JP7846923B2 - 老化抑制剤 - Google Patents

Description

本発明は、老化抑制剤に関する。

細胞の老化の原因の一つとして、テロメアの短縮が挙げられる。テロメアは染色体末端に存在するＴＴＡＧＧＧの６塩基を単位とする反復配列で、染色体の安定性を保ち、遺伝情報を保護する役割を担う。テロメアは細胞分裂とともに短縮し、テロメアの短縮により細胞の老化が進行する。老化した細胞からは炎症性サイトカインが分泌され、臓器や組織の機能低下をもたらすため、テロメアの短縮は個体レベルでの加齢性疾患の原因と考えられる。テロメアを伸長させられれば個体レベルでの老化抑制を図れると考えられるが、生物由来の材料によりテロメアを伸長できることは知られていない。

一方、ビタミンＤに結合するビタミンＤ結合タンパク質（ＶＤＢＰ）は、血漿や乳に含まれるタンパク質であり、ビタミンＤ結合タンパク質とも称される。ビタミンＤ結合タンパク質はマクロファージを活性化する能力を有することが知られている（特許文献１）。

国際公開ＷＯ２０１３／０３８９９７号

本発明は、生物由来の材料を利用した老化抑制剤を提供することを課題とする。

本発明者らは、ビタミンＤ結合タンパク質が老化抑制効果をもつことを見出し、本発明の完成に至った。

すなわち、本発明は、ビタミンＤ結合タンパク質を含む老化抑制剤に関する。

ビタミンＤ結合タンパク質が、β－ガラクトシダーゼ、シアリダーゼ、およびＮ－アセチルガラクトサミニダーゼからなる群から選択される１以上の酵素により処理されたものであることが好ましい。

ビタミンＤ結合タンパク質が乳、または血清に由来するものであることが好ましい。

乳が、初乳、または常乳であることが好ましい。

老化抑制剤が、テロメアを伸長するためのものであることが好ましい。

また、本発明は、ビタミンＤ結合タンパク質をβ－ガラクトシダーゼ、シアリダーゼ、およびＮ－アセチルガラクトサミニダーゼからなる群から選択される１以上の酵素と接触させる工程を含む、老化抑制剤の製造方法に関する。

本発明の老化抑制剤は、生物由来の材料であるビタミンＤ結合タンパク質を含むため、副作用のリスクが少ない。本発明の老化抑制剤は、細胞のテロメアを伸長する効果を奏する。

全ての被験者のテロメア長の相対値を示す。 被験者の性別ごとのテロメア長の相対値を示す。

＜ビタミンＤ結合タンパク質＞
本発明の老化抑制剤は、ビタミンＤ結合タンパク質を含むことを特徴とする。ビタミンＤ結合タンパク質は哺乳動物の血漿や乳などの体液中に存在するタンパク質であり、Ｇｃプロテインとも称される。本発明で使用するビタミンＤ結合タンパク質は、哺乳類由来であれば特に限定されず、例えば、ウシ、ヤギ、マウス、ヒト由来のものが挙げられ、ウシ由来のものが好ましい。

具体的なビタミンＤ結合タンパク質としては、配列表の配列番号１に示すアミノ酸配列と８５％以上の配列同一性を示すポリペプチド、または、配列表の配列番号１に示すアミノ酸配列において１または複数個のアミノ酸が欠失、挿入、置換および／または付加したアミノ酸配列からなるポリペプチドが挙げられる。

配列番号１に示すアミノ酸配列との配列同一性は、９０％以上であることが好ましく、９５％以上であることがより好ましく、９８％以上であることがさらに好ましく、９９％以上であることが特に好ましい。

配列番号１に示したアミノ酸配列において、欠失、挿入、置換および／または付加されるアミノ酸の数は、６８個以下であることが好ましく、４５個以下であることがより好ましく、２２個以下であることがさらに好ましく、９個以下であることがさらにより好ましく、特に好ましくは４個、３個、または２個以下である。

ビタミンＤ結合タンパク質は、前記哺乳類の乳または血清などの体液に含まれるものを用いることができる。ビタミンＤ結合タンパク質を含む乳、血清、またはそれらの処理物を老化抑制剤として使用してもよく、精製されたビタミンＤ結合タンパク質を老化抑制剤として使用してもよい。

