JPH01500899A - 生物適合性インプラント - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 生物適合性インブラント この発明は、ひとまたは動物　医学的適用を対象とする、非経口投与され得る生 物適合性インブラントに関する。

さらに詳しくは、この発明は、ひとを含む動物に対する、ホルモン類を含むペプ チド類または蛋白質の投与に用いられる生物適合性インブラントであって、実質 的に長い期間にわたり前記ペプチド類または蛋白質の連続的で均一な放出をもた らすインブラントに関する。この明細書における「生物適合性」は、インブラン トの全成分が、生理学的に許容し得るものであることを要し、また移植時に有害 な組織応答を誘発してはならないことを意味する。インブラントは非経口放出に 適した固体装置であり、例えば直径ｌａｘ未満ないし数ＣＭのサイズ範囲であり 得るが、最も一般的には直径数３！トである。

この発明の一適用例は、特定の季節に繁殖する動物、特にひつじにおいて発情休 止期間に排卵を誘発する方法および手段の提供に存する。特に本発明のこの９ｍ は、皮下投与され得る生物適合性インブラント手段による前記動物に対する排卵 調節ホルモン類の投与に関する。

オーストラリアのある地域では、極上子羊（ラム）の生産者は好んで春季に羊の 群を合わせる。この持合したボーダーレスター×メリノ種の維手は、年間および 一年以内に一定しない繁殖作用の兆候を呈する。この結果、将来子羊を産む維手 の数および子羊の生まれる時期が共にかなり不確定となり得、子羊の分娩が延び ることも多くなる。大きな広がりのある分娩期間は、管理が困難であり得、他の 農作業に支障を来し、結果的に多くの場合数週間光に分娩する維手に対する飼料 を浪費することになる。

したがって、排卵および繁殖性発情をホルモンにより誘発する安価で有効な技術 が要望される。かかる技術を用いると、生産者は発情休止期でも繁殖性交尾を確 実に達成することが可能となる。その結果、子羊の分娩が簡潔化し、また早く成 長した子羊には高い値段がつくため、子羊の群の統制が改良されるという点で有 利となり得る。

下垂体からの黄体形成ホルモン（ＬＨ）の放出は、視床下部の正中隆起からのゴ ナドトロピン放出ホルモン（Ｇ　ｎＲＨ）のはく動性放出により制御される。Ｇ ｎＲＨはまた、ゴナドトロピン放出因子、黄体形成ホルモン放出因子、黄体形成 ホルモン放出ホルモンおよびルリベリンとしても知られており、下記のアミノ酸 配列を有する。

ピロＧ　１ｕ−Ｈ１ｓ−Ｔ　ｒｐ−Ｓ　ｅｒ−Ｔ　ｙｒ−Ｇ　Ｉｙ−Ｌ　ｅｕ− Ａ　ｒｇ−Ｐ　ｒｏ−Ｇ　１ｙ−Ｎ　ＨｔＧｎＲＨ分泌の結果として、下垂体か らのＬＨのはく動性分泌性放出は、末梢血におけるＬＨの一時的上昇（はく動） をもたらす。これらのはく動の頻度は、羊の発情周期の黄体相期間の方が卵胞相 期間よりも相対的に低くなる。羊における発情休止（非繁殖）期の間、ＬＨのは く動頻度は他のどの時期よりも低い。排卵前期に起こる主たる内分泌事象は、Ｌ Ｈ分泌のはく動回数の増加およびエストロゲンの末梢血漿濃度の上昇である。前 記事象は血漿プロゲステロン濃度の低落を導く黄体の退行により誘発される。卵 胞相においてＬＨおよびエストロゲンの分泌が増加すると、排卵を誘発するＬＨ の大規模放出（排卵前のＬＨサージ）が起こる。

視床下部−下垂体単位に対するエストロゲンのフィードバック作用は季節により 変化するため、発情休止期中ＬＨのはく動頻度は低い状態にある。すなわち、こ の時点では、ＬＨおよびエストロゲン分泌の周期的増加または排卵前のＬＨサー ジが無いため、排卵は起こらない。

発情休止期の維手を反復パルスのＧｎＲＨで処理することにより、排卵前のＬＨ サージを誘発し、排卵を起こすことが可能である。さらに、ＧｎＲＨ／ＬＨシス テムは一般にはく動性分泌パターンを特徴とするが、はく動力式ではなく一定方 式で低用！！（２５０ｎｇ／時）のＧｎＲＨを注入することにより発情休止期の 維手においてＬＨサージを促進し、排卵を起こすことが可能である。この処置の 前にある期間プロゲステロン処置を行うと、処置された維手の大部分は発情反応 を示し、交尾すれば妊娠することができる。

