JPH02145599A - 生物学的に活性なリポタンパク質およびその使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

〔産業上の利用分野〕 本発明は肺界面活性作用を有するリポタンパク質、すな
わちヒトを含む咽乳動物において正常な呼吸をもたらす
肺界面活性組成物の成分として有用なリポタンパク質に
関する。また、本発明はヒトを含む哺乳動物における呼
吸を促進する方法に関する。 〔従来の技術〕 リン、遣質−タンパク質複合体から成る肺界面活性物質
１、肺胞の空気−液体界面での表面張力を低下さＣるこ
とにより、正常な呼吸にとって不可欠である（す。界面
活性物、１ｗ（特異的なタンパクズタンパク質は水溶性
であり、イヌおよびヒト肺に由来するこの唾のタンパク
質の一次構造が決定されている〔４−６）。カルシタム
イオンの存在下で、明らかにこのタンパク質は分泌され
たラメラ体からの界面活性管状ミニリンの形成に関係し
ており（７）、そして界面活性リン脂質の吸着速度をは
るが、代償療法のために考案された外因性界面活−二性
製剤の生理活性には必要でないように思われるＣ９−１
１）。 ２番目のグループの界面活性物質特異的タンパク質は低
分子ｆｉ　（り１４ｒ■ａ）のタンパク質から成るＣ２
．９１１２−２０）。これらのタンパク質は非常に疎水
性であり、エーテル／エタノールに可溶（９）または不
溶ｒ２，１６．１７）である種々のタンノくり質から成
で１゜ 両方゛）タンパク質とも可溶化および精製に有機溶剤を
必要とし、Ｎ末端領域におけるカ改の開始位置により種
々の末端切断形態が存在する。これらのタンパク質のい
ずれかを合成リン脂質と組み合わせると、多くの点で天
然肺界面活性物質と類似した物理的および生物学的性質
を有する界面活性製剤が得られる。 ２種類の低分子量タンパク質は構造および大きさの点で
関係がなく、小さい力のタンパク質は大きい力のタンパ
ク質の断片ではない。最近になって、大きい力のタンパ
ク質のｃ　ＤＮＡセグメント（（２１）がイヌから解明
された。本発明は哺乳動物由来の親油性の低分子量アポ
タンパク質に関する。 〔発明の構成〕 多方面にわたる科学的研究および実験に基づいて、しか
し以前の科学的理論とは相違して、今や意外にも肺界面
活性作用かリポタンパク質Ｃ肺胞のポリペプチドまたは
タンパク質がそれに共有結合された１個または２個の脂
肪酸残基をもつもの）に関係のあることが見出された。 リポタンパク質が肺界面活性作用を有する組成物の活性
成分であると判明した事実は予期せぬ新しい発見であり
、これまでに発表された科学的理論はすべて関連した肺
胞タンパク質がリン脂質型の物質との組み合わせで存在
するという確信に向けられたものであった。それ故に、
今までだれもこのタンパク質が脂肪酸のような疎水性物
質と共有結合により会合したものであるとは予想しなか
った。 従って、これらの驚くべき発見に基づいて、本発明は肺
胞ポリペプチドまたはタンパク質と、それに共有結合に
より会合した１個または２個の脂肪酸残基と、かう成る
新規なリポタンパク質を提供する。 関係する脂肪酸は炭素原子数１４〜２２の慣例的な脂肪
酸、例えば１６個または１８個の炭素原子を有するもの
、から選ばれ、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン
酸、リノール酸およびリルン酸から選ぶことができる。 パルミチン酸残基とステアリン酸残基が好適であり、特
にパルミチン酸残基が好適である。本発明のリポタンパ
ク質は好ましくはポリペプチド分子当たり２個のパルミ
チン酸残基を含んでいる。 新しいリポタンパク質のポリペプチド構成部分は次の最
小アミノ酸配列： １１ｅ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−Ｃ）’５−Ｐｒｏ−Ｖａｌか
ら成る。このアミノ酸配列は異なる哺乳動物種に由来す
る全ての既知ポリペプチドに共通する領域（コンセンサ
ス領域）を構成している。 好適なポリペプチドは次のアミノ酸配列：Ｐｈｅ−Ｘ−
１１ａ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−−
Ｈ１ｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ 〔ここでＸはＧｌｙまたはＡｒｇである）から成る、こ
の配列において、ＸはＧ１７およびＡｒｇから選ばれ、
Ｇｌｙが好適なアミノ酸残基である。 本発明にょろリポタンパク質のポリペプチド部分はヒト
、ブタまたはウシ由来のものであるのが好ましい。この
種のポリペプチドの特性決定に関しては、Ｆｅｂ　：　
５Ｌｅｔｔ、　ｒ１９８８）、Ｖｏｌ、２３２．Ｎｃｌ
　、　６１−６４を参照されたい。この報文の技術内容
