JPH01503115A - 抗生物質１０３８１ｂ、その製法、および該抗生物質を含有する動物成長促進用組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 抗生物質１０３８１Ｂの製法 発明の背景 発明の分野 本発明は抗生物質１０３８１ｂの新規な製法に関する。

該抗生物質はストレプトミセス（Ｓ　ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属の新種、スト レプトミセス・アルギネンシス（Ｓ　ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ａｒｇｉｎｅｎ ｓｉｓ）を用いる栄養培地の発酵により得られる。抗生物質１０３８１ｂは主と してグラム陽性生物に抗する少なくとも５種の抗菌剤の群によりなる。抗生物’ Ｊｔ１０３８１ｂはスルホマイシン抗生物質群について報告されたのに同様の物 理特性を有するが、２種の群成分の同定はまだ確立されていない。

情報の開示 アルギノマイシン（抗生物質１０３８１ａ、）の製造および特性は１９８６年１ ２月３日出願の米国特許出願０３５６７８号に記載されている。

ストレプトミセス・アルギネンシス（培地（１０３８１）はｒＭ性Ｊスタフ４ｏ コツカス・アウレウス（Ｓ　ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ）を包 含するグラム陽性生物に対する抗生物質として有用な溶媒可溶化合物の混合物を 産生ずる。これらの抗生物質は１０３８　ｌｂ抗生物質と命名された。本発明は 抗生物質１０３８１ｂの産生、単離ならびに物理および生物学的特性を記載する 。

化学的には、抗生物質１０３８　ｌｂは構造未知のペプチドであると報告されて いるスルホマイシンに関連するようである。ワイ・エガワら（Ｙ、Ｅｇａ＊ａ　 ｅｔ　ａｌ、　）、「スルホマイシン、新しい硫黄含有抗生物質のシリーズ、■ ：単離、精製および特性」、ジャーナル・オブ・アンチィバイオティックス（Ｊ 、　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ）、２２：１２〜１７（１９６９）参照。

抗生物質１０３８１ｂとスルホマイシン間の関係を明確にする努力の一部として 、抗生物質１０３８１ｂの産生用に開発された発酵条件下で、ニス・アルギネン シス（Ｓ、　ａｒｇｉｎｅｎｓｉｐ）および２種のスルホマイシンを産生ずる培 地の産生様式を比較した。抗生物質１０３８１ｂで用いた方法によって分析した 場合、実質的に同一であるように見える活性を３種の培地が与える。しかし、ニ ス・アルギネンシスのみが殺菌活性（抗生物質１０３８１ａ、／アルギノマイシ ン）を与える。

ストレプトミセス・ピリドクロモゲネス（Ｓ　ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｖｉｒｉ ｄｏｃｈｒｏｍｏｇｅｎｅｓ）（亜種スルホミチニ（ｓｕｌｆｏｍｙｃｉｎｉ） Ａ　Ｔ　ＣＣ２９７７６；　ＵＣ８４１０）によって産生されたスルホマイシン は、抗生物質１０３８１ｂ複合体の単離に用いた手順により単離した。得られた 物質を赤外スペクトル（ＩＲ）、紫外スペクトル（ＵＶ）、ベーパークロマトグ ラフィー、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、高速液体クロマトグラフィー（ ＨＰＬＣ）および抗菌スペクトルによって抗生物質１０３８１ｂ複合体と比較し た。抗生物質１０３８１ｂは、同一ではないにせよ、スルホマイシンに非常ｉこ 似ているようである。

抗生物質１０３８１ｂ、、主たる抗生物質、はスルホマイシン産生生物によって 得られる主活性とほとんど同一である。しかし、産生生物は明らかに異なる。ニ ス・アルギネンシス（培地１０３８１）はアルギノマイシンを産生ずるが、２種 のスルホマイシン産生培地はアルギノマイシンまたは他のいずれの殺菌活性も生 じない。

米国特許第４００７０９０号は微生物ストレプトミセス・シネロピリディス（Ｓ ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｃｉｎｅｒｏｖｉｒｉｄｉｓ）からのスルホマイシン の調製についての新規な発酵方法を開示し、特許請求している。

スルホマイシンＩは日本国特許第４５−６８８０号に記載されている公知のグラ ム陽性抗生物質である（ダーウェント・アブストラクト（Ｄ　ｅｒｖｅｎｔ　Ａ 　ｂｓｔｒａｃｔ）、受入番号１８４４５Ｒ）。また、スルホマイシン■および ■は日本国特許公告公報１７５９９／１９７０におけるグラム陽性抗生物質とし て文献に記載されている（ダーウェント・アブストラクト（Ｄｅｒｖｅｎｔ　Ａ ｂｓｔｒａｃｔ、受入番号４２５５０Ｒ）。すべての３種のスルホマイシン抗生 物質は微生物ストレプトミセス・ピリドクロモゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｉｙｃｅ ｓ　ｖｉｒｉｄｏｃｈｒｏ＋ｏｏｇｅｎｅｓ）株の発酵によって調製された。

発明の要約 本発明は特に： ストレプトミセスーアルギネンシス（Ｓ　ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ａｒｇｉｎ ｅｎｓｉｓ）株、ＮＲＲＬ１５９４１およびその突然変異体で発酵することより なり、水性栄養培地が好気性条件下で同化可能な炭素源および同化可能な窒素源 を含有することを特徴とする抗生物質１０３８１ｂの製造方法； 発育を促進するのに有効な量の抗生物質１０３８１ｂを動物に投与することを特 徴とする肉生産動物において発育を促進する方法；および 実質的にＮＲＲＬ　１５９４１と同定される株であるとして特徴づけられるスト レプトミセス・アルギネンシスの生物学的に純粋な培養物 を提供するものである。

従って、本明細書中に記載する抗生物質は単独でまたは他の抗菌剤と組合せて用 いて種々の環境において多数の微生物の増殖を防止しまたは減じることができる 。例えば、該化合物は表面を消毒したりあるいは添加剤として塗布して微生物の 過剰増殖を防止することができる。

詳細な記載 本発明の抗生物質はニス・アルギネンシス（Ｓ　、　ａｒｇｉｎｅｎｓｉｓ）の 培養から得られる。該生物の分類法は以下に示す。

微生物 抗生物質１０３８１ｂの産生に用いる微生物はストレプトミセス（ｓｔｒｅｐｔ ｏｍｙｃｅｓ）属の新種、ストレプトミセス・アルギネンシス・ディエラ（Ｓｔ ｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ａｒｇｉｎｅｎｓｉｓ　Ｄｉｅｔｚ）種、ＮＲＲＬ−１ ５９４１である。該生物はジ・アップジョン（Ｔ　ｈｅ　Ｕ　ｐｊｏｈｎ）社１ こよって行われた土壌スクリーニングから単離され、ジ・ア、ノブジョン社のア ルマ・ディエラ（Ａ　１ｍａ　Ｄ　１ｅｔｚ）によって分類学的に特徴づけられ た。該生物の継代培養物はブダペスト条約の規定により１９８５年３月８日にノ ーザン・リージョン・リサーチ・センター（Ｎ　ｏｒｔｈｅｒｎ　Ｒｅｇｉｏｎ 　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｅｎｔｅｒ）、ＡＲ８：合衆国農務省；ペーオリア（Ｐ ｅｏｒｉａ）、イリイ州、米国シこ永久寄託した。その受託番号はＮＲＲＬ−１ ５９４１である。

