JPH0210161B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明者等は、先に少数群放線菌ミクロエロボ
スポリア・グリゼア（Microellobosporia
grisea）が培養液中に抗腫瘍活性を有する多糖体
DH―6665Fを産生することを見出し、これを単
離することに成功した。DH―6665Fは分子量分
布が10000〜1000000と広い範囲にわたつており、
抗腫瘍作用には無関係な部分が存在することも考
えられ、また高濃度では粘稠性のため静脈内投与
が困難であり、さらに一過性の発熱等の副作用が
認められる場合があつた。 そこで本発明者等が種々検討した結果、DH―
6665Fを酸処理すると、低分子量化されると共
に、粘稠性も低下し、蛋白含量も減少し前記の副
作用の消失した、かつ抗腫瘍作用の強い多糖体
DH―6665FDが得られることを見い出し本発明
を完成した。 すなわち、本発明は多糖体DH―6665Fを低分
子量化することにより得た抗腫瘍多糖体DH―
6665FD、例えば分子量約30万のDH―6665FD₃₀，
分子量約10万のDH―6665FD₁₀あるいは分子量約
３万のDH―6665FD₃およびそれらの製造法に関
するものである。 原料となる多糖体DH―6665Fはミクロエロボ
スポリア・グリゼアの培養液中に産生された分子
量分布が10000〜1000000、主として300000〜
800000の多糖体である。このものは、例えば
（財）発酵研究所より入手できるIFO―12518を用
いて、ブドウ糖、コーンステイープリカー等を含
む培地で24〜35℃にて数日間培養後、培養液を陰
イオン交換樹脂のカラムに通し、セチルピリジニ
ウムクロライド溶液および硼酸緩衝液を加えて沈
澱を生ぜしめ、この沈澱を水洗し、酢酸溶液に溶
解後、エタノールを加えて生じる沈澱を集め、こ
れをエタノール等で洗浄し、さらに水に溶解して
不溶物を除き、エタノールを加えて沈澱を生じさ
せ、エタノール等で洗浄後乾燥する等の操作によ
り得ることができる。 DH―6665FDを製造するにはDH―6665Fを低
分子量化するが、例えば塩酸、硫酸等の鉱酸ある
いは蟻酸等の有機酸と数十度乃至百数十度程度に
数十分乃至数時間反応させて加水分解する。反応
条件に応じて得られる多糖体の分子量が異なつて
くるので、予め少量の原料を用いて試験的に反応
を行ない、生成物の分子量分布を測定して最適条
件を定めるのが適当である。例えば、塩酸を用い
てDH―6665FDを得るための条件、すなわち、
塩酸濃度、反応温度および時間を定めるには次の
如く行なう。 DH―6665F20mgを数種類の濃度の塩酸各１ml
に溶解後、封管中で各温度条件下１乃至10時間反
応させ、冷後、炭酸ナトリウム溶液にて中和し、
３mlに定容後、高速液体クロマトグラフイーで分
子量分布を測定する。その結果、次に示す条件が
選ばれた。例えば、分子量約30万のDH―
6665FD₃₀を得るためには、0.1N塩酸中、80℃、
約４時間あるいは0.8N塩酸中、60℃、約3.5時間
加水分解すればよい。また分子量約10万のDH―
6665FD₁₀を得るためには、0.1N塩酸中、80℃、
約７時間あるいは0.8N塩酸中、60℃、約７時間
反応させる。また分子量約３万のDH―6665FD₃
を得るためには、0.2N塩酸中80℃、約6.5時間あ
るいは1.6N塩酸中、60℃、約4.5時間反応させれ
ばよい。 反応液は、水酸化アルカリ、炭酸アルカリ、陰
イオン交換樹脂（CO^2- ₃型）等を用いて中和し、
得られる溶液の数倍量の低級アルコール、特にエ
タノール中に撹拌下加えて沈澱を生ぜしめ、これ
を集めて80％エタノール等で洗浄後、水に溶解
し、原料多糖体の５〜50倍量の陰イオン交換樹脂
と陽イオン交換樹脂のカラムを通過させる。得ら
れる液を適当な濃度、例えば、多糖体の濃度が２
