JPH01238533A

JPH01238533A - 抗エイズウイルス剤

Info

Publication number: JPH01238533A
Application number: JP63066252A
Authority: JP
Inventors: Hiroshi Sakagami; 宏坂上
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1988-03-19
Filing date: 1988-03-19
Publication date: 1989-09-22
Anticipated expiration: 2012-03-26
Also published as: JP2594456B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は、植物性物質より得られる抗エイズウィルス作
用のある高分子物質に関する。

（従来の技術）ＨＩ　Ｖ　（ｔｌｕｍａｎ　１ｍｍｕｎｏｄｅｆｆｉｃ
ｉｅｎｃｙ　Ｖｉｒｕｓ　）は、ヒトのＲｃｔｒｏ　Ｖ
ｉｒｕｓてヒトの白血球細胞に感染し免疫阻害を起こす
ことか知られている。

この感染によって、後天性免疫阻害（ＡｃｕｔｅＩｍｍ
ｕｎｏｄｅｆｒｉｃｉｃｎｃｙ　Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）に
陥りその結果、色々な外部からの感染に対する抵抗力か
なくなることて致死を招く。

現在、抗エイズウィルス剤として種々の化合物か提案さ
れ、医・薬品として開発されているが、効果、副作用等
の点から決定的なものは得られていない。ところて、こ
れらの抗エイズウィルス剤の中には、クレスチン及びレ
ンチナンのように植物成分から開発されたものかある。

本発明者らは、種々の植物成分の抗エイズウィルス作用
について鋭意検討を重ねた結果、松かさからアルカリ水
て抽出される抗腫瘍性物質か効果を有すること、そのう
ちで本発明者らかＫＳ−６及びＫＳ−７と名付けたもの
は特に、低濃度て有効にエイズウィルスの増殖を阻害す
ることを見出した。

（発明の構成）本発明の抗エイズウィルス剤は、五葉松（Ｐｉｎｕｓ　
ｐａｒｖｉｆｌｏｒａ　５ｉｅｂ、　ｅｔ　１ｕｃｃ、
　）等の松かさのアルカリ水油出物、特にこの抽出物中
に含まれる抗エイズウィルス性高分子物質を有効成分と
して含有することを特徴とする。

本発明において松かさは、黒松、赤松、五葉松等の種々
の松の松かさが使用できるが、特に五葉松のものか好ま
しい。松かさは、７〜８月頃のものは油分か多く、抽出
した際、油分か層状になって分離することから９乏ｔｏ
月頃のもの、特に成分か豊富に含まれていると考えられ
る１０月頃の落実していないものか好ましい。

松かさからの抽出物としては、単なる熱水によっても成
る程度の効力のあるものか得られるが、特にアルカリ水
による抽出物によって好ましい結果か得られる。

本発明においてアルカリ水抽出物は、抽出液のまま使用
してもよいが、更に分別して、抽出液中に含まれる特に
効果のある成分のみを用いてもよい。木発明者らは、こ
の抽出物中に含まれる有効成分として使用し得るものは
高分子物質であると推定した。また本発明者らは、特に
効果のある成分をＫＳ−６及びＫＳ−７と名づけだ。

本発明て使用するアルカリ水油出物は、直接松かさをア
ルカリ水中に浸漬して抽出してもよいが、通常はアルコ
ール等で油分を除き、熱水抽出したのちのものからアル
カリ水抽出するとよい。

アルカリ水のアルカリ成分としては、有機塩基、無機塩
基のいずれも使用できる。アルカリ水のアルカリ度は特
に限定されないが、好ましくはｐＨ８以上、９〜１３程
度かよい。

抽出液はそのまま、または必要に応じて適当な濃度とな
るように濃縮した後、適当な酸によって中和し、この中
和液をそのまま凍結乾燥等の適８な手段で濃縮・乾燥し
て、適当な濃度の液体または固体として得、これを有効
成分として使用するが、この中和液を更に遠心分離など
適当な方法によって、沈殿と上清とに分画し、沈殿物か
ら再度アルカリ水抽出することによりＫＳ−６を得、−
上清をアルコールて処理して沈殿を生じさせ、この沈殿
物を処理してＫＳ−７を得る。

（実施例）以下、本発明を一実施例によって説明するか１本発明は
これに限定されるものではない。

ＫＳ−６’ＫＳ−７の　４Ｐ５００ｇの松かさを約５交のメタノール、８５％エタノ
ールて４時間、２回づつ還流させながら洗浄する。次に
、５文の沸騰蒸留水で６時間、３回の抽出を行う。残渣
を５文の１％水酸化ナトリウムて室温下６時間、２回抽
出を行う。