発情休止期の維手において繁殖性発情を誘発するこの方法の主な魅力は、処置段 階が短く、動物を一週間以内のＧｎＲＨ処置で交尾させることである。最近の科 学技術においても商業的展開を阻む主な問題点は、ＧｎＲＨの放出方法である。

これは、浸透圧ミニポンプ（アルゼット、アルザ・コーポレーション）の使用に より達成され得るが、これらは、非常に高価なため農家での使用は不適当であり 、また外科的な皮下挿入および回収を必要とする。

したがって、プロゲステロン／プロゲスタゲン前処置と組合わせ、適当な速度で ＧｎＲＨを放出して発情休止期の維手に排卵を誘発する比較的安価で有効な生物 適合性放出システムが明らかに要望されている。

単−投与後長期間に亙るある種の薬剤の連続的放出は、臨床または獣医学分野で の実践に顕著な実用的利益を与え得ることが充分評価され、組成物も既に開発さ れて、経口投与後［例えば、［レミントンズ・ファーマシューティカル・サイエ ンシーズＪ（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　５ｃｉ ｅｎｃｅｓ）、マッグ・７（ブリッジング−カンフ＜ニー、イーストン、ペンシ ルベニア、アメリカ合衆国、第１５版、１９７５年、１６１８−１６３１頁参照 ］、非経口投与後［同書、１６３１−１６４３頁］、および局所投与後（例えば 、イギリス国特許第１３５１４０９号参照）の、数種の有用な薬剤のこれまでよ り長い放出を可能にした。

非経口投与の適当な方法は、薬剤を含有する固体物質、例えばペレットまたはフ ィルムの皮下投入または内植であり、多様な内植可能な装置が記載されている。

特に、多くの薬剤に用いられる、長い薬剤放出を提供する適当な内植可能な装置 は適当なポリマー中に薬剤を封入するか、またはかかるポリマーマトリックスに 薬剤を分散させることにより達成され得ることが知られている。

持続放出製剤に使用される適当なポリマーは充分知られており、水性の生理学的 タイプの環境に置かれると加水分解により徐々に分解されるポリエステル類が含 まれる。使用された特定のポリエステル類はヒドロキシカルボン酸誘導体であり 、多くの先行技術はアルファーヒドロキシカルボン酸、特にラセミ体および光学 活性体の両形態の乳酸およびグリコール酸に由来するポリマー類並びにそれらの コポリマー類を指向している。例えば、米国特許第３７７３９１９号および同第 ３８８７６９９号、ジャブカニッツ等、「コントラセプションＪ（Ｃｏｎｔｒａ ｃｅｐｔｉｏｎ）、１９７３年、８巻、２２７−２３４頁、アンダーラン等、同 書、１９７６年、１１巻、３７５−３８４頁、クイズ等、「ライフ・サイエンシ ーズＪ（Ｌｉｆｅ　５ｃｉｅｎｃｅｓ）、１９７６年、１９巻、８６７−８７４ 頁、ウッドランド等、「ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリーＪ（Ｊ ｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ）、１９７３年、 １６巻、８９７−９０１頁、ヨールス等、「ブレタン・オブ・ザ・バレンチラル ・ドラッグ・アソーシエーションＪ（Ｂｕｌｌｅｔｉｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｐａｒ ｅｎｔｅｒａｌ　Ｄｒｕｇ　Ａｓ５ｏｃｉａｔｉｏｎ）、１９７６年、３０巻、 ３０６−３１２頁、クイズ等、［ジャーナル・オブ・ファーマシ−・アンド・フ ァーマコロジーＪＱｏｕｒｎａｌ　ｏｆＰｈａｒｍａｃｙ　ａｎｄ　ＰｈａｒＩ ｌｌａｃｏｌｏｇｙ）、１９７８年、３０Ｌ６８６−６８９頁および１９７９年 、３１巻、２０１−２０４頁参照。

オーストラリア国特許明細書第７９９８６／８２号は、ポリラクチドおよび酸安 定性ポリペプチドホルモンから成る、インブラントを含む連続放出組成物を記載 している。この明細書は、適当な分子量のポリラクチドの選択によりインビボで インブラントからのポリペプチドの連続放出の提供が可能となる方法を記載して いる。