〜３％（Ｗ／Ｖ）になる様に濃縮し数倍量、例え
ば、３倍量のエタノール中に撹拌下加えて生ずる
沈澱を集めて、例えば、80％エタノール、エタノ
ール、アセトン、エチルエーテルで順次洗浄後、
乾燥すれば無味無臭の白色粉末のDH―6665FD
が得られる。 以上の如くして得られたDH―6665FDについ
て物理学的、化学的及び生物学的諸性質について
以下に詳述する。 物理学的ならびに化学的性質 〔１〕 呈色反応 DH―6665FD₃₀，DH―6665FD₁₀およびDH
―6665FD₃につき、それらの水溶液を用いて
種々の呈色反応を試験した結果は表１の通りで
ある。 【表】 〔２〕 溶解性 DH―6665FD₃₀，DH―6665FD₁₀およびDH
―6665FD₃は、いづれも水に易溶であり、メタ
ノール、エタノール、ｎ―ブタノール、酢酸エ
チル、酢酸ブチル、アセトン、エチルエーテ
ル、石油エーテル、ｎ―ヘキサン、エチレング
リコール、プロピレングリコール、ピリジン等
の有機溶媒にはほとんど溶けない。 〔３〕 旋光性 １％水溶液における比旋光度〔α〕²⁵ _Dは、DH
―6665FD₃₀が＋65±5゜、DH―6665FD₁₀が＋61
±5゜、またDH―6665FD₃が＋57±5゜であつた。 〔４〕 元素分析値 DH―6665FD₃₀、DH―6665FD₁₀およびDH
―6665FD₃は、いづれもC41〜44％、H5.5〜7.0
％、N0.4％以下であり、バイルシユタイン法
および金属ナトリウムと熔融後硝酸銀反応でハ
ロゲンを認めず、フオール（Vohl）反応で硫
黄を認めない。 〔５〕 分子量 ゲル濾過法によつて測定した結果によれば
DH―6665FD₃₀の分子量は300000±60000、DH
―6665FD₁₀は100000±20000、またDH―
6665FD₃は30000±6000を中心とする単一のピ
ークの分布を示す。 東洋曹達工業製HLC―827高速液体クロマト
グラフに接続したＧ―4000SWカラム（7.5×
600mm、東洋曹達工業製）にDH―6665FD₃₀、
DH―6665FD₁₀、DH―6665FD₃およびDH―
6665Fを各々４mg／0.5ml注入し、0.1M食塩水
により流速1.1ml／minで溶出し、示差屈折計
で検出した場合の分子量分布をデキストランＴ
―10、Ｔ―40およびＴ―500（フアルマシア・フ
アインケミカルズ社製）の溶出位置と共に図１
および図２に示した。 〔６〕 赤外線吸収分析 DH―6665FD₃₀、DH―6665FD₁₀およびDH
―6665FD₃を含むKBr錠について測定した赤外
線吸収スペクトルは、それぞれ図３，４および
５に示す如くである。 〔７〕 構成糖類 DH―6665FD₃₀、DH―6665FD₁₀、DH―
6665FD₃およびDH―6665Fを各々1N硫酸に溶
解し、封管中で100℃に於て６時間加水分解後、
硫酸を除き、Kieselgel60F₂₅₄（Merck社製）の
薄層上、iso―プロパノール・ピリジン・水・
酢酸（８：８：４：１容）、或はｎ―ブタノー
ル・iso―プロパノール・水（５：３：１容）
で上昇法によるクロマトグラフイーを行なつた
後、ｐ―アニスアルデヒド・硫酸・95％エタノ
ール（0.5：0.5：９容）試薬で呈色せしめた結
果、Ｄ―グルコースとＤ―マンノースの存在を
確認した。 〔８〕 蛋白部分と構成アミノ酸 ローリー・フオリン法によつて牛血清アルブ
ミンを標準として測定した結果、DH―
6665FD₃₀およびDH―6665Fの蛋白部分は各々
0.3％以下と0.3〜1.0％であつた。また、両物質
を3N塩酸に溶かし、封管中、100℃で16時間加
水分解した後、アミノ酸自動分析機（日立
KLA―５型）により分析した結果は表２に示
す通りであるが、DH―6665FD₃₀のアミノ酸含
量はDH―6665Fに比し概ね半減したことが認
