JPH01296995A

JPH01296995A - 糖転移反応生成物の製造法

Info

Publication number: JPH01296995A
Application number: JP63124784A
Authority: JP
Inventors: Yasuto Watanabe; 渡辺　保人; Shigeyuki Takenishi; 竹西　繁行; Hirobumi Nakano; 博文中野; Shuji Kametani; 亀谷　修史
Original assignee: Osaka Organic Chemical Industry Co Ltd; Osaka City
Current assignee: Osaka Organic Chemical Industry Co Ltd; Osaka City
Priority date: 1988-05-21
Filing date: 1988-05-21
Publication date: 1989-11-30

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】［産業上の利用分野］本発明は食品素材・食品添加物の製造、医薬品・医薬品
中間体の製造、有機合成化合物・有機合成化合物中間体
の製造などに用いられる糖転移反応生成物の製造法に関
する。さらに詳しくは、本発明は酵素反応という温和で
消費エネルギーの少ない方法によってアルコール類、糖
アルコール類、単糖類、オリゴ糖類、カテコールなどの
水酸基を有する種々の物質のガラクトシル誘導体または
均一にβ−１，４結合したガラクトオリゴシル誘導体を
直接かつ選択性よく製造する方法に関する。

［従来の技術およびその課題］乳糖などのβ−ガラクトシド結合を加水分解するはたら
きををする酵素であるβ　−ガラトラダーゼ類は、その
起源により多少の効率の相違はあるが、ガラクトースの
転移反応の触媒として用いられることは周知であり、こ
の酵素を利用してオリゴ糖などを製造することに関する
報告や特許は枚挙にいとまがない（バイオケミストリー
（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、　　１５．　１９９４
（Ｉ９７Ｇ）、特開昭５８−１９０３８８号公報など）
。

しかしながら、β　−ガラクトシダーゼ類は、その反応
の本質においてつぎのような欠点を存する。すなわち、 ■β　−ガラクトシダーゼ類は、乳糖のような低分子口
の基質を用いたばあいの反応効率が大きいが、分子二が
大きい多糖類などは該β−ガラクトシダーゼ類の基質と
なりえないか、または基質となりえたとしてもその分解
反応の効率が非常に小さい。したがって、β　−ガラク
トシダーゼ類を用いては多糖類をガラクトシル供与体と
して転移反応をすることができない。

■β　−ガラクトシダーゼ類はいわゆるエキソ型の酵素
であり、基質の非還元末端からガラクトース単位で加水
分解する。いいかえるとβ−ガラクトシダーゼ類はガラ
クトース単位の転移反応の触媒となりうるが、ガラクト
ース数個を一度に転移するオリゴ糖単位は転移反応の触
媒とはなりえない。その結果、高重合度のガラクトオリ
ゴ糖をその構造中に含む転移生成物をうるためには、−
旦生じた転移生成物が順次受容体となり、ガラクトース
単位ｒつの糖鎖の延長が起こらねばならない。

■既知のβ　−ガラクトシダーゼを用いた転移反応のば
あい、ガラクトース残基は受容体分子の第一級水酸基に
結合する傾向が大きく、その結果、たどえば乳糖にこの
酵素を作用させたばあいの転移生成物の糖鎖間の結合と
してはβ−１，６結合がもっとも多く生成し、かかるβ
−１，Ｇ結合以外にはβ−１，４、β−１，３結合が生
成する（「ジ・エンザイムズ（”Ｔ１１ｅ　Ｅｎｚｙｍ
ｃｓ”）　Ｊ　、Ｖｏｌ、７．ピー・デイ−・ボーイヤ
ー（Ｐ、　Ｄ、　Ｂｏｙｅｒ）編、アカデミツク争ブレ
ス（＾ｃａｄｅｍｌｃ　Ｐｒｅｓｓ）、ニューヨーク（
Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ）、　　１９７２．６１９頁）。した
がって、従来のβ−ガラクトシダーゼを用いた方法では
、その糖鎖部分が均一にβ−１，４ガラクトシド結合し
たオリゴ糖のみをうろことはできない。前記と同様にし
て、たとえばグリセロールを受容体としたばあいには、
その１位（α位）の１級水酸！↓にガラクトース１残基
のみが結合したものがほぼ優先的に合成される。