血清は、哺乳類から採取された血液から常法により調製されたものであれば特に限定されない。血清からビタミンＤ結合タンパク質を精製する場合、精製方法としては、例えば、血清からアルブミン等を除去し、ビタミンＤ結合性カラムによりビタミンＤ結合タンパク質を吸着して溶出し、透析を行う方法が挙げられる。

乳は、分娩後所定日数の間にのみ分泌される初乳であってもよい。特に、ウシの初乳は、母牛が分娩後１０日目までに分泌する乳汁のことをいう。また、乳は常乳であってもよい。ビタミンＤ結合タンパク質を含む乳成分として、例えば、乳からチーズをつくる際にチーズとして固まる成分（カゼイン、脂肪等）を除去する処理、すなわち脱チーズ成分処理を経て得られる、ホエイ（脱チーズ成分、乳清ともいう）を用いることもできる。

＜遺伝子組み換え＞
ビタミンＤ結合タンパク質として、遺伝子組み換えにより発現されたビタミンＤ結合タンパク質を用いてもよい。ビタミンＤ結合タンパク質を遺伝子組み換えにより発現する方法としては、ビタミンＤ結合タンパク質をコードする遺伝子を導入した宿主細胞を培養する方法や、ビタミンＤ結合タンパク質をコードする遺伝子を含む無細胞発現系を使用する方法が挙げられる。宿主細胞は特に限定されず、ストレプトマイセス属、ロドコッカス属、エシェリヒア属、バチルス属、シュードモナス属、ブレビバクテリウム属、ストレプトコッカス属、ラクトバチルス属、サッカロマイセス属、クルイベロマイセス属などの微生物や、高等真核生物の細胞が挙げられる。高等真核生物の細胞としては、ヒト、ハムスター、ニワトリ、昆虫由来の細胞が挙げられ、具体的な細胞株としてはＣＨＯ細胞、ＨｅＬａ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ｓｆ９細胞、ＤＴ４０細胞等が挙げられる。細胞培養の方法は、浮遊培養であっても付着培養であってもよいが、浮遊培養が好ましい。また、不純物の混入を避けるために無血清培地を用いることが好ましい。

＜酵素処理＞
ビタミンＤ結合タンパク質は、β－ガラクトシダーゼ、シアリダーゼ、およびＮ－アセチルガラクトサミニダーゼからなる群から選択される１以上の酵素により処理されたものであってもよい。

β－ガラクトシダーゼとしては、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）由来のもの、ウシ肝臓（ｂｏｖｉｎｅ ｌｉｖｅｒ）由来のものなどが挙げられる。市販されたものとしては、例えば、和光純薬工業（株）のカタログＮｏ．０７２－０４１４１、ＳＩＧＭＡ－ＡＬＤＲＩＣＨ社のＧ１８７５などが挙げられる。

β－ガラクトシダーゼの使用量や処理条件は特に限定されないが、使用するビタミンＤ結合タンパク質の４１８位または４２０位のスレオニン（Ｔｈｒ）に、ＧａｌＮＡｃ（Ｎ－アセチルガラクトサミン）にシアル酸とガラクトースが結合した３糖からなるＯ型糖鎖が付加されている場合には、そのガラクトースを解離させる条件であることが好ましい。β－ガラクトシダーゼ処理の温度は３５～３９℃がより好ましい。酵素処理時間は６０～２００分間がより好ましい。例えば、β－ガラクトシダーゼとして和光純薬工業（株）のカタログＮｏ．０７２－０４１４１を用いる場合、ビタミンＤ結合タンパク質を含む乳１００μｌに対して、酵素を６５ｍＵ以上使用し、３時間以上反応させることが好ましい。β－ガラクトシダーゼの活性は、ｏ－ニトロフェノール－β－Ｄ－ガラクトピラノシドを基質としてｐＨ７．３、３７℃において１分間に１μｍｏｌのｏ－ニトロフェノールを生成する酵素量を１ｕｎｉｔ（Ｕ）とする。

