JP7783217B2

JP7783217B2 - アズブジンを含む抗腫瘍医薬組成物

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Publication number: JP7783217B2
Application number: JP2023083308A
Authority: JP
Inventors: パン・リー; リミン・ジア; ジヨン・シン; ザオヤン・ワン
Original assignee: ホーナン・ジェニュイン・バイオテック・カンパニー・リミテッド
Priority date: 2023-03-03
Filing date: 2023-05-19
Publication date: 2025-12-09
Anticipated expiration: 2043-05-19
Also published as: EP4424310C0; EP4424310A1; CN116212030A; EP4424310B1; JP2024125139A; TW202435855A; WO2024183644A1; US11878028B1; KR20250166964A

Description

本発明は、医薬品の分野に属し、具体的にはアズブジンを含む抗腫瘍医薬組成物に関する。

デオキシシチジンキナーゼ（ＤＣＫ）は、幅広い基質の特異性を備えた酵素であり、ピリミジン及びプリンデオキシヌクレオシドをリン酸化することができ、デオキシヌクレオシド生合成のサルベージ経路における肝要な酵素であり、正常なＤＮＡ代謝を維持して様々な抗ウイルス及び抗がんのヌクレオシド類似体薬物（これらの薬物は、リン酸化された後にのみ活性化され、それによって腫瘍の増殖を阻害する。）をリン酸化することができる。過去数十年間、広く研究されているアポトーシスについての放射線治療戦略は、腫瘍治療に重要な手段の１つになっている。

アズブジンは、広域スペクトルＲＮＡウイルス阻害剤であり、人工的に合成されたウイルスＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲｄＲｐ）のヌクレオシド類似体として、細胞内で抗ウイルス活性を有する５’－三リン酸塩代謝物（アズブジン三リン酸塩）に代謝され、新型コロナウイルスポリメラーゼ（ＲｄＲｐ）に特異的に作用することができ、ウイルスのＲｄＲｐを標的として宿主細胞においてＲｄＲｐの活性を阻害することにより、ＲＮＡ鎖の合成と複製をブロックすることができる。２０２１年７月、アズブジン錠は、ウイルス量の高い成人のＨＩＶ－１感染患者を治療するために用いられるのが中国での販売に承認された。また、２０２２年７月、アズブジンは、新型コロナウイルス感染症の治療薬として承認された。

特許文献ＣＮ２０１０１０５０６５９５．Ｘには、結腸がん、肝臓癌、胃癌、食道癌、肺癌、乳がん、子宮頸癌、白血病、リンパ腫などの腫瘍を治療するためにアズブジンを使用することが開示されている。アズブジンは様々なヒトのがん細胞や動物の移植腫瘍に対して明らかな阻害効果を有することが見られた。

ＥＧＦＲ（上皮成長因子受容体、Epidermal Growth Factor Receptor）は、膜貫通タンパク質チロシンキナーゼｅｒｂＢ受容体ファミリーのメンバーである。ＥＧＦＲは、上皮成長因子（ＥＧＦ）などのそのリガンドに結合することにより、細胞膜上でホモ二量体を形成したり、ファミリー内の他の受容体（例えば、ｅｒｂＢ２、ｅｒｂＢ３、又はｅｒｂＢ４）とヘテロ二量体を形成したりできる。これらの二量体の形成により、ＥＧＦＲ細胞内の肝要なチロシン残基がリン酸化されることが可能になり、それによって細胞内の複数の下流のシグナル伝達経路が活性化される。これらの細胞内のシグナル伝達経路は、細胞の増殖、生存及び抗アポトーシスにおいて重要な役割を果たす。リガンド及び受容体の発現増加、ＥＧＦＲ遺伝子の増幅及び変異などを含むＥＧＦＲシグナル伝達経路の調節不全は、細胞の悪性形質転換を促進し、腫瘍細胞の増殖、浸潤、転移及び血管新生に重要な役割を果たす。ＥＧＦＲは、膀胱がん、脳腫瘍、頭頸部がん、膵臓がん、肺癌、乳がん、卵巣がん、結腸がん、前立腺がん及び腎臓がんなど多くのヒトの悪性疾患で過剰発現されることが報告されている。また、ＥＧＦＲの過剰発現は、患者の予後不良と関連している場合が多い。

肺癌は、がんの中でも罹患率が最も高く、その約８５％が非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である。統計によると、２０２０年に世界中で新たに診断された肺癌罹患数が２２０万人であり、肺癌で死亡した人が１８０万人であり、がん関連死亡者の約１８％を占め、５年生存率がわずか１０％～２０％であった。統計によると、世界中の様々な国や地域のＮＳＣＬＣ患者の約１０％～４０％には上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）変異が発生したから、ＥＧＦＲを標的とすることは非小細胞肺癌に重要な治療戦略である。臨床的には、ＥＧＦＲ阻害剤の使用は、ＥＧＦＲ変異陽性非小細胞肺癌に対する第一選択治療の標準療法となっている。