一般に、前記出願に記載されたインブラントは、投与後にいわゆる「デッドフェ ーズ」、すなわち本質的に活性ポリペプチド成分が放出されない期間を示すこと が多い。連続放出は、通常数日間に及ぶデッドフェーズの終結後にのみ起こる。

先行技術のインブラント組成物に伴い得るさらに別の問題は、「ダンピング」、 すなわち比較的短期間で実質的比率の活性成分が早期において比較的突然放出さ れることであり、続いてインブラントの残りの有効期間に亙ってゆっくりとした 、それまでより均一な放出がみられる。

別の方法は、前記のいわゆる「ミニ浸透圧ポンプ」の使用である。

しかしながら、これらの装置は満足すべき放出制御特性を与え得るが、それらは 比較的高価である。またそれらは非生物分解性であり、外科的内植および除去を 必要とする。

この発明は、所望の期間に亙り実質的一定速度でホルモン類を含むペプチド類ま たは蛋白質の連続放出をもたらし、顕著なデッドフェーズまｆ二はダンピングを 一切伴わない生物適合性インブラントの提供を目的とする。

少なくとも部分的に上記必要条件を満たすインブラントが、容易に入手され得る 材料および錠剤製造に関する既知先行技術において既に使用されている技術を用 いて製造され得ることが判った。

この発明によると、非経口投与された場合実質的に連続方式でペプチドまたは蛋 白質を放出する医薬用または獣医学用インブラントであって、透過性、膨潤性で あり、正常な生理学的ｐＨにおいて非破裂性、不溶性であり、インブラントの有 効期間に分解することのないポリマーコーティング内にペプチドまたは蛋白質お よび賦形剤を含んで成り、前記コーティングが放出速度制限バリアを形成し、イ ンブラント成分の全部が生物適合性であることを特徴とするインブラントが提供 される。

賦形剤は、水溶性もしくは非水溶性材料または水溶性および非水溶性材料の混合 物であり得る。

非水溶性賦形剤を使用する場合、その機能の一つは、インブラント内の他の材料 、すなわち蛋白質またはペプチドおよび水溶性賦形剤（使用する場合）の溶解を 制御することである。これは、非水溶性材料が可溶性成分による水分の吸収およ び前記成分の溶解を阻むことにより溶解速度に影響を及ぼす結果であると信じら れる。好ましい賦形剤は燐酸カルシウムであるが、錠剤製造技術に熟練しておれ ば他の適当な賦形剤も使用され得ることは自明の理である。賦形剤の型および相 対比率を変えることにより、特定のペプチド類または蛋白質の放出速度を変化さ せることが可能である。

好ましい形態では透過性コーティングは本質的に中性である。ポリマー性コーテ ィングが本質的に中性であると記載する場合、イオン化可能基がポリマー鎖に存 在しないことを意味する。すなわち前記記載は、エマルジョンポリマー化による ポリマー分散液の製造における通常の始動残基および慣用の界面活性剤の存在余 地があることを示す。コーティングの本質的中性特性はイオン化可能基の存在す るペプチド類および蛋白質の透過を助けるものと思われる。

「透過性」は、水（または生理学的液体）および蛋白質またはペプチドがコーテ ィングを通過し得ることを意味する。透過性コーティング材料の機能は、蛋白質 またはペプチドの回りに放出速度制限バリアを形成することである。適当な透過 性の材料を選択することにより、水または生理学的液体がマトリックス中へ移入 する速度およびそこに生成した水溶液のマトリックスから移出する速度を制御す ることができる。したがって、マトリックスからの蛋白質またはペプチドの放出 速度を制御することになる。特に好ましいコーティング材料は、ポリ（メタ）ア クリル酸エステルに基づく中性コポリマーである。

特に適当なコーティング材料の一つは、「ニードラジット・イー・３・オー・デ ィー」（ローム・ファルマ・ゲゼルシャフト・ミツト・ベシュレンクテル・ハフ ラング）、アクリル酸エチルおよびメタクリル酸メチルのコポリマーの水性フィ ルム形成分散液である。このコーティングは膨張可能である。フィルム形成ポリ マー粒子の水性分散液から製造されたコーティングが好ましい。コーティングの 透過性は、コーティングの厚さおよびポリエチレンまたはグリコールのような水 溶性材料の含有または粘土のような鉱物性増量剤粒子の含有により変化し得る。

