JPH01121257A

JPH01121257A - システインプロティナーゼ阻害剤

Info

Publication number: JPH01121257A
Application number: JP27952587A
Authority: JP
Inventors: Naoki Higuchi; 直樹樋口; Masayuki Saito; 雅之齊藤; Ritsuo Iwazawa; 岩澤　律夫; Motoo Tsunoda; 元男角田
Original assignee: Suntory Ltd
Current assignee: Suntory Ltd
Priority date: 1987-11-05
Filing date: 1987-11-05
Publication date: 1989-05-12
Anticipated expiration: 2009-04-20
Also published as: JPH0629229B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は一般式（１）％式％（式中、Ｒ１はベンジルオキシカルボニル基、又は４−
フェニルブチリル基を表し、Ｒ２はイソプロピル基、ま
たはイソブチル基を表し、Ｒ３はブチル基、ベンジル基
、またはメチルチオエチル基を表し、Ｒ４は水素原子、
またはクロロメチル基を表す、）で表わされる化合物で
、システインプロティナーゼ、特にパパイン及びカルパ
インに対して強い酵素阻害活性を示すシステインプロテ
ィナーゼ阻害剤に関するものである。

（従来の技術）システインプロティナーゼの一種であるパパイン（Ｅ、
　Ｃ，３，４，２２，２，ＰＡＰＡ、ＩｊＮ）及びカル
パイン（Ｅ、Ｃ，３，４，２２，１７゜ＣＡＬＰＡＩＮ
）の活性を特異的に阻害する薬剤は、抗炎症剤として、
また特にカルパインに関しては、筋ジストロフィー、或
は白内障等治療薬として、有用であることが知られてい
る。これら用途の開発をめざし、これまで様々なシステ
インプロティナーゼ阻害剤が見いだされてきているが（
Ｓｈｊｍｉｚｕ、Ｂ、　　ら、Ｊ、Ａｎｔｉｂｉ。

ｔ、、２５巻、５１５頁、（１９７２）、特開昭６０−
２８９９０号、特開昭６１−１０６６００号、特開昭６
１−１０３８９７号）、活性、特異性、生体内移行性等
の面での改善が強く望まれているのが現状である。

（発明が解決しようとする問題点）そこで本発明者らは、システインプロティナーゼの中で
も特にカルパインに対する阻害活性が強く、さらに生体
内移行性の高い化合物を見出すべく種々合成検討の結果
、本発明を完成した。

（問題を解決するための手段）本発明に従えば、強力なカルパイン阻害、あるいはパパ
イン阻害活性を有する新規化合物である、−殺減（１）％式％（式中、Ｒ１はベンジルオキシカルボニル基、又は４−
フヱニルブチリル基礎表し、Ｒ２はイソプロピル基、ま
たはイソブチル基を表し、Ｒ３はブチル基、ベンジル基
、またはメチルチオエチル基を表し、Ｒ４は水素原子、
またはクロロメチル基を表す。）で表わされる、Ｎ−ア
シル−ペプチジル−アルデヒド、あるいは、Ｎ−アシル
−ペプチジル−クロロメチルケトンが供給される。

本発明の化合物は次のようにして製造することができる
。先ず、式（１）においてＲ４が水素である本発明の化
合物を製造するには、次の一般式（式中、Ｒ１，Ｒ２お
よびＲ３は、前記式（１）で与えられた意味を表し、そ
してＲ５は低級アルキル基を表す。）で表される化合物
を有機溶媒中還元剤を用いてアルコール体にまで還元し
、さらに酸化剤を用いてアルデヒドに酸化することによ
り、容易に製造される。、又−殺減（１）において、Ｒ
４がクロロメチル基である本発明の化合物を製造するに
は、次の一般式（３）（式中、Ｒ，、Ｒ２およびＲ３は、前記式（１）で与え
られた意味を表す。）で表されるカルボン酸を、有機溶
媒中クロロ炭酸エチル等を用いて活性エステルに導き、
ジアゾメタンを“反応させてジアゾメチルケトンとし、
さらに塩酸処理することにより、容易に製造される。

