JP7880997B2

JP7880997B2 - 癒着関連疾患を予防・治療する薬物の調製におけるテトラヒドロナフチリヂン誘導体の使用

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Publication number: JP7880997B2
Application number: JP2024570628A
Authority: JP
Inventors: 胡暁; 王燕; 紀森; 王宵; 張暁東; タン，ジュン
Original assignee: 賽諾哈勃薬業（成都）有限公司
Priority date: 2022-05-30
Filing date: 2023-05-29
Publication date: 2026-06-26
Anticipated expiration: 2043-05-29
Also published as: KR20250011204A; CN119255801A; EP4534083A4; CA3258111A1; WO2023231964A1; EP4534083A1; JP2025519195A; US20260151410A1

Description

本発明は２０２２年５月３０日に中国国家知識産権局に提出された、特許出願番号が２０２２１０５９６５１０．４であり、発明の名称が「癒着関連疾患を予防・治療する薬物の調製におけるテトラヒドロナフチリジン誘導体の使用」、および２０２２年１０月２０日に中国国家知識産権局に提出された、特許出願番号が２０２２１１２８６１６８．４であり、発明の名称が「癒着関連疾患を予防・治療する薬物の調製におけるテトラヒドロナフチリジン誘導体の使用」の先願の優先権を主張する。前記先行出願の全ての内容は参照によって本発明に応用される。

本発明は、医薬の分野に関し、具体的に、癒着関連疾患を予防・治療する薬物の調製におけるテトラヒドロナフチリヂン誘導体の使用に関する。

癒着（Ａｄｈｅｓｉｏｎｓ）は組織損傷の結果であり、その原因としては、鋭利な器具、機械または熱損傷、感染、放射線、虚血、乾燥、磨損、異物反応、腫瘍などが含まれる。いずれの誘発因子であっても、癒着は、体内の３つの互い絡み合ったプロセス、すなわち、線溶系、細胞外マトリックス沈着およびリモデリング、ならびに炎症系が相互に作用して形成されるものである。胃腸管が生物学的、物理的または化学的損傷を受けると、急性炎症反応が現れる。組織虚血、組織因子およびサイトカイン、血管透過性の増加、炎症性因子の放出などは、腸の癒着および腹腔内の癒着を引き起こし、同時に、フィブリノーゲンおよびフィブリンを含む大量の滲出液は、沈着、凝固して繊維網状物を形成し、刺激された組織器官の表面に集中し、周囲の組織に付着することができる。正常な情況の下で、腹膜中皮細胞滲出液はフィブリノーゲンを放出するほか、フィブリン溶解作用があり、セルロース網を溶解吸収させ、癒着形成を減少させる。フィブリンの沈着と分解との間のバランスは、正常な修復癒合または癒着形成において重要な役割を果たし、これら２つのバランスの不均衡を引き起こす重要な因子は、局所的損傷および炎症反応の程度である。

術後癒着（Ｐｏｓｔｏｐｅｒａｔｉｖｅａｄｈｅｓｉｏｎｓ）（例えば、腸癒着または腹膜癒着）は、不妊症、疼痛またはイレウスを引き起こす可能性があり、その後の腹部または骨盤腔手術の難易度が高まる可能性がある。すべての外科医は、術後癒着のリスクおよび結果に熟知し、術後癒着の発生を可能な限りに低減するための措置を採用しなければならない。理論的には、手術中の腹膜損傷を減少させ、反応性異物の導入を防止し、局所炎症反応を減少させ、凝血カスケード反応を阻害し、フィブリン溶解を促進し、または損傷された組織間に障壁を設けることによって、癒着形成を減少させることができる。しかし、研究によると、どのような手術方法を選択しても、子宮筋腫切除術などの手術は通常に癒着をもたらす。開腹筋腫切除術後の癒着発生率は９０％より大きかったが、腹腔鏡筋腫切除術後にも癒着発生率は少なくとも７０％であった。癒着防止生体吸収性膜を使用して手術部位を近くの腹膜または隣接する器官から物理的に隔離し、相互の癒着を防止することは、実行可能な方法の１つと考えられる。ＦＤＡは、ヒアルロン酸およびカルボキシメチルセルロースからなる膜（Ｓｅｐｒａｆｉｌｍ）などの様々な癒着防止膜製品を承認している。臨床研究によると、腹部手術後に創面などの部位に吸収性医療用膜を配置した試験群の患者は、手術後に介入しなかった対照群の患者より、術後の腸鳴音の回復時間、排気時間が明らかに短く、術後の各項目の徴候が対照群の患者より優れ、かつ良好な生体適合性と安全性を有する。この生体吸収性膜は術後の癒着をよく予防でき、二次手術のリスクを減少させ、明らかにコンプライアンスを向上させることができる。しかし、生体吸収性膜の作用部位は留置部位に限られており、外科医は癒着可能な部位を判断する必要があり、癒着発生位置は手術部位から少し離れている可能性があり、同時に、癒着防止膜の留置操作は困難であるため、腹腔鏡手術に使用されることは困難である。

