JPH01311029A - ヒトβ↓２−ミクログロブリン用吸着剤およびヒトβ↓２−ミクログロブリン除去用血液処理装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、ヒトβ２−ミクログロブリン用吸着剤および
それを充填してなるヒトβ２−ミクログロブリン除去用
血液処理装置に関する。

本発明によって提供されるヒトβ２−ミクログロブリン
用吸着剤は、腎不全の患者の血液中に高濃度に存在し、
アミロイドタンパクの１部として組織に沈着して手根管
症候群を引き起こす原因物質であるとされているヒトβ
２−ミクログロブリンを特異的に吸着し得る。従って、
本発明によって提供されるヒトβ２−ミクログロブリン
用吸着剤およびそれを充填してなるヒトβ２−ミクログ
ロブリン除去用血液処理装置は、腎不全患者において発
生する手根管症候群の治療および予防において有用であ
る。

（従来の技術） 慢性腎不全患者に対する長期透析療法において手根管症
候群の合併が問題になっており、その疾患原因物質とし
てβ、−ミクログロブリンが注目されている［例えば、
腎と透析　別冊、第６〜９頁および第３２〜３８頁（１
９８７年）；腎と透析、第２３＠第６１４〜６２０頁（
１９８７年）など参照］。

かかる疾患原因物質であるβ、−ミクログロブリンを吸
着除去する方法については、いくつかの報告がなされて
いる。佐藤らは、コラーゲンビーズ、アンバーライトＸ
ＡＤ−７、アンバーライトＸＡＤ−８、活性炭などの吸
着剤が長期透Ｆｒ患者の血清中のβ、−ミクログロブリ
ンをイン・ビトロ（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）で吸着し得るこ
とを報告している［人工臓器、第１７巻第１号第１４〜
１７頁（１９８８年）参照］。また、アキザワ（Ａｋｉ
ｚａｗａ）らは２−ヒドロキノエチルメタクリレートと
ジエチルアミノエチルメタクリレートとのランダム共重
合体で肢覆されたメチルメタクリレートとジビニルベン
ゼンとの共重合体の多孔性粒状成形物を用いて透Ｆｒ法
者の血液中からβ、−ミクログロブリンを吸着除去し得
ることを報告している［トランサクンヨンズ・オブ・ア
メリカン・ソサエティー・フォー・アーティフィシャル
・インターナル・オルガンズ（Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎ
ｓ　ｏｆ　！ｍｅｒｉｃａｎ　５ｏｃｉｅｔｙ　ｆｏｒ
Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ　Ｉｎｔｅｒｎａｌ　Ｏｒｇａｎ
ｓ）　、第３３巻第５３２〜５３７頁（１９８７年）参
照コ。

（発明が解決しようとする課題） 佐藤らの報告において使用されているような、コラーゲ
ンビーズ、アンバーライトＸＡＤ−７、アンバーライト
ＸＡＤ−８、活性炭などの吸着剤では、吸着平衡に達す
るまでに長時間を要すること、吸着の特異性が高くない
ｆ二め吸着剤の表面がβ宜−ミクログロブリンの吸着に
おいて有効に利用されないことなどの欠点か存在するこ
とから、これらの吸着剤を使用するβ、−ミクログロブ
リンの吸着除去方法は実用的であるとは言い難い。

また、アキザワらの報告において使用されているような
多孔性粒状成形物は、β、−ミクログロブリンのみなら
ず血清中の低分子量タンパク質およびペプチドホルモン
をも非特異的に吸着するという問題点を有している。

しかして、本発明の目的の１つは、ヒトβツーミクログ
ロブリンを特異的に吸着し得るヒトβ。

−ミクログロブリン用吸着剤を提供することにある。ま
た本発明の他の目的は、ヒトβツーミクログロブリンを
特異的に除去し得る血液処理装置を実供することにある
。

（課題を解決するための手段） 本発明によれば、上記の目的は、ヒトβツーミクログロ
ブリンと特異的結合性を有する物質を担体に固定化させ
てなることを特徴とするヒトβ。

