JP7846925B2 - Ｃｄ２５を標的とする抗体及びその製造方法と応用 - Google Patents

Ｃｄ２５を標的とする抗体及びその製造方法と応用

Info

Publication number
JP7846925B2
JP7846925B2 JP2024542360A JP2024542360A JP7846925B2 JP 7846925 B2 JP7846925 B2 JP 7846925B2 JP 2024542360 A JP2024542360 A JP 2024542360A JP 2024542360 A JP2024542360 A JP 2024542360A JP 7846925 B2 JP7846925 B2 JP 7846925B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
amino acid
seq
variable region
chain variable
acid sequence
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
JP2024542360A
Other languages
English (en)
Other versions
JP2025502379A (ja
Inventor
秋明 潘
承恩 王
▲進▼秋 何
▲艶▼ 李
▲遠▼▲東▼ 王
永▲強▼ 王
楚楚 ▲趙▼
宏▲傑▼ 潘
一平 戒
▲海▼山 ▲羅▼
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Nona Biosciences Suzhou Co Ltd
Original Assignee
Nona Biosciences Suzhou Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nona Biosciences Suzhou Co Ltd filed Critical Nona Biosciences Suzhou Co Ltd
Publication of JP2025502379A publication Critical patent/JP2025502379A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP7846925B2 publication Critical patent/JP7846925B2/ja
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2866—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/524—CH2 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/72—Increased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/77—Internalization into the cell
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Description

