JPH01292253A - 涙液中のカルシウムイオンの測定方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、涙液中のカルシウムイオンの測定方法に係り
、更に詳しくは涙液中のカルシウムイオン濃度を機器を
用いることなく、その場で簡単に測定することができる
方法及びこの方法を実施するに好適なキットに関する。

［従来の技術］ コンタクトレンズを装用すると、涙液中の蛋白質・脂質
・カルシウム化合物といった成分が、コンタクトレンズ
に汚れとして付着または吸着してしまい、コンタクトレ
ンズの果たすべき機能に支障をきた１とともに、眼組織
に対しても障害を及ぼす場合がある。涙液中の成分がコ
ンタクトレンズに付着すること自体は、コンタクトレン
ズが涙液に接している以上、Ｉｔノられないことである
が、この涙液中の成分のうち、蛋白質や脂質といった汚
れ゛は、従来の灰浄方法、例えば特公昭５３−４７８１
０号公報や特開昭６１−６１１２７号公報等による洗浄
方法で、比較的容易に除去することが可能である。しか
しながら、カルシウム化合物による汚れについては、カ
ルシウム化合物がコンタクトレンズに固着してしまい、
除去することが困難である。

そこでコンタクトレンズ装用壱の涙液について、そのカ
ルシウムイオンの多少を調べることが行なわれており、
涙液中のカルシウムゼオ２１度の定量は、従来、原子吸
光分析法や蛍光分析法などによって行なわれている。例
えば、原子吸光分析法による定８は、Ｕｏｔｉｌａ　Ｈ
Ｈ，５ｏｂｌｅ　ＲＥ、　５ａｖｏｒｙ　Ｊ。

が”ＨｅａＳｕｒｅｌｌｌｅｎｔ　ｏｆ　ｔｅａｒ　ｃ
ａｌｃｉｕｍ　＋ｅｖｅ＋ｓ”（Ｉｎｖｅｓｔ、　０ｐ
ｈｔｈａｌａ＋ｏｆ、　ｖｉｓ、　Ｓｃｉ、　１１２５
８−２５９゜１９７２）に報告しており、蛍光分析法に
よる定量は、５ｔａｎｌｅｙ　Ｈ，Ｈｕｔｈ、　ＨＡ；
　Ｐａｕｌ旧ｒａｎｏ；　ｘｒｖｔｎｇ　Ｈ。

ＬｅＯＥ）Ｏｌｄ、　　）１０．　　Ｄｓｃが　“Ｃａ
ｌｃｉｕｍ　　ｉｎ　　Ｔｅａｒｓ　　ａｎｄＣｏｎｔ
ａｃｔ　Ｌｅｎｓ　Ｗｅａｒ　”　（Ａｒｃｈ、　　Ｏ
ｐｈｔｈａｌｍｏｌ、　　９８１２２−１２５．１９８
０）に報告している。

また、その他のカルシウムイオン渡瓜の測定方法として
は、蛍光試薬Ｆｕｒａ−２を用いた蛍光分析、ＥＤＴＡ
による滴定、細管式等速電気泳動分析などがある。

しかしながら、これらの方法は、カルシウムイオン１ｍ
度を精度良く測定できるものの、各種の機器を用いるな
ど、煩雑な手間と、ｈ間及び設備が必要であるという欠
点がある。

［発明が解決しようとする課題］ 従来の涙液中のカルシウムイオンの測定方法は、上述し
た様に、精度良く定量することばできても、各種の機器
を用いるなど手間がかかり、涙液採取後、短時間で結果
を得ることができないという欠点がある。

また、測定対象が涙液ということから、サンプル酪及び
サンプリング方法に非常に制限があるという点にも考慮
しなければならない。

従って本発明の課題は、涙液中のカルシウムイオンを、
限られたサンプル餡で、短時間に簡便に測定することが
できる方法およびこの方法に好ましく用いられる４ツト
を提供することにある。

