JP7828688B2 - ブタ由来新規微生物 - Google Patents

ブタ由来新規微生物

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Description

NPMD NITE BP-04072
本発明は、ブタ由来の新規微生物、動物用生菌剤、有用腸内微生物の増殖剤、及び動物の成長促進に効果のある物質のスクリーニング方法に関する。本発明の微生物は、ブタなどの動物に対し、成長促進や抗病性向上などの効果を有する。
ヒトを含む動物の体内には腸内細菌が生息し、健康に深く関わることから最後の臓器と呼ばれている。そのため、腸内細菌を調べ、宿主に影響を及ぼす菌株の分離及び、その有用代謝産物の解析が行われている。家畜では抗生剤が使われているが耐性菌の出現等を理由にEUを始め抗生物質禁止の流れがある。そこで、抗生剤の代替として微生物が注目されており、抗菌物質生産や免疫活性化能のある乳酸菌等の微生物が注目されている。また、ブタはヒトに近く、ヒト臓器をブタに移植、ヒト糞便をブタに移植するなど、ヒトのモデル化動物としての役割も担い、ブタでの研究はヒト研究へ還元されており、ブタ腸内細菌研究はヨーロッパ・中国を中心に盛んに行われている。
これまで、ブタへの生菌剤として、乳酸菌、酪酸菌、ビフィズス菌等が主に開発されてきたが（特許文献１、非特許文献１）、腸内細菌を用いた生菌剤は確立されていない。これは、腸内細菌の分離・培養が困難であることが１つの要因となっている。世界的に大規模なブタ腸内細菌の分離（非特許文献２）が行われているほか、腸内細菌叢全体と宿主との関係（非特許文献３）が研究されている。
特許第2799273号公報
宗田、日本豚病研究会報 (76), 15-23, 2020-08 Wylensek et al., 2020. Nat Commun.;11(1):6389. doi: 10.1038/s41467-020-19929-w. Yang et al., 2022. Nature;606(7913):358-367.doi: 10.1038/s41586-022-04769-z
腸管内容物から抽出した遺伝子を用いた菌叢解析や代謝産物解析が中心的な解析技術であるため、実際に重要な役割を果たしている菌種ないしは菌株の同定・解明に至っておらず、生産性向上に直接活用できる知見が得られていない。
本発明は、以上のような背景の下になされたものであり、ブタなどの動物への生菌剤として利用可能な新規な微生物を提供することを目的とする。
本発明者は、上記課題を解決するため鋭意検討を重ねた結果、成長性の良いブタの腸内から分離された微生物が、抗酸化物質のフェルラ酸、及び抗菌作用を有するギ酸やイソアロリトコール酸を生産することを見出し、本発明を完成するに至った。
即ち、本発明は、以下の〔１〕～〔２２〕を提供するものである。
〔１〕クロストリジウム（Clostridium）属に属し、胆汁酸存在下で、イソアロリトコール酸生産能を有することを特徴とする微生物。
〔２〕胆汁酸存在下で、イソアロリトコール酸生産能を有し、胆汁酸存在又は非存在下で、フェルラ酸及びギ酸生産能を有することを特徴とする〔１〕に記載の微生物。
〔３〕配列番号１に記載の塩基配列からなる16S rRNA遺伝子を有することを特徴とする〔１〕に記載の微生物。
〔４〕受託番号NITE BP-04072で特定される菌株であることを特徴とする〔１〕に記載の微生物。
〔５〕クロストリジウム（Clostridium）属に属し、胆汁酸存在下で、イソアロリトコール酸生産能を有する微生物を含有することを特徴とする動物用生菌剤。
〔６〕微生物が、胆汁酸存在下で、イソアロリトコール酸生産能を有し、胆汁酸存在又は非存在下で、フェルラ酸及びギ酸生産能を有する微生物であることを特徴とする〔５〕に記載の動物用生菌剤。
〔７〕微生物が、配列番号１に記載の塩基配列からなる16S rRNA遺伝子を有する微生物であることを特徴とする〔５〕に記載の動物用生菌剤。
〔８〕微生物が、受託番号NITE BP-04072で特定される菌株であることを特徴とする〔５〕に記載の動物用生菌剤。
〔９〕動物が、ブタであることを特徴とする〔５〕に記載の動物用生菌剤。
〔１０〕動物の成長促進のために用いられることを特徴とする〔５〕に記載の動物用生菌剤。