現在、組換えｔＰＡ、ストレプトキナーゼ、ヘパリン、低分子量ヘパリン、非ステロイド性抗炎症薬、ゴナドトロピン放出ホルモンアゴニスト、ホスファチジルコリン、ビタミンＥ抗酸化分子、およびコルチコステロイドを含む薬物による癒着予防の有効性を評価する多くの研究がある。これらの薬剤は最初には術後癒着以外の疾患の治療のために開発されたものであり、癒着予防の機序は明らかではなく、その効果もさらに検証する必要がある。最近の研究は、腸管の創傷（切開、手術操作、および低灌流）が腸管の粘膜バリアの破壊をもたらし、その後消化性プロテアーゼが腸管の組織および内臓腔に導入されることを示している。これらのプロテアーゼは、内臓の中皮表面にタンパク質加水分解損傷を引き起こし、生体修復プロセスの一部として、損傷された組織の治癒中に癒着形成を引き起こす。本発明者らは、長期の研究において、特定のテトラヒドロナフチリジン誘導体は、広域セリンプロテアーゼ阻害剤として、手術中に腸管粘膜バリア損傷により過剰に放出される消化プロテアーゼの活性を中和することで、胃腸管組織への損傷を減少させ、胃腸管機能の回復を加速し、それによって術後の腸癒着を予防するという目的を達成できることを見出した。

本発明の目的の１つは、胃腸管損傷関連疾患を予防・治療する薬物の調製におけるテトラヒドロナフチリジン誘導体の使用を提供することである。

ある具体的な実施形態において、前記テトラヒドロナフチリジン誘導体は、５，６，７，８－テトラヒドロ－１，６－ナフチリジン－２－カルボン酸、５，６，７，８－テトラヒドロ－１，６－ナフチリジン－２－ホスホン酸、および前記化合物の水和物、または薬学的に許容される塩、またはプロドラッグ、または混合物から選択される。

ある具体的な実施形態において、前記薬学的に許容される塩は、テトラヒドロナフチリジン誘導体の塩酸塩である。

ある具体的な実施形態において、前記胃腸管損傷関連疾患は癒着を指し、特に外科術後の腹腔胃腸管損傷、感染などに起因する各種の癒着、例えば、術後腸管癒着、腹腔癒着、肋間癒着、腹膜癒着、子宮癒着などを含む。

ある具体的な実施形態において、胃腸管損傷関連疾患には、さらに術後癒着に起因する合併症、例えば、女性の不妊症、術後イレウス、疼痛のうちの１種または複数種が含まれる。

本発明はさらに、胃腸タンパク質キナーゼを抑制する薬物の調製におけるテトラヒドロナフチリジン誘導体の使用を提供する。

ある具体的な実施形態において、胃腸タンパク質キナーゼは、トリプシン（Ｔｒｙｐｓｉｎ）、ＭＭＰ９、およびＴＡＣＥから選択される少なくとも１種である。

本発明において、「予防・治療」とは、「予防」および／または「治療」を指し、ここで、「予防」とは、疾患の発生および発症のリスクを回避、軽減、または減少させることを指し、「治療」とは、疾患の症状または疾患の症状の発症、進行または進展を人工介入で排除、阻止、軽減、減弱、制限、抑制または阻害することを指す。