本願は、出願日が２０２２／１／１７である中国特許出願２０２２１００５１２３３９の優先権を主張する。本願は、上記中国特許出願の全てを参照する。
（技術分野）
本願は、バイオ医薬分野に関し、具体的には、ＣＤ２５を標的とする抗体もしくはその変異体、及びその製造方法と応用に関する。
制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）は、体内の自己免疫反応性を制御するＴ細胞サブグループであり、生体の免疫寛容、自己免疫及び抗腫瘍免疫の維持において重要な役割を果たす。既存の研究から、腫瘍浸潤性Ｔｒｅｇ細胞の増加が、様々な腫瘍の予後と負の相関を示すことが見出された。また、腫瘍微小環境におけるエフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）とＴｒｅｇとの比率の高低は、腫瘍の進行及び治療効果に影響を与える。これらの研究により、Ｔｒｅｇに対する抗腫瘍治療スキームが潜在的な価値を有することが示唆されているが、臨床的には、Ｔｒｅｇを標的とする抗腫瘍療法の成功例がほとんどなく、主な原因は、Ｔｒｅｇを特異的に標的とするマーカー分子の設計に用いられ得るものがまだ明確でないことである。マウス実験では、抗ＣＴＬＡ－４の抗体は、腫瘍浸潤性Ｔｒｅｇ細胞を除去する効果を示し、この効果は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲｓ）の活性化により実現される。しかしながら、臨床実験では、抗ＣＴＬＡ－４抗体によるＴｒｅｇに対する除去作用は、まだ明確ではない。いくつかの研究から、抗ＣＴＬＡ－４抗体とＦｃＲｓとの親和性の補強が、抗体臨床実験の効果を改善できることを見出したが、全てのＣＴＬＡ－４抗体治療がいずれもＴｒｅｇ細胞の減少を引き起こすわけではない。そのため、Ｔｒｅｇを標的とする抗腫瘍治療を実現するために、Ｔｒｅｇを標的とする特異性標識分子抗体の開発は依然として必要とされている。
ＣＤ２５は、インターロイキン－２受容体のα鎖（ＩＬ２Ｒα）であり、Ｔｒｅｇ細胞において構成的に高発現するが、Ｔｅｆｆ細胞においてＣＤ２５の発現量がより低い。この特性により、ＣＤ２５は、Ｔｒｅｇ細胞を特異的に標的とすることができる潜在的な標的となる。しかしながら、マウス及び臨床実験における抗ＣＤ２５抗体に対する研究が不足しているため、その発展は制限されている。最近の研究により、マウス実験では、抗ＣＤ２５抗体とＦｃＲｓとの親和性を増加することにより、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）を補強することは、抗体のインビボ抗腫瘍活性を有意に向上させることができることが発見された。また、研究により、Ｆｃ最適化によりＡＤＣＣ機能を補強した抗ＣＤ２５抗体は、抗ＰＤ－１抗体のインビボ抗腫瘍活性を有意に向上させることができることが発見された。一方、ＣＤ２５は、ホジキンリンパ腫及び複数の非ホジキンリンパ腫のいずれにも発現し、成人Ｔ－細胞白血病／リンパ腫及び有毛細胞白血病においてＣＤ２５の発現率が１００％に近い。血液腫瘍におけるＣＤ２５の高発現に基づいて、ＣＤ２５を標的とする抗体薬物複合体（ＡＤＣ）の研究はホットスポットとなった。従来の抗ＣＤ２５のＡＤＣ薬物ＡＤＣＴ－３０１は、ホジキンリンパ腫の臨床研究では優れた治療効果を示した。Ｔｒｅｇ及びリンパ腫細胞におけるＣＤ２５の高発現に基づいて、この標的抗体薬物の開発は、Ｆｃ最適化によるＡＤＣＣ機能補強により抗腫瘍効果を実現することができ、一方、ＡＤＣの方法によっても開発され得る。
抗ＣＤ２５抗体薬物の開発は、以前に、モノクローナル抗体とＡＤＣとを含む、リガンドであるインターロイキン－２に対する遮断抗体に焦点を当てた。最近の研究により、インターロイキン－２を遮断しない抗ＣＤ２５抗体は、マウス実験ではより優れた抗腫瘍活性を示すことが発見され、これは、ＣＤ２５がエフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）にも発現し、遮断抗体がインターロイキン－２のシグナル経路を阻害することによって、Ｔｅｆｆの活性を阻害するためである可能性がある。Ｔｅｆｆは、腫瘍免疫の過程で主な機能を果たす細胞であり、遮断抗体のこの特性は、その抗腫瘍作用を弱める。非遮断型抗ＣＤ２５抗体は、この問題を回避し、より顕著な抗腫瘍活性を有する。
抗ＣＤ２５モノクローナル抗体を開発戦略とする分野では、現在、抗ＣＤ２５インターロイキン－２非遮断型抗体の開発に多くの会社が取り組んでおり、最も進んでいるのはロシュのＲＧ６２９２であり、第１相臨床研究であり、適応症が固形腫瘍である。ＡＤＣを開発戦略とする分野においても、多くの会社が研究を進めているが、最も進んでいるのはＡＤＣＴ－３０１であり、現在第２相臨床研究であり、適応症がホジキンリンパ腫である。しかしながら、臨床的には、選択性の高い抗ＣＤ２５インターロイキン－２非遮断型抗体はまだ存在していない。
本発明は、親和性が高く、選択性が高く、生物学的活性が高い抗ＣＤ２５インターロイキン－２非遮断抗体もしくはその変異体を提供し、且つ細胞にエンドサイトーシスされる能力を有し、ＡＤＣ薬物の開発に適した抗体分子を提供する。
本発明の第１の態様では、ＣＤ２５を標的とする抗体もしくはその変異体を提供し、前記抗体は、軽鎖可変領域と重鎖可変領域とを含み、ここで、前記抗体は、以下の群から選択され、
前記軽鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９６、１１１及び１３３に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、及び／又は、前記重鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０、４４ 及び ７４に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、又は、
前記軽鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０４、１１１、１２７に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、及び／又は、前記重鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２２、４６、７６に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、又は、
前記軽鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９４、１１０、１３４に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、及び／又は、前記重鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２３、４８、７８に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、又は、
前記軽鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９７、１１３及び１２９に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、及び／又は、前記重鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６、４０ 及び ７０に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、又は、
前記軽鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９４、１１６及び１３５に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、及び／又は、前記重鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２３、４７ 及び ７７に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、又は、
前記軽鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９５、１１１、１２７に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、及び／又は、前記重鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １４、３８、６８に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、又は、
前記軽鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９８、１１４、１３０に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、及び／又は、前記重鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７、４１、７１に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、又は、
前記軽鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９９、１１５、１３１に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、及び／又は、前記重鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８、４２、７２に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、又は、
前記軽鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １００、１１３、１３２に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、及び／又は、前記重鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １４、４３、７３に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、又は、
前記軽鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０３、１１０、１３４に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、及び／又は、前記重鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１、４５、７５に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、又は、
前記軽鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０５、１１１、１３６に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、及び／又は、前記重鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８、４２、８０に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含むことを特徴とする。
当業者に周知されるように、当分野では、様々な方法によって抗体のＣＤＲを定義することができ、例えば、抗体の三次元構造及びＣＤＲループのトポロジーに基づくＣｈｏｔｈｉａ（Ｃｈｏｔｈｉａら． （１９８９） Ｎａｔｕｒｅ ３４２： ８７７－８８３，Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉら，「Ｓｔａｎｄａｒｄ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃａｎｏｎｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ」，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２７３，９２７－９４８ （１９９７）） 、抗体配列可変性に基づくＫａｂａｔ（Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第４版，Ｕ．Ｓ． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ （１９８７）），ＡｂＭ （Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｂａｔｈ），Ｃｏｎｔａｃｔ （Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｃｏｌｌｅｇｅ Ｌｏｎｄｏｎ）、国際ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｄａｔａｂａｓｅ （ＩＭＧＴ） （ワールドワイドウェブｉｍｇｔ．ｃｉｎｅｓ．ｆｒ／）、及び多数の結晶構造を利用する近接伝播クラスタリング（ａｆｆｉｎｉｔｙ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ）に基づくＮｏｒｔｈ ＣＤＲ定義である。本発明では、列挙されるＣＤＲのアミノ酸配列は、いずれもＣｈｏｔｈｉａ定義規則に従って示されるものである（本発明の請求項においてもＣｈｏｔｈｉａ定義規則に従って示される配列である）。
ここで、Ｌａａ－Ｌｂｂは、抗体軽鎖のＮ末端から、ａａ位～ｂｂ位のアミノ酸配列を指してもよく、Ｈａａ－Ｈｂｂは、抗体重鎖のＮ末端から、ａａ位～ｂｂ位のアミノ酸配列を指してもよい。例えば、Ｌ２４～Ｌ３４は、抗体軽鎖のＮ末端から、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付け規則に従う２４位～３４位のアミノ酸配列を指してもよく、Ｈ２６～Ｈ３２は、抗体重鎖のＮ末端から、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付け規則に従う２６位～３２位のアミノ酸配列を指してもよい。
当業者であれば理解できるように、特に規定されていない限り、所定の抗体もしくはその領域（例えば、可変領域）の「ＣＤＲ」及び「相補性決定領域」という用語は、本発明に記述されている上記既知のスキームのうちのいずれか一つにより定義される相補性決定領域をカバーすると理解されるべきである。本発明の請求項において請求される範囲が、Ｃｈｏｔｈｉａ定義規則に基づいて示された配列であるが、他のＣＤＲの定義規則に基づく対応するアミノ酸配列も本発明の保護範囲に入る。
そのため、本発明で定義された具体的なＣＤＲ配列で抗体を限定する場合、前記抗体の範囲は、その可変領域配列が前記の具体的なＣＤＲ配列を含むが、異なるスキーム（例えば、異なるＣＤＲ定義規則又は組み合わせ）を適用したため、その記載されているＣＤＲ境界が本発明で定義された具体的なＣＤＲ境界と異なる抗体をさらにカバーしている。
ある具体的な実施例において、前記変異体は、ＣＤ２５を標的とする抗体のアミノ酸配列に１～３個のアミノ酸残基の付加、欠失又は置換が発生するものである。
好ましくは、前記変異体は、前記抗体の重鎖可変領域のＨＣＤＲ１の１位、ＨＣＤＲ２の３位にアミノ酸残基の置換が発生し、及び／又は、前記抗体の軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１の１０～１１位、ＬＣＤＲ３の１又は４位にアミノ酸残基の置換が発生するものであり、
好ましくは、前記変異体は、アミノ酸配列が元のアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性を有し、前記抗体と目的抗原との結合を維持又は改善し、前記少なくとも８５％の配列同一性は、好ましくは、少なくとも９０％の配列同一性であり、より好ましくは、少なくとも９５％、９６％、９７％又は９８％の配列同一性であり、最も好ましくは、少なくとも９９％の配列同一性である。
より好ましくは、前記変異体は、以下の群から選択され、
前記軽鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０１、１１３、１２９に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、及び／又は、前記重鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９、４０、７０に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、又は、
前記軽鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０１、１１３、１３９に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、及び／又は、前記重鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９、４０、７０に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、又は、
前記軽鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０２、１１３、１２９に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、及び／又は、前記重鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９、４０、７０に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、又は、
前記軽鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９４、１１６、１３７に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、及び／又は、前記重鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２３、５０、７７に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、又は、
前記軽鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９４、１１６、１３８に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、及び／又は、前記重鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２３、５１、７７に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、又は、
前記軽鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９４、１１６、１３８に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、及び／又は、前記重鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２３、５０、７７に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
ある具体的な実施例において、
前記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７１に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７１と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するＶＬを含み、前記重鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５３に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５３と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するＶＨを含み、又は、
前記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７３に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７３と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するＶＬを含み、前記重鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５５に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５５と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するＶＨを含み、又は、
