JPH01167667A - 多糖抗原の免疫学的測定法 - Google Patents
多糖抗原の免疫学的測定法Info
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- JPH01167667A JPH01167667A JP63297993A JP29799388A JPH01167667A JP H01167667 A JPH01167667 A JP H01167667A JP 63297993 A JP63297993 A JP 63297993A JP 29799388 A JP29799388 A JP 29799388A JP H01167667 A JPH01167667 A JP H01167667A
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- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
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- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
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- G—PHYSICS
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- G01N33/56911—Bacteria
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-
- G—PHYSICS
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- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
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- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/25—Chemistry: analytical and immunological testing including sample preparation
- Y10T436/25125—Digestion or removing interfering materials
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
生物試料中或いはそれらの培養物中に存在する細菌類ま
たは真菌類の多糖抗原を免疫学的に測定するKは、はと
んどの場合抗原を遊離するための前処理が必要である。
たは真菌類の多糖抗原を免疫学的に測定するKは、はと
んどの場合抗原を遊離するための前処理が必要である。
実際には、抗原を遊離するために種々の方法、具体的に
は100℃での加熱、37℃に於ける酵素処理、或いは
二段階操作での亜硝酸ナトリウムによる抽出、などが使
用されている。
は100℃での加熱、37℃に於ける酵素処理、或いは
二段階操作での亜硝酸ナトリウムによる抽出、などが使
用されている。
これらの抗原を抽出する他の公知の方法は、高濃度のフ
ェノール、例えば90%飽和フェノール(90%フェノ
ール/10%水)、によりロ0°0での処理である。
ェノール、例えば90%飽和フェノール(90%フェノ
ール/10%水)、によりロ0°0での処理である。
抗原遊離のために100℃に加熱したシ、酵素処理をす
る方法は特異抗体の存在下ではそれらが変性するため使
用できない。再度のピペット測量もしなければならない
。高濃度のフェノール抽出でも同じで、さらに遠心分離
操作が必要となる。
る方法は特異抗体の存在下ではそれらが変性するため使
用できない。再度のピペット測量もしなければならない
。高濃度のフェノール抽出でも同じで、さらに遠心分離
操作が必要となる。
亜硝酸ナトリウムによる抽出では二種の異なる試薬を用
い、トリス緩衝液での後処理が必要である。
い、トリス緩衝液での後処理が必要である。
以上のよ51C,これらの公知の操作は非常に状況によ
ってお)、時間がか\るものであって実際の使用に適し
たものではない。
ってお)、時間がか\るものであって実際の使用に適し
たものではない。
本発明の範囲で、多糖抗原を免疫学的に測定するため、
生物試料或いはその培養物中の細菌類または真菌類の多
糖抗原を遊離する方法が見っかシ、その方法は生物試料
或いはその培養物をフェノール水溶液で処理することよ
勺成る。
生物試料或いはその培養物中の細菌類または真菌類の多