本発明において、研究を通じて、前記テトラヒドロナフチリジン誘導体は胃腸管損傷関連疾患を予防・治療する良好な効果を有し、胃腸管損傷を予防・治療する薬物又は胃腸タンパク質キナーゼを抑制する薬物の調製に用いられ、特に胃腸癒着、腹腔癒着、肋間癒着、腹膜癒着、子宮癒着などの症状及びその合併症に対して良好な予防・治療効果を有することを発見した。

図１は、試験例３における偽手術群ラットの術後７日目の屠殺後の腹腔腸部の写真である。図２は、試験例３におけるモデル群ラットの術後７日目の屠殺後の腹腔腸部の写真である。図３は、試験例３における薬物群ラットの術後７日目の屠殺後の腹腔腸部の写真である。図４は、Ｐｈｉｌｌｉｐｓ分級法を採用した試験例４におけるラット腸部癒着の状況に対するスコア（Ｓｃｏｒｅｓ）の棒グラフである。

以下、具体的な実施例を結合して本開示の技術案をさらに詳細に説明する。以下の実施例は、本開示を例示的に説明するものに過ぎず、本開示の範囲を限定するものではないと理解されるべきである。本開示の上記内容に基づいて実現される技術は、本開示の保護範囲内に含まれる。

特に断りのない限り、以下の実施例で使用される原料および試薬はすべて市販商品であり、または既知の方法によって調製することができる。

ステップ１：ｔｅｒｔ－ブチル２－クロロ－７，８－ジヒドロ－１，６－ナフチリジン－６－（５Ｈ）－カルボキシレートの調製

２－クロロ－５，６，７，８－テトラヒドロ－１，６－ナフチリジン塩酸塩（０．９ｇ）を秤量してジクロロメタン（１５ｍＬ）に懸濁させ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１．４ｇ）を遊離させた後、ジ－ｔｅｒｔ－ブチルジカーボネート（１．１５ｇ）を加えて室温で１時間反応させた。ＴＬＣは、原料が完全に消耗されたことを示し、カラムクロマトグラフィーにより精製して、標題の化合物（１．１２ｇ）を得た。

ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）^＋＝２６９．０。

ステップ２：ｔｅｒｔ－ブチル２－シアノ－７，８－ジヒドロ－１，６－ナフチリジン－６－（５Ｈ）－カルボキシレートの調製

ｔｅｒｔ－ブチル２－クロロ－７，８－ジヒドロ－１，６－ナフチリジン－６（５Ｈ）－カルボキシレート（１．１２ｇ）を秤量してＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）に溶解し、シアン化亜鉛（２．４４ｇ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（４８３ｍｇ）を加え、アルゴンで３回置換３し、１２０℃で３時間反応させた。ＴＬＣは、原料が完全に消耗されたことを示し、酢酸エチルを加えて希釈し、珪藻土で濾過し、酢酸エチルで２回抽出し、飽和食塩水で１回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、カラムクロマトグラフィーで精製して標題の化合物（１．１ｇ）を得た。

ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）^＋＝２６０．０。

ステップ３：５，６，７，８－テトラヒドロ－１，６－ナフチリジン－２－カルボン酸塩酸塩の調製

ｔｅｒｔ－ブチル２－シアノ－７，８－ジヒドロ－１，６－ナフチリジン－６－（５Ｈ）－カルボキシレート（１．１ｇ）を秤量して６Ｍ塩酸水溶液（２５ｍＬ）に溶解し、１２０ ℃で一晩反応させた。ＬＣＭＳは、原料が完全に消耗されたことを示し、反応物を乾燥するまでに濃縮し、標題の化合物（７２６ｍｇ）をｐｒｅ－ＨＰＬＣにより分離して得た。

ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）^＋＝１７９．０。

^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｍｅｔｈａｎｏｌ－ｄ４） δ ８．２１（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），８．１２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），４．６０（ｓ，２Ｈ），３．７１（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．４２（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）．

２－クロロ－５，６，７，８－テトラヒドロ－１，６－ナフチリジン塩酸塩（０．９ｇ）をジクロロメタン（１５ｍＬ）に懸濁し、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１．４ｇ）を加え、次にジ－ｔｅｒｔ－ブチルジカーボネート（１．１５ｇ）を加え、室温で１時間反応させた。ＴＬＣは、原料が完全に消耗されたことを示し、水を加えて反応液を希釈し、ジクロロメタンで抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮し、得られた粗製品をカラムクロマトグラフィーで精製し、目的化合物１．１２ｇを得た。

ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）^＋＝２６９．０。

ステップ２：ｔｅｒｔ－ブチル２－（ジエトキシホスホリル）－７，８－ジヒドロ－１，６－ナフチルピリジン－６（５Ｈ）－カルボキシレートの調製

アルゴン雰囲気で、ｔｅｒｔ－ブチル２－クロロ－７，８－ジヒドロ－１，６－ナフチリジン－６（５Ｈ）－カルボキシレート（１００ｍｇ）をトルエン（２０ｍＬ）に溶解し、ジエチルホスファイト（１０２ｍｇ）、トリス（ジベンザルアセトン）ジパラジウム（３４ｍｇ）、１，１’－ビス（ジフェニルホスフィン）フェロセン（４１ｍｇ）およびトリエチルアミン（７５ｍｇ）を加え、系を１２０℃で一晩反応させた。ＴＬＣは、原料が完全に消耗されたことを示し、酢酸エチルを加えて希釈し、珪藻土でろ過し、ろ液を集めて濃縮し、得られた粗製品をＰｒｅｐａｒａｔｉｖｅＴＬＣで精製し、目的化合物７０ｍｇを得た。

ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝３７１．１。

ステップ３：（５，６，７，８－テトラヒドロ－１，６－ナフチリジン－２－イル）ホスホン酸塩酸塩の調製

ｔｅｒｔ－ブチル２－（ジエトキシホスホリル）－７，８－ジヒドロ－１，６－ナフチルピリジン－６（５Ｈ）－カルボキシレート（７０ｍｇ）を濃塩酸（５ｍＬ）に溶解し、１００℃で一晩反応させた。ＬＣＭＳは、原料が完全に消耗されたことを示し、反応液を濃縮し、粗製品をＰｒｅｐａｒａｔｉｖｅＨＰＬＣによって精製し、目的化合物３０ｍｇを得た。

ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）^＋＝２１５．０．
^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ） δ ８．３５（ｄｄ，Ｊ＝８．０，２．４Ｈｚ，１Ｈ），８．０６（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），４．５９（ｓ，２Ｈ），３．６７（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．４９（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）．

生物実験
試験例１
１、実験目的
ラット小腸空腸セグメントのホモジネート液中の全プロテアーゼに対する本発明の化合物の阻害活性を測定した。

２、実験材料と機器

３、実験ステップ
ａ）ラット腸ホモジネートの調製およびタンパク質の定量
ｉ．組織採取：実験動物を麻酔した後に出血して屠殺し、小腸を回盲部から胃下端十二指腸方向に半分に折り、中間約４ｃｍの空腸を取り、０．９％塩化ナトリウム溶液で洗浄した後、液体窒素中に入れて急速冷凍し、その後、－８０℃の条件に移して保存した。
ｉｉ．腸組織ホモジネート：氷上で無菌手術用ハサミを用いて腸組織を小さな塊に切り、２ｍＬのＥＰチューブに移し、１ｍｇの組織ごとに４μＬの体積のＡｓｓａｙＢｕｆｆｅｒ（ＰｒｏｔｅａｓｅＡｃｔｉｖｉｔｙＡｓｓａｙＫｉｔ、Ａｂｃａｍ、ａｂ１１１７５０）を添加し；各ＥＰチューブに２個の小さい鋼球を添加し、４℃の条件下でハイスループット冷凍研磨機を用いて組織をホモジナイズし、毎回３６００ｒｐｍで３０秒間ホモジナイズし、合計で２回ホモジナイズした；
ｉｉｉ．組織ホモジネートを１２０００ｇ、４℃で１０分間遠心分離した後、気を付けてホモジネート上清（腸ホモジネート液）を取り、新しいＥＰチューブに移し、分注した後、－８０℃で保存した。
ｉｖ．ＢＣＡタンパク質濃度測定キットの説明書を参照して、腸ホモジネート液に対して全タンパク質定量を行った。

