JP7648062B2

JP7648062B2 - イノトジオールのエステル誘導体のプロドラッグ

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Publication number: JP7648062B2
Application number: JP2023508097A
Authority: JP
Inventors: パク，ジョンテ; クオングエン，フー; パク，ギュピン; イ，ナンヨン
Original assignee: Industry and Academy Cooperation In Chungnam National University; Carboexpert Inc
Current assignee: Industry and Academy Cooperation In Chungnam National University; Carboexpert Inc
Priority date: 2020-08-06
Filing date: 2021-08-06
Publication date: 2025-03-18
Anticipated expiration: 2041-08-06
Also published as: KR102730723B1; EP4194463A4; US12454546B2; EP4194463A1; CN116322703A; KR20220018458A; US20230279042A1; JP2023536515A; WO2022031130A1

Description

イノトジオールのエステル誘導体のプロドラッグに関する。

プロドラッグとは、最初は不活性だが、体内に投与された後、代謝過程を通じて活性型に変化して効果が現れる薬物を指す。プロドラッグは体内に投入するとすぐに分解されるある治療剤（Ａ）を他の物質（Ｂ）と結合させて標的細胞または組織などに伝達した後、体内代謝過程を通じてＢは排出し、Ａ成分のみ残って治療が行われるようにする。

一方、イノトジオールは、チャーガのアルコール抽出物から分離された化合物として不飽和ジオール（ｄｉｏｌ）の特性を有する。イノトジオールは水溶性がなく、有機溶媒に対して溶解度が比較的低く、不安定で容易に析出するが、経口投与時の体内吸収率が低い。また、経口投与時に析出していない画分は小腸で容易に吸収されるため、小腸末端や大腸に到達できず、析出したイノトジオールは生物活性を示さず体外に排出されるという問題点がある。

したがって、上記の問題点を克服するために、理化学的、生理学的および薬学的特性を改善したイノトジオールのプロドラッグの開発が必要である。

一態様は、イノトジオールのエステル誘導体のプロドラッグまたはその薬学的に許容可能な塩を提供することである。

別の態様は、前記プロドラッグまたはその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む、炎症性疾患またはアレルギー疾患の予防または治療用薬学的組成物を提供することである。

別の態様は、前記プロドラッグまたはその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む、炎症性疾患またはアレルギー疾患の予防または改善のための健康機能食品を提供することである。

別の態様は、有効量の前記プロドラッグまたはその薬学的に許容可能な塩を、それを必要とする個体に投与するステップを含む、炎症性疾患またはアレルギー疾患を予防または治療する方法を提供することである。

一態様は、イノトジオールのエステル誘導体のプロドラッグを提供する。

一態様は、下記の化学式１のイノトジオール化合物のヒドロキシル基と脂肪酸、グルクロン酸（ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｃａｃｉｄ）、アルケニル無水コハク酸、または、フェノール酸のカルボキシル基がエステル縮合反応によって形成されたイノトジオールのエステル誘導体化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。

一態様は、下記の化学式２で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。

前記式で、Ｒ^１およびＲ^２は互いに独立して、ＯＨまたは－ＯＣ（Ｏ）－Ｒ^３であり、Ｒ^３は１～３０個、４～３０個、または６～３０個の炭素数を有する直線状または分枝状アルキル、アルケニル、またはアルキニル鎖であり、
Ｒ^１およびＲ^２のうち、少なくとも１つは－ＯＣ（Ｏ）－Ｒ^３である。

一実施形態で、前記Ｒ^３は、ＣＨ_３（ＣＨ_２）_ａ－、またはＣＨ_３（ＣＨ_２）_ｂ（ＣＨ＝ＣＨ［ＣＨ_２］）_ｃ（ＣＨ_２）_ｄ－を有する非置換の直線状アルキルまたはアルケニル鎖であるが、ａは８～２４の整数、ｂは１～５の整数、ｃは１～６の整数、ｄは３～７の整数である。

