JPH02152993A - アンチマーおよびアンチマー複合体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 この発明は、薬剤分子を担体または抗体に非共有結合に
より結合させるために機能する、「アンチマーＪ　（ａ
ｎｔｉｍｅｒ）と呼ばれる化合物に関し、この際、親和
性は、薬剤を担体または抗体からほとんど解離させない
程度であって、薬効の損失は全くないが、毒性は減少す
る。このような化合物は、抗体やその他の標的タンパク
質などような輸送系物質に薬剤を結合させるために用い
ることができる。アンチマーは、天然に存在するもので
あるか、又は薬剤に特異的結合をもたらすように設計す
ることができる（「設計アンチマー」）、この結合は、
構造は類似しているが、１つ以上の「対立」官能基を有
し、各薬剤の官能基に対して非共有結合により結合する
ことができ、それによって、複数の非共有結合的相互作
用を介して、薬剤との複合体を形成することができる化
合物を用いて行われる。

〔発明の背景〕

瘍の治療に対して、いわゆる「ミサイル療法」への関心
が高まってきた。最近では、モノクローナル抗体などの
特異的抗体に新生物の化学療法薬を結合させ、正常組織
には作用せずＩｌｌ瘍細胞を選択的に標的とし得る複合
体の調製が試みられている。様々な種類の薬剤が、この
応用に向けられている。これらには、β−及びα−放射
性同位元素、植物及び細菌の毒素、および挿入剤、代謝
拮抗物質、アルキル化荊ならびに抗体などの様々な抗新
生物剤が含まれている。化学療法薬と抗体との結合が望
ましいが、それは以下の理由による。

１、近年、薬剤は、抗原特異的モノクローナル抗体に結
合させた場合、遊離で添加したときより、約１０００倍
程度多く腫瘍細胞に到達する、ということが示された。

２　多面発現作用を有する薬剤の耐性は、様々な化学療
法薬の１つによる処置後に起きる可能性があり、数種の
薬剤への耐性を引き起こす結果を招く。このような耐性
の機構は、完全に解明されているとは言えないが、耐性
が薬剤の標的抗体によって部分的に解消する場合もある
ことが知られている。

３、今日の化学療法剤は主要な腫瘍型の幾つかのみに有
効であるが、薬剤に非感受性のＩＩＩ瘍型の反応速度が
抗体介在型の供給によって増加することがある。

４、現在、化学療法薬にみられる様々な用量制限的毒性
が、抗体への結合によって減少することもある。少なく
とも等しい有効性を伴って毒性低下が認められれば、こ
の薬剤は優れた製剤であって、高い化学療法指数を有す
るものとえよう。

薬剤と抗体との複合体を調製するために、薬剤を、抗体
のある種の基（例えば、リジン残基、カルボキシル基、
又はスルフヒドリル基）の求核置換によって抗体に直接
結合させることができる。

また、薬剤は、ペテロもしくはホモ二機能性の架橋性リ
ンカ−を介して抗体に結合することも可能である。リン
カ−は、低分子量有機化合物でもよくまたは結合用の架
橋剤で置換したペプチドであってもよい。リンカ−を含
む高分子量担体が用いられることもあり、それによって
、単一抗体に多数の薬剤分子が結合可能となる利点が生
じる。担体の例では、リジンとグルタミン酸とのポリマ
ーデキストラン、ならびにポリペプチドアルブミンが挙
げられる。

従来、薬剤は、共存結合子を利用することによってのみ
抗体に結合されていた＊　　ＢｓａｉｒおよびＧｈｏｓ
ｅ、　Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、Ｍｅｔｈ、　５９：１２９
−１４４．１９８３参照。

共有結合は、さらに、代謝不可能な結合と代謝可能な結
合とに分類できる０代謝可能な結合は、加水分解を起こ
すことができ、低ｐＨ１還元的環境、タンパク質分解な
どの細胞内または細胞周囲の条件で、薬剤の放出を引き
起こす、有用な代謝可能な結合の例として、細胞内のエ
ンドソームの低ｐＨ環境に感光性のあるものが挙げられ
る。　５ｈｅｎおよびＲｙｓｅｒ＋　Ｂｉｏｃｈｅｍ、
　ａｎｄ　Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ｒｅｓ、Ｃｏｍ５ｕｎ、　
１０２：１０４Ｂ−１０５４参照、薬剤−抗体複合体は
、細胞への結合の後、エンドソームに導（経路によって
内在化（ｉｎｔｅｒｎａｌｉｚｅ）され、そこで複合体
は低ｐＨ環境にさらされる。複合体の共有結合の加水分
解によって、薬剤が遊離し、その細胞障害活性を発揮す
る。

代謝不可能な結合によっても、活性な薬剤複合体が調製
可能である。しかし、代謝不可能な結合で生じる複合体
は、代謝可能な結合によって形成される複合体と比較し
て、薬効の低下が見られる。

これは、細胞内のタンパク賞分解過程によって、代謝可
能な結合子はど有効に薬剤の放出が生じないからである
。さらに、薬剤は、その放出が生じた場合、一般には元
の薬剤と異なった形をとり、細胞毒性の低下が見られる
。

薬剤が抗体に直接結合するか、または薬剤が抗体への結
合に先立って担体に結合される共有結合性薬剤／抗体複
合体が調製されている。米国特許筒４．５０７，２３４
号、およびＧａｒｎｅｔとＢａｌｄｗｉｎ、　Ｃａｎｃ
ｅｒＲｅｓ、　４６：２４０？−２４１２参照、直接的
結合は、抗体分子内での残基、例えば、リジンならびに
グルタミン酸のアミノ基、スルフヒドリル基と、オリゴ
糖鎖の糖残基との結合によるものである。この直接的結
合法に係る重大な限界は、抗体投与後の血清中からの抗
体のより急速な消失が生じるような厳しい結合条件にさ
らされる可能性がある、ということにある、直接結合法
が、部位特異的（例えば、ｓ鎖またはスルフヒドリル基
に）でなければ、複合体の免疫反応が低下することがあ
る０部位特異的な結合が生じても、抗体へ結合した薬剤
の性質によって、直接結合は、非選択的（例えば、はぼ
等しい効力で抗原陽性および抗原陰性細胞を殺す）で、
弱い標的局在化を生じさせる場合がある０例えば、部位
特異的なスルフヒドリル基を介して抗体に結合したりシ
ンＡｉｌは、リシンＡｉｌ上の１！鎖のマンノースレセ
ブダに起因する、肝の貧食作用によって急速に取り込ま
れる。これは、極めて親油性の強い薬剤を用いても生じ
る可能性がある。

遊離薬剤形中での親油性薬剤は、細胞と相互作用のため
に有効な何らかの手段を有するにちがいないからである
。親油性薬剤に関するこのような１つの機構として、細
胞膜脂質二重層への挿入が挙げられる。この直接的薬剤
／抗体複合体が代謝可能な共有結合によって形成される
ならば、この結合は、血中、肝、牌、その他の器官など
、体内の他の部位で代謝されることが多い。

間接結合法は最初に、通常ではリンカ−を介して、薬剤
の担体への結合を必要とする。この担体は続いて、最初
に担体に結合し次に薬剤の結合後に活性化されるヘテロ
二機能性リンカ−を介して、抗体に結合する。この間接
結合法の１つの利点は、抗体に結合した多数の薬剤分子
が、標的部位への供給のための抗体に結合する可能性が
ある点にある、しかし、多数の薬剤分子が、例えば、薬
剤の親脂性により、非特異的取込みの先進をもたらすこ
ともある。この間接結合法では、抗体が厳しい結合条件
にさらされることはない、化学的操作は一般に抗体に対
してではなく担体に対して行われるからである。さらに
、担体は、薬剤複合体の溶解性を高めることもある。

抗体に対する薬剤の直接または間接結合法を用いれば、
安定な複合体が標的部位に到達し、薬剤の解離が最小限
に抑えられる。しかし、最大の効力を得るためには、こ
の性質を薬剤の選択的放出機構と組み合わせる必要があ
る。

選択的放出は、３つの段階で説明することができる。第
１は、腫瘍細胞中での細胞内放出である。

この型の放出の最適例は、複合体の細胞内処理に際し、
分解して遊離薬剤の放出をもたらす、ｐＨ感受性および
還元的結合である。これには、薬剤の解離に先立ち、複
合体の結合および内在化が必要である。細胞内での複合
体の内在化には、複合体が細胞質に入るか、エンドソー
ムもしくはライソゾームに取り込まれることが必要であ
る。固形腫瘍の抗原に対するモノクローナル抗体の内在
化速度は小さい、従って、そのような薬剤の放出過程を
必要とする薬剤複合体は、それほど強力とは言えないよ
うだ、さらに、すべての内在化された複合体が、活性薬
剤の放出のための適当な細胞内過程を経るわけではない
、ライソゾーム中で処理される複合体は恐ら（分解され
、不活性されるものもあろう、エンドソームまたは細胞
質中で処理される複合体には、それらの薬剤を放出する
機会があり、薬剤が細胞内標的へ到達する。

複合体からの薬剤の選択的放出に関する第２の部位は原
形質膜である。原形質膜放出機構の１例は、米国特許第
４．６７１．９５８号に言及されている。

この例では一度腫瘍細胞に結合した複合体は補体を活性
化し、この補体が、薬剤が結合している感受性の高いペ
プチド結合の酵素的分解を引き起こし、それを遊離形で
放出せしめる。

薬剤放出の第３レベルは、腫瘍部位にあって、複合体が
腫瘍細胞に結合する前の段階である。この放出段階には
、腫瘍組織と正常組織との間の細胞内環境の差異を利用
するような、薬剤／抗体結合が必要である。そのような
ものは、今まで開発されてはいない。

リンカ−を介した担体の使用の有無に拘らず、部位特異
的または非特異的に抗体に共有結合した細胞障害剤また
は抗新生物剤から成る、上記の共有結合性薬剤複合体に
は多くの問題がある。第一に、抗体への薬剤の共存結合
では、抗体または担体の基に結合可能な薬剤形を生じさ
せるために、薬剤の誘導体形成が必要である。−触にこ
れは、官能基の化学修飾による薬剤の細胞障害活性また
は効力の低下をもたらす。幾つかの薬剤については、誘
導体形成を行うだけで薬剤が完全に不活性化される場合
もある。また、誘導体形成が十分に調節されず、その結
果、薬剤の細胞障害活性に重要な基が、それがこの方法
での１次標的とはならないにもかかわらず、化学的に修
飾されることがある。ｐＨ感受性結合などの不安定な結
合の使用は、この問題の解決についながる面もあるが、
標的部位で薬剤の放出が比較的遅くなったり、薬剤が活
性の低い修飾型で放出されることもある。

複合体からの薬剤の細胞ット放出は、米国特許第４．６
７１，９５８号に記載されているように、複合体に関連
した、内在化および細胞内処理の問題の解決をもたらす
、しかし、この薬剤は、抗体分子中の糖鎖に共有結合に
より結合するためには、直接にまたは担体仲介系を介し
て導体化される必要がある。さらに、薬剤の放出速度は
、腫瘍細胞の原形質膜上の抗体の半減期、及び抗体の補
体固定速度により左右されよう、この過程の欠点は、は
とんどのマウスモノクローナル抗体（使用頻度が高い）
についてそれらのヒト補体固定能が極めて低いことであ
る。

薬剤と抗体の免疫複合体の現世代は、選択性の低さとい
う別の問題も抱えている。低い選択性の問題は、抗原陽
性および抗原陰性細胞に対して、ｋｒｉ　ｖｔｔｒｏで
薬剤複合体を試験することによって評価することが可能
である。抗原陽性細胞は、一般に、抗原陰性細胞より１
０分の１以下の薬剤複合体濃度で死滅する０例えば、ア
ントラセン複合体について、これが言える。逆に、同一
の抗体と植物または細菌毒素との複合体は、３ないし４
桁強い選択性を示す、従って、細胞障害性薬剤自体が細
胞膜と相互作用するための別の機構を有し、それによっ
て非選択的細胞毒性の生じることが予想される。さらに
、しばしば、１個の抗体分子に結合する１個より多くの
薬剤分子が存在し、各薬剤分子が非選択的細胞相互作用
を行うことができる。

従って、薬剤免疫複合体の選択性を改善する技術の必要
性は極めて高い、これによって、腫瘍部位へのｉｎ　ｖ
ｉｖｏ改良された供給、および正常組織での取込みの低
下がもたらされるであろう。