前記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７５に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７５と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するＶＬを含み、前記重鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５７に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５７と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するＶＨを含み、又は、
前記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６５に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６５と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するＶＬを含み、前記重鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １４８に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １４８と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するＶＨを含み、又は、
前記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７４に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７４と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するＶＬを含み、前記重鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５６に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５６と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するＶＨを含み、又は、
前記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６３に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６３と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するＶＬを含み、前記重鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １４６に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １４６と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するＶＨを含み、又は、
前記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６６に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６６と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するＶＬを含み、前記重鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １４９に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １４９と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するＶＨを含み、又は、
前記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６７に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６７と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するＶＬを含み、前記重鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５０に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５０と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するＶＨを含み、又は、
前記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６８に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６８と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するＶＬを含み、前記重鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５１に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５１と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するＶＨを含み、又は、
前記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７２に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７２と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するＶＬを含み、前記重鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５４に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５４と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するＶＨを含み、又は、
前記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７７に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７７と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するＶＬを含み、前記重鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５９に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５９と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するＶＨを含み、又は、
前記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６９に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６９と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するＶＬを含み、前記重鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５２に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５２と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するＶＨを含み、又は、
前記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８０に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８０と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するＶＬを含み、前記重鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５２に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５２と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するＶＨを含み、又は、
前記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７０に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７０と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するＶＬを含み、前記重鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５２に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５２と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するＶＨを含み、又は、
前記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７８に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７８と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するＶＬを含み、前記重鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６０に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６０と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するＶＨを含み、又は、
前記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７９に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７９と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するＶＬを含み、前記重鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６１に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６１と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するＶＨを含み、又は、
前記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７９に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７９と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するＶＬを含み、前記重鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６０に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６０と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するＶＨを含む。
ある具体的な実施例において、前記抗体もしくはその変異体は、キメラ抗体、ヒト化抗体又は完全ヒト抗体を含む。
好ましくは、前記抗体もしくはその変異体の構造は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ＩｇＧ、Ｆｄ、ｄＡｂ、又は前記抗体もしくはその変異体を含む二重特異性抗体もしくは多重特異性抗体、又は上記抗体から製造されたモノクローナル抗体もしくはポリクローナル抗体であり、前記Ｆｖは、好ましくは、ｓｃＦｖであり、好ましくは、前記ＩｇＧ構造を有する抗体もしくはその変異体は、軽鎖と重鎖とを含み、
前記軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０７に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０７と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８９に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８９と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は、
前記軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０９に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０９と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９１に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９１と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は、
前記軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１１に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１１と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９３に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９３と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は、
前記軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０１に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０１と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８４に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８４と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は、
前記軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１０に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１０と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９２に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９２と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は、
前記軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９９に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９９と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８２に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８２と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は、
前記軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０２に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０２と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８５に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８５と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は、
前記軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０３に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０３と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８６に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８６と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は、
前記軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０４に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０４と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８７に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８７と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は、
前記軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０８に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０８と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９０に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９０と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は、
前記軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１３に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１３と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９５に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９５と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は、
前記軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０５に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０５と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８８に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８８と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は、
前記軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１６に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１６と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８８に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８８と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は、
前記軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０６に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０６と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８８に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８８と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は、