色彩の特徴 気生菌糸体は顕著に青色である；メラニン陽性。エフタフロム（Ｅ　ｋｔａｃｈ ｒｏｍｅ）上の色彩パターンを第１表に掲げる。参照色彩特性を第２表に掲げる 。培地はトレスナ−（Ｔ　ｒｅｓｎｅｒ）およびノイ、ノカス（Ｂ　ａｃｋｕｓ ）の青色（Ｂ）の色彩系列中に置くことができる。（アプライド・ミクロバイオ ロジー（Ａ　ｐｐｌ、　Ｍ　ｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ）、１１：３３５〜３３８ ．１９６３） 顕微鏡的特徴 胞子は若干臼がったあるいは先端またはその近くに単純コイルを有する短い鎖状 である。該胞子には短いとげが備わっており、場合によっては微細な毛髪構造が 備わっている。該胞子は楕円状であって、寸法は１．２Ｘ０．８μである。

炭素化合物上での増殖 シャーリングおよびゴツトリープ（Ｓ　ｈｉｒｌｉｎｇ　ａｎｄ　Ｇｏｔｔｌｉ ｅｂ）の合成培地（インターナショナル・ジャーナル・オプ・システマテイック ・バクテリオロジ−（Ｉｎｔ、Ｊ、５ｙｓｔ、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、　）、１６ ：３１３〜３４０．１９６６）をこの測定のために用いた。増殖は陽ａ対１（Ｄ −グルコース）、Ｌ−アラビノース、スクロース、Ｄ−キシロース、Ｄ−マンニ トール、Ｄ−フルクトース、オヨヒラムノース上で良好であり；およびイノシト ールおよびラフィノース上で相当であった。セルロースまたは炭素化合物を加え ない陰性対照（合成培地Ｉ　Ｓ　Ｐ−９）上では増殖しなかった。

全細胞の分析 Ｌ−ジアミノピメリン酸が全細胞加水分解物中で検出された。

培養物の特徴 ゛　一般的な培養物の特徴を第３表に示す。

温度 ベネフト（Ｂ６ｙ１ｎｅｔｔ）の寒天、ツアペック（ｚａｐｅｋ）のスクロース 寒天、およびマルトース・トリプトン寒天上の増殖は２４℃〜３２°Ｃで良好で あった。最適な増殖（良好な青色空中増殖）がベネットの寒天およびマルトース −トリプトン寒天上で見られた。増殖は１８℃で相当であり、３７℃で普通であ った。ベネットの寒天およびツアペックのスクロース寒天上で増殖型増殖が、お よびマルトース・トリプトン寒天上で空中増殖が４５°Ｃにて見られた。５５℃ では増殖がなかった。

ストレプトミセス・アルギ不ンシスをニス・シネロビリディス（Ｓ　、　ｃｉｎ ｅｒｏｖｉｒｉｄｉｓ）Ａ　Ｔ　ＣＣ２９７７６およびニス・ピリドクロモゲネ ス・亜種０スルホミチニ（Ｓ、　ｖｉｒｉｄｏｃｈｒｏｍｏｇｅｎｅｓ　ｓｓ。

ｓｕｌｆｏｍｙｃｉｎｉ）Ａ　Ｔ　ＣＣｌ　４９２Ｑと比較した。生物分類的比 較の要約を第４表に示す。

抗生物質１０３８１ｂの発酵および回収ニス・アルギネンシスが深部好気的条件 下、水性栄養培地中で増殖するとき、抗生物質１０３８１ｂが産生される。典型 的には、該微生物は炭素源および同化可能な窒素化合物または蛋白質物質を含有 する栄養培地中で増殖する。好ましい炭素源はグルコース、赤砂糖、スクロース 、グリセロール、澱粉、コーンスターチ、ラクトース、デキストリン、糖蜜など を包含する。好ましい窒素源はコーン浸出液、酵母、ミルク固形物を含む自己分 解した醸造酵母、大豆ミール、綿実ミール、コーンミール、ミルク固形物、カゼ インのパンクレアチン消化物、ディステイラーズソリッド、動物のペプトン液、 肉片および骨片などを包含する。有利には、これらの炭素源および窒素源の組合 せを用いることができる。常水および未精製の成分が培地成分として用いられる ので、微量金属、例えば亜鉛、マグネシウム、マンガン、コバルト、鉄などは発 酵培地に加える必要がない。

抗生物質１０３８１ｂの産生は該微生物の満足できる増殖に導くいずれの温度に ても、好ましくは約２０’と３２℃間にて誘導できる。通常、該化合物の最適な 産生は約２ないし１０日間のうちに得られる。通常、培地は発酵の間、弱塩基性 （ｐＨ７，４〜９．０）に保持する。最終のｐＨは一つには緩衝液の存在に依存 し、もしあれば、一つには、滅菌に先立ち有利には約７．２に調整される培地の 初期ｐＨに依存する。

増殖を大きな容器およびタンク中で行う場合、接種用には該微生物の胞子型より はむしろ増殖型を用いて該新しい化合物の産生における顕著な遅延およびそれに 伴う装置の非効率的な利用を回避するのが好ましい。従って栄養ブロス培地を土 壌もしくは斜面培養からの一部で接種することによって、このブロス培地中で増 殖型接種物を産生ずるのが望ましい。かくして、若い増殖型接種物が確保される と、それを無菌的に大きな容器またはタンクに移す。その中で増殖型接種物が産 生される培地は、該微生物の適当な増殖が得られるようなものである限り、該新 しい化合物の産生に用いるものと同一または異なるものであってよい。

抗生物質１０３８１ｂは発酵ブロスから単離し精製する。以下の実施例により詳 しく記載する如く、メタノールでの抽出によって発酵ブロスの菌糸体ケーキから 抗生物質１０３８１ｂを単離する。小規模の発酵（振盪フラスコ）においては、 メタノール抽出物を濃縮乾固し、向流二重分配法（ＣＤＣＤ）単独によって、ま たはひき続いてのシリカゲルクロマトグラフィーによって残渣を精製する。大規 模の発Ｉ（５０００Ｑファーメンタ−）から得られたケーキの菌糸体抽出物は濃 縮して水性溶液とし、次いでこれを酢酸エチルで抽出する。

抗生物質１０３８１ｂを含有する酢酸エチル抽出物を濃縮乾固する。

得られた油状残渣をエーテルでトリチニレートして抗生物質１０３８１ｂのアモ ルファス状混合物を得、これを高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によっ てさらに精製する。

１０３８１種合体の主要成分を１０３８１ｂ、および１０３８１ｂ。

と命名した。これらを２種の化合物のうち抗生物質１０３８１ｂ、を生物学的お よび化学的特性測定が可能となるのに十分な量および純度で単離した。

抗生物質１０３８１ｂ、はグラム陽性菌および嫌気菌（クロストリジウム・ベル フリゲンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｐｅｒｆｒｉｇｅｎｓ）、バクテロイデ ス・フラギリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ　ｆｒａｇｉｌｉｓ））に対して活性 である。