〔発明の要約〕

上記の問題を解決すべく、この発明は、抗体又はその他
の担体分子へ薬剤を結合させる非共有結合法の使用によ
って改良された免疫複合体の産生に関する。非共有結合
法の使用は薬剤を厳しい誘導体形成条件に暴露せず、薬
効を低下させない。

非共有結合法の使用は、標的細胞に対して十分に高い薬
剤の結合親和性を生じさせるが、しかし標的部位で細胞
障害剤が腫瘍細胞内または細胞表面上の薬剤レセプタに
移行し得る程度に不安定である。実際、非共有結合法の
長所の１つは、それによって、相互作用の親和性の別々
の検定が可能となり、薬剤の結合と放出との望ましい均
衡が得られる点である。この発明の複合体は、それぞれ
、緩徐な薬剤放出または標的化された薬剤の供給のため
の担体−薬剤または標的タンパク質の複合体を含んで成
り、抗体もしくは抗体断片などの標的タンパク質または
担体分子、「アンチマー」と呼ばれ、抗体又は担体に共
有結合した成分、および該アンチマーに非共有結合した
薬剤を含んで成る。

異なった配置において、薬剤をまず抗体もしくは担体に
共有結合せしめ、続いてアンチマーに結合せしめて、細
胞殺傷能の選択性を改善することができる。このアンチ
マーは、天然に存在するものであってもよく、又は特に
設計されたものでもよい。（このように特に設計された
アンチマーを、以下「設計アンチマー」と呼ぶ、） 薬剤と担体タンパク賞または抗体との非共有結合的会合
は、結合親和性はランダムであり、そして不均一であり
、一般には結合薬剤の低レベルをもたらす、安定性の低
い結合薬剤は、早過ぎる放出の可能性の増大及び宿主へ
の毒性の危険性増大、および腫瘍部位へ局在化する能力
の低下によって、不適切と見られる。この発明はアンチ
マーを提供し、このアンチマーは薬剤分子に適合しそし
て薬剤との多数の非共有結合性相互作用を受け、抗体又
は担体へのその結合親和性を高め、そして薬剤のほとん
どがなお結合した状態で標的部位に達するほど十分安定
な複合体提供するように特に設計されている。

この発明はまた、薬剤とアンチマーの可溶性複合体に関
する。この前形成複合体は、細胞障害療法の毒性を低下
させ、又は遊離薬剤の徐放性のための機構を付与するた
めの製剤として投与される。

アンチマーは単独で、静注部位周辺におけるドキソルビ
シンの溢血といった毒性を予防するために、薬剤の局所
投与部位に注射することもできる。

この発明の説明に先立って、以下のような定義が有用と
なろう。

・アンチマー：　「アンチマー」という表現は、現在、
この分野では用いられていないが、ここではこの発明を
説明するために使用した。接尾語ｒｍ１３ｒ　Ｊは、化
学種のもう一方の化学種との関連を表すために当業界に
おいて用いられる０例えば、ｒ　ｉｓｏ＊ｅｒ　（異性
体）」とは、ある化合物に対して、原子の数と種類は同
一であって、立体配置が異なるもう一方の化合物を指す
、　　ｒａｎｔｉｍｅｒ（アンチマー）」とは、もう一
方の分子形に対して対立しそして相補的な形を有する分
子をいう、この明細書では、アンチマーという用語は、
ある薬剤分子に構造的に逆でありそして相補的である官
能基を備えた分子を指すために用いる。このアンチマー
および薬剤は、類似の平面環構造を有し、対立する官能
基を有することが好ましい、アンチマーの対立する官能
基には、水素結合及びイオン結合に関する基、並びにｐ
ｉ結合を増加させるアンチマー上の電子欠乏基（例えば
、酸性プロトンを与える基）または電子過剰基（例えば
、ヘテロ原子およびカルボキシレートなどのアニオン基
土における非共有電子対）の有無に拘らないその他の非
共有結合的相互作用が含まれる。さらに、アンチマー上
の対立官能基が立体的に適切な３次元配置を取るので、
薬剤上の官能基は、適正な立体配置でアンチマー上の対
立官能基との相互作用が可能となる。

・官能基：官能基とは、もう一方の基と、相互作用が可
能であって、会合または結合し得る分子の一部である０
例えば、電子過剰基、電子欠乏基、水素結合能のある双
極子、およびイオン性原子団が、官能基の例として挙げ
られる。第１図のドキソルビシンの構造を参照すると、
ケト基、水酸基、メトキシ基、およびアミノ基が、ドキ
ソルビシン上の官能基の例といえる。

・抗新生物剤：抗新生物剤とは、ＤＮＡ、　ＲＮＡ、タ
ンパク質合成、その他の重要な細胞の機能を抑制する能
力のために細胞障害活性を有し、最終的には細胞死をも
たらす薬剤を指す。

・非共有結合：非共有結合は、イオン結合、水素結合、
ｐｉ−ｐｉ結合、疎水性相互作用、およびファンデルバ
ールス相互作用として定義される。

・共有結合：共有結合は、有機２分子間におけるシグマ
結合の形成として定義される。

・電子過剰基：電子過剰基は、過剰な電子、または利用
可能な塩基性で非結合性の電子対を含む。

電子過剰基には、カルボキシレート、スルフィネート、
フェノキシトだけでなく、酸素、イオウならびに窒素な
どの非共有電子対を有するヘテロ原子含有基が含まれる
。

・電子欠乏基：電子欠乏基は、カチオン、電気陰性度の
高い原子団などのように電子欠乏状態にある。を子欠乏
基には、ヘテロ原子に結合したプロトン（酸性状Ｂ）に
限らず、アンモニウムの窒素原子、およびニトロ基が含
まれる。

・立体配置：アンチマー上の官能基の立体配置とは、ア
ンチマーの立体官能基が薬剤の官能基の反対側に向くよ
うに並び、薬剤の官能基とアンチマーの対立官能基との
非共有結合を可能にする配置を示す。

・担体：担体とは、ポリ−１−リジン、ポリ−１−グル
タメート、ポリマーデキストラン、またはアルブミンな
どのポリペプチド、ポリマー、またはタンパク質を示す
。担体は、薬剤を抗体または標的タンパク質に結合させ
るために用いられ、これにより抗体の免疫源性を低下さ
せずに、有効投与量を増大させる。

・標的タンパクｆ：標的タンパク質には、標的細胞また
は標的部位に特異的に結合し得るどのようなタンパク質
領成分も含まれる。標的タンパク質の例として、抗体、
抗体断片ＣＦ−ｂ、Ｆ＜−・、２、およびＦ。・）、モ
ノクローナル抗体、モノクローナル抗体断片、および特
定の細胞のレセプタに結合し得るペプチドホルモンが挙
げられる。

・リンカー：担体または抗体に薬剤を結合させる、ヘテ
ロまたはホモ二機能性結合子を有する小ペプチドまたは
有機化合物分子。

・相補基：相互に反応可能であって、２分子間で引力を
生じるような官能基、電子欠乏基および電子過剰基は、
相補基の一例である。

要約すると、この発明はアンチマー、アンチマー／薬剤
複合体、担体／アンチマー／薬剤複合体、標的タンパク
質／アンチマー／薬剤複合体、標的タンパク質／担体／
アンチマー／薬剤複合体、標的タンパク譬／薬剤／アン
チマー複合体、標的タンパク質／担体／薬剤／アンチマ
ー複合体、および、薬剤と多数の非共有結合性相互作用
を起こすアンチマー（天然型もしくは合成型）を設計し
たり調製する方法に関する。各相互作用は、それ自体で
は比較的弱いが、組み合わせた場合、それらは薬剤に対
して強い結合をもたらす。薬剤に対するアンチマーの非
共有結合は、様々な点で、薬剤−レセプタ部位の相互作
用と類似している。その作用は、疎水結合、イオン結合
ならびに水素結合の組み合わせであり、レセプタに対す
る薬剤の安定で且つ選択的な結合を生じさせる。このよ
うなアンチマー分子は、協奏的で複数の非共有結合性相
互作用により薬剤の安定な接合体または復合体を生じさ
せる。アンチマーに非共有結合した薬剤の安定な複合体
は、続いて、アンチマーの部分で標的タンパク質に共有
結合する。これは、アンチマー分子、すなわち、複合体
形成をすべき薬剤と構造的に類似するがしかし対立する
又は相補的な官能基を存する分子の形成から始まる。ア
ンチマーの反対で相補的な官能基は、薬剤の官能基に配
向するようにアンチマー分子上に配向される。これによ
って、−ｇには、薬剤とアンチマーの構造が同様の空間
配置をとる結果になる。

アンチマーと薬剤が、可能な限り、互いに同じ平面環構
造をとることが好ましい、これによって、「スクッキン
グ」、およびｐｉ　−ｐｉ　もしくは電荷移動相互作用
が起きる。高親和性結合を生じるにはこれらの作用だけ
では不十分であり、そしてそれ故に対立する相補的官能
基が平面環構造の回りに位置し、水素結合またはイオン
結合を介して薬剤の官能基と相互作用する。さらに同様
に、電子過剰基が薬剤上に存在すると、薬剤とアンチマ
ーとのｐｉ−ｐｉまたはスクッキング作用を高めるよう
に電子欠乏基をアンチマーの平面環構造上に配置するこ
とができる。

非共有結合の一つの形は、環構造間に形成される疎水性
（ｐｉ−ｐｔ）結合である。この環構造は、類似の立体
配置をとることが好ましい、平面環構造は、類似の立体
配置の実例である。水素結合は、−Ｃ−０などの陰性双
極子とＯＨなどの陽性双極子との間で起こり得る。水素
結合は、Ｃ−０カルボニル基中の酸素などの塩基性の非
共有電子対を含むヘテロ原子のある基と、置換型アミン
及びヘテロ原子上の酸性を示すプロトンのごときカチオ
ンを有する基との間で形成される。イオン性の非共有結
合は、ホスフェート、ホスホネート、スルホネート、お
よびプロトンに強く結合したその他の基と、ＮＨ”、な
どのカチオン基との間で形成される。官能基は、官能基
が存在する環構造との関連のために非共有相互作用を行
うそれらの能力において異ることができるから、上記の
例は限定的ではない。

しばしば、ドキソルビシンなどの薬剤によって、注射部
位において一種の毒性としての浴出または局所性壊痘が
生じる。ドキソルビシンとアンチマーの同時投与の場合
、またはアンチマーを後で投与した場合、アンチマーは
、局所の注射部位で遊離の薬剤に結合し、遊離の薬剤の
局所的濡出を減少させる。同様に、その他の局所性壊痕
形成薬の局所的毒性は、アンチマーの投与によって低下
することもある。

アンチマーを特定の薬剤に非共有結合させる設計におい
て、アンチマーの構造に対する薬剤全体の親和性は、薬
剤とアンチマー間での可能な非共有結合性相互作用の数
を増加または減少させることによって調節できる。一般
に、この結合は、薬剤／アンチマーがｉｎ　ｖｉｖｏ供
給のために十分に安定となるために、１０”■ｏｌ／１
以上でなければならない、しかし、その親和性は、標的
アクセプタ部位への薬剤の最終的移行のために十分低（
なければならない。非共有結合性相互作用を起こし得る
アンチマー上の基の数は、基の数が異なる環の有機合成
、またはアンチマーの単純な酸化もしくは還元によって
変更できる。−例として、ドキソルビシンに対する天然
のンチマーであるフラビンアデニンジヌクレオチ、ドが
挙げられる。これは、その還元状態で１分子のフラビン
当たり３つの水素結合の、酸化状態でただ１つの水素結
合の能力を有する。

複合体形成に関して、指定されたＲ基（各実施例参照）
においてＦＡＤが修飾される。その他の薬剤に関する設
計アンチマーを実施例９〜１４に示す。さらに、ＦＡＤ
アンチマーは、頚の環構造ヲ有スるその他の既知製剤を
ドキソルビシンに結合させるために用いられる。それら
の例には、アントラサイクリン誘導体、モルホリノ及び
シアノモルホリノドキソルビシン、エビルビシン、アク
チノマイシンＤ１エリプチシン、並びにマイトマイシン
Ｃが挙げられている。

薬剤とアンチマー／との最初の非共有結合性相互作用は
、必要に応じて、脱水剤の存在下で薬剤／アンチマーの
複合体形成を行うことによって高められる＊　Ｐｔ　　
Ｐｉおよび疎水性相互作用を水分子が妨害するであろう
。従って、水を除去すると、初めにこれら結合の相互作
用が増強される。

複合体は、−皮形成されると、その安定性によって再水
和されにくくなる。以下の第１表に、薬剤／アンチマー
の相互作用を促進する脱水剤、および薬剤とアンチマー
との至適相互作用を生じる対応する濃度範囲ＣＶ／Ｖ）
を示す。