シアリダーゼとしては、ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｅｓ）由来のもの、レンサ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ６６４６Ｋ）由来のもの、コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ）由来のもの、アースロバクター・ウレアファシエンス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｕｒｅａｆａｃｉｅｎｓ）由来のものなどが挙げられる。市販されたものとしては、例えば、ＳＩＧＭＡ－ＡＬＤＲＩＣＨ社の製品番号（ＳＩＧＭＡ Ｐｒｏｄ．Ｎｏｓ．）Ｎ２８７６、Ｎ２１３３、Ｎ２９０４、Ｎ３００１、Ｎ５６３１、生化学バイオビジネス社のコード番号（Ｃｏｄｅ Ｎｕｍｂｅｒ）１２００５２、ＢｉｏＬａｂｓ社のカタログ番号（Ｃａｔａｌｏｇ＃）Ｐ０７２０Ｌ、Ｐ０７２０Ｓなどが挙げられる。

シアリダーゼの使用量や処理条件は特に限定されないが、使用するビタミンＤ結合タンパク質の４１８位または４２０位のスレオニン（Ｔｈｒ）に、ＧａｌＮＡｃ（Ｎ－アセチルガラクトサミン）にシアル酸とガラクトースが結合した３糖からなるＯ型糖鎖が付加されている場合には、そのシアル酸を解離させる条件であることが好ましい。シアリダーゼ処理の温度は３５～３９℃がより好ましい。酵素処理時間は６０～２００分間がより好ましい。例えば、シアリダーゼとしてＳＩＧＭＡ－ＡＬＤＲＩＣＨ社の製品番号（Ｎ２８７６）を用いる場合、ビタミンＤ結合タンパク質を含む乳１００μｌに対して、酵素を６５ｍＵ以上使用し、３時間以上反応することが好ましい。シアリダーゼの活性は、ウシ顎下腺由来ムチンを用いてｐＨ ５．０、３７℃にて１分あたり１．０マイクロモルのＮ－アセチルノイラミン酸を放出する活性を１ｕｎｉｔ（Ｕ）とする。

Ｎ－アセチルガラクトサミニダーゼとしては、エンド－α－Ｎ－アセチルガラクトサミニダーゼ、エキソ－α－Ｎ－アセチルガラクトサミニダーゼが挙げられる。エンド－α－Ｎ－アセチルガラクトサミニダーゼとしては、例えば、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）由来のもの、ビフィドバクテリウム ロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）由来のもの、ストレプトコッカス ニューモニエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）由来のもの、ウシ肝臓（ｂｏｖｉｎｅ ｌｉｖｅｒ）由来のものなどがあげられる。市販されたものとしては、例えば、ＭＥＲＣＫ社のカタログ＃３２４７１６などが挙げられる。

Ｎ－アセチルガラクトサミニダーゼの使用量や処理条件は特に限定されないが、ビタミンＤ結合タンパク質の４１８位または４２０位のスレオニン（Ｔｈｒ）に、ＧａｌＮＡｃ（Ｎ－アセチルガラクトサミン）が付加されている場合、そのＮ－アセチルガラクトサミンを除去する条件が好ましい。エンド－α－Ｎ－アセチルガラクトサミニダーゼの使用量は、ビタミンＤ結合タンパク質１μｇに対して１～５００ｍＵが好ましく、１００～２００ｍＵがより好ましい。酵素処理の温度は３５～３９℃が好ましい。酵素処理時間は６０～２００分間が好ましい。

Ｎ－アセチルガラクトサミニダーゼの活性は、１分間に、３７℃、ｐＨ５．０において、ｐ－ニトロフェニル－２－アセトアミド－２－デオキシ－３－Ｏ－（β－Ｄ－ガラクトピラノシル）－α－Ｄ－ガラクトピラノシドから１．０μｍｏｌのｐ－ニトロフェノールを解離させる活性を１ｕｎｉｔ（Ｕ）とする。

また、Ｎ－アセチルガラクトサミンにシアル酸が結合している場合、エンド－α－Ｎ－アセチルガラクトサミニダーゼによるＮ－アセチルガラクトサミンの切断効果が低下するため、あらかじめシアル酸を切断しておくことが好ましい。シアル酸の切断は、ビタミンＤ結合タンパク質にシアリダーゼ処理を行うことにより行える。

Ｎ－アセチルガラクトサミニダーゼ処理による、ビタミンＤ結合タンパク質からのＮ－アセチルガラクトサミンの除去は、レクチンとの結合性の有無により確認できる。レクチンとしては、Ｗｉｓｔｅｒｉａ ｆｌｏｒｉｂｕｎｄａ由来のレクチン、Ｈｅｌｉｘ ｐｏｍａｔｉａ由来のレクチンが挙げられる。ビタミンＤ結合タンパク質がレクチンと結合しない場合、Ｎ－アセチルガラクトサミンが除去されたと判断できる。