それは他の抗生物質に対して耐性のスタフィロコッカス・アウレウス（Ｓ　ｔａ ｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ）（スタフィロコッカス・アウレウスＵ Ｃ３６６５、スタフィロコッカス・アウレウスＵＣ６６８５）に対しても活性で ある（ＵＣはジ・アップジョン社の登録商標である）。

従って、本発明の化合物はヒトを包含する哺乳動物において細菌感染を治療する のに有効である。

本発明の抗生物質１０３８　ｌｂの各種組成物は適量の抗生物質を含有する錠剤 、カプセル、丸剤、粉末、顆粒剤、滅菌非経口溶液もしくは懸濁液、点眼剤、経 口溶液もしくは懸濁液、油中水型エマルジョンの如き単位投与形態でヒトおよび 動物への投与に供される。

経口投与用には、固体または流体いずれかの単位投与形態が調製できる。錠剤の 如き固体組成物を調製するには、抗生物質をタルク、ステアリン酸マグネシウム 、リン酸二カルシウム、マグネシウムアルミニウムシリケート、硫酸カルシウム 、澱粉、ラクトース、アカシア、メチルセルロース、および医薬希釈剤または担 体として機能的に同様の物質の如き通常成分と混合する。カプセルは抗生物質を 不活性な医薬希釈剤と混合し次いで該混合物を適当なサイズのハードゼラチンカ プセルに充填することによって調製される。ソフトゼラチンカプセルは抗生物質 のスラリーを許容される植物油、軽質液状ワセリンまたは他の不活性油と共に機 械カプセル化することにより調製される。

シロップ、エリキシル剤、および懸濁液の如き経口投与用の流体単位投与形態が 調製できる。水溶性形態を砂糖、芳香性フレーバー剤および保存剤と一緒に水性 ビヒクル中に溶解してシロップを得ることができる。エリキシル剤は芳香性フレ ーバー剤と一緒に砂糖およびサッカリンの如き適当な甘味料と共にヒドロアルコ ール性（エタノール）ビヒクルを用いることにより調製される。

懸濁液はアカシア、トラガカント、メチルセルロースなどの如き懸濁剤の補助作 用により水性ビヒクルで調製できる。

非経口用投与には、抗生物質および水が好ましい滅菌ビヒクルを用いて流体単位 投与形態が調製される。用いるビヒクルおよび濃度に応じて、抗生物質をビヒク ル中に懸濁できるかまたは溶解できる。

溶液の調製において、抗生物質を注射用水に溶解し、次いで滅菌濾過した後、適 当なバイアルまたはアンプル中に充填し、次いでシールすることができる。有利 には、局所麻酔剤、保存剤および緩衝剤の如きアジュバントを該ビヒクル中に溶 解できる。安定性を増大させるためには、バイアルに充填した後、該組成物を凍 結し、次いで真空下で水分を除去できる。次いで凍結乾燥粉末をバイアル中にシ ールし、次いで注射用水の付属バイアルを供して使用に先立って該液体を復元す る。非経口用懸濁液は抗生物質を該ビヒクル中に溶解させる代わりに懸濁させか つ滅菌が濾過によって達成できない以外は実質的に同一の方法で調製できる。抗 生物質は滅菌ビヒクル中に懸濁する前にエチレンオキシドに暴露することにより 滅菌できる。

有利には、表面活性剤または湿潤剤を組成物中に包含させて化合物の均一な分布 を容易とする。

さらに、直腸座薬を用いて抗生物質を投与できる。この投与形態は小さな子供ま たは衰弱した人の場合のように、哺乳動物が経口でまたは吹入によるような他の 投与形態によって便宜には治療できない場合に特に注目されるものである。抗生 物質は当該分野で公知の方法によっていずれの公知座薬ベース中に処方すること もできる。

かかるベースの例には融点または溶液速度を一節する他の適合物質と共にカカオ バター、ポリエチレングリコール（カーボワックス）、ポリエチレンソルビタン ・ｌステアリン酸塩およびこれらの混合物が包含される。これらの直腸座薬は約 １ないし２．５９の重さとすることができる。

本明細書中にて用いる「単位投与形態」なる語はヒトの患者および動物用の単位 投与量として適当な物理的に区分された単位を言い、各単位は必要な医薬希釈剤 、担体またはビヒクルと協同して所望の医薬効果を生じるように計算された所定 量の活性物質を含有する。

本発明の新規な単位投与形態についての仕様は本明細書で詳しく開示する如＜（ ａ）活性物質の独自の特徴および達成されるべき特定の効果および（ｂ）ヒトお よび動物で用いる活性物質を調合する技術に固有の制限によって指示され、かつ 直接にそれらに依存し、これら゛　は本発明の特徴である。本発明に関する適当 な単位投与形態の例には、錠剤、カプセル、丸剤、座薬、粉末パケット、ウェハ ー、顆粒剤、カシェ剤、茶さじ１杯分、食さし１杯分、滴びん１杯分、アンプル 、バイアル、計量放出されるエアロゾル、前記のいずれかの分離集合体、および 本明細書中に記載したような他の形態がある。

有効量の抗生物質を治療で用いる。治療用の抗生物質の投与量は当業者によく知 られた多くの要因に依存する。それらは、たとえば投与経路および抗生物質の効 能を包含する。非経口的にまたは本発明の組成物で投与される単一投与量中の抗 生物質約１〜２ｇのヒトに対する投与法が細菌感染を治療するのに有効である。

さらに好ましくは、単一投与量は抗生物質約２ｇである。経口および直腸投与量 は単一投与量中に約１〜２ｇである。さらに好ましくは、単一投与量は抗生物質 約２９である。

本発明の抗生物質はブロイラーのひな、ブタおよびウシの如き肉生産動物におけ る発育を促進するのに用いることもできる。例えば、該抗生物質をブロイラーひ なの飼料（ＮＲＣ認可ダイエツト）と混合して約１１　ｐｐｍ（すなわち１１ｇ ｇ／＆９）の投与量濃度とした。２週間にわたり、各ひな（１日令）に１日当た り約２０ｙの飼料を自由に摂取させた。従って、各ひなは１日当たり抗生物質約 ２２０　ｉｃｙを摂取し、該抗生物質の平均発育指標は３以上であってＯよりも 有意に大きいと計算された。（平均発育指標は対照（薬剤の添加なくして飼料を 与えたひな）以上の発育における改善度を測定したものである。）ブタにおいて 発育を促進する本発明の抗生物質の使用例は後記する。

肉生産動物において発育を促進する本発明の抗生物質の使用についての前記の量 および手順の変法は当業者に公知であろう。ブロイラーのひなについては、好ま しい抗生物質１０３８１ｂの濃度は約０．５〜約１１ｍｇ／飼料に９である。ブ タについては好ましい抗生物質１０３８　ｌｂの濃度は約１０〜約５５ｘｙ／飼 料に９である。