〔１１〕動物の抗病性向上のために用いられることを特徴とする〔５〕に記載の動物用生菌剤。
〔１２〕ラフィノース及び／又はスタキオースを有効成分として含有することを特徴とする有用腸内微生物の増殖剤。
〔１３〕胆汁酸及び／又はマンガンを更に有効成分として含むことを特徴とする〔１２〕に記載の有用腸内微生物の増殖剤。
〔１４〕ラフィノース及びスタキオース以外の糖を含まないことを特徴とする〔１２〕に記載の有用腸内微生物の増殖剤。
〔１５〕有用腸内微生物が、クロストリジウム（Clostridium）属に属し、胆汁酸存在下で、イソアロリトコール酸生産能を有する微生物であることを特徴とする〔１２〕に記載の有用腸内微生物の増殖剤。
〔１６〕有用腸内微生物が、クロストリジウム（Clostridium）属に属し、胆汁酸存在下で、イソアロリトコール酸生産能を有し、胆汁酸存在又は非存在下で、フェルラ酸及びギ酸生産能を有する微生物であることを特徴とする〔１２〕に記載の有用腸内微生物の増殖剤。
〔１７〕有用腸内微生物が、配列番号１に記載の塩基配列からなる16S rRNA遺伝子を有する微生物であることを特徴とする〔１２〕に記載の有用腸内微生物の増殖剤。
〔１８〕有用腸内微生物が、受託番号NITE BP-04072で特定される菌株であることを特徴とする〔１２〕に記載の有用腸内微生物の増殖剤。
〔１９〕ブタに投与されることを特徴とする〔１２〕に記載の有用腸内微生物の増殖剤。
〔２０〕〔１〕乃至〔４〕のいずれかに記載の微生物を更に含むことを特徴とする〔１２〕に記載の有用腸内微生物の増殖剤。
〔２１〕動物の成長促進に効果のある物質のスクリーニング方法であって、以下の工程（１）及び（２）を含むことを特徴とする方法、
（１）被験物質の存在下で、〔１〕乃至〔４〕のいずれかに記載の微生物を培養する工程、
（２）上記微生物を増殖させる被験物質を、動物の成長促進に効果のある物質として選択する工程。
〔２２〕動物が、ブタであることを特徴とする〔２１〕に記載のスクリーニング方法。
また、本発明は、以下の〔２３〕～〔２５〕を提供するものである。
〔２３〕〔５〕乃至〔９〕のいずれかに記載の動物用生菌剤及び／又は〔１２〕乃至〔１９〕のいずれかに記載の有用腸内微生物の増殖剤を動物に投与する工程を含むことを特徴とする動物の飼育方法。
〔２４〕〔５〕乃至〔９〕のいずれかに記載の動物用生菌剤及び／又は〔１２〕乃至〔１９〕のいずれかに記載の有用腸内微生物の増殖剤を動物に投与する工程を含むことを特徴とする動物の成長促進方法。
〔２５〕〔５〕乃至〔９〕のいずれかに記載の動物用生菌剤及び／又は〔１２〕乃至〔１９〕のいずれかに記載の有用腸内微生物の増殖剤を動物に投与する工程を含むことを特徴とする動物の抗病性向上方法。
本明細書は、本願の優先権の基礎である日本国特許出願、特願2024-027311の明細書及び／又は図面に記載される内容を包含する。
本発明は、クロストリジウム属に属する新規な微生物を提供する。この微生物は、成長性の良いブタで優占的であったこと、抗病性を有することから、ブタの成長促進・抗病性向上を目的に利用でき、抗生物質を使用しない安全な食品を提供できるシステムに寄与する。
胆汁酸又はマンガンを添加した場合のNP-1株の増殖性を示す図である。 糖を添加した場合のNP-1株の増殖性を示す図である。
以下、本発明を詳細に説明する。
（Ａ）微生物
本発明の微生物は、クロストリジウム属に属し、胆汁酸存在下で、イソアロリトコール酸生産能を有することを特徴とするものである。
本発明の微生物は、例えば、ブタから腸内細菌を分離し、分離した微生物を胆汁酸添加培地で培養し、培養した微生物の中からイソアロリトコール酸を生産する微生物を選抜し、それらの中からクロストリジウム属に属する微生物を選抜することにより、得ることができる。クロストリジウム属に属する微生物の選抜は、例えば、16S rRNA遺伝子の配列を調べることにより行うことができる。
本発明の微生物の培養方法は特に限定されず、クロストリジウム属に属する微生物に一般的に適用されている方法によって培養することができる。培地としては、例えば、YCFA培地を使用することができる。培養温度は、37℃前後（例えば、35～40℃）とすることができる。また、培養は、嫌気条件下で行う。