好ましくはコーティングの厚さは、２゜５闘のインブラントの場合インブラント の約１〜２０重量％のコーティングに相当する３−６０μ友である。コーティン グの透過性はまたコーティングが膨張可能であることによっても変化し得ると思 われ、好ましい具体例ではコーティングは膨張可能であることを要する。

「膨張可能な」という語は、生理学的液体と接触して置かれた場合コーティング の体積が増加することを意味する。

−皮形成されると、この発明のインブラントは、任意の適当な公知技術、例えば 筋肉内または皮下注射、または常用の臨床または獣医学技術を用いた外科的皮下 内植により、処置が望まれる動物体に配置され得る。

前述したことから、この発明の特に興味深い具体的適用例は、ペプチドホルモン ＧｎＲＨの羊に対する投与である。しかしながら、この発明はこの特定適用例に 限定されず、適当なペプチドまたは蛋白質についても使用され得るが、ただし主 な必要条件は活性成分がインブラントのコーティング層を通って拡散または移動 可能であることを要する点である。一般的に、約５ｏｏｏｏダルトン以下、さら に限定すれば１０００〜３００００ダルトンの分子量を有するペプチド類または 蛋白質が適当である。例として、前記ＧｎＲＨ以外に、表皮成長因子（ＥＧＦ） 、黄体形成ホルモン（ＬＨ）および成長ホルモン（ＧＨ）についてもこの発明に よるインブラントに投入し、放出させると好結果を示した。プロラクチンは別の 適当なペプチドである。

以下、実施例によりこの発明のさらに詳しい具体的な説明を行う。

（部および比率は全部重量に関する。）添付図面の説明を行う。

第１〜３図は、それぞれ非被覆インブラントおよびこの発明による被覆インブラ ントからのＥＧＦ、ＬＨおよびＧｎＲＨのインビトロ放出速度を示すグラフであ る。

第４図および第５図は、この発明に従いそれぞれ４％および９％のコーティング を施された５種の各インブラントのバッチからのＧｎＲＨのインビトロ放出速度 を示すグラフである。

第６図は、非被覆インブラントおよびこの発明に従い被覆されたインブラントか らのＨＧＨのインビトロ放出速度を示すグラフである。

第７図は、浸透圧ミニポンプおよびこの発明によるインブラントからのＧｎＲＨ のインビトロ放出速度を比較するグラフである。

実施例１ インブラントの一般的製造方法。

水不溶性賦形剤（例、燐酸カルシウム）を、最終生成物における必要な用量単位 の供給に充分な量の蛋白質またはペプチドと充分混合する。普通、蛋白質または ペプチドは、混合を容易にすべく溶液または分散液の形を呈する。

水溶性賦形剤（例、乳糖）を使用する場合は、次にこれを他の望ましい添加剤、 例えばステアリン酸マグネシウムのような滑沢剤と一緒に加え、混合して乾燥粉 末を生成する。次に、前記粉末を所望のサイズおよび形を有する錠剤形状の「核 （コア）」に圧縮成型する。

次いで圧縮成型されたコアを、必要なコーティングの厚さを有するインブラント の製造に充分な量のコーティング材料の溶液または分散液を噴霧することにより パン・コーター中で被覆する。一般的には、インブラントは約３０Ｒ９の重量お よび約２　、５　ｘＭの直径を有する。

実施例２ 放射性ヨウ素化ＥＧＦを含有するインブラント。

実施例１の一般的方法を用いて、下記の処方に基づきインブラントコアを製造し た。

９８％　（燐酸カルシウム（７６％） 乳糖（２４％）） ２％　ステアリン酸マグネシウム 製造されたインブラントは３１！９の平均重量を有し、４．９６μ９のＥＧＦお よび０．２μＣｉのＩ”’−ＥＧＦを含有していた。それらを０．２．４．９． １２および１５（重量）％の量のユードラジツト・イー・３０・ディーにより被 覆した。

１吋の胎児うし血清（ＲＰＭ　Ｉ　１６４０中ｌＯ％）中にインブラントを配置 することにより、放出速度を測定した。様々な時点で液体全部を取り出して計数 することにより放出されたＩ”５−ＥＧＦの量を測定した。１ミリリツトルの新 鮮な液体を試料採取後再び置いた。様々なコーティングの厚さくインブラントの 重量％として表す）を有するインブラントについて、異なる時点で放出されたＥ ＧＦの累積パーセンテージとして第１表および第１図に結果を示す。