−ミクログロブリン用吸着剤を提供することにより達成
され、また血液または血漿の導入口および導出口ならび
にヒトβツーミクログロブリンと特異的結合性を有する
物質を担体に固定化させてなるヒトβ２−ミクログロブ
リン用吸着剤を充填した層を有することを特徴とするヒ
トβヨーミクログロブリン除去用血液処理装置を提供す
ることにより達成される。

ヒトβツーミクログロブリンと特異的結合性を有する物
質としては、ヒトβツーミクログロブリンに対する抗体
またはそのＨ鎖、Ｌ鎖、ＦａｂフラグメントもしくはＦ
（ａｂ’）ｍフラグメント；ヒトβツーミクログロブリ
ンのりセプター等が挙げられるが、この中でもヒトβ２
−ミクログロブリンに対する抗体またはそのＨ鎖、Ｌ鎖
、ＦａｂフラグメントらしくはＦ（ａｂ’）ｍフラグメ
ントが特異性および安定性の高さ、入手の容易さなどの
面で優れており好ましく用いられる。

ヒトβツーミクログロブリンに対する抗体としては、ヒ
トβツーミクログロブリンに対するポリクローン抗体ま
たはヒトβツーミクログロブリンに対するモノクローン
抗体を使用することができる。ヒトβツーミクログロブ
リンに対するポリクローン抗体は、ウマ、ウノ、ヒツジ
、ヤギ、ロバ、イヌ、ウサギ、ラット、モルモット、ネ
ズミ等のヒト以外の哺乳動物をヒトβツーミクログロブ
リンで免疫し、次いで免疫された動物の血清、腹水等の
体液を精製操作に付することによって取得される。また
、ヒトβツーミクログロブリンに対するモノクローン抗
体は、前記のようなヒト以外の哺乳動物をヒトβツーミ
クログロブリンで免疫し、免疫された動物から末梢血リ
ンパ球、胸腺細胞、牌臓細胞またはリンパ節中のリンパ
球を採取し、得られたリンパ球または細胞を例えばケー
ラー（Ｋ５ｈｌｅｒ）とミルスタイン（Ｍｉｌｓｔｅｉ
ｎ）の方法［ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）　、第２５６
巻第４９５〜４９７頁（１９７５年）コに従って細胞融
合し、ヒトβ、−ミクログロブリンに対するモノクロー
ン抗体を産生ずる能力を有するハイブリドーマを選別し
、該ハイブリドーマを培養し、次いで得られた培養上清
を精製操作に付することによって取得される。ヒトβ２
−ミクログロブリンを用いる動物の免疫は、例えば瓜谷
郁三ら編「生物化学実験法１５　　免疫学実験入門Ｊ（
１９８１年、学会出版センター）第２２〜２３頁に記載
されているような通常の免疫原を用いて動物を免疫する
場合に採用される方法と同様の方法により行われる。ま
た、免疫され几動物の体液またはハイブリドーマの培養
上清からのヒトβ２−ミクログロブリンに対する抗体の
精製方法としては、例えば瓜谷郁三ら編「生物化学実験
法１５　　免疫学実験入門ｊ　（１９８１年、学会出版
センター）第６１〜６９頁に記載されているような塩析
、ゲルパーミェーションクロマトグラフィー、イオン交
換クロマトグラフィーなどの方法か採用される。