グリセロール　　　　　　　　　０．５〜３０ポリエチ
レングリコール　　　　０．５〜１０エチレングリコー
ル　　　　　　　０．５〜５０硫酸ナトリウム　　　　
　　　　　０．５〜１８二の発明は、また、「アンチマ
ー増幅」の概念を描く、アンチマー増幅は、抗体分子が
アンチマーと複合体形成する場合に達成される。続いて
、薬剤が複合体化したアンチマーと複合体を形成する元
の薬剤は、まだ第二のアンチマー分子と反応することが
でき、そして３分子間で平衡複合体を形成することがで
きる。アンチマーの第二層を添加してから、薬剤の第二
層を加えることができる。

この過程は、複合体の溶解性が減少するまで繰り返すこ
とができる。このスクッキング過程は、「アンチマー増
幅」と呼ばれ、抗体の低レベルの誘導体化を伴って複数
の薬剤分子が運ばれることを可能にする。

アンチマーの複合体を作る別の方法は、細胞と薬剤との
正常な相互作用を妨害するために、直接または担体を介
して抗体に共有結合した薬剤を複合体化するものである
。多数の薬剤の中でいかなるものも、抗体に結合するこ
とができる（例えば、アントラサイクリン）、このアン
チマーは薬剤の複合体形成後に混合物中に透析される。

この状況で、アンチマーは、薬剤を細胞から遮蔽する役
割を果し、複合体の標的への指向を指令する抗原抗体反
応のみを許容する。アンチマーは、薬剤との複合体形成
によって選択することができ、そして次に効力の保持に
ついて試験される。この出願の実施例８で示されるよう
に、異なった親和性を有する様々なアンチマーによって
異なった程度で１ｎｖｉｔｒｏ活性が低下するであろう
。

この発明の複合体および接合体は、適切な方法、例えば
、静脈内、皮下、リンパ管内、腹腔内、筋肉内、標的組
織へ直接、または経口などのいかなる経路によってもｉ
ｎ　ｖｉｖｏで投与することができる。注射によって投
与される複合体または接合は、この発明の複合体または
接合体および製剤の分野では既知の担体から成る組成物
の形態を取っている。

薬剤／アンチマー／抗体複合体を調製する「後形成Ｊ　
（ｐｏｓｔ−ｆｏｒｍ）法は、二段階法である。最初の
段階では、アンチマーを抗体に共有結合する。

次の段階で、薬剤をアンチマーに非共有結合により結合
させる。薬剤の結合に関しては、アンチマーのすべての
官能基が使用される必要はない、すなわち、複合体形成
のための置換のためにはカルボキシル基のようない（つ
かの基が利用される。

複合体形成に有用な求核基には、例えば、活性化エステ
ルまたはマレイミドが挙げられる。アンチマーには、部
分的アンーチマーであるが内因性の基またはタンパク質
に隣接した場合に完全なアンチマー構造を取り得る分子
により置換された標的タンパク質または担体の組成物も
含まれる。

部分的アンチマーとして、カルデイオリビンおよびアデ
ノシン三リン酸の２例が挙げられる。それぞれには、ド
キソルビシンと強いイオン結合を行い得る隣接リン酸基
が少なくとも２つ含まれている。そういった「部分的ア
ンチマー」が、芳香族アミノ酸に併置して、抗体または
担体に結合すれば、これらのアミノ酸にはさらにｐｉま
たは水素結合が生じ、完全なアンチマー構造が形成され
る。理論的には、芳香族残基と部分的アンチマーとの併
置は、完全なアンチマー構造の複合体形成はど調節が容
易ではない。

ある種の条件下では、結合可能なアンチマー構造を形成
する芳香族および荷電アミノ酸の適切な併置が抗体また
はアルブミンのような担体タンバり質に生じて、反応を
開始するのに脱水剤のみを必要とする。しかしながら、
タンパク質と高度の相互作用を起こす薬剤は一般的では
ない、薬剤のアルブミンとの結合が、それに類似した例
といえる。一般に、アルブミンの分子内には、薬剤に対
して高親和性を示す部位と低親和性を示す部位がある。

高親和性部では、荷電アミノ酸残基と芳香族アミノ酸残
基との併置が必要である。これによって、アルブミンは
、薬剤との結合に必要な相互作用のいくつかを満たすた
め、有用面もあることが示された。これは当該分野で周
知の事実であるので、この発明の目的は、第１表に示し
たような、薬剤／タンパク質の相互作用を促進する薬剤
の使用にあって、非共有結合薬剤／タンパク賞複合体の
標的供給への応用もこの発明の一部である。

この発明の一態様では、芳香族薬剤が、オリゴペプチド
またはその類似体上の２つ以上の芳香族原子団に非共有
結合（例えば、挿入）する、これら芳香族原子団は、同
一の場合もあり異なっている場合もあり、そして一般に
ペプチドまたはペプチド類似体の「骨格ｊ上の側鎖（例
えば、酸素、窒素、その他のへテロ原子で置換可能なＩ
！鎖）である、得られた複合体は、通常（薬剤が唯一の
平面環構造と相互作用を介して結合した上記のアンチマ
ー複合体よりも安定な薬剤結合を示す。この薬剤担体系
は、癌を含めて様々な疾病の治療に用いられる芳香族薬
剤のために有用であるにちがいない。

この発明における上記態様の一例は、芳香族側鎖を有す
る２つ以上のアミノ酸を含んで成るオリゴペプチド配列
である。「芳香族側鎖」とは、少なくとも１つの芳香環
を含む側鎖を指す、これら芳香族側鎖は、２本の側鎖と
の相互作用（挿入など）を介して芳香族薬剤の結合を可
能にするような配置を取っている。標的タンパク質は、
既知のタンパク賞工学または組換えＤＮＡ技術を用いて
、目的のオリゴペプチドが含まれるように設計すること
ができる。また、オリゴペプチドは、好ましくは薬剤の
結合後で、標的タンパク質に結合させることができる（
例えば、架橋剤を用いて）。得られた複合体は、ｉｎ　
ｖｉｖｏで目的の標的部位に薬剤を輸送するために有用
である。

上記のオリゴペプチドは、既知のペプチド合成法を用い
て合成することができ、これらは天然およびいわゆる非
天然アミノ酸の両方を含む、これらオリゴペプチドは、
合成ペプチドの芳香族アミノ酸鎖間への薬剤の挿入、ま
たは薬剤とペプチド側鎖との他の相互作用によって、薬
剤と非共有結合するように設計される。完全な複合体を
より水溶性にするためそしておそらく薬剤の結合を補助
するために、電荷を有する側鎖をオリゴペプチド中に近
接して含めることができる。ペプチド配列中のアミノ酸
を、電荷密度および２次構造の調整のために選択して、
芳香族薬剤を抗体へ結合させる初期の試みを満たせなか
った深刻な溶解性の問題を解決することができる。薬剤
を挿入または結合させる配列の反復単位を含めることに
よって、オリゴペプチドが複数の薬剤分子に結合するこ
とが可能となり、それによって標的タンパク質に複数の
薬剤分子を付加して治療効率を高めることができる。

オリゴペプチド中の側鎖の型および位置は、結合される
べき薬剤の構造に従って選択される。薬剤は、以下の例
の一つに存在するものを含む上記芳香族薬剤の一種のよ
うな少なくとも一つの芳香族環を含有するものが挙げら
れる。ペプチド骨格上の側鎖には、結合されるべき薬剤
の環に類似した平面環構造が少なくとも一つ存在しなけ
ればならない、この薬剤が複数の環を含むものであれば
、側鎖は、強固な薬剤の結合のためには複数の類似の環
を含むことが好ましい、オリゴペプチドの側鎖との相互
作用による結合であれば、薬剤は、その環が側鎖の類似
の環にある角度を取るか平行となるような位置に存在し
得る。その結果、ペプチド側鎖上の芳香環は、薬剤分子
９芳香環と面対面、縁灯面、又は面封縁に結合する。そ
の他のペプチド側鎖は、反対の電荷の相互作用を介して
薬剤の結合を助けるように近くに配置することがある。

負電荷アミノ酸、すなわちグルタミン酸またはアスパラ
ギン酸を使用して、例えば、ドキソルビシン（ＮＨ３’
基を含む）の結合を助けることができる。

上記のオリゴペプチドは、少なくとも１つの芳香環を含
む側鎖を有する天然型アミノ酸、例えば、トリプトファ
ン、フェニルアラニンおよびチロシンを含むであろう。

また、ペプチド骨格に他の適切な芳香環含有側鎖、例え
ば、９−フルオレニルメトキシカルボニル（ＦＭＯＣ）
　、ピレン、レイン、ユニブルーＡ、アクリジンＴＣＲ
１９１、ヒスチジン−Ｎ−ジニトロフェニルもしくはベ
ジル基、または目的薬剤の芳香環部分さえも含むように
オリゴペプチドを合成することができる。側鎖は、結合
すべき薬剤の構造に１（ＩＪ性を有するものを選択する
。

複合体の形成を示唆する薬剤を沈澱させるような芳香族
化合物も、側鎖として使用される（例えば、ドキソルビ
シンに対するプロプラノロール）。

別の方法として、側鎖を、オリゴペプチド配列の合成後
に結合させることもできる。２つ以上の同一アミノ酸を
含んで成るオリゴペプチドの合成に直交（ｏｒｔｈｏｇ
ｏｎａｌ）保護基を使用すると、異る条件下で脱保護さ
れる基によってそれらを保護することにより、同一アミ
ノ酸残基のそれぞれに異なった側鎖を有する結合単位を
合成することができる。市販の直交基には、例えば、シ
スティンのためのｐ−メチルベンゼン基及びアセトアミ
ドメチル基、並びにリシンのための２，６−シクロロベ
ンゾキシカルポニル基、ＦＭＯＣ又はトリフルオロアセ
チル基が挙げられる。

システィン、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、
セリン、スレオニン又はアルギニン残基に容易に結合し
得る複合体形成性芳香環基は、Ｒｉｃｈａｒｄ　ｌｌａ
ｒｇｌａｎｄのｒＨａｒ＋ｄｂｏｏｋ　ｏｆ　Ｐ１ｕｏ
ｒｅｓｅｅｒ＋ｔＰｒｏｂｅｓ　ａｎｄ　Ｒｅ５ｅａｒ
ｃｈ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（１９８５）　Ｊ　（Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒＰｒｏｂｅｓ、　Ｅｕｇｅｎｅ＋　Ｏｒｅ
ｇｏｎ）に記載されている０例えば、ヨウ化アルキル基
またはマレイミド基を含んで成る芳香族化合物は、オリ
ゴペプチドのシスティンと反応し、側鎖としてペプチド
骨格にその芳香族化合物が結合する。芳香族イソチオシ
アネート、塩化スルフォニル、スクシンイミドエステル
、ジクロロトリアジニル基もしくはハロゲン化アルキル
ニトロベンゾキサゾール誘導体などの芳香族化合物は、
リジン残基と反応し得る。アミン基を含む芳香族化合物
は、カップリング剤のカルボジイミドを用いてアスパラ
ギン酸またはグルタミン酸に結合可能である。カルボキ
シル基、フェニル基、フェニルグリコジル基、またはジ
カルボキシアルデヒド基を含む芳香族化合物は、アルギ
ニン残基と結合可能である。

こういった芳香族化合物の中には、以下のように、ある
種のアミノ酸残基に側鎖として結合し得るものもある。

チオール反応性（システィン残基への結合）ン アクリジンＩＣＩ？ アミン反応性 （リシン残基） ロイコキニザリン誘導体 レイン 一部 これらの芳香族化合物は、以下の構造式で示される癌の
治療に幅広く適用されるアントラセン環の抗生物質、ド
キソルビシンおよびダウノルビシンの非共有結合に有用
である。

側鎖としてはブチドに結合し得る他の芳香族化合物には
、プリン、ピリミジン、それらの類似体がある。適当な
長さのオリゴペプチドは、同族塩基（例えば、グアニン
、シトシン、チミン、およびアデニン）杏取り込むこと
もでき、それらの塩−ＯＨ −Ｈ 基によって、ＤＮＡが巻き戻って水素結合を形成した後
、有効な取りこみのための二重鎖伸長ＤＮＡを模倣する
であろう゛、これら薬剤の中で、ドキソルビシンは、Ｄ
ＮＡ中へ入ることが知られている。従って、合成ペプチ
ドは、挿入のためのＤＮＡ類似体として作用するといえ
よう。