前記軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１４に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１４と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９６に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９６と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は、
前記軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１５に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１５と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９７に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９７と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は、
前記軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１５に示されるアミノ酸配列を含み、重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９６に示されるアミノ酸配列を含む。
本発明では、「Ｆａｂ断片」は、一本の軽鎖及び一本の重鎖のＣＨ１及び可変領域からなる。Ｆａｂ分子の重鎖は、別の重鎖分子とジスルフィド結合を形成することができない。「Ｆｃ」領域は、抗体のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む二つの重鎖断片を含有する。二つの重鎖断片は、二つ又は複数のジスルフィド結合からなり、ＣＨ３ドメインの疎水性作用により一緒に保持されている。「Ｆａｂ’断片」一本の軽鎖、及びＶＨドメインと、ＣＨ１ドメインと、ＣＨ１とＣＨ２ドメインの間の領域とを含む一本の重鎖の一部を含有し、これにより二つのＦａｂ’断片の二本の重鎖の間に鎖間ジスルフィド結合を形成してＦ（ａｂ’）２分子を形成することができる。「Ｆ（ａｂ’）２断片」は、二本の軽鎖、及びＣＨ１とＣＨ２ドメインの間の定常領域の一部を含む二本の重鎖を含有し、これにより二本の重鎖の間に鎖間ジスルフィド結合を形成する。そのため、Ｆ（ａｂ’）２断片は、二本の重鎖間のジスルフィド結合を介して一緒に保持される二つのＦａｂ’断片からなる。「Ｆｖ」という用語は、抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインからなる抗体断片を指すが、定常領域を欠いている。
本発明では、前記のｓｃＦｖ（ｓｉｎｇｌｅ ｃｈａｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｒａｇｍｅｎｔ、単鎖抗体）は、当分野の従来の単鎖抗体であってもよく、それは、重鎖可変領域と、軽鎖可変領域と、１５～２０個のアミノ酸のショートペプチドとを含む。ここで、ＶＬ及びＶＨドメインは、それらが単一のポリペプチド鎖として生成されることを可能にするリンカーを介して対になって一価の分子を形成する［例えば、Ｂｉｒｄら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６ （１９８８） 及びＨｕｓｔｏｎら，Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３（１９８８）を参照されたい］。このようなｓｃＦｖ分子は、ＮＨ２－ＶＬ－リンカー－ＶＨ－ＣＯＯＨ又はＮＨ２－ＶＨ－リンカー－ＶＬ－ＣＯＯＨという一般的な構造を有してもよい。適切な従来技術のリンカーは、反復Ｇ４Ｓアミノ酸配列もしくはその変異体からなる。例えば、アミノ酸配列（Ｇ４Ｓ）４又は（Ｇ４Ｓ）３を有するリンカーを使用してもよいが、その変異体を使用してもよい。
本発明では、前記のＦｄは、当分野の従来の抗体断片であってもよく、それは、ＦａｂにおけるＶＬ、ＣＬ以外の部分を含み、約２２５個のアミノ酸残基を含み、ＶＨ、ＣＨ１及び一部のヒンジ領域を含む。
本発明では、前記のｄＡｂは、当分野の従来のものであってもよく、ＶＨ又はＶＬドメインからなり、いくつかの最小の機能性抗体断片であり、完全な抗原結合特異性を保持する。その分子量は、正常な抗体の分子量の約十分の一である。
「多重特異性抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、多エピトープに対する特異性を有する抗体をカバーする。これらの多重特異性抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）と軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む抗体であって、該ＶＨ－ＶＬユニットは、多エピトープに対する特異性を有する抗体と、二つ又は複数のＶＬ及びＶＨ領域を有する抗体であって、各ＶＨ－ＶＬユニットは、異なる標的又は同一の標的の異なるエピトープに結合する抗体と、二つ又はそれ以上の単一可変領域を有する抗体であって、各単一可変領域は、異なる標的又は同一の標的の異なるエピトープに結合する抗体と、全長抗体、抗体断片、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｉｅｓ）、及びトリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｉｅｓ）、共有結合的又は非共有結合的に一緒に連結された抗体断片などとを含むが、それらに限らない。
本発明の抗体もしくはその変異体は、モノクローナル抗体を含む。本発明に記載のモノクローナル抗体又はｍＡｂ又はＡｂは、単一のクローン細胞株から得られた抗体を指し、前記の細胞株は、真核、原核又はファージのクローン細胞株に限らない。
本発明の第２の態様では、キメラ抗原受容体を提供し、前記キメラ抗原受容体は、本発明の第１の態様に記載の抗体もしくはその変異体を含む。
本発明の第３の態様では、単離された核酸を提供し、前記核酸は、本発明の第１の態様に記載の抗体もしくはその変異体、又は本発明の第２の態様に記載のキメラ抗原受容体をコードする。
本発明の第４の態様では、組換え発現ベクターを提供し、前記組換え発現ベクターは、本発明の第３の態様に記載の単離された核酸を含み、好ましくは、前記組換え発現ベクターは、プラスミド、コスミド、ファージ又はウイルスベクターであり、前記ウイルスベクターは、好ましくは、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター又はアデノ随伴ウイルスベクターである。
本発明の第５の態様では、形質転換体を提供し、前記形質転換体は、宿主細胞に本発明の第４の態様に記載の組換え発現ベクターを含み、好ましくは、前記宿主細胞は、原核細胞又は真核細胞であり、より好ましくは、前記宿主細胞は、酵母細胞、哺乳類細胞又は抗体もしくはその抗原結合断片の製造に適した他の細胞から選択され、ここで、前記哺乳類細胞は、例えば、２９３細胞又はＣＨＯ細胞である。
本発明の第６の態様では、免疫細胞を提供し、前記免疫細胞は、本発明の第２の態様に記載のキメラ抗原受容体を含み、好ましくは、前記免疫細胞は、Ｔ細胞又はＮＫ細胞であり、より好ましくは、前記ＮＫ細胞は、末梢血ＮＫ細胞、臍帯血由来ＮＫ細胞、幹細胞分化ＮＫ細胞、又はＮＫ細胞株例えばＮＫ－９２細胞株である。
本発明の第７の態様では、ＣＤ２５を標的とする抗体もしくはその変異体の製造方法を提供し、前記方法は、本発明の第５の態様に記載の形質転換体を培養し、培養物からＣＤ２５を標的とする抗体もしくはその変異体を得ることを含む。
本発明の第８の態様では、抗体薬物コンジュゲートを提供し、前記抗体薬物コンジュゲートは、細胞傷害性薬剤と、本発明の第１の態様に記載のＣＤ２５を標的とする抗体もしくはその変異体とを含む。
本発明の第９の態様では、医薬組成物を提供し、前記医薬組成物は、本発明の第１の態様に記載のＣＤ２５を標的とする抗体もしくはその変異体、本発明の第３の態様に記載の単離された核酸、本発明の第４の態様に記載の組換え発現ベクター、本発明の第５の態様に記載の形質転換体、本発明の第６の態様に記載の免疫細胞及び／又は本発明の第８の態様に記載の抗体薬物コンジュゲート、及び薬学的に許容可能なキャリアを含み、
好ましくは、前記医薬組成物は、ホルモン製剤、標的化小分子製剤、プロテアソーム阻害剤、造影剤、診断剤、化学療法剤、腫瘍溶解薬、細胞傷害性薬剤、サイトカイン、共刺激分子の活性化剤、阻害性分子の阻害剤及びワクチンからなる群における一つ又は複数をさらに含む。
いくつかの実施形態において、本発明の医薬組成物又は医薬製剤は、適切な薬学的に許容可能なキャリア、例えば、医薬品添加物、例えば、緩衝剤を含む当分野で既知の医薬品キャリア、医薬品賦形剤を含む。本発明で使用されるように、「薬学的に許容可能なキャリア」又は「医薬品キャリア」は、生理学的に適合性の任意の全ての溶媒、分散媒体、等張剤及び吸収遅延剤などを含む。本発明に適する医薬品キャリアは、ピーナッツ油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油などのような、石油、動物、植物又は合成供給源のものを含む油及び水のような無菌の液体であってもよい。医薬組成物が静脈内投与される場合、水は好適なキャリアである。また、生理食塩水、水性デキストロース及びグリセリン溶液を液体キャリア、特に注射用溶液として用いてもよい。適切な賦形剤は、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、コメ、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセリルモノステアレート、タルク、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、ジオール、水、エタノールなどを含む。賦形剤の使用及びその用途についても、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＥｘｃｉｐｉｅｎｔｓ」，第五版，Ｒ．Ｃ．Ｒｏｗｅ，Ｐ．Ｊ．Ｓｅｓｋｅｙ 及びＳ．Ｃ．Ｏｗｅｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，Ｃｈｉｃａｇｏを参照されたい。所望であれば、前記組成物は、少量の湿潤剤又は乳化剤又はｐＨ緩衝剤をさらに含有してもよい。これらの組成物は、溶液、懸濁液、乳剤、錠剤、丸薬、カプセル剤、粉末、持続放出製剤などの形態をとることができる。経口製剤は、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンのような標準的な医薬品キャリア及び／又は賦形剤を含んでもよい。本発明に記載の医薬製剤又は医薬組成物は、所望の純度を有する本発明の抗体もしくはその抗原結合断片を、一つ又は複数の任意選択的な医薬品添加物（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１６版、Ｏｓｏｌ、Ａ． 編集（１９８０））と混合することによって、好ましくは、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態で製造され得る。本発明の医薬組成物又は製剤は、治療される特定の適応症に必要とされる一つ超の活性成分をさらに含んでもよく、好ましくは、互いに悪影響を及ぼしない、相補的活性を有するそれらの活性成分を有する。例えば、他の抗感染活性成分、例えば、他の抗体、抗感染活性剤、低分子薬物又は免疫調節剤などをさらに提供することは望ましい。前記活性成分は、目的用途に有効な量で適切に組み合わせて存在する。持続放出製剤を製造することができる。持続放出製剤の適切な例は、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片を含有する固体疎水性ポリマーの半透過性マトリックスを含み、前記マトリックスは、成形品、例えば、フィルム又はマイクロカプセルの形態を呈する。
本発明の第１の態様のいずれか一項に記載のＣＤ２５を標的とする抗体もしくはその変異体、本発明の第２の態様に記載のキメラ抗原受容体、本発明の第３の態様に記載の単離された核酸、本発明の第４の態様に記載の組換え発現ベクター、本発明の第５の態様に記載の形質転換体、本発明の第６の態様に記載の免疫細胞、本発明の第８の態様に記載の抗体薬物コンジュゲート及び／又は本発明の第９の態様に記載の医薬組成物の、腫瘍を診断、予防及び／又は治療する薬物の製造における応用である。
本発明の第１０の態様では、キットを提供し、前記キットは、本発明の第１の態様に記載のＣＤ２５を標的とする抗体もしくはその変異体、本発明の第２の態様に記載のキメラ抗原受容体、本発明の第３の態様に記載の単離された核酸、本発明の第４の態様に記載の組換え発現ベクター、本発明の第５の態様に記載の形質転換体、本発明の第６の態様に記載の免疫細胞、又は本発明の第８の態様に記載の抗体薬物コンジュゲート又は本発明の第９の態様に記載の医薬組成物を含み、
好ましくは、前記キットは、（ｉ）抗体もしくはその変異体又はキメラ抗原受容体又は免疫細胞又は抗体薬物コンジュゲート又は医薬組成物を投与する装置、及び／又は（ｉｉ）取り扱い説明書をさらに含む。
本発明の第１１の態様では、パーツキットを提供し、前記パーツキットは、キットＡとキットＢとを含み、ここで、
前記キットＡは、本発明の第１の態様に記載のＣＤ２５を標的とする抗体もしくはその抗原結合断片、本発明の第２の態様に記載のキメラ抗原受容体、本発明の第３の態様に記載の単離された核酸、本発明の第４の態様に記載の組換え発現ベクター、本発明の第５の態様に記載の形質転換体、本発明の第６の態様に記載の免疫細胞、本発明の第８の態様に記載の抗体薬物コンジュゲート及び／又は本発明の第９の態様に記載の医薬組成物を含有し、
前記キットＢは、他の抗腫瘍抗体又は前記他の抗腫瘍抗体を含む医薬組成物、及び／又はホルモン製剤、標的化小分子製剤、プロテアソーム阻害剤、造影剤、診断剤、化学療法剤、腫瘍溶解薬、細胞傷害性薬剤、サイトカイン、共刺激分子の活性化剤、阻害性分子の阻害剤及びワクチンからなる群における一つ又は複数を含有する。
本発明の第１２の態様では、ＣＤ２５を検出する方法を提供し、前記方法は、本発明の第１の態様に記載のＣＤ２５を標的とする抗体もしくはその変異体、本発明の第２の態様に記載のキメラ抗原受容体、本発明の第６の態様に記載の免疫細胞、本発明の第８の態様に記載の抗体薬物コンジュゲート及び／又は本発明の第９の態様に記載の医薬組成物を使用することを含む。
好ましくは、前記検出は、診断及び／又は治療を目的としない。
本発明の第１３の態様では、被験体の病症を予防、治療又は軽減する方法を提供し、前記方法は、治療有効量の本発明の第１の態様のいずれか一項に記載のＣＤ２５を標的とする抗体もしくはその変異体、本発明の第３の態様に記載の単離された核酸、本発明の第４の態様に記載の組換え発現ベクター、本発明の第５の態様に記載の形質転換体、本発明の第６の態様に記載の免疫細胞、本発明の第８の態様に記載の抗体薬物コンジュゲート及び／又は本発明の第９の態様に記載の医薬組成物を前記被験体に投与することを含む。
いくつかの具体的な実施形態において、前記被験体の病症は、増殖性疾患、例えば、腫瘍又は癌である。いくつかの実施形態において、上記被験体は、形成された腫瘍、例えば、固形腫瘍に罹患している。
いくつかの実施形態において、被験体の腫瘍内部又は腫瘍浸潤性Ｔｒｅｇの細胞数を減少させる方法が提供され、いくつかの実施形態において、被験体の腫瘍内部又は腫瘍浸潤性Ｔｒｅｇの細胞活性を除去又は阻害する方法が提供され、いずれも有効量の本発明の第１の態様のいずれか一項に記載のＣＤ２５を標的とする抗体もしくはその変異体、本発明の第２の態様に記載のキメラ抗原受容体、本発明の第３の態様に記載の単離された核酸、本発明の第４の態様に記載の組換え発現ベクター、本発明の第５の態様に記載の形質転換体、本発明の第６の態様に記載の免疫細胞、本発明の第８の態様に記載の抗体薬物コンジュゲート及び／又は本発明の第９の態様に記載の医薬組成物を前記被験体に投与することを含む。
いくつかの実施形態において、被験体の腫瘍内部Ｔｅｆｆ／Ｔｒｅｇの比率を増加する方法が提供され、本発明の第１の態様のいずれか一項に記載のＣＤ２５を標的とする抗体もしくはその変異体、本発明の第２の態様に記載のキメラ抗原受容体、本発明の第３の態様に記載の単離された核酸、本発明の第４の態様に記載の組換え発現ベクター、本発明の第５の態様に記載の形質転換体、本発明の第６の態様に記載の免疫細胞、本発明の第８の態様に記載の抗体薬物コンジュゲート及び／又は本発明の第９の態様に記載の医薬組成物を前記被験体に投与することを含む。
いくつかの実施形態において、被験体体内の腫瘍細胞に対するＡＤＣＣを補強する方法が提供され、本発明の第１の態様のいずれか一項に記載のＣＤ２５を標的とする抗体もしくはその変異体、本発明の第２の態様に記載のキメラ抗原受容体、本発明の第３の態様に記載の単離された核酸、本発明の第４の態様に記載の組換え発現ベクター、本発明の第５の態様に記載の形質転換体、本発明の第６の態様に記載の免疫細胞、本発明の第８の態様に記載の抗体薬物コンジュゲート及び／又は本発明の第９の態様に記載の医薬組成物を前記被験体に投与することを含む。
いくつかの具体的な実施形態において、被験体体内の腫瘍細胞に対するＡＤＣＣ効果は補強した。
いくつかの実施形態において、本発明の第１の態様のいずれか一項に記載のＣＤ２５を標的とする抗体もしくはその変異体、本発明の第２の態様に記載のキメラ抗原受容体、本発明の第３の態様に記載の単離された核酸、本発明の第４の態様に記載の組換え発現ベクター、本発明の第５の態様に記載の形質転換体、本発明の第６の態様に記載の免疫細胞、本発明の第８の態様に記載の抗体薬物コンジュゲート及び／又は本発明の第９の態様に記載の医薬組成物の、被験体の病症を予防、治療又は軽減する薬物を製造するための用途、被験体の腫瘍内部又は腫瘍浸潤性Ｔｒｅｇの細胞数を減少させる薬物を製造するための用途、被験体の腫瘍内部又は腫瘍浸潤性Ｔｒｅｇの細胞活性を除去又は阻害する薬物を製造するための用途、被験体の腫瘍内部Ｔｅｆｆ／Ｔｒｅｇの比率を増加する薬物を製造するための用途、被験体体内の腫瘍細胞に対するＡＤＣＣを補強する薬物を製造するための用途が提供される。
いくつかの具体的な実施形態において、上記被験体は、病症が増殖性疾患（例えば、癌又は腫瘍）であるか又は増殖性疾患（例えば、癌又は腫瘍）に罹患している。前記腫瘍は、癌、リンパ腫、白血病、胚細胞瘤及び肉腫を含むが、それらに限らない。このような癌のより具体的な例は、扁平上皮癌、骨髄腫、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、神経膠腫、肝細胞癌（ＨＣＣ）、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、様々な骨髄腫、胃腸（管）癌、腎臓癌、卵巣癌、肝臓癌、リンパ芽球性白血病、リンパ球性白血病、結腸直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、前立腺癌、甲状腺癌、黒色腫、軟骨肉腫、神経芽細胞腫、膵臓癌、多形性膠芽腫、子宮頸癌、脳癌、胃癌、膀胱癌、肝癌、乳癌、結腸癌及び頭頸部癌を含む。
いくつかの具体的な実施形態において、前記癌又は腫瘍は、固形腫瘍であってもよく、肉腫（組織（例えば、海綿骨、軟骨、脂肪、筋肉、血管、造血細胞、又は線維性結合組織）における間葉系由来の形質転換細胞から発生した癌を含む）、癌（上皮細胞から発生した腫瘍を含む）、中皮腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫などを含むが、それらに限らない。固形腫瘍に関する癌は、脳癌、肺癌、胃癌、十二指腸癌、食道癌、乳癌、結腸及び直腸癌、腎癌、膀胱癌、腎臓癌、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、黒色腫、口腔癌、肉腫、眼癌、甲状腺癌、尿道癌、膣癌、頸部癌、リンパ腫などを含むが、それらに限らない。
いくつかの具体的な実施形態において、前記癌は、ＣＤ２５を発現する腫瘍に関し、リンパ腫、例えば、ホジキンリンパ腫及びリンパ球性白血病、例えば、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）を含むが、それらに限らない。
当技術分野における常識に合致した上で、上記の各好ましい条件を任意に組み合わせて、本発明の各好適な例を得ることができる。
本発明で使用される試薬及び原料は、いずれも市販で入手可能である。
本発明の積極的な効果は以下のとおりであり、
本発明のＣＤ２５を標的とするモノクローナル抗体は、自然に存在する抗体であり、ヒトＣＤ２５及びカニクイザルＣＤ２５に結合する活性を有する。Ｆｃ操作後に、より高いＡＤＣＣ効果を有し、インビトロ実験でＴｒｅｇ及びリンパ腫細胞を除去する優れた作用を有し、それとともにＩＬ－２のシグナル経路を遮断することなく、Ｔｅｆｆ細胞の活性に影響を及ぼさなく、そして良好な内在化活性を有し、ＡＤＣ薬物の開発に適した潜在的な抗体分子である。