糖抗原を遊離する方法が見っかシ、その方法は生物試料
或いはその培養物をフェノール水溶液で処理することよ
勺成る。
本発明による方法では、1−10%の7エノール水溶液
を使用し、2〜5%のフェノール水溶液が好ましく、2
%フェノール水溶液が特に好ましい。
を使用し、2〜5%のフェノール水溶液が好ましく、2
%フェノール水溶液が特に好ましい。
本発明による方法では、血液、血清、血漿、尿、糞便或
いは痰が適当な生物試料である。
いは痰が適当な生物試料である。
本発明により提供される方法によると、5容址の生物試
料或いはその培養物に対して1容量のフェノール水溶液
を使用することが発見された。
料或いはその培養物に対して1容量のフェノール水溶液
を使用することが発見された。
本発明によ右方法では、フェノール水溶液は生物試料ま
たは培養物に5−50分間、好ましくは15分間作用さ
せる。
たは培養物に5−50分間、好ましくは15分間作用さ
せる。
前処理を行なう温度は重要ではない。前処理は通常15
℃から反応液が沸とうする直前の温度までy実施され、
室温が特に好ましい。続く多糖抗原の免疫学的測定のた
めに抽出を行なう必要はなく、従って、免疫的検出は抗
原の遊離を行なった反応液中で実施するこりが出来る。
℃から反応液が沸とうする直前の温度までy実施され、
室温が特に好ましい。続く多糖抗原の免疫学的測定のた
めに抽出を行なう必要はなく、従って、免疫的検出は抗
原の遊離を行なった反応液中で実施するこりが出来る。
上述の免疫学的検出法はそれ自体公知の方法、特にいわ
ゆるRLISA法に従って実施できる。
ゆるRLISA法に従って実施できる。
本発明による方法は連鎖球菌、特に8trepto−c
occus pneumonias、抗酸@(マイコバ
クテリウム)、特にmycobacterium tu
berculoai8或いは腸内細菌、特にKache
richia coliからの多糖抗原の検出に非常に
適している。
occus pneumonias、抗酸@(マイコバ
クテリウム)、特にmycobacterium tu
berculoai8或いは腸内細菌、特にKache
richia coliからの多糖抗原の検出に非常に
適している。
本発明の範囲に於いて、本発明による方法は作業が少な
いはか)でなく、多糖抗原の測定に関して多く場合よシ
高い感度を示すことがさらにわかった。
いはか)でなく、多糖抗原の測定に関して多く場合よシ
高い感度を示すことがさらにわかった。
以下の例で本発明を例示する。
例 1
A、1)ウサギの抗酸菌抗体を用いた培養生育細菌必要
な本数の試験管(10X25m+1)に0.25−の試
料(細菌けん濁液、血清、液状にした痰、尿)t−ピペ
ットで秤量し、これに0.05−の反応試薬(フェノー
ルまたはNaNO2+酢酸+トリス緩衝液)或いは水を
添加する。各試験管に抗−抗酸菌感作ポリスチレンピー
ズ(径=6.5m)10えた後、反応液を室温にて60
分間インキュベートする。続いて、洗滌せずに0.25
−のウサギ抗−抗酸菌−ペルオキシダーゼ結合体(20
%仔ウシつ児血清で不活化した0、1M−トリス−ヒド
ロキシメゾルアミノメタン、−7,0,0,05%Tw
e en20および5Mg/−のウサヤ抗−抗酸菌−ペ
ルオキシダーゼ結合体)を添加する。その後、反応液を
室温で4時間インキエペートする。インキュベーション
彼、ポリスチレンビーズtExA洗滌m(Roche
)で、各5Tnlの蒸溜水中で2回洗滌する。
な本数の試験管(10X25m+1)に0.25−の試
料(細菌けん濁液、血清、液状にした痰、尿)t−ピペ
ットで秤量し、これに0.05−の反応試薬(フェノー
ルまたはNaNO2+酢酸+トリス緩衝液)或いは水を
添加する。各試験管に抗−抗酸菌感作ポリスチレンピー
ズ(径=6.5m)10えた後、反応液を室温にて60
分間インキュベートする。続いて、洗滌せずに0.25
−のウサギ抗−抗酸菌−ペルオキシダーゼ結合体(20
%仔ウシつ児血清で不活化した0、1M−トリス−ヒド
ロキシメゾルアミノメタン、−7,0,0,05%Tw
e en20および5Mg/−のウサヤ抗−抗酸菌−ペ
ルオキシダーゼ結合体)を添加する。その後、反応液を
室温で4時間インキエペートする。インキュベーション
彼、ポリスチレンビーズtExA洗滌m(Roche
)で、各5Tnlの蒸溜水中で2回洗滌する。
次にペルオキシダーゼ活性を測定するために各試験管に
0.25−の基質緩衝液(0,1mol / Lクエン
酸カリ緩衝液、−5,2、Om mol / L H
2O2およCF 20 m mol / L O−フ
ェニレンジアミン)を添加し、室温で15分間インキュ
ベートする。
0.25−の基質緩衝液(0,1mol / Lクエン
酸カリ緩衝液、−5,2、Om mol / L H