（実施例）次に実施例及び阻害活性試験によって本発明を更に具体
的に説明するが、本発明の技術的範囲をこれらの実施例
によって限定するものでないことはいうまでもない。酵
素阻害活性試験及び実施例に於て化合物を特定するため
にＳＵＡＭ番号を用い、以下説明する。

実施例１土ＹＬ−フェニルアラニンエチルエステル塩酸塩（４，６ｇ
、　２０ｍｍｏｌ）及びＮ−ベンジルオキシカルボニル
−し−ロイシン（５，４ｇ、２０ｍｍ。

ｌ）を乾燥塩化メチレン１００ｍｆｆ１に溶解しトリエ
チルアミン（２，Ｏｇ、　　２０ｍｍｏｌ）を加える。

この溶液に１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロ
ピル）カルボジイミド塩酸塩（ＷＳＣＤ）（４，２ｇ、
　　２２ｍｍｏｌ）を加え、−昼夜室温で撹拌した。反
応終了後反応液をＩＮ塩酸、飽和食塩水、飽和炭酸水素
ナトリウム、及び飽和食塩水の順で洗浄し、無水硫酸ナ
トリウム上で乾燥した。

溶媒を情夫し、残渣をシリカゲルを用いた中圧カラムク
ロマトグラフィーで精製すると、Ｎ−ベンジルオキシカ
ルボニル−し−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンエチル
エステル（８，４ｇ、　結晶）を得た。このＮ−ベンジ
ルオキシカルボニル−し−ロイシル−Ｌ−フェニルアラ
ニンエチルエステル（２，２ｇ、　　５ｍｍｏｌ）と水
素化ホウ素ナトリウム（５７０ｍｇ、　　１５ＩＩＩｍ
ｏｌ）を第三ブチルアルコール（５０ｍｊりに懸濁し、
窒素雰囲気下に加熱還流（９０℃）した。ついで還流上
無水メタノール（８ｍｌ）を滴下した。滴下終了後１時
間還流撹拌した後室温に戻し、水冷下に水を（３０−）
加えた。メタノールと第三ブチルアルコールを減圧情夫
したのち、酢酸エチルで３回抽出し、飽和食塩水で洗浄
後無水硫酸マグネシウム上で乾燥した。

酢酸エチルを減圧情夫して得られた残渣をシリカゲルを
用いた中圧カラムクロマトグラフィーで精製すると、Ｎ
−ベンジルオキシカルボニル−し−ロイシル−Ｌ−フェ
ニルアラニノール（１，５ｇ。

結晶）を得た。このＮ−ペンジルオキシカルポニルーＬ
−ロイシルーＬ−フェニルアラニノール（１，２ｇ、　
　３ｍｍｏ＋）とトリエチルアミン（１゜２　ｇ、　　
１２ｍｓ＋ｏｌ）を無水ジメチルスルホキシド（８ｍｆ
ｆｉ）に溶解し、撹拌下に三酸化硫黄−ビリジン錯体（
１，９ｇ、１２ｍｍｏｌ）のジメチルスルホキシド（８
ｍｆｆｉ）溶液を加えた。室温で１０分間撹拌後氷水（
１２０ｍｊりに注ぎ、酢酸エチルで３回抽出し、１０％
クエン酸水溶液、飽和食塩水、飽和炭酸水素ナトリウム
溶液、及び飽和食塩水の順で洗浄し、無水硫酸ナトリウ
ム上で乾燥した。酢酸エチルを減圧情夫して得られる残
渣をシリカゲルを用いた中圧カラムクロマトグラフィー
で精製すると、目的化合物Ｎ−ベンジルオキシカルボニ
ル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニナール（０，６
ｇ＋油状物）を得た。

１１（−ＮＭＲ；　ＣＤＣ１３中、ＴＭＳ基準０．８０
−１．００（６Ｈ，ｍ）、　１．２２−１．７２（３Ｈ
，ｍ）、　３．１２（２Ｈ，ｍ）４−１６（１−Ｈｌｍ
）＋　４−６６（Ｉｌｌ、ｍ）、　５．０８（２Ｈ，ｓ
）、　５．１２（ｉｌｌ。