本明細書において、「プロドラッグ（Ｐｒｏｄｒｕｇ）」という用語はそれ自体で生物学的に不活性であり得るが、体内でその滞留時間中に化学的／生化学的な構造改変後に有効な薬効が現れる薬物を意味することができる。すなわち、有用な薬物であるにもかかわらず、副作用、安定性、溶解性、吸収性、作用時間などで適さない性質を有していることに化学的修飾を加えて臨床使用を可能にしたものである。一実施形態に係るイノトジオール誘導体は、イノトジオールと脂肪酸とのエステル結合を介して形成された化合物であり、無機溶媒および／または有機溶媒への溶解度が増加し安定性が向上しただけでなく、小腸でイノトジオールと脂肪酸に容易に分解され、小腸での吸収が容易である。例えば、前記イノトジオール誘導体は、イノトジオールとコハク酸とのエステル結合を介して形成されたものであり得る。具体的に、前記イノトジオール誘導体は、ｐ－トルエンスルホン酸触媒下でアルケニル無水コハク酸とイノトジオールとの縮合反応を行い合成することができ、アルキル無水コハク酸をイノトジオールに比べ過剰に投入して、イノトジオールの全てあるいは、少なくとも１つのヒドロキシ基にコハク酸エステル結合を誘導することができる。反応完了後、ｐ－トルエンスルホン酸を炭酸水素ナトリウムで中和して除去する。前記方法により合成されたイノトジオール誘導体化合物は、前記化学式２のＲ¹及びＲ²の両方、または少なくとも１つがコハク酸エステル結合を形成して水溶性が向上したばかりでなく、エステル結合が容易に分解して小腸で容易に吸収することができる。また、他の実施形態に係るイノトジオール誘導体は、イノトジオールと脂肪酸とのエステル結合を介してイノトジオールの水溶性を増加させるだけでなく、小腸での加水分解および体内吸収度を低下させ、イノトジオール誘導体が大腸になる到達する可能性を高め、大腸内の様々な微生物によってイノトジオール誘導体が分解すると、イノトジオールが直接的な薬理作用を可能にする。例えば、前記イノトジオール誘導体は、イノトジオールとフェノール酸とのエステル結合を介して形成されたものであり得る。具体的に、前記イノトジオール誘導体は、大腸内でエステル結合が加水分解されてイノトジオールとフェノール酸を放出することにより、イノトジオールとフェノール酸それぞれの様々な生理活性が期待できる。したがって、一態様に係るプロドラッグは、イノトジオールの投与量を減らすことができるだけでなく、高濃度で摂取する時に起こり得る副作用を減少させることができる。

前記イノトジオールは、チャーガ（Ｉｎｏｎｏｔｕｓｏｂｌｉｑｕｕｓ）の主要な生理活性成分として、従来の方法に従って化学的に合成することができ、薬学的に許容可能な塩から製造することができ、またはチャーガの抽出物から分離、精製したものであり得る。

本明細書における用語「イノトジオール（Ｉｎｏｔｏｄｉｏｌ）」とは、ＩＵＰＡＣ名称が（３Ｓ，５Ｒ，１０Ｓ，１３Ｒ，１４Ｒ，１７Ｒ）－１７－［（２Ｓ，３Ｒ）－３－ヒドロキシ－６－メチルへプト－５－エン－２－イル］－４，４，１０，１３，１４－ペンタメチル－２，３，５，６，７，１１，１２，１５，１６，１７－デカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレンｐｈｅｎａｎｔｈｒｅｎ－３－オール（（３Ｓ，５Ｒ，１０Ｓ，１３Ｒ，１４Ｒ，１７Ｒ）－１７－［（２Ｓ，３Ｒ）－３－ｈｙｄｒｏｘｙ－６－ｍｅｔｈｙｌｈｅｐｔ－５－ｅｎ－２－ｙｌ］－４，４，１０，１３，１４－ｐｅｎｔａｍｅｔｈｙｌ－２，３，５，６，７，１１，１２，１５，１６，１７－ｄｅｃａｈｙｄｒｏ－１Ｈ－ｃｙｃｌｏｐｅｎｔａ［ａ］ｐｈｅｎａｎｔｈｒｅｎ－３－ｏｌ）である。

前記イノトジオール誘導体は化学的／生物学的方法によって合成することができる。具体的に、前記イノトジオール誘導体は、イノトジオールと脂肪酸とのエステル化反応によって合成することができる。前記脂肪酸は、Ｃ₁₀～Ｃ₃₀不飽和または飽和脂肪酸であり得、Ｃ₁～Ｃ₁₀カルボン酸またはフェノール酸からなる群から選択されるものであり得る。前記不飽和脂肪酸としては、例えば、ミリストレイン酸、パルミトレイン酸、サピエン酸、オレイン酸、エライジン酸、バクセン酸、リノール酸、リノエライジン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、エルカ酸、ドコサヘキサエン酸などであってもよい。前記飽和脂肪酸としては、例えば、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキン酸、ベヘン酸、リグノセリン酸、セロチン酸、および、ミリスチン酸などであってもよい。前記飽和カルボン酸としては、例えば、ギ酸（Ｆｏｒｍｉｃａｃｉｄ）、酢酸（Ａｃｅｔｉｃａｃｉｄ）、プロピオン酸（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｃａｃｉｄ）、酪酸（Ｂｕｔｙｒｉｃａｃｉｄ）、コハク酸（ｓｕｃｃｉｎｉｃａｃｉｄ）などであってもよい。前記フェノール酸は、例えば、ｐ－クマル酸（ｐ－ｃｏｕｍａｒｉｃａｃｉｄ）、ケイ皮酸（ｃｉｎｎａｍｉｃａｃｉｄ）、フェルラ酸（ｆｅｒｕｌｉｃａｃｉｄ）、３，４－ジヒドロキシ安息香酸（３，４－ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｉｃａｃｉｄ）、ｐ－ヒドロキシ安息香酸（ｐ－ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｉｃａｃｉｄ）、バニリン酸（ｖａｎｉｌｉｃａｃｉｄ）、コーヒー酸（ｃａｆｆｅｉｃａｃｉｄ）、シリン酸（ｓｙｒｉｎｇｉｃａｃｉｄ）、シナピン酸（ｓｉｎａｐｉｎｉｃａｃｉｄｓ）などであってもよい。一実施形態において、前記イノトジオール誘導体は、イノトジオールと不飽和脂肪酸、飽和脂肪酸およびＣ₁～Ｃ₁₀カルボン酸からなる群から選択された脂肪酸を１：１０～３０のモル比で混合して合成したものであってもよい。例えば、１：１０～３０、１：１０～２５、１：１０～２０、１：１０～１５、１：１０～１３、５：１０～３０、または５：１０～１５のモル比で混合したものであってもよい。このとき、イノトジオールおよび脂肪酸の混合割合が前記範囲未満であるか、または前記範囲を超えると、反応が十分に起こらず、イノトジオール誘導体の生成効率が低下したり、反応所要時間が長くなったりするという問題点がある。また、前記エステル化反応は、５５～６５℃で４８～９６時間反応することであり得る。このとき、エステル化反応条件が前記範囲未満であるか、または、前記範囲を超えると、反応基質である脂肪酸の完全溶解が難しく、反応がほとんど起こらないか、または、酵素活性が低下してエステル反応効率が低下し、最終産物であるイノトジオール誘導体を高収率で合成できないという問題点がある。また、前記エステル化反応が終了した後、公知の種々の蒸留方法または精製方法を通じて生成物に含まれたエステルの純度をさらに高めることができる。