好ましい具体例の記載 当業者ならばさらに工夫をこらすことなくこれまでの記載を用いて本発明を最大 限に実施することができると考える。以下の詳細な実施例は種々の化合物を調製 しおよび／または本発明の種々の方法を実行する仕方を記載するものであり、そ れは単に例示的なものである。当業者ならば反応体についての、ならびに反応条 件および反応技術についての方法から適当な変法を即座に認識するであろう。

以下の実施例において、抗生物質の産生および精製はア・ツセイ生物としてミク ロコツカス・ルテウス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕ＠１ｕｔｅｕｓ）およびストレプ トコッカス・ピオゲネス（Ｓ　ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｙｏｇｅｎｅｓ） を用いる微生物学ディスク・プレート・アッセイ法により測定した。クロロホル ム・メタノール（９５：５または１００　：　１０ｖ／ｖ）を移動相として用い てセルロース（ブリンクマン・セル（Ｂｒｉｎｋｍａｎ　Ｃｅ１ｌ）３００）； ｐＨ７，０，０，１Ｍリン酸緩衝液またはシリカゲル（ブリンクマンのポリグラ ム（Ｐｏｌｙｇｒａｍ）Ｓ　Ｉ　Ｌ−Ｎ−ＨＲ）プレート上で薄層クロマトグラ フィーを行う。バイオオートグラフィーをエム・ルテウス（Ｍ、１ｕｔｅｕｓ） またはニス・ピオゲネス（Ｓ　、　ｐｙｏｇｅｎｅｓ）について行う。

実施例Ｉ Ａ３発酵 ストレプトミセス・アルギネンシス、ＮＲＲＬ−１５９４１の土壌株をヒックネ イートレスナー（Ｈ１ｃｋｎｅｙ　−Ｔ　ｒｅｓｎｅｒ）寒天上で培養し、４℃ で貯蔵する。試料を水中でホモジネートし、再びヒックネイートレスナー寒天上 に置く。２８℃での７日間のインキユベーションの後、増殖は種培養接種物用と して十分である。

種培養体は常水１ｌ当たり：廃糖蜜５．８ｇ、ディフッ（ＤＨｃｏ）ぺブトン１ ０ｇ、ディフコ酵母二牛ス４ｇ、デキストリン４９、Ｌ−アスパラギンｏ、２ｇ 、ＣＯＣ（１＊　・６　Ｈ！　０１１９を含有する種培地（ＳＳＭ、１）中で増 殖させ；該培地は滅菌前にＫＯＨでｐＨ７，２に調整する。該ｓ　ＳＭ、　１　 ’ｅ　１００ｚＱ／フラスコで（２個のミルクフィルターで蓋をした）無地の５ ００ｘｆｆ広ロエルレンマイヤーフラスコ中に分注し、１２１℃、１５ｐｓｉに て３０分間オートクレーブ処理する。

フラスコをホモジネートした寒天プラグで０．５〜１プラグ／フラスコの割合で 接種し、２８℃にて３日間振盪する（２５０ｒｐｔａ、　２゜５”ストローク） 。収集時のｐＨは８．３である。

常水１１２当たり二大豆ミール２０９、醸造酵母２９、セレローズ２０９（オー トクレーブ処理後、５０％溶液として加える）を含有する培地中で種培養物を発 酵させる；該培地を滅菌前にＰＨ７，２に調整する。該培地を分注し、滅菌し、 次いで前記の如く振盪する。接種率は５峠／種培地１０Ｍである。発酵条件は２ ８℃における３日間である。

Ｂ、振盪フラスコまたは１０（２タンクの発酵からの抗生物質１０３８１ｂの単 離 要すれば濾過助剤を用いて発酵物を濾過し、発酵物容量の１７１０の水で固形分 ケーキを洗浄する。清澄な濾液および洗液を合する。

該ケーキをメタノール１．５ｇづつで４回トリチニレートする。メタノール抽出 物についてアッセイを行う（第５表）。活性画分を合し、濃縮乾固して調製物Ａ を得、これを抗生物質１０３８１ｂの単離および精製用の出発物質として用いる 。

実施例２　向流二重分配法およびシリカゲルクロマトグラフィーによる調製物Ａ からの抗生物質１０３８１ｂの単離Ａ、向流二重分配法：調製物Ａの２０ット分 を合しく２６．７９および１８．６９）、溶媒系シクロヘキサン−酢酸エチル− ９５％エタノール−水（１：ｌ　：１　：１ｖ／ｖ）の両相（各相１２５ｊｌｆ ｆ）に溶解する。

向流二重分配装置の上側（下層が該機械に入る側）の試験管２０−２５に該溶液 を添加する。以下の移行を行う：１）２５回の移行（画分を収集せず）；２）４ ５回の移行（上相を収集する）；および３）１００回の移行（両相を収集する） 。

バイオ活性測定により、および抗生物質−感受性微生物につＬＳての展開したＴ ＬＣプレート（バイオ−ＴＬＣ）のノ〈イオオートグラフイーにより画分を分析 する。以下のプールを作製する。各プールζこおける溶液を濃縮して水性とし、 凍結乾燥して以下の調製物を得る：プールＩ：（画分：下側コレクター５〜２５ ）調製物８４．１（２８゜４８９）； プール■：（画分：下側コレクター２５〜７９）ｍ吸物８４．２（１゜８５９） ； および プール■：（画分：下側コレクター８０〜１００；下側機械５０〜０；上側機械 １〜２０）調製物８４．３（０，２５９）。

薄層クロマトグラフィー分析（ブリンクマン（Ｂ　ｒｉｎｋｍａｎ）のシリカゲ ル；クロロホルム−メタノール９５：５（ｖ／ｖ）：エムー）レテウス・センダ （Ｍ、　１ｕｔｅｕｓ　５ｅｎｓ）についてのノイイオオー誹グラフィー）（± 以下のＲｆ値を与えた：　０．８（１０３８ｌｂ、）；　０．６（１０３８ｌｂ 、）；　０．５（１０３８１ｂｓ）；　０．２（１０３８ｌｂ、）；および０（ １０３エム・ルテウス・センダ（Ｍ、　１ｕｔｅｕｓ　５ｅｎｓ）に対する調製 物の能力値（Ｂｕ／ｍ９）は次のとおりである：２（調製物８４．１）；　６４ （調製物８４．２）；および２５６（調製物８４．３）。

Ｂ、シリカゲルクロマトグラフィー クロロホルム−メタノール（９７：３ｖ／ｖ）中のシリカゲル６００ｇよりカラ ムを調製する。前記の如くして得た調製物８４．２および８４．３を合し、無水 メタノール３１ｉ１２でトリチニレートする。濾過により不溶性のバイオ活性物 質を分離する（６００ｊ１９）。濾液を濾過助剤６０ｇおよびクロロホルム９７ ０Ｒ（ｌと混合する。混合物を濃縮して乾燥粉末とする。この残渣を該カラムの 頂部に加え、これを以下の如く溶出する。２０ｘＱずつの画分を収−集する。