個々のオリゴペプチド結合単位は、長いペプチド担体に
結合し、抗体１分子当たりに非共有結合する薬剤の化学
量論値を増加させる。ヘブチド担体は、ドキソルビシン
などの薬剤が結合するとき、不溶性であれば、ペプチド
上でより水溶性の芳香族側鎖を用いるか、１結合単位当
たりグルタミン酸またはアスパラギン酸などのより多く
の荷電アミノ酸を含存させることによって、溶解度を増
加させることができる。ペプチドは、その長さが増すほ
ど二次構造を形成しやすく、α−ヘリックスまたはＰ−
シート構造のような規則的構造は、結合単位の側鎖から
の斥力によって、薬剤の結合を阻害し得る。２分子以上
連続したグリシンを結合単位間に挿入し、規則的二次構
造を破壊しやすいグリシンの立体的柔軟性のために、各
単位を立体的に調節することができる。さらに、規則的
二次構造を破壊するために、結合単位間にプロリンを挿
入することもできる。より溶解度の高い伸長されたペプ
チドのコンホーメーションは、薬剤−結合単位間への２
つ以上のグルタミン酸の挿入によって達成され、電荷の
反発による鎖の伸長を可能にする。

連続するグルタメートを有するペプチドは、抗体複合体
が細胞内に取り込まれた後、グルタメートヒドラーゼに
よってライソゾーム中で加水分解され、これらの残基が
イオン対の形成に重要であれば、薬剤の放出が生じる。

同様に、ライソゾームのカルボキシペプチダーゼの作用
によっても、内在化後の薬剤の放出が高まる。もう一つ
の可能性は、ライソゾームのエラスターゼの加水分解に
感受性を示すアラニン連続配列の挿入である。

上記のオリゴペプチドは、様々な既知の方法のいずれを
用いても合成することができる。必要に応じて、上記の
ように、オリゴペプチドの合成後、ある種のアミノ酸残
基にさらに側鎖を結合させることができる。ペプチドの
アミドは、４−メチルベンジルヒドリルアミンで誘導化
化された架橋されたポリスチレン−１％のジビニルベン
ゼン樹脂を用いて、そしてペプチド酸はＰＡＭ（フェニ
ルアセタミドメチル）樹脂を用いて調製することかので
きる（Ｓｔｅｗａｒｔら、“５ｏｌｉｄ　Ｐｈａｓｅ　
ＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ、’　Ｐｉｅ−ｃｅ
　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ＋ｍｐａｎｙ、　Ｒｏｃｋｆ
ｏｒｄ。

、　１９８４）　、この合成は、Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉ
ｏｓｙｓｔｅｍｓ４３０Ａなどの市販の合成剤を用いて
、またはＭｅｒｒｉｆｉｅｄらの方法（Ｂｉｏｃｈｅｍ
ｙｓｔｒｙ、　２１：５０２０−３１．１９８２）もし
くはＨｏｕｇｈｔｏｎ（ＰＮＡＳ　８２：５１３１−３
５．１９８５）の方法に従って実施できる。側鎖の保護
基は、Ｔａｇ−ＭｅｒｒｉｆｉｅｄのＨＦ法（Ｔｉ−ら
、Ｊ、＾ｍ、ｃｈｅ＋＋＋、ｓｏｃ、　１０５：６４４
２−５５゜１９８３）を用いて除去される。

上記ペプチドは、２０％酢酸で抽出し、凍結乾燥して、
Ｖｙｄａｃ　Ｃ−４分析用カラムを装着した逆相ＨＰＬ
Ｃにより、５０分間で１００％Ｈ，０から１００％アセ
トニトリル１０．１％トリフルオロ酢酸の直線濃度勾配
をかけて精製した。このペプチドの分析は、ＰＴＣアミ
ノ酸分酸分上って行う（Ｈａｉｎｒｉｋｓｏｒｉら、Ａ
ｎａｌ、Ｂｉｏｃｈｅ＊、　１３６：６５−７４．１９
８４）、気相での加水分解（Ｍｅｆｔｚｅｒら、Ａｎａ
ｌ、Ｂｉｏｃｈｅ＋ｗ、　１６０：３５６−６１．１９
８７）後、配列決定は、エドマン分解またはｆ量分析に
よって行う。

上記オリゴペプチドは、それが標的タンパク質に結合し
得る、システィンまたはリシンなどのアミノ酸残基（通
常では、ペプチドのＮ末端またはＣ末端で）含むように
設計することができる。必要に応じて、残基を直交的に
保護したり、タンパク質との反応直前または反応中に脱
保護することができる。−例として、にトロピリジアン
スルフェニル）システィンが挙げられる。このオリゴペ
プチドは、様々な既知の三機能性架橋剤のいずれを用い
ても、標的タンパク質に結合させることができる（薬剤
の結合後が好ましい。）架橋剤は、オリゴペプチドのア
ミノ酸配列に応じて選択する。

オリゴペプチドがりシン残基を含む場合、ビス（スルフ
ォスフシミジル）基質などの、アミン反応性三機能性架
橋剤を使用することもできる。また、水溶性カルボジイ
ミドのカップリング剤は、一方の反応体（すなわち、オ
リゴペプチドまたは標的タンパク質）の遊離アミノ基と
他方の反応体のカルボキシル基との間で結合を形成する
ために用いられる。

以下の実施例によって、「アンチメリズム（ａｎｔｉ−
ｍｅｒｉｓｏｉ）　Ｊの概念を説明する。これらの実施
例では、ドキソルビシンを取り上げるが、抗新生物剤の
典型としての構造式を第１図に示す。ドキソルビシンは
、それが様々な腫瘍に有効な承認薬であり、広範に適用
され、ぞの化学療法剤の作用機構ならびに薬物動態が研
究されているために、例示を目的として選択した。さら
に、ドキソルビシンは、生体化合物と薬剤との相互作用
の研究において典型的な化学療法剤としてしばしば使用
される。

ｍ土　　キソルビシン　アン　マー 少なからぬ例で、天然に存在するアンチマー構造が用い
られている。この構造は、薬剤のドキソルビシンに結合
する。フラビンアデニンジヌクレオチド（ＰＡＤ）（第
１図参照）は、還元状態のとき、アンチマー官能基を有
し、この基がカルボキシル基および水酸基と水素結合し
、ＦＡＤの陰性リン酸基とダウノサミン糖のアミノ基と
の間でイオン性相互作用及び平面環同士の間でｐｉ結合
を行う。

刀缶贋）　アンチマー　　人　の　　法この方法では、
薬剤は、初めに「活性化された」アンチマーと複合体形
成し、続いて抗体に接合する。アンチマーは、まず、抗
体分子の還元型スルフヒドリル基に結合し得る、マレイ
ミドなどの求核基を用いて誘導体にする。この接合体形
成は、希薄で中性ｐＨの緩衝液（わずかに低張）中で、
ＦＡＤとドキソルビシンとを混合する段階から始まる。

アンチマーは、Ｎ荊とアンチマーとの１：ｌ複合体（等
モル）の形成をまず促進する濃度で用る。薬剤とアンチ
マーの最初の結合は、１０％硫酸アンモニウムなどの脱
水剤の添加によって促進されるであろう、この薬剤は２
〜４　ｔｇ／ｄといった比較的高濃度で添加される。そ
の結果、アンチマーの大部分が、薬剤と複数の非共有結
合的相互作用によって複合体形成され、少しの部分が沈
澱を生じる。

複合体形成に際し、水素結合、イオン結合、およびｐｉ
−ｐｉ相互作用によって、複合体が安定化する。複合体
形成の終了後、この複合体を、室温で１時間抗体と反応
させる。そのとき、薬剤／アンチマー〇モル比は、抗体
のそれの１０ないし１００倍とする。モノクローナル抗
体などの抗体は、ジチオスレイトール（ＤＴＴ　）を用
いた還元によって複合体形成のために用意される。（実
施例４参照）。

続いて、未結合の薬剤／アンチマーはゲル濾過によって
除去する。直接の複合体形成により抗体１分子当たり６
ないし１０分子の薬剤／アンチマー複合体が結合し、ま
たはアルブミピなどの担体を介して複合体１５〜４０分
子が結合するであろう。

裏庭１　　アンチマー　　　　ム　の 第−例として、ＦＡＤを直接抗体に結合させた。

１■の抗体を２■のＦＡＤ　（５ｍｇ／ｄ）と混合した
。この溶液を水浴中で３７°Ｃに温め、２■のＥＤＣＩ
　（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）
−カルボジイミド）１０■／ｄを添加した。ｌＮＨＣｌ
でｐＨを約６．０に調整し、反応液を３７℃で約２０分
間撹拌した。　０．０５Ｍ　ＰＢＳ　（ｐＨ９，０）０
．７ｄを、ｐｌｆが８．０〜８．５になるまで反応液に
加えて混合した。続いて、０．２５％グルタルアルデヒ
ド（■型−５１ｇ＋＋ａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、＋
　Ｓｔ、Ｌｏｕｉｓ。

Ｍｏ、）　１００．ｌ１７を、ゆっくりと撹拌しながら
加えた。

次に、この複合体を、リン酸緩衝液（ＰＢＳ）を用いた
ゲル濾過によって反応体から精製し、躍外濾過によって
濃縮し、２容のＰＢＳで少なくとも２回洗浄した。典型
的には、１０分子のＦＡＤ／抗体がこの方法で結合する
。１００ｍｏｌ過剰のドキソルビシンを、３７°Ｃで６
０分間反応させ、４°Ｃで一晩放置した。遊離の薬剤を
、ゲル濾過と瞑外濾過を組み合わせて抗体／アンチマー
／薬剤複合体から除去した。典型的には、抗体に結合し
たＦＡＤ分子当り１ｍｏｌの薬剤かに取り込まれる。

アンチマー複合体を用いる二番目の例では、Ｒｅａｃｔ
ｉｖｅ　　Ｂｌｕｅ　　４（ＰＨ４）（八１ｄｒｉｃｈ
　　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　　Ｃｏ、）などの色素が用いら
れ、最初にヒト血清アルブミン（ＵＳＡ　）に結合させ
、続いて抗体に接合させた。

ＰＨ８，５の０．２　Ｍ重炭酸ナトリウム緩衝液中２■
のヒト血清アルブミン（１０ｇ／ｄ）を、７．５■の活
性型ＲＢ４と反応させた（ＰＨ４のクロロ基によるタン
パク賞のアミノ基のアルキル化）。水中２０■／ｄのＰ
Ｈ４を、１時間室温で反応させる。ｐｌ！約１０の１．
０Ｍリジンを用いて反応を停止した。この複合体をゲル
濾過によって洗浄すると、約７ＲＢ４分子／ヒト血清ア
ルブミン（ＩＳＡ　）が得られた。

このアルブミン誘導体を、ｐＨり、ｓの１０％ＤＭＳＯ
／エタノール中のＳＭＣＣ１■と室温で１時間反応させ
た。過剰の反応体をゲル濾過によって除（。抗体（１０
ｍｇ）を、室温で３０分間８■のＤＴＴと反応させた。

過剰の反応体を脱気したＰＢＳを用いるゲル濾過によっ
て除去し、抗体（ＳＨ）をＳＭＣＣにより誘導体にした
アルブミンと反応させた。この複合体は、続いて、４　
’Ｃで一晩かけて１００ｍｏ　ｌの過剰ドキソルビシン
と反応させ、次に未結合の薬剤を除去した。

裏庭■土　アンチマー　　　の　　　の可溶性アンチマ
ーへの、または抗体もしくは担体に結合したアンチマー
への薬剤の結合親和性は、例えば、アルブミンまたはカ
ルシオリビン含有リポソームとの競争反応によって評価
し得る。カルシオリピンはドキソルビシンの強力なアク
セプタである。リポソームと会合したドキソルビシンを
分光光度法により測定した。アルブミンに会合したドキ
ソルビシンも、分光光度法により測定した。

（ＮＨ４）　ＺＳＯ４による分別沈澱、またはＣ１ｂｒ
ａｅｒｏｎ　Ｂｌｕｅセファロースへの結合によって、
−度アルプミンを抗体から分離した後、２種類の薬剤ア
クセプタを用いて抗体もしくは担体に結合した薬剤をチ
ャレンジし、そして血清中もしくは標的層全体での解離
速度を示した。１例として、抗体または担体上の還元型
フラビンアデニンジヌクレオチドに結合したドキソルビ
シンは、アルブミンによりチャレンジされた場合結合し
たドキソルビシンの低下は認められないが、カルシ、オ
リピンリポソームへのドキソルビシンの輸送が見られた
。酸化型フラビンアデニンジヌクレオチドを用いて結合
数を低下させると、カルシオリビン含有リポソームヘノ
より急速な輸送が可能となるが、アルブミンへの輸送は
なお低レベルである。この系は、アルブミンと薬剤の相
互作用の適当な親和性についての試験として用いられ、
薬剤／アンチマー複合体中の非共有結合の数が腫瘍部位
での薬剤の供給および放出のための適当な親和性をもた
らすか否かを前取て知ることができた。アクセプタが未
知の幾つかの場合、適切な標的細胞から調製した膜が競
争物質として使用することもできよう。