ヒトβ２−ミクログロブリンに対する抗体のＨ鎖、１．
ｌｌ、ＰａｂフラグメントおよびＦ（ａｂ’）、フラグ
メントは、例えば瓜谷郁三ら編「生物化学実験法１５　
　免疫学実験入門Ｊ（１９８１年、学会出版センター）
第３９〜４２頁、ジャーナル・オブ・イムノロジカルｅ
メソツズ（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｍｓ＋ｕｎｏｌｏ
ｇｉｃａ１Ｍｅｔｈｏｄｓ）　、第５６＠第２３５〜２
４３頁（１９８３年）などに記載されているような一般
の抗体からそのＨ鎖、Ｌ鎖、Ｆａｂフラグメントまたは
Ｆ（ａｂ’）＊フラグメントを作成する場合に採用され
る方法に従って、ヒトβ２−ミクログロブリンに対する
抗体を分解することによって作成される。なお、抗体の
Ｆｃフラグメント部分は抗原性が強く、種々の生体反応
を引き起こす可能性があるので、Ｐｃフラグメント部分
を含まない抗体の構成部分であるＦａｂフラグメント、
Ｆ（ａｂ’）＊フラグメントまたはＬ鎖をヒトβ。

−ミクログロブリンと特異的結合性を有する物質として
使用するのが望ましい。

ヒトβ２−ミクログロブリンと特異的結合性を有する物
質が固定化される担体としては、親水性の表面を有し、
該物質との間で共有結合を形成させるために利用し得る
アミノ基、カルボキシル基、水酸基等の反応性を有する
官能基を何し、血液、血漿などの体液に不溶性であり、
かつ多孔性であるものが好ましい。多孔性の担体として
は、ヒトβ２−ミクログロブリンを吸着させ得る有効表
面積が広いことから、排除限界タンパク質分子量が約１
０′〜１０８の範囲内であるかまたは平均細孔径が約５
０〜１０００ナノメートルの範囲内であるものを使用す
るのが好ましい。担体は粒子状、Ｖ＆維状、シート状、
中空糸状などの任意の影状であることができる。かかる
担体としては、例えば、ＣＭ〜セルロファイン　ＣＨ（
排除限界タンパク質分子量：約３Ｘ　１０”　、生化学
工業株式会社販売）などのセルロース系担体：　ＣＭ−
トヨバール６５０Ｃ（排除限界タンパク質分子量：　５
Ｘ　１０＠、東ソー株式会社製）などのポリビニルアル
コール系担体、ＣＭ−トリスアクリルＭ　（ＣＭ　−Ｔ
ｒｉｓａｃｒｙｌ　Ｍ　）　［排除限界タンパク質分子
量：ｌＸ１Ｇ’；スウェーデン国ファルマシアーＬ　Ｋ
　Ｂ　（Ｐｈａｒｍａｃｉａ　−Ｌ　Ｋ　Ｂ　）社製１
などのポリアクリルアミド系担体；セファロースＣＬ　
−４８（５ｅｐｈａｒｏｓｅ　ＣＬ　−４Ｂ　）　［排
除限界タンパク質分子量・２Ｘ　１Ｇ’　、スウェーデ
ン国ファルマシアーＬ　Ｋ　Ｂ　（Ｐｈａｒｍａｃｉａ
　−Ｌ　Ｋ　Ｂ　）社製コなどのアガロース系担体など
の有機質担体；およびＣＰ　Ｇ　−１０−１０００［排
除限界タンパク質分子量：ｌＸｌ０”：平均細孔径：　
１１００ｎ　：米国エレクトロ一二ュークレオニクス（
Ｅｌｅｃｔｒｏ−ｎｕｃｌｅｏｎｉｃｓ）社製コなどの
多孔性ガラスなどの無機質担体が挙げられる。

本発明の吸着剤における担体上のヒトβ２−ミクログロ
ブリンと特異的結合性を有する物質の固定化量は、吸着
剤が血漿、血液等の体液中のヒトβ２−ミクログロブリ
ンの有意量を吸着しうるために通常的３Ｘ　ｔｏ−Ｊル
／ｇ（担体）以上であることが必要であり、担体上に固
定化されたヒトβ２−ミクログロブリンと特異的結合性
を有する物質がヒトβ２−ミクログロブリンの吸着に有
効に利用されロタメニ約１ＸＩＯ−ｓ〜１×ｌ０−６モ
ル／ｇ（担体）ノ範囲内であるのか好ましい。