［課題を解決するための手段］ 本発明者は、涙液分泌がを測定するためのシルマー試験
後のシルマー試験紙を有効に利用して、涙液中のカルシ
ウムイオンを調べることができれば、カルシウム化合物
のコンタクトレンズへの付着の可能性を予測し、未然に
その防止対策をとるなどの対応が可能となることに着眼
した。そして試験後の涙液を含んだシルマー試験紙を水
で抽出処理して得られた抽出液に、カルシウムイオンと
キレートを形成する発色試薬を加えて抽出液を呈色させ
ることにより、涙液中のカルシウムイオンを簡易に測定
できることを見い出した。さらにシルマー試験紙以外の
ものでも、水を吸収する性質を有する試験紙であれば、
同様に使用可能であることを見い出した。

従って本発明は、涙液を含ませた、水吸収性試験紙を水
で抽出処理して得られた抽出液に、カルシウムイオンと
キレートを形成する発色試薬を加えて前記抽出液を呈色
させて、その呈色の度合により涙液中のカルシウムイオ
ン１ｍの高低を評価することを特徴とする涙液中のカル
シウムイオンの測定方法にある。

以下、本発明のカルシウムイオンの測定方法を詳細に説
明する。

本発明の方法により、涙液中のカルシウムイオンを測定
するためには、その試験紙として、水吸収性試験紙を用
いる。水吸収性を要件としたのは、涙液に接触したとき
に涙液を吸収保持させるためである。この試験紙は上記
の水吸収性を有するとともに、涙液を含ませるために眼
組織と接触させた場合に眼組織に悪影響を与えず、無害
なものであれば、いかなるものも用いられるが、濾紙を
用いるのが好ましく、濾紙の中でも特に、涙液分泌Ｓを
測定するためのシルマー試験に用いられるシルマー試験
紙（例えばフルオレッセイン試験紙、アルコン社製シル
マー試験試験組”ＳｃｈｉｒｍｅｒＴｅａｒ　Ｔｅ５ｔ
　５ｔｒｉｐｓ　”等）を用いると涙液分泌船の測定と
涙液中のカルシウムイオンの測定とを同時に行なうこと
ができるので特に好ましい。ここでシルマー試験とは、
幅５　ｓｒ　ｓ長さ３５Ｍの濾紙からなるシルマー試験
紙の先端５＃１を折り曲げ、これを雨下眼瞼外側１／３
の部分の瞼粘膜に掛け、５分間ｔＩ装置し、涙で濡れた
長さを折り目部分から測定し、涙液分泌かが正常（１０
〜３０　ｍ　）か涙液減少症（１０ｔｒｍ以下）である
かを判断するための試験である。

上述の如く、シルマー試験後のシルマー試験紙を用いれ
ば涙液分泌量の測定と同時に涙液中のカルシウムイオン
の測定を行なうことができ好適であるので、以下、本発
明の方法をシルマー試験紙を用いた例について説明する
。

先ずシルマー試験により涙液分泌量を評価した後の涙液
を含んだシルマー試験紙を用意する。この涙液を含んだ
シルマー試験紙はカルシウムイオン測定のための涙液サ
ンプル聞を一定にするため、その涙液を含んだ部分を一
定の大きさに切断して使用するのが好ましい。例えば上
記の幅５ｍ、長さ３５Ｍのシルマー試験紙の場合、涙液
を含ｌνだ部分を長さ１０〜３０＃＋となるように切断
する。

次に一定の大きさに切断されたシルマー試験紙を水で抽
出処理する。この抽出処理に用いられる水は、涙液中の
カルシウムイオンの測定精度を上げるために、カルシウ
ムイオン等のイオン成分を含まない蒸留水を用いるのが
好ましい。この抽出処理は所定部の水を入れた抽出用容
器中に前記シルマー試験紙片を投入し、攪拌することに
より行なわれる。容器が栓付きであれば、密栓後、激し
く撮とうしても良い。この抽出処理により、涙液中のカ
ルシウムイオンは抽出液中に移行する。抽出のための水
の部は、例えば幅５　ａｍ　、長さ２０Ｉｎのシルマー
試験紙片の場合、０．５〜５１１１１！が適当である。

０．５ｄ未満では、歩出すぎてシルマー試験紙片中のカ
ルシウムイオンを１分に水層に移行させることができ・
ないばかりでなく、後続の発色試薬による抽出液の呈色
の判定が判りずらく、一方、５ｄを超えると、カルシウ
ムイオンの抽出は十分に行なうことができるが、抽出液
中のカルシウムイオン濃度が低くなり、後続の発色試薬
による抽出液の呈色の度合が少なく、判定しにくくなる
からである。抽出に用いられる水の特に好ましい帛は、
前記の大きさのシルマー試験紙片の場合、１〜３１ｄｌ
である。。