二番目の方法は、アンチマーと薬剤との間の累積非共有
結合エネルギーの概算を可能にする。現在用いられてい
る多数の化学療法剤は、生理学的ｐＨで帯電する。ドキ
ソルビシンは、ダウノサミン糖のアミノ基により正電荷
を帯びている。アガロースゲルの等電点電気泳動によっ
て分析すると、ドキソルビシンは陽極に移動し、容易に
可視化され得る。ドキソルビシンと安定に非共有結合し
そしてイオン性相互作用を満たすアンチマーとの複合体
形成の場合、薬剤／アンチマー複合体は、アガロースゲ
ルの等電点電気泳動の原点に止まる。

薬剤とアンチマーの解離が生じるまで電界強度を調節す
ることによって、アンチマーと薬剤間での結合親和性を
間接的に調べる。

薬剤複合体の効力および選択性は、抗原陽性細胞および
抗原陰性細胞とを比較したｉｎ　ｖｉｔｒｏの細胞障害
アッセイによって測定できる。そういったアッセイの一
つでは、ＭＴＴ色素の取込みおよび代謝を利用して、残
留生存細胞を測定する。

共有結合性および非共有結合性の抗体／アンチマー／薬
剤ドキソルビシン複合体の効力および選択性を第２図に
示す。２つのタイプの共有結合複合体がベンチマークと
して使用された。第１は、架橋剤としてＨＤＣＩを使用
するドキソルビシンの複合体である。第２の場合は、ド
キソルビシンがグルタルアルデヒドを用いる架橋反応に
よりダウノサミン糖のアミノ基を介して抗体に結合して
いる。

ＥＤＣＩ結合した非代謝性複合体は、同じ細胞系に対し
て遊Ｍ薬剤と比較した場合、糟ｏ　１　／　ｎｏ　１で
、抗体複合体の３つのタイプ中で有効性が最も低かった
。

アミノ結合した複合体によって、効力のより高い値が得
られるが、抗原陰性細胞系に対する選択性を示さない、
アンチマー／薬剤免疫複合体は、効力が遊離薬剤より高
く、共有結合複合体より優れ合のような非共有結合性相
互作用を用いるアンチマー複合体形成によって、有効で
より選択性の高い複合体が得られることを示している。

アンチマーが薬剤の官能基を占有し、抗原非特異的に細
胞膜と相互作用するので、選択性が改善される。細胞表
面の抗原に対する抗体の結合に際し、細胞の脂質膜と非
共有結合薬剤との併置は、ドキソルビシンの脱離を引き
起こし、そして、原形質膜内または上の受容体部位への
薬剤の輸送するのに十分である。

１施肛　　　　にお番る　　　たは　　　しめ戒 この実施例では、低い親和性と若干高い親和性の両方の
部位を有するアルブミンを、第１表に示すように、脱水
剤の存在下でタンパク質１ｍｏｆ当たり薬剤１００ｍｏ
ｌにさらした。脱水剤が存在しないと、２ｍｏ１未満の
薬剤が１ｍｏｌのアルブミンに結合し、薬剤は急速に溶
出（ｔｅａｃｈｉｎｇ）　Ｌ／た。脱水剤の存在下では
、低親和性及び高親和性をもって〔例えば、急速または
緩徐な消失溶出（ｌｅａｃｈｉｎｇ）　）タンパク質１
ｍｏｌ当たりに６〜１５ｍｏｌの薬剤が結合した。複合
体は、過剰な遊離薬剤の除去後、凍結乾燥され、通常の
薬剤として再構成され、ドキソルビシンの徐放剤として
投与される。

アルブミン上の高親和性部位の数は、アルブミンに対す
るＡＺＰ上の活性型カルシオリビンの複合体形成によっ
て増加する。これら「部分的」アンチマーの幾つかは、
アンチマー構造を完成させるであろう内因性アミノ°酸
の官能基と併置状態を取るであろう、薬剤の複合体形成
は上記のように行われ、徐放性を備えた薬剤／担体複合
体が生じる。

１施貫１　ロ　　　　　アンチマーの アンチマー単独使用のほとんどの場合、ドキソルビシン
などの薬剤は、実施例２に示すような脱水剤の有無にか
かわらず、アンチマーと複合体を形成する。脱水剤を用
いた場合、エチレングリコールのような静注に適するも
のが好ましい、アンチマー、ＦＡＤについては、タンパ
ク質への結合を目的としなければ、追加の官能基が、薬
剤とのさらなる相互作用のために用いられ、高親和性結
合を生じる。カルシオリビン−リポソームによるチャレ
ンジに際しては、遅い輸送動態のみが認められる。これ
らの結果は、ドキソルビシン／アンチマーのｉｎ　ｖｉ
ｖｏ心臓毒性の低さと相関していた。

実施班ｌ ドキソルビシンを、２５０Ｋｄの黒色腫関連抗原に特異
的なモノクローナル抗体、ＮＲ−ＭＬ−０５と共有結合
により複合体形成せしめる。共有結合性複合体の形成機
構は、この分野ではよく確立されている。ドキソルビシ
ンに対する酸化型ＦＡＤ、非酸化型ＦＡＤ、プロプラナ
ロール又はその他のアンチマーを添加し、そして次に透
析する。非共有結合したアンチマーとの薬剤複合体を、
抗原陽性（Ｍ１４＋）細胞系および抗原陰性（ＭＬ４−
）　１４胞系に対して評価し、遊離ドキソルビシンおよ
びアンチマーのないドキソルビシン／ＮＲ−ＭＬ−０５
複合体に対するＭ１４＋およびＭＬ４−細胞系のＩＤ５
Ｏ値を比較することによって、ｉｎ　ｖｉｔｒｏでの選
択性を比較する。アンチマーと結合しない複合体にでき
るだけ近い効を提供するが、ｉｎ　ｖｔｔｒｏアッセイ
で定義される最大の選択性を示すアンチマーが選択され
る。しかしながら、そのアンチマーは、薬剤または抗体
と十分安定に結合し、ヒト血清中で複合体のままで存在
しなければならない。

別の態様では、マイトマイシン−Ｃを抗体に共有結合せ
しめる。ＦＡＤ、酸化型ＦＡＤ、プロプラノロール又は
その他のアンチマーを添加し、そして次に未結合アンチ
マーを透析して除去する。

マイトマイシンＣの複合体は、抗原陽性細胞および抗原
陰性細胞に対して試験し、様々なアンチマーにさらされ
た複合体−と比較する。この方法によって、最大の細胞
障害活性を示す複合体の選択が可能となる。

５−ＦＵに対するアンチマーは、チアミン（ビタミンＢ
＋）の側鎖を修飾することによって調製し、それを、標
的タンパク質への共有結合は容易にするが、ピリジン環
上の官能基をそのまま保持する。

こうして、複数相互作用を介して非共有結合せしめ、合
成スキームに示すように、化合物１の４−β−（Ｎ−Ｙ
−カルボキシプロピオニル）アミノメチル−５−メチル
−１−Ｎ−（Ｒ−メチル−４−アミノピリミジン−５−
イル）メチルチアゾールの２．３，４．６−チトラフル
オロフエニルエステルを調製する。

チアミン（スキーム１の化合物１）の溶液を５−の無水
ピリジンに溶解し、０〜５℃に冷却する。

Ｐトルエンスルフォニルクロリド（１，１ｗＩｌｌｏｌ
）　ヲ５〜１０分間かけて少しずつ添加する。この溶液
を、２〜３時間冷却しながら撹拌し、冷却状態では一晩
保存することができる。約５〜１０戚の水を添加して、
溶液は必要に応じて濾過することができる。沈澱が生じ
なければ、溶液は真空中で蒸発乾固させる。この乾燥残
渣を酢酸エチルに溶解する。この溶解した残渣を水で洗
浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、蒸発乾燥させる
と、スキーム１の化合物２で示される、０−ｐ−トルエ
ンスルフォニルチアミン生成物が得られる。

化合物２を無水テトラヒドロフラン１０ｊｄに溶かして
、１ｍＭの溶液とする。この溶液にトリメチルシリルア
ジド（１，２ｍ５ｏｆ　）を添加してから、溶液を６〜
８時間還流させる。溶液を蒸発乾燥して、残渣を酢酸エ
チルに溶解する。この新しい溶液を水で洗浄し、無水酢
酸ナトリウム上で乾燥させてから、蒸発乾燥させてると
、図式１の化合物３で示される、４−β−アジドエチル
−１−Ｎ−（２−メチル−４−アミノピリミジン−５−
イル）メチルチアゾールが得られる。化合物３を調製用
液体クロマトグラフィーによって精製する。

１０〜１５１ｄの無水エタノールに化合物３（１，０ｍ
ｍｏｌ　）を溶解し、この溶液を、Ｐａａｒの装置に入
れた硫化Ｉ’ｄ−Ｃ触媒上にて大気圧で水素化する。水
素化の後、触媒をセライト上での濾過によって除去し、
溶媒を真空中で除去すると、図式ｌの化合物４、すなわ
ち４−β−アミノメチル−１−Ｎ−（２−メチル−４−
アミノピリミジニル）メチル−５−メチルチアゾールが
残る。

化合物４　（１，０ｍｍｏｌ）を１０ｍ２の無水テトラ
ヒドロフランに溶解し、これにコハク酸モノ−１−ブチ
ルエステルモノスフシミデートエステルを添加する。こ
の溶液を混合してから、室温で２時間撹拌する。次に溶
媒を蒸発させ、残渣を塩化メチレンに溶かして、水で洗
浄する。有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥しそして
蒸発させると、図式１の化合物５で示される化合物４の
誘導体が得られる。

化合物５は、Ｌ−ブチルエステル（１ｍｍｏｌ）を塩化
メチレン１０ｍ２および無水トリフルオロ酢酸２ｄに添
加することよって遊離酸型に転化し、この溶液を冷却条
件下で３０分間撹拌する。溶液を、さらに３時間撹拌を
続けながら、室温にまで戻す。

溶媒を真空中で除去し、残渣を塩化メチレンとともに数
回共蒸発させると、トリフルオロ酢酸が完全に除去する
。エーテルを滴加することによって、遊離酸が沈殿し、
これが図式１の化合物６である。

化合物６を液体クロマトグラフィーによって精製する。

遊離酸の２．３，５．６−チトラフルオロフエニルエス
テルは、アセトニトリル：水（４：１）１０ｄ、テトラ
フルオロフェニル３Ｉ１１および１−（３−ジメチルア
ミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩５ｓ
＋ｍｏｌ中に溶解した遊離酸（化合物６）１糟■ｏｌの
溶液から生成する。得られた溶液を室温で一晩撹拌する
。沈殿した固体を濾過してから、エーテルで洗浄し、遊
離のテトラフルオロフェニルを除去する。この活性エス
テルは、高速液体クロマトグラフィーによって精製し、
図式１の化合物７が得られた。

ａ、　　’キソルビシンアンチマーとしてのこの実施例
では、修飾されたＦＤＡをドキソルビシンのアンチマー
とするために調製した。得られたアンチマーは、リボフ
ラビン誘導体であって、ドキソルビシンと非共有結合性
相互作用をするアンチマー結合部位、および標的タンパ
ク質に共有結合する活性エステル残基を含む。修飾型Ｆ
ＤＡアンチマーを調製する合成経路を、以下のスキーム
２に示す。

スキーム２ リボフラビン （Ｊｔｉ 入玉ニムｌユ肱１ スキーム２の化合物８は、１０−１５ｍの蟻酸およべ２
〜３演の無水酢酸に溶解した２ｍｍｏｌの４−２チルア
ミノ）酪酸の溶液を混合することによて生成する。溶媒
を蒸発乾燥させ、エーテルを１すると、反応産物のＮ−
ホルミル−４−（メツアミノ）酪酸が得られ、このｌ　
ｗｍｏｌを無水チーヒドロフランに添加し、１．１　ｍ
ｍｏｌのトリメチ・すＪレエタノール（ＴＭＳＢ）　（
八１ｄｒｉｃｈ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ）お’　１．１　ｗ
ｌＩｏｌのＮ、Ｎ’−ジシクロヒキシルカＪし′イミド
と共に一晩撹拌する。固体沈澱物が生−る、この固体を
濾過し、濾液を蒸発乾燥する。