第１世代のＥＧＦＲ阻害剤は、可逆的競合阻害剤であり、代表的な薬剤としてゲフィチニブ、エルロチニブである。しかしながら、５０～６０％の患者は、１～２年後に、Ｔ７９０Ｍ変異を発生するという主な分子メカニズムで薬剤耐性を生じることがある。第２世代のＥＧＦＲ阻害剤は、共有結合型阻害剤であり、代表的な薬剤としてアファチニブであり、第１世代のＥＧＦＲ阻害剤よりも治療効果に優れるが、依然として患者にＴ７９０Ｍ変異による薬剤耐性を引き起こす恐れがある。第３世代のＥＧＦＲ阻害剤は、主にＴ７９０Ｍ薬剤耐性変異を対象として設計され、代表的な薬剤としてオシメルチニブがあるが、１年程度に使用されると、Ｃ７９７Ｓ変異による薬剤耐性が生じる恐れがある。現在、ＥＧＦＲ阻害剤の薬剤耐性の問題を解決するために、新しいＥＧＦＲ阻害剤が世界中で開発されている。中国では人口が多く、喫煙者も多く、肺癌の発生率が他の国よりも高いため、肺癌患者の５年生存率を高めるために新しい肺癌治療薬を開発するのは中国にとってより重要である。

マルチメカニズム併用投与は、腫瘍薬剤に対する薬剤耐性の発生を遅らせたり、回避したりするための重要な戦略である。現在の非小細胞肺癌の治療戦略及びＥＧＦＲ阻害剤の研究の進歩によれば、マルチメカニズムの非小細胞肺癌併用薬は、薬剤耐性の発生を遅らせ、有効性と安全性を高め、それによって患者の生存期間を延長するという目標を達成する。

本開示は、アズブジンとＥＧＦＲ阻害剤との医薬組み合わせ製品、及び腫瘍疾患を予防又は治療するための薬物の調製におけるこの医薬組成物製品の使用を提供する。

本発明に係る医薬組成物は、各単剤と比較して、以下の利点を有する。
１．併用後、各単剤の腫瘍抑制効果が向上した。
２．薬剤耐性の発生が遅くなり、有効性及び安全性が向上し、それによって患者の生存期間を延長することが図れる。

本発明の技術的課題を解決するために、本発明は、
（ｉ）アズブジン或いはその薬学的に許容される塩、立体異性体又はアイソトープ誘導体と、
（ｉｉ）ＥＧＦＲ／ＴＫＩ阻害剤と、を含む医薬組み合わせ製品を提供する。

本発明における好ましい技術的態様では、前記ＥＧＦＲ／ＴＫＩ阻害剤は、オシメルチニブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ、ドキシチニブ、オルムチニブ、イコチニブ、ピロチニブ、ダコミチニブ、アファチニブ、ネラチニブ、ラパチニブ、ＡＢＴ－４１４、バルリチニブ、ＨＬＸ－０７、テセバチニブ、テリアチニブ、エペルチニブコハク酸塩、Ｓ－２２２６１１、フルモネルチニブ、ベフォテルチニブ、レジベルチニブ、ポジオチニブ及びれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。

本発明における好ましい技術的態様では、前記ＥＧＦＲ／ＴＫＩ阻害剤は、オシメルチニブ、ドキシチニブ、又はそれらの組み合わせである。

本発明における好ましい技術的態様では、前記（ｉ）及び（ｉｉ）は同時に、別々に、連続的に投与されるか、又は前記（ｉ）及び（ｉｉ）は同じ剤形に存在する。

また、本発明は、腫瘍関連疾患を治療するための上記医薬組み合わせ製品を提供する。

本発明における好ましい技術的態様では、前記腫瘍関連疾患は、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、黒色腫、脳腫瘍、食道癌、胃癌、肝臓癌、膵臓がん、結腸直腸癌、肺癌、腎がん、皮膚癌、神経膠芽腫、神経芽細胞腫、肉腫、脂肪肉腫、骨軟骨腫、骨腫、骨肉腫、セミノーマ、精巣腫瘍、子宮癌、頭頸部腫瘍、多発性骨髄腫、悪性リンパ腫、真性多血症、白血病、甲状腺腫瘍、尿管腫瘍、膀胱腫瘍、胆嚢がん、非小細胞肺癌、胆管癌及び絨毛癌からなる群により選択され、好ましくは非小細胞肺癌である。