はすべて参照によりここに引用するものとする。 より祥細には、ポリペプチドは次のアミノ酸配列： Ｐｈｅ　−Ｘ−ｌｌ５−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｐｒ
ｏ　−Ｖａｌ　−−Ｈ１ｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−
Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−１１ｅ　−Ｖａｔ　−加 −Ｖａｌ　−Ｖａｌ　−Ｖａｌ　−Ｖａｌ　−Ｖａｌ　
−Ｌｅｕ　−１１ｅ　−Ｖａｌ　−−Ｖａｌ　−ｖａｌ
　−１１ｅ　−Ｖａｌ　−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｌ
ｅｕ−あ −Ｍｅｔ−Ｇ１７−Ｌｅｕ から成り、この配列においてもＸはＧｌｙまたはＡｒｇ
であり、好ましくは前者である。 本発明のリポタンパク質には上記ポリペプチドのＮ末端
切断形態が含まれる。このような末端切断は好ましくは
１個または２個のアミノ酸残基を含む。 上記ポリペプチドの脂肪酸残基の結合位置に関して、そ
れらはポリペプチド分子の５位と６位にあるシスティン
残基の一ヵまたは両方に共有結合され、この結合はチオ
エステルを形成するようなものである。 本発明はまた、上記のタンパク質またはタンパク質組成
物とリン脂質型の物質との組み合わせから成る薬剤組成
物を包含する。このような薬剤組成物においてタンパク
質は少量成分であり、組成物に含まれるタンパク質の好
適な重量範囲は組成物の約０．５〜１０″＠看チである
。タンパク質は全体として組成物の約１〜５重量％を占
めるのが特に好適である。リン脂質型の物質の倒として
は、パルミチン酸に基づいたリン脂質を挙げることがで
きる。この種のリン脂質マトリックスのほかに、本発明
組成物は他の添加剤、例えば製剤学的に許容しうる担体
または希釈剤、安定剤、およびその他の通常用いられる
製剤学的に許容しうる添加剤をも含有しうる。 本発明にょろリポタンパク質は肺界面活性作用に有意に
寄与することが分かった。従って、本発明のリポタンパ
ク質および組成物は、肺界面活性物質の成分として特に
有用である。さらに、本発明は呼吸障害の治療を必要と
する患者の気道に、有効量の本発明リポタンパク質また
は組成物を投与することから成る、ヒトを含む哺乳動物
における呼吸の促進方法を包含する。この投与により、
患者の肺胞の空気−液体界面での表面張力を有意に低下
させることができる。投与は気管または気管支に直接性
われるが、普通のタイプのエーロゾル噴霧剤を用いて口
腔を通して行うこともできる。 以下の非限定的実施例により、本発明をさらに詳しく説
明することにする。この例示は添付図面を参照しながら
行われる。 本発明にょろリポタンパク質は高度に疎水性であって、
可溶化および精製に有機溶剤を必要とする。 〔実施例〕 例１ ｆａｒ　Ｉａｖａｇｅ　：　ＢＡＬ　）は局所麻酔下に
柔軟性の気管支鏡を用いて行った。気管支鏡を中葉気管
支に押し込み、３７℃の滅菌生理食塩液を５０ｍのアリ
コートに分けて注入した。注入した合計容素は２００〜
３００ｍ１の間で変化した。それぞれの注入後に流動液
を吸引し、氷上に保持したシリコーン処理済みのびんの
中に集めた。洗浄完了後すぐにこのびんを実験室へ移し
た。 回収したＢＡＬ流動液はダクロン（Ｄｉ＆ｃｌ枕昨）ネ
ットの２重層を通して濾過し、容量を測定した。 それを４℃、４００．！ｉ＋で５分間遠心し、上清を分
析に使用するまで一加℃で貯蔵した。 羊水 帝王切開および症分娩により月満ちた娘娠から得られた
ヒト羊水はネットを通して濾過し、その容量を測定し、
分析に使用するまで一２０℃で貯蔵した。 ヒトにおける気管支肺胞洗浄（Ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅ
ｏ−分離 羊水またはＢＡＩ、流動液３００Ｍにメタノール４００
−を加え、この溶液を振とりおよび超音波処理により混
合した。クロロホルム８００ｍ／を加え、この混合物を
振とうした。Ｆ逼陵、下相を蒸発乾固させ、そして疎水
性タンパク質をも含むリン脂質画分をリビデツクス（Ｌ
ｉｐｉｄｅｘ　）　−５０００による逆相クロマトグラ
フィにかけ、塩化エチレン／メタノール１：４（ｖ／ｖ
）混合酵媒系で溶出することにより単離した。 例２ 界面活性リポタンパク質の分析 アミノ酸組成の決定のために、タンパク質はジチオエリ
トリトール（約３０　ｎｍｏｌ　／　ｎｍｏｌペプチド
；３７℃；２時間）で還元し、８Ｍ尿素、０．４　Ｍ　
）リス／　ＨＣＸ　１　、２　ｍＭ　ＥＤＴＡ中の中和
ヨード（１４Ｃ）酢酸（１２０ｎｍｏｌ　／　ｎｍｏＩ
ペプチド：３７℃：２時間）の添加によりカルボキシメ
チル化した。過剰の試薬類はセファデックス（５ｅＰｈ
ａｄｅｘ　）　ＬＨ−６０（４０Ｘｌ、１ｃＷＩ）によ
る排除クロマトグラフィーにかけ、５−〇。ＩＭＨ（Ｊ
を含むクロロホルム／メタノール１　：　１　（ｖ／ｖ
