JPH02164354A - 女性の不妊周期を測定する方法および装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、主として、女性の周期的な不妊時期を測定る
、方法およびその装置に関る、。更に詳細には、本発明
は、次の月経が来るまでは、女性が妊娠しないことを示
すプレグナンジオール・グルクロニドの尿中濃度のスレ
ッショルドレベルの測定に関る、。

宗教的、倫理的、医学的理由から、非常に多数の女性が
避妊のために薬物や器具を用いないで、パースコントロ
ールによる自然の家族計画法を行なっている。更に受精
遮断策を講じている女性やカップルも、そのような手段
を講じる必要のない時期を測定できるのを望むことは多
い。一般的に、自然の家族計画法では、女性が、基礎体
温や子宮頚管粘液の粘度などの生理学的指標を観察して
、排卵の時期を調べるのに頼っている。排卵前後の適当
な期間、性交渉をひかえることによって、通常は妊娠を
避けることができる。しかし、女性の周期が変動る、た
め、基礎体温や頚管粘液の発生を常に信頼る、ことはで
きない。従って、より信頼のおける生理学的指標の得ら
れるのが望まれている。

代替指標がこれまでも提案されてきている。例えば、女
性の黄体形成ホルモン（ＬＨ）の血中濃度の上昇は、排
卵の前に起きることが知られている。また、女性のプロ
ゲステロンの血中濃度は、排卵後の短期間上昇る、こと
も知られている。従って、まずＬＨ濃度の上昇を測定し
て、尿中のプレグナンジオール・グルクロニド（ＰＤＧ
、プロゲステロンの代謝物）の濃度が上昇しているのを
測定る、こきによって、女性が妊娠可能な期間、逆に言
うと不妊期間を知ることができる。

しかし、このような二段階の測定法には、ある種の欠点
がある。例えば、ＬＨ濃度が必ずしも上昇る、わけでは
なく、このため、妊娠可能期間及び不妊期間の測定に問
題が生じる。また、２種類の測定を行なう必要があるた
め、妊娠可能期間の測定が複雑になり、それほど有用な
方法ではなくなる。

上記理由から、簡単に、できれば、一種類の測定で済む
不妊期間の測定法を開発る、のが望まれている。このよ
うな測定法であれば、不妊期間を示す、高度に信頼でき
る指標となるはずであり、不妊期間の全体を測定る、た
めには、月経等の他の生理学的指標の観察結果と組み合
わせて用いるのが望ましいであろう。

〔従来の技術〕

ブラウン他（１９８７年）は、Ａｌ１１．Ｊ、　０ｂｓ
ｔｅｔ、　Ｇｙｎｅｃｏｌ。

１５７　：　１０１１１２−１０８９で、尿中のエスト
ロゲン及びプレグナンジオール・グルクロニドを測定る
、ことによって、女性の妊娠可能期間をいかに測定る、
かについて述べている。妊娠可能時期の始まりを測定る
、のに、エストロゲンの酵素による測定法が用いられて
おり、また、終わりの時期を測定る、には、プレグナン
ジオール・グルクロニドの酵素による測定法が用いられ
ている。プレグナンジオール・グルクロニドの測定法で
は、５．２μｍｏβ／２４時間（尿１５００ｍｊで約１
．７ｇ／ｒｎｌの濃度に相当）以上の濃度で、陽性とな
る。コリンズ他（１９８１年）は、第１０回国際生殖及
び不妊会議の抄録集（Ｐｒｏｃ。

Ｘｔｈ　Ｉｎｔ’　ｌ　Ｃｏｎｇｒｅｓｓ　ｏｎ　Ｆｅ
ｒｔｉｌｉｔｙ　ａｎｄ　５ｔｅｒｉｌｉｔｙ。

ＭＴＰ　Ｌｔｄ、、　１９−３３ページ）で、女性の妊
娠可能な期間は、まず黄体形成ホルモンまたはエストラ
ジオールの濃度がピークになったのを測定し、次いで、
プレグナンジオール−３α−グルクロニドなどのステロ
イドのグルクロニドの濃度を測定る、ことによって、知
ることができると示唆している。