次にこの抽出液に、カルシウムイオンとキレートを形成
する発色試薬を加えて、抽出液を呈色させ、その９色の
度合により涙液中のカルシウムイオン濃度！度の高低を
評価する。用いられる発色試薬としては、カルシウムイ
オン濃度によって異なった発色を示覆試桑が好ましく、
例えば０−クレゾール２タレインコンブレクソン、ＮＮ
希釈粉末指示薬（商品名ドータイトＮＮとして市販され
ている１−（２−ヒドロキシ−４−スルホ−１−ナフチ
ルアゾ）−２−ヒトＯキシナフトエ酸を粉末状に２Ｓ０
４で１０倍に希釈した混合物）、ＥＢＴ試液（エリオフ
ロムブラック丁０．５９および塩酸ヒドロキシルアミン
４．５ｇをエタノール（９０％（■ハ））１００Ｉｄに
溶解した混合物）などが挙げられる。これらの試薬は、
カルシウムとキレートをｎり発色するが、この簡の発色
が、肉眼での判定の容易なものであることが望ましい。

中でも、キレートの形成による発色が、カルシウムイオ
ンＳ度が増加するに従って、青から紫を経て赤に変り、
肉眼でとらえやすいＮＮ希釈粉末指示薬、ＥＢＴ試液が
好ましい。発色試薬の形態としては、−足部を添加する
ことが容易であり、前記抽出液に添加した時に、短時間
で均一に溶解するものであれば、特に限定されない。

本発明の好ましい態様によれば、上で得られた抽出液に
前記発色試薬を加える前にその・一部を分取し、所定倍
率に希釈して得られた希釈液袋も上の抽出液の９色に用
いたと同・−の発色試薬を加えて、この希釈液も呈色さ
せることにより、前記の抽出液の呈色の度合とともに希
釈液の呈色の度合も観察することが可能になり、２つの
呈色の度合の組み合せにより、′涙液中のカルシウムイ
オン濃度を更に細かな濃度区分で判断するごとが可能と
なる。

抽゛出液の一部゛を分取して希釈する時の希釈倍率は１
．５〜４倍が適当である。その理由は、１゜５倍未満の
場合は、希釈液のカルシウムイオン濃度が抽出液のそれ
と大差がなく、一方、４倍を超える場合には、希釈液の
カルシウムイオンが低くなりすぎて、いずれの場合も抽
出液の呈色の度合と希釈液の呈色の度合との組み合せに
よる涙液中のカルシウムイオン濃度の判定が困難になる
からである。希釈倍率は２〜３倍であるのが特に好まし
い。

尚、発色試薬を上記で調製した抽出液と希釈液に、一定
量ずつ添加して呈色を観察することを考えると、抽出液
と希釈液は、最終的に同体積となっているのが好ましい
。

これらの発色試薬で抽出液又は抽出液と希釈液を正確に
呈色させるためには、溶液のＤＨが一定でな番プればな
らないが、ｐｌの調節は、抽出及び希釈用の水について
行なっても良く、また発色試薬調１１１時に行なっても
良い。

涙液中のカルシウムイオンを簡易に測定するための本発
明の方法を今迄説明してきたが、例えばシルマー試験紙
のような吸水性試験紙と、涙液を含ませた、水吸収性試
験紙からカルシウムイオンを抽出するための、例えば蒸
留水のような抽出用水を収容する容器と、カルシウムイ
オンとキレートを形成する発色試薬との３点をセットに
した測定用キットがあれば、本発明のカルシウムイオン
の測定方法を、特別な分析技術を必要とゼずに極めて簡
便に行なうことができる。従ってこの測定用キットも本
発明に包含される。

なお、本発明のカルシウムイオンの測定り法を、上述の
好ましい態様である抽出液と希釈液の両名を呈色させる
方法により実施することを可能にするために、前記の測
定用キットは、抽出液の一部を希釈するための、例えば
蒸留水のような希釈用水を収容する希釈用容器を含むこ
とができる。なお、抽出用容器と希釈用容器は、上述の
如く抽出液と希釈液とを同体積にして９色さするのが好
ましいので、同形で同容量とするのが好ましい。これら
の容器として好ましいものは、スピッツ、バイアル、試
験管などである。