実施例３ 放射性ヨウ素化ＬＨを含有するインブラント、インビトロ放出。

個々のインブラントからのＬＨの放出を様々なコーティングレベルで測定した。

実施例２と同様の方法を用いて、ＬＨの量をＲＩＡ（ラジオイムノアッセイ）技 術により測定した。放出されたＬＨのパーセンテージを表にしく第２表）、第２ 図に示した。結果は、非被覆インブラントが最大速度でＬＨを放出したこと、お よびコーティングの厚さを変えることにより放出速度の制御が可能であることを 示す。

実施例４ ヨウ素化ＧｎＲＨを含存するインブラント、インビトロ放出。

非被覆インブラントおよび様々な厚さのコーティングを有する被覆インブラント からの１　”’−ＧｎＲＨの放出を測定した。放出されたＧｎＲＨのパーセンテ ージの平均を５種のインブラントから算出し、表に示しく第３表）、第３図に図 示する。結果は、放出速度がコーティングにより抑制され、コーティングの厚さ を変えることにより、広範囲に亙って４箇月ないしｌＯ箇月までの期間制御され 得ることを示す。

放出されたＧｎＲＨの試料を分析して遊離■■５の量を測定した。

採取された全試料において遊離ヨウ素は８％未満の活性を立証し、放射性標識さ れたペプチドがインタクトであることを示していた。

第３図は平均放出を示す。放出速度にかなりの変化があった。第４および５図は 、４および９％コーティングを有する５種のインブラントから得られた結果を示 す。示された一般的傾向は、コーティングの量の増加に従い放出速度が変化しゃ すいことであった。

第３表　２９８日間にわたるＧｎＲＨのインビトロ放出５％放出は５種のインブ ラントにおける平均値である。

６　４２．２　２．１ ２２　７０．４　１６＋０ ３０　８２．９　２３．７ ４Ｂ　９０，５　３８．４ ９７　９４．２　６２．３ １６８　９５．９　７８．４ ２１Ｂ　ｉｏｏ、４　８４＋７ ２６５　−　１０１．６ 実施例５ 放射性ヨウ素化ひと成長ホルモン（ＨＧＨ）のインビトロ放出。

インブラントからのＩ”−ＨＧＨの放出を２９日に互って測定した。非被覆イン ブラント並びに３．６．９および１２％（重量）のポリマーフィルムにより被覆 したインブラントを使用した。放出されたＨＧＨのパーセンテージを表に示しく 第４表）、第６図に表す。

放出データは各コーティングレベルにおいて５種のインブラントについて測定さ れた平均値である。結果は、コーティングレベルがインブラントからのＨＧＨの 放出を遅らせること、およびコーテイング量を変えることにより放出速度の制御 が可能であることを立証していた。

第４表　２９日間にわたるＨＧＨのインビトロ放出。

％放出は５種のインブラットにおける平均値である。

２２．５　１０．３ ３０．０　１１．８ ４７．５　１３．３ ９４．５　１４．９ ２６３．０　１フ、３ ４３３．０　２０．２ ６９７．０　２２．８ ２２．５　７．５　１．６　０．８　０．６３０．０　７Ｌ９　２．３　１．２ 　０．９４７．５　８．４　３．５　２．５　２．０９４．５　９．Ｌ　５．０ 　４．２　３．８１６９．５　９．９　６．３　５，５　５．２２２１．５　１ ０．５　７，０　６．２　５．９２６３．０　１１．０　７．６　６．７　６． ５４３３−０　１２．１　９．０　７．９　７．７６９７．０　１３．４　１０ ．４　９．０　８．７実施例６ ＧｎＲＨインブラント、インビトロ放出。

実施例１の一般的方法を用い、使用したペプチドがＧｎＲＨであること以外は実 施例２の記載と同様の処方に基づきインブラントを製造した。製造されたインブ ラントは３１Ｒ９の平均重量を有し、０．１．２５．２または４％のニードラジ ット・イー・３０・ディーにより被覆された。下記第５表に記載の通り、幾つか のインブラントは、１２または２４μ９のＧｎＲＨを含有していた。他の被覆お よび非被覆インブラントは共にＧｎＲＨを含まなかった。