）の混合溶媒で溶出して除いた。アミノ酸組成の分析の
ために、サンプルは排気した管の中で０．５％フェノー
ルを含む６　Ｍ　ＨＣｌにより、１１０℃で冴時間、さ
らにそれぞれ１５０’Ｃで７２時間および１２０時間加
水分解した。ヒト界面活性リポタンパク質の全アミノ酸
組成を表１に示す。遊離したアミノ酸はベックマン（Ｂ
ｅｃｋｍａｎ　）　１２０　Ｍ装置を使って分析した。 見掛は分子層はＳＤＳ　／ポリアクリルアミドゲル電気
泳動〔８Ｍ尿素を含む１０％ゲルを使用）により決定し
たー。分子層マーカーはＢＤＨＣｈｅｍｉｃａｌａＬｔ
ｄ　（英国）から購入し、臭化シアンで切断したウマ心
臓ミオグロブリンから成っていた。リンはＢａｒｔｌｅ
ｔｔ＠に従って分析した。 配列分析用の調製物はクロロホルム／メタノール１：２
の混合溶媒中に加えた。 構造分析 リポタンパク質両分は窒素下に３７℃で２時間ジチオト
レイトール（３０ｎｍｏｌ　／　ｎｍｏｌポリペプチド
）により処理して還元した。その後、還元サンプルは中
和ヨードｒ１４（＋）酢酸（１２０ｎｍｏｌ　／　ｎｍ
ｏｌポジペプチド１３フ６０８２時間）で処理して１４
Ｃ−カルボキシメチル化し、そしてセファデックスＬＴ
（−６０での排除クロマトグラフィーにより精製した。 １４Ｃ−カルボキシメチル化タンパク質の配列分析用サ
ンプルはクロロホルム／メタノールに可溶化した後取り
出した。ペプシン切断用サンプルは１００％ギ酸に溶か
し、５チギ酸へ希釈し、その後酵素Ｃ酵素対基質比１　
：３０：３７℃：２時間）で処理した。ペプシンで切断
したペプチドはウシトロパック（ＵｌｔｒｏＰａｃ　）
　Ｃ−１８カラムでの高性能液体クロマトグラフィーに
かけ、線状勾配のアセトニトリルを含む０．Ｉ　Ｓ　）
リフルオロ酢酸で溶出して分離した。ＣＮＢ　ｒ処理用
サンプルは１００　＊ギ酸に溶かし、７０チへ希釈し、
その後ＣＮＢｒ　（０，１！！　／−）を用いて室温で
Ｕ時間処理した。ＣＮＢ　ｒ断片は５１％０．ＩＭＨＣ
Ｊを含むクロロホルム／メタノール１：１（マ／Ｖ）　
　の混合溶媒を用いてセファデックスＬＨ−６０により
分離した（２４）。 気相シークエンサー分析はアプライド・バイオシステム
ズ（Ａｐｐｌｌｅｄ　Ｂｉｏｓ）’ｓｔｅｍｓ　）　４
７０　Ａ　ａ　ｍでの分解、およびヒユーレット・パラ
カード（Ｈｅｗｌｅｔｔ　Ｐａｃｋａｒｄ　）　１０９
０装置を使用する逆相高性能液体クロマトグラフィーで
のフェニルチオヒダントイン検出により行った（２５）
。ベックマン８９０Ｃ装置による久相シークエンサー分
析用のサンプルはグリシン予備循環ポリブレン（Ｐｏ１
７ｂｒｅｎｅ　）に加え（２６）、そして同じ高性能液
体クロマトグラフィー装置により分析した。全組成物は
減圧下に１００℃でＵ時間６　ＭＨＣＩ　／　０．５　
％　フエ）−ルニより加水分解して得られた。ヒドラジ
ン分解は排気した管の中で無水ヒドラジンを用いて１０
０℃で６時間実施した

【２７）。アミノ酸はニンヒドリ
ンに基づいたペックマン１２１Ｍアミノ酸アナライザー
、またはフェニルチオカルバミルに基づいた高性能液体
クロマトグラフィー装置を用いて定量化したＣ２８）。 界面活性タンパク質のＮ末端切断を表２に示す。 界面活性リポタンパク質の分子量は１８０００ボルトの
加速電圧を用いて“飛行時間（ｔｉｍｅ　ｏｆｆｌｉｇ
ｈｔ）”質量分光分析器（スエーデン国りプサラ、Ｂｉ
ｏｉｏｎ　）により測定した。ウシインシュリンを内部
標準として使用した。 リポタンパク質はジチオエリトリトール（約Ｉｍｏｌ　
／　ｍｏｌペプチド；３７℃；２時間）で還元し、質量
分析器により分析した。非還元および還元物質は３５個
のアミノ酸の重量から予測されるものより約４８０質量
単位大きい、類似した分子量を示した〔第１図参照）。 天然の界面活性リポタンパク質は、プロテオリビドを形
成すべく、ペプチド配列に共有結合で連結された脂肪酸
から成るという仮説を証明する目的で、非還元リポタン
パク質をクロロホルム／メタノール１　：　２　（ｖ／
ｖ）の混合溶媒に溶かし、２Ｍトリメチルアミン水溶液
を加えて最終濃度を２００　ｍＭ　とした。 この混合物を３７’Ｃで４時間イン中ユベートした。 脂肪酸を遊離させ、セファデックスＬＴ（−６０による
排除クロマトグラフィーにかけ、５％０．ＩＭ’ＨＣｌ
ヲ含ムクロロホルム／メタノールｘ：１ｒマ／ｖ）の混
合溶媒で溶出して脂肪酸をポリペプチドから分離した。 脂肪酸（主にパルミチン酸）が回収された。 得られたペプチド画分を“飛行時間“質量分光分析器で
分析するとＣ第２図参照）、その分子量はトリメチルア
ミン処理の際に約４７８質量単位だけ減少することが明
らかになった。 この分子量の減少は、恐ら＜　Ｃｙｓ　５およびＣｙｓ
６のスルフヒドリル基にエステル化されていた、２個の
パルミチン酸残基の欠損に一致する。 界面活性ペプチドから２個のパルミチン酸残基を遊離さ
せたトリメチルアミン処理が遊離チオール基を生成させ