められる。 【表】 【表】 【表】 〔９〕 DH―6665FDおよびDH―6665Fの多糖
部分の構造 構造を解明するために以下の分析を行なつ
た。 (a) DH―6665FD₃₀、DH―6665FD₁₀、DH―
6665FD₃およびDH―6665Fを各々完全酸加
水分解後常法によりアルジトール・アセテー
トとしてガスクロマトグラフイーによつて分
離定量した結果は、表３の通りであつた（モ
ル比）。 【表】 (b) DH―6665FD₃₀、DH―6665FD₃およびDH
―6665Fを箱守法により完全メチル化後、常
法によりアルジトール・アセテートとしてガ
スクロマトグラフイーよつて分析した結果
は、表４の通りであつた（モル比）。 【表】 【表】 (c) DH―6665Fの完全スミス分解及び緩和ス
ミス分解の結果は、表５の通りであつた（モ
ル比）。 【表】 (d) DH―6665Fの緩和スミス分解産物として、
２―Ｏ―β―Ｄ―グルコシル―Ｄ―エリスリ
トールが得られた。 (e) DH―6665Fのアセトリシスによつて二糖
として、３―Ｏ―α―Ｄ―マンノシル―Ｄ―
グルコースとセロビオース（４―Ｏ―β―Ｄ
―グルコシル―Ｄ―グルコース）が得られ
た。 (f) DH―6665Fの部分酸加水分解によつて、
二糖として、６―Ｏ―α―Ｄ―マンノシル―
Ｄ―グルコースとセロビオースが得られた。 (g) DH―6665Fの部分酸加水分解によつて得
られる種々の低分子量化体（MW5×10³〜７
×10⁴）の還元末端基を分析した結果、グル
コースのみであつた。 以上の分析結果を総合してDH―6665Fの主構
造を次式の如く推定した。 Ｇ：Ｄ―グルコース残基 Ｍ：Ｄ―マンノース残基 また本物質DH―6665FD₃₀、DH―6665FD₁₀お
よびDH―6665FD₃などの構造は、表３および表
４の結果から、上式に示されたDH―6665Fの構
造において、主鎖β―１，４―Ｄ―グルカンの切
断による低分子量化と同時に、側鎖マンノースの
うち主として３位マンノースが一部脱離したもの
と推定された。 生物学的性質 〔１〕 急性毒性 正常のddYマウス（雄、体重25〜27ｇ）を用
い、DH―6665FD₃、DH―6665FD₁₀およびDH―
6665FD₃₀の溶液（生理食塩水又は蒸溜水に溶解）
を腹腔内および経口で投与した場合のLD₅₀値は、
いずれも2000mg／Kg以上であつた。 〔２〕 抗腫瘍作用 マウス同種腫瘍（Allogeneic tumor）および
同系腫瘍（Syngeneic tumor）について検討した
結果を以下に例示する。 Ａ マウス同種移植癌 エーリツヒ固型癌に対する効果 ａ 腹腔内投与の場合 ３×10⁶個のエーリツヒ癌細胞を各々のddyマ
ウスのそけい部皮下に接種し、癌移植後12および
17日目の２回、生理食塩水に溶解した各試料を腹
腔内に投与した。実験各群のマウスは７匹とし、
移植後26日目にマウスを屠殺して摘出した癌の重
量を測定し、対照群のそれと比較した。また、活
性対照としてレンチナンおよびDH―6665Fの至
適投与量を同様に投与し比較した。実験終了後の
各群の腫瘍重量の平均値（Ｔ）とその対照群(C)に
対する百分率（Ｔ／Ｃ×100％）を表６に示した。 【表】 ｂ 経口投与の場合 ５×10⁵個のエーリツヒ癌細胞を、各々のICR
マウスのそけい部皮下に移植し、24時間後から連
日17回各試料の水溶液を経口投与した。各群のマ
ウスは５匹とし、癌移植後24日目の腫瘍重量を前
述の方法で対照群と比較した。なお活性対照とし
てクレスチン（PS―Ｋ）およびDH―6665Fを用
い結果を表７に示した。 【表】 Ｂ マウス同系移植癌 MM46乳癌に対する効果 ａ 腹腔内投与の場合 近交系C3H／Heマウスを用い、MM46癌細胞
４×10⁶個を各マウスのそけい部皮下に接種し、
移植後12および17日目の２回、生理食塩水に溶解
した各試料を腹腔内に投与した。各実験群のマウ