以下に、本発明の吸着剤の製造方法について述べる。

ヒトβ２−ミクログロブリンと特異的結合性を膏する物
質の担体上への固定化は、一般にタンパク質を担体上に
固定化する場合に採用される方法に従って行われる。そ
の固定化方法としては、例えば、担体が有するカルボキ
シル基をＮ−ヒドロキンコハク酸イミドと反応させるこ
とによってスフノンイミドオキシカルボニル基に変換し
、これにヒトβ２−ミクログロブリンと特異的結合性を
有する物質のアミノ基の部分を反応させる方法（活性エ
ステル法）、担体が有するアミノ基またはカルボキシル
基にシンクロヘキシルカルボッイミドなどの縮合試薬の
存在下でヒトβ２−ミクログロブリンと特異的結合性を
有する物質のカルボキシル基またはアミノ基を縮合反応
させる方法（縮合法）、担体とヒトβ２−ミクログロブ
リンと特異的結合性を有する物質とをグルグルアルデヒ
ドなどの２備以上の官能基を有する化合物を用いて架橋
する方法（担体架橋法）などが挙げられる。一般に、ヒ
トβ２−ミクログロブリンと特異的結合性を有する物質
を活性エステル法で担体上に固定化して得られる吸着剤
が特に高いヒトβ。

−ミクログロブリンの吸着能力を有する。

かかるヒトβ２−ミクログロブリン用吸着剤を用いる二
とによって本発明のヒトβ、−ミクログロブリン除去用
血液処理装置が提供される。

本発明の血液処理装置が適用される被処理液としては、
全面または選択性透過膜などを使用して全面から血球成
分を分離して得られる血漿を挙げることができる。被処
理液は、本発明の血液処理装置の導入口を経由して吸着
剤充填層に流入し、吸着剤充填層において吸着剤と接触
した後、導出口より流出する。

本発明の血液処理装置のハウジングは被処理液と接触す
る部分がポリプロピレン、ポリカーホネート、アクリル
−スチレン系共重合体等の生物学的に不活性な材質から
なるものであることが好ましい。また、血液または血漿
の導入口および導出口は通常用いられる血液回路と容易
に接続し得る形状を有していることが好ましい。導入口
と吸着剤充填層との間および導出口と吸着剤充填層との
間には、通常、被処理液を通過させ得るが吸着剤か通過
さけない支持体を接着する。かかる支持体としては、セ
ルロース系ポリマー、ポリエチレン、ポリプロピレン、
ポリエステル、テフロン等のポリマーからなる不織布：
これらの材質からなる約６０〜２４０メツシユのネット
等が好ましく用いられる。

本発明の血液処理装置は滅菌処理されることが好ましい
。滅菌方法としては吸着剤の担体の材質に応して適切な
方法を選択し得るが、通常はγ線滅菌、エチレンオキサ
イドガス滅菌、オートクレーブ滅菌等が好ましく用いら
れる。

（実施例） 以下、実施例により本発明を具体的に説明するか、本発
明はこれらの実施例により限定されるものではない。

参考例１（抗体の作成） ヒトβ２−ミクログロブリン［米国ングマ（Ｓｉｇｍａ
）社製］　０．２５Ｂを０　、５ｍＱの生理食塩液に溶
解し、０．５ｎ＋（のフロイント・コンプリート・アノ
ユバントと、足台してエマルジョンを調製した。このよ
うにして得られるエマルジョンの０１１１ずつを１箇月
間隔で１年間（計１３回）ウサギの後足の指先の皮下に
注入した。１回めのエマルジョンの注入から３箇月後の
注入（４回めの注入）以降においては、各注入時より１
週間後にウサギの心臓より３０＋ａｆｌずつ採血を行な
った。得られた血液をそれぞれ４℃で１晩静置した後遠
心して、計１５０ｍ１！のウサギ血清を得た。