ビタミンＤ結合タンパク質の酵素処理は、任意で緩衝液の存在下で行ってもよい。そのような緩衝液としては、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）などが挙げられる。

酵素処理後は、熱処理により、酵素を失活させてもよい。熱処理条件は、酵素を失活させることができる限り特に限定されないが、例えば、６０℃付近の温度で、約１０分間加熱する。また、酵素処理後は、ビタミンＤ結合性カラム、ゲルろ過カラム、限外ろ過等を組み合わせることによりビタミンＤ結合タンパク質から酵素を除去してもよい。

酵素処理は、固相に固定した酵素（固定化酵素）を用いて行うこともできる。酵素を固相に固定させる方法は当業者に知られており、例えば、酵素を、シアンブロマイドなどのカップリング剤によりアガロースビーズに固定する方法が挙げられる。酵素が固定化された固相にビタミンＤ結合タンパク質を適用することにより酵素反応を行える。固定化酵素を用いることにより、酵素処理後、酵素を熱処理により失活させることなく回収でき、夾雑物（熱処理により失活した酵素などのタンパク質等）を除去できる。

ビタミンＤ結合タンパク質を含む乳や血清を酵素処理する場合は、酵素処理に付す前に、前処理を行うことが好ましい。前処理としては、水分量を減少させる濃縮の他、乳からチーズをつくる際にチーズとして固まる成分（カゼイン、脂肪等）を除去する処理（脱チーズ成分処理）が挙げられる。濃縮により得られる乳を「濃縮乳」という。脱チーズ成分処理により得られる乳を脱チーズ成分乳、乳清、またはホエイともいう。以上の方法で得られるビタミンＤ結合タンパク質は、さらに、凍結乾燥して、固体ないし粉体状としてもよい。

＜老化抑制＞
本発明の老化抑制剤は、個体に投与することにより個体の老化を抑制できる。老化抑制は、テロメア長を測定することにより評価できる。テロメア長は、例えば、細胞から染色体ＤＮＡを抽出し、標識したテロメアプローブと反応させて標識の発光強度を検出することにより測定できる。老化抑制剤を投与しなかった被験者群と比較して、老化抑制剤を投与した被験者群でテロメア長が伸長しているときに、老化が抑制されたと判断できる。老化抑制剤を投与した被験者群でのテロメア長は、老化抑制剤を投与しなかった被験者群でのテロメア長の１．０２倍以上が好ましく、１．０５倍以上がより好ましく、１．１倍以上がさらに好ましく、１．２倍以上がさらにより好ましい。老化抑制剤の投与により、組織や細胞種にかかわらずテロメア長を伸長できるが、代表的な細胞としては白血球、皮膚細胞、粘膜細胞などが挙げられる。白血球は全血から採取でき、粘膜細胞は口腔粘膜や鼻腔から採取できる。

＜マクロファージ活性化能＞
本発明で使用するビタミンＤ結合タンパク質は、マクロファージ活性化能を有するものであってもよい。マクロファージ活性化能を有するビタミンＤ結合タンパク質は、ＧｃＭＡＦ（Ｇｃ ｐｒｏｔｅｉｎ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ）と称されることもある。マクロファージ活性化能を有するビタミンＤ結合タンパク質としては、４１８位または４２０位のスレオニン（Ｔｈｒ）にＧａｌＮＡｃ（Ｎ－アセチルガラクトサミン）が結合していないビタミンＤ結合タンパク質や、４１８位または４２０位のスレオニン（Ｔｈｒ）にＧａｌＮＡｃのみが結合したビタミンＤ結合タンパク質が挙げられる。

また、本発明で使用するビタミンＤ結合タンパク質は、４１８位または４２０位のスレオニン（Ｔｈｒ）に、ＧａｌＮＡｃ（Ｎ－アセチルガラクトサミン）にシアル酸とガラクトースが結合した３糖からなるＯ型糖鎖が結合した形態であってもよい。この形態はマクロファージ活性化能を有しないとされている。