ｍ）、　５．６４（ＩＨ，ｍ）、　７．１６−７．３４
（１０１１，ｍ）、　９．５６（ＩＨ，５）ＩＲスペク
トル；測定形状はフィルム、波数（ｃｍ−’）Ｈ３３３
０、３２７０，３０３０，２９６０，１７３０，１６８
０，１６５０，１５３０，１２４０，１０４０，７５０
，７４０，７００実施例２実施例１において、Ｌ−フェニルアラニンエチルエステ
ル塩酸塩の代わりにＬ−ノルロイシンメチ　−ルエステ
ル塩酸塩（３，６ｇ、　　２０ｍｍｏｌ）を用いること
により目的化合物Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−
ロイシル−Ｌ−ノルロイシナール（０，５ｇ、油状物）
を得た。屈折率（Ｄ線、２５℃）：１．５３４２ＩＨ−ＮＭＲ；　ＣＤＣｌ　８中、ＴＭＳ基準０．８０
−１．００（９Ｈ，ｌ１１）、　　１．２２−１．２８
（９）１．Ｍ）、　　４．１２−４．５８（２８，＋＋
＋）、　　５．１２（２Ｈ，ｓ）、　　５．２２（ＩＩ
Ｉ、ｄ、Ｊ＝８．０）、　　６．５７（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝
７．０）、　　７．３６（５Ｈ，ｓ）、　　９．５４（
１１，５）ＩＲスペクトル：測定形状はフィルム、波数
（ｃＩｌｌ−’）；３３２０、３０３０．２９５０．１
７２０．１６Ｂ０．１６４０．１５３０．１２３０、１
０５０．７４０．７００実施例３実施例１において、Ｌ−フェニルアラニンエチルエステ
ル塩酸塩の代わりにＬ−メチオニンメチルエステル塩酸
塩（，４，０ｇ、　　２０ｍｍｏｌ）を用いることによ
り目的化合物Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−し−ロイ
シル−し−メチオニナール（０，５ｇ、粉末物）を得た
。融点；９３℃ＩＨ−ＮＭＲ；　ＤＭＳＯ−ｄ　６中、
ＴＭＳ基準０．９４（６Ｈ，ｄ、Ｊ＝６．０）、　１．
４２−２．５８（５Ｌ＋１１）、　２．０６（３１１，
ｓ）＋　４．０８−４．６２（２ｈ、ｍ）、　５．１０
（２Ｈ，ｓ）、　５．３７（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝７．０）、
　６．９５（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝６．０．）、　７．３４（
５Ｌｓ）、　９．５６（１１゜ｄ、Ｊ＝２．０）ＩＲスペクトル；測定形状はＫＢｒ、波数（ｃｍ−’）
；３３００、３０７０．２９５０．１７２０．１７００
．１６６０．１５３０．１２４０、１０４０．７４０．
７００実施例４１１一実施例１の合成中間体であるＮ−ベンジルオキシカルボ
ニル−し−ロイシル−し−フェニルアラニンエチルエス
テル（２，２ｇ、　５１１１１１０１）をエチルアルコ
ール（５０ｍｆｆｉ）に溶解し、少量のパラジウム炭素
を加え、水素雰囲気下で室温で２４時間撹拌した。反応
終了後パラジウム炭素を濾過し、エチルアルコールを減
圧溶去した。この残渣をテトラヒドロフラン５０−に溶
解し、トリエチルアミン（１，０ｇ＋　　１０ｍｍｏｌ
）を加え・る。この溶液に水冷下（４−フェニル）ブタ
ノイルクロリド（０，９ｇ、　５ｍ５ｏｌ）を滴下し、
１時間撹拌した。

その後室温に戻して更に１時間撹拌した。反応終了後テ
トラヒドロフランを減圧溶去し、残渣を５０ｍ１の酢酸
エチルに溶解した。この溶液をＩＮ塩酸、飽和食塩水、
飽和炭酸水素ナトリウム、及び飽和食塩水の順で洗浄し
、無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。溶媒を減圧溶去し
て得られる残渣をシリカゲルを用いた中圧カラムクロマ
トグラフィーで精製すると、Ｎ−（４−フェニル）ブタ
ノイル−し−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニノールルエ
ステル（２，０ｇ、結晶）を得た。このＮ−（４−フェ
ニル）ブタノイル−し−ロイシル−し−フェニルアラニ
ンエチルエステル（１，４ｇ。