このようにして得られたウサギ血清１５０ｍｃに飽和硫
酸アンモニウム水溶液７５１を除々に加え、よく撹拌し
、次いで４℃で１時間静置した後、遠心した。得られた
沈澱に、１５０ｉ１２の生理食塩液を加えて再溶解させ
た。この溶液に再び飽和硫酸アンモニウム水溶液７５ｍ
（！を加え、よく撹拌しｆ二後に４℃で１時間静置した
。遠心し、て得られた沈澱を少量の生理食塩液に溶解し
、ｌｏａ＋Ｍのリン酸塩緩衝液（ｐＨ７，４）に対して
透析した。透析によって得られた試料をｌＯ＋ａＭのリ
ン酸塩緩衝液（ｐＨ７，４）で平衡化したジエチルアミ
ノエチル化セルロース［イギリス国ワットマン・バイオ
・ンステムズ（Ｗｈａｔｍａｎ　Ｂｉｏ　５ｙｓｔｅａ
＋ｓ）社製、Ｄ　Ｅ　−５２３を充填したカラムに循環
した。その後、１０ｄリン酸塩鏝ｉ動液（ｐＨ７，４）
からなる溶離液をその食塩濃度を除々に上昇させながら
上記のカラムに流し、溶出液を一定量ずつ順次分取した
。潟られた各画分をドデンル硫酸ナト１ノウムの存在下
に実施されるポリアクリルアミドゲル電気泳動法で分析
した結果、循環残液と初期の溶出液の中にＩｇＧ　（免
疫グロブリンＧ）が含まれていることが判明したので、
これらを合一シた。このようにして７１られた抗体含有
溶液中の抗体の量を波長２８Ｏｎ＋ａでの吸光度に基づ
いて定量したところ、該抗体量は約２．３ｇであること
が判明した。