ガーゼで癌した抽出液のｐｌ＋を酢酸て５に合わせる。

１ｏｏ００ｘ　ｇ、２０分、４℃の遠心により先づ沈Ｓ
と上清に分画する。沈澱を少發の１％水酸化ナトリウム
に溶かし、遠心による不溶物の除去後、充分量の水に対
して透析し、凍結乾燥したものかＫＳ−６である。上清
に等量のエタノールを加え、生した沈澱を充分量の水に
対して透析し、凍結乾燥したものかＫＳ−７である。松
かさ乾燥重量当りの収率は、それぞれ約０．５％及び約
１％である。

九丘五中性糖の組成は、メタノール塩酸中で１５時間６５℃、
メタツリシスにより得られたメチルグリコシドのトリメ
チルシリル化誘導体のガスーリキドクロマトグラフィー
により分析する。中性糖の定量は又、フェノール硫酸法
により行う。

ウロン酸は、アルドノラクトンに換えてからトリメチル
シリル化誘導体をガスーリキドクロマトクラフィーによ
り解析する。ウロン酸の定量は、カルバゾール法により
行う。

炭素、水素、窒素、イ才つの定量は、元素分析機により
行う。

エンドトキシン−１エンドトキシンの定量は、大腸菌０１１１：８４エンド
トキシンを標準にして、エンドトキシン（エンドトキシ
ン特異的新比色定量、生化学工業株）により行う。

Ｔ■１１への或！細胞ＣＥ　Ｍ　　（：ｅｌｌ　Ｌｉｎｅは、ヒト白血病
患者より由来したＴ細胞株てあり、ＨＴＬＶＩと２を含
んでいない。使用されたウィルス株は、ＨＩＶのＮ、Ｙ
、株である。

ＣＥＭ株にＨＩＶを含む細胞培養液を加え、ＣＥＭを感
染する。培養液中に放出されたウィルスの感染価は、逆
転写酵素の活性（ＲＴ）とｐ２４　ａｒ＋Ｌｉｇｅｎ　
ｃａｐｔｕｒｅ法によって測定した。

（作　用）ＫＳ−６は、波長２６０−２８０ｎｍの光に吸収をもつ
茶褐色の粉末として得られ、水、含水アルコール及び含
水アセトンに対する溶解性は優れている。炭素４３．２
％、水素４．０％、窒素２．６％を含み、イオウは検出
されなかった。中性糖は１１．０％を占め、その構成の
内訳は、フコース９．４％、マンノース１９．０％、ガ
ラクトース４４．７％、グルコース２６．９％であった
。ウロン酸は１．７％しか含まれていなかった。アルカ
リ性条件下におけるゲル癌過ての分子量は、１万であっ
た。

ＫＳ−７は、波長２６０〜２８０ｎｆｆｉの光に吸収を
もつ茶褐色の粉末として得られ、水に対する溶解性は優
れているが、含水アルコール、含水アセトン及び生理食
塩水中ては沈澱を生しやすい、炭素３３．５５％、水素
４．２３％を含み、窒素、イオウは検出されなかった。

中性糖は３９．５％を占め、その構成の内訳は、アラビ
ノース１６．５％、マンノース１６，２％、ガラクトー
ス３９．３％、グルコース２６．０％であった。また、
ＫＳ−７は、ウロン酸５８．２％を含んていた。エンド
トキシンの混入は０．００２５％前後てあった。アルカ
リ性ての条件下でのゲル謹過ての分子量は、１〜２゜万
てあった。

肱ユＣＥＭ細胞にＨＩＶを低いウィルス感染比で加え長く培
養することによって、ＣＥＭ細胞をウィルス持続感染細
胞株に変えることかてきる。このようにして作られた持
続感染細胞株に、松かさのアルカリ抽出物ＫＳ−７をＯ
ｐＬｇ（対照）０．７鉢ｇ、フルｇ、７０終ｇ、３５０
ｇｇ／ｍｌ加えて１週間培養した。その培養液のＨＩＶ
の活性をＲＴ法によって測定した。結果を第１図に示す
。

その結果、ＲＴの活性はフルｇ／ｍｌのＫＳ−７を加え
ることによって６６％抑制されることか発見された。７
０ｇｇ／鳳１以上では、ＲＴ活性によって測定された阻
止率は、８５％以上である。ＫＳ−７は７０ｐｇ／ｍｌ
までＣＥＭ細胞の生存率には影響を与えなかった。これ
に対して、対照はスラミンＺＯＯｇ　ｇ　／　ｍｌで処
理したもの（スラミンは　アジドチミジンと同し位の効
果を示す）でウィルスのＲＴ活性をわずか６９％しか抑
制せず、ＣＥＭ細胞の生存率を７８％まで低下させた。

次にＫＳ−７添加によるウィルス産生の抑制の経時変化
を調べた。第２図に示す様に、５０ｇｇ／ｍｌあるいは
１００ｇｇ７ｍｌのＫＳ−７を添加してから５日目、７
日目、ｌＯ０日目１７７日目培養液中のウィルス量を、
ＲＴ活性により求めた。ＫＳ−７投与後５〜１７日間の
どの段階でも、培養液中のウィルス量は、ＫＳ−７によ
り約９０％近く抑制されていた。このことはＫＳ−７は
ウィルスの産生を抑制していることを示している。

