JPH02190188A - リパーゼをコードするｄｎａ配列，該ｄｎａ配列を有するプラスミド，該プラスミドを有する形質転換体および該形質転換体を用いてリパーゼを製造する方法 - Google Patents
リパーゼをコードするｄｎａ配列，該ｄｎａ配列を有するプラスミド，該プラスミドを有する形質転換体および該形質転換体を用いてリパーゼを製造する方法Info
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- JPH02190188A JPH02190188A JP1007757A JP775789A JPH02190188A JP H02190188 A JPH02190188 A JP H02190188A JP 1007757 A JP1007757 A JP 1007757A JP 775789 A JP775789 A JP 775789A JP H02190188 A JPH02190188 A JP H02190188A
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Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明はリパーゼをコードする遺伝子を含有するＤＮＡ
配列、該ＤＮＡ配列を有するプラスミド、該プラスミド
を有する形質転換体および該形質転換体を用いてリパー
ゼを製造する方法に関する。
配列、該ＤＮＡ配列を有するプラスミド、該プラスミド
を有する形質転換体および該形質転換体を用いてリパー
ゼを製造する方法に関する。
リパーゼ（ｌｉｐａｇｅ、 ！ｌＣ３，１，１，３）は
グリセロールエステルを加水分解し、脂肪酸を遊離する
酵素であり、消化剤や血中脂質の測定用試薬などの医療
用として、また石鹸製造のための油脂の分解用や洗剤用
酵素として、さらに最近では各種エステルの合成に用い
られるなど、巾広く利用されている。
グリセロールエステルを加水分解し、脂肪酸を遊離する
酵素であり、消化剤や血中脂質の測定用試薬などの医療
用として、また石鹸製造のための油脂の分解用や洗剤用
酵素として、さらに最近では各種エステルの合成に用い
られるなど、巾広く利用されている。
〔従来の技術、発明が解決しようとする課題〕今までに
アミノ酸配列が報告されているリパーゼとしては、動物
由来のものとして、ヒトブタやラットのリパーゼがあり
、微生物由来のものとして、スタフィロコッカス・ハイ
クス（Ｓｔａ ｈ １ｏｃｏｃｃｕｓｈ■旦）およびシ
ュードモナス・フラジ（ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓＤ１幻
ツＩ Ｆ ０３４５８株由来のリパーゼがある。
アミノ酸配列が報告されているリパーゼとしては、動物
由来のものとして、ヒトブタやラットのリパーゼがあり
、微生物由来のものとして、スタフィロコッカス・ハイ
クス（Ｓｔａ ｈ １ｏｃｏｃｃｕｓｈ■旦）およびシ
ュードモナス・フラジ（ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓＤ１幻
ツＩ Ｆ ０３４５８株由来のリパーゼがある。
渡辺らは、土壌中よりアルカリ性でより高い活性を示し
、比較的高温域で活性を有するリパーゼを生産する微生
物としてシュードモナス・フラジ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎ
ａｓ Ｂ１し） ２２．３９ Ｂ株を見出した（Ｎ。
、比較的高温域で活性を有するリパーゼを生産する微生
物としてシュードモナス・フラジ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎ
ａｓ Ｂ１し） ２２．３９ Ｂ株を見出した（Ｎ。
Ｗａ ｔａｎａｂｅら、 八ｇｒｉｃ、 Ｂｉｏｌ、
Ｃｈｅｍ、、 ４１ １３５３．１９７７）。
Ｃｈｅｍ、、 ４１ １３５３．１９７７）。
本発明では、このシュードモナス・フラジ２２．３９
Ｂ株より、リパーゼをコードする口Ｎへ配列を有するプ
ラスミドおよび該プラスミドを有する形質転換体の構築
に成功した。本発明で得られたリパーゼをコードする遺
伝子のＤＮＡ配列、該ＤＮＡ配列を有するプラスミド、
該プラスミドを有する形質転換体および該形質転換体を
用いてリパーゼを製造する方法は、今までに知られてい
ない。
Ｂ株より、リパーゼをコードする口Ｎへ配列を有するプ
ラスミドおよび該プラスミドを有する形質転換体の構築
に成功した。本発明で得られたリパーゼをコードする遺
伝子のＤＮＡ配列、該ＤＮＡ配列を有するプラスミド、
該プラスミドを有する形質転換体および該形質転換体を
用いてリパーゼを製造する方法は、今までに知られてい
ない。
本発明者らは、リパーゼをコードする遺伝子を含有する
ＤＮＡ配列、該ＤＮＡ配列を有するプラスミド。
ＤＮＡ配列、該ＤＮＡ配列を有するプラスミド。
該プラスミドを有する形質転換体を得る方法および該形
質転換体を用いてリパーゼを製造する方法について検討
した。
質転換体を用いてリパーゼを製造する方法について検討
した。
まず、渡辺らが土壌中より分離したリパーゼ生産菌であ
るシュードモナス・フラジ（ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓＤ
１１υ２２．３９ Ｂ株（ＦＥＩＩＩＭ ＢＰ−１０５
１，特公昭５６２８５１７号）の有するリパーゼ活性を
有するＤＮＡ配列をクローニングし、該ＤＮＡ配列を決
定した。次いで、該ＤＮＡ配列を有するプラスミドを得
、さらに該プラスミドを含む形質転換体を創製し、本発
明を完成するに至った。
るシュードモナス・フラジ（ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓＤ
１１υ２２．３９ Ｂ株（ＦＥＩＩＩＭ ＢＰ−１０５
１，特公昭５６２８５１７号）の有するリパーゼ活性を
有するＤＮＡ配列をクローニングし、該ＤＮＡ配列を決
定した。次いで、該ＤＮＡ配列を有するプラスミドを得
、さらに該プラスミドを含む形質転換体を創製し、本発
明を完成するに至った。
すなわち本発明は、リパーゼをコードする遺伝子を含有
するＤＮＡ配列、該ＤＮＡ配列を有するプラスミド、該
プラスミドを有する形質転換体および該形質転換体を用
いてリパーゼを製造する方法に関する。
するＤＮＡ配列、該ＤＮＡ配列を有するプラスミド、該
プラスミドを有する形質転換体および該形質転換体を用
いてリパーゼを製造する方法に関する。
本発明のリパーゼをコードする遺伝子は第１図のアミノ
酸配列および第２図の塩基配列で特定される。
酸配列および第２図の塩基配列で特定される。
本発明のリパーゼ遺伝子を含むプラスミドは、前記のシ
ュードモナス・フラジ２２．３９ Ｂ株の染色体ＤＮＡ
から遺伝子ライブラリーを作製し、本発明のリパーゼ遺
伝子を含むＤＮＡ断片を単離し、プラスミドと連結する
ことにより得ることができる。
ュードモナス・フラジ２２．３９ Ｂ株の染色体ＤＮＡ
から遺伝子ライブラリーを作製し、本発明のリパーゼ遺
伝子を含むＤＮＡ断片を単離し、プラスミドと連結する
ことにより得ることができる。
よく知られているように、多くのアミノ酸についてはそ
れをコードする塩基配列は複数存在する。
れをコードする塩基配列は複数存在する。
その塩基配列は一義的には決らず多数の可能性があり得
る。本発明者等により明らかにされたシュードモナス・
フラジ２２．３９ Ｂ株のリパーゼのアミノ酸配列をコ