また、前記イノトジオールと脂肪酸の混合物に生物学的酵素を加えて合成することができ、前記生物学的酵素は、高効率のイノトジオール誘導体を産生するのに適した酵素として、例えばＣａｎｄｉｄａａｎｔａｒｃｔｉｃａリパーゼＢ（ＣａｎｄｉｄａＡｎｔａｒｃｔｉｃａＬｉｐａｓｅＢ、ＣａｌＢ）であってもよい。前記ＣａｎｄｉｄａａｎｔａｒｃｔｉｃａリパーゼＢは、最終産物であるイノトジオール誘導体の収率を高めるために、一般酵素よりも固定化酵素（ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄｅｎｚｙｍｅ）を使用することができ、前記固定化酵素は市販製品を使用するか、通常の方法で製造して使用することができる。また、前記ＣａｎｄｉｄａａｎｔａｒｃｔｉｃａリパーゼＢは、イノトジオール１００重量部基準で４００～５００重量部を追加してイノトジオール誘導体を合成することができる。このとき、ＣａｎｄｉｄａａｎｔａｒｃｔｉｃａリパーゼＢの含有量が前記範囲未満であると、エステル化反応が十分に起こらずエステルを生産する効率が低いという問題点があり、前記範囲を超えると、最終産物であるイノトジオール誘導体を高収率で合成できず経済的ではないという問題点がある。

一態様は、前記プロドラッグを有効成分として含むアレルギー疾患の予防または治療用組成物を提供する。

本明細書における用語「炎症性疾患」は、急性および／または慢性炎症性疾患を含む。前記炎症性疾患は、例えば、皮膚炎、結膜炎、歯周炎、鼻炎、中耳炎、咽頭炎、扁桃炎、肺炎、胃潰瘍、胃炎、クローン病、大腸炎、痔、痛風、強直性脊椎炎、リウマチ熱、狼瘡、線維筋痛症（ｆｉｂｒｏｍｙａｌｇｉａ）、乾癬性関節炎、変形性関節炎、関節リウマチ、肩関節周囲炎、腱炎、腱鞘炎、腱周囲炎、筋肉炎、肝炎、膀胱炎、腎炎、シェーグレン症候群（ｓｊｏｇｒｅｎ‘ｓｓｙｎｄｒｏｍｅ）、動脈硬化症、過敏性大腸症候群（ＩＢＳ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、多発性硬化症、急性炎症性疾患および慢性炎症性疾患からなる群から選択されたものであり得る。

本明細書における用語「アレルギー」は、アレルギー誘発物質であるアレルゲンとの接触を介して抗原抗体反応によってインビボで急激な反応が起こる現象を意味する。前記アレルギーは、例えば、花粉、チリダニ、薬物、植物繊維、細菌、食品、染色剤および化学物質、食品などによって誘導されるアレルギー疾患であり得る。

前記アレルギー疾患は、アレルギーによって生じる疾患であり、例えば、蕁麻疹、アナフィラキシス（ａｎａｐｈｙｌａｘｉｓ）、アレルギー性鼻炎、気管支喘息、アトピー性皮膚炎、薬疹、薬剤アレルギー、血清病などであり、アレルゲンの種類やアレルギー反応を引き起こす組織に応じて、さまざまな疾患の種類を示すことができる。

一態様に係るアレルギー疾患の予防または治療用薬学的組成物は、それぞれ通常の方法に従って、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁液、エマルジョン、シロップ、エアロゾルなどの経口製剤、外用剤、坐剤および滅菌注射用溶液の形態で製剤化され、使用されてもよく、製剤化のために薬学的組成物の製造に通常使用される適切な担体、賦形剤または希釈剤を含み得る。