従来、植物細胞壁の多糖を加水分解する酵素としてガラ
クタナーゼの研究が行われている。

ガラクタナーゼとしてはエンド型のものがよく知られて
おり、かかるガラクタナーゼは分解される多糖類のガラ
クトシド結合によってつぎの２種類に分類されている。

すなわち、１つはβ−１，４結合したガラクタン主鎖を
分解するエンド１．４−β−Ｄ−ガラクタナーゼであり
、もう１つはβ−１，３結合を有するガラクタン主鎖を
分解するエンド−１，３−β−Ｄ−ガラクタナーゼであ
る。

しかしながら、これらの研究は、基質となる多糖類の構
造の推定、種々の成分の抽出効率や濾過効率の上昇、ペ
クチンの製造などを目的としてなされたものであり（ジ
ャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ、
Ｂｉｏｔ。

Ｃｈｏｉ、）、２５１．５９０４　　（Ｉ９７Ｂ＞、日
本農芸化学会誌。

４３．８３１　（Ｉ９０９））、酵素の糖転移反応を積
極的に利用して転移生成物をうるとい・うことを目的と
してなされたものではない。

そこで本発明者らは前記従来技術に鑑みてペニシリウム
中シトリナム（Ｐｅｎｌｃｉｌｌｉｕｍｅｉｔｒｉｎｕ
ａ＋）に属するカビが生産するエンド−１゜４−β−１
）−ガラクタナーゼ（以下、単にガラクタナーゼという
）に着目して説意研究を重ねた結果、かかるガラクタナ
ーゼが強い転移活性を仔し、しかもその受容体特異性が
大きいことを見出し、本発明を完成するにいたった。

［課題を解決するための手段］すなわち、本発明はペニシリウム・シトリナム（Ｐｅｎ
ｌｅｉｌｌｉｕｍ　ｃｉｔｒｌｎｕｍ）が生産するガラ
クタナーゼを触媒として用いることを特徴とする糖転移
反応生成物の製造法に関する。

［作用および実施例］本発明で用いられるペニシリウム・シトリナムが生産す
るガラクタナーゼは、同じβ　−ガラクトシド結合を加
水分解する酵素であってもβ〜・ガラクトシダーゼとは
まったく異なる作用を呈するものである。その特徴とし
ては以下の２点があげられる。

■前記ガラクタナーゼはアラビノガラクタンのような多
糖類を速やかに分解する性質を有するため、多糖類を基
質として利用することができる。

■前記ガラクタナーゼはいわゆるエンド型酵素であり、
基質である多糖類のガラクトシド結合を、適当な長さで
（ランダムに）分解する。

本発明においては、ガラクタナーゼが前述の特徴を有す
るだけではなく、さらに以下の特徴を有することが本発
明者らによって見出された。

■前記ガラクタナーゼは糖鎖がβ−１，４ガラクトシド
結合のみからなる転移生成物を収率よく生成する。また
、受容体の２級水酸基へ選択的に糖を転移させることが
できる。たとえば、以下の実施例にも示すように、グリ
セロールを受容体としたばあいには、グリセロールの２
位（β位）にガラクトースやガラクトオリゴ糖が結合し
た転移物のみかえられる。

■前記ガラクタナーゼが受容体とすることができる物質
の種類、すなわち受容体の特異性は広く、β　−ガラク
トシダーゼにまったく劣りをとらない。

したがって、本発明の方法は従来のβ−ガラクトシダー
ゼと呼ばれている一群の酵素を利用して糖転移生成物を
つる方法とはまったく異なり、ガラクタナーゼの新たな
特性を利用して糖転移生成物をうる方法であり、とりわ
け、ガラクトシルまたはβ−１，４結合したガラクトオ
リゴシル誘導体を収率よく製造することができる方法で
ある。