ードする遺伝子の場合も、そのＤＮＡ塩基配列は天然の
遺伝子の塩基配列以外にも多数の可能性があり、本発明
のＤＮＡ配列は、天然のＤＮＡ塩基配列のみに限定され
るものではなく、本発明により明らかにされたリパーゼ
のアミノ酸配列をコードする他のＤＮＡ配列も含むもの
である。
る。本発明者等により明らかにされたシュードモナス・
フラジ２２．３９ Ｂ株のリパーゼのアミノ酸配列をコ
ードする遺伝子の場合も、そのＤＮＡ塩基配列は天然の
遺伝子の塩基配列以外にも多数の可能性があり、本発明
のＤＮＡ配列は、天然のＤＮＡ塩基配列のみに限定され
るものではなく、本発明により明らかにされたリパーゼ
のアミノ酸配列をコードする他のＤＮＡ配列も含むもの
である。
また、遺伝子組換え技術によれば、基本となるＤＮＡの
特定の部位に、該ＤＮＡがコードするものの基本的な特
性を変化させることなく、あるいはその特性を改善する
ように、人為的に変異を起こすことができる。本発明に
より提供される天然の塩基配列を有するＤＮＡあるいは
天然のものとは異なる塩基配列を有するＤＮＡに関して
も、同様に人為的に挿入、欠失、置換を行なうことによ
り天然の遺伝子を同等あるいは改善された特性とするこ
とが可能であり、本発明はそのような変異遺伝子をも含
むものである。
特定の部位に、該ＤＮＡがコードするものの基本的な特
性を変化させることなく、あるいはその特性を改善する
ように、人為的に変異を起こすことができる。本発明に
より提供される天然の塩基配列を有するＤＮＡあるいは
天然のものとは異なる塩基配列を有するＤＮＡに関して
も、同様に人為的に挿入、欠失、置換を行なうことによ
り天然の遺伝子を同等あるいは改善された特性とするこ
とが可能であり、本発明はそのような変異遺伝子をも含
むものである。
以下に実施例を挙げ、さらに本発明の詳細な説明する。
本発明は以下の実施例のみに限定されるものではなく、
本発明の技術分野における通常の変更をすることができ
る。
本発明の技術分野における通常の変更をすることができ
る。
実施例
（１） シュードモナス・フラジ２２．３９ Ｂ株（
ＦＥＲＭＢＰ−１０５１）の染色体ＤＮへの調製とプラ
スミドＤＮＡライブラリーの作製 ニュートリエンド・プロス培地（Ｎｕｔｒｉｅｎｔ Ｂ
ｒｏｔｈ＋デイフコ社製）で培養したシュードモナス・
フラジ２２．３９ Ｂ株（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０５１）
の菌体より、Ｋ、 Ｃｏ１ｅ＋ｓａｎらの方法（Ｊ、
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、、 月４．９０９゜１９８３）に
従って染色体ＤＮＡを調製した。
ＦＥＲＭＢＰ−１０５１）の染色体ＤＮへの調製とプラ
スミドＤＮＡライブラリーの作製 ニュートリエンド・プロス培地（Ｎｕｔｒｉｅｎｔ Ｂ
ｒｏｔｈ＋デイフコ社製）で培養したシュードモナス・
フラジ２２．３９ Ｂ株（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０５１）
の菌体より、Ｋ、 Ｃｏ１ｅ＋ｓａｎらの方法（Ｊ、
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、、 月４．９０９゜１９８３）に
従って染色体ＤＮＡを調製した。
調製した染色体ＤＮＡをＥｃｏＲＩ、 Ｂａｍ１ｌ
Ｉ 、 Ｈｉｎｄ ＩＩ［。
Ｉ 、 Ｈｉｎｄ ＩＩ［。
Ｐｓｔ Ｉ等の制限酵素を用いて部分分解または完全分
解した。次に、同じ制限酵素で完全分解したプラスミド
ベクターＤＮＡであるｐＵＣ１８と混合し、Ｔ４ＤＮＡ
リガーゼを用いて連結させた。
解した。次に、同じ制限酵素で完全分解したプラスミド