スは７匹とし、さらに移植後31日目にマウスを屠
殺し、摘出した癌の重量を測定した。腫瘍重量の
平均値（Ｔ）と対照群(C)のそれに対する百分率
（Ｔ／Ｃ×100、％）を表８に示した。なお活性対
照としてレンチナンおよびDH―6665Fの至適投
与量を同様に投与し比較した。 【表】 【表】 ｂ 皮下投与の場合 C3H／HeマウスにMM46癌細胞を既述のごと
くそけい部皮下に接種し、癌移植後12および17日
目の２回、生理食塩水に溶解した各試料を背部皮
下に投与した。各実験群のマウスは７匹とし、移
植後29日目にマウスを屠殺し、摘出した癌の重量
を対照群のそれと比較した。なお、活性対照とし
てDH―6665F及びピシバニール（OK―432）を
用い、その結果を表９に示した。 【表】 ｃ 経口投与の場合 C3H／HeマウスにMM46癌細胞を既述のごと
く皮下に接種し、癌移植後24時間から各試料の水
溶液を連続して16回経口投与した。各実験群のマ
ウスは５〜６匹とし、移植後23日目にマウスを屠
殺し、摘出した癌の重量を対照群のそれと、これ
も既述のごとく比較した。なお、活性対照として
クレスチン（PS―Ｋ）を用い、その結果を表10
に示した。 【表】 以上の結果にみられる如く、本発明の抗腫瘍多
糖体DH―6665Fの低分子化体DH―6665FD₃、
DH―6665FD₁₀およびDH―6665FD₃₀はマウス同
種腫瘍のみならず、同系腫瘍に対しても有効であ
り、また腹腔内、皮下および経口投与によつても
優れた効果を示す点に著しい特徴を有する。 また活性対照として用いたレンチナン、クレス
チン（PS―Ｋ）、ピシバニール（OK―432）と比
較しても、優れた抗腫瘍性を示す物質であること
が明らかである。 〔３〕 免疫学的作用（遅延型アレルギー反応の
惹起） エーリツヒ癌又はMM46乳癌を皮下に移植した
担癌マウスに対し、同じ癌細胞の超音波破砕遠心
上清を癌抗原として、その足掌に投与した場合腫
脹がみられる。これは投与部位において、いわゆ
る古典的な抗原抗体反応が起こると共に、その結
果誘起された遅延型アレルギー反応であると考え
られる。またこの場合、免疫賦活性作用を示す物
質を投与することにより、マウスにおけるこの反
応が強く発現することが知られている（Gann，
67，685〜692（1976））。 以下２つのマウス腫瘍系を用いて、この反応に
対するDH―6665FD₃、DH―6665FD₁₀およびDH
―6665FD₃₀の作用を検討した。 ａ エーリツヒ担癌マウスに経口投与した場合 マウス同種腫瘍エーリツヒ癌細胞５×10⁵個を
各々のICRマウスのそけい部皮下に接種し、24時
間後から試料水溶液を連続17回経口投与した。活
性対照としてはクレスチン（PS―Ｋ）およびDH
―6665Fを同様に投与し、各実験群のマウスは５
匹とした。癌移植後21日目にエーリツヒ癌細胞の
破砕遠心上清を抗原として、マウス当たり200μ
ｇの蛋白量（Lowry法）を各群のマウスの後肢
足掌皮内に投与した。マウスの足掌の厚みは癌抗
原投与直前（０時間）および正確に24時間後にダ
イヤル・シツクネス・ゲージを用いて測定し、24
時間値から０時間値を引いた値を腫脹増加量とし
て算出した。その結果を表11に示した。 【表】 ｂ MM46担癌マウスに経口投与した場合 マウス同系腫脹MM46乳癌４×10⁶個をC3H／
Heマウスのそけい部皮下に移植し、５日後より
試料水溶液を連日16回経口投与した。活性対照と
してはクレスチン（PS―Ｋ）およびDH―6665F
を同様に投与し比較し、各群のマウスは１群８匹
とした。癌移植後22日目にMM46癌細胞の破砕遠
心上清を抗原として、マウス当たり600μｇの蛋
白量（Lowry法）を各群のマウスの後肢足掌皮
内に投与した。実験方法および腫脹測定法は、エ
ーリツヒ癌の場合と同様に行ない、その結果を表
12に示した。 【表】 以上の結果より、本発明の抗腫瘍多糖体DH―