ハーネス（ｈａｒｎｅｓｓｅｄ）の精管切除した子羊を用いて発情休止期間に向 かう発情周期について、約３００頭の純粋なコリゾール種の維手にモニターを行 った。自然の周期が１１月初旬に１０％未満の群に観察された場合、全維手に内 視鏡検査を行って卵巣機能を評価した。２００頭の無排卵の維手を試験に選んだ 。これらの維手にプロゲスタゲン含浸スポン′ジペツサリーを与えた。内植の１ ０日後、スポンジ除去時に、１９−２０動物から成る群に第５表記載に従い皮下 インブラント処置を行った。第６表記載の実験スケジュールに従い処置を施し、 観察を行った。

結果を第７および８表に示し、下記の観察を行った。プールした対照群の３８頭 の維手のうち３頭（７，９％）に自然排卵か観察された。これらの排卵は発情を 伴わなかった。

約１２μ９のＧｎＲＨを含有する被覆コアを与えられた第３．４および５群の維 手の２０〜２５％に排卵が観察された。第３．４および５群において排卵してい る前記維手のそれぞれ１００．８０または７５％に発情が観察され、一般的に内 植後の２日目の午後または３日目の午前に記録を行った〔第６表λ１．２５％の コーティングを有し、２４μ９のＧｎＲＨを含有するインブラントを投与した第 ８群の維手の４５％に排卵が観察された。

厚さを増すと、処置された維手において排卵を誘発された維手の比率が増大し、 ２４μ９のＧｎＲＨインブラントに対して第７群（２％コーティング）中５２． ６％および第６群（４％コーティング）中８４゜２％の維手に排卵が起こり、ま たそれらの４０−６６．７％が発情を示したが、コーティングの厚さにおいて明 らかな首尾一貫した傾向は認められなかった。。

低濃度のＧｎＲＨ（１２μ９のＧｎＲＨ１第９群）を含有する非被覆インブラン トは、処置された維手の２０％にしか排卵を誘発せず、またこれらの排卵してい る維手のうち１頭しか交尾しなかった。排卵した４頭の維手のうち２頭は内視鏡 検査により卵胞において黄体形成したことが観察されたが、これらは非被覆イン ブラントからのＧｎＲＨのダンピングを示している。

さらに、この発明のインブラントにより処置された維手に生まれた子羊は正常な 外見、健康および性質を呈することが試験により示された。すなわち発情休止期 の維手の繁殖性は遅いＧｎＲＨ放出による排卵誘発形態間では異ならないという 結論に達した。

第５表 群−蚤ノＬ　処　置 １　１９　ブランクインブラント、非被覆２　１９　ブランクインブラント、４ ％被覆３　２０　１２ｕ９　ＧｎＲＨコア、４％被覆４　２０　１２７１　Ｇｎ ＲＨコア、２％被覆５　２０　１２ｕ９　ＧｎＲＨコア、１．２５％被覆６　１ ９　２４ｕ９　ＧｎＲＨコア、４％被覆７　１９　２４ｕ９　ＧｎＲＨコア、２ ％被覆８　２０　２４ｕ９　ＧｎＲＨコア、１．２５％被覆９　２０　１２ＪＩ 　ＧｎＲＨコア、非被覆第６表 １１月７−８日　−１０群全体に内視鏡検査を行い実験動物を選択。

