JPH02171191A

JPH02171191A - 黄色物質の製造法及びその用途

Info

Publication number: JPH02171191A
Application number: JP63327462A
Authority: JP
Inventors: Naomi Morimoto; 森本　直美; Keisuke Tamura; 田村　啓祐; Hajime Ono; 一小野
Original assignee: Daiso Co Ltd
Current assignee: Osaka Soda Co Ltd
Priority date: 1988-12-23
Filing date: 1988-12-23
Publication date: 1990-07-02

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明はケシ科の植物であるエンゴサクの組織培養によ
り生成され、各種染色材料等として有用な黄色物質に関
するものである。

（従来の技術）ケシ科（Ｐａｐａｖｅｒａｃｅａｅ）　ｍｌリダリス（
ＣＯｒｙｄａｌ−ｉｓ）属に属するエンゴサク（Ｃｏｒ
ｙｄａｌｉｓ　ｔｕｒｓｃｈａ−ｎｉｏｖｉｉ　ｆ、ｙ
ａｎｈｕｓ　ｕｏ）及びその伯同腐植物の塊茎は延胡索
、別名玄胡索、天胡と呼ばれる生薬として、中国の唐宋
時代から婦人の心腹疼痛、打撲等の広範囲の通経、鎮痛
薬として用いられ、現在も産後の疼痛、胃腸の痛み等の
漢方処方１例えば安中数、牛膝散等に配合されている。

またエンゴサク等のコリダリス属植物は、花弁植物とし
て現在栽培されている。

〔発明が解決しようとする課題〕

上記エンゴサクはその大半を中国からの輸入に依存して
おり、入手が不安定となりがちであるため近年日本国内
での栽培化が望まれていた。しかしその種苗の入手が困
難でおり生産コストが高く、その利用開発面の研究は十
分性われていない。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者らは上記の点に鑑みエンゴサクの増殖方法につ
ぎ鋭意研究を行った。その過程でエンゴサクの組織培養
により新規な黄色物質が生成することを見出し本発明を
完成したものである。

本発明はすなわちケシ科に属するエンゴサクの組織片よ
り誘導したカルスを、栄養源及び植物ホルモンを含む培
地で培養し、培地中に生ずる黄色物質を採取することを
特徴とする黄色物質の製造法及びその用途である。

従来、植物組織培養によるアルカロイド、色素。

医薬品等の植物成分の製造については、多くの文献があ
るが未だエンゴサクの組織培養により黄色物質を製造す
る試みはなされていない。例えば特開昭６３−６８０２
５号明細書にはエンゴサク等コリダリス属植物の組織培
養により不定胚、不定芽を作出する方法の記載がある。

また［張治国ら中薬通法１２（４Ｌ　２０３（１９８７
）Ｊにはエンゴサクの組織培養とアルカロイドの生成に
ついて記述されている。しかしながらこれらの文献には
その過程で黄色物質が生成しこれを採取する事について
は全く報告されていない。

本発明に用いられるエンゴザクとしては、エンゴナク（
Ｃ，ｔｕｒｓｃｈａｎｉｎｏｖｉｉ　ｆ、ｙａｎｈｕｓ
　ｕｏ）　、　エゾエンゴザク（Ｃ，ａｍｂｉｇ　ｕａ
）　、コウライエンゴナク（Ｃ，ｎａｋａｉ）　、オラ
ンダエンゴサク（Ｃ，ｃａｖａ）　。

ジロボウエンゴサク（Ｃ，ｄｅＣＵｍｂｅｎＳ＞　、ヤ
マエンゴ丈り（Ｃ，ｌ１ｎｅａｒｉｌｏｂａ　５ｉｅｂ
、ｅ　Ｚｕｃｃ）等を挙げることができる。特にエゾエ
ンゴサクが好ましい。

エンゴーナクの組織片よりカルスを誘導するには、まず
エンゴサクの組１１Ａ　（塊茎、幼芽なと）を通常の滅
菌法（エタノール水溶液とざらし液、或いは次亜塩素酸
ソーダ水溶液に数分〜数十分浸漬する方法）により滅菌
後、無菌水で洗浄する。次いでこれを５ｍｍ角程度に細
断して移植片となし培地上に置床し、１８〜３０’Ｃの
明所又は暗所で培養する。