本発明の微生物は、胆汁酸存在下で、イソアロリトコール酸生産能を有するものであればよいが、胆汁酸存在又は非存在下で、フェルラ酸及びギ酸生産能も有するものであることが好ましい。また、本発明の微生物は、下記の塩基配列（配列番号１）からなる16S rRNA遺伝子を有するものであることが好ましい。
tattgagagt ttgatcctgg ctcaggacga acgctggcgg cgtgcctaac acatgcaagt 60
cgagcgaatg aagttccttc gggaacggat ttagcggcgg acgggtgagt aacacgtggg 120
caacctacct catagagggg aatagccttc cgaaagggag attaataccg cataagattg 180
tagtaccgca tggtacagca attaaaggag caatccacta tgagatgggc ccgcggcgca 240
ttagctagtt ggtgaggtaa cggctcacca aggcgacgat gcgtagccga cctgagaggg 300
tgatcggcca cattgggact gagacacggc ccagactcct acgggaggca gcagtgggga 360
atattgcaca atgggggaaa ccctgatgca gcaacgccgc gtgagtgatg acggccttcg 420
ggttgtaaag ctctgtcttc agggacgata atgacggtac ctgaggagga agccacggct 480
aactacgtgc cagcagccgc ggtaatacgt aggtggcgag cgttgtccgg atttactggg 540
cgtaaaggga gcgtaggcgg atttttaagt gagatgtgaa atactcgggc ttaacctgag 600
tgctgcattt caaactggaa gtctagagtg caggagagga gaagggaatt cctagtgtag 660
cggtgaaatg cgtagagatt aggaagaaca ccagtggcga aggcgcttct ctggactgta 720
actgacgctg aggctcgaaa gcgtggggag caaacaggat tagataccct ggtagtccac 780
gccgtaaacg atgaatacta ggtgtagggg ttgtcatgac ctctgtgccg ccgctaacgc 840
attaagtatt ccgcctgggg agtacggtcg caagattaaa actcaaagga attgacgggg 900
gcccgcacaa gcagcggagc atgtggttta attcgaagca acgcgaagaa ccttacctag 960
acttgacatc tcctgcatta ctcttaatcg aggaagtcct ttcggggaca ggatgacagg 1020
tggtgcatgg ttgtcgtcag ctcgtgtcgt gagatgttgg gttaagtccc gcaacgagcg 1080
caacccttat tgttagttgc catcattaag ttgggcactc tagcgagact gcccgggtta 1140
accgggagga aggtggggat gacgtcaaat catcatgccc cttatgtcta gggctacaca 1200
cgtgctacaa tggtcggtac aataagacgc aagcccgcga gggggagcaa aactggaaaa 1260
ccgatctcag ttcggattgt aggctgaaac tcgcctacat gaagctggag ttgctagtaa 1320
tcgcgaatca gcatgtcgcg gtgaatacgt tcccgggcct tgtacacacc gcccgtcaca 1380
ccatgagagt tggcaatacc caaagtacgt gatctaaccc gcaagggagg aagcgtccta 1440
aggtagggtc agcgattggg gtgaagtcgt aacaaggtag ccgtaggaga acctgcggct 1500
ggatcacctc cttt 1514