１）クロロホルム−メタノール（９７：３ｖ／ｖ）：画分１〜８３７；２）クロ ロホルム−メタノール（９４：６ｖ／ｖ）：画分８３８〜１２８５；および ３）クロロホルム−メタノール（９０：ｌｏｖ／ｖ）：画分１２８６〜１６００ ゜ バイオ活性およびバイオ−ＴＬＣによって画分を分析する。以下のプールを作製 する。各プールを濃縮乾固して以下の調製物を得る：プールＩ：（画分２３０〜 ２９９）調製物１０６．１　（３０ｚｙ”）：プール■：（画分３００〜５００ ）調製物１０６．２　（４０ｎ）；プール■：（画分８５５〜９３０）調製物１ ０６．３（４０ｇｇ）および プール■：（画分９３１〜１０００）調製物１０６．４　（４ｏｚｙ）。

゛　薄層クロマトグラフィー分析（シリカゲル；クロロホルム−メタノール（９ ５：５）；エム・ルテウス（Ｍ、　１ｕｔｅｕｓ）についてのバイオオートグラ フィー）は以下のＲｆ値を与える：　０．５（１０３８１ｂｓ）；および０．２ （１０３８１ｂ、）。

ニス・ピオゲネス（Ｓ　、　ｐｙｏｇｅｎｅｓ）に対する調製物の能力値（Ｂｕ ／ｍｇ）は次のとおりである：１２８（調製物１０６．１）；　１００（調製物 １０６．２）；　＞１０２４（調製物１０６．３）；および３８０（調製物１０ ６．４）。エム・ルテウス・センズ（Ｍ、　１ｕｔｅｕｓ　５ｅｎｓ）に対する 調製物の能力値（Ｂｕ／ｚ９）は次のとおりである：９６（Ｘｉｌ製物１０６． １）；６４（調製物１０６．２）；　３８４（調製物１０６．３）；および（調 製物１０６．４）。

実施例３　向流分配法（溶媒ニジクロへ牛サンー酢酸エチルーアセトンー水（１ ：２：２：ｌｖ／ｖ））による調製物Ａの精製調製物Ａの３０ツトを合しく２０ ．５９．２１．１ｇおよび２０．８９）、前記の系の両相（各相１５５１ρ）に 溶解する。向流二重分配装置の上側（下相が機械に入る側）の試験管１８〜２５ に該溶液を添加する。

以下の移行を行う： １）６８回の移行（上相を収集する）；および２）１００回の移行（両相を収集 する）。

バイオ活性測定およびバイオ−ＴＬＣによって分配物を分析する。

以下のプールを作製する。各プールを濃縮して水性とし、凍結乾燥して以下の調 製物を得る： プールＩ：（画分：下側コレクター１〜３０）調製物９１．１（３４゜８ｇ）； プール■：（画分：下側機械３０〜０；上側機械１〜３０）調製物９１．２（２ ４０ｍｇ）； プール■：（画分：上側機械３５〜５０：上側コレクター１７０〜８０）調製物 ９１．３（３００１９）；およびプール■：（画分二上側コレクター７９〜２７ ）調製物９１．４゜薄層クロマトグラフィー分析（シリカゲル；クロロホルム− メタノール９５：５；エム・ルテウス（Ｍ、１ｕｔｅｕｓ）についてのバイオオ ートグラフィー）は次のＲｆ値を与える：　０．２（１０３８ｌｂ、）。前記Ｔ ＬＣは、調製物９１．３が主として１０３８１ｂ、および痕跡量の１０３８１ｂ 、を含有し、約３０００　ＢＬＩ／１９の対ｘｘ−ピオゲネス（Ｓ　、ｐｙｏｇ ｅｎｅｓ）能力を有することを示す。

実施例４　５０００ｆｆ発酵からの抗生物質１０３８１ｂの単離Ａ、セラトム（ ＣＥＬＡＴＯＭ）ＦＷ４０を濾過助剤として用いて全発酵物（収集ｐＨ６，９） を濾過する。ケーキを水５０００ｅで洗浄し、次いで各回メタノール６００１２ で４回トリチニレートする。４回のメタノール抽出物をプールし、濃縮して容量 ９０ｆｆとする。次いで等容量の酢酸エチルで水性濃縮物（ｐＨ７，０）を３回 抽出する。

３回の酢酸エチル抽出物を合し、濃縮して容量１５．５１２（アッセイ：約１０ ００　Ｂｕ／ｘＱ、ニス・ピオゲネス（Ｓ　、　ｐｙｏｇｅｎｅｓ）として調製 物Ｂを得る。

調製物Ｂをスケリソルプ（Ｓ　ｋｅｌ　Ｉｙｓｏｌｖｅ）　Ｂ　６０　Ｑと混合 する。混合物を室温にて２０時間放置する。濾過助剤を含有するフィルター上で の濾過によって不溶性物質（抗生物質１０３８１ｂ）を単離する。

濾液を捨てる。抗生物質１０３８　ｌｂを含有するケーキをスケリソルプ（Ｓ　 ｋｅｌ　１ｙｓｏｌｖｅ）　Ｂで洗浄し、次いでメタノール４Ｑずつで４回スラ リー化する。４回のメタノール抽出物を合し、溶液を濃縮乾固して調製物Ｃを得 る。

て不溶性物質を単離し、乾燥しく４７．３ｇ）、アッセイを行い約２０００　Ｂ 　ｕ／ｍｙを得る。

Ｂ、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣＸ装置：ウォーターズ（Ｗａｔｅｒ ｓ）ブレプ（Ｐｒｅｐ）５００Ａ；支持体：ウォーターズ（Ｗａｔｅｒｓ）Ｃ− １８逆相シリカ充填カラム；移動相ニアセトニトリル−水（４０：６０ｖ／ｖ） ；および波速：１５０ｒ１２／分）による調製物Ｃの精製前記の如くして得た調 製物Ｃ１，０９をアセトニトリル１００ｇｇおよび水１５０！ρと共に２時間撹 拌する。濾過によって不溶性物質を分離する（２５８ｇ９）。濾液をカラム中に 注入する。ＵＶディテクターによりクロマトグラフィーを追跡する。さらに、選 択した画分（各１５０ｍＱ）をバイオ活性についてテストしＴＬＣにより分析す る（シリカゲル；クロロホルム−メタノール１００　：　１０ｖ／ｖ；　ミクロ コ・ノカス・ルテウス（Ｍ　１ｃｒｏｃｏｃｃｕｓ　１ｕｔｅｕｓ）についてノ 寸イオオートグラフィー）。１０３８１ｂ、のみを含有する両分６３〜９６を合 し、濃縮して水性溶液１６００Ｊ２とする。この溶液を各回酢酸エチル６００貫 ａずつで３回抽出する。酢酸エチル抽出物を合し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、 濃縮乾固して生成物１２９ｇｇを得る。該生成物をジメチルスルホキシド２．５ ｍＱおよびメタノール２．５１１２に溶解する。