３　ｍ５ｏｌ　）と水素化ホウ素ナトリウム（３４０ｍ
ｇ。

９　ｍｍｏｌ　）を第三ブチルアルコール（３０ｍｆｆ
ｉ）に懸濁し、窒素雰囲気下に加熱還流（９０℃）した
。

ついで還流上無水メタノール（５ｍｆｆｉ）を滴下した
。

滴下終了後１時間還流撹拌した後室温に戻し、水冷下に
水を（３０ｍＪり加えた。メタノールと第三ブチルアル
コールを減圧溶去したのち、酢酸エチルで３回抽出し、
飽和食塩水で洗浄後無水硫酸マグネシウム上で乾燥した
。酢酸エチルを減圧溶去して得られた残渣をシリカゲル
を用いた中圧カラムクロマトグラフィーで精製すると、
Ｎ−（４−フェニル）フタノイル−し−ロイシル−し−
フェニルアラニノール（１，２ｇ、結晶）を得た。この
Ｎ−（４−フェニル）ブタノイル−し−ロイシル−し−
フェニルアラニノール（１，１ｇ、２゜５　＋＋＋ｏｌ
　）とトリエチルアミン（１，０ｇ、１０ｍｍｏｆ）を
無水ジメチルスルホキシド（８ｍｆｆｉ）に溶解し、撹
拌下に三酸化硫黄−ピリジン錯体（１，６ｇ、　　１０
ｍｆｉｏｌ）のジメチルスルホキシド（８ｍｆｆｉ）溶
液を加えた。室温で１０分間撹拌後氷水（１２０ｍｊり
に注ぎ、酢酸エチルで３回抽出し、１０％クエン酸水溶
液、飽和食塩水、飽和炭酸水素ナトリウム溶液、及び飽
和食塩水の順で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し
た。酢酸エチルを減圧情夫して得られる残渣をシリカゲ
ルを用いた中圧カラムクロマトグラフィーで精製すると
、目的化合物Ｎ−（４−フェニル）ブタノイル−し−ロ
イシル−し−フェニルアラニナール（０，６ｇ、油状物
）を得た。

ＩＨ−ＮＭＲ；　ＣＤＣｌ　３中、７ＭＳ基準０．８０
−１．００（６８，ｍ）、　１．５２−２．２６（７■
、ｍ）、　２．５２−２．７２（２Ｂ、ｍ）、　３．１
２（２８，ｍ）、　４．４０−４．７６（２０，ｍ）、
　５．７２（１１１、ｄ、Ｊ＝７．０）、　６．６８（
ｌｔｌ、ｄ、Ｊ＝６．０）、　７．１４−７．２６（Ｉ
ＯＨ。

ｍ）、　９．５８（１１１，５）ＩＲスペクトル；測定形状はフィルム、波数（ｃｍ−’
）；３７２０、３０６０．２９５０．１？３０．１６３
０．１５４０．１２４０．７４０、　７００実施例５１と実施例４において、実施例１の合成中間体Ｎ−ベンジル
オキシカルボニル−し−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニ
ンエチルエステルの代わりに実施例３の合成中間体であ
るＮ−ベンジルオキシカルボニル−し−ロイシル−Ｌ−
ノルロイシンメチルエステル（５，３ｇ、　　１２ｍｍ
ｏｌ）を用いることにより、目的化合物Ｎ−（４−フェ
ニル）ブタノイル−し−ロイシル−し−ノルロイシナー
ル（０゜６ｇ、油状物）を得た。