ヒトＣＤ２５を過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞への抗ＣＤ２５ Ｈ２Ｌ２抗体の結合を示した図である。 サルＣＤ２５を過剰発現するＨＥＫ２９３細胞への抗ＣＤ２５ Ｈ２Ｌ２抗体の結合を示した図である。 ヒトＣＤ２５を内因的に発現する腫瘍細胞株ＳＵ－ＤＨＬ－１への抗ＣＤ２５ Ｈ２Ｌ２抗体の結合を示した図である。 ヒトＣＤ２５を内因的に発現する腫瘍細胞株Ｋａｒｐａｓ２９９への抗ＣＤ２５ Ｈ２Ｌ２抗体の結合を示した図である。 ヒトＴｒｅｇ細胞及びＴｅｆｆ細胞への抗ＣＤ２５ Ｈ２Ｌ２抗体の結合を示した図である。 抗ＣＤ２５ Ｈ２Ｌ２抗体がヒトインターロイキン－２とＣＨＯＫ１－ｈｕＣＤ２５細胞との結合を遮断しないことを示した図である。 抗ＣＤ２５ Ｈ２Ｌ２抗体がヒトインターロイキン－２とＳＵ－ＤＨＬ－１細胞との結合を遮断しないことを示した図である。 ヒトインターロイキン－２シグナル経路下流のタンパク質ＳＴＡＴ５のリン酸化レベルを阻害しない抗ＣＤ２５ Ｈ２Ｌ２抗体を検出したＡｌｐｈｓＬｉｓａである。 ヒトインターロイキン－２シグナル経路下流のタンパク質ＳＴＡＴ５のリン酸化レベルを阻害しない抗ＣＤ２５ Ｈ２Ｌ２抗体を検出したＦＡＣＳである。 レポーター遺伝子細胞株による、ＳＵ－ＤＨＬ－１細胞株に対する抗ＣＤ２５ Ｈ２Ｌ２抗体のＡＤＣＣ作用の検出を示した図である。 レポーター遺伝子細胞株による、ヒトＴｒｅｇ細胞に対する抗ＣＤ２５ Ｈ２Ｌ２抗体のＡＤＣＣ作用の検出を示した図である。 レポーター遺伝子細胞株による、ヒトＴｅｆｆ細胞に対する抗ＣＤ２５ Ｈ２Ｌ２抗体のＡＤＣＣ作用の検出を示した図である。 抗ＣＤ２５ Ｈ２Ｌ２抗体に対するＫａｒｐａｓ ２９９細胞のエンドサイトーシス作用を示した図である。 抗ＣＤ２５ Ｈ２Ｌ２抗体に対するＳＵ－ＤＨＬ－１細胞のエンドサイトーシス作用を示した図である。
以下では、実施例の方式によって本発明をさらに説明するが、本発明を前記実施例の範囲内に限定するものではない。以下の実施例に具体的な条件の実験方法を明記していないが、従来の方法と条件に従って、又は商品説明書に従って選択される。
実施例１． 抗ＣＤ２５抗体分子の取得
ＣＤ２５組換えタンパク質を使用して実験動物を免疫して、ＣＤ２５に特異的に結合する抗体分子を得て、該実験動物は、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ラクダなどであってもよい。通常、得られた抗体分子は、非ヒト由来のものである。非ヒト由来の抗体を得た後に、抗体工学技術を用いてこれらの分子に対してヒト化操作を行って、免疫原性を低下させ創薬可能性を高める必要がある。しかしながら、抗体のヒト化過程は、技術が複雑であり、ヒト化操作された分子は抗原に対する親和性を低下させることがよくある。一方、トランスジェニック技術の進歩により、遺伝子操作されたマウスを作製することが可能になり、それは、ヒト免疫グロブリンの免疫レパートリーを持ち、その内因性マウス免疫レパートリーを欠失させる。Ｈａｒｂｏｕｒ Ｈ２Ｌ２マウス（Ｈａｒｂｏｕｒ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ＢＶ）は、ヒト免疫グロブリンの免疫レパートリーを持つトランスジェニックマウスであり、このようなトランスジェニックマウスから産生した抗体は、完全ヒト由来配列を有するため、さらなるヒト化操作を必要とせず、治療用抗体の開発の効率を大幅に向上させた。
１．１． マウス免疫
可溶性組換えヒトＣＤ２５－ｈｉｓ融合タンパク質（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、＃１０１６５－Ｈ０８Ｈ）を抗原としてＨａｒｂｏｕｒ Ｈ２Ｌ２マウスを複数ラウンド免疫した。抗原タンパク質と免疫アジュバントを混合して免疫原試薬を形成し、そして皮下で鼠径部注射又は腹腔内注射した。各ラウンドの免疫において、各マウスが受けた総注射量は１００マイクロリットルである。初回免疫では、各マウスは、５０マイクログラムの抗原タンパク質と完全フロイントアジュバント（Ｓｉｇｍａ，＃ Ｆ５８８１）を１：１の体積比で混合して調製した免疫原試薬による免疫を受けた。その後の各ラウンド追加免疫では、各マウスは、２５マイクログラムの抗原タンパク質とＳｉｇｍａ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ｓｙｓｔｅｍアジュバント（Ｓｉｇｍａ，＃Ｓ６３２２）を混合して調製した免疫原試薬による免疫を受けた。各ラウンドの追加免疫の間隔は、少なくとも２週間であり、通常、６～７ラウンドの追加免疫がある。免疫時間は、０、１４、２８、４２、５６、７０、８４、９８日目であり、且つ４９、７７日目に、マウス血清の抗体力価を検出した。Ｈ２Ｌ２マウスの脾臓Ｂ細胞分離を行う５日前に、マウスあたり２５マイクログラムの抗原タンパク質の用量で最後の追加免疫を行った。
１．２． 血清力価の検出
特定の時点で、マウス血清を採取し、ＦＡＣＳ方法により血清中のＣＤ２５結合抗体の力価を検出した。
遺伝子合成により、ヒトＣＤ２５（そのＧｅｎｅｂａｎｋ番号がＮＭ０００４１７である）をコードするｃＤＮＡを得て、発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１にクローニングし、そして発現ベクターをＣＨＯ細胞にトランスフェクトし、ヒトＣＤ２５を高発現するＣＨＯＫ１－ｈｕＣＤ２５細胞を構築した。
段階希釈されたマウス血清とＣＨＯＫ１－ｈｕＣＤ２５細胞を４℃で１時間インキュベートし、細胞を２回洗浄した後に、二次抗体ａｎｔｉ－ｒａｔ ＩｇＧ （Ｈ＋Ｌ） （Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ａ１１００６） を加え、４℃で１時間インキュベートし、２回洗浄した後に、細胞を再懸濁させ、フローサイトメトリーで検出した（ＢＤ，ＣａｎｔｏＩＩ）。ＣＨＯＫ１細胞をバックグラウンド対照とした。
１．３． ハイブリドーマ技術による抗ＣＤ２５抗体のスクリーニング
遺伝子合成により、カニクイザルＣＤ２５（そのＧｅｎｅｂａｎｋ番号がＮＭ００１２８３７０４である）をコードするｃＤＮＡを得て、発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１にクローニングし、そして発現ベクターをＨＥＫ２９３細胞にトランスフェクトし、カニクイザルＣＤ２５を高発現するＨＥＫ２９３－ｃｙｎｏＣＤ２５細胞を構築した。
血清力価の高い免疫マウスを選択し、一回の最終免疫を行った後にマウスを屠殺し、脾細胞及びＳＰ２／０ 骨髄腫細胞（ＡＴＣＣ，ＣＲＬ－１５８１）を取って電気融合を行い、細胞比率は４：１であり、電気融合パラメータはＶ１：５０Ｖ、ｔ１：１５ｓ、Ｖ２：６００Ｖ、ｔ２：２０μｓ、ｔ３： ０．５ｓ、ｎ：１、ｔ４： ７ｓ、Ｖ＋／－： ＋、ｆａｄｅ： ｏｎである。２０％ＦＢＳ及びＨＴを含有するＤＭＥＭの培養液に細胞を再懸濁させ、１ × １０５／１００μＬ／ウェルで播種し、２４時間後に、２０％ＦＢＳ及び２× ＨＴを含有するＤＭＥＭを１００μＬ／ウェルで加えて培養し続けた。その後、上清を取って抗体力価を検出した。一般的には、融合後９～１５日に、組換えヒトＣＤ２５－ｈｉｓタンパク質で免疫したマウスから上清を取り、ＥＬＩＳＡで予備スクリーニングを行い、組換えヒトＣＤ２５－ｈｉｓタンパク質との結合を検出し、そして、陽性クローンをＦＡＣＳによりさらに確認し、ヒトＣＤ２５を過剰発現するＣＨＯＫ１細胞株（ＣＨＯＫ１－ｈｕＣＤ２５）、カニクイザルＣＤ２５を過剰発現するＨＥＫ２９３細胞株（ＨＥＫ２９３－ｃｙｎｏＣＤ２５）との結合能力を検出した。また、ＦＡＣＳ方法により、インターロイキン－２とＣＨＯＫ１－ｈｕＣＤ２５との結合に対する陽性クローンの遮断作用を検出した。有限希釈法により、遮断作用がなく、陽性であるウェルをさらにサブクローニングし、次にＥＬＩＳＡ及びＦＡＣＳ方法によりさらにクローニングした。ヒト及びサルＣＤ２５に良好に結合するクローンを選んでシーケンシングした。本実施例では、免疫されたＨａｒｂｏｕｒ Ｈ２Ｌ２マウスから得られた抗ＣＤ２５モノクローナル抗体分子の可変ドメインの配列はヒト由来の抗体配列である。
１．４． 完全ヒト組換え抗体の製造
抗体分子をコードする軽、重鎖可変ドメインの配列を得た後に、従来の組換えＤＮＡ技術を用いて、軽、重鎖可変ドメインの配列及び対応するヒトの抗体の軽、重鎖定常ドメインの配列に対して融合発現を行い、組換え抗体分子を得ることができる。本実施例では、抗体重鎖可変ドメイン配列（ＶＨ）を遺伝子合成し、ヒトＩｇＧ１抗体重鎖定常ドメイン配列をコードする哺乳類細胞発現プラスミドベクターにクローニングすることによって、ＩｇＧ１抗体を産生する全長重鎖をコードした。抗体軽鎖可変ドメイン配列（ＶＬ）を遺伝子合成し、ヒト抗体Ｉｇκ軽鎖定常ドメイン配列をコードする哺乳類細胞発現プラスミドベクターにクローニングすることによって、抗体を産生する全長軽鎖をコードした。本実施例では、免疫されたＨａｒｂｏｕｒ Ｈ２Ｌ２マウスから得られた抗ＣＤ２５モノクローナル抗体分子可変ドメインの配列がヒト由来の抗体配列であるため、本実施例でも完全ヒト由来の抗ＣＤ２５組換えＩｇＧ１抗体を得た。
抗体重鎖をコードするプラスミド及び抗体軽鎖をコードするプラスミドの両方を哺乳類宿主細胞（例えば、ヒト胚腎細胞ＨＥＫ２９３）にトランスフェクトし、従来の組換えタンパク質発現及び精製技術を用いて、軽鎖と重鎖が正確に対合し組み立てられる精製されたＣＤ２５組換え抗体を得ることができる。具体的には、ＨＥＫ２９３細胞をＦｒｅｅＳｔｙｌｅＴＭ Ｆ１７ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｍｅｄｉｕｍ培地（Ｔｈｅｒｍｏ ，＃Ａ１３８３５０４）中で培養した。一過性トランスフェクションが開始する前、細胞濃度を６～８ × １０５細胞／ｍｌに調節し、３７℃ ８％ ＣＯ２のシェーカーで２４時間培養し、細胞濃度が１．２ ×１０６細胞／ｍｌである。培養した細胞を３０ｍｌ用意した。抗体重鎖をコードする上記プラスミド及び抗体軽鎖をコードする上記プラスミドを２：３の比率で混合し、合計３０μｇのプラスミドを１．５ｍｌのＯｐｔｉ－ＭＥＭ血清低減培地（Ｔｈｅｒｍｏ，３１９８５０８８）に溶解させ、０．２２μｍの濾過膜で濾過し滅菌した。次に１．５ｍｌのＯｐｔｉ－ＭＥＭを取り、１ｍｇ／ｍｌ ＰＥＩ（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ ＃２３９６６－２）１２０μｌに溶解させ、５分間静置した。ＰＥＩをプラスミドにゆっくりと加え、室温で１０分間インキュベートし、培養フラスコをゆっくりと振盪しながらプラスミドＰＥＩ混合溶液をゆっくりと滴加し、３７℃ ８％ ＣＯ２のシェーカーで５日間培養した。５日後に細胞生存率を観察した。培養物を収集し、３３００ｇの回転速度で１０分間遠心分離した後に上清を取り、そして上清を高速で遠心分離して不純物を除去した。ＭａｂＳｅｌｅｃｔＴＭ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，＃ ７１－５０２０－９１ ＡＥ）を含有する重力カラム（Ｂｉｏ－Ｒａｄ ，＃７３１１５５０）をＰＢＳ（ｐＨ７．４）で平衡化し、２～５倍のカラム体積で洗い流した。上清試料をカラムに通し、カラム体積の５～１０倍のＰＢＳでカラムを洗い流し、次にｐＨ３．５の０．１Ｍグリシンで目的タンパク質を溶出させ、その後にｐＨ ８．０のＴｒｉｓ－ＨＣｌ中性に調節し、最後に限外濾過チューブ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，ＵＦＣ９０１０２４）で濃縮しＰＢＳ緩衝液に交換し、精製されたＣＤ２５抗体溶液を得た。最後にＮａｎｏＤｒｏｐ（Ｔｈｅｒｍｏ ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＴＭ ＮａｎｏＤｒｏｐＴＭ Ｏｎｅ）で濃度を測定し、分注し、保存して待機した。
１．５ Ｆｃ領域突然変異によるＡＤＣＣ効果機能の補強
抗体重鎖可変ドメイン配列（ＶＨ）を遺伝子合成し、ヒトＩｇＧ１抗体重鎖定常ドメイン配列をコードする哺乳類細胞発現プラスミドベクターにクローニングし、且つ該ＩｇＧ１重鎖定常領域のＣＨ２領域にＳ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅ突然変異（ＥＵ番号によると、２３９位のセリンがアスパラギン酸に置き換えられ、３３２位のイソロイシンがグルタミン酸に置き換えられる）を導入して、ＡＤＣＣ効果機能を増加した。そして実施例１．４の前記方法を用いて、抗体重鎖及び抗体軽鎖をコードするプラスミドを哺乳類宿主細胞にトランスフェクトして、組換え抗体タンパク質を製造した。
１．６ フコースの除去によるＡＤＣＣ効果機能の補強
本実施例は、抗体糖鎖（Ｎ２９７）におけるフコース成分を除去することによって、Ｆｃコンホメーションを変えて、さらにＡＤＣＣ効果機能を補強した。そして実施例１．４の前記方法を用いて、ＩｇＧ１抗体重鎖をコードするプラスミド及び抗体軽鎖をコードするプラスミドの両方を哺乳類宿主細胞にトランスフェクトし、且つ２－ｆｌｕｏｒｏ ｐｅｒａｃｅｔｙｌａｔｅｄ ｆｕｃｏｓｅ （２ＦＦ） （Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、＃３４４８２７）を加え、そして実施例１．４の前記方法に従って細胞培養、収集、精製などのステップを行った。化合物２ＦＦの添加は、グリコシダーゼ活性を阻害し、糖鎖におけるフコース成分の形成を阻害した。
本実施例で生成した組換え抗体は、実施例１．４で生成した組換え抗体と同じアミノ酸配列を有するが、糖鎖修飾が異なる。二つの方法で生成した、同じアミノ酸配列を有する異なる抗体タンパク質試料を区別するために、本実施例では、抗体試料名の接尾辞として「ＡＦ」を用い、該試料が「低フコース」又は「「フコースなし」」の試料であることを示した。
例えば、ＰＲ００４６３９は、正常ＩｇＧ１定常領域を含有する組換え抗体であり、実施例１．４の前記方法を用いて、正常な糖鎖構造を有する対応する抗体タンパク質試料を製造した。ＰＲ００４６３９ＡＦは、ＰＲ００４６３９と同じアミノ酸配列を有し、本実施例の方法で得られた、フコース修飾が除去された抗体タンパク質試料である。
いくつかの実施例において、同一の抗体のアミノ酸配列は、実施例１．４の前記方法で抗体試料（番号がＰＲｘｘｘｘｘｘであり、ここでｘｘｘｘｘｘが数字である）を製造することができ、本実施例の方法で抗体試料（番号がＰＲｘｘｘｘｘｘＡＦであり、ここでｘｘｘｘｘｘが数字である）を製造することもでき、これらの試料は、糖鎖構造に違いがあった。
１．７ 抗ＣＤ２５完全ヒト組換え抗体の配列
表２－１には、本発明出願におけるＣＤ２５抗体の軽、重鎖可変ドメインアミノ酸配列、軽鎖全長アミノ酸配列、重鎖全長アミノ酸配列及びＣｈｏｔｈｉａ定義規則に従って定義されたＣＤＲのアミノ酸配列が列挙されている。
本発明出願の複数の実施例で使用される対照抗体は、ＲＧ６２９２であり、その配列が特許出願ＵＳ２０１９０２８４２８７Ａ１からのものであり、その対応する組換えＩｇＧ１抗体の番号がＰＲ００４６３９である。実施例１．６の前記方法を用いて、フコースが除去された抗体タンパク質試料ＰＲ００４６３９ＡＦ、即ちＲＧ６２９２の類似体を製造した。ＰＲ００４６３９（ＰＲ００４６３９ＡＦ、ＲＧ６２９２）の配列は表２－５に示されている。
本発明出願の実施例で使用される対照抗体は、ｄａｃｌｉｚｕｍａｂ（商品名Ｚｅｎａｐａｘ、Ｒｏｃｈｅ）であり、対応する組換えＩｇＧ１抗体の番号がＰＲ００３６８９であり、その重鎖配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２１７に示すとおりであり、軽鎖配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２１８に示すとおりである。
本発明出願の実施例で使用される対照抗体は、ＨｕＭａｘ－Ｔａｃ（Ｇｅｎｍａｂ社）であり、その配列が特許出願ＷＯ ２０１４０５７１１９Ａ１からのものであり、対応する組換えＩｇＧ１抗体の番号がＰＲ００７７２２である。
実施例２ 抗体の配列分析及び配列最適化
抗体の重鎖可変ドメイン配列は、染色体における重鎖遺伝子群の生殖系列遺伝子Ｖ、Ｄ、Ｊ遺伝子断片の遺伝子再構成及び体細胞高頻度突然変異などの事象に由来し、軽鎖可変ドメイン配列は、軽鎖遺伝子群の生殖系列遺伝子Ｖ、Ｊ遺伝子断片の遺伝子再構成及び体細胞高頻度突然変異などの事象に由来する。遺伝子再構成及び体細胞高頻度突然変異は、抗体の多様性を増加させる主要な要因である。同じ生殖系列Ｖ遺伝子断片からの抗体は、異なる配列を産生することもできるが、全体的には類似性が高い。いくつかのアルゴリズム、例えば、ＩＭＧＴ／ＤｏｍａｉｎＧａｐＡｌｉｇｎ （ｈｔｔｐ：／／ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／３Ｄｓｔｒｕｃｔｕｒｅ－ＤＢ／ｃｇｉ／ＤｏｍａｉｎＧａｐＡｌｉｇｎ．ｃｇｉ）又はＮＣＢＩ／ＩｇＢＬＡＳＴ （ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｉｇｂｌａｓｔ／）を利用して、抗体の可変ドメイン配列から、遺伝子再構成が発生する時のその可能な生殖系列遺伝子断片を推定することができる。実施例１及び表２－１における抗体配列を分析し、それらの重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）の生殖系列遺伝子Ｖ遺伝子断片は表２－２に示されている。
タンパク質又はポリペプチドのアミノ酸鎖は、細胞内で翻訳合成された後に、翻訳後修飾（ＰＴＭ）と呼ばれる化学修飾を導入することがある。抗体の場合、いくつかのＰＴＭの部位は、非常に保存的であり、例えば、ヒトのＩｇＧ１抗体の定常ドメインの２９７位（ＥＵ番号）における保存的アミノ酸アスパラギンＡｓｎは、通常、グリコシル化修飾が発生して糖鎖を形成し、該糖鎖構造は、抗体構造及び関連エフェクター機能にとってかなり重要である。しかし、抗体の可変ドメイン、特に抗原結合領域（例えば、ＣＤＲ）にＰＴＭが存在すれば、これらのＰＴＭの存在は、抗原の結合に大きな影響を与え、抗体の物理化学的性質にも変化を与え得る。例えば、グリコシル化、脱アミド、異性化、酸化などは、いずれも抗体分子の不安定性又は不均質性を増加させることにより、抗体開発の難易度及びリスクを増加させる可能性がある。したがって、いくつかの潜在的なＰＴＭを回避することは、治療用抗体の開発に非常に重要である。経験の蓄積により、いくつかのＰＴＭは、アミノ酸配列の組成、特に隣接するアミノ酸の組成の「パターン」と高度に相関していることが発見され、これにより、タンパク質の一次アミノ酸配列から潜在的なＰＴＭを予測することができる。例えば、Ｎ－ｘ－Ｓ／Ｔ（１位がアスパラギンであり、２位が非プロリン以外の任意のアミノ酸であり、３位がセリン又はスレオニンである）の配列パターンからＮ－連結グリコシル化部位が予測される。ＰＴＭを引き起こすアミノ酸配列パターンは、生殖系列遺伝子配列、例えば、ＦＲ３領域にグリコシル化パターンＮＳＴが自然に存在するヒト生殖系列遺伝子断片ＩＧＨＶ３－３３に由来する可能性があり、体細胞高頻度突然変異に由来する可能性もある。表２－２には、実施例１の抗体の可変ドメインＶＨ及びＶＬの予測されたＰＴＭが列挙されている。具体的には、ＮＳＳ又はＮＬＴはグリコシル化部位である可能性があり、ＮＳ又はＮＴ又はＮＮは脱アミド部位である可能性がある。
アミノ酸突然変異によってＰＴＭのアミノ酸配列パターンを破壊することにより、特定のＰＴＭの形成を低減又は除去することができる。突然変異の設計方法は、抗体配列及びＰＴＭ配列パターンによって異なる。１つの方法として、「ホットスポット」アミノ酸（例えば、ＮＳパターンにおけるＮ又はＳ）を物理化学的性質が似ているアミノ酸に置き換え（例えば、ＮからＱへの突然変異）、又は飽和突然変異の方法でそれを他のいずれかのアミノ酸に置換する。ＰＴＭ配列パターンが体細胞高頻度突然変異に由来するが、生殖系列遺伝子配列に存在しない場合、別の方法として、該配列パターンを対応する生殖系列遺伝子配列に置き換えてもよい。実際の操作では、同一のＰＴＭ配列パターンに対して様々な突然変異設計方法を用い得る。
表２－３には、実施例１からの、潜在的なＰＴＭ部位を有する抗体の配列に対してアミノ酸突然変異を行って得られた新たな抗体分子（ＰＴＭ変異体と呼ばれる）が列挙されている。表２－４には、本実施例におけるこれらのＰＴＭ変異体の軽、重鎖可変ドメインアミノ酸配列、軽鎖全長アミノ酸配列、重鎖（ヒトＩｇＧ１）全長アミノ酸配列、及びＣｈｏｔｈｉａ定義規則に従って定義されたＣＤＲのアミノ酸配列が列挙されている。設計された全てのＰＴＭ変異体は、実施例１．４に記載の方法に従って、精製された組換え抗体を得て、後続の機能実験においてさらに検証された。
実施例３． 予備拡張されたヒトＴｒｅｇ細胞及び予備活性化されたヒトＴｅｆｆ細胞の製造
予備拡張されたヒトＴｒｅｇ細胞の製造において、新鮮なヒトＰＢＭＣからＴｒｅｇ細胞（ＥａｓｙＳｅｐＴＭ Ｈｕｍａｎ ＣＤ４＋ＣＤ１２７ｌｏｗＣＤ２５＋ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ，＃１８０６３）を分離し、Ｔｒｅｇ拡張ビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ Ｔｒｅｇ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ Ｋｉｔ，ｈｕｍａｎ ＃１３０－０９５－３４５）及びＩＬ－２（ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、２００－０２）を加え、３７℃、５％ ＣＯ２含有のインキュベーターに入れて１０日間インキュベートすれば、予備拡張されたヒトＴｒｅｇ細胞になった。