参考ｆ”１２（Ｆａｂフラグメントの作成）参考例１で
得られた抗体の１００ｍｇを、塩化ナトリウム、エチレ
ンジアミン四酢酸およびメルカプトエタノールをそれぞ
れ０，１５モルＩＱ、　１ミリモル／Ｑおよび２５　ミ
ＩＩ　ｔル／Ｑの濃度で含有させたｌｏ＋＋Ｍ’ｌン酸
塩緩衝液（ｐＨ７，４）　ｌＯｍｃに溶解し、ＩＢのパ
パイン［米国シグマ（Ｓｉｇｍａ）社製、２　Ｘ　ｃｒ
ｙｓｔａｌｌｉｚｅｄｌを加えて３７°Ｃで１時間イン
キュベートした。さらに最終濃度が３０＋旧こなるよう
にニードアセトアミドを加えて３７℃で１５分間インキ
ュベートしたｌ、１０１リン酸塩緩衝液（ｐＨ７，４）
に対して４°Ｃで透析した。透析によって得られた試料
を１０ｉＭＩＪン酸塩緩衝液で平衡化したジエチルアミ
ノエチル化セルロースロイギリス国ワットマン・バイオ
・システムズ（買ｈａｔｍａｎ　Ｂｉｏ　５ｙｓｔｅＩ
Ｉｓ）社製、Ｄ　Ｅ　−５２３を充填したカラムに循環
して非吸着成分を含有する循環残液を得た。この循環残
液を、ヒｌ−１ｇＧのＦｃフラグメントに特異性を有す
る抗体ロデンマーク国タコ（Ｄａｋｏ）社製、ラビット
・アンチ−ヒユーマンＩｇＧ、　　スベンフイック・フ
ォーＦｃフラグメン　ト　　（Ｒａｂｂｉｔ　　Ａｎｔ
ｉ−ｈｕｍａｎ　　ＩｇＧ、　　　５ｐｅｃｉｆｉｃ　
　ｆｏｒＦｃ　ｆｒａｇｍｅｎｔ）　Ｌを固定化したア
ガロース系担体Ｃスウェーデン国ファルマシアーＬＫＢ
（Ｐｈａｒｍａｃｉａ　−Ｌ　Ｋ　Ｂ　）社製、ＣＮＢ
ｒ−セファロースＣＬ　−４Ｂ（ＣＮ　Ｂ　ｒ−Ｓｅｐ
ｈａｒｏｓｅ　ＣＬ−４８）ｉを充填したカラムに循環
させ、８存するＩｇＧおよびＦｃフラグメントを吸着さ
せた。得られた循環残液を、ポリアクリルアミド系担体
ロスウェーデン国ファルマンアーＬ　Ｋ　Ｂ　（Ｐｈａ
ｒｍａｃｉａ　−Ｌ　Ｋ　Ｂ　）社製、セファクリル（
５ｅｐｈａｃｒｙｌ）　Ｓ　−３０ＣＢを充填したカラ
ム（内径：１８＋旧１ｍ；長ざ・６００ｍｍ）および食
塩を０．１５ｔル／Ｑの濃度で含有するｌｏ＋ｎＭリン
酸塩緩衝液（ｐ）１７．４）からなる溶離液（原虫・１
ｍ＋２／ｍ１ｎ）を用いて分取操作にけすることにより
、溶出時間９０分付近の成分として抗体のＦａｂフラグ
メノトを得ｆこ。こＪ）ようにして（４られｒ：Ｆａｂ
フラグメノトの量は、波長２８００巾での吸光度測定の
結果、約３０Ｂであることか判明したつ 参考例３　［Ｆ（ａｂ’　）、フラグメントの作成：・
参考例１で得られｆ二抗体のｌｏｏｍｇを５０ａ＋Ｃの
０．１Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ３，５）に溶解し、ベブ
ノンＥ米国ング？　（Ｓｉｇｍａ）社製：活性：　３．
２００〜３，８００ｕｎｉｔｓ／＋ｇ］ＩＪＢを加え３
７℃で静置しｆ二。１時間後、１Ｍトリス（２−アミノ
−２−ヒドロキンメチル−ＩＪ−プロパンツオール）水
溶液を加えることによりｐｉ（を７．０に調整し、食塩
をＱ、１５ｔル／Ｑの濃度て含有する１０ｍＭリン酸塩
緩衝液（ｐＨ７，４）に対して４℃で透析しＬｏさらに
、ゲルパーミェーションカラムクロマトグラフィー［カ
ラム充填剤：東ソー味式会社製、Ｔ　Ｓ　Ｋ　ｇｅｌＧ
　３０００Ｓ　Ｗ　Ｇｌａｓｓ；溶離液：食塩を０．１
３’ｃｋｔ’ＱＯ）　１度で含有ｔ　ルｌｏａＭリン酸
塩緩衝液（ｐＨ７，４）　（流速：　Ｑ、８ｍＱ／５ｉ
ｎ）コにおいて、溶出時間１２分付近の成分として抗体
のＦ（ａｂ’）、フラグメントを得ｆこ。このようにし
て得られｆ二Ｆ（ａｂ’）ｔフラグメントの量は、波長
２８Ｏｎ−での吸光度測定の結果、約２０１１１ｇ″Ｓ
″あることか判明しｆこ。

実施例１（抗体が固定化されｒ二吸着剤の製ＩＪｉＬ）
金属ナトリウムの存在下で蒸留することによって得られ
ｆこノオキサン５０ｍｆｌ中にセルロース粒子（生化学
工業株式会社販売、ＣＮ・Ｉ−セルロファイン　ＣＨ）
ｌＯｇを懸濁し、得らメ−ｆこ＠濁液にＮ−ヒドロキシ
コハク酸イミド０．５ｇおよびジシクロへキノルカルボ
ノイミド１．ｏｇを加え、混合物を室温下でｌ晩振盪攪
拌したＯ　（’Ｊられ几混合物を０．０２Ｍリン酸塩緩
衝液（ｐＨ７，４）で洗浄し、吸引が過した。