たことを確かめる目的で、次の実験を行った： 天然界面活性リポタンパク質の別々のサンプルをトリメ
チルアミンで処理し、その後遊離チオール基をジチオエ
リトリトールで処理して再酸化を防ぎ、続いてヨード酢
酸で処理してカルボキシメチル化した◇ 質量分光分析（第３図参照）はトリメチルアミン処理し
たペプチド画分と比べて約１２０質量単位の増加を示す
。１２０の分子量の増加はＣ）’ｓ　５とＣｙｓ　６の
チオール基のカルボ中ジメチル化とよく一致する。 ２個のエステル化されたパルミチン酸残基の存在をさら
に証明するために、天黙リポタンパク質はメタノール／
水９８　：　２　（ｖ／　ｖ　）の混合溶媒中０．０１
　Ｍ　ＫＯ）（により＋３７℃で（９）分間処理した。 ペプチドを非極性相から回収した（２９）。 このペプチドの°飛行時間″′Ｒ′Ｍ、分光分析による
測定（第４図参照）はこの場合も天然界面活性ペプチド
と比較して約４８０質量単位の分子量の減少を示し、ア
ルカリ加水分解後の２個の共有結合パルミチン酸残基の
欠損を立証した。 第１図では、２つの比較的小さいピークをはっきりと識
別することができる。主ピークに対して−２４０の位置
にあるものは、恐らく２（ｖＡのシスティン残基のうち
の１個のみがパルミチン酸により゛エステル化された、
小割合のペプチドを表すであろう。 これらのデータを総合すると、少なくとも１個優先的に
は２個のパルミチン酸残基がＣｙｓ　５およびＣｙｓ　
６のチオール基へのエステル化によりペプチドへ共有結
合されていることが明らかである。 例３ 単離したリポタンパク質画分と合成リン脂質との組み合
わせ １．２−ジパルミトイル−８ｎ−グリセロ−３−ホスホ
コリン（ＤＰＰＣ）、ｌ−バルミトイル−２−オレオイ
ル−８ｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）お
よび１．２−ジパルミトイル−８ｎ−グリセロ−３−ホ
スホグリセロール（ＤＰＰＧ　）　＋２Ｓｉｇｍａ　Ｃ
ｈｅｍｉｃａ１社〔ミズーリ州セントルイス）から購入
し、これ以上精製せずに使用した。これらのリン脂質は
クロロホルム／メタノール２：１（ｖ／ｖ）　　の混合
溶媒に溶解し、ＤＰＰＣ：　ＰＯＰＣ：　ＤＰＰＧ：５
５　：　３５　：　１０　（Ｗ／Ｗ／Ｗ　）の比率で混
合し、界面活性ｐ１Ｍ物１リン脂質″として用いた。 この混合物に、クロロホルム／メタノール１：２（Ｖ／
Ｖ）　　に溶かした界面活性リポタンノくり質を加え、
リポタンパク質対リン脂質の比を１：５０とした。溶媒
を蒸発乾固させ、それぞれの界面活性調製物（リン脂質
、リン脂質＋リポタンパク質両分）を食塩水に懸濁して
１０またはａｏｍ９／ｍのリン脂質濃度を得た。 ■１ １ｎ　ｖｉｔｒｏ表面特性の決定 リポタンパク質をベースとした人工界面活性物質の表面
特性は脈動バブル装置「カナタ国トロン）　ｚ　Ｓｕｒ
ｆａｃｔｏｍｅｔｅｒ　Ｉｎｔａｒｎａｔｉｏｎｌ　）
を用いて分析した（３ｏ）。界面活性ｐＪ！！！！物は
１０　ｑ　／　／＃ｊのリン脂質濃度で懸濁し、バブル
壁を横切る圧力勾配を４０／分の速度での５０％周期的
表面圧縮において３７℃で記録した。表面張力は５回目
のサイクルと、１分および５分の脈動後において最大お
よび最小バブル寸法で評価した。 これらの実験結果を第５図に示す。ここに示されるトレ
ースはバブル壁を横切る圧力勾配を表し、ｍａｘおよび
ｍ１ｎＩは４０／分の速度での脈動における最大Ｃ半径
０．５５ｍ）および最小〔半径０，４０　ｗａｓ　）バ
ブル寸法を示す。最小バブル寸法でゼロに近い圧力勾配
はほぼゼロの表面張力に相邑する。 例５ 天然またはトリメチルアミン処理済みのリポタンパク質
を、タンパク質不含リン脂質（セファデックスＬＨ−６
０でのクロマトグラフィーにより肺界面活性物質から得
られたもの）と混合した。０〜４チのリポタンパク質ま
たは上記処理により得られたタンパク質両分を含むこれ
らの人工界面活性調製物は１０　ｒｎ９　／　ｔｕｔの
リン脂質濃度で食塩水に懸濁し、脈動バブル装置を使っ
て分析した。バブル壁を横切る圧力勾配は、４ｏ／分の
速度での５Ｃ１％周期的表面圧縮において３７℃で記録
した。最大および最小バブル寸法での表面張力は５回目
、４００回目よび２００回目の脈動サイクルにおいて測
定した。 その後、表面吸着速度は最大バブル寸法で脈動を停止さ
せ、静止表面張力が３Ｌ）　ｍＮ／ｍのレベルに降下す
るまでの時間間隔を記録することにより測定した。 ２％の天然リポタンパク質を含む界面活性調表物は速や
かな散層（（２秒）およびＯｍＮ／ｍに近い最小表面張
力を有していた。トリメチルアミン処理したリポタンパ
ク質を含む対応混合物は遅い吸着（＞　１２０秒）およ
び高い最小表面張力Ｃ約加ｍＮ／ｍ　）を有していた。 従ってに５ポリペプチドに共有結合されたアシル残基は