6665Fの低分子化体DH―6665FD₃、DH―
6665FD₁₀およびDH―6665FD₃₀は癌抗原に対す
る担癌マウスの遅延型アレルギー反応を経口投与
により惹起し、活性対照として用いたクレスチン
（PS―Ｋ）と同様に、宿主の免疫能を促進する作
用を有することが認められた。これは、本物質の
抗腫瘍性は宿主介在の作用によるものであること
を支持するものである。 参考例 ブドウ糖２％（Ｗ／Ｖ）、ペプトン0.5％（Ｗ／
Ｖ）、コーンステイープリカー0.5％（Ｗ／Ｖ）、
粉末酵母エキス0.3％（Ｗ／Ｖ）、食塩0.5％
（Ｗ／Ｖ）から成る培地（PH7.0）100mlを内容500
mlの三角フラスコに仕込んで滅菌し、これにミク
ロエロボスポリア・グリゼア（IFO―12518）の
寒天斜面培養から一白金鉤接種し、28℃で５日間
回転振盪培養した。この培養液２mlを上記と同じ
培地100mlを含む500ml容の三角フラスコ２本に
各々接種し、28℃で３日間回転振盪培養した。こ
の第２段種培養液200mlを再び上記と同じ培地20
を含む30容ジヤーフアーメンターに接種し、
28℃に於て通気量10／分、内圧0.5Kg／cm²、回
転数250rpmで66時間培養した。 この第３段種培養液20をブドウ糖3.0％
（Ｗ／Ｖ）、コーンステイープリカー2.0％（Ｗ／
Ｖ）および消泡剤としてアデカノールLG805（旭
電化製）0.05％（Ｗ／Ｖ）から成る培地（PH7.2）
1000を仕込んだ1500容フアーメンターに接種
し、28℃に於て通気量500／分、内圧0.5Kg／
cm²、回転数165rpmで88時間培養した。培養終了
後、培養液を80℃で20分間加熱した後、冷却しラ
ジオライト＃900（昭和化学工業製）を20Kg加え、
フイルタープレスにて濾過し水洗した。濾液と洗
液とを合してダイヤイオンPA306（Cl^-型）30を
充填したカラム（20cm×100cm）２本にSV5の流
速で通過させて、次いで脱イオン水でカラムを洗
浄した。通過液と洗液とを合した液1200に10％
セチルピリジニウムクロライド溶液25を加え、
次いで硼酸緩衝液（溶液１中に硼砂100ｇ、苛
性ソーダ25ｇを含む）50を加えた。生じた沈澱
を集め、洗液が中性になるまで充分に水洗した。
沈澱物を２％酢酸溶液100に溶解し、エタノー
ル300を加えて再び沈澱を形成せしめた。生じ
た沈澱を集めて75％エタノール、エタノール次い
でアセトンで順次洗浄した後、真空乾燥し白色粉
末1.99Kgを得た。 ここに得られた粉末1.0Kgを70の水に溶解し、
13200×Ｇで５分間連続的に遠心分離し、得られ
た上澄液を減圧下で25まで濃縮した。この濃縮
液にエタノール75を加え、更に酢酸ソーダ飽和
のエタノール２を加えて沈澱を形成せしめた。
沈澱を集め、75％エタノール、エタノール次いで
アセトンで順次洗浄後、真空乾燥し、DH―
6665Fの白色粉末910ｇを得た。元素分析値C43.6
％、H6.4％、N0.4％。〔α〕²⁵ _D＋61゜（１％水溶液）
。
グルコース／マンノース比（モル比）＝1.14。 実施例 １ DH―6665F100ｇを0.1N塩酸４に溶解し、恒
温槽中、内温80℃で４時間加熱反応後氷冷した。
反応液を5N苛性ソーダにて中和後エタノール18
中に撹拌下加えて、生じる白色沈澱を集め、こ
れを脱イオン水５に溶かし、エタノール18中
に撹拌下加えて生じる沈澱を集め、80％エタノー
ルにて洗浄した。得られた沈澱を再び脱イオン水
５に溶かし、ダウエツクス１（Cl^-型、米国ダウ
ケミカル社製）１を充填したカラムに通し、次
いで脱イオン水にてカラムを洗い、通過液と洗液
を合した。この液をダウエツクス50（H⁺型、米国
ダウケミカル社製）0.5を充填したカラムに通
し、次いで脱イオン水にてカラムを洗い、通過液
と洗液を合し、これに５％酢酸ソーダ溶液50mlを
加えた後、約４まで減圧濃縮した。得られた濃