３週間〜１ケ月程度でカルス化が起り、培地に黄色物質
が溶出され、次第に濃厚となる。誘導されたカルスを新
しい培地に移植し同様に培養増殖させることにより大量
のカルスと黄色物質を含む培地が得られる。

培地としては、公知の各種栄養源及び植物ホルモンを添
加した液体培地、或いは更に寒天、ジェランガム等を加
えて固化させた固体培地のいずれも使用することができ
る。液体培地の場合には撮どう培養１回転培養成いはジ
ャーファーメンタ−の如き通気撹拌装置を備えた培養槽
で培養することができる。

栄養源を含む培地の例としては、ムラシゲ・スクーグ（
Ｈｕｒａｓｈｉｇｅ−３ｋｏｏｇ　）の培地（以下ＭＳ
培地という）、リンスマイヤー・スクーグ（Ｌｉｎ−ｓ
ｍｅｉｅｒ−３ｋｏｏｇ　）の培地、ミラー（Ｍｉｌｌ
ｅｒ）の培地、ホワイト（Ｗｈｉｔｅ）の培地、或いは
これらの修正されたもの２例えばＭＳ８５培地、前出の
修正リンスマイヤー・スクーグ培地等を挙げることがで
きる。

植物ホルモンの例としては、２．４−ジクロロフェノキ
シ酢酸（２，４−Ｄ＞、インドール酢酸（ＩＡＡ）、ナ
フタレン酸ｍ　（ＮＡＡ）、　インドール醋酸（ＩＢＡ
）等のオーキシン、カイネチン。

ベンジルアミノプリン（ＳＡＰ）等のサイトカイニン等
一般に植物組織培養に用いられるものが使用できる。

ぞの他、必要に応じて培地にビタミン類、酵母エキス、
ココナツツミルク等を適宜添加して使用することができ
る。

このようにして（ｑられた黄色物質を含む培地は、これ
を凍結乾燥後、メタノール等で抽出し溶媒を留去して乾
固物として採取する。採取された乾固物を有機溶媒で溶
解しシリカゲル薄層クロマ１〜グラフイーで分離分析す
ると新規な黄色物質がＵＶ蛍光鑑識燈下でＲｆｏ、５〜
０．６の着色斑点として示される。

なお薬理作用を有するエンゴサクの化学成分としては主
としてコリダリン（Ｃｏｒｙｄａｌｉｎｅ）　、テトラ
ヒドロパルマチイン（ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｐａｌｍａ
ｔｉｎｅ）　。

デヒドロコリダリン（ｄｅｈｙｄｒｏｃｏｒｙｄａｌｉ
ｎｅ）　、プロトピン（ｐｆ’０ｔＯｐｉｎＯ）等が報
告されているが、本発明による黄色物質はこれらの生理
活性物質とは異なる独特のものである。

この黄色物質は硫酸銅、硫酸第一鉄、塩化第一錫、酢酸
クロム、ミョウバン等の溶液を用いて織布類の媒染を行
いこれらを黄色に着色させることができる。

以下実施例により本発明を説明するが、例中％はいずれ
も重量基準である。

実施例（初代培養）ＭＳＢ５培地にオーキシンとしてＮＡＡ５０μＭ。

カイネチン５μＭ及び寒天０．８％を添加し、加熱溶解
後５０ｍ１容サンプル管に１０ｄ宛分注し滅菌培地とし
た。

■ゾエンゴサクの直径的８ｍｍの塊茎を採取し水洗後、
１０％ざらし液の上清に２０分間浸漬殺菌し、無菌水で
充分洗浄した。この塊茎を約５ｍｍ角程度に無菌的に切
断して、移植片（エキスプラント）として上記培地に置
床した。