いくつかの実施形態では、前記アズブジンの用量は１～１００ｍｇの範囲であり、前記ＥＧＦＲ／ＴＫＩ阻害剤の用量は１～１００ｍｇの範囲である。

本開示に記載されるアズブジンの用量は、１ｍｇ、２ｍｇ、３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、１０ｍｇ、１１ｍｇ、１２ｍｇ、１３ｍｇ、１４ｍｇ、１５ｍｇ、１６ｍｇ、１７ｍｇ、１８ｍｇ、１９ｍｇ、２０ｍｇ、２１ｍｇ、２２ｍｇ、２３ｍｇ、２４ｍｇ、２５ｍｇ、２６ｍｇ、２７ｍｇ、２８ｍｇ、２９ｍｇ、３０ｍｇ、３１ｍｇ、３２ｍｇ、３３ｍｇ、３４ｍｇ、３５ｍｇ、３６ｍｇ、３７ｍｇ、３８ｍｇ、３９ｍｇ、４０ｍｇ、４１ｍｇ、４２ｍｇ、４３ｍｇ、４４ｍｇ、４５ｍｇ、４６ｍｇ、４７ｍｇ、４８ｍｇ、４９ｍｇ、５０ｍｇ、５１ｍｇ、５２ｍｇ、５３ｍｇ、５４ｍｇ、５５ｍｇ、５６ｍｇ、５７ｍｇ、５８ｍｇ、５９ｍｇ、６０ｍｇ、６１ｍｇ、６２ｍｇ、６３ｍｇ、６４ｍｇ、６５ｍｇ、６６ｍｇ、６７ｍｇ、６８ｍｇ、６９ｍｇ、７０ｍｇ、７１ｍｇ、７２ｍｇ、７３ｍｇ、７４ｍｇ、７５ｍｇ、７６ｍｇ、７７ｍｇ、７８ｍｇ、７９ｍｇ、８０ｍｇ、８１ｍｇ、８２ｍｇ、８３ｍｇ、８４ｍｇ、８５ｍｇ、８６ｍｇ、８７ｍｇ、８８ｍｇ、８９ｍｇ、９０ｍｇ、９１ｍｇ、９２ｍｇ、９３ｍｇ、９４ｍｇ、９５ｍｇ、９６ｍｇ、９７ｍｇ、９８ｍｇ、９９ｍｇ、１００ｍｇから選択される。

本開示に記載されるＥＧＦＲ／ＴＫＩ阻害剤の用量は、１ｍｇ、２ｍｇ、３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、１０ｍｇ、１１ｍｇ、１２ｍｇ、１３ｍｇ、１４ｍｇ、１５ｍｇ、１６ｍｇ、１７ｍｇ、１８ｍｇ、１９ｍｇ、２０ｍｇ、２１ｍｇ、２２ｍｇ、２３ｍｇ、２４ｍｇ、２５ｍｇ、２６ｍｇ、２７ｍｇ、２８ｍｇ、２９ｍｇ、３０ｍｇ、３１ｍｇ、３２ｍｇ、３３ｍｇ、３４ｍｇ、３５ｍｇ、３６ｍｇ、３７ｍｇ、３８ｍｇ、３９ｍｇ、４０ｍｇ、４１ｍｇ、４２ｍｇ、４３ｍｇ、４４ｍｇ、４５ｍｇ、４６ｍｇ、４７ｍｇ、４８ｍｇ、４９ｍｇ、５０ｍｇ、５１ｍｇ、５２ｍｇ、５３ｍｇ、５４ｍｇ、５５ｍｇ、５６ｍｇ、５７ｍｇ、５８ｍｇ、５９ｍｇ、６０ｍｇ、６１ｍｇ、６２ｍｇ、６３ｍｇ、６４ｍｇ、６５ｍｇ、６６ｍｇ、６７ｍｇ、６８ｍｇ、６９ｍｇ、７０ｍｇ、７１ｍｇ、７２ｍｇ、７３ｍｇ、７４ｍｇ、７５ｍｇ、７６ｍｇ、７７ｍｇ、７８ｍｇ、７９ｍｇ、８０ｍｇ、８１ｍｇ、８２ｍｇ、８３ｍｇ、８４ｍｇ、８５ｍｇ、８６ｍｇ、８７ｍｇ、８８ｍｇ、８９ｍｇ、９０ｍｇ、９１ｍｇ、９２ｍｇ、９３ｍｇ、９４ｍｇ、９５ｍｇ、９６ｍｇ、９７ｍｇ、９８ｍｇ、９９ｍｇ、１００ｍｇから選択される。