ｂ）化合物阻害活性試験
ｉ．化合物保存液：化合物をＡｓｓａｙＢｕｆｆｅｒに溶解して４００ｍＭのストック液を調製し、分注した後－２０℃で保存した。
ｉｉ．４×化合物作動液：化合物ストック溶液を３倍勾配希釈し、全部で１０個の濃度点があり、希釈液はＡｓｓａｙｂｕｆｆｅｒであり、化合物を含まないウェルを陰性対照として設置し、プロテアーゼホモジネート液のないウェルをブランク対照として設置した；
ｉｉｉ．４×腸プロテアーゼ作動液：ＡｓｓａｙＢｕｆｆｅｒで腸ホモジネート液を指定濃度に希釈する；
ｉｖ．以下の表に従ってＲｅａｃｔｉｏｎＭｉｘ溶液を調製し、２００μＬＲｅａｃｔｉｏｎＭｉｘ溶液を調製したことを例とした；

ｖ．黒色平底３８４ウェル反応プレートに、４×化合物作動液１０μＬ、４×腸プロテアーゼ作動液１０μＬ、ＲｅａｃｔｉｏｎＭｉｘ溶液２０μＬを順次加え、３０００ｒｐｍで１０秒間迅速に遠心分離した後、すぐに検出した。
ｖｉ．動力学モードで、ＦＩ＝Ｅｘ４８５／Ｅｍ５２０ｎｍの蛍光シグナルを３０分間以内（５分間に１回）に連続して検出した。

ｃ）データ分析
３０分間の蛍光シグナルの差値をΔＲＦＵと記録して計算した。
化合物濃度のｌｏｇ値をＸ軸とし、蛍光シグナル差値（ΔＲＦＵ）をＹ軸とし、分析ソフトＧｒａｐｈＰａｄ７の４パラメーターモデル（ｌｏｇ（阻害剤）ｖｓ．応答－可変スロープ（Ｖａｒｉａｂｌｅｓｌｏｐｅ））フィッティング量効果曲線を用いて、各化合物の酵素活性に対するＩＣ_５０値を求めた。

フィッティング公式：Ｙ＝ｍｉｎ＋（ｍａｘ－ｍｉｎ）／（１＋１０＾（（ＬｏｇＩＣ_５０－Ｘ）×Ｈｉｌｌｓｌｏｐｅ））。

上記ラット小腸ホモジネート中の全プロテアーゼに対する本発明の化合物の阻害効果は、上記の試験によって測定され、測定されたＩＣ_５０値は次のとおりである。

実験データは、本発明の化合物がラット小腸の全プロテアーゼに対して一定の阻害活性を有することを示している。

試験例２
１．実験目的
組換えヒトプロテアーゼであるトリプシン、ＭＭＰ９およびＴＡＣＥに対する本発明の化合物の阻害活性を測定した。

２．実験材料および機器
主な試薬と消耗材料

反応緩衝液
Ｔｒｙｐｓｉｎ：１００ｍＭＴｒｉｓ－ＨＣｌ，７５ｍＭＮａＣｌ，２．５ｍＭＣａＣｌ_２，１０ｍＭＣｙｓｔｅｉｎｅ，ｐＨ７．５
ＭＭＰ９：５０ｍＭＴｒｉｓ，１０ｍＭＣａＣｌ_２，１５０ｍＭＮａＣｌ，０．０５％Ｂｒｉｊ－３５（ｗ／ｖ），ｐＨ７．５
ＴＡＣＥ：２５ｍＭＴｒｉｓ，２．５ μＭＺｎＣｌ_２，０．００５％Ｂｒｉｊ－３５（ｗ／ｖ），ｐＨ９．０