界面活性物質の生理活性にとって不可欠である。 形 合成ペプチドの製造 次のペプチド： ＨｘＮ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−１１ｅ＝Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−Ｃ
ｙｓ−Ｐｒｏ−Ｖａ１−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｒ
ｇ−ＣＯＯＨ＃ＨＩＮ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−１１ｅ−Ｐｒ
ｏ−Ｃ７ｓ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｈ１ｓ→−ｙ−
Ｌｅｕ　−Ｌｙｓ　−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ　−１１
ｅ　−−Ｖ＆、ｌ　−Ｖａ　ｌ　−Ｃ０ＯＨ、およびド
合成機を用いて段階的固相法により合成した。 支持体としてフェニルアセトアミドメチルＣＰＡＭ　）
樹脂を使用し、次のｔ−ブチルオキシカルボニル（ｔ−
Ｂｏａ　）アミノ酸誘導体を用いた：Ｌ−Ａｒｇ−）シ
ル、Ｌ−Ｃｙｓ−４−メチル−ヘンシル、Ｌ−Ｌ７ｓ−
ＣＩ−ベンジルオキシカルボニル、−り−Ａｓ　ｎ　＃
　Ｌ−Ｐｒｏ　ｅ　Ｌ−Ａｌａ　ｅ　Ｌ−Ｖａｌ　ｅ　
Ｌ−Ｍｅｔ　＠　Ｌ−１１６＃Ｌ−Ｌｅｕ　　およびＧ
ｌｙ　ｏこの合成のために、対称酸無水物の予備形成を
含む標準プログラムを使用した。生成したペプチドはフ
ッ化水素ｒＨＦ）法により樹脂から切り離し、脱保護し
た。その後逆相高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬ
Ｃ）で精製した。最終産物の同一性および純度はアミノ
酸加水分解により評価したＣ３１）。 Ｋｅｎｔ　ｙＳ、Ｂ、Ｈ，（１９８０）Ａｎｎ　、Ｒｅ
ｖ　、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　５７　ｍ９５７−９８９　
。 例７ Ｈ霊Ｎ−１１ｅ　−Ｐｒｏ　−Ｃｙｓ　−Ｃｙｓ、−Ｐ
ｒｏ″″Ｖａｌ″″Ｃ０ＯＨ再蒸留した塩化ツクルミト
イＡＩ　（Ｆｌｕｋａ　）とヘキはアプライド°°バイ
オ″チー″、（４３０Ａ型ゝブチ　　サベプチト”　Ｈ
ｘＮ−１１ｅ　−Ｐｒｏ　−Ｃｙｓ　−Ｃｙｓ　−Ｐｒ
。−Ｖａ　１−　Ｃ０ＯＨとの結合は次のように行った
ニーへ牟す？ペプチド３■Ｃ４，８μｍｏｌ　　）をク
ロロホルム／メタノール１　：　２　（ｖ／　ｖ　）の
混合溶媒５００μノに溶解した。 −この溶液に０．５　Ｍ　ＤＴＥ　２５　ｆｉｌ（１２
，５ｌＩｍｏｌ　）を加えた。この混合物にＮ！　を流
し、３７℃で１６０分間インキュベートした。 −３，３Ｍ塩化バルミトイル加μ１（６６μｍｏｌ）を
加え、この混合物にＮ！　を流して３７℃で２５０分間
インキュベートした。 アシル化ペプチドはＴＬＣで分離し、その分子量を確認
した。 例４に記載の方法に従って試験した場合、このリボペプ
チドは天然リポタンパク質と同様の挙動を示した。 例８ 測定 ５ｐ−ｃポリペプチドはアプライド・パイオシステムダ
４３０Ａ型ペプチド合成機を用いて段階的固相法により
合成した。支持体としてフェニルアセトアミドメチル樹
脂を使用し、ポリペプチドはフッ化水素法により樹脂か
ら切り離し且つ脱保護した。ポリペプチドは５％０．Ｉ
ＭＨＣ４を含むまたは含まないクロロホルム／メタノー
ル１　：　１　（ｖ／ｖ）の混合溶媒で樹脂から抽出し
、約３０％のサンプルを得た。この物質を少量の濃ギ酸
に溶かし、クロロホルム／メタノール１　：　１　ｒｖ
／ｖ）　　で希釈し、セファデックスＬ）Ｉ−６０クロ
マトグラフィーにかけ、５％ギ酸を含むクロロホルム／
メタノール１　：　１　（ｖ／ｖ）　　で溶出して精製
した。最終産物の同一性および純度はアミノ酸加水分解
、シークエンサー分解および“飛行時間″質量分析によ
り評価した。 いろいろな量の精製した合成ポリペプチド５ｐ−ｃは例
３で用いた合成リン脂質混合物と組み合わせた。リン脂
質はクロロホルム／メタノール２　：　１　ｒｖ／ｖ）
　　の混合溶媒に溶かし、ＤＰＰＣ：　ＰＯＰＣ：　Ｄ
ＰＰＧ　５５　：　３５　：　１０　（ｗ／　ｗ／　ｗ
　）の比率で混合し、そして界面活性調製物“リン脂質
”として使用した。 ギ酸に溶解した合成５ｐ−ｃポリペプチドの異なる量は
別々の管に加え、その後酸を蒸発乾固させた。リン脂質
の添加後、有機溶媒を蒸発乾固させた。それぞれの界面
活性調製物は１０１ｎ９／＃Ｌ／のリン脂質濃度で食塩
水に懸濁した。０〜加％の合成５ｐ−ｃポリペプチドを
含むこれらの人工界面活性調製物は脈動バブル装置を用
いて試験した。バブル壁を横切る圧力勾配は４０／分の
速度での５０％周期的表面圧縮において３７℃で記録し
た。最大および最小バブル寸法での表面張力は５回目、
４００回目よび２００回目の脈動サイクルにおいて測定
した。 その後、表面吸着速度は最大バブル寸法で脈動を止め、