以下、本発明の方法について、具体的に説明する。

本酵素を用いて転移反応を行なうに際して使用されうる
基質としては、たとえば大豆種子や柑橘類の皮に含まれ
る多糖類などが代表例としてあげられるが、本発明にお
いてはこれら以外にもガラクタンを含有するものであれ
ばいかなるものも基質として使用することができる。ま
たかかる多糖類の純度はとくに高くなくてもよい。なお
、通常はオカラより１０％ＮａＯＨで抽出し、たとえば
エタノールなどの溶媒を用いて沈澱させることによりえ
られる大豆アラビノガラクタンを主成分とする多糖類標
品が用いられる。また、本発明においては基質にはこの
ような多糖類だけではなく、β−１，４にガラクトシド
結合したガラクトオリゴ糖やその含有物、さらにｏ　−
二トロフェニルーβ−Ｄ−ガラクトシドなどの人工基質
を用いることもできる。

酵素生産菌には、本発明においてはペニシリウム・シト
リナムが用いられるが、ガラクタナーゼの生産能を有す
るかぎりその変異株を利用することもできる。

酵素標品は、前記ペニシリウム・シトリナムにより同時
に生産されるβ−ガラ′クトシダーゼが分離されたもの
であれば高度に精製する必要はない。たとえば、既報の
方法（アグリカルチュラル・アンドφバイオロジカル・
ケミストリー（＾ｇｒ１ｃ、Ｂｌｏｌ　、Ｃｈｅｍ、　
、　４９　、３４４５　、　（Ｉ９８５））／Ｐｕｒ１
ｆ’Ｉｃ１ｃａｔｌｏｎ　　ａｎｄ　　Ｐｒｏｐｅｒｔ
ｉｅｓ　　ｏｌ’　　Ｔｗ。

Ｇａ１ａｃｔａｎａｓｏｓ　［’ｒｏｏ＋　Ｐｅｎｌｃ
ｌｌｌｌｕｍ　ｃｉｔｒｌｎｕｍ）にしたがって本菌を
固体培養してえられる粗酵素液を出発原料とし、硫安沈
澱、陰イオン交換クロマトグラフィにより分画すれば、
はぼ目的とする約５％以上の酵素純度を有する標品がえ
られる。

受容体原料には、たとえばメタノール、エタノール、エ
チレングリコール、ｌ−プロパツール、１．２−プロパ
ンジオール、１．３−プロパンジオール、グリセロール
、ｌ−ブタノール、１．２−ブタンジオール、１．３−
ブタンジオール、１．４−ブタンジオール、２．３−ブ
タンジオール、メソ−エリスリトール、ジグリセロール
、スチレングリコール、モノアセチン、モノブロピオニ
ン、モノカプロン、モノカプリン、カテコール、Ｄ−リ
ビトール、Ｄ−キシリトール、Ｌ−アラビトール、Ｄ−
グルチトール、Ｄ−ガラクチトール、Ｄ−マンニトール
、ミョーイノシトール、Ｄ−リボース、Ｄ−キシロース
、１、−アラビノース、Ｄ−リキソース、Ｄ−ガラクト
−ス、Ｄ−グリツース、Ｄ−マンノース、Ｄ−クロース
、Ｄ−アロース、Ｄ−フコース、Ｌ−ソルボース、Ｄ−
ガラクシロン酸、メチル−β−グリコシド、メチル−β
−ガラクシド、ラクトースなどの通常市販されている純
度（約９５％以上）のものを用いることができる。

本発明は酵素を触媒とした反応であるから、温和な条件
で反応を行なうことができるのは言うまでもない。すな
わち、ｐＨは４〜５、温度は２０〜５０℃が適当である
。

本酵素を用いた転移反応のばあい、反応初期より種々の
重合度の転移生成物が認められるが、これらのうち高重
合度の転移生成物は一旦生じたのち、さらに本酵素によ
り分解され、反応経過とともに順次減少する。その結果
、反応後期には低重合度の転移生成物が多く生成する。

したがって、反応時間、酵素濃度などの条件は反応液中
の転移生成物のガラクトース残基の・Ｖ均重合度に大き
な影響を及ぼす。すなわち、反応時間は長いほど、また
一定反応時間のばあいには、高い酵素濃度を使用するほ
ど、えられる転移生成物の平均重合度は小さくなる。