屈折率（Ｄ線、２５°Ｃ）；１．５１２３ＩＨ−ＮＭＲ
；　ＣＤＣ１３中、７ＭＳ基準０．８０−１．００（６
Ｈ，ｍ）、　　１．２４−Ｌ３２（１３１１，ｍ）、　
２．５７−２．７２（２Ｈ，ｍ）、　４．３０−４．６
３（２１Ｌｍ）、　６．０２（Ｉｎ、ｄ、Ｊ＝８．０）
、　６゜２８（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝７．０）、　７．１８−
７．２３（５Ｈ，ｍ）、　９．５４（ＬＨ，５）ＩＲス
ペクトル；測定形状はフィルム、波数（ｃＩｌｌ−’）
；３２７０、３０６０．２９５０．１７３０．１６３０
．１５４０．１２４０．７４０、７００実施例６実施例４において、実施例１の合成中間体Ｎ−ベンジル
オキシカルボニル−し−ロイシル−し−フェニルアラニ
ンエチルエステルの代わりに実施例２の合成中間体であ
るＮ−ベンジルオキシカルボニル−し−ロイシル−し−
メチオニンメチルエステル（２，１ｇ、　　５ｍｍｏｌ
）を用いることにより、目的化合物Ｎ−（４−フェニル
）ブタノイル−し−ロイシル−し−メチオニナール（０
，５ｇ、油状物）を得た。

屈折率（Ｄ線、２５℃）；１．５３２７ＩＨ−ＮＭＲ；
　ＣＤＣｌ　３中、７ＭＳ基準０．８０−１．００（６
Ｈ，ｓ＋）、　１．４０−２．８０（ＩＩＨ，ｍ）、　
２．０３−２．０６（ｔｏｔａｌ−３■、ｂｏｔｈ−ｓ
）、　４．３９−４．６０（２８，ｍ）、　６．０２（
ＩＨ。

ｄ、Ｊ＝８．０）、　’１１８−７．２２（６Ｈ，＋ｎ
）、　９．５５．９．５８（ｔｏｔａｌ−ＩＨ，ｂｏｔ
ｈ−ｓ）＋ＩＲスペクトル；測定形状はフィルム、波数（ｃｍ　−
’）；３２７０、３０６０．２９５０．１７３０．１６
３０．１５４０．１２４０．７４０、７００実施例７上上１立工Ｌ実施例１の合成中間体であるＮ−ベンジルオキシカルボ
ニル−し−ロイシル−し−フェニルアラニンエチルエス
テル（２，６ｇ、　６ｍｍｏｌ）を少量のメチルアルコ
ールに溶解し、ＩＮ水酸化ナトリウム水溶液を１０ｍｆ
ｆ加える。この懸濁液を透明な溶液になるまで室温で撹
拌した。メチルアルコールを減圧溶去し、水と酢酸エチ
ルに分配した。水層をＩＯＮ塩酸で酸性にし、酢酸エチ
ルで３回抽出、有ｌｌＮを無水硫酸ナトリウム状で乾燥
した。

溶媒を減圧溶去するとＮ−ベンジルオキシカルボニル−
し−ロイシル−し−フェニルアラニン（２゜４ｇ、結晶
）が得られた。このＮ−ベンジルオキシカルボニル−し
−ロイシル−し−フェニルアラニン（２，１ｇ、　　５
ｇｍｏｌ）を乾燥テトラヒドロフラン（２０ｍｆｆｉ）
に溶解し、トリエチルアミン（０゜５ｇ、　　５＋＊ｗ
＋ｏｌ）を加え、−１０℃に冷却した。この溶液にクロ
ロ炭酸エチル（０，６ｇ、　　５ｓ＋ｓ＋ｏｌ）を加え
一１０℃で２０分間撹拌した。室温に戻し、過剰のジア
ゾメタンのエーテル溶液を加えて更に３０分間撹拌した
。この反応液に塩酸ガスを約１０分間吹き込んだ。反応
終了後溶媒を情夫し、酢酸エチル（５０ｍｌりを加え、
飽和食塩水、飽和炭酸水素ナトリウム溶液、及び飽和食
塩水の順で洗浄し無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。溶
媒を減圧溶去して得られた残渣をシリカゲルを用いた中
圧カラムクロマトグラフィーで精製すると、目的化合物
Ｎ−（４−フェニル）ブタノイル−し−ロイシル−Ｌ−
フェニルアラニルクロロメチル（１゜５ｇ、結晶）を得
た。