静止表面張力が３０　ｍＮ／ｍのレベルに降下するまで
の間隔を記録することにより測定した。これらの調製物
はすべて非常に遅い吸着（）　１２０秒）および高い最
小（）　２０ｍＮ／ｍ　　）および最大（〉祠ｍＮ／ｍ
　）表面張力を有していたｃ表３参照）。これらの結果
は、５Ｐ−ＣポリペプチドＣバルミトイル残基を含まな
い）が表面活性に対して何ら影響を及はさなかったこと
を示している。遅い吸着および高い表面張力の値は新生
児を治療する際のこれらの調製物の使用を妨げるであろ
う。 例９ 天然およびトリメチルアミン処理５ｐ−ｃの分子量は１
＠行時間＃質量分析により測定した。質量スペクトルは
天然５Ｐ−Ｃが主として２個のバルミトイル残基を含み
、１個のバルミトイル残基をもつ分子が少量含まれるこ
とを示した。トリメチルアミン処理５ｐ−ｃはセファデ
ックスＬＨ−６０クロマトグラフィーにかけ、５％０．
ＩＭＨＣＪを含むクロロホルム／メタノ−／ｌ／１　：
　１　（ｖ／ｖ）の混合溶媒で溶出して精製し、“飛行
時間１質量分析により測定した。このトリメチルアミン
処理５ｐ−ｃは完全に脱アシル化されていた。異なる量
の天然または脱アシル化５ｐ−ｃを例３で用いた合成リ
ン脂質混合物と組み合わせた。リン脂質はクロロホルム
／メタノール２　：　１　（ｖ／ｖ）に溶解し、ＤＰＰ
Ｃ：ＰＯＰＣ：　ＤＰＰＧ　５５　：　３５　：　１０
　（ｗ／　ｗ／　ｗ　）　の比率で混合し、そして界面
活性調製物”リン脂質１として使用した。 これらのリン脂質混合物に、クロロホルム／メタノール
１　：　２　ｒｖ／ｖ）に溶解した天然または脱アシル
化５ｐ−ｃをいろいろな量で加えた。有機溶媒を蒸発乾
固させ、それぞれの界面活性調製物は１０■／ｒｒＬｔ
のリン脂質濃度で食塩水に懸濁した。０〜４チの天然ま
たは脱アシル化５Ｐ−Ｃを含むこれらの人工界面活性調
製物は脈動バブル装置を用いて試験した。バブル壁を横
切る圧力勾配は、４０／分の速度での５０９６周期的表
面圧縮におＡて３７℃で記録した。最大および最小バブ
ル寸法での表面張力は５回目、４００回目および２００
回目の脈動サイクルにおいて測定した。その後、最大バ
ブル寸法で脈動を止め、静止表面張力が３０ｍＮ／ｍ　
のレベルに降下するまでの時間間隔を記録することによ
り表面吸着速度を測定した。これらの結果は、天然５ｐ
−ｃ含有調與物力ｊ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ表面活性を増強
したことを示している。こうして、ｖ！４裂物中の２優
の濃度の天然５ｐ−ｃはやや速やかな吸着（１６秒）、
ＯｍＮ／ｍに近い最小表面張力および約３０ｍＮ／ｍの
最大表面張力を与えたＣ表４色照）。これらの結果は、
新生児の治療に上首尾で用いられる天然ブタ界面活性製
剤のｌｎ　ｖｉｔｒｏ表面活性Ｃ吸着く１秒、２００回
目のサイクルにおける最小および最大表面張力それぞれ
＜　３　ｍＮ／ｍおよび３０　ｍＮ／ｍ　）と類似して
いる。吸着時間は天然界面活性物質中のより複雑な不飽
和リン脂質混合物のために、天然界面活性物質から得ら
れた吸着時間よりもやや長い。 リン脂質混合物への脱アシル化５ｐ−ｃの添加は表面特
性を改善しなかった。これらの調製物はすべて非常に遅
い吸着（＞　１２０秒）と高い最小（〉１８ｍＮ／ｍ　
）および最大（’２５０　ｍＮ／ｍ　）表面張力を有し
ていたＣ表５参照）。これらの結果は、脱アシル化５ｐ
−ｃを含む界面活性調製物が新生児の治療に効果的でな
いことを示している。 文、献 Ｇｏａｒｋｅ　＃　Ｊ　、　（１９７４）Ｂｉｏｃｈｉ
ｍ、　ＢｉｏＰｈｙｓ　、　Ａｃｔａ３７４＃　２４１
−２６１　。 ＫｉｎｇｓＲ，Ｊ、ｅＫｌａｓｓｅＤ、Ｊ、５Ｇｉｋａ
ａ＊Ｅ、Ｇ、ａｎｄＣｌｅｍｅｎｔｓｅＪ、Ａ、（１９
７３）Ａｍ、Ｊ、Ｐｈｙｓｉｏｌ、２２４゜７８８−７
９５　。 ｖａｎ　ＧｏｌｄｅｓＬ、Ｍ、Ｇ、＊Ｂａｔｅｎｂｕｒ
ｇｓＪ、Ｊ、ａｎｄＲｏｂｅｒｔｓｏｎｅＢ、（１９８
７）Ｐｈ７ｓｉｏｌ、Ｒｅｖ、ｅ　１ｎｐｒｅｓｓ。 Ｂｅｎ５ｏｎｓＢ、ｅＨａＷｇｏｏｄ磨Ｓ、＃　Ｓｈｉ
ｌｌｉｎｇ、Ｊ、ｅＣｌｅｍｅｎｔｓｅＪ、ｓＤａｍｍ
ｓＤ、＊Ｃｏｒｄｅｌｌ＋Ｂ、ａｎｄＷｈｉｔｅｙＲ，
Ｔ、ｒ１９８５）Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃ
ｉ。 ＵＳＡ８２．６３７９−６３８３゜ ＷｈｉｔｅｔＲ，Ｔ、＊ＤａｍｍｓＤ、Ｍｉｌｌｅｒ＊
Ｊ、、５ｐｒａｔｔｓＫ、。 Ｓｈｉ１１１ｎｇ＊Ｊ、＊ＨａｗｇｏｏｄｔＳ、＊Ｂｅ
ｎ５ｏｎ＊Ｂ、ａｎｄＣｏｒｄｅｌｌｅＢ、（１９８５
）Ｎａｔｕｒｅ　３１７．３６１−３６３゜Ｆ１ｏｒｏ
ａ＊１．５Ｓｔｅｉｎｂｒｉｎｋ＊Ｒ，、Ｊａｃｏｂｓ
ｓＫ、ＰｈｅｌＰａＤ、Ｋｒ１ｚｐＲ＊、Ｒｅｃｌ＊Ｍ
、＊ＳｕｌｔｚｍａｎｎｓＬ、ＪｏｎｅｓｓＳ、Ｔａｅ
ｕｓｃｈ＊Ｈ，Ｗ、＃Ｆ’ｒａｎｋ歩Ｈ，Ａ、ａｎｄ　