尿中のステロイド・グルクロニドの検出法については、
サラマジワ他（１９８３年）が、「ステロイド・グルク
ロニドの尿分析：臨床化学におけるその価値と方法論」
、第２版、（チャーチル・リビングストン、ニシンバラ
、４１４−４２１ページ）で述べている。５ｂ−プレグ
ナン−３α−２０α−ジオール・グルクロニドの同相競
合比色による免疫検定のセットは、カリフォルニア州マ
ウンテンビニ−のモノクロナール・アンティボディー社
が、「プロゲスト・ウリン・ビープイージー・アッセイ
」の商品名で販売している。その検定法については、添
付文書に記されている。尿中のプレグナンジオール−３
−グルクロニドを測定る、ラジオイムノアッセイについ
ては、デナリ他（１９８１年）が、０ｂｓｔｅｔ、　Ｇ
ｙｎｅｃｏｌ、５８　：５−９で述べているが、そこで
は、早朝に採取した尿試料中の代謝物の濃度は、その該
当ホルモンの血清中濃度と高度の相関を示した。

〔発明の概要〕 本発明によると、女性における周期的な不妊時期を測定
る、方法は、月経周期における月経第−日目を観察る、
ことによって始まる。生理の第−白目以降のあらかじめ
決められた期間、尿中のプロゲステロン代謝物、通常は
、プレグナンジオール・グルクロニド（ＰＵＧ）の濃度
は、妊娠可能を示す指標として測定る、ことができる。

もしＰＤＧ濃度が、あらかじめ決めておいたスレッショ
ルドレベル、通常は約３．５ｆｆ／ｍｌを越えているの
であれば、その女性は、その日から、少なくとも次の生
理周期の生理第−日目までは、性交渉によって妊娠でき
ないと考えられる。試験は、予定の性行為よりも前の日
に行なう必要があり、定めた期間内でのみ試験る、こと
によって、最大の経済性が得られる。

本発明はまた、上述の方法を実施る、ための装置に関る
、。該装置は測定をいつ、どのように行うか、及び結果
をどのように解釈して、女性の月経周期における不妊期
間を検出る、かに関る、指図書と、複数のＰＤＧ測定に
必要な部品および試薬から成るものである。

〔発明の手段〕

本発明による女性の不妊周期を測定る、方法は女性の月
経時期を観察し、女性の尿中のプロゲステロン代謝物質
濃度を測定し、この測定は月経後の所定時期に開始る、
、上記代謝物質濃度が排卵を示すスレッショルドレベル
を越える場合を観察し、かつ女性の次の月経開始を観察
る、ことから成り、それにより上記スレッショルド濃度
が越える時期から少なくとも次の月経開始までの性行為
による受胎の可能性がないと判断る、ことを特徴とる、
。

本発明による女性の不妊周期測定装置は尿試料中のプレ
グナジオール−３α−グルクロニド（ＰＤＧ）のレベル
がスレッショルドレベルを越えるか否を決定る、手段、
および（１）女性の月経時期を観察し、（２）女性の尿
中のＰＤＧ濃度を測定し、この測定は月経後の所定時期
に開始る、、（３）上記ＰＤＧ濃度が排卵を示すスレッ
ショルドレベルを越える場合を観察し、かつ（４）女性
の次の月経開始を観察る、工程から成る不妊周期測定指
図物から成り、それにより上記ＰＤＧスレッショルド濃
度が越える時期から少なくとも次の月経開始までの性行
為による受胎の可能性がないと判断る、ことを特徴とる
、。

更に、本発明の女性の不妊期間測定方法は女性の尿中Ｐ
ＤＧ濃度が約３．５ｔ／−のスレッショルドレベルを越
えるか否かを測定し、それにより該スレッショルドレベ
ルを越える時期から少なくとも次の月経初日までを不妊
期間と判断る、ことを特徴とる、。