１１月８日　−１Ｏ試験維手にプロゲスタゲンスポンジを挿入。

１１月１２日　−６全動物の秤量およびスポンジのチェック。

１１月１８日　０　スポンジ除去。インブラント挿へ。子羊にハーネス色変化。

１１月１８−２２日　ロー４　午前および午後に発情観察（７時および１９時） 。

１１月２３日　５−　１日１回発情観察、継続。

１１月２５８　７　プロゲステロン分析のため２００頭の維手全部から血液採取 。

１１月２８Ｂ　ｌＯ全維手に内視鏡検査（予定周期の約８８目）。

１１月２９日　１１　排卵または黄体形成した卵胞を伴う維手から血液採取。

１２月２日　１４　排卵または黄体形成した卵胞を伴う維手から血液採取。

実施例７ ＧｎＲＨインブラントによりインビボ誘発されたＬＨの放出。

ＧｎＲＨ含有インブラントがＬＨのインビボ放出を誘発するか否かを試験するた めに、少量のＣ；ｎＲＨに対して非常に感度の高いモデルを考案、すなわち卵巣 切除した（Ｏｖｘ）維手にエストロゲンを含有する皮下用シラスティックインブ ラントを投与した。２５０　ｎ９７時の速度でＧｎＲＨを放出する浸透圧ミニポ ンプの内植後、Ｏｖｘ雌羊維手血しょうＬＨ濃度が僅かだけ上昇した場合、応答 はエストロゲン処置により高められる。この放出速度では、ＧｎＲＨは末梢血し ょう中では測定不可能である。すなわち、ＧｎＲＨインブラントが・２５０　ｎ ９／時でＧｎＲＨを放出する浸透圧ミニポンプと同じ影響を血しょうＬＨ濃度に 与えるか否かを測定するために、下記の実験を行った。Ｏｖｘエストロゲン処置 雌羊維手処置の状態で放置するか、２５０　ｎ９／時でＧｎＲＨを放出する浸透 圧ミニポンプ（ＯＭＰ）を用いるか、または非被覆または２．４もしくは６％（ インブラントに対する重量％）のニードラジット・イー３０デイーにより被覆し たインブラントを投与した。

群の数を第９表に示す。処置の前およびその間にＬＨ分析のために頚静脈の血し ょう試料を頻繁な（ｌ−３時間）間隔て集めた。６羊について分泌プロフィール をグラフにした後、各曲線下領域およびピークＬＨ濃度への到達時間を測定した 。これらのデータを第９表に表す。

下記の結論に達した。発情休止期の完全な維手が使用不可能な場合に、エストロ ゲン処置卵巣摘出維手は、処方の評価に関して感度の高いモデルを提供した。対 照インブラントは基準線レベル以上のＬＨ応答を誘発できなかった。ＯＭＦ処置 羊は、ピーク到達時間が約８．０時間の２実験で１９０−２０３　（ｒ＋９／２ ２１２）時のＬＨ分泌における応答（曲線下領域）を誘発したものと判断できる 。非被覆インブラントはかなり早くに大きなＬＨ応答を誘発し几。被覆インブラ ントは遅い応答を誘発し、放出パターンはＯＭＦ処置羊の場合と同様であったが 、応答の合計は少なかった。ＬＨ曲線下領域およびＬＨピークへの到達時間は明 らかにニードラジットコーティングの量の関数であった。

第９表 黄体形成ホルモン応答 群　数　平均曲線下領域　ピーク到達時間　平均ピーク高（ｎ９／＋ｉ２）時　 （時）　（ｎ９／ｘ（り１部 対照　５　５６．８　２．４ ０ＭＰ　４　１９０．３　Ｂ、５　１３．４非被覆　４　３３７．８　３．８　 ６７．７３．５％被覆３　６１．４　６．０　１１．７部部 対照　３　０．０　０．０ ０ＭＰ　５　２０２．６　Ｂ、０　３１．１非被覆　４　３９０．２　４．３　 １０６．６２％被覆　５　１１２．０　７．８　１３．１４％被覆　５　８６． １　１３．３　９．８６％被覆　５　２６．７　１９．２　２．１実施例８ インブラント対浸透圧ミニポンプからのＧｎＲＨ放出。

浸透圧ミニポンプ（アルザ）は一定速度で活性物質を放出する信頼できる方式を 提供する。各々Ｉ”’−ＧｎＲＨを仕込み、インビトロの放出速度を測定するこ とにより、インブラントおよび浸透圧ミニポンプを比較した。ミニポンプおよび 被覆インブラント（ｎ＝３２）に関する平均放出プロフィールを表に示しく第１ ０表）、第７図に表す。ＧｎＲＨの放出速度は、ペイロード合計の３０−４０％ が放出される３−４日間にかけて類似していた。

この研究で使用されたインブラントは４％コーティングを有し、羊においてイン ビボで使用されたものと同様であった。浸透圧ミニポンプおよびインブラント（ ４％被覆）は、発情休止末期にロムニ一種雌羊に内植されると優れた排卵および 交尾応答を発生することが判った。

第１０表 インブラントおよび浸透圧ミニポンプからのＧ　ｒ、　ＲＨの　−インビトロ放 出 第１図、　２８日間にわたるＥＧＦのインビトロ放出（ｕ／ｃ　非被覆）時間（ 時間） 第２［ａ、６３日間にわたるＬＨのインビトロ放出（ｕ　／　ｃ　非ｖｉＷ＞時 間（時間） 第３図、１６８日間にわたるＧｎＲＨのインビトロ放出（ｕ／ｃ非被覆）、２種 の異なる時間尺度を使用していることに注意。