2O2およCF 20 m mol / L O−フ
ェニレンジアミン)を添加し、室温で15分間インキュ
ベートする。
ペルオキシダーゼ活性を停止し、発色を強めるために1
.0−のi N −H,So、を添加して30分間以内
に492 nmの波長における吸光を、例えばEIA光
度計(Roche )を用いて測定する。
.0−のi N −H,So、を添加して30分間以内
に492 nmの波長における吸光を、例えばEIA光
度計(Roche )を用いて測定する。
必要な本数の試験管(10×25IIIIm)に0.2
5−の試料(細菌けん濁液、血清、液状にした痰、尿)
またはPH1(ブランク)をピペットで秤量し、これに
0.051dの反応試薬(フェノールまたはNaN02
+酢酸+トリス緩衝液)或いは水を加える。
5−の試料(細菌けん濁液、血清、液状にした痰、尿)
またはPH1(ブランク)をピペットで秤量し、これに
0.051dの反応試薬(フェノールまたはNaN02
+酢酸+トリス緩衝液)或いは水を加える。
各試験管に抗−肺炎菌一感作一すスチレンビーズ(径=
6.5 rsw、 )を添加した後、反応液を室温に
て15分間インキュベートする。続いて、洗滌操作を行
なわずに0.251dのウサギ抗−肺炎菌−ペルオキシ
ダーゼ結合体(20%仔ウシつ児血清で不活化した0、
1 M −)リス−ヒドロキシメチルアミノメタン、−
7,0,0,05%Tvreen 80および0.7μ
g/ゴのウサイ抗−肺炎菌−ペルオキシダーゼ結合体)
を添加する。その後、反応液を室温で60分間インキュ
ベートする。インキュベーション後にポリスチレンビー
ズをEIA洗滌機(Roche)を用いて各5TILl
の蒸溜水中で2回洗滌する。次にベルオキシダーぜ活性
を測定するために各試験管に0.251117の基質緩
衝液(80mmol/Lクエン酸カリ緩衝液、pH4−
25,1−6m mol / L H2O5およびi
mmol/ L 5 、5’= 5 、5’−テトラ
メチルベジジンを6.6%2−fロバノール加16.4
%DMSOに溶解)を添加し、試験管を室温で5分間放
置する。ペルオキシダーゼ活性を停止し、発色を強める
ために1.0−のI N −u2so、を添加して60
分間以内に450 nmの波長における吸光を、例えば
BmIA光度計<ROChe)を用いて測定する。
6.5 rsw、 )を添加した後、反応液を室温に
て15分間インキュベートする。続いて、洗滌操作を行
なわずに0.251dのウサギ抗−肺炎菌−ペルオキシ
ダーゼ結合体(20%仔ウシつ児血清で不活化した0、
1 M −)リス−ヒドロキシメチルアミノメタン、−
7,0,0,05%Tvreen 80および0.7μ
g/ゴのウサイ抗−肺炎菌−ペルオキシダーゼ結合体)
を添加する。その後、反応液を室温で60分間インキュ
ベートする。インキュベーション後にポリスチレンビー
ズをEIA洗滌機(Roche)を用いて各5TILl
の蒸溜水中で2回洗滌する。次にベルオキシダーぜ活性
を測定するために各試験管に0.251117の基質緩
衝液(80mmol/Lクエン酸カリ緩衝液、pH4−
25,1−6m mol / L H2O5およびi
mmol/ L 5 、5’= 5 、5’−テトラ
メチルベジジンを6.6%2−fロバノール加16.4
%DMSOに溶解)を添加し、試験管を室温で5分間放
置する。ペルオキシダーゼ活性を停止し、発色を強める
ために1.0−のI N −u2so、を添加して60
分間以内に450 nmの波長における吸光を、例えば
BmIA光度計<ROChe)を用いて測定する。
必要な本数の試験管(10X25驕)に0.25−の試
料(細菌けん濁液、血清、尿)或いはPH1(ブランク
)をピペットにて秤量し、0.05−の反応試薬(フェ
ノールまたはNaNO2+酢酸+トリス緩衝液)或いは
pBs t−添加する。各試験管に抗−E、 coli
−感作ポリスチレンビーズ(径=6.5rnra )を
加えた後、反応液を室温で15分間インキュベートする
。続いて、洗滌操作なしで、0.25−のウサギ−抗−
E、 coli−ペルオキシダーゼ結合体(20%仔ウ
シつ児血清で不活化した0、1Mトリスヒドロキシメチ
ルアミノメタン、p’7−0.0−05 % Twee
n 20および1μg/mA!のウサイー抗−E、co
li−ペルオキシダーゼ結合体)を添加する。その後、
反応液を室温で60分間インキュヘートスーる。インキ
ュベーション後、ポリスチレンビーズをEIA洗滌機(
Ro c he)で、各5 rrtlの蒸溜水中で2回
洗滌する一0次にペルオキシダーゼ活性を測定するため
に各試験管に0.25mの基質緩衝液(0−1mol
/ Lクエン酸カリ緩衝液、…5.2.6m mol
/ L H2O2および20 m mol / L O
−フェニレンジアミン)を添加し、室温で15分間イン