３．実験ステップ
ａ）化合物をＰＢＳまたは等モル体積濃度のＮａＯＨ水溶液で溶解して、１００ｍＭストック溶液を調製した。
ｂ）化合物を３倍勾配希釈し、全部で１０個の濃度点があり、希釈液はＰＢＳである。
ｃ）勾配希釈した化合物溶液５μＬを取り、実験プレートに加えた。
ｄ）Ｔｒｙｐｓｉｎ、ＭＭＰ９およびＴＡＣＥの４×酵素作動液をそれぞれ調製し、最終濃度がそれぞれ７５ｎＭ、０．２μｇ／ｍＬ、０．２μｇ／ｍＬとなるように５μＬのプレートを加えた。
ｅ）２×基質溶液を調製し、最終濃度がそれぞれ１２０、１０、２０μＭとなるように、１０μＬをＴｒｙｐｓｉｎ、ＭＭＰ９およびＴＡＣＥプレートに添加した。
ｆ）室温で（ＭＭＰ９とＴＡＣＥ）または３７℃（Ｔｒｙｐｓｉｎ）で３０分間（ＭＭＰ９とＴＡＣＥ）または６０分間（Ｔｒｙｐｓｉｎ）インキュベートした後、多機能マイクロプレートリーダーを用いて蛍光値を読み取った。
ｇ）タンパク質、基質を含有し、化合物を含有しないウェルのシグナルをＨｉｇｈＣｏｎｔｒｏｌとし、基質を含有し、タンパク質および化合物を含有しないウェルのシグナルをＬｏｗＣｏｎｔｒｏｌとして、以下の式で各テストウェルの阻害率を計算した。
阻害率％＝１００－１００ ×（テストウェル－ＬｏｗＣｏｎｔｒｏｌ）／（ＨｉｇｈＣｏｎｔｒｏｌ－ＬｏｗＣｏｎｔｒｏｌ）
ｈ）濃度のｌｏｇ値をＸ軸とし、阻害率パーセントをＹ軸とし、分析ソフトウェアＩＤＢＳ＿ＸＬＦｉｔのＭｏｄｅ２０５モデルフィッティング量効果曲線を用いて、各化合物の酵素活性に対するＩＣ_５０値を得た。
フィッティング公式：ｆｉｔ＝（Ａ＋（（Ｂ－Ａ）／（１＋（（Ｃ／ｘ）＾Ｄ））））；
Ａ：Ｂｏｔｔｏｍ；Ｂ：Ｔｏｐ；Ｃ：ＩＣ_５０；Ｄ：Ｈｉｌｌｓｌｏｐｅ

本発明化合物による上記３種のプロテアーゼの阻害作用を以上の試験により測定した。測定されたＩＣ_５０値は以下の通りであった。

実験データは、本発明の化合物が３つのプロテアーゼに対してすべて一定の阻害効果を有することを示している。

試験例３
３．１実験動物：ＳＰＦ級雄性２２０ｇＳＤラット、杭州メディカルカレッジ実験動物センターから購入し、浙江省実験動物品質監督検査ステーションにより合格と検査された。３０匹のＳＤラットを、実験室に入ってから１０日間適応的に飼育し、耳標番号を用いて、ランダムに３群に分け、各群１０匹とした。

３．２被験物：被験物１の被試験活性化合物は５，６，７，８－テトラヒドロ－１，６－ナフチリヂン－２－カルボン酸であり、被験物２の被試験活性化合物は（５，６，７，８－テトラヒドロ－１，６－ナフチリジン－２－イル）ホスホン酸である。胃内投与用溶媒は複方ポリエチレングリコール電解質溶液であり、洗浄投与溶媒は無菌生理食塩水である。