マクロファージ活性化能は、マクロファージの貪食能を測定することにより評価できる。マクロファージの貪食能の測定は、ビタミンＤ結合タンパク質をマクロファージの培養液に添加し、そのマクロファージに蛍光ラテックスビーズ、ザイモザンなどの試験物質を貪食させ、貪食したマクロファージの割合や、貪食された試験物質の粒子数を計算することにより行う。貪食したマクロファージの割合や貪食された試験物質の粒子数が、比較対照よりも多いときにマクロファージ活性化能があると判断できる。マクロファージ細胞株としては、例えばＲＡＷ２６４．７、ＮＲ８３８３、Ｊ７７４．１などを使用できる。

本発明の老化抑制剤は、マクロファージによるＮＯ産生を増大しないものであってもよい。ＮＯ産生能は、マクロファージに老化抑制剤を添加し、２４時間程度静置した後のＮＯ産生量を測定することにより評価できる。ＮＯ産生量は、例えば、実施例に記載したＧｒｉｅｓｓ法により測定できる。

本発明の老化抑制剤は、マクロファージによるＮＯ産生を抑制するものであってもよい。ＮＯ産生の抑制能は、マクロファージに、老化抑制剤とリポポリサッカライド（ＬＰＳ）などのＮＯ産生刺激剤を添加し、２４時間程度静置した後のＮＯ産生量を測定することにより評価できる。マクロファージによるＮＯ産生を抑制することは、抗炎症作用があることを意味する。

本発明の老化抑制剤は、マクロファージによるＴＮＦ－αの産生を増大しないものであってもよい。ＴＮＦ－αの産生能は、マクロファージに老化抑制剤、リポポリサッカライド（ＬＰＳ）などのＮＯ産生刺激剤、およびＩＦＮ－γを添加し、２４時間程度静置した後のＴＮＦ－α産生量を測定することにより評価できる。ＴＮＦ－α産生量は、例えば、実施例に記載したＥＬＩＳＡ法により測定できる。マクロファージによるＴＮＦ－αの産生を増大しないことは、抗炎症作用があることを意味する。

本発明の老化抑制剤は、Ｍ２型マクロファージへの分化能を有していてもよい。Ｍ２型マクロファージへの分化能は、マクロファージに老化抑制剤を添加し、２４時間程度静置した後の、マクロファージにおけるマーカー遺伝子の発現量を測定することにより評価できる。マーカー遺伝子としては、例えばＡＲＧ－１を用いることができる。マーカー遺伝子の発現量は、例えば、実施例に記載した、固定化した細胞の蛍光顕微鏡による観察により評価できる。一般的に、マクロファージの分化型として炎症性のＭ１型と抗炎症性のＭ２型が知られている。

＜食品組成物＞
老化抑制剤は、必要に応じて、補助剤、甘味料、香辛料、調味料、防腐剤、保存料、殺菌剤、酸化防止剤などの食品に通常用いられる各種添加剤と組み合わせることにより食品組成物とすることができる。

食品組成物は、いわゆる健康食品、健康飲料、機能性食品、栄養機能食品、健康補助食品、栄養補助食品（サプリメント）、特別用途食品、特定保健用食品等とすることができる。食品組成物の形態としては、散剤、顆粒剤、錠剤（舌下錠などを含む）、腸溶性カプセル剤、胃溶性カプセル剤、口腔溶性カプセル剤、丸剤、内用液剤（懸濁剤、乳剤、シロップ剤、ペースト剤、クリーム剤などを含む）などが挙げられる。

食品組成物の投与量は、摂取者の年齢、性別、体重および症状、投与方法などにより異なるが、典型的な例としては、例えば、食品組成物に含まれるタンパク質の総量として、１回の投与あたり、体重１ｋｇあたり、０．００５ｍｇ～１．０ｍｇが好ましく、０．０１ｍｇ～０．５ｍｇがより好ましく、０．０１ｍｇ～０．１ｍｇがさらに好ましい。また、ビタミンＤ結合タンパク質の投与量として、１回の投与あたり、体重１ｋｇあたり、０．０００１ｍｇ～１．０ｍｇが好ましく、０．００１ｍｇ～０．５ｍｇがより好ましい。