キュベートする。ペルオキシダーゼ活性を停止し、発色
を強めるために1.Odのi N −a、so、を添加
して60分間以内に492 mmの波長における吸光を
、例えば1nIA光度計(RoChe)を用いて測定す
る。
料(細菌けん濁液、血清、尿)或いはPH1(ブランク
)をピペットにて秤量し、0.05−の反応試薬(フェ
ノールまたはNaNO2+酢酸+トリス緩衝液)或いは
pBs t−添加する。各試験管に抗−E、 coli
−感作ポリスチレンビーズ(径=6.5rnra )を
加えた後、反応液を室温で15分間インキュベートする
。続いて、洗滌操作なしで、0.25−のウサギ−抗−
E、 coli−ペルオキシダーゼ結合体(20%仔ウ
シつ児血清で不活化した0、1Mトリスヒドロキシメチ
ルアミノメタン、p’7−0.0−05 % Twee
n 20および1μg/mA!のウサイー抗−E、co
li−ペルオキシダーゼ結合体)を添加する。その後、
反応液を室温で60分間インキュヘートスーる。インキ
ュベーション後、ポリスチレンビーズをEIA洗滌機(
Ro c he)で、各5 rrtlの蒸溜水中で2回
洗滌する一0次にペルオキシダーゼ活性を測定するため
に各試験管に0.25mの基質緩衝液(0−1mol
/ Lクエン酸カリ緩衝液、…5.2.6m mol
/ L H2O2および20 m mol / L O
−フェニレンジアミン)を添加し、室温で15分間イン
キュベートする。ペルオキシダーゼ活性を停止し、発色
を強めるために1.Odのi N −a、so、を添加
して60分間以内に492 mmの波長における吸光を
、例えば1nIA光度計(RoChe)を用いて測定す
る。
例・2
グラン(BC())
Difco社のミドルデルツク寒天を含む試験管数本に
Serum In5titute Berne (ベル
ン血清研究所)から入手したBCGワクチンの開封した
ばかりのアンプルを植菌し尼。およそ1週間インキュベ
ーションした後、コロニーを生理NaCl溶液で洗滌し
、マクファランド濃度を約0.5に調整した。
Serum In5titute Berne (ベル
ン血清研究所)から入手したBCGワクチンの開封した
ばかりのアンプルを植菌し尼。およそ1週間インキュベ
ーションした後、コロニーを生理NaCl溶液で洗滌し
、マクファランド濃度を約0.5に調整した。
けん濁液を5等分し、各種前処理を行なった。
その後、−段階酵素免疫アッセイを各処理について実施
した。試験の方法は例1に従った。
した。試験の方法は例1に従った。
次のような結果が得られた。
8.2)肺炎菌
8treptococcua pneumoniaeを
血液平板上で一晩培養した。その後、マクファランド濃
度が1.0となるように生理的Nac j溶液中にコロ
ニーをけん濁した。けん濁液を5等分し、各種前処理を
行なった。続いて一段階の酵素免疫アッセイを実施し九
。試験操作は実施例1に従った。
血液平板上で一晩培養した。その後、マクファランド濃
度が1.0となるように生理的Nac j溶液中にコロ
ニーをけん濁した。けん濁液を5等分し、各種前処理を
行なった。続いて一段階の酵素免疫アッセイを実施し九
。試験操作は実施例1に従った。
次の結果が得られた。
B、5)Racherichia coliLcoli
ATCC19110を血液平板上で一晩培養した。そ
の後、コロニーを生理的NaC#溶液にけん濁してマク
ファランド濃度1.0となるよう調整した。けん濁液′
t−4等分し、各種処理を行なった。それぞれについて
続いて一段階酵素免疫アツセイを実施した。試験の実施
は方法の部を参照のこと。
ATCC19110を血液平板上で一晩培養した。そ
の後、コロニーを生理的NaC#溶液にけん濁してマク
ファランド濃度1.0となるよう調整した。けん濁液′
t−4等分し、各種処理を行なった。それぞれについて
続いて一段階酵素免疫アツセイを実施した。試験の実施
は方法の部を参照のこと。
次のような結果が得られた。
例 6
患者からの試料を用いてさらに調査を行なった。
実施例1に従って一段階RIA試験を実施した。前処理
は添付の衣に従って行なった。
は添付の衣に従って行なった。
次の結果が得られた。
Claims (11)
- (1)多糖抗原の免疫学的測定のための生物試料中のま
たは同試料の培養物中の細菌類或いは真菌類からの多糖
抗原の遊離方法において、生物試料または培養物を水性
フェノール溶液で処理することを特徴とする方法。 - (2)1−10%のフェノール水溶液を使用する特許請
求の範囲第(1)項記載の方法。 - (3)2−5%のフェノール水溶液を使用する特許請求
の範囲第(1)項または(2)項記載のいずれか一つの
方法。 - (4)生物試料が血液、血清、血漿、尿、糞便または痰