また手持ちのシルマー試験紙がある場合には、涙液中の
カルシウムイオン測定用キットを、前記の容器（抽出用
容器又は抽出容器と希釈用容器）と前記の発色試薬とで
構成しても良い。また通常、蒸留水が用いられる抽出用
水及び希釈用水並びにこれらを予備貯蔵するための容器
は、これらの手持ちがある場合は不要であるが、必要に
応じて本発明のカルシウムイオン測定用キットに含ませ
ても良い。さらに、発色試薬及び抽出用水や希釈用水の
所定足を採取するためのスポイトやピペット等をキット
の付属品とすることもできる。

［実施例］ 以下、実施例により本発明の詳細な説明（る。

実施例１ （１）　　シルマー試験紙 （２）　　スピッツ（Ａ）（蒸留水３ｄ入り）（３）　
　スピッツ（Ｂ）（蒸留水１〆入り）（４１ＥＢＴ試液
（アンモニア緩衝液でｐＨ１０に調節演） 上記４点をセットにして、涙液中のカルシウムイオン測
定用キットとした。シルマー試験後に涙液を含んだシル
マー試験紙２枚（両眼から同時に採取）のうちの１枚を
先端から２０ａｍ＋の所で切断し、蒸留水３ｄ入りのス
ピッツ（Ａ）に入れ、よく攪拌して抽出処理した。次に
このスピッツ（八）から１１Ｉｄｌの抽出液を分取して
、蒸留水１ｊｄ入りのスピッツ（Ｂ）に入れ、よく攪拌
して希釈処理した。

従ってこの段階においてスピッツ（Ａ）の内容物の体積
は２ａｅ１スピツツ（Ｂ）の内容物の体積も２ｄで同量
であり、スピッツ（Ｂ）の内容物の希釈倍率は２倍であ
った。

次に各々スピッツ（Ａ）、　（Ｂ）に、ＥＢＴ試液２８
！２を加え、攪拌してスピッツ（八）及び（Ｂ）につい
て直ちに呈色を観察した。

もう・−枚のシルマー試験紙は、原子吸光分析法による
分析を行ない、涙液中のカルシウムイオン濃度を定量し
た。

２０名（Ｎｏ、　１〜２０）の涙液について、以上の方
法でテストした結果を、表−１に示す。

表−１より明らかなように、スピッツ（Ａ）の抽出液及
びスピッツ（Ｂ）の希釈液を呈色させる本実施例の方法
によれば、２つの呈色の度合の組み合せにより涙液中の
カルシウムイオン濃度の高低を４段階で判定可能であり
、この判定Ｉｉ！Ｉ東は、従来の原子吸光分析法による
結果と極めて高い相関性を有していた。

実施例２ （１）　　シルマー試験紙 （２）　　バイアル（Ａ）（蒸留水２−入り、８ＮＫＯ
ＨＩ滴でｐＨ調節済） （３）　　バイアル（Ｂ）（蒸留水１１Ｉｌ入り、８Ｎ
”ＫＯ３１滴でｐＨ調節済） （４１ＮＮ希釈粉末指示薬（ドータイトＮ、Ｎ（市販品
）を粉末状に２Ｓ０４で１０倍に希釈したもの） 上記４点をセットにして、涙液中のカルシウムイオンの
測定用キットとした。シルマー試験後に涙液を含んだシ
ルマー試験紙２枚（両眼から同時に採取）のうちの１枚
を先端から２０ｍ＋の所で切断し、蒸留水２１１！入り
のバイアル（Ａ）に入れ、よく攪拌して抽出処理した。

次にこのバイアル（Ａ）から０．５ｄの抽出液を分取し
て、蒸留水１１１１入りのバイアル（Ｂ）に入れ、よく
攪拌して希釈処理した。

従ってこの段階においてバイアル（Ａ）の内容物の体積
は、１．５ａｌ＋、バイアル（Ｂ）の内容物の体積も１
．５ｄで同があり、バイアル（Ｂ）の内容物の希釈倍率
は３倍であった。

