JPH01100131A - ミリストイル化合物である．ウィルス構成蛋白のミリストイル化抑制剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はミリストイル化合物を有効成分とするウィルス
構成蛋白のミリストイル化増殖抑制剤に間する。

の１　　　　　′ 近年、ある種の蛋白質リン酸化酵素（ａｄｅｎｏｓｉｎ
ｅ３’５’−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ
　ｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ　ｔｙｐｅ■）のＮ末端
グリシンがミリスチン酸と共有結合していることが発見
され［Ｐｒｏｃ、ＮａＬｌ、＾ｃａｄ、ｓｃｉ、Ｌｌ。

Ｓ、＾、　Ｖｏｌ、７９　ｐ、６１２８（１９８２）；
　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　Ｖｏｌ。

２２　ｐ、３７０２（１９８３）１、これを端緒として
ミリストイル化された種々の蛋白質に関する数多くの報
告がなされた［ＦＥＢＳ　ＬｅＬｔ、ｖｏｌ、１５０　
ｐ、３１４（１９８２）；Ｊ。

Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、Ｖｏｌ、２５６　　ｐ、１３３４
９（１９８４）；Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ。

＾ｃａｄ、ｓｅｉ、ｕ、ｓ、＾、Ｖｏ１．８０　ｐ、３
３９（１９８３）］、　　さらにＮ末端グリシンのミリ
ストイル化は、細胞の形質転換や成長の調節に関わるあ
、る種の蛋白質の機能発現に重要な意味を持つという、
蛋白のミリストイル化の生物学的意義に関する報告もあ
る［５ｃｉｅｎｅｅ　Ｖｏｌ、２２７　ｐ、４２７（１
９８５）’！、又、レトロウィルスが関与する種々の疾
患、たとえば、成人Ｔ細胞白血病（ＡＴＬ）、後天性免
疫不全症候群（ＡＩ　ＤＳ）とウィルス蛋白のミリスト
イル化との関連も大きな注目を集めている［Ｉｎｔｅｒ
ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ　ｏｎ　ＡＩ
ＤＳ。

Ｐａｒｉｓ、Ｊｕｎｅ　２３（１９８６）；Ｖｉｒｏｌ
Ｊｏｌ、１３８　ｐ、１３３（１９８７）］。

蛋白質のミリストイル化の一般的な役割については尚不
明な点も残されているが、上述したように、生体系にお
いて重要な役割を果たしていることは疑いない、おそら
く、ウィルス構成蛋白のアミノ末端グリシン残基のミリ
ストイル化はウィルス増殖におけるつ゛イルス形成、も
しくはウィルス感染細胞におけるウィルス遺伝子産物の
合成に重要な役割を担っているものと考えられる。

本発明者らはレトロウィルスの一種であるラウス肉腫ウ
ィルス（ＲＳＶ）を用い、レトロウィルスにおけるミリ
ストイル化について種々の研究を行ってきた。その過程
において、ミリストイルグリシンおよびそのオリゴペプ
チド誘導体を合成し、これらの物質にウィルス感染した
細胞の形質転換抑制効果があることを確認して先に特許
出願している（特願昭６１−２５７８２３号；特願昭６
２−１２６３８４号）。

１１ユｌ恭 本発明者らは１以上のような事実に基づき、ウィルス感
染細胞内のウィルス増殖を抑制することのできる物質を
得る目的で、レトロウィルス遺伝子産物におけるミリス
トイル化についてさらに研究を重ねた。その結果、先に
出願したミリストイルグリシンおよびそのペプチドなら
びにそれらの誘導体がレトロウィルスの構成蛋白のミリ
ストイル化の抑制に効果があることを確認した。

日　の　　　　お　　　　　　、 本発明は、ミリストイル基を持つ化合物を有効成分とす
るウィルス感染細胞内のウィルス構成蛋白のミリストイ
ル化抑制剤を提供する。好ましい化合物は、ミリストイ
ルグリシン残基を有するアミノ酸もしくはペプチドまた
はそれらの誘導体である１本発明に従う抑制剤として、
特に好ましい化合物の例としては、先の出願（特願昭６
１−２５７８２３：特願昭６２−１２６３８４）に示し
たようなミリストイルグリシンおよびそのオリゴペプチ
ド誘導体の他、カルボキシル末端がアルデヒド化された
ミリストイルグリシナールおよびそのオリゴペプチド誘
導体である。さらに、アルデヒド基を有する化合物はア
セタール化した状態で用いることもできる。以下、ミリ
ストイルグリシナールおよびそのオリゴペプチド誘導体
の製造方法について詳細に説明する。