３．３溶媒調製：１袋の複方ポリエチレングリコール電解質溶液（６８．５６ｇ）を取り、１Ｌの純水に溶解し、さらに溶媒のグルコース含量が４％（ｗ／ｖ）になるように４４ｇのグルコース（含水）を加えた。調製後２～８℃で保存し、１週間以内に使用した。

３．４胃内投与用溶液の調製：一定量の被験物を秤量し、適量の無菌超純水を加えて２０％（ｗ／ｖ）母液を調製し、等当量のＮａＯＨを加えてｐＨを中性に調節し、完全に溶解した状態（ｐＨ値を測定）を呈した。母液１部を取り、９部の電解質溶液（１：９、ｖ：ｖ）を加え、２％（ｗ／ｖ）の胃内投与用溶液（ｐＨ範囲を測定）を調製した。

３．５洗浄溶液調製：一定量の被験物を秤量し、生理食塩水を用いて１％（ｗ／ｖ）の腹腔洗浄溶液を調製した（ｐＨを中性に調節）。

３．６モールディング：ヤスリ法を用いて腹腔癒着モデルを作成し、術前に動物は禁食するが禁水せず（＞１２ｈ）、吸入麻酔下で腹部を局所的に除毛し、ヨードフォア溶液で消毒し、メスを用いて実験動物の腹部の中線領域に３ｃｍ切開し、盲腸を取り出し、回盲部の右側面でヤスリを用いて漿膜層を表面に針先状出血点が出るまで繰り返し摩擦して、約０．５ｃｍ×０．５ｃｍの損傷創面を形成し、これを腹腔に戻し、洗浄投与を完了した後、手術縫合糸で１層ずつ縫合して腹腔を閉じた。各群の動物を各群３匹ずつ交差させた。開腹のみで盲腸損傷のない偽手術群対照を設置した。

３．７投与：開腹術の２時間前に１２ｍＬ／ｋｇで単回経口胃内投与し、盲腸を損傷した後、腹部縫合前に２ｍＬ／匹で腹腔内洗浄を１回行った。

３．８癒着採点：Ｐｈｉｌｌｉｐｓ分級基準を用いて術後腹腔内癒着の情況を採点した。下記の表の通りである。

３．９結果検出
術後７日目に解剖動物を屠殺し、Ｐｈｉｌｌｉｐｓ分級法を用いて腸部癒着の情況を採点し、結果は図１（偽手術群）、図２（モデル群）および図３（被験物２）に示すように、偽手術群では、モールディング７日後に、腹腔と盲腸の癒着が観察されなかった；モデル群ラットでは、盲腸摩擦モールディング７日後に、複数箇所で大面積の腸癒着が観察された；２％の被験物２溶液胃内投与＋１％溶液腹腔洗浄を採用した後、モデル群に対して８０％を超える動物の腸癒着の数量及び程度は明らかに改善された。

試験例４
４．１実験動物
ＳＰＦ級雄性ＳＤラット２２０±２０ｇ、７０匹、北京維通利華実験動物技術有限公司より購入した。実験室に入ってから適応的に２週間飼育した後、耳標番号を用い、ランダムに７群に分け、各群８匹とした。

４．２被験物および溶媒調製
被験物：被験物１の被試験活性化合物は５，６，７，８－テトラヒドロ－１，６－ナフチリヂン－２－カルボン酸塩酸塩であり、被験物２の被試験活性化合物は（５，６，７，８－テトラヒドロ－１，６－ナフチリヂン－２－イル）ホスホン酸塩酸塩である。陽性薬はトラネキサム酸（ＴｒａｎｅｘａｍｉｃＡｃｉｄ，ＴＸＡ）である。

溶媒：１袋の複方ポリエチレングリコール電解質溶液粉末（６８．５６ｇ）を取り、１Ｌの純水に溶解し、さらに溶媒のグルコース含量が４％（ｗ／ｖ）になるように４４ｇのグルコース（含水）を加えた。調製後２～８℃で保存し、１週間以内に使用した。