たとえば、反応温度４０℃、［）１１４．５の条件下で
、酵素濃度０．５単位／　ｍｌ　、基質濃度１％、受容
体製ｆｉ　２　、５％としたばあい、反応時間３０分間
では、一般式（Ｉ）：Ｇ＋　−（Ｇｚ　）ｎ−Ａ　　　　　　　　（Ｉ）（式
中、Ｇ１およびＧ２はそれぞれガラクトース残基、雇ま
水酸基含有の受容体分子、ｎはθ〜１０の整数を示し、
ガラクトース残基どうしの結合はβ−１，４％合である
）において、重合度（ｐ）が３以上である転移物が約５
０％生成し、残りはそれ以下の重合度を有するものとな
る。また、反応時間２時間では、重合度（ｎ）が０．１
および２のものがそれぞれほぼ等ｍずつ生成する。さら
に反応時間２０時間では重合度（ｎ）が主に１および２
のものがそれぞれほぼ等量ずつ生成する。

また、使用する受容体が本酵素の活性を阻害しないかぎ
り、受容体濃度が高いほど基質あたりの転移生成物の収
率は人きくなる。一般に受容体濃度５％以上であれば、
転移生成物は薄層クロマトグラフィー（以下、ＴＬＣと
いう）で確認することができる。このばあい、えられる
転移生成物の収量は、使用する受容体の種類によって異
なるのは言うまでもない。また、受容体をある程度以上
添加しても転移生成物の収量には顕著な増加は認められ
なくなる。このばあいの濃度も受容体によって異なるが
、たとえば比較的受容体としての効率が高いグリセロー
ルのばあい、１５％以−ヒの濃度ではえられる転移生成
物ごの増加はほとんどない。

基質濃度は高いほど、一定の酵素および受容体濃度で一
定時間反応させたばあいにえられる転移生成物の平均重
合度は大きく、またそれらの収量も大きい。しかし、使
用する基質あたりの転移生成物の収率としては、低い基
質濃度のばあいとほぼ同じである。一般に、大豆アラビ
ノガラクタンの濃度１％において、一般式（Ｉ）中の重
合度（ｎ）がＯおよび１の転移生成物のみが主に生成す
る本反応の最終段階までに要する時間は、たとえば４０
℃、ｐＨ４，５、酵素濃度０，５単位／　ｍｌの条件下
では、１５時間で充分である。このばあい、受容体が本
酵素の活性を阻害しないかぎり、受容体濃度の影響は小
さい。

以上、本反応のための条件を述べたが、いろいろな受容
体について目的とするある重合度の転移生成物を収率よ
くうるための最適なこれらの諸条件は、さらにつぎのよ
うな実験により詳細に決定することができる。すなわち
、ＴＬＣまたはＢｉｏ−Ｇｅｔ　Ｐ−２（バイオラド社
製）などを用いたゲル濾過法で種々の条件下でえられた
反応液を分画法後、フェノール−硫酸法でなどを用いて
各重合度の生成物を定ユする。

酵素反応は、反応液を沸騰水中で１０〜１５分間加熱す
ることにより完全に停止させることができる。

酵素反応液から目的とする転移生成物を分離するには、
種々の方法を採用することができる。

その−例をあげれば、たとえば活性炭クロマトグラフィ
を行ない、目的物をカラムに吸着させ、エタノールなど
の低級アルコールの水溶液で溶出させる方法がある。な
お、反応液に濃度が５０％となるようにたとえば、メタ
ノール、エタノール、アセトン、エチルエーテルなどの
有機溶媒を添加すれば、残存する未反応多糖類は沈澱物
として除くことができる。

また、転移生成物が非還元糖であるばあい、反応液中に
共存する加水分解物である還元糖は、アニリン処理（日
本農芸化学会誌６１．３３９（Ｉ９８７）参照）と活性
炭クロマトグラフィーを併用することによって除去する
ことが可能である。

