JPH0133780B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 発明の背景および記述 本発明は血球細胞の数および大きさを計測する
ための血液希釈剤に関するものである。特に本発
明は、種々の走査の工夫を用いた電気的粒子分析
が遂行できる、血液細胞の血液計算盤による計測
およびヘモグロビン濃度の決定用の改良した多目
的の血液希釈剤に関するものである。このために
は、上記溶液は所望の特徴を賦与するための他の
成分と共に電解質溶液を与えるための化学物質を
含有する安定な水溶液でなければならない。

通常、医学の診断には血液サンプルについてあ
る種の決定をするために患者の血液サンプルの分
折検査が含まれる。患者の血液サンプルを測定で
き、サンプルを自動的にかつ連続的に処理できる
機器による計測が米国特許第4282902号、4165484
号、4240029号および4110604号に記載されてい
る。本発明の多目的の血液希釈剤は血液サンプル
成分の分析のための上記以外の粒子数の電気的な
計測のみならず、上記の特許に記載のような機器
による計測にも使用が適している。

従つて、そのような機器による計測を行なうに
当つて、血液サンプルの正確かつ有効な希釈が分
析に先立つて行なわれることが必要である。この
希釈剤は上記システムにおいてうまく作用するよ
うに適当な電解質成分を含む必要がある。同様な
理由で、希釈剤はその分析に先立つて血液細胞に
いかなる変化をも与えないように血液細胞を処す
るのに適している必要もある。このために、血液
希釈剤は血液細胞の溶液に関して等張であり又浸
透的につりあつている必要がある。例えばヘモグ
ロビン測定のための分解に対して血液細胞の抵抗
度は赤血球の必要な分解を十分に妨げる程に変化
してはならない。溶液は細胞の膨張や収縮を避け
るために中性のPHでなければならない。赤血球の
体積は、２〜３時間もの間それらが懸濁している
媒体の浸透圧の反比例して直接直線的に関連づけ
られることはよく知られている。従つて、このよ
うな細胞が血しようの浸透圧と一致する等張の媒
体中に置かれた時は、それらに変化はおこらな
い。細胞がより低い浸透圧の媒体中に置かれる
と、水が細胞膜を通つて入つてきて、細胞は膨張
する。これに反して、細胞がより高い浸透圧の媒
体中に置かれると、水が抜け出るから細胞は収縮
する。極端な例では、細胞の破裂がおこる程度に
まで膨張したり、細胞内に水がほとんどなくなる
まで収縮が進行したりする。

このようなすべての懸濁媒体あるいは希釈剤は
予想されるように防腐剤を含んでいる。しかしこ
の防腐剤は細胞膜の透過性を変えたり、収縮、膨
張、その他の変化を引き起こしたりしてはならな
い。このような希釈剤によく用いられる成分であ
る界面活性剤は細胞膜においても同様な変化を生
ずる。それ故、希釈剤に適切な防腐剤および界面
活性剤を選択し、例えば一方の収縮する傾向を他
方の膨張により相殺できるような濃度を選ぶこと
が重要である。あるいは、防腐剤により生じた細
胞の体積変化は希釈剤のイオン強度によつて相殺
するように調節してもよい。これらを合わせた効
果が収縮でも膨張でもないことが望むところであ
る。

本発明では、このような望ましい性質のバラン
スした希釈剤を提供するものである。この希釈剤
は、電解質として塩化ナトリウムおよび塩化カリ
ウム、第一および第二リン酸塩のようなPH緩衝剤
をも含有する。エチレンジアミン四酢酸も２価の
陽イオンを制御し、キレート化するために希釈剤
溶液に含まれる。

もし血液細胞を防腐剤を含む等張希釈剤に懸濁
したときは、一般に細胞は膨張あるいは収縮する
であろう。膨張あるいは収縮の方向は例えば殺細
菌、制細菌、殺カビあるいは制カビ剤などの使用
する防腐剤に依るであろう。殺細菌性防腐剤はバ
クテリアは殺すけれども、必ずしもバクテリアの
胞子を殺すとは限らない。一方、制細菌剤はバク
テリアおよびバクテリア胞子の成長を阻害する。
本発明によれば、制細菌剤の概して弱い抑制作用
が好ましい。なぜならば、この作用は十分なもの
であり、低濃度の防腐剤によりしばしば得られる
からである。とにかく、本発明に述べられている
ように、血液細胞に何らかの変化を生じさせる希
釈剤溶液の防腐剤成分の影響を界面活性剤成分に
よりバランスさせるという点が本発明の重要な要
素である。等張の希釈剤の界面活性剤成分もまた
血液細胞に収縮や膨張を引き起こす作用があるで
あろう。例えばいくつかの界面活性剤は赤血球細
胞の分解を引き起こすし、ごくわずかのものは赤
血球細胞膜を溶かすことさえ行なう。