この残渣を酢酸エチルに溶解し、水で洗浄する。

有機相を蒸発乾燥すると、Ｎ−ホルミル−４−（メチル
アミノ）醋酸トリメチルシリルエステルが得られ、この
エステル（化合物８）を、触媒量のＰ−）ルエンスルホ
ン酸を含むメタノール（２０Ｍ１／　＋１１１０１化合
物）と共に５〜６時間還流する。このメタノールを真空
中で完全に除去し、スキーム２の化合物９をカラムクロ
マトグラフィーによって精製する。

ＦＡＤ　（フラビンアデニンジヌクレオチド、Ｐｉｅｒ
ｃｅ　Ｃｈｅａ＋１ｃａｌ　；化合物１０）ｌｎｕｗｏ
ｌを２０ｔｄのアセトニトリル：水（１：１）に溶解し
、スキーム２の化合物９、Ｎ−ジメトキシメチル−Ｎ−
メチル−４−（メチルアミノ）酪酸トリメチルシリルエ
チルエステル（２〜３ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物
を室温で６〜１０時間撹拌する。溶媒を真空中で除去し
、残渣を水に懸濁し、そして酢酸エチルで抽出して過剰
の化合１！１９を除去する。この生成物は、スキーム２
で示される化合物１１のフラビンＮ６−　（メチル、Ｙ
−カルボキシ−プロピル）アミノメチレンアデノシルジ
ヌクレオチドであって、凍結乾燥に続く液体クロマトグ
ラフィー精製によって水溶液から単離する。

化合物１１のａｍ物１　＊ｍｏｌを、２ｄの重炭酸トリ
エチルアンモニウム溶液に溶解し、続いて、蒸発乾燥す
る。約５Ｉ１１の水をその残渣に加え、２＋ｎ＋ｏｌの
フッ化カリウムまたはフッ化テトラエチルアンモニウム
も添加して、この混合物を約３０分間撹拌する。混合物
を蒸発乾燥し、アセトンを添加してから、溶液を共蒸発
乾燥する。残渣を１：ｌエタノール／アセトン混合物に
溶解し、それにＮａＣｌ０ａの飽和溶液を添加する。固
体が沈殿し、これを遠心分離によって単離し、続いて、
真空デシケータ−中で乾燥し、移動相としてイソプロパ
ノール／酢酸／水を用いる液体クロマトグラフィーによ
って精製する。

Ｉ　ｎ＋ｍｏｌの遊離酸化合物１２を、５ｄのアセトニ
トリル：水（１：　１）に添加し、この溶液に３１１１
ｏ１の２．３．５．６−チトラフルオロデノールおよび
３ｍｍｏｌの１−（３−ジメチルアミノプロピル−３−
エチルカルボジイミド塩酸塩を添加して、溶液を室温で
１０〜１２時間撹拌する．この溶液を希釈し、エーテル
で抽出して、過剰のテトラフルオロフェノールを除去す
ると、図式２の化合物１３で示される生成物、フラビン
Ｎ６−（メチル−２。

３、５．６−テトラフルオロフエノキシカルボニルプロ
ビル）アミノメチレン−アデノシルジヌクレオチドが得
られ、これを高速液体クロマトグラフィーによって単離
する。

Ｍ．メソトレキセートのアンチマー メソトレキセート（１’ｌＴＸ　”）に対するアンチマ
ーは、該アンチマーをＭＴＸに非共有結合により連結せ
しめるためにイオン結合相互作用および水素結合相互作
用の両者を利用するものとし２て、生成することができ
た。メソトレキセートは、アンチマーのピリドピリミジ
ン環とＭＴＸのプテリジン環、及びＭＴＸのグルタミン
酸部分のαカルボン酸とＭＴＸのピロリジン環により非
共有結合によってアンチマーに結合する。以下のスキー
ム３に、アンチマーであるα−１−ピペリジニル−αー
Ｎーｐ−（２．４．８−トリオキソピリド［３．２−ｄ
］ピリミジン−６ーイル）アセトフェニルアミドグルタ
ル酸−Ｔ−スクシンイミデートエステルの生成に必要な
合成法を示す。

スキーム 化合物１３であるグルタミン酸−α−ベンジルエステル
−ｒ　−ｔ−７’チルエステルグルタルアルデヒドの２
５％溶液５１１１に添加し、この溶液を２〜３時間で撹
拌する．この溶液にナトリウムシアノボロヒドリドｌＱ
ｍｍｏｌを添加し、さらに２時間撹拌し続ける．溶液の
水相を蒸発させ、残渣を水に懸濁して、酢酸エチルで抽
出する。

有機相を水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ
てから蒸発させると、化合物１４が得られる．化合物１
４の２−（ピロリジン−Ｊ−イル）−グルグル酸−１−
ベンジルエステル−５−Ｌ−ブチルエステルを、調製用
液体クロマトグラフィーで精製した。

２１１１１１０１の化合物１４の溶液を、塩化水素２当
量含むメタノール２０ｊｄ中で調製し、Ｐａａｒの装置
に入れたＰｄ−Ｃ　（　１　０％）触媒上にて３時間水
素化する。触媒をセライト上での濾過によって除去し、
濾液を蒸発させると、化合物１５が塩酸塩として得られ
る。

１００ｄのエタノールに溶解した１０ｗ＊ｏｌの５−ア
ミノウラシル溶液に、１２．５ｍｍｏｌのメチル−２−
プチノエートを添加し、この懸濁液を室温で８時間撹拌
する。沈殿した固体を濾過し、真空乾燥すると、４−（
２’、４’　−ジオキソピリミジン−５−イル）アミノ
クロトネートが得られる。このクロトネート懸濁液を３
時間還流する。混合物を室温まで冷却し、石油エーテル
を添加する。沈澱した固体を濾過し、空気乾燥すると、
化合物１６の２．４．８−）リオキソ−６−メチルビリ
ド［３，２−ｄ］ピリミジンが生じる。これを結晶化に
よって精製する。

１０Ｍ１の乾燥ジメチルホルムアミドに溶かしたＰ−ア
ミノベンツ゛ニトリルの２ｍ請ｏ１？Ｓ液に、３霞ｇａ
ｏｌのジーｔ−ブチルジカルボネートを添加し、この溶
液を３〜５時間室温で撹拌する。溶媒を真空中で除去し
、残渣を水に懸濁して、塩化メチレンで抽出する。有機
相を水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥すると、
ｐ−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルアミノベンゾニトリル
が得られる。これを結晶化によって精製する。化合物１
６の５ｎ＋ｍｏｌ；ｊ濁液を５−のへキサメチルジシラ
ザン、ｌｄのクロロトリメチルシラン、および５０ｄの
トルエンでと共に還流する。透明な溶液が得られな後に
、溶媒を脱気して除くと、化合物１６のトリメチルシリ
ル誘導体が得られる。この誘導体を１０−の無水テトラ
ヒドロフラン（ＴＨＦ　）に溶解する。トリメチルシリ
ル誘導体の溶液を、無水ＴＨＦに溶かしたＩＭｒｎ−ブ
チル−リチウム６ｄの冷却溶液に加える。この赤色溶液
によって、化合物１６のα−メチルリチウム誘導体の形
成されたことが分かる。約３０分間の撹拌の後、５．ｄ
の無水ＴＨＦに溶解した５ｍ５ｏｌのｐ−Ｎ−ｔ−ブト
キシカルボニルアミノベンゾニトリルを５分間かけて滴
加する。さらに１０〜１５分間の撹拌を行った後、１０
ｄのｌＮＨＣｌを添加して、反応で生成したアミンを加
水分解する。溶媒を真空で除去し、残渣を結晶化すると
、化合物１７の生成物、２，４．８−）ジオキソビリジ
ノ［３，２−ｄ］ピリミジン−６−イル）メチル−（ｐ
−ｔ−ブトキシカルボイル）−アミノフェニルケトンが
得られる。

２ｍ＋１１０１の化合物１７を、約１０Ｍ１の塩化メチ
レンおよび２ｄのトリフルオロ酢酸に溶解し、３時間撹
拌する。溶媒を除去し、残液をエーテルで粉砕すると、
アニリン中間体が得られる。　２１１＋１１０１のアニ
リン中間体溶液を、２０ｄのアセトニトリル：水（１：
１）中２６１１１０１の上記化合物１５および５ｓａｇ
ｏ　Ｉの１−（ジメチルアミノプロピル）−３−エチル
−カルボジイミドとともに撹拌する。反応終了後、溶媒
を除去すると、化合物１８で示される生成物、α−１−
ビベルジニルーα−Ｎ−ｐ−（２，４，８−１−ジオキ
ソピリド［３、２−ｄｌピリミジン−６−イル）アセチ
ルフェニルアミドグルタル酸−Ｙ−ｔ−ブチルエステル
が、シリカゲルのクロマトグラフィーによって単離され
る。

２　ｍｍｏｌの化合物１Ｂを、１０ｉｄの塩化メチレン
および２ｄのトリフルオロ酢酸と共に３時間撹拌する。

溶媒を除去し、残渣をエーテルと共にすりつぶし、活性
エステルを調製するための酸中量体を得る。この酸中量
体は、スキーム３の化合物１９である。化合物１９　（
１ｏ＋ｓ＋ｏｌ）の溶液を、１．　ｌ　ｍｍｏｌのＮ−
ヒドロキシスクシンイミドおよびｌ、　ｌ　ｍ＋ｍｏｌ
のＮ、Ｎ’　−ジシクロエトキシカルポジイミドととも
に、１０〜１２時間室温で撹拌する。沈殿したジシクロ
ヘキシル尿素を濾過し、濾液を蒸発乾燥する。残渣を酢
酸エチルに溶解しそして水で洗浄する。有機相を無水硫
酸ナトリウムで乾燥し、真空中で蒸発乾燥すると、図式
３に化合物２０として示されるアンチマー生成物、α−
１−ビベルジニルーα−Ｎ−ｐ　−（２、４、８−）ジ
オキソピリド［３，２−ｄｌピリミジン−６−イル）ア
セチルフェニルアミドグルタル酸−Ｙ−ｔ−ブチルエス
テルが生ずる。最後の精製は、高速液体クロマトグラフ
ィーで行う。

１１拠■、シ　シン　−ビノシ　ＡＲＡ−Ｃのアンチマ
ー ＡＲＡ−Ｃのアンチマーは、ＡＲＡ−Ｃ分子のニトロイ
ソシチジン基と反応する分子の設計によって調製する。

その反応は、イオン相互作用および水素結合によるもの
である。アンチマー分子の残りの部分は、該アンチマー
に水溶性を付与するために設計された。

ＡＲＡ−Ｃ へのアンチマーの調製をスキー ム４に示す。

スキーム４で示される化合物２１の５′−デオキシ−５
−アイオド−２’、３’−０−イソプロピリデン−５−
ニトロウリジンは、出発物質をウリジンの代わりに５−
ニトロウリジンを用いる以外、Ｂｒｏｗｎら、Ｊ、Ｃｂ
ｅ＊、Ｓｏｃ、、　８６Ｂ（１９５７）によって使用さ
れたものと同じ方法で調製する。化合物２１は、スキー
ム４の化合物２２である２、５′−アンヒドロー２．３
−０−イソプロピリデン−５−ニトロウリジンに転化さ
れる。化合物２２は、飽和メタノールアンモニアと反応
し、スキーム４の化合物２３である２、３−０−イソプ
ロピリデン−ニトロイソシチジンが生じる。化合物２３
を、９８％蟻酸を用いて脱保護し、化合物２４の５−二
トロイソシチジンが得られる。

２ｍ５ｏｌの化合物２４の溶液を、２Ｉ１１のテトラヒ
ドロフランに対して２，５１１１１０１のトリエチルア
ミンおよび１．１　ｍｍｏｌの１．３−ジクロロ−１、
１，、３。

３−テトライソプロピルジシロキサンを含む２０ｄの無
水テトラヒドロフランを用いて調製する。

この溶液を８時間撹拌して、蒸発乾燥する。残渣を塩化
メチレンに溶解し、薄層クロマトグラフィーによってシ
リカゲル上で精製する。残渣は、化合物２５の３．５−
テトライソブロビルージシロキシ−５−二トロイソシチ
ジンであった。