次いでこの溶液をエーテル２００ＪＩｅと混合する。沈澱した物質６１１９を特 性測定する。結果は後記にて報告する。

Ｃ０物理特性：１０３８１ｂ、の物理特性は第６表に示す。１０３８１ｂ、の抗 菌活性のスペクトルは第７表に示す。

実施例５　ブタにおいて発育を促進させるための抗生物質１０３８１ｂの使用 設備：加熱および換気装置が所望の養殖環境を維持するのに適当な設備中で各試 行を行った。各小屋には自動給餌器および乳首タイプの飲料供給器を備え付けた 。排泄物除去用の、小屋の一端の流水溝上の二キスパンデッドメタル薄板０．７ ４１’以外は、各小屋の床は固体コンクリートである。

動物：同数の健康な雌および去勢雄のハンプシャー×ヨークシャー交雑の５〜６ 週令離乳ブタを各試行で用いた。実験単位は４頭のブタ、雌２頭および雄２頭の 小屋よりなるものであった。各試行において、体重群により小屋のブロックにブ タを割り当て、ブロック内の個々の小屋にランダムに割り当てた（両性につき同 一手順）。小屋のブロックは養殖ができる位置にランダムに割り当て、処置はブ ロック内のブタの小屋にランダムに割り当てた。

食物および処置：約１８％の生蛋白質を含むコーン大豆ミールベースの食物が処 置を施すために薬剤を添加する基本食物であった。

適当量の１０３８１ｂを大豆ミール飼料中に予め混合してプレミックス１ｋｇ当 たり４４ｇの濃度とした。次いで該プレミックスを該食物と混合して食物１ｋｙ 当たり薬剤５５ｇ９活性の最終飼料レベルを得た。

データの解析：注目する変数は平均口体重増加（ＡＤＧ）で表わした体重増加、 消費飼料を体重増加で除して表わした飼料効率（Ｆ／Ｇ）、および各々が等しい 体重である場合のＡＤＧおよびＦ／Ｇにおけるブロック内改善値を合計すること によって計算した発育指標（Ｇｌ）である。

各変数についての薬剤からの応答を対照に対する各体重ブロック内で計算した。

例えば： ｔ−テストを用いて偶然差異の確率を評価した。試行および試行内ブロックに関 するモデルを用いて変動の解析から変動の評価を得た。

ブタ実行ふるい分は法により、薬剤を含有しないかまたは５５１！ｙ／に９で１ ０３８１ｂを含有する食料を２５６頭のヨークシャー×ハンプシャー交雑ブタに ２１日間摂取させた。薬剤処置は８ケ月間にわたって行った４回の試行において 試行当たり８のブロック（小屋当たり４頭のブタ）において表わした。ブロック 内比較から発育指標（Ｇ　Ｉ　）を計算して化合物についての体重増加および飼 料効率における改善を見積もった。このふるい分けにパスするには、化合物は少 なくとも７．５０Ｇｌを有さなければならず、Ｐ＜０．１０において有意にＯか ら異なっていなければならない。

１０３８１ｂはＰ＝０．００４でＧｌが２９Ｌ５２に等しく許容された。

第８表より、１０３８１ｂについての発育指標は正であって７．５の最小基準を 越えていることがわかる。第９表より、この応答が偶然に帰される確率は０．１ ０以下であることがわかる。

第１表　ストレプトミセス−アルギネンシスＮＲＲＬ−１５９４１のエフタフロ ム２上の色彩特徴１ Ｓ＝表面、Ｒ＝裏面 試験管中の培地上の増殖！は２８℃における７日間のインキ１ベーションの後に 写真にとった。色彩はＮＢＳの色票との比較によって決定した（ケリー、ケイ・ エル、およびディー・ビー、シュド（Ｋｅｌｌｅｙ、　Ｋ、　Ｌ、　、ａｎｄ　 Ｄ、　Ｂ、Ｊｕｄｄ、　）ａ　１９７６年。カラー。

ユニヴアーサル、ラングイッジ・アンド・ディクショナリー・オブ・ネイムズ。

ＮＢＳスピシイフィケイション・パブリケイション４４０、スーハーインテンデ ント・オブ・ドキニメンツ、Ｕ、Ｓ、ガバンメント・プリンティング・オフィス 、ワシントン、ディーシー２０９４２；およびＳＲＭ２０１６゜１９５８年ｌ５ ＣＣ−ＮＢＣセントロイド・カラー・チャーン。オフィス・オブ・スタンダード 中レファレンス・マチイアリアル、ルームＢ５１１、ケミストリー・ビルディン グ、ナショナル・ブ二ロー・オブ・スタンダーズ、ワシントン、ディーシー２０ ２３４）。

鵞ディエツ、エイおよびサイエル、ディー・ダブりニー（Ｄ　１ｅｔｚ。

Ａ、　ａｎｄ　ＴｈａｙｅｒＳＤ、Ｗ、）（編）１９８０年。Ｓ　Ｉ、Ｍスペシ ャル・パブリケイションＮｏ、６゜ソサイエティ・フォー・インダストリアル・ マイクロバイオロジー、アーリントン、バージニア州。

第２表　ストレプトミセス・アルギネンシスＮＲＲＬ　１５９４Ｓ＝表面、Ｒ＝ 裏面、Ｐ＝色素 １色彩の決定は２８℃で１４日間インキュベートしたプレート上の増殖体につい て行った。色彩はＮＢＳの色票と比較することによって決定した。（ケーリー、 ケイ・エルおよびディー・ビー、ジ二ド（Ｋｅｌｌｙ、　Ｋ、Ｌ、、ａｎｄ　Ｄ 、　Ｂ、　Ｊ　ｕｄｄ、　）、１９７６年、カラー、ユニバーサル・ラングイッ ジ・アンド・ディクショナリ・オブ・ネイムズ。ＮＢＳスピシフィケイション・ パブリケイション４４０゜スーパーインテンプント・オブ・ドキニメンッ、Ｕ、 Ｓ、ガバンメント・プリンティング・オフィス、ワシントン、ディーシー２０９ ４２；およびＳＲＭ２１０６．１９５８．ｌ５ＣＣ−ＮＢＳセントロイド・カラ ー・チャープ。オフィス・オブ・スタンダード・レファレンス・マチイアリアル 、ルームＢ５１１、ケミストリー・ビルディング、ナショナル・ビューロー、オ ブ・スタンダード、ワシントン、ディーシー２０２３４） 第３表　培養物の特徴１−一般的なストレプトミセス・アルギネＳ＝表面、Ｒ＝ 裏面、Ｐ＝色素、Ｏ＝他の特徴１デイエツツ、エイおよびサイヤー（Ｄｉｅｔｚ 、　Ａ、　ａｎｄ　Ｔｈａｙｅｒ）、ディー・ｆ−ｊす、−（Ｄ、Ｗ、）！、　 １９８０年。ニスアイエム・スペシャル・パブリケーシｇ７（ＳＩＭ　５ｐｅｃ ｉａｌ　Ｐｕｂｌ、　）Ｎｏ、６゜ソサイエティ・フォー・インダストリアル・ ミクロバイオロジー（Ｓｏｃ、　ｆｏｒ　Ｉ　ｎｄ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、　 ）、アーリントン（Ａ　ｒｌｉｎｇｔｏｎ）、バージニア州。