上記のことより、赤血球細胞の体積をある一方
に変化させる防腐剤と共に赤血球細胞の体積を逆
の方向に変化させる界面活性剤を一緒に使用すれ
ば細胞の体積に関して影響を与えなくすることが
できることは明白であり、本発明の特に意図する
ところはこのような組み合わせを血液希釈剤に用
いることである。本発明のよれば、このような防
腐剤−界面活性剤の組み合わせには、例えば次亜
塩素酸ナトリウム、フエネチルアルコール、ベン
ジルアルコール等が含まれる。好ましい防腐剤は
２−フエノキシエタノールであり、これは好まし
くは少なくとも80％のエチレンオキサイドを含有
するポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン
グリコール非イオン性界面活性剤と合わせて用い
られる。一般に界面活性剤は、例えば、エチレン
オキサイド、ポリプロピレングリコール縮合生成
物類である。このような製品は商業的に入手可能
であり、このような製品の入手先のひとつとして
BASF Wyandotte Corporation（Wyandotte
Michigan48192）社製の“プルロニクス
（Pluronics）”と呼ばれるものがある。使用でき
るBASF社のその他の製品として、エチレンオキ
サイドでさまざまに架橋されたプロピレンオキサ
イドのさまざまな架橋が４ケ所でエチレンジアミ
ンの骨格にかかつたものを含む構造的に４つの官
能基をブロツクした共重合体である非イオン性界
面活性剤がある。これらはBASF社の製品であり
“テトロニツク（Tetronic）”と呼ばれている。

本発明に沿つて、血液希釈剤を調製する条件を
一般的に考慮すると、以下のような溶液により満
足のゆく結果が得られることに留意されたい。す
なわち、電解質として塩化ナトリウムを６ないし
12ｇ／（好ましくは8.795ｇ／）、同じく電解
質として塩化カリウムを０ないし１ｇ／（好ま
しくは0.28ｇ／）、PH緩衝剤としてリン酸二水
素カリウムを０ないし１ｇ／（好ましくは0.26
ｇ／）、第２のPH緩衝剤としてリン酸−水素ナ
トリウムを０ないし５ｇ／（好ましくは2.35
ｇ／）、エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム
塩を０ないし１ｇ／（好ましくは0.36ｇ／）、
防腐剤を約0.5ないし10ml／（好ましくは2.0
ml／）および界面活性剤を約0.001ないし10
ｇ／（好ましくは0.5ｇ／）を用いるもので
ある。ついでながら、本発明の特徴のひとつは上
記の範囲内で溶液中の界面活性剤と防腐剤の含量
を制御して、赤血球細胞の平均粒子体積への一方
の効果を他方の効果により相殺する点にあること
が理解されるであろう。

上で論じたように、考慮中のサンプル中の血液
細胞への過度の作用を伴なうことなくバクテリア
やバクテリアの胞子の成長を阻害し、溶液の望ま
しい保存をもたらす防腐剤を選択することが重要
である。本発明によれば、防腐剤のサンプルへの
いかなる反応も共存する界面活性剤の性質により
平均化されるものである。防腐剤を選択するに当
つては、サンプルへの作用が“穏やか”であるこ
とが重要である。これにより、防腐剤あるいは界
面活性剤の濃度およびそれらの作用のタイムコー
スを合わせる際に要求される比類無い正確さが必
要でなくなる。すなわち、ゆつくり作用する防腐
剤と迅速に作用する界面活性剤（あるいはこの逆
の場合も）を使用しても最終の定常状態では正味
の体積の変化のない状態が得られるであろう。し
かしながら、定常状態に達するまでの遷移状態で
はお互いの作用のつりあいがとれずに細胞の体積
が変化し、誤つた分析をもたらすであろう。従つ
て、理想的な例では防腐剤も界面活性剤もそれ自
身では全く細胞の体積を変化させないが、このよ
うな理想的な例は実際にはないので、それ故、そ
れらの濃度がそれぞれの望ましい性質を最適にす
るように、両者のつり合いを選択することが重要
となる。

従つて、本発明の血液希釈剤によれば、好まし
い防腐剤は２−フエノキシエタノールであり、
2.0ml／の濃度がよい。２−フエノキシエタノ
ールは考慮中のサンプル中の血液細胞への作用は
比較的穏やかである。更に、これは本発明で選択
された界面活性剤の作用を効果的につり合わせる
ことができる。本発明の有用な界面活性剤のひと
つはプルロニツク（PLURONIC）F68であり、
これは80％のエチレンオキサイドを含むポリオキ
シエチレン−ポリオキシプロピレングリコール非
イオン性界面活性剤である。プルロニツクF108
は極めて好ましいものであり、エチレンオキサイ
ドを同じく80％含有している。希釈剤中にこれは
約0.001ないし10ｇ／、好ましくは0.5ｇ／の
濃度で存在するのが良い。エチレンオキサイド含
量の異なるテトロニツク（TETRONIC）あるい
はその他のプルロニツク界面活性剤もまた使用で
きる。これらの物質は米国特許第2674619号に詳
しく記載されており、これはすべてそのまま参考
文献として本発明に含まれている。上記の特許は
本発明における界面活性剤として有用なポリオキ
シエチレン−ポリオキシプロピレン化合物類の製
造について記載がある。