である特許請求の範囲第(1)項〜(3)項のいずれか
一つに記載の方法。 - (5)2%のフェノール水溶液を使用する特許請求の範
囲第(1)項〜(4)項のいずれか一つに記載の方法。 - (6)生物試料または培養物5部に対して1部の水性フ
ェノール溶液を使用する特許請求の範囲第(1)項〜(
5)項のいずれか一つに記載の方法。 - (7)水性フェノール溶液を試料または培養物に5〜3
0分間作用させる特許請求の範囲第(1)項〜(6)項
のいずれか一つに記載の方法。 - (8)水性フェノール溶液を試料または培養物に15分
間作用させる特許請求の範囲第(7)項記載の方法。 - (9)生物試料またはその培養物を特許請求の範囲第(
1)項〜(8)項のいずれか一つに記載の方法により前
処理し、続いてそれ自体公知の方法によつて多糖抗原を
免疫学的に検出することより成る、生物試料またはそれ
より得られる培養物中の細菌類または真菌類からの多糖
抗原の免疫学的測定方法。 - (10)連鎖球菌、抗酸菌または腸内細菌からの多糖抗
原を検出する特許請求の範囲第(9)項記載の方法。 - (11)Streptococcuspneumoni
ae、mycobacterinmtuberculo
sisまたはEscherichiacoliからの多
糖抗原を検出する特許請求の範囲第(10)項に記載の
方法。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CH461687 | 1987-11-27 | ||
CH04616/87-3 | 1987-11-27 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH01167667A true JPH01167667A (ja) | 1989-07-03 |
Family
ID=4279430
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP63297993A Pending JPH01167667A (ja) | 1987-11-27 | 1988-11-25 | 多糖抗原の免疫学的測定法 |
Country Status (3)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US5126244A (ja) |
EP (1) | EP0322549A3 (ja) |
JP (1) | JPH01167667A (ja) |
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6060237A (en) * | 1985-02-26 | 2000-05-09 | Biostar, Inc. | Devices and methods for optical detection of nucleic acid hybridization |
US5482830A (en) * | 1986-02-25 | 1996-01-09 | Biostar, Inc. | Devices and methods for detection of an analyte based upon light interference |
US5468606A (en) * | 1989-09-18 | 1995-11-21 | Biostar, Inc. | Devices for detection of an analyte based upon light interference |
US5541057A (en) * | 1989-09-18 | 1996-07-30 | Biostar, Inc. | Methods for detection of an analyte |
US5639671A (en) * | 1989-09-18 | 1997-06-17 | Biostar, Inc. | Methods for optimizing of an optical assay device |
US5550063A (en) * | 1991-02-11 | 1996-08-27 | Biostar, Inc. | Methods for production of an optical assay device |
US5955377A (en) * | 1991-02-11 | 1999-09-21 | Biostar, Inc. | Methods and kits for the amplification of thin film based assays |
US5418136A (en) * | 1991-10-01 | 1995-05-23 | Biostar, Inc. | Devices for detection of an analyte based upon light interference |