被験物胃内投与用溶液：一定量の被験物１を秤量し、電解質溶液を加えて６４ｍＭ、２１ｍＭの溶液を調製し、適当なＮａＯＨを加えてｐＨを７．５程度に調整し、放置し、析出は認められなかった。一定量の被験物２を秤量して６４ｍＭのクリア溶液を調製し、適当なＮａＯＨを添加してｐＨを中性に調節した。一定量の陽性薬トラネキサム酸（ＴＸＡ）を秤量して電解質溶液に加え、それぞれ６４ｍＭと２１ｍＭの溶液を調製した。

４．３群分けおよび投与
開腹術の２時間前に１２ｍＬ／ｋｇで単回経口胃内投与し、偽手術群とモデル群に溶媒を投与した。

４．４モールディング
術前に動物は禁食するが禁水せず（＞１２ｈ）、吸入麻酔下で腹部を局所的に除毛し、ヨードフォア溶液で消毒し、メスを用いて実験動物の腹部を中線領域に３ｃｍ切開し、盲腸を取り出し、回盲部の両側で無菌ガーゼで漿膜層を表面に針先状出血点が出るまで繰り返し摩擦して、盲腸の内外側の損傷創面を形成し、これを腹腔に戻し、手術縫合糸で１層ずづに縫合して腹腔を閉じ、消毒し、全手術操作過程は無菌を保持した。各群の動物を４匹ずつ交差させた。偽手術群は開腹のみで盲腸を損傷しなかった。

４．５癒着採点
術後７日間に解剖学的観察し、Ｐｈｉｌｌｉｐｓ分級基準を用いて術後腹腔内癒着の情況を採点した。その結果は、下記の表の通りである。

４．６結果
術後７日目に各群の生存動物を解剖し、Ｐｈｉｌｌｉｐｓ分級法を用いて腸部癒着の情況を採点し、採点結果は図４に示すように、偽手術群では腹腔と盲腸の癒着が観察されなかった；モデル群ラットでは、盲腸摩擦モールディング７日後に、複数箇所で大面積の腸癒着が観察された；モデル群と比較し、トラネキサム酸群は、術後に各１匹の動物が死亡し、６４ｍＭ群の腹腔内癒着程度は明らかに軽減し、２１ｍＭ群は軽減する傾向があった；６４ｍＭ被験物１を投与したラットでは、腹腔内癒着部位と程度が有意に減少した；２１ｍＭ被験物１を投与したラットでは、癒着部位と程度が減少した。６４ｍＭ被験物２を投与したラットでは、腹腔内癒着部位と程度はある程度改善された。

以上、本発明の技術案の実施形態を例示的に説明した。なお、本発明の保護範囲は、上記実施形態に限定されるものではないと理解されるべきである。本開示の精神および原則の範囲内で、当業者によってなされた任意の修正、等価置換、改良などは、本出願の特許請求の範囲の保護範囲内に含まれるべきである。

Claims

胃腸管損傷関連疾患を予防・治療する薬物の調製におけるテトラヒドロナフチリジン誘導体の使用であって、
前記テトラヒドロナフチリジン誘導体は、５，６，７，８－テトラヒドロ－１，６－ナフチリジン－２－カルボン酸、５，６，７，８－テトラヒドロ－１，６－ナフチリジン－２－ホスホン酸、および前記化合物の水和物、または薬学的に許容される塩、または混合物から選択され、前記胃腸管損傷関連疾患は癒着を指す、使用。
前記癒着が、術後癒着または術後癒着に起因する合併症であることを特徴とする、
請求項１に記載の使用。
前記術後癒着は、腸管癒着、腹腔癒着、肋間癒着、腹膜癒着、子宮癒着から選択される１種または複数種であることを特徴とする、
請求項２に記載の使用。
前記術後癒着に起因する合併症は、女性不妊症、術後イレウス、および疼痛から選択される１種または複数種であることを特徴とする、
請求項２に記載の使用。
前記薬学的に許容される塩は、前記テトラヒドロナフチリジン誘導体の塩酸塩であることを特徴とする、
請求項１～４のいずれか１項に記載の使用。