本発明の微生物に含まれる菌株としては、NP-1株を挙げることができる。NP-1株は、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに国際寄託されている。国際寄託に関する詳細な情報は以下の通りである。
1)国際寄託機関の名称及び住所
名称：独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
住所：日本国千葉県木更津市かずさ鎌足2-5-8郵便番号292-0818
2)国内寄託日：2024年1月30日
3)国内受託番号：NITE P-04072
4)国際寄託への移管日：2024年11月22日
5)国際受託番号：NITE BP-04072
6)識別の表示：NP-1
（Ｂ）動物用生菌剤
本発明の動物用生菌剤は、上記の本発明の微生物を含有することを特徴とするものである。
対象とする動物は、通常、ブタであるが、ブタ以外の動物であってもよい。また、動物にはヒトが含まれていてもよいが、除外されていてもよい。本発明の動物用生菌剤は、例えば、対象動物の成長促進又は抗病性向上のために用いられる。
本発明の動物用生菌剤は、本発明の微生物の菌体をそのまま使用したものであってもよく、菌体に賦形剤を加えて製剤化した菌体を使用したものであってもよい。賦形剤としては、ブドウ糖、ショ糖、乳糖、グルタミン酸、アスコルビン酸、脱脂乳、卵アルブミン、澱粉、カゼイン、シュークロースなどを挙げることができる。また、微生物の菌体は、凍結乾燥等あるいは胞子化により保存性を高めた菌体であってもよい。本発明の微生物の菌体を調製する方法は特に限定されず、常法に従って行うことができる。例えば、本発明の微生物が増殖可能な培地で、一定期間培養を行い、その後、遠心分離等の手段を用いて、菌体を回収すればよいが、培養液をそのまま用いてもよい。本発明の微生物は、偏性嫌気性細菌で、酸素に非常に弱い。そのため、本発明の微生物に対しては、胞子化させる、あるいは酸素に触れないようにカプセルに封入するなどの方法をとることが好ましい。
本発明の動物用生菌剤の投与量は、目的の効果（例えば、対象動物の成長促進や抗病性向上）が得られる量であれば特に限定されず、例えば、ブタ1頭に対して、1日に当たりの微生物の菌体の投与量を1010～1012cfuとすることができ、好ましくは、1010～1011cfuとすることができる。
本発明の動物用生菌剤は、これを単独で経口投与してもよいが、糖質、タンパク質、脂質、繊維質、ビタミン類、ミネラル類などを含む飼料原料と混合し、散剤又はペレット状の飼料とすることもできる。この際使用される飼料原料は、動物用飼料に使用可能なものであればどのようなものでもよく、例えば、動物性飼料原料（脱脂粉乳、ホエー、魚粉、魚など）、穀類（小麦、トウモロコシ、米など）、かす類（大豆かす、大豆油かすなど）、糟糠類（ふすまなど）、リーフミール類（アルファルファミールなど）を使用できる。基礎飼料に胆汁酸を添加し、上述の動物用生菌剤を添加して発酵させることにより製造することもできる。イソアロリトコール酸以外は胆汁酸非添加でも可能である。基礎飼料の種類は特に限定されず、例えば、青刈り牧草、貯蔵牧草、穀類、野菜類、根菜類、乳製品（スキムミルクなど）、未利用、低利用の食品加工副産物（澱粉粕、オカラ、カボチャワタなど）、農産加工副産物（リンゴ果汁絞り粕、ポテトパルプ、ビール酵母など）を使用できる。食品加工副産物や農産加工副産物を基礎飼料として使用することにより、飼料自給率を向上させることができる。また、幼動物に与える飼料においては、それぞれの動物に応じて粗たんぱく質、粗脂肪、粗繊維、粗灰分、ミネラルなどが調製された公知の代用乳を基礎飼料とすることができる。
（Ｃ）有用腸内微生物の増殖剤
本発明の有用腸内微生物の増殖剤は、ラフィノース及び／又はスタキオースを有効成分として含有することを特徴とするものである。
増殖対象とする有用腸内微生物は、例えば、上記の本発明の微生物であり、好ましくは、NP-1株である。
本発明の有用腸内微生物の増殖剤は、ラフィノース若しくはスタキオース、又はこれらの両者を含むが、それ以外の成分を含んでいてもよい。例えば、胆汁酸若しくはマンガン、又はこれらの両者を含んでいてもよい。また、本発明の有用腸内微生物の増殖剤は、ラフィノース以外の糖（単糖、二糖、オリゴ糖、多糖）を含んでいてもよいが、含んでいなくてもよい。更に、本発明の有用腸内微生物の増殖剤は、本発明の微生物を増殖させるものなので、増殖対象とする本発明の微生物自体を含んでいてもよい。