上記の目的およびその他の目的を示すために、
以下に本発明をより詳細に記載する。本発明のそ
の他の目的および利点は以下の説明、添えた図お
よび添付の特許請求の範囲から明らかになるであ
ろう。

図面の詳しい説明 第１図は代表的ないくつかの界面活性剤および
防腐剤の位置を赤血球細胞の平均粒子体積
（MCV）シフトラインおよび赤血球細胞のドリフ
トラインを両軸上にグラフで示したものである。

発明の詳細な説明 第１図において、いつくかの代表的な界面活性
剤および防腐剤の作用が示してある。シフトは希
釈後30秒内にCoulter Model Fnのような電気的
粒子測定器を用い得られた赤血球細胞の平均粒子
体積（RBC MCV）の変化である。この変化は
防腐剤も界面活性剤も含んでいない等張希釈剤で
の希釈時に観察されたMCVと示した防腐剤ある
いは界面活性剤を含む同じ希釈剤に対して観察さ
れたMCVを比較することにより決定される。ド
リフト（Drift）は希釈後、初めの30分間に観察
されたRBC MCVの変化速度である。このドリ
フト速度は直線的な回帰により最初の30分間に観
察されたデータに合う直線の傾きにより決定され
る。代表的な物質は以下の通りである。

界面活性剤（○†ぐ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ (a)塩化ナトリウム、塩化カリウムおよび両者
   の混合物からなる群から選ばれる一種以上の電解
   質、(b)第一リン酸塩、第二リン酸塩および両者の
   混合物からなる群から選ばれる一種以上のPH緩衝
   液、(c)エチレンジアミン四酢酸、(d)防腐剤および
   (e)本希釈剤に添加された赤血球を上記防腐剤の存
   在下に安定化させるのに有効な量で存在するエチ
   レンオキサイド−ポリプロピレン縮合生成物、か
   らなることにより特徴づけられる、迅速な平均血
   液体積の安定化をもたらす、血球計測に使用する
   ための多目的な等張の血液希釈剤組成物。 ２ エチレンオキサイド−ポリプロピレン縮合生
   成物が80％のエチレンを含有するポリオキシエチ
   レン−ポリオキシプロピレングリコールよりなる
   非イオン性界面活性剤である特許請求の範囲第１
   項に記載の組成物。 ３ (a)塩化ナトリウムを約６ないし12ｇ／含
   み、塩化カリウムを約０ないし１ｇ／含み、(b)
   第一リン酸塩がリン酸二水素カリウムであり、こ
   れを約０ないし１ｇ／含み、第二リン酸塩がリ
   ン酸一水素ナトリウムであり、これを約０ないし
   ５ｇ／含み、(c)エチレンジアミン四酢酸がエチ
   レンジアミン四酢酸二ナトリウム塩であり、これ
   を約０ないし１ｇ／含み、(d)防腐剤が２−フエ
   ノキシエタノールであり、これを約0.5ないし10
   ml／含み、(e)縮合生成物を約0.001ないし10
   ｇ／含む特許請求の範囲第１項に記載の組成
   物。 ４ 縮合生成物が80％のエチレンオキサイドを含
   有するポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレ
   ングリコールである特許請求の範囲第３項に記載
   の組成物。 ５ ２−フエノキシエタノールを2.0ml／含み、
   縮合生成物を0.5ｇ／含む特許請求の範囲第３
   項に記載の組成物。 ６ 縮合生成物が80％のエチレンオキサイドを含
   有するポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレ
   ングリコールである特許請求の範囲第５項に記載
   の組成物。 ７ (a)塩化ナトリウムを8.795ｇ／含み、塩化
   カリウムを0.28ｇ／含み、(b)リン酸二水素カリ
   ウムを0.26ｇ／含み、リン酸一水素ナトリウム
   を2.35ｇ／含み、(c)エチレンジアミン四酢酸が
   エチレンジアミン四酢酸ナトリウムであり、これ
   を0.36ｇ／含み、(d)２−フエノキシエタノール
   を2.0ml／含み、(e)縮合生成物が80％のエチレ
   ンオキサイドを含有するポリオキシエチレン−ポ
   リオキシプロピレングリコールであり、これを
   0.5ｇ／含む特許請求の範囲第３項に記載の組
   成物。