得られた粒子を、参考例１て得られＬ抗体の２ｈｇを含
有する１０ｎ＋Ｍ　’ノン酸塩緩衝液（ｐＨ７，４）　
２０ｍＣと混合し、この混合物を４℃の温度で１晩攪拌
した。

得られた混合物を吸引が過した。が液をドデンル硫酸ナ
トリウムの存在下に非還元条件下でポリアクリルアミド
ゲル電気泳動（ゲル濃度：８重量％）に付したが、残存
する未反応の抗体は認められなかった（担体上への抗体
の固定化率；約１０Ｑ％）。

このようにして、参考例１で得られた抗体の２０Ｂが固
定化された吸着剤を約ｌｏｇ得ｆこ。

実施例２（抗体のＦａｂフラグメントが固定化された吸
着剤の製造） 実施例１においてセルロース粒子ｌｏｇの代りにポリビ
ニルアルコール粒子（東ソー昧式会社製、ＣＭ−）ヨパ
ール６５ＧＣ）　ｌｏｇを用い、かつ参考例１て得られ
ｆ二抗体２０Ｂの代りに参考例２て得られた抗体のＦａ
ｂフラグメント２０ＩＩ１ｇを用いる以外は同様な方法
により、参考例２て得られた抗体のＦａｂフラグメント
の１８．４１ｎｇが固定化された吸着剤を約ｌｏｇ得几
（Ｆａｂフラグメントの固定化率、約９２％）。

実施例３［抗体のＦ（ａｂ’）ｔフラグメントが固定化
された吸着剤の製造］ 多孔性ガラス粒子［米国エレクトロ一二ュークレオニク
ス（Ｅｌｅｃｔｒｏ　−ｎｕｃｌｅｏｎｉｃｓ）社製Ｃ
ＰＧ−１０−１０００］　ＩＱｇを、γ−アミノプロピ
ルトリエトキンシランを５１含有するトルエン溶液１０
０ｍ（！中で２４時間加熱還流下に反応させた。得られ
ｆ二混合物を、金属ナトリウムの存在下で蒸留すること
によって得られたジオキサンで洗浄し、吸引濾過した。

得られた粒子を、金属ナトリウムの存在下で蒸留するこ
とによって得られたジオキサンｌ［ｌＱｍｌｌ！に懸濁
し、この懸濁液に無水コハク酸３ｇを加え、混合物を室
温下で１晩攪拌した。得られｆ二混合物を、金属ナトリ
ウムの存在下て蒸留することによって得られたジオキサ
ンで洗浄し、吸引が過した。