！試験管内の培地上の増殖は２８℃における７日間のインキ二ベーションの後、 写真をとった。色彩はＮＢＳ色票と比較して決定した。（ケーゾー、ケイ、エル 、およびディー・ビー・シュド（Ｋｅｌｌｙ。

Ｋ、　Ｌ、、ａｎｄ　Ｄ、Ｂ、Ｊｕｄｄ、　）。１９７６゜カラー。ユニバーサ ル・ラングイッジ・アンド・ディクショナリ・オブ・ネイムズ。ＮＢＳスピシフ ィケイション・パブリケーシシン４４０゜スーパーインテンプント・オプ・ドキ ュメンツ、Ｕ、Ｓ、ガバンメント・プリンティング・オフィス、ワシントン、デ ィーシー２０９４２；およびＳＲＭ２１０６．１９５８．１ＳＣＣ−ＮＢＳセン トロイド・カラー・チャーン。オフィス・オブ・スタンダード・レファレンス・ マチイアリアル、ルームＢ３１１、ケミストリー・ビルディング、ナショナル・ ビューロー・オブ・スタンダード、ワシントン、ディーシー第４表　ニス・アル ギネンシス（Ｓ　、　ａｒｇｉｎｅｎｓｉｓ）Ｎ　ＲＲＬ　−１５９４１とＳ、 ピリドクロモゲネス・亜種・スルホミチニ（Ｓ、　ｖｉｒｉｄｏｃｂｒｏｍｏｇ ｅｎｅｓ　ｓｓ、　ｓｕＨｏｍｙｃｉｎｉ）ＡＴＣＣ２９７７６およびニス・ピ リドクロモゲネス（Ｓ、ｖｉｒｉｄ。

ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｅｓ）Ａ　Ｔ　ＣＣ１４２０１との比較１デイエツツ、エイ ・アンド・サイヤー（Ｄｉｅｔｚ％Ａ、　ａｎｄＴ　ｈａｙｅｒ）、ディー・ダ ブリ、−（Ｄ、Ｗ、）編、１９８０゜ニスアイエム・スペシでル・パブリケーシ ョン（Ｓ　ＩＭ　５ｐｅｃｉａｌ　Ｐｕｂｌ、　）Ｎｏ、６゜ソサイエティ・フ ォー・インダストリアル・ミクロバイオロジー（Ｓ　ｏｃ、ｆｏｒ　Ｉ　ｎｄ、 　Ｍ　１ｃｒｏｂｉｏ１．　）、アーリントン（Ａｒｌｉｎｇ−ｔｏｎ）、バー ジニア州。

第５表　バイオアッセイ：濾過、抽出ケーキ１．ｚス−ルテア（Ｓ、　１ｕｔｅ ａ）感受性ゾーン（ｍｍ） ＦＳ　ｌ／２　１／４　１／８　１／１６清澄発酵物　２６　２３　２１　１８ 　痕跡量メタノール−１２９２７２４２１１７ メタノールー２　２７　２５　２３　２０　１７メタノールー３　２４　２１　 １９　１７　−メタノール−４２０１５０００ ２、ニス・ピオゲネス（Ｓ　、　ｐｙｐｇｅｎｅｓ）清澄発酵物　２５　２３　 ２１　１ｇ、５　１７．５メタノール−１３０，５３０２８２５，５２３メタノ ール−２２９，５２８，５２６２４・２２メタノール−３２７２５２４２２− 第６表　抗生物質１０３８１ｂ、の特性測定外観：アモルファス状着色固体 溶解性ニジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシドおよび低級アルコールに 溶解。酢酸エチル、アセトンおよびアセトニトリルにあまり溶解せず。エーテル および飽和炭化水素溶媒に不溶。

元素分析値データ（％）：　Ｃ，４８，３３；　Ｈ，４，５８；　Ｎ、１５．１ ４；　Ｓ、５．１６：　Ｏ（引算により、２６．７９）実験酸二元素分析値より Ｃ，、、、Ｈ，、、、、、Ｎ、、、Ｏ，、、、Ｓの式が導かれる。分子が２個の 硫黄原子を含有すると仮定すると、１０３８１ｂ、についての分子式はＣ，、Ｈ ，、Ｎ、、０．、Ｓ。

（分子量１２２５）となる。

融点：約１９５℃にて、該物質はガス発生を伴って分解し始める。

紫外スペクトル（λｔａｘ、メタノール）：２４３．３１６赤外スペクトル（ｅ ＠’、鉱油マル）：　２９６５．５．２８５１．６．１４６５．７．１４９５． ６．１３７７．０．１６６３．５．１５２６．５．１６３３．６．３３３７．７ ．１３６８．３．１３４１．３．７２１．２．１１９７．６．１０８２．０．１ ３０７．６．１０２１．２．１０３９．５．７４９．２．１２９１．２．１２４ ９．７．１１２２．５．１１０２．２．８８９．０．１１４７．５．９９７．０ 抗菌スペクトル：抗生物質１０３８１ｂ、は主としてダラム陽性菌および嫌気菌 に対して活性である（クロストリジウム・ベルフリゲンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉ ｕｍ　ｐｅｒｆｒｉｇｅｎｓ）：バクテロイデス・フラギリス（Ｂ　ａｃｔｅｒ ｏｉｄｅｓ　ｆｒａｇｉｌｉｓ））。それは他の抗生物質に対して耐性のスタフ ィロコッカス・アウレウス（Ｓ　ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓＸ スタフィロコッカス・アウレウスＴＪＣ３６６５；スタフィロコッカス・アウレ ウスＵＣ６６８５）に対しても活性である。

抗菌ｉｎ　ｖｉｔｒｏテスト：グラム陽性およびグラム陰性菌に対する抗生物質 １０３８１ｂ、のｉｎ　ｖｉｔｒｏテスト精果は第７表に示す。

ペーパークロマトグラフィー：Ｒｆ（溶媒系）；０．５〜０．９（ストリークを ひく）（１−ブタノール／水８４／１６）：　０．５〜．０９（ストリークをひ く）（１−ブタノール／水８４／１６＋０．２５％ｐ−）ルエンスルホン酸）； 　０．９（１−ブタノール／酢酸／水／２／１／１）；　０．９（１−ブタノー ル／水８４／１６＋２％ピペリジン）；０．１〜０゜５（ストリークをひく）（ １−ブタノール／水４／９６）；０．１〜０．５（ストリークをひく）（１−ブ タノール／水４／９６＋０．２５％ｐ−）ルエンスルホン酸）；０．１〜０．５ Ｍリン酸カリウムｐＨ７，４）；　０．１〜０．３　（水／メチルイソブチルケ トン／アンモニウム２００／２０／１）；　０．９（）ルエン／メタノール／水 １／１／２）；　ｏ。