前記担体または賦形剤および希釈剤としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、デンプン、アカシアゴム、アルジネート、ゼラチン、リン酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、微結晶セルロース、ポリビニルピロリドン、水、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、ステアリン酸マグネシウム、鉱物油などを含む様々な化合物または混合物があげられる。

製剤化する場合には、通常使用する充填剤、重量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、界面活性剤などの希釈剤または賦形剤を用いて製造することができる。

経口投与のための固形製剤は、前記イノトジオール（Ｉｎｏｔｏｄｉｏｌ）、そのプロドラッグ、またはそれらの薬学的に許容可能な塩に少なくとも１種以上の賦形剤、例えば、デンプン、ホウ酸カルシウム、スクロースまたはラクトース、ゼラチンなどを混合して製造することができる。また、単純な賦形剤の他に、ステアリン酸マグネシウム、タルクなどの潤滑剤も使用することができる。

経口用の液状製剤としては、懸濁液、内容液剤、乳剤、シロップ等があげられるが、よく使用される単純希釈剤である水、流動パラフィン以外にも種々の賦形剤、例えば湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤等を含むことができる。

非経口投与のための製剤には、滅菌水溶液、非水溶性剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤、坐剤が含まれる。非水性溶剤、懸濁剤としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油などの植物油、エチルオレートなどの注射可能なエステルなどを用いることができる。坐剤の基剤としては、ウイテプゾール（ｗｉｔｅｐｓｏｌ）、マクロゴール、ツイン（ｔｗｅｅｎ）２０、カカオ脂、ラウリン脂、グリセリンゼラチンなどを用いることができる。

一態様に係る炎症性疾患またはアレルギー疾患の予防または治療用薬学的組成物の好ましい投与量は、患者の状態、体重、疾患の程度、薬物形態、投与経路および期間によって異なるが、当業者によって適切に選択することができる。しかしながら、好ましい効果のためには、１日当たり０．０００１～２，０００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．００１～２，０００ｍｇ／ｋｇで投与することができる。投与は１日に１回投与してもよく、数回に分けて投与してもよい。ただし、前記投与量によって本発明の範囲を限定するものではない。

一態様に係る炎症性疾患またはアレルギー疾患の予防または治療用薬学的組成物は、ラット、マウス、家畜、ヒトなどの哺乳動物に様々な経路で投与することができる。投与のすべての方法は、例えば、経口、直腸または静脈、筋肉、皮下、子宮内硬膜または脳血管内（ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒｏｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ）注射によって投与することができる。

他の態様は、前記化合物またはその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む、炎症性疾患またはアレルギー疾患の予防または改善のための健康機能食品組成物または化粧料組成物を提供する。

上記化合物の具体的な内容は上記の通りである。

一態様に係る炎症性疾患またはアレルギー疾患の予防または改善用健康機能食品において、前記化合物を健康機能食品の添加物として使用する場合、それをそのまま添加するか、他の食品または食品成分と併用することができ、従来の方法に従って適切に使用することができる。有効成分の混合量は、予防、健康または治療などの各使用目的に応じて適切に決定することができる。

健康機能食品の製剤は、散剤、顆粒剤、丸剤、錠剤、カプセル剤の形態だけではなく、一般食品または飲料の形態のいずれでも可能である。

前記食品の種類には特に制限はなく、前記物質を添加できる食品の例としては、肉類、ソーセージ、パン、チョコレート、キャンディー類、スナック類、菓子類、ピザ、ラーメン、その他の麺類、ガム類、アイスクリーム類を含む酪農製品、各種スープ、飲料水、紅茶、ドリンク剤、アルコール飲料、およびビタミン複合剤などがあり、通常の意味での食品を全て含むことができる。

一般に、食品または飲料の製造時に、前記化合物は原料１００重量部に対して１５重量部以下、好ましくは１０重量部以下の量で添加することができる。しかし、健康および衛生を目的とするか、または健康調節を目的とする長期間の摂取の場合には、前記量は前記範囲以下であってもよく、また天然物からの分画物を用いる点で安全性の面で問題がないため、前記範囲以上の量でも使用できる。

一態様に係る健康機能食品のうち、飲料は、通常の飲料のように、様々な香味剤または天然炭水化物などを追加成分として含有することができる。上述の天然炭水化物は、グルコース、フルクトースなどの単糖類、マルトース、スクロースなどの二糖類、およびデキストリン、シクロデキストリンなどの多糖類、キシリトール、ソルビトール、エリトリトールなどの糖アルコールであり得る。甘味剤としては、タウマチン、ステビア抽出物などの天然甘味料、サッカリン、アスパルテームなどの人工甘味剤などを用いることができる。天然炭水化物の割合は、本発明による飲料１００ｍＬあたり約０．０１～０．０４ｇ、好ましくは約０．０２～０．０３ｇであり得る。