食品組成物を上記の１回あたりの投与量で投与する場合の、投与間隔および投与回数は、週１回～１日３回が好ましく、週２回～１日２回がより好ましく、１日１～２回がさらに好ましい。投与は１カ月以上継続することが好ましく、２ヶ月以上継続することがより好ましく、３ヶ月以上継続することがさらに好ましく、４ヶ月以上継続することがさらにより好ましく、６ヶ月以上継続することが特に好ましい。

＜医薬組成物＞
老化抑制剤は、必要に応じて、薬学的に許容し得る添加剤と組み合わせることにより医薬組成物とすることができる。薬学的に許容し得る添加剤としては、例えば希釈剤、安定剤、保存剤、緩衝剤等が挙げられる。

医薬組成物の形態は特に制限されず、注射用組成物、経口組成物、点眼組成物、輸液組成物、点鼻組成物、点耳組成物、坐剤、経腸栄養組成物が挙げられる。経口組成物の形態としては、散剤、顆粒剤、錠剤（舌下錠などを含む）、カプセル剤、丸剤、腸溶剤、内用液剤（懸濁剤、乳剤、シロップ剤などを含む）、吸入剤などが挙げられる。注射の形態としては、静脈内注射、皮下注射、皮内注射、筋肉内注射、腹腔内注射などが挙げられる。

医薬組成物の投与量は、患者の年齢、性別、体重および症状、投与方法などにより異なるが、典型的な例としては、例えば、医薬組成物に含まれるタンパク質の総量として、１回の投与あたり、体重１ｋｇあたり、０．００５ｍｇ～１．０ｍｇが好ましく、０．０１ｍｇ～０．５ｍｇがより好ましく、０．０１ｍｇ～０．１ｍｇがさらに好ましい。また、ビタミンＤ結合タンパク質の投与量として、１回の投与あたり、体重１ｋｇあたり、０．０００１ｍｇ～１．０ｍｇが好ましく、０．００１ｍｇ～０．５ｍｇがより好ましい。

医薬組成物を上記の１回あたりの投与量で投与する場合の、投与間隔および投与回数は、週１回～１日３回が好ましく、週２回～１日２回がより好ましく、１日１～２回がさらに好ましい。投与は１カ月以上継続することが好ましく、２ヶ月以上継続することがより好ましく、３ヶ月以上継続することがさらに好ましく、４ヶ月以上継続することがさらにより好ましく、６ヶ月以上継続することが特に好ましい。

＜適応症状＞
ビタミンＤ結合タンパク質はマクロファージ活性化能を有するため、本発明の医薬組成物は、老化抑制効果に加えて、マクロファージ活性化に基づく疾病治療効果を有していてもよい。疾病として、癌、感染症、自己免疫疾患、自閉症、炎症性疾患、脳・神経変性疾患、皮膚疾患、心臓病が挙げられる。

癌とは、癌腫、肉腫、その他の悪性腫瘍のいずれをも含むものであり、例えば、皮膚癌、気管支癌、肺癌、非小細胞肺癌、乳癌、卵巣癌、舌癌、咽頭癌、食道癌、胃癌、小腸癌、大腸癌、直腸癌、結腸癌、肝癌、膵臓癌、腎臓癌、腎細胞癌、膀胱癌、前立腺癌、子宮癌、子宮頸癌、ウィルムス腫瘍、悪性黒色腫、髄膜腫、神経芽腫、骨肉腫、カポジ肉腫、リンパ腫、白血病などが挙げられる。なお、癌は、これら悪性腫瘍の他、その転移をも含む。

感染症としては、例えば、ウイルス感染症、細菌感染症などが挙げられ、具体的には、新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）、ＨＩＶ感染症、エイズの他、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ヘルペス、インフルエンザ、肺炎、結核、ＥＢウイルス感染症などが挙げられる。

自閉症は、他人との社会的関係の形成の困難さ、言葉の発達の遅れなどを特徴とする行動の障害である。

炎症性疾患は、物理的刺激、化学的刺激、微生物の感染に対して起こす生体の防御反応のうち炎症によって生じる疾患である。また、本発明の医薬組成物は、自然免疫の異常によって炎症反応が自然に生じ、臓器障害に至る自己炎症性疾患に対しても有効である。

脳・神経変性疾患としては、アルツハイマー病、パーキンソン病、脊髄小脳変性症、筋萎縮性側索硬化症、レビー小体型認知症などが挙げられる。

皮膚改善としては、皮膚の美白化、色素沈着の抑制若しくは改善、角質除去若しくは角質ターンオーバー促進、老化防止、しわ抑制若しくは改善、保湿化、再生、脱毛症の治療若しくは予防などが挙げられる。