置床後２５℃明所で３週間培養するとカルス化が始まる
。引き続き４力月培養した後、培地に黄色物質を溶出す
るカルスを選択して継代培養に移植しｌこ。

（継代培養）継代のための培地には前出の修正ｃｔｎｓｍｅｔｅｒ　
−３ｋｏｏｇ培地に２．４−ＤＩＯμＭ、カイネチン５
μＭ。

寒天０．８％を加えたものを用いた。この培地で１８日
間培養後、２．４−０１０μＭ、カイネチン５μＭを含
むＭＳ増殖用寒天培地に移植し３週間培養を続けた。

尚継代にあたっては、ｌ５ＡＩＯμＭ＋ＢＡＰ２μＭ、
２．４−Ｄ１０μＭ＋ＢＡＰ　７ｇＭ、ＮＡＡ１μＭ十
ＢＡＰ　２ｇＭ、ＢＡＰ　１ｇＭ、ＩＡＡ１０μＭ十Ｋ
ｉｎｅｔｉｎｅ　２ｇＭ、　　２．４−Ｄ１０μＭ＋に
１−ｎｅｔｉｎｅ　ｓμＭを夫々含有するＭＳ培地を用
いて上記と同様の培養を行い、同様のよい結果が得られ
た。

（黄色物質の抽出と分離）このようにして得られた黄色物質を含む培地を集め凍結
乾燥したちの１７．５ｇをメタノール２５０ｄで３回抽
出し、抽出液の溶媒を留去して乾固物を得た。これを５
％酢酸２５ｄに分散溶解し石油エーテルで抽出後再び５
％酢１１ｔ　５ｄで抽出した後これら酢酸層を合したも
のに濃アンモニア水１０ＩＲ１を加え、これをエチルエ
ーテル３０ｍ１で５回抽出した。

溶媒を留去して得た乾固物をクロロボルム２ｄで溶解し
、これを薄層クロマトグラフィーに供した。

展開溶媒として酢酸−ブタノール−水（１：４：５）の
混合液を用い、シリカゲルプレート（メルク社製「シリ
カゲル６０」）上に展開させた薄層クロマトグラムを第
１図に示す。本発明の黄色物質は第１図■の黒色だ一円
（原クロマトグラムは黄色斑点）として示現され、Ｒｆ
Ｏ，５４付近である。

比較のために同様の抽出操作を中国産エンゴサク（乾燥
塊茎細片１０ＣＩ）、エゾエンゴサク（生鮮塊茎１３．
５（１）　、エンゴサク末（粉末１０ｇ、アルプス薬品
社製）の３試料について行った結果を第１図■■■とし
て併せて示した。これに黄色物質が含有されないことが
わかる。

染色試験黄色物質を含有する寒天培養培地２０ｄを加温）ｄ解し
、これにさらし綿布を入れてＳ騰後、取り出した綿イ５
を温湯で濯ぎ脱水した。

次に綿布の３％の硫酸銅を熱湯に溶解した中に入れて沸
騰させて媒染を行い、うすよもぎ色の染物を得た。

また、同様の媒染を５Ｍｒ！ｉ第一鉄を用いて行い、黄
土色の染物を得た。媒染はその仙塩化第−錫。

酢酸クロム、ミョウバン等によっても可能であった。

〔発明の効果〕

本発明によれば従来、薬用植物としてのみ知られていた
エンゴサクの組織培養により、食品、化粧品、染料等の
様々な用途に利用可能性のある黄色物質を工業的規模で
生産し得る。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の実施例における薄層クロマトダラムを
示す。 ■・・・中国産エンゴサク乾燥塊茎抽出物。 ■・・・エゾエンゴサク生鮮塊茎抽出物。 ■・・・本発明の黄色物質。 ■・・・エンゴサク粉末抽出物 ○・・・黄　色。 ○・・・淡黄色。 ○・・・青〜紫

Claims

【特許請求の範囲】

（１）ケシ科に属するエンゴサクの組織片より誘導した
カルスを、栄養源及び植物ホルモンを含む培地で培養し
、培地中に生成する黄色物質を採取することを特徴とす
る黄色物質の製造法。
（２）栄養源を含む培地として、ムラシゲ・スクーグの
培地、リンスマイヤー・スクーグの培地、ミラーの培地
、ホワイトの培地、Ｂ５培地、又はこれらの修正された
培地を使用する請求項１に記載の黄色物質の製造法。
（３）植物ホルモンとしてオーキシン及びサントカイニ
ンを使用する請求項１に記載の黄色物質の製造法。
（４）黄色物質が薄層クロマトグラムによりＲｆ０．５
〜０．６を示す物質である請求項１に記載の黄色物質の
製造法。
（５）請求項１により採取された黄色物質を用いて基材
の染色を行うことを特徴とする黄色物質の用途。