いくつかの実施形態では、前記アズブジンは、用量が１～１００ｍｇの範囲であり、投与頻度が１日１回、１日２回、又は１日３回でよく、前記ＥＧＦＲ／ＴＫＩ阻害剤は、用量が１～１００ｍｇの範囲であり、投与頻度が１日１回、１日２回又は１日３回でよい。

いくつかの実施形態では、前記アズブジンは、用量が１～６０ｍｇの範囲であり、投与頻度が１日１回又は１日２回でよく、前記ＥＧＦＲ／ＴＫＩ阻害剤は、用量が１～６０ｍｇの範囲であり、投与頻度が１日１回である。

いくつかの実施形態では、前記アズブジンは、用量が１～２０ｍｇの範囲であり、投与頻度が１日１回又は１日２回でよく、前記ＥＧＦＲ／ＴＫＩ阻害剤は、用量が１～２０ｍｇの範囲であり、投与頻度が１日１回である。

いくつかの実施形態では、前記アズブジンは、用量が１～１０ｍｇの範囲であり、投与頻度が１日１回又は１日２回でよく、前記ＥＧＦＲ／ＴＫＩ阻害剤は、用量が１～１０ｍｇの範囲であり、投与頻度が１日１回である。

いくつかの実施形態では、前記ＥＧＦＲ／ＴＫＩ阻害剤は、用量が１ｍｇ、２ｍｇ、２．５ｍｇ、３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、１０ｍｇ、１１ｍｇ、１２ｍｇ、１３ｍｇ、１４ｍｇ、１５ｍｇ、１６ｍｇ、１７ｍｇ、１８ｍｇ、１９ｍｇ、２０ｍｇ、２１ｍｇ、２２ｍｇ、２３ｍｇ、２４ｍｇ、２５ｍｇ、２６ｍｇ、２７ｍｇ、２８ｍｇ、２９ｍｇ、３０ｍｇ、３１ｍｇ、３２ｍｇ、３３ｍｇ、３４ｍｇ、３５ｍｇ、３６ｍｇ、３７ｍｇ、３８ｍｇ、３９ｍｇ、４０ｍｇ、４１ｍｇ、４２ｍｇ、４３ｍｇ、４４ｍｇ、４５ｍｇ、４６ｍｇ、４７ｍｇ、４８ｍｇ、４９ｍｇ、５０ｍｇから選択され、投与頻度が１日１回又は１日２回であり、前記ＥＧＦＲ／ＴＫＩ阻害剤は、用量が１０ｍｇ、２０ｍｇ、４０ｍｇ、６０ｍｇから選択され、投与頻度が１日１回である。

いくつかの実施形態では、前記アズブジンは、用量が１ｍｇ、２ｍｇ、３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、１０ｍｇ、１１ｍｇ、１２ｍｇ、１３ｍｇ、１４ｍｇ、１５ｍｇ、１６ｍｇ、１７ｍｇ、１８ｍｇ、１９ｍｇ、２０ｍｇから選択され、投与頻度が１日１回又は１日２回であり、前記アズブジンは、用量が１ｍｇ、２ｍｇ、４ｍｇ、６ｍｇから選択され、投与頻度が１日１回である。

いくつかの実施形態では、前記ＥＧＦＲ／ＴＫＩ阻害剤は、用量が１ｍｇ、２ｍｇ、３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、１０ｍｇから選択され、投与頻度が１日１回又は１日２回であり、前記ＥＧＦＲ／ＴＫＩ阻害剤は、用量が１０ｍｇ、２０ｍｇ、４０ｍｇ、６０ｍｇから選択され、投与頻度が１日１回である。

いくつかの実施形態では、前記ＥＧＦＲ／ＴＫＩ阻害剤は、用量が１ｍｇ、２ｍｇ、４ｍｇ、６ｍｇ、８ｍｇから選択され、投与頻度が１日１回又は１日２回であり、前記ＥＧＦＲ／ＴＫＩ阻害剤は、用量が１ｍｇ、２．５ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇから選択され、投与頻度が１日１回である。

本発明に記載されている併用の投与経路としては、経口投与、非経口投与、経皮投与であり、好ましくは経口投与である。前記非経口投与には、静脈内注射、皮下注射、筋肉注射が含まれるが、これらに限定されない。