融点；１４０℃ ＬＨ−ＮＭＲ；　ＤＭＳＯ−ｄ　６中、７ＭＳ基準０．
８０（６Ｈ，ｑ、Ｊ＝４．０．Ｊ＝７．０）、　　１．
００−１．７０（３Ｈ，請）。

２．７０−３．４０（２１（、ｍ）、　３．９５（１１
（、ｗ＋）、　４．４５（２■、ｄｄ、Ｊ＝１６゜０）
、　４．５０（ＩＨ，ｗ）、　５．００（２Ｈ，Ｓ）、
　７．２１（５８，ｓ）、　７．２８（５Ｂ、ｓ）、　
７．４１（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝８．０）、　８．４２（ＩＩ
、ｄ、Ｊ＝８．０）ＩＲスペクトル；測定形状はＫＢｒ
、波数（ｅｌｌ−’）；３３１（１，３２Ｂ０．２９５
０．１７３（１，１６８５，１５４０，１２Ｇ５．１２
４０、７００実施例８実施例７において、実施例１の合成中間体Ｎ−ベンジル
オキシカルボニル−し−ロイシル−し−フェニルアラニ
ンエチルエステルのがわりに実施例２の合成中間体であ
るＮ−ベンジルオキシカルボニル−し−ロイシル−し−
ノルロイシンメチルエステル（２，４ｇ、　　６ｍｍｏ
ｌ）を用いることにょり、目的化合物Ｎ−（４−フェニ
ル）ブタノイル−し−ロイシル−し−ノルロイシルクロ
ロメチル（１，６ｇ、結晶）を得た。

融点；１１１℃ ＩＦｒ−ＮＭＲｉ　ＤＭＳＯ−ｄ　６中、ＴＭＳ基準ｏ
、８０−１．００（９ｎ、ｍ）、　　１．００−１．９
０（９Ｈ’、ｍ）、　　４．０４（ＩＨ，ｍ）。

４．３０（ＬＨ，ｍ）、　４．５４（２Ｌｓ）、　５．
００（２１１’＋Ｓ）＋　７．３６（５１１゜ｓ）＋　
７．４６（１１，ｄ、Ｊ＝８．０）、　８．３６（１１
，ｄ、Ｊ＝８．０）！Ｒスペクトル：測定形状はＫＢｒ
、波数（ｃｍ　−’）；３３００、２９５０．１７４０
．１６８０．１６６０．１６４０．１５３０．１２Ｂ０
．１２４０．６９０実施例９実施例７において、実施例１の合成中間体Ｎ−ベンジル
オキシカルボニル−し−ロイシル−し−フェニルアラニ
ンエチルエステルのかわりに実施例６の合成中間体であ
るＮ−（４−フェニル）ブタノイル−し−ロイシル−Ｌ
−ノルロイシンメチルエステル（２，４ｇ、　　６１１
１ＮＯ１）を用いることにより、目的化合物Ｎ−（４−
フェニル）ブタノイル−し−ロイシル−し−ノルロイシ
ルクロロメチル（１，０ｇ、結晶）を得た。

融点；１１４°ＣＬＨ−ＮＭＲ；　ＤＭＳＯ−ｄ　６中、ＴＭＳ基準０．
８０−１．００（９８，ＩＩ＋）、　１．００−２．４
０（１５Ｈ，ｍ）、　４．３０（２■、ａ）＋　４．５
２（２１（、ｓ）、　７．２０（５１（、ｓ）、　８．
００（１■、　ｄ　、　Ｊ＝８．０）　。

８．３２（１）１．ｄ、Ｊ＝８．０）ＴＲスペクトル：測定形状はＫＢｒ、波数（ＣイーＩ）
：３３００、２９５０．１？３０．１６３０．１５３０
．６９０試験例 ■　　　　の　　　　　　− 本発明物質の酵素阻害活性は以下のように測定した。

抗パパイン活性は各種濃度に調整した本発明化合物、パ
パイン（０，０１５ｕｎｉｔ）、およびＥＣ；ＴＡ　（
０，８８ｍｇ）のクエン酸緩衝液溶液（２０ｍＭ、　９
Ｂ＝６．２．１ｍ１）を３０℃で５分間ブレインキュベ
ートし、基質溶液（１ｍｊりを加えて反応を開始する。