〔実施例〕

本発明は、女性の生理学的状態、つまり月経の発現の観
察と、一種類のホルモンの濃度、つまり、尿中のプロゲ
ステロン代謝物濃度の定量値とを組み合わせて利用した
、自然のパースコントロール法である。生理の第−日日
はマーカー、つまり基礎日であり、尿中プロゲステロン
代謝物濃度の測定は、基礎日以降のあらかじめ決めてお
いた日よりも早く開始してはならない。生理の第−日と
尿中プロゲステロン代謝物濃度測定日との間隔は、各女
性の月経期間（周期）の平均に基づいている。

この間隔は、以下に示す相関に基づいて決定してもよい
。この相関はプロゲステロン代謝物濃度の上昇開始を見
のがさずかつ代謝物濃度の尚早テストを最小限にとどめ
る点で信頼性がある。

月経サイクル　テスト開始　月経サイクルプロゲステロ
ン代謝物濃度の測定を開始した後は、少なくとも２４時
間前、望ましくは少なくとも３６時間前、更に望ましく
は少なくとも４８時間前に排卵が起きたことを示す、所
定のスレッショルドレベルを測定値が越えることが確認
されるまで、毎日、測定を続行る、。卵子は、排卵後最
大２４時間は生きているので、排卵後２４時間以上たっ
てからであれば、性交渉によって受精る、ことはない。

適当な尿中プロゲステロン代謝物としては、プレグナン
ジオール−３α−グルクロニド（ＰＤＧ）　　トプレグ
ナントリオ−ルー３α−グルクロニド（ＰＯＴ）の両方
があり、ＰＤＧは高濃度に存在る、ので、ＰＤＧを測定
る、方が望ましい。しかし、ＰＤＴは、以下に述べるよ
うに、スレッショルドレベルの適当な変更に適している
。

ＰＤＧのスレッショルドレベルは、排卵が少なくとも２
４時間前に起きたことを確認できるほど十分に高く、か
つ、ＰＤＧ濃度が特に高くはない女性でさえもＰＤＧ濃
度の上昇を検出できる程度には低く設定されている。約
２−５Ｒ／−の範囲でＰＤＧを測定し、スレッシ日ルド
レベルヲ３．５に／ｒ！ｄｌとる、のが望ましいことが
認められている。

ＰＤＧは、各日向時刻に測定すべきで、朝一番の尿を採
取して測定る、のが望ましい。

ＰＤＧの測定を有効にる、ものとしては、ラジオイムノ
アッセイや酵素イムノアッセイなど、多くの便利なシス
テムがある。しかし、試験は通常、訓練を受けていない
人が家で行なうため、迅速かつ機器なしで行えることが
望ましい。特に、酵素による触媒作用を受けて視覚的に
観察できる色や点によってユーザーが自分で結果を解釈
できる固相免疫検定法（イムノアッセイ）が適している
。

このような試験は、十分な感受性を有し、プロゲステロ
ン代謝物のスレッショルドレベル値がａ察できるよう標
準化されていなければならない。通常は、本試験によっ
て女性の生理周期の妊娠可能期間及び妊娠不可能期間に
応じて、陽性／陰性の結果が得られる。

特に、本発明の出願人による、１９８７年１２月３日出
願の米国特許出願Ｎａ　１２８．２５７及び１９８２年
１２月３日出願の米国特許出願Ｎα１２８．２６０に記
載した種類の同相膜検定が望ましい。このような検定シ
ステムは、以下のように、ＰＤＧの競合的免疫検定を行
なうのに用いることができる。