DE69127628T2 (de) * | 1991-10-01 | 1998-01-22 | Biostar Inc | Hochempfindlicher optischer Immunoassay durch Gebrauch von Enzymmarkierten Reagenz |
US5308983A (en) * | 1992-07-02 | 1994-05-03 | Harrick Scientific Corporation | Spectroscopic accessory with microscope illuminator |
US5494829A (en) * | 1992-07-31 | 1996-02-27 | Biostar, Inc. | Devices and methods for detection of an analyte based upon light interference |
US5552272A (en) * | 1993-06-10 | 1996-09-03 | Biostar, Inc. | Detection of an analyte by fluorescence using a thin film optical device |
US6844199B1 (en) * | 1997-03-14 | 2005-01-18 | The Board Of Governors For Higher Education, State Of Rhode Island And Providence Plantations | Direct detection of bacteria-antibody complexes via UV resonance Raman spectroscopy |
CN1087748C (zh) * | 1999-07-22 | 2002-07-17 | 中国医学科学院医药生物技术研究所 | 具有il-1受体拮抗活性的微生物多糖或其盐或水解产物,其制备方法和含有它的药物组合物 |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3148120A (en) * | 1952-01-24 | 1964-09-08 | Wander Ag Dr A | Hot aqueous phenol extraction of gramnegative bacterial lipopolysaccharides |
GB1073694A (en) * | 1965-05-24 | 1967-06-28 | Twyford Lab Ltd | Preparation of bacterial lipopolysaccharides |
US4029762A (en) * | 1971-11-17 | 1977-06-14 | Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften E.V. | Lipid A-preparation |
US4285936A (en) * | 1979-12-10 | 1981-08-25 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Method for producing a vaccine against bacterial infections caused by pseudomonas aeruginosa |
US4755382A (en) * | 1985-06-13 | 1988-07-05 | Monsanto Company | Immunostimulating method |
-
1988
- 1988-11-15 EP EP19880119002 patent/EP0322549A3/de not_active Withdrawn
- 1988-11-17 US US07/272,288 patent/US5126244A/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-11-25 JP JP63297993A patent/JPH01167667A/ja active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP0322549A3 (de) | 1991-05-08 |
EP0322549A2 (de) | 1989-07-05 |
US5126244A (en) | 1992-06-30 |
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