なお、第２図において矢印は、ＣＥＭ細胞を１＝５に希
釈し、新たにＫＳ−７を含む培養液を補充したところ（
日）を示す。また縦軸は、培養液中に放出されたウィル
スのＲＴ活性を　ｌｏｇ　５ｃａｌｅでプロットしてい
るのに注意されたい。

次にウィルス感染比ＫＳ−６を加えた場合の効果を調べた。ウィルスの感染
比を高くして（Ｔ　ＣＩ　Ｄ　ｓ。

−３）、ＣＥＭ細胞に感染させた。その直後にＫＳ−６
を加え新たに３〜７日間培養し、培養液中のウィルス量
をｐ２４　ａｎｔｉｇｅｎ　ｃａｐｔｕｒｅ法により求
めた。

第３図に示すように、ＫＳ−６のウィルス増殖抑制効果
は、Ｏ１ｐｇ／ｍ１以上で観察され、１〜３ｐｇ／ｍｌ
て４０−５０％程度抑制し、：１０ｇｇ／ｍｌの濃度て
は最大８８％まて抑制した。そして、これらの濃度では
ＣＥＭ細胞の生存率に殆んど影響を与えなかった。

最後に、ウィルスを感染させる前に、ＫＳ−６、ＫＳ−
７でＣＥＭ細胞を前処理した場合の効果を調べた。種々
の濃度のＫＳ−６（０，３〜３０鉢ｇ／謙１）、　　Ｋ
Ｓ−７（３〜　１００用ｇ／ｌ）てＣＥＭ細胞を１日間
、７日間前処理し、洗浄後ＨＩＶウィルスの感染比を高
くして感染した。その後５日間同温度のＫＳ−６、ＫＳ
−７存在下で培養し、培養液中に放出されたウィルス量
をｐ２４　ａｎｔｉｇｅｎ　ｃａｐｔｕｒｅ法により求
めた。

その結果、第４図に示されている様に、ＫＳ−６のウィ
ルス抑制効果は、　０１ｇｇ／１１で既に検出され、３
ｇｇ／ｍｌで８０％以上、１０〜］ＯＢｇ／ｍｌて９０
〜９５％抑制した。これに対してＫＳ−７のウィルス抑
制効果は、ＫＳ−６のそれよりわずかに弱く、１０μｇ
／ｌで検出され、：ＩＯ〜１００　ｕＬｇ　／　ｍｌて
最大９５％抑制した。

以」−により、松かさ由来抗ＩＩ！ｉ瘍性物質ＫＳ−６
、ＫＳ−７は、エイズウィルスを持続的に産生じている
系に対してウィルスの増殖を強力に抑制すること、この
結果はウィルスを感染させた直後に加えた場合よりも、
ウィルスを感染させる前に加えた場合の方が強く現われ
ることが判明した。

（発明の効果）エイズウィルスは、血液のＴ細胞に感染し、免疫阻害を
誘起し、死に到らしめる。ＫＳ−６及びＫＳ−７は、抗
エイズウィルス作用を持つばかりでなく、ヒト末梢血由
来の単球や、多形核白血球を著しく活性化させることも
判っている。この様にＫＳ−６及びＫＳ−７は、他の植
物性高分子物質に見られない多くの免疫賦活活性を持っ
ている。従って単独でまたは他の治療法もしくは他の治
療薬（アシドチミジン、ジデオキシシチシン、スラミン
等）と組み合わせて使用することにより、より効果的な
エイズの治療を行うことかできる。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ウィルス持続感染細胞ににおけるＫＳ−７の
濃度依存的ウィルス産生抑制効果を示すグラフである。第２図は、ウィルス持続感染細胞系におけるＫＳ−７の
ウィルス産生抑制効果の経時変化を示すグラフである。第３図は、ウィルス感染直後にＫＳ−６を処理した時の
効果を示すグラフである。第４図は、ウィルス感染前にＫＳ−６及びＫＳ−７を処
理した時の効果を示すグラフである。才１図、ノ農　ｒａ’　　　ｐｇ／ｍｌ

Claims

【特許請求の範囲】

（１）五葉松（ＰｉｎｕｓｐａｒｖｉｆｌｏｒａＳｉｅ
ｂ．ｅｔＺｕｃｃ．）等の松かさのアルカリ水抽出物を
有効成分として含有することを特徴とする抗エイズウィ
ルス剤。
（２）有効成分が、松かさのアルカリ水抽出物に含まれ
る抗エイズウィルス作用のある高分子物質であることを
特徴とする請求項囲第１項記載の抗エイズウィルス剤。