時間（時間） 第４図、５種のインブラントからのＧｎＲＨの放出（４％被覆）、−散点を数字 により示す。

第５図、５種のインブラントからのＧｎＲＨの放出（９％被覆）、−散点を数字 により示す。

第６図、２９日間にわ几るＨＧＨの放出（ｕ／ｃ被覆）時間（時間） 第７図、インブラントおよび浸透圧ミニポンプ（ｏｍｐ）からのＧｎＲＨ放出時 間（時間） 国際調査鱗失 ＭＮＥｘＴｏ　’Ｉｌ［ｍα（ＡＬ　Ｓ’ＥＡＲＯＩ　ＲＥＰＣＲｒ　ＧＪコツ ロゴひ硝ユ丁ＣＮ入り入ＰＰＬ工Ｃ入＝丁ＧＪＮつ、ＫＴ　入Ｕ　８７００１３ ９ＡＵ　３４６１４／６３　ＣＨ４８３４７１ＤＥ　１４６７８６１ＡＵ１６２ ０２／６７ＤＥ１６１〕３９３ＦＲ１５８６８１１１Ｔ１０５０３５３ＡＵ　５ ７６７２／８６　１Ｘ　２４３８／８ｇ　ＥＰ　２０４４７６　ＪＰ６Ｌ２７７ ６２９Ｆ！’　８２６３５　ｔＪｓ　４６６６７０４　ＺＡ　８６０３８６７Ｅ ＮＤＯＦに電圧■

Claims (15)

【特許請求の範囲】
1. （１）非経口投与された場合に実質的に連続方式でペプチドまたは蛋白質を放出 する医薬用または獣医学用インプラントであって、前記インプラントが透過性で あり、通常の生理学的ｐＨ値では非破裂性、非溶解性であり、インプラントの有 効期間中に分解することのないポリマー性コーティング内にペプチドまたは蛋白 質および賦形剤を含んで成り、前記コーティングが放出速度制限バリアを形成し 、インプラント成分が全部生物適合性であることを特徴とする、インプラント。
2. （２）賦形剤が水溶性材料であることを特徴とする、請求の範囲第１項記載の医 薬用または獣医学用インプラント。
3. （３）賦形剤が水不溶性材料であることを特徴とする、請求の範囲第１項記載の 医薬用または獣医学用インプラント。
4. （４）賦形剤が水溶性および水不溶性材料から成ることを特徴とする、請求の範 囲第１項記載の医薬用または獣医学用インプラント。
5. （５）コーティングが実質的にイオン化可能基を含まない付加重合体であること を特徴とする、請求の範囲第１〜４項のいずれか１項記載の医薬用または獣医学 用インプラント。
6. （６）コーティングがアクリル酸エチルおよびメタクリル酸メチルのコポリマー の水性フィルム形成分散液から形成されることを特徴とする、請求の範囲第５項 記載の医薬用または獣医学用インプラント。
7. （７）コーティングが膨張し得ることを特徴とする、請求の範囲第１〜６項のい ずれか１項記載の医薬用または獣医学用インプラント。
8. （８）蛋白質またはペプチドの分子量が１０００〜５００００の範囲にあること を特徴とする、請求の範囲第１〜７項のいずれか１項記載の医薬用または獣医学 用インプラント。
9. （９）蛋白質またはペプチドが受容者の生殖システムに影響を与えることを特徴 とする、請求の範囲第１〜８項のいずれか１項記載の医薬用インプラント。
10. （１０）蛋白質またはペプチドが受容者の成長に影響を与えることを特徴とする 、請求の範囲第１〜８項のいずれか１項記載の医薬用インプラント。
11. （１１）蛋白質またはペプチドが受容動物の生殖システムに影響を与えることを 特徴とする、請求の範囲第１〜８項のいずれか１項記載の獣医学用インプラント 。
12. （１２）蛋白質またはペプチドが受容動物の成長に影響を与えることを特徴とす る、請求の範囲第１〜８項のいずれか１項記載の獣医学用インプラント。
13. （１３）蛋白質またはペプチドがＧｎＲＨであることを特徴とする、請求の範囲 第１１項記載の獣医学用インプラント。
14. （１４）ひとまたは動物受容対象への蛋白質またはペプチドの投与に関する、請 求の範囲第１〜８項のいずれか１項記載のインプラントの用途。
15. （１５）請求の範囲第１〜８項のいずれか１項記載のインプラントをひとまたは 動物に内値することを特徴とする、ひとまたは動物への蛋白質またはペプチドの 投与方法。