投与対象とする動物は、通常、ブタであるが、ブタ以外の動物であってもよい。また、動物にはヒトが含まれていてもよいが、除外されていてもよい。本発明の有用腸内微生物の増殖剤は、動物の成長促進効果や抗病性向上効果を持つ微生物の増殖を促進するので、投与対象動物の成長促進又は抗病性向上のために用いることができる。
本発明の有用腸内微生物の増殖剤は、ラフィノース等の有効成分のみからなるものであってもよいが、賦形剤を加えて製剤化してもよい。賦形剤としては、上記の本発明の動物用生菌剤と同様のものを使用することができる。
本発明の有用腸内微生物の増殖剤の投与量は、有用腸内微生物を増殖できる量であれば特に限定されず、例えばブタ1頭に対して、1日に当たりのラフィノースの投与量を餌重量の0.01～99%とすることができ、好ましくは、0.1%～10%とすることができ、1日に当たりのスタキオースの投与量を餌重量の0.01～99%とすることができ、好ましくは、0.1%～10%とすることができる。また、胆汁酸を含む場合は、ブタ1頭に対して、1日に当たりの胆汁酸の投与量を餌重量の0.01～10%とすることができ、好ましくは、0.1～1%とすることができる。マンガンを含む場合は、ブタ1頭に対して、1日に当たりのマンガンの投与量を餌重量の0.001～50%とすることができ、好ましくは、0.01%～0.5%とすることができる。
本発明の有用腸内微生物の増殖剤は、これを単独で経口投与してもよいが、飼料原料と混合し、飼料とすることもできる。飼料の調製は、上記の本発明の動物用生菌剤と同様に行うことができる。
（Ｄ）スクリーニング方法
本発明のスクリーニング方法は、動物の成長促進に効果のある物質のスクリーニング方法であって、下記の工程（１）及び（２）を含むことを特徴とするものである。
工程（１）では、被験物質の存在下で、上記の本発明の微生物を培養する。被験物質の種類は特に限定されず、有機化合物又は無機化合物のいずれであってもよい。有機化合物としては、糖類、アミノ酸類、ペプチド類、脂質類、核酸類などを被検物質とすることができる。本発明の微生物の培養は、上述した通り、クロストリジウム属に属する微生物に一般的に適用されている方法によって培養することができる。
工程（２）では、本発明の微生物を増殖させる被験物質を、動物の成長促進に効果のある物質として選択する。本発明の微生物に含まれるNP-1株は、成長性のよい動物（ブタ）に多かったことから、NP-1株やこれに類似する微生物を増殖させる物質は、「動物の成長促進に効果のある物質」であると予想される。被験物質により微生物が増殖したかどうかは、被験物質の非存在下で、同様の培養を行い、培養後の菌体量を比較することにより判断できる。動物の種類は、通常、ブタであるが、ブタ以外の動物であってもよい。
以下に、実施例により本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこの実施例に限定されるものではない。
〔実施例１〕本新規株の分離
世界的に広く実施されている成長性の良いブタ、悪いブタの腸内細菌叢解析から（参考：Microbiome. 2020;8(1):110、Front Microbiol. 2023;14:1239847、）、成長性や飼料効率の良いブタに特徴的なClostridium_sensu_scrict1に着目しClostridium属細菌の分離を行った。分離は、既報(Nature,2016. 533,543-546)を参考に、YCFA培地（https://www.jcm.riken.jp/cgi-bin/jcm/jcm_grmd?GRMD=1130）を改良した培地（胆汁酸添加、VFAmixは除く）を用いて行った。その結果、NP-1株を分離した。
〔実施例２〕本新規株の有機酸及びメタボローム解析
メタボローム解析