すなわち、反応液に酢酸アニリンをその１０分の１の量
（重量）程度を加え、８０℃で３時間処理し、還元糖の
みをアニリン誘導体に変える。このアニリン誘導体およ
び残存する酢酸アニリンは、活性炭カラムに強力に吸着
されるため、比較的吸着力の弱い転移生成物とは容易に
分離することができる。また、ＴＬＣにおいて、上記ア
ニリン処理後の液を分析すれば加水分解物である還元糖
はアニリン１透導体どなることにより易動度が大きく増
大するので、そうでない転移生成物と容易に識別するこ
とができる。

かくしてえられる糖転移反応生成物は一般式（）：％式％（）（式中、Ｇ１およびＧ２はそれぞれガラクトース残基、
Ａは水酸基含有の受容体分子、ただし、Ｇ１　はオリゴ
糖鎖における非還元末端のガラクトース残基、Ｇ２はＧ
ｌ　と受容体分子間に結合するガラクトース残基、また
ｎはθ〜ＩＯの整数を示し、ガラクトース残基どうしの
結合はβ−１，４結合である）で表されるガラクトシル
誘導体またはガラクトオリゴシル誘導体である。ここで
、反応液中のｎの平均値は前述したようにその反応条件
によって異なりうる。

以下に実施例をあげて本発明の方法をさらに詳細に説明
するが、本発明はかかる実施例のみに限定されるもので
はない。

実施例１大豆アラビノガラククン１％、第１表に示した濃度の種
々の化合物、ガラクタナーゼ（２，５単位）を含む２０
０μ史の５０ＩＩＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４，５）を４０℃
で１５時間保温した。この反応液を直接またはアニリン
処理した後、ＴＬＣで分析した。

このようにしてえられたクロマトグラムを受容体を添加
しない対照のものと比較し転移物のｑ無を確認した。そ
の結果を第１表に示す。

この結果、本酵素は種々の一級アルコール類、ジオール
類、グリセロールやその誘導体、糖類、糖アルコール類
、カテコールなどを受容体とじつる広い受容体特異性を
有していることが明らかとなった。しかし、調べた物質
の範囲内では、２−プロパツール、２−ブタノール、モ
ノラウリンおよびフラクトースは受容体となりえなかっ
た。

［以下余白コ実施例２大豆アラビノガラクタン０．８ｇおよびグリセロール５
ｇを含む１００ｍ１の５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐ１１４．
５）に精製したガラクタナーゼ２０単位を加えて４０℃
で４８時間反応させた。残留する未反応多糖類はエタノ
ール２００１ｉｌを加えることにより沈澱物として回収
し、除去した。上清をさらに１００ｍ１に減圧濃縮した
のち、転移生成物の単離を容μにするために、酢酸アニ
リン１０ｇを加えて８０℃で３時間加熱し、共存するガ
ラクトースなどの還元糖をアニリン誘導体に変換した。

この液をＴＬＣで分析したところ、最終的に蓄積すると
考えられる２ｇｉ類の転移生成物が認められた。

そこで前記アニリン処理液から活性炭クロマトグラフィ
でこれら２種類の転移生成物（＾およびＢ）を（Ｉ１離
した。生成物ＡおよびＢの収量はそれぞれ１３ｍｇと１
２０１ｇであり、用いたアラビノガラククンに対する収
率は生成物ＡとＢをあわせて約３１９６であった。

これらの生成物は、β　−ガラクトシダーゼにより完全
に加水分解され、生成物Ａではガラクトースとグリセロ
ールが等モルで、また生成物Ｂではグリセロール１モル
に対してガラクトース２モルの割合で検出された。さら
に１３　Ｃ−核磁気共用スベクトルで内部標準としてア
セトン（δ３１．４ｐｐＩＤ）を用い、これらの生成物
を同定した。その結果、生成物Ａでは６２．０Ｇ　、８
２．１７．１１ｆ２．７＋、８９．７Ｂ　、　７２．１
４　、？３．８２．７６．２Ｂ、８’２　、０５．１０
３．６１ｐｐｍｌこ共鳴線が認められた。とくに８２．
Ｏ５ｐｐｍの共鳴線により、化合物Ａはガラクトース残
基がグリセロールの２位に転移した２−ガラクトピラノ
シルグリセロールであることを確認した。化合物Ｂでは
θ１．８０．８２．０７．６２．７１　、　Ｏ９，８２
，７２，８４，７３，９９，７４，３１。