ｌ　ｍｍｏｌの化合物２５の溶液を、触媒量のｐ−トル
エンスルホン酸、およびｌ、　ｌ　ｍ＋ｗｏｌの３．４
−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸を含む無水
テトラヒドロフラン１０１ｄ中に調製する。この溶液を
３〜４時間撹拌してから、真空中で蒸発乾燥すると、６
″−力ルボキシ−２′−テトラヒドロピラン−２″−イ
ル−３’、５’　−テトラーイソブロビルージシロキシ
−５−ニトロイソシチジンである化合物２６が得られた
。化合？１２６をカラムクロマトグラフィーにより精製
する。化合物２６のテトラヒドロフランエステルを、化
合物２７としてスキーム４に示す。

１　＋ａｍｏｌの化合物２７を、水分ｌＯ％のＴＨＦ中
１、ＩＭｌのフッ化テトラーｎ−ブチルーｎ−アンモニ
ウムと３０分間混合する。溶媒を真空中で除去すると、
生成物である化合物２８の６”−（２゜３．５．６−テ
トラフルオロフエノキシカルボニル）−２′−テトラヒ
ドロピラン−２″−イル−５−ニトロイソシチジンを含
む残渣が得られ、化合物２日をシリカゲルの薄層クロマ
トグラフィーによって精製し、最終精製を高速液体クロ
マトグラフィーによって行う。

！ＩＩＪ！ｕ、マイトマイシンＣのアンチマースキーム
５に、活性エステルからマイトマイシンＣのためのアン
チマーの合成法を示す。

↑ ５ｍｍｏｌの４，６−ジアミツー２−オキソピリミジン
と１０〜１５ｖ＋ｍｏｌのジエチルエトキシメチレンマ
ロネートの混合物を混合し、１２０℃〜１５０’Ｃで６
〜８時間加熱する。透明な溶解物が得られる。エタノー
ルの除去を容易にするためにこの温度を維持する。エタ
ノールの除去後、混合物を室温にまで冷却し、固体の塊
をエタノールと共にすりつぶし、濾過することにより中
間生成物の２−（４−アミノ−２−オキソビリミジン−
６−イル）アミノメチレンマロネートが得られる。上記
のマロネート誘導体を撹拌し、Ｄｏｗｔｈｅｒａｏ　Ａ
中で環化を完全に行うために３〜５時間加熱する。その
結果、スキーム５で示される生成’１Ｑ３０の４−アミ
ノ−６−カルベトキシ−２，５−ジオキソピリジノ［２
，３−ｄ］ピリミジンが得られる。沈澱した固体を濾過
し、石油エーテルで洗浄して、還元段階の前に再結晶化
する。

２０−の無水ＴＨＦ中の化合物３０の懸濁液を、２ｍｍ
ｏｌのＬｉＡＩＨａ中に調製する。還元反応であれば、
進ｊ￥ＦＦ’　Ｌ　Ｃ（Ｆｉｌｌクロマトグラフィー）
によって観察される。還元が不完全であれば、ＬｉＡｌ
Ｈ４の一部を加えて完了させる。少量の冷水を滴加して
過剰の試薬を分解し、そして次に濾過する。濾液を氷酢
酸で酸性にし、蒸発乾燥すると、化合物３１で示される
生成物、４−アミノ−６−ヒドロキシメチル−２，５−
ジオキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジンが得られる。

化合物３１を再結晶化する。

２ｍｍｏｌの無水カリウムカルボネートおよびクロロ酢
ｆ’１ｐ−（メチルチオ）フェニルエステル（１ａ＋ｍ
ｏｌ）を含有する無水ジメチルホルムアミド中１ｍｍｏ
　１の化合物３１の溶液を、標準法によるＰ−（メチル
チオフェニルエステル）とクロロ酢酸のＤＣＣ縮今によ
って調製し、添加し、そして混合物を一晩撹拌する。溶
媒壱真空中で除去し、残渣を水に懸濁し、酸性にし、濾
過および結晶化を行って、化合物３２で示される生成物
の４−アミノ−６−ヒドロキシメチル−２，５−ジオキ
ソピリジノ［２，３−ｄｌピリミジン−Ｎｌ−酢酸ｐ−
メチルチオ）フェニルエステルが得られる。

テトラヒドロフラン中メチルチオ酢酸エチルエーテルの
ナトリウム塩の溶液を、塩化ナトリウムをメチルチオ酢
酸エチルエーテルに添加することによって調製する。こ
の溶液を、無水ジメチルホルムアミド（Ｄ？ｌＦ）中化
合￥ｙｊ３２の溶液に加えて、それを５０°Ｃ〜６０″
Ｃに加熱し、反応を終了させる。

この反応過程を、試料を抜き取りながら監視する。

そして、酢酸で酸性にして、反応を停止し、ＴＬＣによ
って反応の進行を調べる０反応の終了が判定された場合
、この溶液を酢酸で酸性にし、溶媒の蒸発乾燥、その後
の水溶液処理によって、化合物３３すなわち４−アミノ
−６−ヒドロキシメチル−２，５−ジオキソピリド［２
，３−ｄｌピリミジン−７−（α−メチルチオ）酢酸エ
チル−Ｎｍ−４’Ｆ酸ｐ−（メチルチオ）フェニルエス
テルを得る。

１　ｍｍｏｌの化合物３３を、１ｇのラニーニッケル（
温重遣）と共にエタノール中で短時間加熱し、７−α−
チオメチル基を脱チオ化した０反応終了後、ＩＭＮのｌ
ＮＨＣｌを溶液に添加し、加熱を続け／ て、ラクトン形成を完了させる。溶媒を真空中で蒸発乾
燥させることにより生成物を得、続く再結晶化によって
、化合物３４のラクトン誘導体を得る。１０ｍ１の無水
テトラヒドロフラン中１ｍｍｏｌのラクトン誘導体で懸
濁液を調製し、２当盪のｍ−クロロパーオキシ安息香酸
とともに３〜５時間撹拌する。この反応によって、スル
ホンとスルホキシド誘導体が生じる。これら産物を濾過
によって得る。

ドキソルビシンに結合する合成オリゴペプチドの使用を
評価する実験を行った。結合を、ドキソルビシンの可視
スベクロルの変化により追跡し、４７５ｎｍまたは５６
５ｎｍにおける薬剤の吸収スベクロルを、０．１Ｍリン
酸緩衝液（ｐＨ７，０）中で様々な濃度のペプチドを用
いる検定によって解析した。

結合曲線は、Ｂｎｚｆｉｔｔｅｒプログラム（Ｅｌｓｅ
ｖｉｅｒ−Ｂｉｏｓｏｆ　ｔ）での単純な双曲線に当て
はまった。結合のスクリーニング用に使用したオリゴペ
プチドに関する結果を第２表に示す。これらのペプチド
は、側鎖に芳香族を含むアミノ酸間で１，３−スペーシ
ング（すなわち、芳香族側鎖を有する２つの残基間で単
一の非芳香族アミノ酸が介在する）にドキソルビシンを
挿入するときの有効性を調べられるように設計した。こ
れらのアミノ酸は、Ｃ＝Ｃｙｓ。

Ｋ　＝Ｌｙｓ、　　Ｗ　＝Ｔｒｐ、　　Ｇ　＝Ｇｌｙ、
　　Ｅ　＝Ｇ１ｕ、　　Ｄ　＝Ａｓｐ。

Ｆｍｏｃ　＝リジンのεアミノ基に結合した９−フルオ
レニルメトキシカルボニル、およびＭＩＡＭＳ−システ
ィンに結合した２−（４’　−マレイミジＪレアニリノ
）ナフタレン−６−スルホン酸であった。

これらのオリゴペプチドは、ＢａｒａｎｙおよびＭｅｒ
ｒｉｆｉｅｌｄ著、ｒＴｈｅ　Ｐｅｐｔｆｄｅｓ：　Ａ
ｎａｌｙｓｉｓ、　５ｙｎ−ｔｈｅｓｉｓ＋　Ｂｉｏｌ
ｏｇｙＪ、　Ｂ、ＧｒｏｓｓおよびＪ、Ｍｅｉｅｎｈｏ
ｆｅｒ曙、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ：　Ａｃａｄｅ＋ｓｉｅ　
Ｐｒｅｓｓ（１９８０）に記載された、ｂｏｃ−ベンジ
ル固相ペプチド合成法を用いて合成した。

」−じし−表 ペプチド配列　　　　　　　　Ｋｄ、μＨＣＫＷＧ−に
一アミド　　　　　　　　　結合は未検出（ＪＷＧＷＧ
Ｗに一アミド　　　　　　　　結合は未検出ＣＫＷＧＷ
ＫＧＷＫ−アミド　　　　　　　結合は未検出ＫＫ（Ｆ
ｍｏｃ）　ＧＫ　（Ｆｎ＋ｏｃ）　ＫＧＧＣ結合は未検
出ＥＫ　（Ｆｍｏｃ）　ＧＧＫ　（Ｆｍｏｃ）　ＥＧＧ
Ｃ結合は未検出Ｅに（Ｆｎ＋ｏｃ）　Ｋ　（Ｆｏ＋ｏｃ
）　ＥＧＧＣ結合は未検出ＥＫ　（Ｆｍｏｃ）　ＧＫ（
Ｆｍｏｃ）　ＥＧＧＣ２８００Ｋ（Ｆｍｏｃ）ＧＫ（Ｆ
ｍｏｃ）ＤＧＧＣ２２ＥＫ　（Ｆｎｏｃ）　ＥＸ　（Ｆ
ｍｏｃ）　ＥＧＧＣ結合は未検出ＥＥＫ　（Ｆｍｏｃ）
ＧＫ（Ｆｍ３ｏｃ）ＥＥＧＧＣ３３ＥＣ（ＭＩＡＮＳ）
ＧＣ（ＭｆＡＮＳ）ＥＧＧＣ（Ａｃｍ）　　　　　　４
８第３ａ図は、これらの実験から得られた検定曲線の一
例であり、オリゴペプチド、ＤＫ　（Ｆ＋＋＋ｏｃ）　
ＧＫ　（Ｆｍｏｃ）ＤＧＧＣ−アミドの様々な濃度に関
して５０μ門　ドキソルビシンの至適な検定曲線を示す
。オリゴペプチドをドキソルビシン非存在下で添加した
ときは、吸光度の変化は認められなかった。吸光度の濃
度依存的飽和性の増大は、オリゴペプチドを薬剤に添加
した場合に認められ、これによって、２つの成分間で複
合体の形成したことが示唆された。このオリゴペプチド
担体、ＤＫ　（Ｆｍｏｃ）　ＧＫ　（Ｆ＋５ｏｃ）　Ｄ
ＧＧＣ−アミドは、ドキソルビシン（０，１Ｍリン酸緩
衝液、ｐＨ７，０中で５０ｕＭ）に対して様々な濃度で
添加したところ、４７５ｎｍにおいてドキソルビシンの
吸光スペクトルの変化が認められた。結合定数は、非線
形の最小二乗法から得られ、Ｅｎｚｆｉｔｔｅｒ（Ｅｌ
ｓｅｖｉｅｒＢｉｏｓｏｆｔ）プログラムでの単双曲線
によく一敗しており、２２μＨの明らかな解離定数が得
られた９第３図に、オリゴペプチドのＥＣ（旧ＡＮＳ）
　ＧＣ（Ｍ　ＩＡＮＳ）ＥＧＧＣ（Ａｃｍ　）を用いて
ドキソルビシンの検定結果を示す、このオリゴペプチド
は、最初、ＥＣＧＣＨＧＧＣ（Ａｃ＋＋＋）（ここで、
Ａｃｅは、アセトアミドメチルの保護基を示す）のオリ
ゴペプチドを合成することによって調製した。この合成
は、ＢａｒａｎｙおよびＭｅｒｒｉｆ　１ｅｌｄ、前記
文献、およびｌ（ｏｕｇｈｔｅｒ＋＋　Ｒ，Ａ、（１９
８５）＋　Ｐｒｏｃ。

Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　８２．５１３
１に示された固相法を用いて行った。ペプチド当たりシ
スティンのチオール基の数は、エルマン試薬での滴定に
よって１．８と測定された（Ｍｅａｎｓ＋　Ｇ、Ｅ、；
　Ｆｅｅｎｙ、　Ｒ，Ｅ。

（１９７１）＋　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｍｏｄｉｆｉｃａ
ｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ。

Ｓａｎ　Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ：、　Ｈｏ１ｄｅｎ−Ｄａ
ｙ＋　２２０頁参照）。