心臓病としては、うっ血性心不全、不整脈、狭心症、心筋梗塞などが挙げられる。

＜医薬部外品用組成物＞
老化抑制剤は、必要に応じて補助剤等と組み合わせることにより、医薬部外品用組成物とすることができる。該医薬部外品用組成物は、溶液状、懸濁液状、シロップ状、顆粒状、クリーム状、ベースト状、ゼリー状等の種々の形態をとり得るものであり、必要に応じ、所望の形状に成形することもできる。医薬部外品用組成物はいずれも常法により製造できる。

医薬部外品用組成物におけるＧｃタンパク質の使用量は、特に限定されるものではないが、上記医薬組成物の場合の投与量と同じもの、あるいは、上記を参考にして適宜設定したものを採用することができる。

＜老化抑制剤の製造方法＞
本発明の老化抑制剤の製造方法は、ビタミンＤ結合タンパク質をβ－ガラクトシダーゼ、シアリダーゼ、およびＮ－アセチルガラクトサミニダーゼからなる群から選択される１以上の酵素と接触させる工程を含むことを特徴とする。β－ガラクトシダーゼ、シアリダーゼ、Ｎ－アセチルガラクトサミニダーゼ、および酵素処理条件については、老化抑制剤に関して上述した通りである。

本発明の老化抑制剤の製造方法では、シアリダーゼ、およびＮ－アセチルガラクトサミニダーゼを使用する場合、先にビタミンＤ結合タンパク質をシアリダーゼにより処理し、その後、Ｎ－アセチルガラクトサミニダーゼにより処理することが好ましい。これは、ビタミンＤ結合タンパク質にＮ－アセチルガラクトサミンを介してシアル酸が結合している場合、Ｎ－アセチルガラクトサミニダーゼによるＮ－アセチルガラクトサミンの切断効率が低下するからである。あらかじめシアル酸を切断することにより、Ｎ－アセチルガラクトサミンの切断効率を向上できる。

（１）ビタミンＤ結合タンパク質を含むカプセルの製造（製造例１）
脱チーズ成分処理した粗脱チーズ成分乳（一般財団法人蔵王酪農センターから入手した乳清）を８，０００ｒｐｍ、４℃で１時間遠心し、沈殿物に注意して、上清を回収した。回収した上清と等量の蒸留水（Ｍｉｌｌ－Ｑグレード。以下、特に断りの無い限り同じグレードのものを使用）を加え、ペンシル型モジュールＵＦ膜（フナコシ社製、ＡＩＰ－００１３Ｄ）で透析処理した。この時、濾液が加えた蒸留水と等量に達するまで透析を行い、脱チーズ成分乳（乳清）を得た。タンパク質濃度を、波長５７０ｎｍでの吸光度測定により決定（ＢＳＡ（ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ ａｌｂｕｍｉｎ、ＳＩＧＭＡ、Ａ４５０３）について作成した検量線を使用）した。

上記で得た脱チーズ成分乳を、そのタンパク量が６ｇとなるように分注し、該脱チーズ成分乳に、ホルミル樹脂（ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ社製、Ｆｏｒｍｙ－６５０Ｍ）で固定化したβ－ガラクトシダーゼ（オリエンタル酵母工業（株）製、大腸菌由来）を４ｇ／６，０００Ｕ添加し、３７℃で１時間インキュベートした。インキュベート後、反応液をグラスフィルターでろ過し、ホルミル樹脂を分離した。ホルミル樹脂は蒸留水で洗浄し、繰り返し使用のため保存した。ろ液を、ラボディスク（アドバンテック東洋（株）製、５０ＣＰ０２０ＡＳ）でフィルター滅菌した。滅菌したろ液は、凍結乾燥して粉末化し、粉末状の乳酵素処理物を得た。乳酵素処理物にビタミンＤ結合タンパク質が含まれることを、抗ビタミンＤ結合タンパク質抗体を用いて、国際公開ＷＯ２０１６／１９４９１４号に記載のウエスタンブロッティングにより確認した。