また、本発明は、上記アズブジンと、ＥＧＦＲ／ＴＫＩ阻害剤と、一つまたは複数の薬学的に許容される担体、賦形剤、希釈剤との医薬組成物を提供する。前記医薬組成物は、任意の薬学的に許容される剤形にすることができる。例えば、錠剤、カプセル剤、滴丸剤、粒剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤、注射剤（インフュジョン、注射用無菌粉末及び注射用濃溶液を含む）、坐剤、吸入剤又はスプレー剤として製剤化することができる。前記医薬組成物は、同じ剤形にしてもよく、例えば、アズブジン及びＥＧＦＲ／ＴＫＩ阻害剤を、複合錠剤、複合カプセル剤、複合滴丸剤、複合粒剤、複合溶液剤、複合懸濁剤、複合シロップ剤、複合注射剤（インフュジョン、注射用無菌粉末及び注射用濃溶液を含む）、複合坐剤、複合吸入剤又は複合スプレー剤として製剤化することができる。

また、本発明は、有效量の上記アズブジン及び有効量の上記ＥＧＦＲ／ＴＫＩ阻害剤を患者に投与することを含む腫瘍疾患の治療方法、を提供する。

また、本発明は、本開示に記載されているアズブジンとＥＧＦＲ／ＴＫＩ阻害剤との医薬組成物が包装された、腫瘍疾患を治療するための薬物において用いられる医薬キットを提供する。

本発明では、アズブジンとＥＧＦＲ／ＴＫＩ阻害剤を併用投与することにより、腫瘍疾患を治療するための薬物の効果が増強される。

本発明に記載される「併用」は、投与方式であり、所定の期間内に少なくとも１つの用量でアズブジンと少なくとも１つの用量でＥＧＦＲ／ＴＫＩ阻害剤を投与し、両方の薬剤とも薬理学的効果を示すことを指す。前記期間は、一つの投与周期内としてもよく、４週間以内、３週間以内、２週間以内、１週間以内、又は２４時間以内であることが好ましく、１２時間以内であることがより好ましい。アズブジン及びＥＧＦＲ／ＴＫＩ阻害剤は、同時に投与してもよく、連続して投与してもよい。この期間には、アズブジン及びＥＧＦＲ／ＴＫＩ阻害剤が同じ投与経路又は異なる投与経路で投与されるような治療が含まれる。

図１は、ヒト肺癌ＮＣＩ－Ｈ１９７５マウス皮下移植腫瘍の腫瘍体積に対するアズブジン（ＦＮＣ）とオシメルチニブの単独又は併用の影響である。図２は、マウスの腫瘍重量に対するアズブジンとオシメルチニブの単独又は併用の影響である。図３は、ヒト肺癌ＮＣＩ－Ｈ１９７５によるマウス皮下移植腫瘍の腫瘍体積に対するアズブジンとドキシチニブの単独又は併用の影響である。図４は、マウスの腫瘍重量に対するアズブジンとドキシチニブの単独又は併用の影響である。図５は、アズブジン、オシメルチニブ、ドキシチニブの化学構造である。

以下、本開示を実施例に合わせてより詳細に説明する。本開示の実施例は、本開示の技術的態様を説明するためにのみ使用され、本開示の本質及び範囲を限定するものではない。

実験材料
実験動物及び飼育環境
実験動物
種：マウス
系統：ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス
週齢及び体重：６～８週齢、１７．４２～２３．７１ｇ
性別：雌
数量：４０匹（群分けから残したマウスが含まれていない）
サプライヤー：浙江維通利華実験動物有限公司

飼育環境
動物が到着してから実験環境で７日間飼育してから実験を開始した。動物をＳＰＦグレードの動物室でＩＶＣ（独立換気システム）ケージで飼育した（ケージあたり４匹）。各ケージの動物情報カードに、ケージ内の動物の数、性別、系統、受領日、投薬レジメン、実験番号、グループ及び実験開始日が示されている。すべてのケージ、床敷材及び飲料水は使用前に滅菌された。ケージ、飼料及び飲料水は週に２回交換した。飼育環境及び光照射状況は次の通りであった。
－温度：２０～２６°Ｃ
－湿度：４０～７０％
－光照射周期：１２時間光照射、１２時間光照射なし（午前８時に点灯～午後８時に消灯）

ケージ：ポリカーボネート製、体積３２５ｍｍ×２１０ｍｍ×１８０ｍｍ。床敷材はとうもろこしの穂軸で、週に２回交換した。
食物：実験動物に、実験期間中、食物（照射滅菌済みの乾燥ペレット状食物）を自由に摂取させた。
飲料水：実験動物に滅菌水を自由に飲ませた。
ケージの識別：各ケージの動物情報に、ケージ内の動物の数、性別、系統、受領日、投薬レジメン、実験番号、グループ及び実験開始日を示した。
動物の識別：実験動物は耳タグで識別された。

実施例１
実験目的：ヒト肺癌ＮＣＩ－Ｈ１９７５（ＥＧＦＲＬ８５８Ｒ／Ｔ７９０Ｍ）細胞株ＢＡＬＢ／ｃヌード雌マウスの皮下異種移植動物モデルにおけるアズブジンとオシメルチニブの併用の抗腫瘍効果を評価する。

