より大きさが３０〜６０μ
ｍのカルスを体細胞経用として選別取出すには、開閉弁
３２，３３，３５，３８，４０゜４１．４２を開け、他
を閉じ、さらに、第１タンク１の排出ポンプ８、第２、
第３の補助タンク２１．２２の供給装置３４．３９を駆
動する。

これにより、第１タンク１の培地はスクリーンユニット
２６の第２室２５ｂに流入し、メツシュ径が６０μｍの
第２スクリーン２４ｂと、メツシュ径が３０μｍの第３
スクリーン２４ｃにてＰ遇され、３０〜６０μｍの大き
さのカルスは第３室２５ｃより開閉弁３８を通って第２
補助タンク２１にためられ、３０μｍ以下の大きさのカ
ルスは第４室２５ｃより開閉弁４２を通って第３補助タ
ンク２２にためられる。このとき、第２、第３補助タン
ク２１．２２の培地はそれぞれの供給装置３４．３９に
てスクリーンユニット１９の第３、第４室２５ｃ、２５
ｄに戻されて循環する。このとき、スクリーンを通過す
る流れを必要とするので、開閉弁３３及び３８．４２を
交互に断続的に開閉するとよい。

第２補助タンク２１内に３０〜６０μｍの大きさのカル
スが所定量ためられたら、これとスクリーンユニット１
，９の第３室２５ｃを接続する開閉弁３５を閉じ、洗浄
タンク２３に接続する開閉弁３６を開けて、この第２補
助タンク２１のカルスを洗浄タンク４３へ入れる。これ
と同時に洗浄タンク２３のドレン側の開閉弁４６を開と
して、この洗浄タンク２３内にカルスと共に流入した第
１タンク１よりの培地をドレンする。これにより洗浄タ
ンク２３のスクリーン４３上に上記３０〜６０μｍの大
きさの体細胞経用のカルスがためられる。この量が所定
量以上になったら、スクリーン側の開閉弁３６を閉じる
と共に、流入側の開閉弁４９を開とし、洗浄水流人管１
５より純水を供給し、この洗浄タンク２３内のカルスを
洗浄し、第１タンク１側の植物ホルモンを含む培地を洗
い流す。このとき、３０μｍ以下のカルスはスクリーン
４３を通過し、ドレン側より排出される。このとき、開
閉弁４３の下流側を開閉弁を介して第１タンク１に接続
し、洗浄水を第１タンク１へもどしてもよい。その後、
ドレン側及び供給側の開閉弁４６゜４９を閉じ、第２タ
ンク２に通ずる方の開閉弁４７．５０を開け、第２タン
ク２に接続した供給装置４５を駆動する。これにより洗
浄タンク２３の下流側に第２タンク２内の培地が流入し
、この培地と共に、洗浄タンク２３内にためられたカル
スが第２タンク２内に導入される。

上記のようにして第１タンク１内で培養されたカルスの
うち、３０〜６０μｍの大きさのカルスだけが純水で洗
われた状態で第２タンク２へ導入される。

このとき、第３補助タンク２２には３０μｍ以下の大き
さのカルスがためられるが、このカルスは不要の場合は
そのままドレンし、まだ生長しそうなカルスが多い場合
は第１タンク１へ戻す。

第２タンク２内ではカルスが再分化されて置床に適した
大きさである１、５〜２Ｉ１１の大きさの体細胞胚に生
長する。そしてこの第２タンク２内の体細胞胚は上記第
１タンク１のカルスの導出と全く同じ作用により、第２
分離装置１７を介して行なわれる。。

このとき、スクリーンユニット１９′では第１スクリー
ン２４８′にて３１ｍ以上に生長しすぎたものが分離さ
れ、第２スクリーン２４ｂ′では２１以上のものが分離
され、第３スクリーン２４′　ｃでは１，５−■以上の
もが分離され、１．５〜２　ｍｍの体細胞胚がスクリー
ンユニット１９′の第３室２５ｃにためられ、これが洗
浄タンク２３にて洗浄された後、置床装置１８へ導入さ
れる。

上記作用における各開閉弁及び供給装置は各サイクルに
従って制御装置により自動的に開閉及び駆動し、これに
より、上記サイクルが自動的に行なわれる。

なお、スクリーンユニットは図に示すような一体型でな
く、各メツシュごとに個別のスクリーンを組合わせ用い
てもよい。また第１、第２タンク１．２及び各補助タン
ク２０，２１．２２にはそれぞれ液面を感知する液面計
を、及び液の流入に備えてエアの抜きバルブを設けても
よい。

〔発明の効果〕

本発明によれば、２個のタンク１．２及び２組の分離装
置１６．１７でもって体細胞胚を毎日連続して生産でき
、生長のそろった体細胞胚を小規模の設備で能率よく生
産することができる。

また上記２個のタンクの相互、及び２組の分離装置の相
互はそれぞれ大略同一のものを用いることができ、設備
費を安価にすることができる。

【図面の簡単な説明】

図は本発明の実施例を示す構成説明図である。 １．２は第１、第２タンク、１６．１７は第１、第２分
離装置、１８は置床装置、１９゜１９′はスクリーンユ
ニット。 出願人　　株式会社　小　松　製　作　所代理人　　弁
理士　　米　原　正　章

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）第１タンク１にて培養したカルスを培地と共にス
   クリーンユニット１９へ送り、このスクリーンユニット
   １９にて再分化に適した大きさのカルスを分離すると共
   に、洗浄し、その後、この分離したカルスを第２タンク
   ２へ送り、この第２タンク２にて上記カルスを再分化し
   て体細胞胚に培養し、ついで、この第２タンク２内の体
   細胞胚を培地と共にスクリーンユニット１９′へ送り、
   このスクリーンユニット１９′にて置床に適した大きさ
   の体細胞胚を分離すると共に、洗浄し、その後、この分
   離した体細胞胚を置床装置１８へ送るようにしたことを
   特徴とする体細胞胚連続生産方法。
2. （２）カルスを培養する第１タンク１と、カルスを再分
   化して体細胞胚を培養する第２タンク２と、第１タンク
   １内のカルスを再分化に適した大きさのものに分離する
   第１分離装置１６と、第２タンク２内の体細胞胚を置床
   に適した大きさのものに分離する第２分離装置１７とか
   らなり、上記両分離装置１６、１７を、カルス及び体細
   胞胚を培地と共に通してそれぞれの大きさのものに分離
   するスクリーンユニット１９、１９′と、この分離した
   ものを洗浄する洗浄タンク２３と、この洗浄タンクで洗
   浄したものを第２タンク２へ、及び置床装置１８へ送る
   送り手段とにて構成したことを特徴とする体細胞胚連続
   生産装置。