JPH01172298A - 結晶作製方法 - Google Patents
結晶作製方法Info
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- JPH01172298A JPH01172298A JP32722787A JP32722787A JPH01172298A JP H01172298 A JPH01172298 A JP H01172298A JP 32722787 A JP32722787 A JP 32722787A JP 32722787 A JP32722787 A JP 32722787A JP H01172298 A JPH01172298 A JP H01172298A
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C30—CRYSTAL GROWTH
- C30B—SINGLE-CRYSTAL GROWTH; UNIDIRECTIONAL SOLIDIFICATION OF EUTECTIC MATERIAL OR UNIDIRECTIONAL DEMIXING OF EUTECTOID MATERIAL; REFINING BY ZONE-MELTING OF MATERIAL; PRODUCTION OF A HOMOGENEOUS POLYCRYSTALLINE MATERIAL WITH DEFINED STRUCTURE; SINGLE CRYSTALS OR HOMOGENEOUS POLYCRYSTALLINE MATERIAL WITH DEFINED STRUCTURE; AFTER-TREATMENT OF SINGLE CRYSTALS OR A HOMOGENEOUS POLYCRYSTALLINE MATERIAL WITH DEFINED STRUCTURE; APPARATUS THEREFOR
- C30B7/00—Single-crystal growth from solutions using solvents which are liquid at normal temperature, e.g. aqueous solutions
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
〔概 要〕
生体高分子結晶の作成に際し、内部断面積が軸方向に漸
減している容器を用いることにより、結晶核の数を制限
し大型で良質の結晶を得ることを可能にする。
減している容器を用いることにより、結晶核の数を制限
し大型で良質の結晶を得ることを可能にする。
本発明は、酵素等のタンパク質、核酸素の生体高分子結
晶の作製方法に関する。
晶の作製方法に関する。
〔従来技術および発明が解決しようとする問題点〕タン
パク質の高次構造決定にＸ解析法は必須の手段である。
パク質の高次構造決定にＸ解析法は必須の手段である。
Ｘ線回折用のタンパク質の結晶は、まず第一に大きくな
ければならない。ちなみに、構造解析を目的とする場合
、０．３ Ｘ Ｏ，３Ｘ ０．３ ｔａ程度の大きさの
ものが好ましい。このような大きな結晶を調製するには
、結晶核の数を少数に制限し、結晶の成長をうながすよ
うな条件と操作を選ぶことが必要である。
ければならない。ちなみに、構造解析を目的とする場合
、０．３ Ｘ Ｏ，３Ｘ ０．３ ｔａ程度の大きさの
ものが好ましい。このような大きな結晶を調製するには
、結晶核の数を少数に制限し、結晶の成長をうながすよ
うな条件と操作を選ぶことが必要である。
従来、生体高分子の単結晶を得る方法としては下記の方
法が知られている。
法が知られている。
■、生体高分子の過飽和水溶液を長時間静置する方法。
■、生体高分子の水溶液に含まれる水分を少量ずつ蒸発
させる方法。
させる方法。
Ｏ９生体高分子の水溶液と沈澱割水溶液とを自由界面を
介して接触させ、沈澱剤を生体高分子の水溶液中に静か
に拡散させる方法。
介して接触させ、沈澱剤を生体高分子の水溶液中に静か
に拡散させる方法。
■、透析膜を使用して生体高分子の水溶液を濃縮する方
法。
法。
■、生体高分子溶液を高濃度の沈殿剤溶液と密閉容器内
で共存させて、蒸気拡散により、過飽和にする方法（蒸
気拡散法） ｅｔｃ。
で共存させて、蒸気拡散により、過飽和にする方法（蒸
気拡散法） ｅｔｃ。
これらのうち■、の方法は最も簡易で処理条件の設定が
容易であるが、反応初期において結晶核の数をコントロ
ールすることが難しく、太き（晶癖のそろった結晶を再
現性よく作製することができないという欠点があった。
容易であるが、反応初期において結晶核の数をコントロ
ールすることが難しく、太き（晶癖のそろった結晶を再
現性よく作製することができないという欠点があった。
このような欠点を解消するため、鋭意検討した結果、内
部断面積が軸方向に斬新している結晶作成容器、例えば
円錐体を用いることにより、適当な数の結晶核を生成さ
せることを見出した。
部断面積が軸方向に斬新している結晶作成容器、例えば
円錐体を用いることにより、適当な数の結晶核を生成さ
せることを見出した。
このような形状の結晶作成容器を用いることにより、最
初の生成した生体高分子の不溶物沈澱が重力により、傾
斜面附近に集合して適度に凝集する。その附近でのみ結
晶核生成が促進されるため適当な数例えば２，３個の数
がまたはそれにより近い数の結晶核が得られると考えら
れる。
初の生成した生体高分子の不溶物沈澱が重力により、傾
斜面附近に集合して適度に凝集する。その附近でのみ結
晶核生成が促進されるため適当な数例えば２，３個の数
がまたはそれにより近い数の結晶核が得られると考えら
れる。
第１図に本発明方法で用いる容器の断面図を、第２図に
従来方法で用いられた容器の断面図を示す。
従来方法で用いられた容器の断面図を示す。
このような傾斜面を有する本発明における結晶作成容器
にあって、その傾斜面と垂直軸との間の角度は約２０℃
〜７０℃が好ましい。何故ならかかる角度を有する斜面
が、クリスタルが生成する前段階としてアモルファス沈
殿が重力の作用で適度に凝縮して結晶核生成基を与える
ことになるからである。
にあって、その傾斜面と垂直軸との間の角度は約２０℃
〜７０℃が好ましい。何故ならかかる角度を有する斜面
が、クリスタルが生成する前段階としてアモルファス沈
殿が重力の作用で適度に凝縮して結晶核生成基を与える
ことになるからである。
以下、更に本発明を実施例により説明する。