予備活性化されたＴｅｆｆの製造方法において、新鮮なヒトＰＢＭＣからＴ細胞（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ，＃１３００９６５３５）を分離し、ＯＫＴ３（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，＃１６－００３７－８５、２μｇ／ｍｌ）によりコーティングされる６ウェルプレートに加え、密度が１×１０６細胞／ｍｌであり、次にａｎｔｉ－ＣＤ２８抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，＃１６－０２８９－８５、１μｇ／ｍｌ）を加えた。細胞インキュベーターに入れて７２時間培養した後に、ＩＬ－２（ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ ２００－０２、１０ｎｇ／ｍｌ）を加えて７２時間培養すれば、予備活性化されたＴｅｆｆ細胞になった。
実施例４． 抗ＣＤ２５抗体のＣＤ２５への結合能力のＦＡＣＳによる検出
本実施例は、抗ヒトＣＤ２５のＨ２Ｌ２モノクローナル抗体のヒト／カニクイザルＣＤ２５へのインビトロ結合活性を研究するためのものである。ヒトＣＤ２５を過剰発現するＣＨＯＫ１細胞株（ＣＨＯＫ１－ｈｕＣＤ２５、和金白医薬（Ｈａｒｂｏｕｒ））、カニクイザルＣＤ２５を過剰発現するＨＥＫ２９３細胞株（ＨＥＫ２９３－ｃｙｎｏＣＤ２５、和金白医薬（Ｈａｒｂｏｕｒ））及びヒトＣＤ２５を高発現する細胞株ＳＵ－ＤＨＬ－１（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－２９５５）、Ｋａｒｐａｓ２９９（南京科佰ＣＢＰ６０２７１）、予備拡張されたヒトＴｒｅｇ細胞、予備活性化されたヒトＴｅｆｆ細胞を用いて、細胞レベルでの抗体結合実験を行った。簡単に言えば、ＣＨＯＫ１－ｈｕＣＤ２５細胞、ＨＥＫ２９３－ｃｙｎｏＣＤ２５細胞を消化し、ＳＵ－ＤＨＬ－１細胞、Ｋａｒｐａｓ２９９細胞、Ｔｒｅｇ及びＴｅｆｆ細胞を収集し、２％ＢＳＡ含有のＰＢＳで再懸濁させた。細胞密度をそれぞれ１×１０６細胞／ｍＬに調整した。１００μＬ細胞／ウェルで９６ウェルのＶ底板（Ｃｏｒｎｉｎｇ，＃３８９４）に接種し、その後、最終濃度の２倍である、５倍濃度で段階希釈された検出対象抗体及び陽性対照抗体ＲＧ６２９２を１００μＬ／ウェルで加えた。細胞を４℃で、遮光して１時間インキュベートした。その後、予冷された２％ＢＳＡ含有ＰＢＳを１００μＬ／ウェルで加え、細胞を２回すすぎ、５００ｇ、４℃で５分間遠心分離し、上清を捨てた。次に、蛍光二次抗体（Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８－ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｇｏａｔ Ａｎｔｉ－Ｈｕｍａｎ ＩｇＧ，Ｆｃγ Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ，Ｊａｃｋｓｏｎ，＃１０９－５４５－０９８，１：１０００希釈）を１００μＬ／ウェルで加え、４℃で、遮光して１時間インキュベートした。１００μＬ／ウェルの予冷された２％ＢＳＡ含有ＰＢＳで細胞を２回洗浄し、５００ｇ、４℃で５分間遠心分離し、上清を捨てた。最後に、２００μＬ／ウェルの予冷された２％ＢＳＡ含有ＰＢＳで細胞を再懸濁させ、ＢＤ ＣａｎｔｏＩＩフローサイトメトリーを用いて蛍光発光シグナル値を読み取った。
細胞表面のヒトＣＤ２５、カニクイザルＣＤ２５、並びに腫瘍細胞ＳＵ－ＤＨＬ－１及びＫａｒｐａｓ表面のＣＤ２５への抗体の結合のまとめは、以下（表４－１、表４－２、表４－３、表４－４、表４－５、表４－６、表４－７、表４－８、表４－９）のとおりである。
ヒトＣＤ２５を過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞への抗体の結合の結果は図１（図１のＡ及び図１のＢ）、表４－１及び表４－２に示すとおりであり、ＰＲ００５４３３、ＰＲ００５４３５、ＰＲ００５４３６及びＰＲ００５４９７は、対照抗体に比べて、より高い結合活性を有する。サルＣＤ２５を過剰発現するＨＥＫ２９３細胞への抗体の結合の結果は図２（図２のＡ～図２のＦ）に示すとおりであり、表４－１、表４－２及び表４－３を参照して、初期抗体ＰＲ００５４３３、ＰＲ００５４３５、ＰＲ００５４３６、ＰＲ００５４９７、ＰＲ００６１２２、ＰＲ００６９２７、ＰＲ００６９３０、ＰＲ００６９３１及びＰＲ００６９３２は、カニクイザルＣＤ２５との良好な交差結合活性を有することが分かり、表４－５及び表４－７を参照して、ＰＴＭ突然変異によりＰＲ００５４３６から得られた突然変異体ＰＲ００６７６９、ＰＲ００６７７１及びＰＲ００８１９７は、カニクイザルＣＤ２５との良好な交差結合活性を有することが分かり、表４－６を参照して、ＰＴＭ突然変異によりＰＲ００６９３１から得られた突然変異体ＰＲ００８０１４、及びＰＲ００８０１６は、カニクイザルＣＤ２５との良好な交差結合活性を有することが分かった。
ヒトＣＤ２５を内因的に発現する腫瘍細胞株ＳＵ－ＤＨＬ－１への抗体の結合の結果は、図３（図３のＡ～図３のＩ）に示すとおりであり、表４－１、表４－２、表４－３、表４－４及び表４－９を参照して、初期抗体ＰＲ００５４３３、ＰＲ００５４３６、ＰＲ００５４９７、ＰＲ００６１１０、ＰＲ００６１２２、ＰＲ００６９２７、ＰＲ００６９２８、ＰＲ００６９３０、ＰＲ００６９３１、ＰＲ００６９３２、ＰＲ００７１８１は、ＳＵ－ＤＨＬ－１に対して高い結合活性を有することが分かり、表４－１及び表４－４を参照して、ＰＲ００５４３５及びＰＲ００６９８４は結合活性が弱いことが分かった。表４－５及び表４－７を参照して、ＰＴＭ突然変異によりＰＲ００５４３６から得られた突然変異体ＰＲ００６７６９、ＰＲ００６７７１及びＰＲ００８１９７は、ＳＵ－ＤＨＬ－１に対して高い結合活性を有することが分かり、表４－６及び表４－８を参照して、ＰＴＭ突然変異によりＰＲ００６９３１から得られた突然変異体ＰＲ００８０１４、ＰＲ００８０１５及びＰＲ００８０１６は、ＳＵ－ＤＨＬ－１に対して高い結合活性を有することが分かった。
ヒトＣＤ２５を内因的に発現する腫瘍細胞株Ｋａｒｐａｓ２９９への抗体の結合の結果は、図４（図４のＡ～図４のＩ）に示すとおりであり、表４－１、表４－２、表４－３、表４－４及び表４－９を参照して、初期抗体ＰＲ００５４３３、ＰＲ００５４９７、ＰＲ００６１１０、ＰＲ００６１２２、ＰＲ００６９２７、ＰＲ００６９２８、ＰＲ００６９３０、ＰＲ００６９３２、ＰＲ００７１８１は、Ｋａｒｐａｓ２９９に対して高い結合活性を有することが分かり、表４－１、表４－３及び表４－４を参照して、ＰＲ００５４３５、ＰＲ００５４３６、ＰＲ００６９３１及びＰＲ００６９８４は、結合活性が弱いことが分かった。表４－５を参照して、ＰＴＭ突然変異によりＰＲ００５４３６から得られた突然変異体ＰＲ００６７６９、ＰＲ００６７７１は、Ｋａｒｐａｓ２９９に対する結合活性が対照抗体ＲＧ６２９２の結合活性に相当することが分かり、表４－７によれば、ＰＲ００８１９７結合活性は、比較的に弱いことが分かった。表４－６及び４－８を参照して、ＰＴＭ突然変異によりＰＲ００６９３１から得られた突然変異体ＰＲ００８０１５は、Ｋａｒｐａｓ２９９に対して高い結合活性を有し、ＰＲ００８０１４及びＰＲ００８０１６は、結合活性が弱いことが分かった。
ヒトＴｒｅｇ細胞及びＴｅｆｆ細胞への抗体の結合の結果は、図５（図５のＡ～図５のＦ）に示すとおりであり、ＰＲ００５４３６、ＰＲ００８０１４、ＰＲ００８０１６、ＰＲ００８１９７、ＰＲ００６９２７は、ヒトＴｒｅｇに結合することができ、ヒトＴｅｆｆに対する結合強度が弱かった。
実施例５． ヒトインターロイキン－２とＣＤ２５との結合に対する抗ＣＤ２５抗体の遮断作用のＦＡＣＳによる検出
本例は、ヒトインターロイキン－２とＣＤ２５との結合に対する抗ＣＤ２５抗体の遮断作用を研究するためのものである。ヒトＣＤ２５を過剰発現するＣＨＯＫ１細胞株（ＣＨＯＫ１－ｈｕＣＤ２５、和金白医薬（Ｈａｒｂｏｕｒ））又はヒトＣＤ２５を高発現する細胞株ＳＵ－ＤＨＬ－１（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－２９５５）及びビオチン標識されたヒトインターロイキン－２（Ａｃｒｏ、ＩＬ２－Ｈ８２Ｆ３）を用いて、ＦＡＣＳ方法により抗体の遮断作用を検出した。簡単に言えば、ＣＨＯＫ１－ｈｕＣＤ２５細胞を消化するか又はＳＵ－ＤＨＬ－１（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－２９５５）細胞を収集し、２％ＢＳＡ含有ＰＢＳで再懸濁させた。細胞密度をそれぞれ１×１０６細胞／ｍＬに調整した。９０μＬの細胞／ウェルで９６ウェルのＶ底板（Ｃｏｒｎｉｎｇ，＃３８９４）に接種し、その後、最終濃度の２倍である、５倍濃度で段階希釈された検出対象抗体及び対照抗体ＲＧ６２９２又はＰＲ００３６８９を１００μＬ／ウェルで加え、次にビオチン標識を含有する、ヒトインターロイキン－２濃度が１０μｇ／ｍｌであるＰＢＳを１０μＬ／ウェルで加えた。細胞を４℃で、遮光して１時間インキュベートした。その後、予冷された２％ＢＳＡ含有ＰＢＳを１００μＬ／ウェルで加え、細胞を２回すすぎ、５００ｇ、４℃で５分間遠心分離し、上清を捨てた。次に蛍光二次抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＃１２－４３１７－８７、１：２００希釈）を１００μＬ／ウェルで加え、４℃で、遮光して１時間インキュベートした。１００μＬ／ウェルの予冷された２％ＢＳＡ含有ＰＢＳで細胞を２回洗浄し、５００ｇ、４℃で５分間遠心分離し、上清を捨てた。最後に、２００μＬ／ウェルの予冷された２％ＢＳＡ含有ＰＢＳで細胞を再懸濁させ、ＢＤ ＣａｎｔｏＩＩフローサイトメトリーを用いて蛍光発光シグナル値を読み取った
ヒトインターロイキン－２とＣＨＯＫ１－ｈｕＣＤ２５細胞との結合に対する抗体の遮断作用のＦＡＣＳ方法による検出の結果は図６（図６のＡ～図６のＣ）に示すとおりであり、ＰＲ００５４３３、ＰＲ００５４３５、ＰＲ００５４３６、ＰＲ００５４９７及びＰＲ００６１２２は、インターロイキン－２とＣＨＯＫ１－ｈｕＣＤ２５細胞表面ＣＤ２５との結合を遮断することができなかった。
ヒトインターロイキン－２とＳＵ－ＤＨＬ－１（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－２９５５）細胞との結合に対する抗体の遮断作用のＦＡＣＳ方法による検出の結果は図７（図７のＡ～図７のＤ）に示すとおりであり、初期抗体ＰＲ００６９２７、ＰＲ００６９３０、ＰＲ００６９３１及びＰＲ００６９３２は、インターロイキン－２とＳＵ－ＤＨＬ－１細胞表面ＣＤ２５との結合を遮断することができず、ＰＴＭ突然変異によりＰＲ００５４３６から得られた突然変異体ＰＲ００６７６９、ＰＲ００６７７１及びＰＲ００８１９７は、インターロイキン－２とＳＵ－ＤＨＬ－１細胞表面ＣＤ２５との結合を遮断することができず、ＰＴＭ突然変異によりＰＲ００６９３１から得られた突然変異体ＰＲ００８０１４及びＰＲ００８０１６は、インターロイキン－２とＳＵ－ＤＨＬ－１細胞表面ＣＤ２５との結合を遮断することができなかった。
実施例６． Ｔｅｆｆにおけるヒトインターロイキン－２により誘導される下流シグナル分子ＳＴＡＴ５のリン酸化レベルに対する抗ＣＤ２５抗体の影響のＡｌｐｈａＬｉｓａ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｉｍｅｒ、＃ＡＬＳＵ－ＰＳＴ５－Ｂ５００）による検出
予備活性化されたＴｅｆｆ細胞を、ＩＬ－２を含有しない培地で４時間培養した後に、細胞を収集し、細胞密度を２．５×１０７細胞／ｍｌに調整し、４μＬ／ウェルで３８４ウェルプレートに接種した。次に最終濃度の４倍である抗体及び対照抗体ＰＲ００３６８９を２μＬ／ウェルで加え、インキュベーターで１時間インキュベートした。そして、最終濃度の５倍であるＩＬ－２を２μＬ／ウェルで加え、インキュベーターで１０分間インキュベートした。５×溶解液を２μＬ／ウェルで直ちに加え、室温で１５分間インキュベートした。そしてＡｃｃｅｐｔｏｒ混合液を５μＬ／ウェルで加え、室温で１時間インキュベートし、次にＤｏｎｏｒ混合液を５μＬ／ウェルで加え、室温で１時間インキュベートした。ＰｅｒｋｉｎＥｌｉｍｅｒ Ｅｎｖｉｓｉｏｎを用いて、シグナル値を読み取った。
ヒトインターロイキン－２シグナル経路下流タンパク質ＳＴＡＴ５のリン酸化レベルに対する抗体の影響のＡｌｐｈａＬｉｓａ方法による検出の結果は図８に示すとおりであり、ＰＲ００６１２２は、Ｔｅｆｆにおけるヒトインターロイキン－２シグナル経路下流タンパク質ＳＴＡＴ５のリン酸化レベルに対して阻害作用がなかった。
実施例７． Ｔｅｆｆにおけるヒトインターロイキン－２により誘導される下流シグナル分子ＳＴＡＴ５のリン酸化レベルに対する抗ＣＤ２５抗体の影響のＦＡＣＳによる検出
予備活性化されたＴｅｆｆ細胞を、ＩＬ－２を含有しない培地で４時間培養した後に、細胞を収集し、細胞密度を２×１０６細胞／ｍＬに調整した。５０μＬ細胞／ウェルで９６ウェルのＶ底板（Ｃｏｒｎｉｎｇ，＃３８９４）に接種し、その後、最終濃度の２倍である、５倍濃度で段階希釈された検出対象抗体及び対照抗体ＰＲ００３６８９又はＲＧ６２９２を５０μＬ／ウェルで加え、インキュベーターで１時間インキュベートした。次に、１μＬ／ウェル１μｇ／ｍｌのＩＬ－２を加え、インキュベーターで１０分間インキュベートした。固定液（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、＃４２０８０１）を１００μＬ／ウェルで直ちに加え、３７℃で１５分間インキュベートした後に、５００ｇ、４℃で５分間遠心分離し、上清を捨てた。予冷された２％ＢＳＡ含有ＰＢＳを１００μＬ／ウェルで加え、細胞をすすぎ、次に５００ｇ、４℃で５分間遠心分離し、上清を捨てた。そして膜貫通緩衝液を１００μＬ／ウェルで加え、細胞（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ 、＃４２５４０１）を再懸濁させ、－２０℃の冷蔵庫に入れて一晩インキュベートした。翌日、１０００ｇ取り出し、４℃で５分間遠心分離し、上清を捨て、予冷された２％ＢＳＡ含有ＰＢＳを１００μＬ／ウェルで加え、細胞を２回すすぎ、次に５００ｇ、４℃で５分間遠心分離し、上清を捨てた。抗リン酸化ＳＴＡＴ５抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、＃９３６９０４）を１００μＬ／ウェルで加え、４℃の冷蔵庫で１時間インキュベートした。予冷された２％ＢＳＡ含有ＰＢＳを１００μＬ／ウェルで加え、細胞を２回すすぎ、次に５００ｇ、４℃で５分間遠心分離し、上清を捨てた。最後に、２００μＬ／ウェルの予冷された２％ＢＳＡ含有ＰＢＳで細胞を再懸濁させ、ＢＤ ＣａｎｔｏＩＩフローサイトメトリーを用いて蛍光発光シグナル値を読み取った。
結果は図９に示すとおりであり、ＰＲ００８０１４、ＰＲ００８０１６、ＰＲ００８１９７及びＰＲ００６９２７は、Ｔｅｆｆにおけるヒトインターロイキン－２シグナル経路下流タンパク質ＳＴＡＴ５のリン酸化レベルに対して阻害作用がなかった。
実施例８． 抗ＣＤ２５抗体の腫瘍細胞株ＳＵ－ＤＨＬ－１に対するＡＤＣＣ作用のレポーター遺伝子細胞株による検出
ＳＵ－ＤＨＬ－１（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－２９５５）細胞を収集し、１．２×１０６細胞／ｍＬに調整し、２５μＬ／ウェルで９６ウェルプレート（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、６００５２２５）に接種した。遺伝子合成により、ヒトＣＤ１６ａ（そのＧｅｎｅｂａｎｋ番号がＮＭ０００５６９．８である）及びヒトＮＦＡＴ（そのＧｅｎｅｂａｎｋ番号がＮＭ＿１４５９１２．８である）をコードするｃＤＮＡを得て、発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１にクローニングし、そして発現ベクターをＪｕｒｋａｔ細胞にトランスフェクトし、Ｊｕｒｋａｔ／ＦＣγＲＩＩＩ－ＮＦＡＴ安定細胞株を構築した。
Ｊｕｒｋａｔ／ＦＣγＲＩＩＩ－ＮＦＡＴ細胞（和金白医薬（Ｈａｒｂｏｕｒ））を収集し、１．２×１０６細胞／ｍＬに調整し、２５μＬ／ウェルで同じ９６ウェルプレートに接種した。そして、最終濃度の２倍である抗体及び対照抗体ＲＧ６２９２を５０μＬ／ウェルで加え、３７℃、５％ ＣＯ２含有のインキュベーターに入れて、６時間インキュベートした。Ｏｎｅ－Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ、＃Ｅ６１２０）を６０μＬ／ウェルで加え、室温で遮光して１０分間放置した。ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｅｎｖｉｓｉｏｎを用いて、シグナル値を読み取った。
抗体のＳＵ－ＤＨＬ－１に対するＡＤＣＣの結果は、以下（表８－１、表８－２）に示すとおりである。
結果は図１０（図１０のＡ及び図１０のＢ）に示すとおりであり、ＰＲ００６９２７ＡＦ、ＰＲ００６９３１ＡＦ、ＰＲ００６７６９ＡＦ、ＰＲ００６７７１ＡＦは、ＳＵ－ＤＨＬ－１に対して高いＡＤＣＣ作用を有する。
実施例９． 抗ＣＤ２５抗体の予備拡張されたヒトＴｒｅｇ細胞及び予備活性化されたヒトＴｅｆｆ細胞に対するＡＤＣＣ作用のレポーター遺伝子細胞株による検出
予備拡張されたヒトＴｒｅｇ細胞及び予備活性化されたヒトＴｅｆｆ細胞を収集し、１．２×１０６細胞／ｍＬに調整し、２５μＬ／ウェルで９６ウェルプレート（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、６００５２２５）に接種した。Ｊｕｒｋａｔ／ＦＣγＲＩＩＩ－ＮＦＡＴ細胞（和金白医薬（Ｈａｒｂｏｕｒ））を収集し、１．２×１０６細胞／ｍＬに調整し、２５μＬ／ウェルで同じ９６ウェルプレートに接種した。そして、最終濃度の２倍である抗体を５０μＬ／ウェルで加え、３７℃、５％ ＣＯ２含有のインキュベーターに入れて、６時間インキュベートした。Ｏｎｅ－Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ、＃Ｅ６１２０）を６０μＬ／ウェルで加え、室温で遮光して１０分間放置した。ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｅｎｖｉｓｉｏｎを用いて、シグナル値を読み取った。
抗体のＴｒｅｇ及びＴｅｆｆに対するＡＤＣＣ結果は以下（表９－１、表９－２、表９－３）に示すとおりである。
結果は、図１１（図１１のＡ～図１１のＣ）及び図１２（図１２のＡ～図１２のＣ）に示すとおりであり、ＰＲ００５４３３、ＰＲ００５４３６、ＰＲ００５４９７及びＰＲ００６１２２は、ヒトＴｒｅｇ細胞に対して高いＡＤＣＣ作用を有するが、ヒトＴｅｆｆに対して明らかな作用がなかった。ＰＲ００５４３５のヒトＴｒｅｇに対するＡＤＣＣ作用は弱かった。
実施例１０． 抗体内在化実験
本例は、抗体の内在化作用を研究するためのものである。ヒトＣＤ２５を高発現する腫瘍細胞株ＳＵ－ＤＨＬ－１（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－２９５５）及びＫａｒｐａｓ２９９（南京科佰ＣＢＰ６０２７１）を用いて、ＦＡＣＳ方法により抗体の内在化作用を検出した。実験方法は以下のとおりであり、ＳＵ－ＤＨＬ－１細胞又はＫａｒｐａｓ２９９細胞を収集し、２％ＢＳＡ含有のＰＢＳで再懸濁させた。細胞密度をそれぞれ１×１０６細胞／ｍＬに調整した。１００μＬ細胞／ウェルで９６ウェルのＶ底板（Ｃｏｒｎｉｎｇ，＃３８９４）に接種し、その後、最終濃度の２倍である、５倍濃度で段階希釈された検出対象抗体及び対照抗体ＰＲ００７７２２を１００μＬ／ウェルで加えた。細胞を４℃で、遮光して１時間インキュベートした。その後、予冷された２％ＢＳＡ含有ＰＢＳを１００μＬ／ウェルで加え、細胞を２回すすぎ、５００ｇ、４℃で５分間遠心分離し、上清を捨てた。１００μＬの２％ＢＳＡのＰＢＳで細胞を再懸濁させ、３７℃、５％ ＣＯ２含有のインキュベーターに入れて、４時間インキュベートした。その後、予冷された２％ＢＳＡ含有ＰＢＳを１００μＬ／ウェルで加え、細胞を２回すすぎ、５００ｇ、４℃で５分間遠心分離し、上清を捨てた。次に、蛍光二次抗体（Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８－ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｇｏａｔ Ａｎｔｉ－Ｈｕｍａｎ ＩｇＧ、Ｆｃγ Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ、Ｊａｃｋｓｏｎ、＃１０９－５４５－０９８、１：１０００希釈）を１００μＬ／ウェルで加え、４℃で、遮光して１時間インキュベートした。１００μＬ／ウェルの予冷された２％ＢＳＡ含有ＰＢＳで細胞を２回洗浄し、５００ｇ、４℃で５分間遠心分離し、上清を捨てた。最後に、２００μＬ／ウェルの予冷された２％ＢＳＡ含有ＰＢＳで細胞を再懸濁させ、ＢＤ ＣａｎｔｏＩＩフローサイトメトリーを用いて蛍光発光シグナル値を読み取った。
結果は図１３及び図１４に示すとおりであり、ヒト腫瘍細胞株Ｋａｒｐａｓ２９９は、ＰＲ００５４３３、ＰＲ００５４９７、ＰＲ００６１２２、ＰＲ００６９３０、ＰＲ００６９３２に対して明らかなエンドサイトーシス作用を有する。