縮液をエタノール12中に撹拌下加えて生じる白
色沈澱を集め、80％エタノール、エタノール、ア
セトンにて順次洗つた後、真空乾燥してDH―
6665FD₃₀の白色粉末86.0ｇを得た。 実施例 ２ DH―6665F100ｇを0.8N塩酸５に溶解し、内
温60℃で3.5時間加熱反応後氷冷した。反応液を
10N苛性ソーダにて中和後以下実施例１に従つ
て、DH―6665FD₃₀の白色粉末85.6ｇを得た。 実施例 ３ DH―6665F100ｇを0.1N塩酸５に溶解し、内
温80℃で７時間加熱反応後、以下実施例１に従つ
て、DH―6665FD₁₀の白色粉末84.2ｇを得た。 実施例 ４ DH―6665F100ｇを0.8N塩酸５に溶解し、内
温60℃で７時間加熱反応後氷冷した。反応液を
10N苛性ソーダにて中和後、以下実施例１に従つ
て、DH―6665FD₁₀の白色粉末を82.8ｇ得た。 実施例 ５ DH―6665F100ｇを0.2N塩酸５に溶解し、内
温80℃で6.5時間加熱反応後、以下実施例１に従
つて、DH―6665FD₃の白色粉末を76.3ｇ得た。 実施例 ６ DH―6665F100ｇを1.6N塩酸５に溶解し、内
温60℃で4.5時間加熱反応後、氷冷した。反応液
を10N苛性ソーダにて中和後、以下実施例１に従
つて、DH―6665FD₃の白色粉末を74.0ｇ得た。

【図面の簡単な説明】

図１および図２はゲル濾過パターンであり、図
３，図４および図５は赤外線吸収スペクトルであ
る。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 次の物理学的ならびに化学的性質を有する抗
   腫瘍多糖体DH―6665FD ［１］ 呈色反応 アンスロン硫酸反応 青 色 フエノール硫酸反応 黄褐色 ローリー・フオリン法 青 色 塩酸加水分解後のニンヒドリン反応 青紫色 ［２］ 溶解性 水に易溶。メタノール、エタノール、ｎ―ブ
   タノール、酢酸エチル、酢酸ブチル、アセト
   ン、エチルエーテル、石油エーテル、ｎ―ヘキ
   サン、エチレングリコール、プロピレングリコ
   ール、ピリジンにほとんど溶けない。 ［３］ １％水溶液における比旋光度［α］²⁵ _D DH―6665FD₃₀＋65±5゜ DH―6665FD₁₀＋61±5゜ DH―6665FD₃＋57±5゜ ［４］ 元素分析値 C41〜44％、H5.5〜7.0％、N0.4％以下、バ
   イルシユタイン法および金属ナトリウムと熔融
   後の硝酸銀反応でハロゲンを認めない。フオー
   ル（Vohl）反応で硫黄を認めない。 ［５］ 分子量（ゲル濾過法で次の単一ピークの
   分布を示す）。 DH―6665FD₃₀ 300000±60000 DH―6665FD₁₀ 100000±20000 DH―6665FD₃ 30000±6000 ［６］ 赤外線吸収分析（KBr錠） DH―6665FD₃₀、DH―6665FD₁₀及びDH―
   6665FD₃はいずれも次の特性吸収を示す。3400
   cm^-1（OH）、2900cm^-1（CH）、1630〜1640cm^-1
   （結合水）、1050〜1060cm^-1（Ｃ―Ｏ） ［７］ 構成糖類 1N硫酸に溶解し、封管中で100℃に６時間加
   水分解した結果、Ｄ―グルコースとＤ―マンノ
   ースの存在を確認した。 ［８］ 蛋白部分と構成アミノ酸 ローリー・フオリン法により牛血清アルブミ
   ンを標準とした測定結果で、DH―6665FD₃₀の
   蛋白部分は0.3％以下であつた。 構成アミノ酸としてアスパラギン酸、スレオ
   ニン、セリン、グルタミン酸、プロリン、グリ
   シン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイ
   シン、チロシン、フエニルアラニン、リジン、
   ヒスチジン、アルギニンが認められる。