上記に加えて、一態様に係る健康機能食品は、様々な栄養剤、ビタミン、電解質、風味剤、着色剤、ペクチン酸およびその塩、アルギン酸およびその塩、有機酸、保護性コロイド増粘剤、ｐＨ調整剤、安定剤、防腐剤、グリセリン、アルコール、炭酸飲料に使用される炭酸化剤を含有することができる。さらに、本発明の睡眠改善用組成物は、天然果物ジュース、果物ジュース飲料および野菜飲料の製造のための果肉を含有することができる。これらの成分は独立して、または混合して使用することができる。このような添加剤の割合は限定されないが、本発明の健康機能食品１００重量部に対して０．０１～０．１重量部の範囲から選択されることが一般的である。

一態様に係るプロドラッグは、無機溶媒および有機溶媒への溶解度が増加するだけでなく、安定性が向上したところ、炎症性疾患またはアレルギー性疾患を含む様々な炎症性疾患の治療に使用することができる。

図１はイノトジオールのオレイン酸プロドラッグのＨＰＬＣ－ＥＬＳＤ結果を示す図である。図２は、イノトジオールのリノール酸プロドラッグのＨＰＬＣ－ＥＬＳＤ結果を示す図である。図３は、イノトジオールのパルミチン酸プロドラッグのＨＰＬＣ－ＥＬＳＤ結果を示す図である。図４は、イノトジオールのコハク酸プロドラッグのＨＰＬＣ－ＥＬＳＤ結果を示す図である。図５は、イノトジオールのオレイン酸プロドラッグのＬＣ－ＭＳ／ＭＳ結果を示す図である。図５Ａは、イノトジオールのオレイン酸エステルの分子量を確認した図であり、図５Ｂは、イノトジオールのオレイン酸エステルの断片パターンを確認した図である。図６は、イノトジオールのコハク酸プロドラッグのＬＣ－ＭＳ／ＭＳ結果を示す図である。図６Ａは、イノトジオールのコハク酸エステルの分子量を確認した図であり、図６Ｂは、イノトジオールのコハク酸エステルの断片パターンを確認した図である。図７は、イノトジオールのリノール酸プロドラッグのＬＣ－ＭＳ／ＭＳ結果を示す図である。図７Ａは、イノトジオールのリノール酸エステルの分子量を確認した図であり、図７Ｂは、イノトジオールのリノール酸エステルの断片パターンを確認した図である。図８は、イノトジオールのパルミチン酸プロドラッグのＬＣ－ＭＳ／ＭＳ結果を示す図である。図８Ａは、イノトジオールのパルミチン酸エステルの分子量を確認した図であり、図８Ｂは、イノトジオールのパルミチン酸エステルの断片パターンを確認した図である。図９は、イノトジオールのオレイン酸プロドラッグの¹Ｈ－ＮＭＲ結果を示す図である。図９Ａは、イノトジオールの¹Ｈ－ＮＭＲを確認した図であり、図９Ｂは、２２－Ｏ－オレイル－イノトジオールの¹Ｈ―ＮＭＲを確認した図であり、図９Ｃは、３－Ｏ－オレイル－イノトジオールの¹Ｈ―ＮＭＲを確認した図である。図１０は、イノトジオールのオレイン酸プロドラッグの¹³Ｃ－ＮＭＲ結果を示す図であり、図１０Ａは、イノトジオールの¹³Ｃ－ＮＭＲを確認した図であり、図１０Ｂは、２２－Ｏ－オレイル－イノトジオールの¹³Ｃ－ＮＭＲを確認した図であり、図１０Ｃは、３－Ｏ－オレイル－イノトジオールの¹³Ｃ－ＮＭＲを確認した図である。図１１は、イノトジオールのオレイン酸プロドラッグの２次元の異核多結合相関（ＨＭＢＣ）の結果を示す図であり、図１１Ａは、２２－Ｏ－オレイル－イノトジオールの２次元の¹Ｈ－¹³ＣＨＭＢＣを確認した図であり、図１１Ｂは、３－Ｏ－オレイル－イノトジオールの２次元の¹Ｈ－¹³ＣＨＭＢＣを確認した図である。図１２は、イノトジオールのオレイン酸プロドラッグのＤＳＣ結果を示す図であり、図１２Ａは、イノトジオールのＤＳＣ結果を示す図であり、図１２Ｂは、イノトジオールのオレイン酸エステルのＤＳＣ結果を示す図である。図１３は、イノトジオールのコハク酸プロドラッグのＤＳＣ結果を示す図である。図１３Ａは、イノトジオールのＤＳＣ結果を示す図であり、図１３Ｂは、イノトジオールコハク酸エステルのＤＳＣ結果を示す図である。図１４は、イノトジオールのオレイン酸プロドラッグのＦＴ－ＩＲ結果を示す図であり、図１４Ａは、イノトジオールのＦＴ－ＩＲ結果を示す図である。図１４Ｂは、イノトジオールオレイン酸エステルのＦＴ－ＩＲ結果を示す図である。図１５は、イノトジオールのコハク酸プロドラッグのＦＴ－ＩＲ結果を示す図である。図１５Ａは、イノトジオールのＦＴ－ＩＲ結果を示す図であり、図１５Ｂは、イノトジオールコハク酸エステルのＦＴ－ＩＲ結果を示す図である。