本発明のミリストイルグリシナールおよびそのオリゴペ
プチド誘導体の合成に使用するミリスチン酸塩化物は市
販のミリスチン酸から通常の方法で調製したものを用い
ることができる。また、ミリストイル化アミノ酸の酸塩
化物、特にミリストイルグリシルクロリド、またはミリ
ストイルペプチジルクロリドを調製する場合も、このミ
リスチン酸に、通常の方法、たとえば、酸−クロリド法
等で、必要なアミノ酸を結合させることによって容易に
目的とするミリストイルアミノ酸またはミリストイルペ
プチドを調製することができる。このとき、触媒として
作用するアルカリは反応溶媒中において約０．１〜１．
０モル濃度、好ましくは０．３〜０゜６モル濃度で使用
する。

反応は、一般に撹拌条件下室温またはそれ以下の温度で
進行し、反応時間は約６〜２０時間である。

反応終了後、得られた生成物はエーテル等による抽出、
アルコール等による再結晶等通常の精製処理を施すこと
によって高純度品として得ることができる。さらにこれ
らに、アミノアセトアルデヒドジエチルアセタールを作
用させてアセタール化する。

かくして得られたミリストイルグリシナールまたはその
オリゴペプチド誘導体は、ウィルス、特にレトロウィル
スのウィルス構成蛋白のミリストイル化を抑制する。す
なわち、本発明者等は、ＡＴＬの病原ウィルスであるＨ
ＴＬＶ−１やＡＩＤＳウィルスのようなレトロウィルス
に感染した細胞を用いて、ウィルス構成蛋白のミリスト
イル化に対して本発明のミリストイルグリシナールおよ
びそのオリゴペプチド誘導体が与える影響を調べたとこ
ろ、ミリストイル基を持つ本発明に従う化合物はレトロ
ウィルスのミリストイル化を著しく抑制することが判っ
た。したがって、該化合物は、それらのレトロウィルス
に対してウィルス増殖抑制等の効果を発揮することが期
待できる。

以下、実施例に従って本発明をさらに詳細に説明する。

ミリスチン酸１ｇにオキサリルクロリド３ｄを加えて室
温で一夜放置し、酸−クロリド化を行った。

反応終了後、渦剰のオキサリルクロリドを減圧下で除去
し、ミリスチン酸塩化物を得た。アミノアセドアｌレデ
ヒドジエチｌレアセタール（２３〜３５−一０１）を０
．５Ｎ炭酸水素ナトリウム溶液２０■！に溶解し、激し
く撹拌しながらこれにミリスチン酸塩化物（２，３〜３
．５ｍｍｏｌ）のアセトニトリル溶液５ｍＦを滴下し、
引き続き撹拌を続けながら室温で一夜反応した。

この反応液をエーテルで抽出し、抽出液を１規定塩酸で
洗浄した。これを蒸発乾固すると粉末状固体が得られ、
熱エタノールで再結晶することによりミリストイルグリ
シナールジエチルアセタール６００、が得られた。この
結晶の融点は６５〜６７℃であった。

１創Ｌｎ 実施例１においてミリスチン酸の代わりにミリストイル
グリシン（Ｈｙｒ−Ｃ１ｙ）　、ミリストイルジグリシ
ン（Ｍｙｒ−１１：ｌｙ−にｌｙ）、およびミリストイ
ルグリシルセリン（Ｍｙｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）を用い、
実施例１と同様にしてそれぞれ次の３種の結晶生成物が
得られた。また、実施例１の場合と同様に最終産物のジ
エチルアセタール化物の融点を測定すると下記の結果で
あった。