Ｆｒ１ｔａｃｈ＊Ｅ、Ｆ、（１９８６） Ｊ、Ｂｌｏｌ、Ｃｈｅｍ、２６１．９０２９−９０３３
゜７、　　　Ｂｅｎ５ｏｎｅＢ、Ｊ、ｓＷｉｌｌｉａｍ
ｓｓＭ、Ｓ、５ｕｅｉａｈｉｓＫ、ｅＧｏｅｒｋｅｅＪ
、ａｎｄ　Ｓａｒｇｅａｎｔ＊Ｔ、（１９８４）Ｂｉｏ
ｃｈｉｍ。 Ｂｉｏｐｈ７ｓ、Ａｃｔａ　７９３．１８−２７゜８、
　　　ＫｉｎｇｓＲ，Ｊ、ａｎｄＭａｃＢｅｔｈｓＭ、
ＣＪ１９７９）Ｂｌｏｃｈｉｍ、ＢｉｏＰｈ）’ｓ、Ａ
ｃｔａ　５５７＃　８６−１０１゜９、　　　Ｗｈｉｔ
ｓｅｔｔｅＪ、Ａ、ｅｏｈｎｉｎｇ＊Ｂ、Ｌ、＊Ｒｏｓ
ｓｓＧ、ＭｅｕｔｈｔＪ、　＊Ｗｅａｖｅｒｓ　Ｔ、　
＊ＨＯ１ｍ＊　Ｂ、Ａ、　＊　５ｈａｌ）　１ｒｏｓＤ
、Ｌ、　ａｎｄＮｏｔｔａｒ、Ｒ，Ｈ，（１９８６）Ｐ
ｅｄｉａｔｒ、Ｒｅｓ、２０１４６０−４６７゜ １０　　Ｍｅｔｃａｌｆｅ＊１．Ｌ、ｐＥｎｈｏｒｎｌ
ｎｇｓＧ、ａｎｄ　ＰｏｓｓｍａｙｅｒｅＦ、　（１９
８０）　Ｊ、ＡＰＰＩ　、Ｐｂ）’５ｉｏｌ　、　４９
　＊　３４−４１　。 １１　　Ｂｅｒｇｇｒｅｎ＊Ｐ、＊Ｃｕｒ８ｔｅｄｔ＋
Ｔ、５Ｇｒｏ＋５ｓｍａｎｅＧ、５ＮｉｌｓｓｏｎｙＲ
，ａｎｄ　Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ駿Ｂ、　（１９８５）Ｅ
ｘｐ。 Ｌｕｎｇ　Ｒｅｓ、８ｓ　２９−５１　。 １２　　Ｐｈ１ｚａｃｋｅｒｌｅｙ＊Ｐ、Ｊ、Ｒ，ｅＴ
ｏｗｎｅＭ、　−Ｈ，ａｎｄＮｅｗｍａｎｍＧ、Ｅ、　
（ｌ　９７９　）　Ｂｉ　ｏｃｈｅｒｎ、　Ｊ、　１Ｂ
、Ｌ７３１−７３６゜ １３　　Ｋａｔ７ａｌｎＳ、Ｌ、ａｎｄｓｉｎｇｈ＊Ｇ
、（１９７９）Ｌａｂ、Ｉｎｖｅｓｔ４０．５６２−５
６７゜ Ｃ１ａ７ｐｏｏｌ＊Ｗ、Ｄ、ｅＪｒ、＃ｃｈａｎｄｅｒ
ｓＡ、ａｎｄ　ＦｉｓｈｅｒｙＡ、Ｂ、ｒ１９８１）Ｆ
ｅｄ、Ｐｒｏｃ、４０，４０８゜５ｕｅｉｓｈｉｅＫ、
ａｎｄ　Ｂｅｎ５＋ｏｎＪ、Ｊ、（１９８１）Ｂｉｏｃ
ｈｉｍ、Ｂｉｏｐｈ７ｓ、Ａｃｔａ　６６５ａ４４２−
４５３゜５ｕｚｕｋＬＹ、ｅＮａｋａｉｓＥ、＊ｏｈｋ
ａｗａｓＫ、ｒ１９８２）Ｊ、Ｌｉｐｉｄ、Ｒｅｓ、２
３．５３−６１゜５ｕｚｕｋｉｅＹ、Ｃｕｒｓｔａｄｔ
＊Ｔ、　＊ＧｒＯ１ｉＳｍａｎｎｓＧ、＊Ｋｏｂａ７ａ
ｓｈｉａＴ、５ＮｉｌＢ！１ｌｏｎｓＲ，＊Ｎｏｈａｎ
ｓＫ、ａｎｄＲｏｂｅｒｔｓｏｎｓＢ、（１９８６）Ｆ
ｕｒ、Ｊ、Ｒｅ５ｐｉｒ、Ｄｉｇ、６９＊３３６−３４
５゜ ＴａｋａｈａｓｈｉｎＡ、ａｎｄ　Ｆｕｊｉｗａｒａ＊
Ｔ、（１９８０）Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ｒ
ｅｓ、Ｃｏｍｍｕｎ、１３５，５２７−５３２゜Ｗｈｉ
ｔｓｅｔｔｅＪ、Ａ、＊ＨｕｌＬＷ、Ｍ、ｓｏｈｎｉｎ
ｇ−Ｇ、＃ＲＯ８Ｂ１Ｇ、ａｎｄ　Ｗｅａｖｅｒ＊Ｔ、
Ｅ、（１９８６）Ｐｅｄｉａｔｒ＊Ｒｅａ、２０ｅ７４
４−７４９゜ Ｙｕ＊Ｓ、−Ｈ，ａｎｄ　ＰｏｓｓｍａｙｅｒｅＦ、　
（１９８６）Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｊ、２３６．８５−８９
゜Ｈａｗｇｏｏｄ＊Ｓ、’ｅＢｅｎｓｏｎ＊Ｂ、Ｊ、ｅ
Ｓｃｈｉｌｌｉｎｇ＊Ｊ、ｓＤａｍｍｓＤ、　ｅｃ１ｅ
ｍｅｎｔｓ＊　Ｊ、Ａ、　ａｎｄ　Ｗｈｉ　ｔｅ＊Ｒ，
Ｔ。 （１９８７）Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、
ＵＳＡ８４．６６−７０゜が あ 四 ＳｗａｎｋｓＲ，Ｔ、＆ＭｕｎｋｒｅｓｅＫ、Ｄ、（１
９７１）Ａｎａｌ。 Ｂｉｏｃｈｅｍ、３９　＊　４６２−４７７゜Ｂａｒｔ
ｌｅｔｔ、Ｇ、Ｒ１（１９５９）Ｊ、Ｂｌｏｔ、Ｃｈｅ
ｍ、２３４゜４６６−４６８゜ Ｂｉｚｚｏｚｅｒｏ＊０１Ｊｅｓｉｏ　−Ｍｏｒｅｎｏ
＊Ｍ、ｊＰａｓ（ｌｕｉｎｉｓＪ、Ｍ、＊５ｏｔｏｓＥ
、Ｐ、ａｎｄ　ＧｏｍｅｚｅＯｏＪ、（１９８２）Ｊ。 Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ、２２７　＊　３３−４４　。 Ｈａｌｌｄｅｎ＊Ｇ、＊ＧａｆｖｅｌｉｎｅＧ、１Ｍｕ
ｔＬＶ、ａｎｄ　Ｊｏｒｎ−ｖａｌｌ＊Ｈ，（１９８６
）Ａｒｃｈ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、１４７
＃２０−２７゜ ＪろｒｎｖａｌｌｙＨｌａｎｄ　Ｐｈ１ｌｔｐｓｏｎ＊
Ｌ、　（１９８０）Ｅｕｒ。 Ｊ、Ｂｌｏｃｈｅｍ、１０４．２３７−２４７゜Ｆｒａ
ｅｎｋｅｌ−ＣｏｎｒａｔｓＨ６ａｎｄ　Ｔｓｕｎｇ＋
Ｃ，Ｍ、　（１９６７）Ｉｎ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　　ｉｎ
　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇ７ｓｖｏｌ、ＸＩ　（Ｃ，ＨｏＷ
。 Ｈ１ｒｓ＃６ｄ、）ｐｒｌ、１５１−１５５゜Ｂｅｒｇ
ｍａｎ＊Ｔ、ａｎｄ　ＪろｒｎｖａｌＬＨ，（１９８７