ＮＣＩ－Ｈ１９７５を、１０％血清を含むＲＰＭＩ１６４０培地に使用し、３７°Ｃ、５％ＣＯ_２無菌恒温条件下で培養し、各ボトル内の細胞のコンフルエンスが９０％以上に達したら、細胞を消化し、ＰＢＳに再懸濁し、細胞カウンターでカウントしながら細胞濃度が５ｘ１０^７個／ｍｌになるようにし、各マウスにを０．１ｍｌ注射した。８継代細胞をヌードマウスの皮下に接種し、腫瘍が８００ｍｍ^３程度に成長したところで腫瘍を取り出し、２×２×２ｍｍ^３のサイズに切り取り、各マウスの右背中に接種した。接種後の腫瘍の平均体積が１００～１２０ｍｍ^３に達したとき、腫瘍体積と動物の体重に基づいてランダム化層別グループ分け法を採用して各グループに投薬を開始した。肺癌細胞株モデルを、ランダムに各群８匹ずつに４つの実験群に分けた。グループ分け後に、２８日間連続投薬した。

腫瘍体積抑制率（ＴＧＩ_ＴＶ）：
ＴＧＩ_ＴＶ（％）＝［１－（Ｔｉ－Ｔ０）／（Ｖｉ－Ｖ０）］×１００％
（Ｔｉ：投与ｉ日目の治療群の腫瘍体積平均値、Ｔ０：投与０日目の治療群の腫瘍体積平均値、Ｖｉ：投与ｉ日目の溶媒対照群の腫瘍体積平均値、Ｖ０：投与０日目の溶媒対照群の腫瘍体積平均値）

腫瘍重量抑制の結果（Ｔ_重量／Ｃ_重量）：
実験終了後、生き残った動物を安楽死させ、腫瘍組織を剥がし、腫瘍重量を秤量し、各群の腫瘍重量の差を計算し、そして腫瘍重量抑制結果（Ｔ_重量／Ｃ_重量）を次の計算式で計算した。
腫瘍重量抑制結果（Ｔ_重量／Ｃ_重量）％＝Ｗ_{Ｍｅａｎ治療群}／Ｗ_{Ｍｅａｎ溶媒対照群}×１００％、ここでは、Ｗは腫瘍重量を指す。

腫瘍体積抑制の結果
各群の担癌マウスの腫瘍体積変化曲線を図１に示し、異なる時点での平均腫瘍体積と有意統計を表１に示す。初回投与日をＤａｙ０とした。投与２８日後、対照群と比較して、Ｇ２を除く各投与群の腫瘍体積に有意差が認められた。腫瘍ＴＧＩは、オシメルチニブ＋アズブジン（２．５＋１ｍｐｋ）群（９４．５％）＞オシメルチニブ群（６６．４％）＞アズブジン（１ｍｐｋ）群（３５．７％）の順になった。

腫瘍重量抑制の結果
対照群と治療群における担癌マウスのＴ_重量／Ｃ_重量パーセンテージを表２に、各群の担癌マウスの腫瘍重量変化曲線を図２に示す。

肺癌細胞株ＮＣＩ－Ｈ１９７５担癌マウスモデルでは、腫瘍阻害率ＴＧＩ（％）の統計分析の結果は、アズブジンが用量依存的に腫瘍増殖を阻害する効果があったことを示した。アズブジンとオシメルチニブの併用により、それぞれの単剤の腫瘍抑制効果が向上した。本実験における被験薬の投与量は、動物に明らかな毒副作用を与えず、安全性が良好であった。

実施例２
実験目的：ヒト肺癌ＮＣＩ－Ｈ１９７５（ＥＧＦＲＬ８５８Ｒ／Ｔ７９０Ｍ）細胞株ＢＡＬＢ／ｃヌード雌マウスの皮下異種移植動物モデルにおけるアズブジンとドキシチニブの併用の抗腫瘍効果を評価する。

ＮＣＩ－Ｈ１９７５細胞を、１０％ウシ胎児血清を加えたＲＰＭＩ１６４０培地、３７oＣ、５％ＣＯ_２インキュベーターの培養条件下で培養した。通常の継代を週に１回行った。細胞の飽和度が８０％～９０％になり、必要な数に達したら、細胞を収集し、カウントして接種した。

腫瘍細胞接種
ＮＣＩ－Ｈ１９７５細胞０．１ｍＬ（５×１０^６）を各マウスの右背中に皮下接種し、腫瘍の平均体積が約１５４ｍｍ^３に達したときに各グループに投薬を開始した。