９（１−ブタノール／水８４／１６−＋２，０％ｐ−）ルエンスルホン酸）：　 ０．９（メタノール／１５％Ｎ　ａ　Ｃ（１（Ｈ＊抗生物質１０３８１ｂ、のｉ ｎ　ｖｉｖｏテスト：抗生物質１０３８１ｂ、をストレプトコッカス・ピオゲネ ス（Ｓ　ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｙｏｇｅｎｅｓ）およびスタフ４ｏコツ カス・アウレウス（Ｓ　ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ）誘発マウ ス乳腺炎に対しｉｎ　ｖｉｖｏテストを行った。皮下投与した場合、該抗生物質 はニス・ピオゲネス感染マウスを保護し、ＣＤ、。は１　、２５　ｍ９／ｋｙで あった。それはニス・アウレウス誘発マウス乳腺炎テストにおいて活性であり、 ＰＤ、。は１．８（対乳腺炎）および６．２（対ニス・アウレウス）ｍ９／ｋｇ であった。

発育促進についての抗生物質１０３８１ｂ、複合体のテスト：ブロイラーにおい て抗生物質１０３８１ｂ、複合体を発育促進および／または飼料変換指示につい てテストした。抗生物質１０３８１ｂの平均発育指標（体重増加／３＋飼料変換 ）は３以上であって有意に（Ｐ≦０．２０）Ｏより大であった。かくして第１次 ふるい分けの基準により、抗生物質１０３８１ｂはパスした。（平均発育指標は 対照（薬剤添加なくして摂食させたひよこ）に対する発育の改善を測定するもの である。） 第７表　抗生物質１０３８１ｂ、の抗菌ｉｎ　ｖｉｔｒｏテスト（最小阻止濃度 （ＭＩＣ）） （ＭＩＣ培地：ＭＨＡ） 生物　培地’；：　ＭＩＣ（ｇｃ９／Ｊ）エンテロバクタ−・クロアカニ　ＵＣ ９３８１＞　２５６（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ　ｃｌｏａｃａｅ）エフテロバ クター・クロアカニ　ＵＣ９３８２２５６クレブシエラ・オキシト力　ＵＣ９３ ８１＞　２５６（Ｈｅｂｓｉｅｌｌａ　ｏｘｙｔｏｃａ）クレブシェラ・オキシ ト力　ＵＣ９３８４２５６エシエリヒア・コリ　ＵＣ９３７９２５６（Ｅｓｃｈ ｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ）エシェリヒア・コリ　ＵＣ９３８０２５６スタフイ ロコツカス・アウレウス　Ｌ：Ｃ６６７５１（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　 ａｕｒｅｕｓ）スタフィロコッカス・アウレウス　ＵＣ３６６５１スタフイロコ ツカス・アウレウス　ＵＣ６６８５１ストレプトコツカス・ピオゲネス　ＵＣｌ ３２　０．１２５（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｙｏｇｅｎｅｓ）ストレプ トコッカス・ニニーモニエ　ＵＣ４１０，１２５（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ 　ｐｎｅｕａｏｎｉａｅ）ストレプトコッカス・フェカリス　ＵＣ６９４０，２ ５（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｆａｅｃａｌｉｓ）エシェリヒア・コリ　Ｕ Ｃ３１１＞２５６クレブシエラ・二二−モノエ　ＵＣ５ｇ　１２ｇ（Ｋｌｅｂｓ ｉｅｌｌａ　ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）シウドモナス・アエルギノーザ　ＵＣ９１ ９１＞２５６（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）シウドモナス ・アエルギノーザ　ＵＣ６４３２＞　２５６セラチア・マルセセンス　ＵＣ６８ ８８＞　２５６（Ｓｅｒｒａｔｉａ　ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）シトロバクタ−・ フレンディイ　ＵＣ３５０７＞　２５６（Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ　ｆｒｅｕｎ ｄｉｉ）プロテウス・ブルガリス　ＵＣ３０２６４２５６（Ｐｒｏｔｅｕｓ　ｖ ｕｌｇａｒｉｓ）第８表　試行による体重増加および飼料変換ならびに平均発育 指標における改善 平均改善 試行　処理　ＡＤＧ　Ｆ／Ｇ　発育指標１　１０３８１ｂ　２１．９７　７．８ ８　２９．８５２　１０３８１ｂ　１４．４８　ｇ、１１　２２．５９３　１０ ３８１ｂ　１９．２６　４．３７　２３．６３４　１０３８１ｂ　２９．２１　 １２．７８　４１．９９計　１０３８１ｂ　２１．２３　１２９　２９．５２第 ９表　統計量およびｔ−テスト ０〜２１日 ０３８１ｂ 平均発育指標　２９．５２ 確率平均は＜＝０．ＯＯ，０００４ 変動成分： 国際調査報告 国際調査報告 ＩＪｓ　８７０１４５０

Claims (16)

【特許請求の範囲】
1. １．ストレプトミセス・アルギネンシス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓａｒｇｉｎ ｅｎｓｉｓ）株、ＮＲＲＬ１５９４１およびその突然変異体で発酵することより なり、水性栄養培地が好気性条件下で同化可能な炭素源および同化可能な窒素源 を含有することを特徴とする抗生物質１０３８１ｂの製法。
2. ２．該発酵を約１５〜５０℃の温度および約６．０〜９．０のｐＨで行う請求の 範囲第１項記載の製法。
3. ３．該温度が約２０〜３５℃であってｐＨが約７．２である請求の範囲第２項記 載の製法。
4. ４．該温度が約２４〜３２℃である請求の範囲第３項記載の製法。
5. ５．該栄養培地が２〜３重量％の炭素源および２〜３重量％の窒素源を含有する 請求の範囲第１項記載の製法。
6. ６．該発酵が約２〜１０日のうちに完了する請求の範囲第１項記載の製法。
7. ７．抗生物質１０３８１ｂを単離する請求の範囲第１項記載の製法。
8. ８．該株がストレプトミセス・アルギネンシスＮＲＲＬ１５９４１である請求の 範囲第１項記載の製法。
9. ９．発育を促進するのに有効な量の抗生物質１０３８１ｂを動物に投与すること を特徴とする肉生産動物において発育を促進する方法。
10. １０．抗生物質を動物の飼料に添加することにより抗生物質１０３８１ｂを投与 する請求の範囲第９項記載の方法。
11. １１．抗生物質１０３８１ｂの濃度が動物の飼料１ｋｇ当たり約０．５〜約５５ ｍｇである請求の範囲第１０項記載の方法。
12. １２．該肉生産動物がプロイラーのひなである請求の範囲第１１項記載の方法。
13. １３．抗生物質１０３８１ｂの濃度がひなの飼料１ｋｇ当たり約０．５〜約１１ ｍｇである請求の範囲第１２項記載の方法。
14. １４．該肉生産動物がプタである請求の範囲第１１項記載の方法。
15. １５．抗生物質１０３８１ｂの濃度がプタ飼料１ｋｇ当たり約１０〜約５５ｍｇ である請求の範囲第１４項記載の方法。
16. １６．実質的にＮＲＲＬ−１５９４１と同定される株であるとして特徴づけられ る徴生物ストレプトミセス・アルギネンシス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ａｒ ｇｉｎｅｎｓｉｓ）の生物学的に純粋な培養物。