以下、本発明の理解を助けるために好ましい実施例を提示する。しかしながら、以下の実施例は本発明をより容易に理解するために提供されるものであり、以下の実施例によって本発明の内容が限定されるものではない。

実施例１イノトジオールの水溶性の測定
イノトジオールの水溶性を測定するために、以下のように行った。
まず、イノトジオール試料５０ｍｇを１ｍｌの有機溶媒に混合した。その後、ボルテックスし、ｗａｔｅｒｂａｔｈｓｏｎｉｃａｔｏｒで15分間置いた。２５℃で１時間放置した後、１３，０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。その後、上澄み液を採取してＨＰＬＣ－ＵＶ－ＶＩＳ分析を行い、その結果を下記表１に示す。

実施例２イノトジオールの脂肪酸エステルの酵素的合成と精製
イノトジオールのエステルを製造するために、オレイン酸、リノール酸、パルミチン酸およびコハク酸を含む様々なアシル供与体をリパーゼ反応によってイノトジオール（モル比イノトジオール／酸＝１：４）でエステル化した。
まず、スクリューキャップ付き５０ｍＬガラス瓶に０．１ｍｍｏｌのイノトジオールと０．４ｍｍｏｌの酸を準備し、磁気攪拌機（４００ｒｐｍ）を用いて６０℃で３０分間５ｍＬのｔ－ブタノールに溶解した。次に、酵素溶液（ＣａｎｄｉｄａａｎｔａｒｃｔｉｃａｌｉｐａｓｅＡ）０．５ｍＬを混合物に添加し、インキュベーション中に４００ｒｐｍで撹拌しながら６０℃で７２時間反応を行った。反応を停止するために反応溶液にエタノール（１０ｍＬ）を加え、６０℃で３０分間保持してリパーゼを沈殿させた。次いで溶液を濾過して酵素を除去した。最後に、上澄み液を回収し、ロータリーエバポレーター（Ｅｙｅｌａ、Ｔｏｋｙｏ、Ｊａｐａｎ）を使用して真空下で少量まで濃縮した。
次に、エステル化生成物を精製するために分取ＨＰＬＣシステム（ＬＣ－Ｆｏｒｔｅ／Ｒ、ＹＭＣＫＯＲＥＡ）を介してＯＤＳ－ＡＱＣ１８（ＹＭＣＫＯＲＥＡ、城南、韓国）で満たされたガラスカラム（１５ｘ２５０ｍｍ）に濃縮された混合物（１ｍＬ）を１０ｍｌ／分の流速でロードした。イノトジオールのオレイン酸エステル（Ｉｎｏｔｏｄｉｏｌｏｌｅａｔｅｅｓｔｅｒ）、イノトジオールのリノール酸エステル（ｉｎｏｔｏｄｉｏｌｌｉｎｏｌｅａｔｅｅｓｔｅｒ）およびイノトジオールのパルミチン酸エステル（ｉｎｏｔｏｄｉｏｌｐａｌｍｉｔａｔｅｅｓｔｅｒ）精製の場合、移動相は蒸留水（溶媒Ａ）およびメタノール：エタノール＝１：１（溶媒Ｂ）を使用し、次の勾配溶出法で溶出した：（０～１０分、９０～９５％Ｂ）、（１０～２５分、９５～１００％Ｂ）、（２５～８０分、１００％Ｂ)。イノトジオールのコハク酸エステル（ｉｎｏｔｏｄｉｏｌｓｕｃｃｉｎａｔｅｅｓｔｅｒ）精製の場合には、次のような勾配溶出法で溶出した：（０～１０分、０～１０％Ｂ）、（１０～３０分、１０～５０％Ｂ）、（３０～８０分、１００％Ｂ）。流出物は２１０ｎｍの検出波長で連続的にモニターした。イノトジオールのエステルのピーク画分は、クロマトグラムを観察して手動で収集した。