ペプチド濃度は、ニンヒドリンを用いて測定した（Ｓｃ
ｈｅｒａｇａ、　Ｈ，（１９８７）Ｐｕｒｅ　Ａｐｐｌ
、Ｃｈｅｍ、　５０．３１５参照）、続いて、オリゴペ
プチドは、オリゴペプチドＩｍｏｌ当たりＭＩＡＮＳ　
２　ｍｏｌでアルキル化した。

ＭＩＡＮＳ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｐｒｏｂｅｓ＋　Ｅ
ｕｇｅｎｅ＋　０ｒｅ）を、このペプチドの２つのシス
ティン残基のチオール基に誘導体化し、５６５または５
８０ｎ−にてｐＨ７，０の０．１Ｍリン酸緩衝液中で、
第１ａ図に示すように結合させた。見かけの至適の解離
定数は、４８μＨであった。

このデータによれば、１，３スペーシング（１゜２また
は１．４スペーシングに対立）中の芳香族側鎖は、ドキ
ソルビシンの結合を助けることが示唆された。このオリ
ゴペプチドにおいて負電荷側鎖を有する内部アミノ酸（
例えば、アスパルテートまたはグルタメート）は、薬剤
の結合に重要のようであり、その位置も同様と考えられ
る。このことは、ドキソルビシンのダウノサミン成分の
正電荷アミノ基と、グルタメートまたはアスパルテート
との間におけるイオン対形成に起因するようである。

【図面の簡単な説明】

第１図は、天然に存在するアンチマー、フラビンアデニ
ンジヌクレオチドに結合するドキソルビシン分子を示す
、これら分子の配置から、２分子間で起こり得るｐｉ−
ｐｉ結合またはスクッキングが分かる。この薬剤／アン
チマー複合体の潜在的水素結合も表される。さらに、薬
剤のアミノ基とアンチマーのリン酸基との間でのイオン
結合も起こり得る。複数の非共有結合性相互作用によっ
て、高親和性の複合体が生じる。アンチマーは、抗体ま
たは担体への結合に関して活性エステルまたはマレイミ
ドなどの典型的な求核基でそのＲ基を修飾できる。 第２図では、共有結合および非共有結合の抗体（ＮｒＭ
Ｌ−５）　／アンチマー（ＦＡＤ）　／薬剤（ドキソル
ビシン：　Ｄｏｘまたはアドリアマイシンの効力および
選択性を比較する。第２図でのアッセイは、抗原陽性の
黒色腫細胞（上）および抗原陰性の黒色腫細胞（下）の
両者に対するｉｎ　ｖｉＬｒｏの細胞障害測定法である
。モノクローナル抗体ＮｒＭＬ−５は、黒色腫抗原に特
異的である。棒グラフは、ＭＴＴ色素の取込みおよび代
謝による測定（実施例５）などでの生存率を示す。 第３Ａ図は、ドキソルビシン５０μＨおよびペプチドＥ
Ｃ（旧ＡＮＳ）　ＧＣ（Ｍ　ＩＡＮＳ）　ＥＧＧＣ（Ａ
ｃ＋＋＋　）の様々な濃度（ｐＨ）での至適検定曲線を
示す。 第３Ｂ図は、ペプチド濃度４８μｉでの至適解離定数に
関して、吸光波長５６５ｎ−および５８０ｎ−での結合
を示す。 図面の浄書（内容に変更なし） ＨＯＮ）（２ ＨＣ−開 ＨＣ−開 ＨＣ−加 Ｃ）１２０Ｐ０３− ＦＩＧ、１ （％） （％） ｌ　Ｎｒｌｔ−Ｏ５のみ ２　Ｄｏｘ　１０　ｎｇ／１１ ３　　’　　５０ｎ！）／＋＋１ ９　　　’　　　　　５０ｎｇ／ｍｌ’ｔｏ　　　’　
　　　　１１００ｎ／＋＋ｌ　　’ＩＩ　ＦＡｒｙＮｒ
ＭＬ−５のみ ペプチド（＋、＋Ｍ） ＦＩＧ、３Ｂ 手 続 補 正 書 （方式） ％式％ 事件の表示 平成１年特許Ｉ幀第４０１２８号 発明の名称 アンチマーおよびアンチマー複合体 補正をする者 事件との関係　　　　　特許出願人 名称　ネオルックス　コーホ１４２５フフ２日 ６、補正の対象 （１）　　願書の「出願人の代表者」の樹（２）委任状 （３）明細書 （４）図　面 ７、補正の内容 （１）（２）　　別紙の通り （３）明細書の浄書（内容に変更なし）（４）図面の浄
書（内容に変更なし） ８、添付書類の目録 （１）訂正願書 （２）委任状及び訳文 （３）浄書明細書 （４）浄書図面 １通 各１通 １通 １通

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、標的タンパク質、薬剤成分、および該薬剤成分に非
   共有結合により結合しそして該標的タンパク質に共有結
   合しているアンチマー成分を含んで成る、標的タンパク
   質／アンチマー／薬剤−複合体。 ２、前記標的タンパク質がモノクローナル抗体またはモ
   ノクローナル抗体断片である、請求項１記載の複合体。 ３、前記薬剤成分が抗新生物活性または腫瘍細胞への細
   胞毒素を有する、請求項１記載の複合体。 ４、前記アンチマー成分が、イオン結合、水素結合、ｐ
   ｉ−ｐｉ結合、疎水性相互作用、ファンデルワールス力
   、およびそれらの組み合わせから成る群より選ばれた相
   互作用を介して、薬剤成分に結合している、請求項１記
   載の複合体。 ５、前記薬剤成分が平面環構造を含んで成り、前記アン
   チマー成分が該薬剤成分の平面環構造に非共有結合する
   平面環構造を含んで成る、請求項１記載の複合体。 ６、該薬剤成分が、ドキソルビシン及び他のアントラサ
   イクリン誘導体、アクチノマイシンＤ、エリプチシン、
   並びにマイトマイシンＣから成る群より選ばれる、請求
   項１記載の複合体。 ７、前記アンチマー成分が、前記薬剤成分上の１又は複
   数の官能基に対して化学的に反対の官能基を有する、請
   求項１記載の複合体。 ８、前記アンチマー成分が、前記薬剤成分の平面環構造
   上の各電子過剰官能基に立体的に対応した電子欠乏官能
   基を有し、そして／または、前記アンチマー成分が、前
   記薬剤成分の平面環構造上の各電子欠乏官能基に立体的
   に対応した電子欠過剰能基を有する、請求項７記載の複
   合体。 ９、前記アンチマー成分が、前記薬剤成分上の陽性双極
   子に立体的に対応した水素結合の陰性双極子を有する、
   および／または、前記薬剤域上の陽性双極子に立体的に
   対応した水素結合の陰性双極子を有する、請求項７記載
   の複合体。 １０、前記アンチマー成分が、少なくとも１つの疎水性
   相互作用および／またはｐｉ−ｐｉ相互作用によって前
   記薬剤成分に非共有結合する、請求項７記載の複合体。 １１、前記薬剤成分がドキソルビシンであって、前記ア
   ンチマー成分がフラビンアデニンジヌクレオチドまたは
   その誘導体である、請求項１記載の複合体。 １２、前記アデニンがリアクチブ・ブルー４である、請
   求項１記載の複合体。 １３、標的タンパク質、該標的タンパク質に直接もしく
   はリンカーを介して結合した薬剤成分、および該薬剤成
   分に非共有結合により結合したアンチマー成分であって
   、それによって該薬剤成分上の官能基が保護され、該薬
   剤成分と非標的細胞間の非特異的相互作用を低下させる
   アンチマー成分を含んで成る、標的タンパク質／薬剤／
   アンチマー−複合体。 １４、前記アンチマー成分および薬剤成分が、平面融合
   環構造を有し、さらに前記複合体が、アンチマー成分と
   薬剤成分間で複数の非共有結合性相互作用を含んで成り
   、該平面融合環のアンチマー成分が、該平面融合環上の
   １つ以上の官能基に対して反対の官能基を有する、請求
   項１３記載の複合体。 １５、標的タンパク質、該標的タンパク質上の糖または
   アミノ酸残基に結合した担体、該担体に結合した薬剤成
   分、および、該薬剤成分に非共有結合により結合したア
   ンチマー成分であって、それによって該薬剤成分上の官
   能基が保護され、該薬剤成分と非標的細胞間の非特異的
   相互作用を低下させるアンチマー成分を含んで成る、標
   的タンパク質／担体／薬剤／アンチマー−複合体。 １６、アンチマーを複数の非共有結合によって薬剤に結
   合させる方法であって、該薬剤と該アンチマーを脱水剤
   とともに混合することを特徴とする結合法。 １７、前記脱水剤が、グリセロール、プロピレングリコ
   ール、エチレングリコール、硫酸ナトリウムおよび硫酸
   アンモニウムから成る群から選ばれる、請求項１６記載
   の結合法。 １８、複数の非共有結合性の相互作用によってアンチマ
   ーに非共有結合により結合した薬剤分子を含んで成る、
   活性な薬剤成分の生物学的利用性および毒素を調節する
   めのアンチマー／薬剤複合体。 １９、前記薬剤分子の血清中半減期が少なくとも２０％
   増加する、請求項１８記載の複合体。 ２０、チミン誘導体から本質上成る５−フルオロウラシ
   ルに非共有結合により結合するアンチマー。 ２１、前記チミン誘導体が、スキーム１に示される化合
   物５、６および７から成る群より選ばれる、請求項２０
   記載のアンチマー。 ２２、フラビンアデニンジヌクレオチドの修飾型から本
   質上成るドキソルビシンに非共有結合により結合する請
   求項２２記載のアンチマー。 ２３、前記の修飾型フラビンアデニンジヌクレオチドが
   、フラビンＮ＾６（メチル−Ｔ−カルボキシ−プロピル
   ）アミノメチレンアデノシルジヌクレオチドの遊離酸ま
   たは活性エステルである、請求項２２記載のアンチマー
   。 ２４、α−１−ピペリジニル−α−Ｎ−ｐ−（２，４，
   ８−トリオキソピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−６−
   イル）アセトフェニルアミドグルタル酸の遊離酸または
   スクシンイミデートエステルから本質上成るメソトレキ
   セートに非共有結合するアンチマー。 ２５、６″−カルボキシ−２′−テトラヒドロピロン−
   ２″−イル−５−ニトロイソシチジンから本質上成るシ
   トシンアラビノシドに非共有結合により結合するアンチ
   マー。 ２６、４−アミノ−６−ヒドロキシメチル−２，５−ジ
   オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７−（α−メ
   チルチオ）酢酸エチルエステル−Ｎ＾６−酢酸ｐ−（メ
   チルチオ）フェニルエステルのスルホンまたはスルホキ
   シド誘導体から本質上成るマイトマイシンＣに非共有結
   合により結合するアンチマー。 ２７、酸化型フラビンアデニンジヌクレオチド、非酸化
   型フラビンアデニンジヌクレオチドおよびプロパノール
   から成る群より選ばれる、薬剤のドキソルビシンのため
   のアンチマー。 ２８、少なくとも２つの芳香族側鎖を含むオリゴペプチ
   ドに非共有結合により結合した芳香族薬剤を含んで成る
   複合体。 ２９、少なくとも２つの芳香族側鎖を含むオリゴペプチ
   ドに非共有結合により結合した芳香族薬剤、および該オ
   リゴペプチドに結合した標的タンパク質を含んで成る複
   合体。 ３０、前記オリゴペプチドが、芳香族側鎖を有する少な
   くとも２つの天然に存在するアミノ酸を含んで成る、請
   求項２９記載の複合体。 ３１、天然に存在するアミノ酸の一員ではない芳香族化
   合物が、前記の芳香族側鎖としてオリゴペプチドの結合
   した、請求項２９記載の複合体。 ３２、前記薬剤が２つの前記芳香族側鎖間への挿入によ
   って結合した、請求項２９記載の複合体。 ３３、前記オリゴペプチドが、アスパラギン酸およびグ
   ルタミン酸のうちの少なくとも１つのアミノ酸をさらに
   含む、請求項２９記載の複合体。 ３４、１つの非芳香族アミノ酸が、前記オリゴペプチド
   中の芳香族側鎖を有する２つのアミノ酸の間に介在する
   、請求項２９記載の複合体。 ３５、前記薬剤がドキソルビシンである、請求項２９記
   載の複合体。 ３６、前記芳香族薬剤が抗癌剤であって、前記標的タン
   パク質が癌細胞に結合するモノクローナル抗体である、
   請求項２９記載の複合体。 ３７、前記芳香族薬剤および各芳香族側鎖が複数の芳香
   環を含んで成る、請求項２９記載の複合体。