基質としてはカゼインの１％クエン酸緩衝液溶液を用い
、３０℃で２０分間反応させる。ついで反応液に６．５
％トリクロロ酢酸（３ｍｌりを加えて反応を停止させ、
酵素により加水分解されたカゼインのトリクロロ酢酸可
溶画分中の蛋白質量をローリ・フォリン（Ｌｏｗｒｙ−
Ｆｏｌｉｎ）法により測定し、対照液との比較より阻害
活性を求めた。　抗カルパイン活性は、カルパイン１１
および■それぞれについて、各種濃度に調整した本発明
化合物、カルパイン■、またはＩＩ　（０，３３ｕｎｉ
ｔ）、およびＣａ　Ｃ１２（０，２２ｍｇ）のイミダゾ
ール−塩酸緩衝液溶液（５０ｍＭ、　ｐＨ＝　７　、５
．１＋ｎｌ）を３０”Ｃで５分間ブレインキュベートし
、基質溶液（１ｍＪりを加えて反応を開始する。基質と
してはカゼインの０゜４％イミダゾール塩酸緩衝液溶液
を用い、３０℃で３０分間反応させる。ついで反応液に
５％トリクロロ酢酸（３ｍＪりを加えて反応を停止させ
、酵素により加水分解されたカゼインのトリクロロ酢酸
可溶画分中の蛋白質量をロス・シャッ９（Ｒ。

５ｓ−３ｃｈａｔｚ）法により測定し、対照液との比較
より阻害活性を求めた。

このようにして得られた本発明化合物のパパイン、カル
パインＩ、および■に対する活性阻害作用を表■、■お
よび■に示す。

表■　パパインに対する阻害活性ＳＵＡＭ番号　　　　　ｒ　Ｄ５０　（＃／　ｔｕｂｅ
）１４５４４　　　　　　　０．０１５１４５４５　　　　　　　０．０１１１４５４６　　　　　　　０．０１５１１７０６　　　　　　　０．０１０１１７０７　　　　　　　０．０２１０イペプチン　　　　　　０．０４５表■　　カルパインＩに対する阻害活性ＳＵＡＭ番号　
　　　　Ｉ　Ｄ５０　（ｐｇ／１ｕｂｅ）１４５４１　
　　　　　　０．０８０１４５４２　　　　　　　０．０３８１４５４５　　　　　　　０．０３０１４５４６　　　　　　　０．０３０１１７０６　　　　　　　０．１２１１７０７　　　　　　　０．０６０ロイペプチン　　　　　　０．１８表■　カルパイン■に対する阻害活性ＳＵＡＭ番号　　　　　Ｉ　Ｄ５０　（ｐｇ／１ｕｂｅ
）１４５４１　　　　　　　０．０２Ｂ１４５４２　　　　　　　０．０２５１４５４３　　　　　　　０．０１９１４５４４　　　　　　　０．０２４１４５４５　　　　　　　０．２４１４５４６　　　　　　　０．０５６１１７０６　　　　　　　０．０９５１１７０？　　　　　　　　０．１２０イペブチン　　　　　　０．８０（発明の効果）本発明の新規化合物はパパイン、カルパイン■およびカ
ルパイン■等のシステインブロティナーゼに対し、非常
に優れた阻害活性を有するばかりでなく、その合成も容
易であるから、抗炎症側、筋ジストロフィあるいは白内
障治療薬としての用途が期待できる。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）一般式（１） ▲数式、化学式、表等があります▼（１）｛式中、Ｒ＿１はベンジルオキシカルボニル基、又は４
−フェニルブチリル基を表し、Ｒ＿２はイソプロピル基
、またはイソブチル基を表し、Ｒ＿３はブチル基、ベン
ジル基、またはメチルチオエチル基を表し、Ｒ＿４は水
素原子、またはクロロメチル基を表す。｝で表わされる
化合物。
（２）一般式（１） ▲数式、化学式、表等があります▼（１）｛式中、Ｒ＿１はベンジルオキシカルボニル基、又は４
−フェニルブチリル基を表し、Ｒ＿２はイソプロピル基
、またはイソブチル基を表し、Ｒ＿３はブチル基、ベン
ジル基、またはメチルチオエチル基を表し、Ｒ＿４は水
素原子、またはクロロメチル基を表す。｝で表わされる
化合物を有効成分として含有するシステインプロティナ
ーゼ阻害剤。