Claims (22)

  1. ＣＤ２５を標的とする抗体もしくはその抗原結合断片であって、前記抗体は、軽鎖可変領域と重鎖可変領域とを含み、ここで、前記抗体は、以下の群から選択され、
    前記軽鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９６、１１１及び１３３に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、及び、前記重鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０、４４及び７４に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、又は、
    前記軽鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０４、１１１、１２７に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、及び、前記重鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２２、４６、７６に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、又は、
    前記軽鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９４、１１０、１３４に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、及び、前記重鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２３、４８、７８に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、又は、
    前記軽鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９７、１１３及び１２９に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、及び、前記重鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６、４０及び７０に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、又は、
    前記軽鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９４、１１６及び１３５に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、及び、前記重鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２３、４７及び７７に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、又は、
    前記軽鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９５、１１１、１２７に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、及び、前記重鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １４、３８、６８に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、又は、
    前記軽鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９８、１１４、１３０に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、及び、前記重鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７、４１、７１に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、又は、
    前記軽鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９９、１１５、１３１に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、及び、前記重鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８、４２、７２に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、又は、
    前記軽鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １００、１１３、１３２に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、及び、前記重鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １４、４３、７３に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、又は、
    前記軽鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０３、１１０、１３４に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、及び、前記重鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１、４５、７５に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、又は、
    前記軽鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０５、１１１、１３６に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、及び、前記重鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８、４２、８０に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、又は、
    前記軽鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０１、１１３、１２９に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、及び、前記重鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９、４０、７０に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、又は、
    前記軽鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０１、１１３、１３９に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、及び、前記重鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９、４０、７０に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、又は、
    前記軽鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０２、１１３、１２９に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、及び、前記重鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９、４０、７０に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、又は、
    前記軽鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９４、１１６、１３７に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、及び、前記重鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２３、５０、７７に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、又は、
    前記軽鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９４、１１６、１３８に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、及び、前記重鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２３、５１、７７に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、又は、
    前記軽鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９４、１１６、１３８に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、及び、前記重鎖可変領域はアミノ酸配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２３、５０、７７に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む、ことを特徴とするＣＤ２５を標的とする抗体もしくはその抗原結合断片。
  2. 前記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７１に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７１と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するＶＬを含み、前記重鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５３に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５３と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するＶＨを含み、又は、
    前記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７３に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７３と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するＶＬを含み、前記重鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５５ に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５５と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するＶＨを含み、又は、
    前記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７５に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７５と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するＶＬを含み、前記重鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５７に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５７と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するＶＨ を含み、又は、
    前記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６５に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６５と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するＶＬを含み、前記重鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １４８に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １４８と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するＶＨを含み、又は、
    前記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７４に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７４と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するＶＬを含み、前記重鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５６に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５６と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するＶＨを含み、又は、
    前記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６３に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６３と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するＶＬを含み、前記重鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １４６に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １４６と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するＶＨを含み、又は、
    前記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６６に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６６と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するＶＬを含み、前記重鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １４９に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １４９と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するＶＨを含み、又は、
    前記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６７に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６７と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するＶＬを含み、前記重鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５０に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５０と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するＶＨを含み、又は、
    前記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６８に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６８と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するＶＬを含み、前記重鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５１に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５１と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するＶＨを含み、又は、
    前記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７２に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７２と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するＶＬを含み、前記重鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５４に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５４と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するＶＨを含み、又は、
    前記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７７に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７７と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するＶＬを含み、前記重鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５９に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５９と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するＶＨを含み、又は、
    前記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６９に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６９と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列からなるＶＬを含み、前記重鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５２に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５２と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列からなるＶＨを含み、又は、
    前記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８０に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８０と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列からなるＶＬを含み、前記重鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５２に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５２と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列からなるＶＨを含み、又は、
    前記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７０に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７０と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列からなるＶＬを含み、前記重鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５２に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５２と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列からなるＶＨを含み、又は、
    前記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７８に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７８と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列からなるＶＬを含み、前記重鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６０に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６０と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列からなるＶＨを含み、又は、
    前記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７９に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７９と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列からなるＶＬを含み、前記重鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６１に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６１と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列からなるＶＨを含み、又は、
    前記軽鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７９に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７９と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列からなるＶＬを含み、前記重鎖可変領域は、アミノ酸配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６０に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６０と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列からなるＶＨを含む、及び／又は、
    前記抗体は、以下のキメラ抗体、及び、完全ヒト抗体の群から選択される、請求項１に記載のＣＤ２５を標的とする抗体もしくはその抗原結合断片。
  3. 前記抗体もしくはその抗原結合断片の構造は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ＩｇＧ、又は前記抗体もしくはその抗原結合断片を含む二重特異性抗体もしくは多重特異性抗体、又は上記抗体から製造されたモノクローナル抗体である、請求項２に記載のＣＤ２５を標的とする抗体もしくはその抗原結合断片。
  4. 前記抗体もしくはその抗原結合断片は、軽鎖と重鎖とを含むＩｇＧ構造を有し、
    前記軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０７に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０７と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８９に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８９と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は、
    前記軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０９に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０９と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９１に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９１と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は、
    前記軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１１に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１１と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９３に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９３と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は、
    前記軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０１に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０１と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８４に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８４と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は、
    前記軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１０に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１０と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９２に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９２と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は、
    前記軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９９に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９９と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８２に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８２と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は、
    前記軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０２に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０２と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８５に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８５と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は、
    前記軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０３に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０３と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８６に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８６と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は、
    前記軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０４に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０４と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８７に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８７と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は、
    前記軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０８に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０８と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９０に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９０と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は、
    前記軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１３に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１３と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９５に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９５と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は、
    前記軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０５に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０５と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８８に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８８と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は、
    前記軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１６に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１６と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８８に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８８と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は、
    前記軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０６に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０６と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８８に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８８と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は、
    前記軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１４に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１４と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９６に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９６と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は、
    前記軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１５に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１５と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９７に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９７と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は、
    前記軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１５に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１５と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９６に示されるか又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９６と少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む、ことを特徴とする請求項１に記載のＣＤ２５を標的とする抗体もしくはその抗原結合断片。
  5. 請求項１又は２に記載の抗体もしくはその抗原結合断片を含む、キメラ抗原受容体。
  6. 請求項１又は２に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、又は請求項３に記載のキメラ抗原受容体をコードする、単離された核酸。
  7. 請求項６に記載の単離された核酸を含む、組換え発現ベクター。
  8. 前記組換え発現ベクターは、プラスミド、コスミド、ファージ又はウイルスベクターであり、前記ウイルスベクターは、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター又はアデノ随伴ウイルスベクターである、請求項７に記載の組換え発現ベクター。
  9. 宿主細胞に請求項７に記載の組換え発現ベクターを含む、形質転換体。
  10. 前記宿主細胞は、酵母細胞、哺乳類細胞又は抗体もしくはその抗原結合断片の製造に適した他の細胞から選択され、ここで、前記哺乳類細胞は、２９３細胞又はＣＨＯ細胞である、請求項９に記載の形質転換体。
  11. 請求項５に記載のキメラ抗原受容体を含む、免疫細胞。
  12. 前記免疫細胞は、Ｔ細胞又はＮＫ細胞である、請求項１１に記載の免疫細胞。
  13. ＣＤ２５を標的とする抗体もしくはその抗原結合断片の製造方法であって、請求項９に記載の形質転換体を培養し、培養物からＣＤ２５を標的とする抗体もしくはその抗原結合断片を得ることを含む、方法。
  14. 細胞傷害性薬剤と、請求項１又は２に記載のＣＤ２５を標的とする抗体もしくはその抗原結合断片とを含む、抗体薬物コンジュゲート。
  15. 医薬組成物であって、請求項１又は２に記載のＣＤ２５を標的とする抗体もしくはその抗原結合断片、請求項６に記載の単離された核酸、請求項７に記載の組換え発現ベクター、請求項９に記載の形質転換体、請求項１１に記載の免疫細胞及び／又は請求項１４に記載の抗体薬物コンジュゲート、及び薬学的に許容可能なキャリアを含む、医薬組成物。
  16. 前記医薬組成物は、ホルモン製剤、標的化小分子製剤、プロテアソーム阻害剤、造影剤、診断剤、化学療法剤、腫瘍溶解薬、細胞傷害性薬剤、サイトカイン、共刺激分子の活性化剤、阻害性分子の阻害剤及びワクチンからなる群における一つ又は複数をさらに含む、請求項１５に記載の医薬組成物。
  17. 腫瘍を診断、予防及び／又は治療において使用するための請求項１又は２に記載のＣＤ２５を標的とする抗体もしくはその抗原結合断片、請求項５に記載のキメラ抗原受容体、請求項６に記載の単離された核酸、請求項７に記載の組換え発現ベクター、請求項９に記載の形質転換体、請求項１１に記載の免疫細胞、請求項１４に記載の抗体薬物コンジュゲート及び／又は請求項１５に記載の医薬組成物。
  18. 前記腫瘍は癌である、請求項１７に記載の前記使用のためのＣＤ２５を標的とする抗体もしくはその抗原結合断片、キメラ抗原受容体、単離された核酸、組換え発現ベクター、形質転換体、免疫細胞、抗体薬物コンジュゲート及び／又は医薬組成物。
  19. キットであって、請求項１又は２に記載のＣＤ２５を標的とする抗体もしくはその抗原結合断片、請求項５に記載のキメラ抗原受容体、請求項６に記載の単離された核酸、請求項７に記載の組換え発現ベクター、請求項９に記載の形質転換体、請求項１１に記載の免疫細胞、又は請求項１４に記載の抗体薬物コンジュゲート又は請求項１５に記載の医薬組成物を含み、
    前記キットは、（ｉ）前記抗体もしくはその抗原結合断片又は前記キメラ抗原受容体又は前記免疫細胞又は前記抗体薬物コンジュゲート又は前記医薬組成物を投与するための装置、及び／又は（ｉｉ）取り扱い説明書をさらに含む、キット。
  20. キットＡとキットＢとを含むパーツキットであって、
    前記キットＡは、請求項１又は２に記載のＣＤ２５を標的とする抗体もしくはその抗原結合断片、請求項５に記載のキメラ抗原受容体、請求項６に記載の単離された核酸、請求項７に記載の組換え発現ベクター、請求項９に記載の形質転換体、請求項１１に記載の免疫細胞、請求項１４に記載の抗体薬物コンジュゲート及び／又は請求項１５に記載の医薬組成物を含有し、
    前記キットＢは、他の抗腫瘍抗体又は前記他の抗腫瘍抗体を含む医薬組成物、及び／又はホルモン製剤、標的化小分子製剤、プロテアソーム阻害剤、造影剤、診断剤、化学療法剤、腫瘍溶解薬、細胞傷害性薬剤、サイトカイン、共刺激分子の活性化剤、阻害性分子の阻害剤及びワクチンからなる群における一つ又は複数を含有する、パーツキット。
  21. ＣＤ２５を検出する方法であって、請求項１又は２に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、請求項５に記載のキメラ抗原受容体、請求項１１に記載の免疫細胞、請求項１４に記載の抗体薬物コンジュゲート及び／又は請求項１５に記載の医薬組成物を使用することを含み、前記検出は、診断及び／又は治療を目的としない、方法。
  22. 被験体の腫瘍浸潤性Ｔｒｅｇの細胞数を減少させるための請求項１又は２に記載のＣＤ２５を標的とする抗体もしくはその抗原結合断片、請求項５に記載のキメラ抗原受容体、請求項６に記載の単離された核酸、請求項７に記載の組換え発現ベクター、請求項９に記載の形質転換体、請求項１１に記載の免疫細胞、請求項１４に記載の抗体薬物コンジュゲート及び／又は請求項１５に記載の医薬組成物。
JP2024542360A 2022-01-17 2023-01-16 Ｃｄ２５を標的とする抗体及びその製造方法と応用 Active JP7846925B2 (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210051233 2022-01-17
CN202210051233.9 2022-01-17
PCT/CN2023/072439 WO2023134766A1 (zh) 2022-01-17 2023-01-16 靶向cd25的抗体及其制备方法和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2025502379A JP2025502379A (ja) 2025-01-24
JP7846925B2 true JP7846925B2 (ja) 2026-04-16