実験例１高性能液体クロマトグラフィー蒸発光散乱検出器（Ｈｉｇｈ－ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ－ｅｖａｐｏｒａｔｉｖｅｌｉｇｈｔｓｃａｔｔｅｒｉｎｇｄｅｔｅｃｔｏｒ：ＨＰＬＣ－ＥＬＳＤ）分析
ＨＰＬＣ分析は、ＲＳダイオードアレイ検出器（Ｄｉｏｎｅｘ）およびＹＭＣ－ｔｒｉａｒｔＣ１８カラム（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、ＹＭＣＫＯＲＥＡ、Ｓｕｎｇｎａｍ、ＳｏｕｔｈＫｏｒｅａ）を備えたＵｌｔｉｍａｔｅ３０００ＵＨＰＬＣシステム（Ｕｌｔｉｍａｔｅ３０００、Ｄｉｏｎｅｘ、Ｉｄｓｔｅｉｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）で行った。クロマトグラフィー分離は、水（溶媒Ａ）およびメタノール（溶媒Ｂ）からなる二元移動相グラジエントを用いて行った。イノトジオールのオレイン酸エステル（Ｉｎｏｔｏｄｉｏｌｏｌｅａｔｅｅｓｔｅｒ）、イノトジオールのリノール酸エステル（ｉｎｏｔｏｄｉｏｌｌｉｎｏｌｅａｔｅｅｓｔｅｒ）およびイノトジオールのパルミチン酸エステル（ｉｎｏｔｏｄｉｏｌｐａｌｍｉｔａｔｅｅｓｔｅｒ）の場合、溶媒Ｂ勾配は０分で８５％、７分で９２％、１５分で９４％、２０分で１００％、５０分で１００％、５０．１分で８５％、および５５分で８５％であった。イノトジオールのコハク酸エステル（ｉｎｏｔｏｄｉｏｌｓｕｃｃｉｎａｔｅｅｓｔｅｒ）の場合、溶媒Ｂ勾配は０分で０%、５分で５％、１２分で５０％、１５分で１００％、３０分で１００％、３０．１分で０％、４０分で０％であった。注入容積は１０μＬであり、溶出は２１０ｎｍでモニターした。流速は、５０℃のカラム温度で１ｍＬ／分に設定した。
ＥＬＳＤ分析は、蒸発光散乱検出器（Ａｌｌｔｅｃｈ２０００、Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ、ＩＬ、ＵＳＡ）とＹＭＣ－ｔｒｉａｒｔＣ１８カラム（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、ＹＭＣＫＯＲＥＡ、Ｓｕｎｇｎａｍ、ＳｏｕｔｈＫｏｒｅａ）を備えたＷａｔｅｒｓ１５２５ＢｉｎａｒｙＨＰＬＣｓｙｓｔｅｍ（ＷａｔｅｒｓＣｏｒｐ．）で行った。注入容積は１０μＬであり、溶出液は９０℃のドリフトチューブ温度でＥＬＳＤでモニターし、輸送ガス流速は２．０Ｌ／分であり、検出器は１に設定した。流速は、５０℃のカラム温度で１ｍＬ／分に設定した。
その結果、図１～図４に示すように、イノトジオールのプロドラッグであるイノトジオールのオレイン酸エステル、イノトジオールのリノール酸エステル、イノトジオールのパルミチン酸エステル、イノトジオールのコハク酸エステルの合成が良好に行われたことがわかった。
図１は、イノトジオールのオレイン酸プロドラッグのＨＰＬＣ－ＥＬＳＤ結果を示す図である。
図２は、イノトジオールのリノール酸プロドラッグのＨＰＬＣ－ＥＬＳＤ結果を示す図である。
図３は、イノトジオールのパルミチン酸プロドラッグのＨＰＬＣ－ＥＬＳＤ結果を示す図である。
図４は、イノトジオールのコハク酸プロドラッグのＨＰＬＣ－ＥＬＳＤ結果を示す図である。

実験例２高性能液体クロマトグラフィータンデム質量分析（Ｈｉｇｈ－ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｔａｎｄｅｍｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ：ＬＣ／ＭＳ）
イノトジオールのエステルは、ＥＳＩ（ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ）源を備えたＡｇｉｌｅｎｔ－１２９０ＵＰＬＣ／６４７０ＡおよびＡｇｉｌｅｎｔ－１２９０ＵＰＬＣ／６４３０ＡＱＱＱシステム（ＡｇｉｌｅｎｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓＫｏｒｅａ、Ｓｅｏｕｌ、ＳｏｕｔｈＫｏｒｅａ）を使用して識別した。移動相は、各溶媒に５ｍＭ酢酸アンモニウムと０．１％ギ酸を含む溶液Ａ（蒸留水）と溶液Ｂ（メタノール）から構成した。分離は、ＺｏｒｂａｘＥｃｌｉｐｓｅＰｌｕｓＣ１８カラム（２．１×５０ｍｍ、３．５μｍ）（ＡｇｉｌｅｎｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓＫｏｒｅａ）を備えたカラムで行った。溶液Ｂ勾配は、０～２分で８５％、７分で９０％、１８～２５分で１００％、および２６～３５分で８５％であった。注入容積は２μＬであり、流速は４０℃のカラム温度で０．２ｍＬ／分に設定した。質量分析器は、以下のパラメータを使用して正モードで行った。乾燥ガス温度：２７０℃、乾燥ガス流速：１０Ｌ／分、スプレー圧力：４０ｐｓｉ、シース（Ｓｈｅａｔｈ）ガス温度：３００℃、シースガス流速：１１Ｌ／分、キャピラリー電圧：３５００Ｖ（正）、ノズル電圧：５００Ｖ（正）。
その結果、図５～８に示すように、イノトジオールのプロドラッグであるイノトジオールのオレイン酸エステル、イノトジオールのリノール酸エステル、イノトジオールのパルミチン酸エステル、イノトジオールのコハク酸エステルそれぞれの特異的なピークを確認した。
図５Ａは、イノトジオールのオレイン酸エステルの分子量を確認した図であり、図５Ｂは、イノトジオールのオレイン酸エステルの断片パターンを確認した図である。
図６Ａは、イノトジオールのコハク酸エステルの分子量を確認した図であり、図６Ｂは、イノトジオールのコハク酸エステルの断片パターンを確認した図である。
図７Ａは、イノトジオールのリノール酸エステルの分子量を確認した図であり、図７Ｂは、イノトジオールのリノール酸エステルの断片パターンを確認した図である。
図８Ａは、イノトジオールのパルミチン酸エステルの分子量を確認した図であり、図８Ｂは、イノトジオールのパルミチン酸エステルの断片パターンを確認した図である。