以下の三種の水溶液を用意する。
〔Ａ液〕ミオグロビン（マツコラクジラ由来、シグマ社
製）を１ ／１５Ｍリン酸緩衝液（ｐｉ（７，２）に７
．５ｗｔ％溶解し、不溶部を濾過したもの。
製）を１ ／１５Ｍリン酸緩衝液（ｐｉ（７，２）に７
．５ｗｔ％溶解し、不溶部を濾過したもの。
〔Ｂ液）１／１５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７： ２ ）。
〔Ｃ液〕飽和硫安溶液に５ＭＮａ０）！水溶液を微量加
えてｐＨ７，２にしたもの。
えてｐＨ７，２にしたもの。
以上の３種の溶液をＡ、Ｂ、Ｃの順に混合してミオグロ
ビン濃度２．０〜０．５％飽和硫安濃度８０〜６８％の
溶液を作り、本発明方法に用いる容器（第１図）。
ビン濃度２．０〜０．５％飽和硫安濃度８０〜６８％の
溶液を作り、本発明方法に用いる容器（第１図）。
および従来方法に用いる容器（第２図）に入れ密栓して
、２０℃で静かに放置する。その結果を第３図（ａ）、
第３図（ｂ）に示す。これらの図表から明らかなように
通常の容器（第２図）で作製するよりも本発明の容器（
第２図）を用いたほうが結晶数がはるかに少なく、従っ
て得られる結晶は大きくなる。
、２０℃で静かに放置する。その結果を第３図（ａ）、
第３図（ｂ）に示す。これらの図表から明らかなように
通常の容器（第２図）で作製するよりも本発明の容器（
第２図）を用いたほうが結晶数がはるかに少なく、従っ
て得られる結晶は大きくなる。
また、本発明方法は蒸気拡散法にも応用できる。
密閉容器内に低濃度、硫安を含むタンパク溶液の少量と
その１０〜１００倍以上の高密度硫安溶液を静かに並置
する。硫安のかわりに有機溶媒も用いることができる。
その１０〜１００倍以上の高密度硫安溶液を静かに並置
する。硫安のかわりに有機溶媒も用いることができる。
この際タンパク溶液の容器として本発明方法における容
器を用いても同様の効果が得られた。
器を用いても同様の効果が得られた。
本発明は以上説明したように構成したものであるから、
最初に生成した生体高分子沈澱（非晶質状態）が重力と
壁面の傾斜により適度に凝集されることにより非晶核の
形成がコントロールされ、通常の容器よりも再現性良く
大型の結晶が得られる効果を奏する。
最初に生成した生体高分子沈澱（非晶質状態）が重力と
壁面の傾斜により適度に凝集されることにより非晶核の
形成がコントロールされ、通常の容器よりも再現性良く
大型の結晶が得られる効果を奏する。
第１図は本発明方法で用いる容器の断面図、第２図は従
来方法による容器の断面図、第３図（ａ）は従来方法に
おける容器を用いた場合の結晶の個数を示すグラフを表
わし、第３図（ｂ）は、本発明における容器を用いた場
合の結晶の個数を示すグラフである。
来方法による容器の断面図、第３図（ａ）は従来方法に
おける容器を用いた場合の結晶の個数を示すグラフを表
わし、第３図（ｂ）は、本発明における容器を用いた場
合の結晶の個数を示すグラフである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、生体高分子結晶の作製方法であって、結晶化すべき
生体高分子の過飽和溶液を調製し、この溶液を、内部断
面積が軸方向に漸減している結晶作成容器に静置して結
晶化させることを特徴とする、前記方法。 ２、断面形状が円錐形である、特許請求の範囲第１項記
載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP32722787A JPH01172298A (ja) | 1987-12-25 | 1987-12-25 | 結晶作製方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP32722787A JPH01172298A (ja) | 1987-12-25 | 1987-12-25 | 結晶作製方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01172298A true JPH01172298A (ja) | 1989-07-07 |
Family
ID=18196736
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP32722787A Pending JPH01172298A (ja) | 1987-12-25 | 1987-12-25 | 結晶作製方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH01172298A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6117232A (en) * | 1995-03-01 | 2000-09-12 | Sumitomo Metal Industries, Ltd. | Crystallization control method for organic compound and crystallization control solid-state component employed therefor |
-
1987
- 1987-12-25 JP JP32722787A patent/JPH01172298A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6117232A (en) * | 1995-03-01 | 2000-09-12 | Sumitomo Metal Industries, Ltd. | Crystallization control method for organic compound and crystallization control solid-state component employed therefor |
| US6123769A (en) * | 1995-03-01 | 2000-09-26 | Sumitomo Metal Industries, Ltd. | Crystallization control method for organic compound and crystallization control solid-state component employed therefor |
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