次に各々のバイアル（Ａ）　、　（Ｂ）に、ＮＮ希釈粉
末指示薬約１０Ｒｇを加え、攪拌してバイアル（Ａ）。

（Ｂ）について直ちに呈色を観察した。

もう−枚のシルマー試験紙は、原子吸光分析法による分
析を行ない、涙液中のカルシウムイオン濃度を定量した
。

２０名（ＮＱ　２１〜４０）の涙液について、以上の方
法でテストした結果は、表、−２に示すように、２秤類
の呈色の組み合わせによって、涙液中のカルシウムイオ
ンｌｉ［を、前記実施例１と同様に４段階に判定するこ
とができた。

実施例３ （１）　　シルマー試験紙 （２）　　試験管（Ａ）（蒸留水１．２ｄ入り）（３）
　　試験管（Ｂ）（蒸留水０．４ａｌ＋入り）（４１Ｅ
ＢＴ試液（アンモニア緩引液でｐＨｌＱに調節済） 上記４点をセットにして、涙液中のカルシウムイオン測
定用キットとした。シルマー試験後に涙液を含んだシル
マー試験紙２枚（両眼から同時に採取）のうちの１枚を
先端から１５＃ｌｌｌの所で切断し、蒸留水１．２ＩＩ
ｆｌ入りの試験管（Ａ）に入れ、よく攪拌して抽出処理
した。次にこの試験管（＾）から０．４ｍの抽出液を分
取して、蒸留水０．４ｄ入りの試験管（Ｂ）に入れ、よ
く攪拌して希釈処理した。

従ってこの段階において試験管（＾）の内容物の体積は
、０．８ａｄ！、試験管（Ｂ）の内容物の体積も０．８
ｄで同量であり、試ｗＡ管（Ｂ）の内容物の希釈倍率は
２倍であった。

次に各々の試験管（Ａ）　、　（Ｂ）に、ＥＢＴ試液１
滴を加え、攪拌して試験管（Ａ）　、　（Ｂ）について
自らに呈色を観察した。

もう−枚のシルマー試験紙は、原子吸光分析払による分
析を行ない、涙液中のカルシウムイオン家度を定かした
。

２０名（ＮＱ４１〜６０）の涙液について、以上の方法
でテストした結果は、表−３に示すように、２種類の９
色の組み合せによって、涙液中のカルシウムイオン濃度
を、前記実施例１．２と同様に４段階に判定づることが
できた。

（以下余白） Ｌ発明の効果］ 本発明の涙液中のカルシウムイオンの測定方法によれば
、短時間で簡便に涙液中のカルシウムイオン濃度を測定
することが可能である。

更に、この測定結果から、コンタクトレンズ装用間始後
のカルシウム化合物の付着の可能性を予測することが可
能であり、クリーニングを頻繁に行なうなどの指導を行
なうことで、コンタクトレンズへの汚れ付着を未然に防
ぐことあるいは軽減することが可能である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、涙液を含ませた、水吸収性試験紙を水で抽出処理し
   て得られた抽出液に、カルシウムイオンとキレートを形
   成する発色試薬を加えて前記抽出液を呈色させて、その
   呈色の度合により涙液中のカルシウムイオン濃度の高低
   を評価することを特徴とする涙液中のカルシウムイオン
   の測定方法。 ２、前記発色試薬を加える前に、前記抽出液の一部を分
   取し、所定倍率に希釈して得られた希釈液にも前記発色
   試薬を加えてこの希釈液も呈色させて、抽出液の呈色の
   度合と希釈液の呈色の度合の組み合せにより、涙液中の
   カルシウムイオン濃度の高低を評価する、請求項１に記
   載の方法。 ３、水吸収性試験紙と、涙液を含ませた、水吸収性試験
   紙からカルシウムイオンを抽出するための抽出用水を収
   容する抽出用容器と、カルシウムイオンとキレートを形
   成する発色試薬とを含むことを特徴とする、涙液中のカ
   ルシウムイオンの測定方法を実施するためのキット。 ４、前記抽出用容器を用いて得られた抽出液の一部を希
   釈するための希釈用水を収容する希釈用容器を更に含む
   、請求項３に記載のキット。