実験指標は、腫瘍増殖が阻害、遅延又は治癒されるかどうかを調査することであった。腫瘍の直径を、週に２回又は１日おきにノギスで測定した。腫瘍体積は、Ｖ＝０．５ａ×ｂ^２の計算式で算出し、但し、ａ及びｂはそれぞれ腫瘍の長径及び短径を表す。

化合物の抗腫瘍効果は、ＴＧＩ（％）又は相対的腫瘍増殖率Ｔ／Ｃ（％）によって評価された。ＴＧＩ（％）は腫瘍増殖阻害率を反映する。ＴＧＩ（％）は、ＴＧＩ（％）＝［１－（ある治療群の投与終了時の平均腫瘍体積－当該治療群の投与開始時の平均腫瘍体積）／（溶媒対照群の治療終了時の平均腫瘍体積－溶媒対照群の治療開始時の平均腫瘍体積）］×１００％という計算式で計算した。

相対的腫瘍増殖率Ｔ／Ｃ（％）は、Ｔ／Ｃ％＝Ｔ_ＲＴＶ／Ｃ_ＲＴＶ×１００％（ただし、Ｔ_ＲＴＶは治療群のＲＴＶ平均値を表し、Ｃ_ＲＴＶは陰性対照群のＲＴＶ平均値を表す）という計算式で計算した。腫瘍測定の結果から、ＲＴＶ＝Ｖ_ｔ／Ｖ_０という計算式で相対的腫瘍体積（ｒｅｌａｔｉｖｅｔｕｍｏｒｖｏｌｕｍｅ，ＲＴＶ）を算出し、ここでは、Ｖ_０はグループ投与時（即ちｄ_０）に測定された腫瘍体積であり、Ｖ_ｔはある測定時の腫瘍体積であり、Ｔ_ＲＴＶとＣ_ＲＴＶは同じ日に取得したデータである。

統計分析
統計分析では、各群の各時点での腫瘍体積の平均値及び標準誤差（ＳＥＭ）（具体的なデータについては、表３を参照のこと）を含む。治療群では、投与後２０日目から試験終了時に最高の治療効果を示したため、このデータに基づいた統計分析によりグループ間の差異を評価した。２つのグループ間の比較はＴ－ｔｅｓｔで分析され、３つ以上のグループ間の比較はｏｎｅ－ｗａｙＡＮＯＶＡで分析された。すべてのデータ分析をＰｒｉｓｍで行った。ｐ＜０．０５は有意差と見なされた。

ＮＣＩ－Ｈ１９７５細胞皮下異種移植腫瘍ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに被験薬を投与した後の各群の腫瘍体積変化を表３に、各群の担癌マウスの腫瘍体積変化曲線を図３に示す。

抗腫瘍薬効評価指標

各群の担癌マウスの腫瘍重量変化曲線を図４に示す。

試験結果
実験は、ヒト肺癌細胞株ＮＣＩ－Ｈ１９７５異種移植腫瘍マウスモデルにおいて、アズブジンが用量依存的に腫瘍増殖を阻害する効果があったことを示した。アズブジンとドキシチニブの併用により、それぞれの単剤の腫瘍抑制効果が向上した。