得られｎ粒子を、金属ナトリウムの存在下で蒸留すこと
によって得られたジオキサン５０１中に懸濁し、この＠
濁液にＮ−ヒドロキシコハク酸イミド０５ｇおよびジシ
クロへキンルカルボノイドミ１．ｏｇを加え、混合物を
室温下でｌ晩攪拌しｆコ。得らイを几混合物を１０１１
１！１１リン酸塩緩衝液（ｐＨ７，４）で洗浄し、吸引
が過した。得られた粒子を、参考例３で得られた抗体の
Ｆ（ａｂ’）ｔフラグメント２ＱＢを含有するｌｏａＭ
リン酸塩緩衝液（ｐＨ７，４）　２０ｍＣと混合し、こ
の混合物を４℃の温度でＩ　ｌ１Ｍ１ｔｆｆ’した。得
られた混合物を吸引が過することによって、参考例３で
得られた抗体のＦ（ａｂ’）ｔフラグメントの２０１１
１ｇか固定化されｒ二吸着剤を約１０ｇ１！　几［Ｆ（
ａｂ’　）ｔフラグメントの固定化率　約１００％］５ 試験例１〜３および比較試験例１（吸着剤またはグリン
ン固定化セルロース粒子を用いた吸着試験）慢性腎不全
の患者の血ａ０．５ｍＱに実施例１て得られた吸着剤の
５０ｍｇを加え、３７°Ｃで３時間静置した。静置後、
遠心して得られた上前中のヒトβ２−ミクログロブリン
およびＩｇＧのａ変を測定した（試験例１）。ま几、実
施例１で得られｆ二吸着削の５０１ｇの代りに、実施例
２で得られｌこ吸着剤（試験例２）、実施例３で得られ
た吸着剤（試験例３）または実施例１におけると同様な
方法によりグリシノ２０ｍｇをセルロース粒子１０ｇに
固定化させて得られたグリンン固定化セルクース粒子（
比較試験例Ｉ）をそれぞれ５０Ｂ用いた以外：よ同様に
して慢性腎不全のも者の血清を処理し、ヒトβツーミク
ログロブリンおよびＩｇＧの濃度を測定した。これらの
結果を第１表に示す。なお、吸着剤またはグリンン固定
化セルロース粒子を加えない点以外は同様にして慢性腎
不全の患者の血清を処理した場合におけるヒトβツーミ
クログロブリンおよびＩｇＧの濃度は、それぞれ６０．
０ｍｇ／Ｑおよび１３４０ｍｇ／ｄＱ、てあった。

試験例　　１　　　　　　４５．３　　　　　　　　　
１３３０試験例　　２　　　　　　３７．２　　　　　
　　　　１３０５試験例　　３　　　　　　４０．５　
　　　　　　　　１２９０実施例４（血液処理装置の製
造） 実施例１におけると同様な方法により得られた抗体が固
定化された吸着剤の１ｏｏｆｆＬ！を、体液の導入口と
吸着剤充填層との間および体液の導出口と吸着剤充填層
との間にそれぞれ１８０メツツユのボリエステル製フィ
ルターからなる支持体を装着さ仕たポリカーボネート製
のハウジング（吸着剤充填層の形状・内径３０ａｎ＋の
円筒形）に充填しｆこ。このようにして得られた吸着剤
が充填されたハウジングをγ線滅菌処理に付することに
より、目的とする［ｆＩｌ液処理装置を得ｆ二。

試験例４（血液処理装置を用いｒニヒトβ、−ミクログ
ロブリン除去試験） 実施例４て得られた血液処理装置に、慢性腎不全の患者
の血漿（ヒトβツーミクログロブリン１変：　６１．１
ｍｇ＃！　；　ＩｇＧ蟲度：　１０００ｍｇ／ｄ＆）　
５００ｍＲを２０ｎｃ／＠ｉｎの流量で２時間循環した
。処理後の血漿中のヒトβ２−ミクログロブリン濃度は
２９．５ｍｇ／ｆ！で１）　９、まりＩｇＧｉｆｉ度：
１１３２０ｍｇ／ｄ（！ｉ：’　ａ　ツた。

（発明の効果） 本発明によれば、上記の実施例から明らかなとおり、ヒ
トβツーミクログロブリンを特異的に吸着する能力を有
する新規な吸着剤がｔｌ！供される。

また、該吸着剤を充填してなる血液処理装置を用いるこ
とによって、血漿等の被処理液中のヒトβツーミクログ
ロブリンを特異的に除去することが可能である。

特許出願人　株式会社　り　ラ　し

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ヒトβ＿２−ミクログロブリンと特異的結合性を有
   する物質を担体に固定化させてなることを特徴とするヒ
   トβ＿２−ミクログロブリン用吸着剤。 ２、血液または血漿の導入口および導出口ならびに請求
   項１記載のヒトβ＿２−ミクログロブリン用吸着剤を充
   填した層を有することを特徴とするヒトβ＿２−ミクロ
   グロブリン除去用血液処理装置。