ベクターＤＮＡであるｐＵＣ１８と混合し、Ｔ４ＤＮＡ
リガーゼを用いて連結させた。
次に、Ｅ、 ｃｏｌｉ ＪＭ １０９株を１ｌａｎａｈ
ａｎの方法（Ｊ、 Ｍｏｌ。
ａｎの方法（Ｊ、 Ｍｏｌ。
Ｂｉｏｌ、、 １６６、５５７．１９８３）に従って処
理し、上記のＴ４リガーゼ反応液を加え、アンピシリン
（５０ｇｇ／ｍ）。
理し、上記のＴ４リガーゼ反応液を加え、アンピシリン
（５０ｇｇ／ｍ）。
５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−βＤ−ガラ
クトシド（Ｘ−ｇａｌ、 ５０ｇｇ／ｍｌｌ＞を含むＬ
Ｂ寒天培地（トリプトン（デイフコ社製） １０ｇ、イ
ーストエキストラクト（デイフコ社製） ５ｇ、 Ｎａ
Ｃ１５ｇ。
クトシド（Ｘ−ｇａｌ、 ５０ｇｇ／ｍｌｌ＞を含むＬ
Ｂ寒天培地（トリプトン（デイフコ社製） １０ｇ、イ
ーストエキストラクト（デイフコ社製） ５ｇ、 Ｎａ
Ｃ１５ｇ。
粉末寒天１５ｇをＩＡの蒸留水に熔解させた培地（ｐＨ
７，２））に塗布し、３７°Ｃで一夜培養し、プラスミ
ドＤＮＡ中にシュードモナス・フラジ２２．３９Ｂ株の
染色体ＤＮＡの断片が挿入されたプラスミドを含む白色
のコロニー、すなわち形質転換体を多数得た。
７，２））に塗布し、３７°Ｃで一夜培養し、プラスミ
ドＤＮＡ中にシュードモナス・フラジ２２．３９Ｂ株の
染色体ＤＮＡの断片が挿入されたプラスミドを含む白色
のコロニー、すなわち形質転換体を多数得た。
（２） リパーゼ遺伝子を含む大腸菌クロー・ンの単
離トリブチリンを０．５ ｖ／ｖχとアンピシリン（５
０μｓ／Ｉｄ）をＬＢ寒天培地に加えて、トリブチリン
含有ＬＢ寒天培地を調製した。この培地をリパーゼ生産
菌株のスクリーニングに用いた（Ｄ、 Ｌ、 Ｂｅｒｎ
ｅｒ＆ Ｅ、 Ｇ、 Ｈａｎｖ＋ａｎｄ、 Ｌｉｐｉｄ
ｓ、 ｓｌ ５５８＋ １９７０）、 Ｅ、 ｃｏｌｉ
ＪＭ １０９株およびプラスミドベクターｐｕｃ １８
を有する同株は、このトリブチリン含有ＬＢ寒天培地で
培養してもクリアーゾーンの形成は認められなかった。
離トリブチリンを０．５ ｖ／ｖχとアンピシリン（５
０μｓ／Ｉｄ）をＬＢ寒天培地に加えて、トリブチリン
含有ＬＢ寒天培地を調製した。この培地をリパーゼ生産
菌株のスクリーニングに用いた（Ｄ、 Ｌ、 Ｂｅｒｎ
ｅｒ＆ Ｅ、 Ｇ、 Ｈａｎｖ＋ａｎｄ、 Ｌｉｐｉｄ
ｓ、 ｓｌ ５５８＋ １９７０）、 Ｅ、 ｃｏｌｉ
ＪＭ １０９株およびプラスミドベクターｐｕｃ １８
を有する同株は、このトリブチリン含有ＬＢ寒天培地で
培養してもクリアーゾーンの形成は認められなかった。
また、シュードモナス・フラジ２２．３９ Ｂ株をトリ
ブチリン含有ＬＢ寒天培地で培養すると、クリアーゾー
ンの形成が認められた。
ブチリン含有ＬＢ寒天培地で培養すると、クリアーゾー
ンの形成が認められた。
前項で得られた白色のコロニー約１４．０００株をトリ
ブチリン含有ＬＢ寒天培地に植菌して一夜培養した結果
、５クリアーゾーンを形成する菌株が６株得られた。
ブチリン含有ＬＢ寒天培地に植菌して一夜培養した結果
、５クリアーゾーンを形成する菌株が６株得られた。
（３） プラスミドＤＮＡの解析
前項で得られた６株のプラスミドＤＮＡを常法（Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｔｎｇ、 ｅｄ、 Ｍａｎｉａ
ｔｉｓ ｅｔ ａｌ、、 ｐ９２９４、 Ｃｏ１ｄ Ｓ
ｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、
Ｕ、Ｓ、Ａ、）に従って調製し、各種制限酵素で切断し
て調べたところ、すべて２．４にｂのＰｓｔ Ｉ断片
がプラスミドベクターｐｕｃ １８に対して同一方向に