７５．５１．７６．２Ｂ　、　７８．３２．８２．０１
．１０３．６２．１０５．４１ｐｐｍに共鳴線が認めら
れた。８２．０１ｐｐｌＩ＋の共鳴線によりこの化合物
は、グリセロールの２位に転移した化合物であることを
確認した。またβ　−ガラクトシダーゼにより完全に分
解されることおよび７８．３２ｐｐｍの共鳴線によりガ
ラクト−ス残基間の結合はβ−１，４結合であることが
確認された。

これらの結果から、化合物１３は２−β−ガラクトビオ
シルグリセリンであることが確認された。

実施例３大豆アラビノガラクタン　１．ｏｆおよび乳糖２．５ｇ
を含む１００ｍ１の５０＠Ｈ酢酸緩衝液（ｐｌ＋４．５
）に、精製したガラクタナーゼ２０単位を加え、４０°
Ｃで１０時間反応させた。残留する未反応多糖をエタノ
ール２００ｍ１を加えることにより沈澱物を回収して除
去し、上清を３０ｍ１に減圧濃縮した。

これを活性炭カラム（Ｉ５ｅｍφｘ５０ｃｍ）にかけ、
水１ｇおよび５％エタノール５００１で順次カラムを洗
浄したのち、５〜４０９６の範囲でエタノール濃度を直
線的に上昇させ、オリゴ糖を分画した。これらのうち、
主転移生成物の両分を集め、サラニペーパークロマトグ
ラフィで単離し、転移生成物Ｃｌ０５ｍｇをえた。転移
生成物Ｃを常法にしたがってメチル化分析を行なったと
ころ、２、　３．　６　−１−リメチルーグリコース、
２，３゜６−トリメチル−ガラクトースおよび２．３゜
４．６−チトラメチルガラクトースが約１：１：１の割
合（重量比）で検出された。またこの化合物は、β−ガ
ラクトシダーゼにより完全に分解され、ガラクトースと
グルコースが２＝１の割合（重量比）で生じた。

これらの結果から、転移生成物Ｃは４−β−ガラクトシ
ル１．４−ラクトースであることが確認された。

実施例４大豆アラビノガラクタン　１．０ｇ、、Ｄ−フコース２
．５ｇを含む１００ｍ１の５０ｄ酢酸緩衝液（ｐ＋＋４
．５）に、精製したガラクタナーゼ２０単位を加え、４
０℃で１０時間反応させた。残留する未反応多糖類をエ
タノール２０ｈｌに加えることにより沈澱物を回収して
除去し、上清を３０ｍ１に減圧濃縮した。

これを活性炭カラム（Ｉ５ｃ＋ｏφｚ５Ｑｃ１ｎ）にか
け、水１！：ｌおよび５％エタノール５００　ｍｌで順
次カラムを洗浄したのち、５〜５０％の範囲でエタノー
ル濃度を直線的に上昇させ、オリゴ糖を分画した。２種
類の転移生成物の両分を集め、それぞれペーパークロマ
トグラフィでさらに精製し、転移生成物Ｄｌ１５ｍｇお
よびＥ３３ｍｇをえた。えられた転移生成物りおよびＥ
はともにβ　−ガラクトシダーゼで完全に分解され、遊
離されるガラクトースとフコースの量は、それぞれ約１
：１および２：１であった。また、常法によりメチル化
を行ない、ガスクロマトグラフィー（カラム＝ＩεＣＮ
５５−ＭガスクロームＱ（ガスクロ工業■製）（２ｍ）
　：温度１８０℃）を用いて各構成メチル化糖を定鑓し
たところ、転移生成物りでは２，３゜４．６−テトラメ
チルガラクトースと２．３−ジメチルフコースが約１．
１の比で、また転移生成物Ｅでは２，３，４．６　−テ
トラメチルガラクトース、２，３．６　−）リメチルガ
ラクトースおよび２，３−ジメチルフコースが約１：１
：１の割合（モル比）で検出された。