第１及び２図については、反応セル１０は、ベースパネ
ル１２と上パネル１４を有る、。パネル１２及び１４の
間に、微孔性膜１６、スペース層１８、及び多層不織セ
ルロースからなる吸収剤２０がはさまれている。ベース
パネル１２及び上パネル１４は、ポリスチレンなどの熱
可塑性物質から成ると便利であり、その端がヒート・シ
ールされることによって、反応セル１０を形成していて
もよい。上パネル１４には、孔２２があり、これによっ
て膜１６の上部表面が、反応セルｌＯの外部に接してい
る。以下詳細に述べたように、尿試料と必要な試薬は、
孔２２を通って同相膜に添加され、吸収剤２０は、ウィ
ック（ｗｉｃｋ）として働き、膜１６を通して溶液を吸
いあげる。

膜１６は、その上部に固定された抗ＰＤＧ抗体を支持る
、際の固相として働く。適当な抗体としては、モノクロ
ナール抗体またはポリクロナール抗体があり、これらは
、ＰＤＧ免疫原による無を推動物ホストの高度免疫に基
づいた従来の方法によって調整してもよい。ＰＤＧに対
る、抗体を調整る、特別な方法は、サマラジーバ他（１
９８１年）によって、５ｔｅｒｏｉｄ　３８　：　６６
７−６７８に述べられている。

孔の直径が３７−であるナイロン膜が特に適している。

抗ＰＤＧ抗体は、調整、分離、精製されると、吸着及び
共有結合などの適当な方法によって膜上に固定される。

いずれの場合も、抗体は、ＰＤＧ濃度が、２−１０Ｒ／
ｍＪ！の濃度範囲以下及び以上である尿試料を識別でき
るのに十分な濃度で固定されなければならない。

適当な固定化のプロトコールは、以下に述べる通りであ
る。

抗ＰＤＧ抗体は、適当なバッファー中で約２−６■／ｒ
ｄの範囲内の濃度に調整され、抗体溶液１−３ｄを膜１
６上に沈着させることによって固定される。反応スポッ
トは、直径が２−５ｍ＋ａの膜１６上に形成される。次
いで、膜１６の周囲の部分上の空いている結合部位は、
非特異的蛋白質溶液、通常は１０〜５０ｍｇ／ｄの濃度
のノーファツトの乾燥ミルク、２００−４００　ｄを添
加る、ことによって塞さがれる。抗ＰＤＧ抗体を固定し
た反応セル１０は乾燥され、無水状態で包装される。

ここで述べた反応セルｌＯは、まず尿試料を膜に適用し
、ついで適当な酵素−ＰＤＧ共役体に適用した競合的結
合アッセイを行なうのに適している。

尿試料中及び酵素−ＰＤＧ共役体中遊離ＰＤＧは、膜上
の限られた抗ＰＤＧ結合部位を求めて競合る、ため、膜
に結合した酵素の量が、尿試料中に存在る、遊離ＰＤＧ
の相対量によって求められる。

結合が平衡状態になるのに十分な時間が経った後、過剰
な遊離ＰＤＧ及び酵素−ＰＤＧの共役体を洗浄によって
除き、次いで酵素基質を膜に適用る、。

酵素と基質の系を選択して、膜上に沈澱着色物質を形成
る、。結合した酵素の量は、尿試料中の遊離ＰＤＧの量
に反比例る、ため、膜１６上の色の強度は、尿中ＰＤＧ
濃度に反比例る、。つまり、色の強度が高い場合、尿試
料中にＰＤＧが少ないか、または存在していないことが
示され、一方、色がないか色の強度が低い場合、尿試料
中ＰＤＧが高濃度に存在る、ことが示されることになる
。

米国特許Ｎα４．３６６、２４１の第２７役３５行から
第３６段６３行までには、適当なシグナル呈示システム
が多数記されており、本発明の参考とした。

膜表面上に暗青色の色素を沈着させる、ＰＤＧ−アルカ
リフォスファターゼ共役体とインドキシル・フォスフェ
ート基質との組み合わせなど、膜上に色素を沈着させる
色呈示システムを使用る、のが望ましい。