挿入されていることが明らかとなった。そこで、この菌
株をす。
ｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｔｎｇ、 ｅｄ、 Ｍａｎｉａ
ｔｉｓ ｅｔ ａｌ、、 ｐ９２９４、 Ｃｏ１ｄ Ｓ
ｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、
Ｕ、Ｓ、Ａ、）に従って調製し、各種制限酵素で切断し
て調べたところ、すべて２．４にｂのＰｓｔ Ｉ断片
がプラスミドベクターｐｕｃ １８に対して同一方向に
挿入されていることが明らかとなった。そこで、この菌
株をす。
次に、プラスミドｐＬＢ １００中の２．４Ｋｂ Ｐ
ｓｔ Ｔ断片を各種制限酵素で切断し、各ＤＮＡ断片
をｐｕｃ ｔｓにサブクローニングして、大腸菌ＪＭ
１０９株を形質転換させ、前記と同様にしてトリブチリ
ン含有Ｌｌｌ寒天培地でクリアーゾーンの形成の有無を
調べた。
ｓｔ Ｔ断片を各種制限酵素で切断し、各ＤＮＡ断片
をｐｕｃ ｔｓにサブクローニングして、大腸菌ＪＭ
１０９株を形質転換させ、前記と同様にしてトリブチリ
ン含有Ｌｌｌ寒天培地でクリアーゾーンの形成の有無を
調べた。
その結果、第３図の下部に示すようｇ １．４Ｋｂ Ｓ
ｐｈ １−ＥｃｏＲＩ断片を有するプラスミドｐＬＢ
１０５を有する大腸菌にクリアーゾーン形成が認められ
た。その結果、リパーゼ遺伝子が１．４ＫｂのＳｐｈ
Ｉ −ＥｃｏＲＩ断片中に存在することが示唆された。
ｐｈ １−ＥｃｏＲＩ断片を有するプラスミドｐＬＢ
１０５を有する大腸菌にクリアーゾーン形成が認められ
た。その結果、リパーゼ遺伝子が１．４ＫｂのＳｐｈ
Ｉ −ＥｃｏＲＩ断片中に存在することが示唆された。
（４） ＤＮＡ塩基配列の決定
ｄｉｄｅｏｘｙ法（Ｆ、 Ｓａｎｇｅｒら、 Ｐｒｏｃ
、 Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ。
、 Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ。
Ｓｅｔ、 ｔｌｓＡ、 ７４．５４６３．１９７７）に
より、プラスミドｐＬＢ １０５の挿入ＤＮＡ断片の塩
基配列を決定した。
より、プラスミドｐＬＢ １０５の挿入ＤＮＡ断片の塩
基配列を決定した。
その結果、第２図に示すようなオープンリーディングフ
レームの存在が認められ、シュードモナス・フラジ２２
．３９ Ｂ株のリパーゼをコードするＤＮＡ配列はＡＴ
Ｇより始まり、ＴＧＡのストップコドンで終る１１０７
塩基対からなることが明らかとなった。
レームの存在が認められ、シュードモナス・フラジ２２
．３９ Ｂ株のリパーゼをコードするＤＮＡ配列はＡＴ
Ｇより始まり、ＴＧＡのストップコドンで終る１１０７
塩基対からなることが明らかとなった。
この塩基配列より、リパーゼはアミノ酸３６８個からな
る第１図に示すようなアミノ酸配列からなることも明ら
かとなった。
る第１図に示すようなアミノ酸配列からなることも明ら
かとなった。
（５）形質転換体のリパーゼ活性の測定大腸菌ＪＭ １
０９（ｐＬＢ １０５）を１ａｇ／ｍｌのＩＰＴＧ （
イソプロピル−β−Ｄ−チオガラクトシド）と５０ｇｇ
／−のアンピシリンを含むＬＢ培地を用いて３７℃で一
夜培養後、集菌し、１００ｍＭ ｌ−リス塩酸（ｐＨ９
，０）バッファーに懸濁後、超音波破壊した。次に、こ
れを遠心して上清を得た。この上清中のリパーゼ活性は
３１０／ｍ１！であった。
０９（ｐＬＢ １０５）を１ａｇ／ｍｌのＩＰＴＧ （
イソプロピル−β−Ｄ−チオガラクトシド）と５０ｇｇ
／−のアンピシリンを含むＬＢ培地を用いて３７℃で一
夜培養後、集菌し、１００ｍＭ ｌ−リス塩酸（ｐＨ９
，０）バッファーに懸濁後、超音波破壊した。次に、こ