培地は、10 mL のYCFA培地を用いた。培地を入れた血清ボトルはブチル栓とアルミキャップシールで密閉し、ガス置換装置で内部に嫌気ガス（窒素75%、二酸化炭素20%、水素5%）を充填した。必要に応じて、培地には100μLの5%ブタ胆汁末（富士フイルム和光純薬）溶液を添加した。NP-1株を接種後、37℃48時間培養で培養し、培養液を遠心し0.2μmのフィルターでろ過した後、培養液のメタボローム解析を行った。LC-MSによるHM400 Metabolomics（https://www.nature.com/articles/nm.4358）を用いて、胆汁酸を含まない培地で培養した培養液（YC-1,2,3）、胆汁酸添加培地で培養した培養液（Yb-1,2,3）, 胆汁酸添加培地の培養前の培地（Y1,2,3）について、メタボローム解析を行った。
有機酸分析
培養液を適宜希釈し、HPLC system(LC-UV; Shimadzu) を用いて分析した。Shim-packSCR-102H カラム (8 × 300 mm; Shimadzu、SCR-102H ガードカラムとCDD-10Avp conductivity detectorを装備). 移動相は、2.5 mM p-トルエンスルホン酸、ポストカラム緩衝液は2.5 mM p-トルエンスルホン酸, 50 μM EDTA及び 10 mM Bis-Trisを用いた。
胆汁酸添加培地中でNP-1株が生産した代表的な代謝産物を表１に示す。
表１に示すように、NP-1株は、抗酸化物質のフェルラ酸、抗菌作用を有するギ酸やイソアロリトコール酸を生産することが明らかとなった。イソアロリトコール酸は、本株のゲノム情報からは想定されなかった代謝産物である。また、イソアロリトコール酸は、ヒト長寿者（100歳以上）に多いことが慶応大のグループにより明らかにされている (Nature, 2021. 599,458-464. https://doi.org/10.1038/s41586-021-03832-5）。成長性の良い豚に優勢であった株が本物質を生産することは、ブタの成長に影響する可能性を示唆する。
〔実施例３〕本新規株とヒト分離同種菌株との16S ribosomal RNAの対比
ブタ盲腸内容物（約１g/10mL）を70%エタノールに1:1の割合で懸濁し、4時間室温で放置した。その後、遠心で上清除き、PBSバッファーに懸濁した。この懸濁液をYCFA寒天培地（以下を追加：5g/L Meat extract, 2g/L Starch, 500 μL VitaminK(0.2g/20mLエタノール)）に塗布し、72時間37℃で、嫌気培養を行った。作業はすべて、嫌気チャンバー内で行った。72時間後、コロニーをピックアップし、16S rRNA遺伝子解析を行った。
Primerは真正細菌の16S rRNA遺伝子で高度に保存された領域を用いて設計されたuniversal primerである27F (5-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3、配列番号２)と1525R (5- AAAGGAGGTGATCCAGCC-3、配列番号３)を使用した。DNAポリメラーゼはTakara Ex Taq Hot start versionを使用した。
PCR産物 (20 μl) をアガロースゲル電気泳動 (和光純薬 Agarose Sを1％、100 Vの電圧)に供した。緩衝液には、1×TAE (Tris-acetate 40 mM、EDTA 1 mM、pH 7.2)を使用した。アガロースゲル電気泳動後、Gel Extraction KIT (QIAGEN) を用いて、ゲルからDNA回収、シークエンス反応のテンプレートとして用いた。シークエンス反応は、BigDye Terminator v.3.1キットを用いた。反応液をエタノール沈殿後、ホルムアミドに懸濁し、DNAシーケンサー GENETIC Analyzer 3500xLで配列を解析した。その後、配列をBLAST searchで検索し、菌種を選択した。
NP-1株の16S rRNA遺伝子の塩基配列を配列番号１に示す。NP-1株の16S rRNA遺伝子は、ヒトから分離されたClostridium属の菌株の16S rRNA遺伝子と99.7％の相同性を示した。このことから、NP-1株はClostridium属に属すると考えられる。一方、NP-1株は、16S rRNA遺伝子の配列が完全に一致せず、また、分離源が大きく異なることから、このヒト分離菌株と異なる菌株であると考えられる。
〔実施例４〕 本新規株を増殖させる物質の検討