以上、本発明の具体的な実施形態を説明したが、これらは単なる例であり、本発明の原理及び要旨から逸脱することなく、これらの実施形態に対して様々な変更や修正を加え得ることは、当業者なら理解すべきである。従って、本発明の保護範囲は、添付の特許請求の範囲によって定義されるものである。
本明細書は以下の発明の開示を包含する。
［項目１］（ｉ）アズブジン或いはその薬学的に許容される塩、立体異性体又はアイソトープ誘導体と、
（ｉｉ）ＥＧＦＲ／ＴＫＩ阻害剤と、を含む医薬組み合わせ製品。
［項目２］前記ＥＧＦＲ／ＴＫＩ阻害剤が、オシメルチニブ（Ｏｓｉｍｅｒｔｉｎｉｂ）、ゲフィチニブ（Ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ、エルロチニブ（Ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）、ドキシチニブ（Ｄｏｘｉｔｉｎｉｂ）、オルムチニブ（Ｏｌｍｕｔｉｎｉｂ）、イコチニブ（Ｉｃｏｔｉｎｉｂ）、ピロチニブ（Ｐｙｒｏｔｉｎｉｂ）、ダコミチニブ（Ｄａｃｏｍｉｔｉｎｉｂ）、アファチニブ（Ａｆａｔｉｎｉｂ）、ネラチニブ（Ｎｅｒａｔｉｎｉｂ）、ラパチニブ（Ｌａｐａｔｉｎｉｂ）、ＡＢＴ－４１４、バルリチニブ（Ｖａｒｌｉｔｉｎｉｂ）、ＨＬＸ－０７、テセバチニブ（Ｔｅｓｅｖａｔｉｎｉｂ）、テリアチニブ（Ｔｈｅｌｉａｔｉｎｉｂ）、エペルチニブコハク酸塩（Ｅｐａｌｔｉｎｉｂｓｕｃｃｉｎａｔｅ）、Ｓ－２２２６１１、フルモネルチニブ（Ｆｕｒｍｏｎｅｒｔｉｎｉｂ）、ベフォテルチニブ（Ｂｅｆｏｔｅｒｔｉｎｉｂ）、レジベルチニブ（Ｒｅｚｉｖｅｒｔｉｎｉｂ）、ポジオチニブ（Ｐｏｚｉｏｔｉｎｉｂ）、及びそれらの組み合わせからなる群より選択される、項目１に記載の医薬組み合わせ製品。
［項目３］前記ＥＧＦＲ／ＴＫＩ阻害剤が、オシメルチニブ、ドキシチニブ、又はそれらの組み合わせである、項目１又は２に記載の医薬組み合わせ製品。
［項目４］前記（ｉ）及び（ｉｉ）が同時に、別々に、連続的に投与されるか、又は前記（ｉ）及び（ｉｉ）が同一の剤形に存在する、項目１～３のいずれか１項に記載の医薬組み合わせ製品。
［項目５］腫瘍関連疾患の治療に用いられる、項目１～４のいずれか１項に記載の医薬組み合わせ製品。
［項目６］前記腫瘍関連疾患が、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、黒色腫、脳腫瘍、食道癌、胃癌、肝臓癌、膵臓がん、結腸直腸癌、肺癌、腎がん、皮膚癌、神経膠芽腫、神経芽細胞腫、肉腫、脂肪肉腫、骨軟骨腫、骨腫、骨肉腫、セミノーマ、精巣腫瘍、子宮癌、頭頸部腫瘍、多発性骨髄腫、悪性リンパ腫、真性多血症、白血病、甲状腺腫瘍、尿管腫瘍、膀胱腫瘍、胆嚢がん、非小細胞肺癌、胆管癌及び絨毛癌からなる群により選択され、好ましくは非小細胞肺癌である、項目５に記載の医薬組み合わせ製品。

Claims

（ｉ）アズブジン或いはその薬学的に許容される塩、又は立体異性体を含む医薬組成物であって、
（ｉｉ）ＥＧＦＲ／ＴＫＩ阻害剤の投与と組み合わせて使用され、
前記ＥＧＦＲ／ＴＫＩ阻害剤が、オシメルチニブ（Ｏｓｉｍｅｒｔｉｎｉｂ）、ゲフィチニブ（Ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ）、エルロチニブ（Ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）、ドキシチニブ（Ｄｏｘｉｔｉｎｉｂ）、オルムチニブ（Ｏｌｍｕｔｉｎｉｂ）、イコチニブ（Ｉｃｏｔｉｎｉｂ）、ピロチニブ（Ｐｙｒｏｔｉｎｉｂ）、ダコミチニブ（Ｄａｃｏｍｉｔｉｎｉｂ）、アファチニブ（Ａｆａｔｉｎｉｂ）、ネラチニブ（Ｎｅｒａｔｉｎｉｂ）、ラパチニブ（Ｌａｐａｔｉｎｉｂ）、ＡＢＴ－４１４、バルリチニブ（Ｖａｒｌｉｔｉｎｉｂ）、ＨＬＸ－０７、テセバチニブ（Ｔｅｓｅｖａｔｉｎｉｂ）、テリアチニブ（Ｔｈｅｌｉａｔｉｎｉｂ）、エペルチニブコハク酸塩（Ｅｐａｌｔｉｎｉｂｓｕｃｃｉｎａｔｅ）、Ｓ－２２２６１１、フルモネルチニブ（Ｆｕｒｍｏｎｅｒｔｉｎｉｂ）、ベフォテルチニブ（Ｂｅｆｏｔｅｒｔｉｎｉｂ）、レジベルチニブ（Ｒｅｚｉｖｅｒｔｉｎｉｂ）、ポジオチニブ（Ｐｏｚｉｏｔｉｎｉｂ）、及びそれらの組み合わせからなる群より選択される、医薬組成物。
前記ＥＧＦＲ／ＴＫＩ阻害剤が、オシメルチニブ、ドキシチニブ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
前記（ｉ）及び（ｉｉ）が同時に、別々に、連続的に投与されるか、又は前記（ｉ）及び（ｉｉ）が同一の剤形に存在する、請求項１に記載の医薬組成物。