生成物　　　　　　　　融点 Ｍｙｒ−Ｃ１ｙ−ｇｌｙｃｉｎａｌ　ａｃｅｔａｌ　　
　１１０〜１１６℃Ｍｙｒ−Ｇｌｙ−にｌｙ−ｇｌｙｃ
ｉｎａｌ　ａｅｅＬｉｌ　１０：Ｊ−１０５℃Ｍｙｒ−
（：ｌｙ−Ｓｅｒ−ｇｌｙｃｉｎａｌ　ａｅｅＬａｌ　
１０６〜１０８℃ｌ：　　ルス　　　　の≧１ストイル 釦仕 １％牛脂児血清（ＦＣＳ）を含むＲＰ旧１６４０等混合
培地中で培養したＭＴ−２細胞（ヒトレトロウィルス、
ＩＩＴＩＪ−■感染細胞、）Ｘ　１０＠ｃｅｌ　Ｉｓ／
１０ｄ　）に［＋４（：］ミリスチン酸２５ｐＣｉを添
加し、所定の時間（０，３，６，９時間）培養した。各
経時毎に１５００ｒｐｍ　５分間遠沈し細遣を分離して
、リン＊Ｍ！ＩＩ食塩液（ＰＢＳ、ｐＨ７，４）で３回
遠沈洗浄した。洗浄した細胞は０．２＄ＳＯＳおよび１
１トリトンＸ−１００を含むＰＢＳで可溶化した。一方
、培養上清は３０．ＯＯＯｒｐｍ　９０分間の条件で遠
心してウィルス画分をペレットとして気め２＄ＳＯＳを
含むＰＢＳで可溶化した。ｉ４胞あるいはウィルス中の
ミリストイル化蛋白の分析はＳＯＳポリアクリルアミド
ゲル電気泳動（ＳＯＳ−ＰＡＧＥ）後のオートラジオグ
ラフィー法およびイムノトランスブロッティング法によ
り行った。その結果、ＭＴ−２細胞の可溶化成分中に数
種のミリストイル化蛋白（ｐ５８．ｐ２８．ｐｉ９）が
見いだされ、これらのうちｐｉ９は経時的に増量傾向が
見られ、有意のミリストイル化が認められた。（第１図
参照） 区１」Ｌ」 ヒトレトロウィルスであるＡＩＤＳウィルス（ＬＡＹ）
を感染させたＣＥＮ細Ｊｌａ　（ＣＥＭ／ＬＡＶ）につ
いて試験例１と同様の検討を行ったところウィルス精成
蛋白ｐ１７が有意にミリストイル化されていることが判
明した。

１＄ＦＣＳを含むＲＰ？ｌ１１６４Ｇ等混合培地中で培
養したＨＴ−２細患に所定の濃度（２５，５０，１０１
００ｐのミリストイルグリシナールアセタール（Ｍｙｒ
−ｇｌｙｅｉｎ＠ｌ　ａｃｅｔａｌを添加し、３７℃で
１５時間培養した。さらに、　Ｍｙｒ−ｇｌｙｃｉｎｉ
ｌ　１ｃｅｔａｌを添加して１時間培養後、［”Ｃｌミ
リスチン酸５ｐＣｉを加えて２４時間培養した。終了後
、１，５００　ｒｐｍ　５分間の条件で遠沈し細胞を分
離してｐＢｓ、ｐｉ　７．４で３回洗浄した。洗浄した
細胞は０゜２＄ＳＯＳオよび１！）リド：／　Ｘ−１０
０を含ｔｒ　ＰＢＳテ可溶化した。一方、培養上清は１
０．ＯＯＯｒｐｍ　３０分、さらに３Ｇ、ＯＯＯｒｐｍ
　９０分間遠心してウィルス画分をペレットとして鶏め
これを可溶化した。細胞あるいはウイルス中のりストイ
ル化蛋白の分析は５ＯＳ−ＰＡＧＥ後のオートラジオグ
ラフィー法及びイムノトランスブロッティング法により
行った。その結果、ｐ−１９のミリストイル化の程度は
Ｈｙｒ−ｇｌｙｅｉｎａｌ　ａｃｅｔａｌの濃度に依存
し、該化合物の濃度の増加に従いミリストイル化の検出
量は減少した。すなわち、Ｎｙｒ−ｇｌｙｃｉｎａｌ　
ａｃｅｔａｌが著明なミルストイル化抑制効果を有する
ことが見いだされた。（第２図参照）

【図面の簡単な説明】

第１図はレトロウィルス構成蛋白のミリストイル化の経
時的変化を示すものであり、第２図は該化合物のミリス
トイル化抑制効果をしめすものである。

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. （１）ミリストイル基を持つ化合物を有効成分とするウ
   ィルス構成蛋白のミリストイル化抑制剤。
2. （２）該化合物がミリストイルグリシン残基を有するア
   ミノ酸もしくはペプチドまたはそれらの誘導体である前
   記第（１）項記載の抑制剤。
3. （３）該化合物がミリストイルグリシナールまたはその
   アセタール化物である前記第（１）項記載の抑制剤。
4. （４）該化合物がミリストイルグリシン残基およびアル
   デヒド基を持つオリゴペプチドまたはその誘導体である
   前記第（１）項記載の抑制剤。
5. （５）該ウィルスがレトロウィルスである前記第（１）
   項から第（４）項のいずれかに記載の抑制剤。