第３　Ａ−３Ｃ図については、第３Ａ図に示したように
、破線３０で囲まれた円状の部分内など、反応セル上の
接した膜部分の限られた部分にのみ、抗体が適用される
ことが一般的である。上述したように本発明による検定
を行った場合、ＰＤＧ濃度が高い場合、通常は４躍／−
以上では、第３Ａ図に示したように、膜１６上に色はほ
とんど、あるいはまったく生じない。これは排卵が２４
時間以上前に発生し、次の月経周期の開始後まで妊娠し
ないことを示す。

約２Ｒ／−時のＰＤＧの尿濃度により第３Ｂ図のごとく
スポット３２０強度は中間になり、２ガ／−下のＰＤＧ
レベルは第３Ｃ図のごとく比色強度のスポット３４とな
る。膜１６上でスポットが消えてい（またはスポットが
皆無になるまでユーザは、普通、暗色スポット３４から
中間色スポット３２を経て変化る、のを期待る、であろ
う。本発明の検定装置を具備した測定チャートはユーザ
が試験時に自分の周期時点を測定る、のに役立つ。主と
して、中間色スポット３２が最初に現われる時から次の
月経サイクルの開始後まで、通常、月経の初日後３゜４
日間、受胎できない。

第３　Ａ−３Ｃ図の他の方法として、本発明の反応セル
１０は膜１６上にコントロールスポットを具備る、もの
であってよい。第４八と４Ｂ図に示されたように、コン
トロールスポット４０は典型例３ｊＮ／ａｔ’のスレッ
ショルドレベル（テストスポットに望ましい陽性スレッ
ショルドレベルのちょうど下）の尿ＰＤＧレベルに相当
る、酵素濃度を固定る、ことにより形成される。このよ
うに、検定記録を作ると、ＰＤＧ値のスレッショルドレ
ベルに結びつく精確な強度に相当る、コントロールスポ
ットの範囲で色が生じる。排卵前右よび排卵に続く最初
の略２４時間、尿試料の使用によるテストスポラ）４２
’　　（ｊＩＪＡ図）はコントロールスポット４０より
も強くなり、女性が不妊期に入っていないことを示す。

しかし、排卵後２４時を越えるとテストスポット４２″
は第４Ｂ図のごと（なり、コントロールスポット４０と
比較して弱い強度は女性が不妊期に入ったこと表示る、
。コントロールスポットの使用は試薬の働らきおよびユ
ーザのテスト法の違いにより生じる色度の変動を解消る
、ので概ね好ましい。

第３方法として、抗酵素抗体から成るリファレンス（基
準ンスポットを反応セル膜上に設ける。

このリファレンススポットは上記のごとき濃度コントロ
ールを具備しない。代りに、リファレンススポット内の
陽性読みとりが検定工程を正確に実行したことを表示る
、。抗酵素抗体は酵素−ＰＤＧ結合を拘束して検定過程
が正しく実行された限りで着色沈着る、。