（２）ビタミンＤ結合タンパク質を含むカプセルの投与試験（実施例）
上記で調製した乳酵素処理物を用いて、その中に含まれるタンパク質の量が１．０ｍｇとなるよう調整した腸溶性カプセルを、常法により調製した。該腸溶性カプセルを朝と晩の１日２回、１回あたり１カプセル、すなわち１日あたり２カプセルを、毎日、健康な被験者１６７名（女性１１８名、男性４９名）に経口投与した。

なお、被験者の年齢構成は次の通りであった。４０代：６０名、５０代：５２名、６０代：２８名、７０代：２４名、８０代：２名、９０代：１名。

投与試験の開始時、及び投与試験を開始して３ヶ月後と６ヶ月後に、被験者から血液を採取した。血液細胞から染色体ＤＮＡを抽出し、下記論文の記載に基づき、リアルタイムｑＰＣＲによりテロメア長を測定した。その後、全ての被験者のテロメア長の平均値を算出した。
Journal of Affective Disorders 273 (2020) 453-461 Zeyue Liu et al. "Inverse changes in telomere length between the blood and brain indepressive-like mice"

投与試験の開始時、及び投与試験を開始して３ヶ月後と６ヶ月後のテロメア長の相対値を図１に示す。投与試験を開始して３ヶ月後と６ヶ月後には、投与期間に応じてテロメア長相対値が増加した。テロメア長相対値は、投与開始時と３ヶ月投与後、投与開始時と６ヶ月投与後、３ヶ月投与後と６ヶ月投与後において、ｐ＜０．０１の有意差が認められた。

また、被験者の性別ごとのテロメア長を図２に示す。投与試験を開始して３ヶ月後と６ヶ月後には、投与期間に応じて、男女ともにテロメア長相対値が増加した。女性の投与開始時と３ヶ月投与後、３ヶ月投与後と６ヶ月投与後でｐ＜０．０１の有意差が認められた。また、男性の投与開始時と３ヶ月投与後でｐ＜０．０１の有意差が認められた。なお、男女間ではテロメア長に有意差はなく、本発明の老化抑制剤が、性別を問わず有効であることが確認された。

本開示（１）はビタミンＤ結合タンパク質を含む老化抑制剤である。

本開示（２）は、ビタミンＤ結合タンパク質が、β－ガラクトシダーゼ、シアリダーゼ、およびＮ－アセチルガラクトサミニダーゼからなる群から選択される１以上の酵素により処理されたものである、本開示（１）に記載の老化抑制剤である。

本開示（３）は、ビタミンＤ結合タンパク質が乳、または血清に由来する、本開示（１）または（２）に記載の老化抑制剤である。

本開示（４）は、乳が、初乳、または常乳である、本開示（３）に記載の老化抑制剤である。

本開示（５）は、テロメアを伸長するための、本開示（１）～（４）のいずれかに記載の老化抑制剤である。

本開示（６）は、ビタミンＤ結合タンパク質をβ－ガラクトシダーゼ、シアリダーゼ、およびＮ－アセチルガラクトサミニダーゼからなる群から選択される１以上の酵素と接触させる工程を含む、老化抑制剤の製造方法である。

Claims (9)

1. 脱チーズ成分乳のβ－ガラクトシダーゼ処理物を有効成分として含む、テロメアを伸長するための組成物。
2. 経口投与するための、請求項１に記載の組成物。
3. 血液細胞におけるテロメアを伸長するための、請求項１または２に記載の組成物。
4. 脱チーズ成分乳のβ－ガラクトシダーゼ処理物がビタミンＤ結合タンパク質を含む、請求項１または２に記載の組成物。
5. ビタミンＤ結合タンパク質が、β－ガラクトシダーゼによる処理物である、請求項４に記載の組成物（ただし、Ｎ－アセチルガラクトサミニダーゼ、またはノイラミニダーゼにより処理されたビタミンＤ結合タンパク質を含む組成物を除く）。
6. ビタミンＤ結合タンパク質が乳に由来する、請求項４に記載の組成物。
7. 乳が、初乳、または常乳である、請求項６に記載の組成物。
8. ビタミンＤ結合タンパク質にＮ－アセチルガラクトサミンが付加されている、請求項４に記載の組成物。
9. 脱チーズ成分乳をβ－ガラクトシダーゼと接触させる工程を含む、請求項１または２に記載の組成物の製造方法。