れを遠心して上清を得た。この上清中のリパーゼ活性は
３１０／ｍ１！であった。
以上詳述したように、本発明によりリパーゼをコードす
るＤＮＡ配列およびプラスミドを得ることができ、さら
に形質転換体を用いて遺伝子工学的にリパーゼの生産が
可能となった。例えば、従来のリパーゼに比較して熱安
定性が高いリパーゼをコードするＤＮＡ配列、かかる配
列を有するプラスミド、かかるプラスミドを含む形質転
換体の利用による遺伝子工学的リパーゼの生産が可能と
なったものであり、産業の発達に寄与するものである。
るＤＮＡ配列およびプラスミドを得ることができ、さら
に形質転換体を用いて遺伝子工学的にリパーゼの生産が
可能となった。例えば、従来のリパーゼに比較して熱安
定性が高いリパーゼをコードするＤＮＡ配列、かかる配
列を有するプラスミド、かかるプラスミドを含む形質転
換体の利用による遺伝子工学的リパーゼの生産が可能と
なったものであり、産業の発達に寄与するものである。
第１図は、シュードモナス・フラジ２２．３９ Ｂ株の
リパーゼをコードする遺伝子のＤＮＡ配列に対応するア
ミノ酸配列を示す図面である。 第２図は、シュードモナス・フラジ２２．３９ Ｂ株の
リパーゼをコードする遺伝子のＤＮＡ配列を示す図面で
ある。 第３図は、シュードモナス・フラジ２２．３９ Ｂ株の
リパーゼをコードするＤＮＡ配列を有するプラスミドｐ
ＬＢ １００とｐＬＢ １０５ （７）挿入ＤＮＡ１ｒ
片部分（７）制限酵素切断地図を示す図面である。 １８１口 特許出願人 サッポロビール株式会社 １ｓ＾ＩａＧｌｙＳｅｒＰｒｏＳｅｒＣｙｓＡｒｇ第２
１！１
リパーゼをコードする遺伝子のＤＮＡ配列に対応するア
ミノ酸配列を示す図面である。 第２図は、シュードモナス・フラジ２２．３９ Ｂ株の
リパーゼをコードする遺伝子のＤＮＡ配列を示す図面で
ある。 第３図は、シュードモナス・フラジ２２．３９ Ｂ株の
リパーゼをコードするＤＮＡ配列を有するプラスミドｐ
ＬＢ １００とｐＬＢ １０５ （７）挿入ＤＮＡ１ｒ
片部分（７）制限酵素切断地図を示す図面である。 １８１口 特許出願人 サッポロビール株式会社 １ｓ＾ＩａＧｌｙＳｅｒＰｒｏＳｅｒＣｙｓＡｒｇ第２
１！１
Claims (12)
- （１）リパーゼをコードする遺伝子を含有するＤＮＡ配
列。 - （２）遺伝子が下記のアミノ酸配列で特定されるもので
ある請求項１記載のＤＮＡ配列。 【遺伝子配列があります。】 - （３）遺伝子が下記の塩基配列で特定されるものである
請求項１記載のＤＮＡ配列。 【遺伝子配列があります。】 - （４）リパーゼをコードする遺伝子を含有するＤＮＡ配
列を有するプラスミド。 - （５）遺伝子が下記のアミノ酸配列で特定されるもので
ある請求項４記載のプラスミド。 【遺伝子配列があります。】 - （６）遺伝子が下記の塩基配列で特定されるものである
請求項４記載のプラスミド。 【遺伝子配列があります。】 - （７）リパーゼをコードする遺伝子を含有するＤＮＡ配
列を有するプラスミドを含む形質転換体。 - （８）遺伝子が下記のアミノ酸配列で特定されるもので
ある請求項７記載の形質転換体。 【遺伝子配列があります。】 - （９）遺伝子が下記の塩基配列で特定されるものである
請求項７記載の形質転換体。 【遺伝子配列があります。】 - （１０）リパーゼをコードする遺伝子を含有するＤＮＡ
配列を有するプラスミドを含む形質転換体を培地に培養
してリパーゼを蓄積せしめ、該リパーゼを採取すること
を特徴とするリパーゼの製造法。 - （１１）遺伝子が下記のアミノ酸配列で特定されるもの
である請求項１０記載のリパーゼの製造法。 【遺伝子配列があります。】 - （１２）遺伝子が下記の塩基配列で特定されるものであ
る請求項１０記載のリパーゼの製造法。 【遺伝子配列があります。】