これらの結果から、前記転移生成物りおよび１）は、そ
れぞれ含まれる結合がすべてβ−１，４ガラクトシド結
合であるガラクトシルフコースおよびガラクトビオシル
フコースであることが確認された。

比較例１大豆アラビノガラククン０．８ｇ、グリセロール５ｇお
よび塩化マグネシウム０．０４５ｇ−を含む１００ｉ１
の５０＋ａＭ（Ｉ）Ｈ７，０）リン酸緩衝液に、それぞ
れエシェリヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｌｅｈｌａ　ｃｏ
ｉｌ）、サツカロミセス・フラギリス（Ｓａｅｃｈａｒ
ｏｍｙｃｅｓ１’ｒａｇｌｌｌｓ）、牛の肝臓に由来の
β　−ガラクトシダーゼ（いずれもシグマ薬品■製）　
８０単位を加えて４０℃で５０時間反応させた。そのの
ち、各反応液をＴＬＣで分析したが、ガラクトースなど
の加水分解反応生成物もグリセロールへの転移生成物も
まったく検出されなかった。

比較例２０−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド０．
８０２ｇ　、グリセロール６．０ｇおよび塩化マグネシ
ウム０．０９５ｇを含む２００ｉ１の５００１Ｍ（Ｉ）
ＩＩ７．３）リン酸緩衝液に前記エシェリヒア・コリに
由来のβ　−ガラクトシダーゼ１２０単位を加え、４０
℃で３０分間反応させたのち、１０分間煮沸して酵素を
失活させた。つぎに反応液に酢酸アニリン２０ｇを加え
、８０℃で３時間加熱し１、反応液中のガラクトースな
どの還元糖をアニリン誘導体とした。これを、ＴＬＣを
用いて分析したところ、実施例１と異なり、ただ１種類
の転移生成物のスポットしか観察されなかった。そこで
実施例１と同様に活性炭カラムクロマトグラフィを行な
い、この転移生成物Ｆ５０２ＩＩ１ｇを単離した。この
生成物１？を実施例１と同様に１３　Ｃ−核磁気共鳴ス
ペクトルを用いて同定した。その結果、［ｉ２．０Ｂ、
１；３．４７　、６９．７０．７１．５４．７１．８＋
　、７３．７Ｇ、？［ｉ、２０．１０４．１ｏｐｐａ＋
に共鳴線が認められた。しかしながら、実施例１で観測
された８２．Ｏ５ｐｐｍのＪＩ：鳴線は存在せず、７１
．５４ｐｐｍにグリセロールの２位炭素に起因する共鳴
線が観察され、化合物が１位にガラクトースが転移した
１−ガラクトシルグリセロールであることを確認した。

さらに前記転移生成物Ｆは、β　−ガラクトシダーゼで
完全に水解されることから、結合はβ　−ガラクトシド
結合であることが確認された。

［発明の効果］本発明の製造法には基質と（２て多糖類を利用すること
ができ、しかもえられる化合物は高重合度の糖鎖を有す
るβ−１，４結合したガラクトース糖鎖の転移生成物で
あり、グリセロールを受容体としたばあいにえられるβ
　−ガラクトシダーゼと異なる水酸基に特異的に糖を結
合することができるなど、従来の方法にはない特性を呈
する。したがって、本発明の製造法によれば、新規な構
造の化合物の合成、新しい生理活性を発現する可能性の
ある化合物の合成、水酸Ｊλを特異的に保護するなどの
効果が奏される。

Claims

【特許請求の範囲】１　ペニシリウム・シトリナム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕ
ｍｃｉｔｒｉｎｕｍ）が生産するガラクタナーゼを触媒
として用いることを特徴とする糖転移反応生成物の製造
法。２　糖転移反応生成物が一般式（ I ）：Ｇ＿１−（Ｇ＿２）＿ｎ−Ａ（ I ）（式中、Ｇ＿１およびＧ＿２はそれぞれガラクトース残
基、Ａは水酸基含有の受容体分子、ｎは０〜１０の整数
を示し、ガラクトース残基どうしの結合はβ−１，４結
合である）で表されるガラクトシル誘導体またはガラク
トオリゴシル誘導体である請求項１記載の糖転移反応生
成物の製造法。