上記実施例は理解を容易にる、ために例示として詳述し
たが、一定の改変、改良が特許請求の範囲内で実施でき
ることは自明である。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の方法によって、ＰＤＧの検定を行なう
のに有用な反応セルの遠近図である。 第２図は第１図の反応セルの分解断面図である。 第３Ａ〜３０図は、最初の比色定量プロトコールを用い
てＰＤＧを検定し、得られた結果を図示したものである
。 第４Ａ及び４Ｂ図は２番目の比色定量プロトコールを用
いてＰＤＧを検定し、得られた結果を図示したものであ
る。 １０・・・反応セル、１２・・・ベースパネル、１４・
・・上パネル、　　　　１６・・・微孔性膜、１８・・
・スペース層、　　　２０・・・吸収剤、２２・・・孔
、 ４０・・・コントロールスポット、 ４２’　、　４２”・・・テストスポット。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、女性の月経時期を観察し、 女性の尿中のプロゲステロン代謝物質濃度を測定し、こ
   の測定は月経後の所定時期に開始する、上記代謝物質濃
   度が排卵を示すスレッショルドレベルを越える場合を観
   察し、かつ 女性の次の月経開始を観察することから成り、それによ
   り上記スレッショルド濃度が越える時期から少なくとも
   次の月経開始までの性行為による受胎の可能性がないと
   判断することを特徴とする女性の不妊周期を測定する方
   法。 ２、上記代謝物質濃度の測定を開始する時期が女性の月
   経サイクル長に基づく、請求項１の方法。 ３、月経初日と上記代謝物質測定初日との間の日数を次
   の関係に従って計算する、請求項２の方法： ▲数式、化学式、表等があります▼ ４、上記プロゲステロン代謝物質がプログナンジオール
   −３α−グルクロニド（ＰＤＧ）である、請求項１の方
   法。 ５、上記ＰＤＧのスレッショルドレベルが少なくとも約
   ３．５μｇ／ｍｌである、請求項４の方法。 ６、上記スレッショルドレベルが約２μｇ／ｍｌから５
   μｇ／ｍｌの範囲にある、請求項４の方法。 ７、上記ＰＤＧのスレッショルドレベルを比色決定点を
   有する固相免疫検定法により測定する、請求項４の方法
   。 ８、尿試料中のプレグナンジオール−３α−グルクロニ
   ド（ＰＤＧ）のレベルがスレッショルドレベルを越える
   か否を決定する手段、および 次の方法により不妊周期を測定する指図物：（１）女性
   の月経時期を観察し、 （２）女性の尿中のＰＤＧ濃度を測定し、この測定は月
   経後の所定時期に開始する、 （３）上記ＰＤＧ濃度が排卵を示すスレッショルドレベ
   ルを越える場合を観察し、かつ （４）女性の次の月経開始を観察する、 から成り、それにより上記ＰＤＧスレッショルド濃度が
   越える時期から少なくとも次の月経開始までの性行為に
   よる受胎の可能性がないと判断することを特徴とする女
   性の不妊周期を測定する装置。 ９、上記指図物は上記ＰＤＧ測定が次の関係に従って女
   性の平均長の月経サイクルに基づいて開始されるべきで
   あることを表示する、請求項８の装置： ▲数式、化学式、表等があります▼ １０、上記ＰＤＧのスレッショルドレベルが少なくとも
   約３．５μｇ／ｍｌである、請求項８の装置。 １１、上記ＰＤＧのスレッショルドレベルが約２μｇ／
   ｍｌから５μｇ／ｍｌの範囲にある、請求項８の装置。 １２、上記ＰＤＧレベル測定手段は抗ＰＤＧ抗体を上に
   固定した固相、酵素−ＰＤＧ共役体からなる第１試薬溶
   液、および酵素基質から成る第２試薬溶液であって該酵
   素は該基質を比色物質に変化させるものから成り、かつ
   上記指図物は上記ＰＤＧレベルが、 上記固相を尿中に暴し、 上記尿中のＰＤＧと酵素ＰＤＧ共役体とが競合的に上記
   固相へ結合するような条件下で上記固相を第１試薬溶液
   へ暴し、 上記固相を洗って不結合のＰＤＧと酵素ＰＤＧ共役体と
   を除去し、かつ 上記洗った固相を基質に暴して比色物質を形成する、 ことから成る工程により測定すべきことを指図する、請
   求項８の装置。 １３、女性の尿中ＰＤＧ濃度が約３．５μｇ／ｍｌのス
   レッショルドレベルを越えるか否かを測定し、それによ
   り該スレッショルドレベルを越える時期から少なくとも
   次の月経初日までを不妊期間と判断することを特徴とす
   る女性の不妊周期測定方法。 １４、上記尿中ＰＤＧ濃度測定を女性の月経初日に続く
   所定日よりも早く開始しない、請求項１３の方法。