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1007757A JPH02190188A (ja) | 1989-01-18 | 1989-01-18 | リパーゼをコードするｄｎａ配列，該ｄｎａ配列を有するプラスミド，該プラスミドを有する形質転換体および該形質転換体を用いてリパーゼを製造する方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1007757A JPH02190188A (ja) | 1989-01-18 | 1989-01-18 | リパーゼをコードするｄｎａ配列，該ｄｎａ配列を有するプラスミド，該プラスミドを有する形質転換体および該形質転換体を用いてリパーゼを製造する方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02190188A true JPH02190188A (ja) | 1990-07-26 |
Family
ID=11674569
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1007757A Pending JPH02190188A (ja) | 1989-01-18 | 1989-01-18 | リパーゼをコードするｄｎａ配列，該ｄｎａ配列を有するプラスミド，該プラスミドを有する形質転換体および該形質転換体を用いてリパーゼを製造する方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH02190188A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5306636A (en) * | 1990-10-31 | 1994-04-26 | Kurita Water Industries Ltd. | Gene, vector and transformant for thermostable lipase and preparation of them and thermostable lipase |
| EP0846768A3 (en) * | 1996-11-28 | 1999-11-17 | Sumitomo Chemical Company, Limited | Esterase gene and its use |
-
1989
- 1989-01-18 JP JP1007757A patent/JPH02190188A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5306636A (en) * | 1990-10-31 | 1994-04-26 | Kurita Water Industries Ltd. | Gene, vector and transformant for thermostable lipase and preparation of them and thermostable lipase |
| EP0846768A3 (en) * | 1996-11-28 | 1999-11-17 | Sumitomo Chemical Company, Limited | Esterase gene and its use |
| US6306634B1 (en) | 1996-11-28 | 2001-10-23 | Sumitomo Chemical Company, Limited | Esterase gene and its use |
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