）　ｉｎＭｅｔｈｏｄｓ　　ｉｎ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　５
ｅｑｕｅｎｃｅ　Ａｎａｌ）’５ｉｓ（Ｋ、Ａ、Ｗａｌ
ｓｈ＋　ｅｄ、　）　）ｌｕｍａｎａ　Ｐｒｅｓ＋ｓ＋
Ｃ１１ｆｔｏｎ＊　ＩｎＪｏｈａｎｓｓｏｎ＊　１．　
＊ＣｕｒｓｔｅｄｔｙＴ、ＲｏｂｅｒｔｓｇｏｎｓＢ。 ａｎｄ　ＪＡｒｎｖａｌｌ＊Ｈ，（１９８８）Ｂｉｏｃ
ｈｅｍｌｓｔｒｙ　２７ｅ３５４４−３５４７゜ 表２ 加 ＥｎｈｏｒｎｉｎｇｔＧ、（１９７７）Ｊ、ＡＩ）ｐｌ
、Ｐｈｙｓｉｏｌ、４Ｌ１９８−２０３゜ 表１ Ｃｙｓ　　ｆｍ） Ｐｒ。 ｌｙ ｌａ ａ１ ｅｔ １ｅ ｅｕ Ｐｈｅ ｙｓ ｉｓ ｒｇ ０．７　（２）で１】°；′、′１ ２．５　（３’１ ３．０　（２） １．４　（１） ２．４　（ＩＧ　２．５Ｃ１０１ １，０（１） １．２（（至）１．３（３） ５．１　（７）　５．１（７） ｏ、ｓ　（１） １．２　（１） ０．８（１） １．２　（２ ２，８（１（ｎ ８．０１ ８．６００１ １．４（３）　　２．２（３）　　　１．４（３）４．
７（η　６，２（７）　　７．８（７）ヒトリポタンパ
ク質 Ｐｈｅ−Ｇｌ）’／Ａｒｇ−１１ｅ−Ｐｒ。 Ｇｌｙ／Ａｒｇ−１１ｅ−Ｐｒｏ− １１ｅ−Ｐｒｏ− ３２％ ３２チ ５５チ １９％ ２６％ Ａ：羊水 Ｂ：気管支肺胞洗浄 表３ 均値） 記録はπ℃、５０ｑＩｂ表面圧縮および速度４０７分で
の脈動バブルにより得られた。各調製物に対して５回の
実験を行った。 ｐ−ｃ 表面張力（ｍＮ／ｍ） 天然 Ｆｃ表面張力（ｍＮ／ｒｎ） チド ｃ％） １．０ ２．０ ４．０ Ｃ秒） 〉１２０ 〉１２０ 〉１２０ 〉１２０ 〉１２０ 〉１２０ １．０ ２．０ ４．０ 表５ 記録は３７℃、５０ｔｓ表面圧縮および速度４０／分で
の脈動バブルにより得られた。各調製物に対して５回の
実験を行った。 記録は３７℃、５０％表面圧縮および゛速度４０／分で
の脈動バブルにより得られた。各調製物に対して５回の
実験を行った。 脱アシル化 表面張力 ＣｍＮ／ｍ） 物の表面活性に関する図表を示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、肺胞のポリペプチドまたはタンパク質と、それに共
   有結合された１個または２個の脂肪酸残基から成る肺表
   面活性作用を有するリポタンパク質。 ２、脂肪酸残基は１４〜２２個の炭素原子を有する脂肪
   酸の残基から選ばれる、請求項１記載のリポタンパク質
   。 ３、脂肪酸はパルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸
   、リノール酸およびリノレン酸から選ばれる、請求項２
   記載のリポタンパク質。 ４、脂肪酸は飽和脂肪酸である、請求項３記載のリポタ
   ンパク質。 ５、脂肪酸はパルミチン酸およびステアリン酸から選ば
   れる、請求項４記載のリポタンパク質。 ６、脂肪酸残基はパルミチン酸残基である、請求項４記
   載のリポタンパク質。 ７、２個の脂肪酸残基を含む、請求項１〜６のいずれか
   １項記載のリポタンパク質。 ８、ポリペプチドは次のアミノ酸配列： 【アミノ酸配列が有ります】 から成る、請求項１〜７のいずれか１項記載のリポタン
   パク質。 ９、ポリペプチドはヒト、ブタまたはウシ由来のもので
   ある、請求項８記載のリポタンパク質。 １０、ポリペプチドは次のアミノ酸配列： 【アミノ酸配列が有ります】 （ここでＸはＧｌｙまたはＡｒｇである）から成る、請
   求項９記載のリポタンパク質。 １１、ポリペプチドは次のアミノ酸配列： 【アミノ酸配列が有ります】 （ここでＸはＧｌｙまたはＡｒｇである）から成る、請
   求項１０記載のリポタンパク質。 １２、ポリペプチドはＮ末端切断形態である、請求項１
   ０または１１記載のリポタンパク質。 １３、末端切断は１個または２個のアミノ酸残基を含む
   、請求項１２記載のリポタンパク質。 １４、１個または２個の脂肪酸残基は１つまたは両方の
   Ｃｙｓ残基に共有結合され、それとチオエステルを形成
   する、請求項８〜１３のいずれか１項記載のリポタンパ
   ク質。 １５、脂肪酸残基の数は２である、請求項１４記載のリ
   ポタンパク質。 １６、脂肪酸残基はパルミチン酸残基である、請求項１
   ４または１５記載のリポタンパク質。 １７、請求項１〜１６のいずれか１項記載のリポタンパ
   ク質とリン脂質型の物質との組合わせを含有する薬剤組
   成物。 １８、患者の肺胞の空気−液体界面での表面張力を低下
   させるために、呼吸障害を有する患者の気道に、請求項
   １〜１７のいずれか１項記載のリポタンパク質または薬
   剤組成物の有効量を投与することから成る、ヒトを含む
   哺乳動物における呼吸を促進する方法。 １９、投与は気管または気管支へ直接行う、請求項１８
   記載の方法。