胆汁酸又はマンガンを添加した細菌用培地で、NP-1株を培養し、これらの物質がNP-1株の増殖に与える影響を調べた。細菌用培地としては、YCFA培地を用いた。胆汁酸については、培地10 mLに対して、100μLの5%ブタ胆汁末（富士フイルム和光純薬）溶液を添加して行った。マンガンについては、培地10 mLに対して、100μLの硫化マンガン・5水和物（ナカライテスク(株)：5mg/100mL蒸留水）を添加した。37℃で18時間培養後の培地の濁度（OD600）を測定し、NP-1株の増殖を評価した。
胆汁酸、マンガンのいずれも添加しなかった場合（Control）、胆汁酸のみを添加した場合（bile）、マンガンのみを添加した場合（Mn）、胆汁酸とマンガンを添加した場合（bile+Mn）の濁度を図１に示す。図に示すように、胆汁酸及びマンガンは、NP-1株の増殖を向上させることが明らかとなった。
〔実施例５〕 本新規株を増殖させる糖の検討
細菌用培地に、単一糖源としてグルコース（Glucose）、キシロビオース（Xylobiose）、ラクトース（Lactose）、ラムノース（Rhamnose）、ラフィノース（Raffinose）、アラビノース（Arabinose）、キシラン（Xylane）、マンノース（Mannose）、D-ピニトール（D-pinitol）、又はスタキオース（Stachyose）を添加し、NP-1株を培養した。培地中の濃度が0.5%になるように各糖を添加した。グルコースは、一般的に細菌全体が資化できるコントロールとして使用した。NP-1株の培養及び増殖の評価は、実施例４と同様に行った。
各糖を添加した場合の濁度を図２に示す。図に示すように、NP-1株はラフィノース及びスタキオースを資化できることが明らかとなった。また、わずかであるが、キシロビオース、ラクトース、キシランについても、増殖が確認された。その他の糖では、ほぼ増殖しないことが確認された。この結果から、NP-1株のプレバイオティクスとして、ラフィノース及びスタキオースが有望であると考えられる。
また、NP-1株は成長性の良いブタに多い。つまり、NP-1株の増殖を向上させる物質はブタの成長にもよいと予想される。そこで、 NP-1株を、ブタの成長性に効果のある物質のスクリーニングに利用できると考えられる。
本明細書で引用した全ての刊行物、特許および特許出願をそのまま参考として本明細書にとり入れるものとする。
本発明は、畜産業などの産業分野において利用可能である。

Claims (8)

  1. クロストリジウム（Clostridium）属に属し、胆汁酸存在下で、イソアロリトコール酸生産能を有することを特徴とする微生物であって、配列番号１に記載の塩基配列からなる16S rRNA遺伝子を有することを特徴とする微生物。
  2. クロストリジウム（Clostridium）属に属し、胆汁酸存在下で、イソアロリトコール酸生産能を有することを特徴とする微生物であって、受託番号NITE BP-04072で特定される菌株であることを特徴とする微生物。
  3. クロストリジウム（Clostridium）属に属し、胆汁酸存在下で、イソアロリトコール酸生産能を有する微生物であって、配列番号１に記載の塩基配列からなる16S rRNA遺伝子を有する微生物を含有することを特徴とする動物用生菌剤。
  4. クロストリジウム（Clostridium）属に属し、胆汁酸存在下で、イソアロリトコール酸生産能を有することを特徴とする微生物であって、受託番号NITE BP-04072で特定される菌株である微生物を含有することを特徴とする動物用生菌剤。
  5. 動物が、ブタであることを特徴とする請求項３又は４に記載の動物用生菌剤。
  6. ラフィノース及び／又はスタキオースを有効成分として含有することを特徴とする有用腸内微生物の増殖剤であって、有用腸内微生物が、配列番号１に記載の塩基配列からなる16S rRNA遺伝子を有する微生物であることを特徴とする有用腸内微生物の増殖剤。
  7. ラフィノース及び／又はスタキオースを有効成分として含有することを特徴とする有用腸内微生物の増殖剤であって、有用腸内微生物が、受託番号NITE BP-04072で特定される菌株であることを特徴とする有用腸内微生物の増殖剤。
  8. 請求項１又は２に記載の微生物を更に含むことを特徴とする請求項６又は７に記載の有用腸内微生物の増殖剤。
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