Family

ID=87280139

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2024542360A Active JP7846925B2 (ja) 2022-01-17 2023-01-16 Ｃｄ２５を標的とする抗体及びその製造方法と応用

Country Status (6)

Country Link
US (1) US20250154268A1 (ja)
EP (1) EP4467568A1 (ja)
JP (1) JP7846925B2 (ja)
CN (1) CN118541391A (ja)
TW (1) TW202340250A (ja)
WO (1) WO2023134766A1 (ja)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2025202213A1 (en) 2024-03-26 2025-10-02 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Lipid nanoparticle loaded with antitumoral agent and functionnalized to target immosuppressive cells

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020248938A1 (zh) 2019-06-10 2020-12-17 山东博安生物技术有限公司 抗cd25抗体及其应用

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2906296B1 (en) 2012-10-12 2018-03-21 ADC Therapeutics SA Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
US10752691B2 (en) 2018-03-13 2020-08-25 Tusk Therapeutics Ltd. Anti-CD25 antibody agents
EP3880227A4 (en) * 2018-11-14 2022-11-09 RubrYc Therapeutics, Inc. ANTI-CD25 ANTIBODIES

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020248938A1 (zh) 2019-06-10 2020-12-17 山东博安生物技术有限公司 抗cd25抗体及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN118541391A (zh) 2024-08-23
JP2025502379A (ja) 2025-01-24
EP4467568A1 (en) 2024-11-27
WO2023134766A1 (zh) 2023-07-20
US20250154268A1 (en) 2025-05-15
TW202340250A (zh) 2023-10-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7790754B2 (ja) Ｃｄ３を標的とする抗体、二重特異性抗体及びその使用
JP7287963B2 (ja) 抗ｔｉｇｉｔ抗体並びに治療剤及び診断剤としてのその使用
CN112867507B (zh) 新型抗sirpa抗体
KR102362609B1 (ko) 항garp 단백질 항체와 그 용도
TWI844684B (zh) 一種抗ceacam5的單殖株抗體及其製備方法和用途
WO2018147245A1 (ja) 抗ｇｐｒｃ５ｄ抗体及び該抗体を含む分子
CN117024593A (zh) 抗SIRPα抗体
CA3056972A1 (en) Anti-ox40 antibody and use thereof
JP7538131B2 (ja) 抗ｃｄ７９ｂ抗体、その抗原結合フラグメントおよびそれらの医薬用途
KR20240038043A (ko) 약학적 조성물 및 용도
WO2022068809A1 (zh) 抗cd3抗体以及其用途
US20250376517A1 (en) Anti-cldn18.2 antibody, and pharmaceutical composition and use thereof
CA3207791A1 (en) Anti-cd112r antibody and use thereof
US20250297012A1 (en) Anti-cd16a antibody and application thereof
WO2023036281A1 (zh) 抗cd47抗体及其用途
CN118076638A (zh) 新型抗sirpa抗体
WO2023131328A1 (zh) 一种抗体及其用途
CA3238571A1 (en) Bispecific antibody against tigit and pd-l1, and pharmaceutical composition thereof and use thereof
JP7846925B2 (ja) Ｃｄ２５を標的とする抗体及びその製造方法と応用
WO2024235317A1 (zh) 结合lilrb4和cd3的抗体及其用途
WO2022166700A1 (zh) 基于ccdc112抑制肿瘤细胞生长的方法
JP2025510266A (ja) Ｃｄ３を標的とする抗体及びその使用
RU2808138C1 (ru) Антитело, нацеливающееся на cd3, биспецифическое антитело и их применение
WO2025113640A1 (zh) 结合lilrb1/2或pd1-lilrb1/2的抗体及其用途
TW202537974A (zh) Ｔｒｇｖ９結合蛋白及其醫藥用途

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20240717

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20240717

A977 Report on retrieval

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007

Effective date: 20250627

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20250701

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20250930

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20251111

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20260210

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20260303

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20260330

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 7846925

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150