実験例３核磁気共鳴法（Ｎｕｃｌｅａｒｍａｇｎｅｔｉｃｒｅｓｏｎａｎｃｅ：ＮＭＲ）分析
ＮＭＲ分析のために、イノトジオールのオレイン酸エステル（５ｍｇ）を６００μＬのＣＤＣｌ₃に溶解し、次いでＮＭＲチューブ（Ｅｕｒｉｓｏｔｏｐ、ＳａｉｎｔＡｕｂｉｎ、Ｆｒａｎｃｅ）に移した。¹ＨＮＭＲおよび¹³ＣＮＭＲスペクトルは、それぞれ６００．２３ＭＨｚおよび１５０．９３ＭＨｚの周波数でＢｒｕｋｅｒＡｖａｎｃｅ－ＩＩＩ－６００（Ｂｒｕｋｅｒ，Ｓｅｏｎｇｎａｍ，ＳｏｕｔｈＫｏｒｅａ）機器で得た。イノトジオールのオレイン酸エステルのエステル結合形成および化学構造を同定するために、２次元の異核多結合相関（ＨＭＢＣ）を使用した。２次元のＨＭＢＣＮＭＲスペクトルは、１３時間、３２回のスキャンを用いて得た。データは、ＴｏｐＳｐｉｎ^TM４．０ソフトウェア（Ｂｒｕｋｅｒ）の教育版を使用して処理されました。
その結果、図９～図１１に示すように、イノトジオールのオレイン酸エステルの構造を確認した。
図９Ａは、イノトジオールの¹Ｈ－ＮＭＲを確認した図であり、図９Ｂは、２２－Ｏ－オレイル－イノトジオールの¹Ｈ―ＮＭＲを確認した図であり、図９Ｃは、３－Ｏ－オレイル－イノトジオールの¹Ｈ―ＮＭＲを確認した図である。
図１０Ａは、イノトジオールの¹³Ｃ－ＮＭＲを確認した図であり、図１０Ｂは、２２－Ｏ－オレイル－イノトジオールの¹³Ｃ－ＮＭＲを確認した図であり、図１０Ｃは、３－Ｏ－オレイル－イノトジオールの¹³Ｃ－ＮＭＲを確認した図である。
図１１Ａは、２２－Ｏ－オレイル－イノトジオールの２次元の¹Ｈ－¹³ＣＨＭＢＣを確認した図であり、図１１Ｂは、３－Ｏ－オレイル－イノトジオールの２次元の¹Ｈ－¹³ＣＨＭＢＣを確認した図である。

実験例４示差走査熱量測定法（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｓｃａｎｎｉｎｇｃａｌｏｒｉｍｅｔｒｙ：ＤＳＣ）
イノトジオールのオレイン酸エステルおよびイノトジオールのコハク酸エステルの熱分析は、ＤＳＣ－１機器（ＭｅｔｔｌｅｒＴｏｌｅｄｏ、Ｇｒｅｉｆｅｎｓｅｅ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）で行った。約２ｍｇの各乾燥サンプルを密封したアルミニウムパンに入れた。次に、パンを窒素雰囲気下で１０℃／分の速度で２５℃から４００℃に加熱した。何も入れなかったパンを目安として使用した。
その結果、図１２～図１３に示すように、イノトジオールのオレイン酸エステルおよびイノトジオールのコハク酸エステルがイノトジオールと比較して融点が低くなったことを確認した。
図１２Ａは、イノトジオールのＤＳＣ結果を示す図であり、図１２Ｂは、イノトジオールのオレイン酸エステルのＤＳＣ結果を示す図である。
図１３Ａは、イノトジオールのＤＳＣ結果を示す図であり、図１３Ｂは、イノトジオールのコハク酸エステルのＤＳＣ結果を示す図である。

実験例５フーリエ変換赤外分光法（Ｆｏｕｒｉｅｒｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｆｒａｒｅｄｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ：ＦＴ－ＩＲ）
イノトジオールのオレイン酸エステルおよびイノトジオールのコハク酸エステルについて、ＦＴ－ＩＲ分析を行った。約１ｍｇの試料対１００ｍｇのＫＢｒ（１：１００）の比で赤外線スペクトルを真空赤外分光計（ＶＥＲＴＥＸ８０ｖ）で記録した。スペクトルは、４０００～４００ｃｍ^-1の周波数範囲での平均走査で得た。
その結果、図１４～図１５に示すように、イノトジオールのオレイン酸エステルおよびイノトジオールのコハク酸エステルの構造を確認した。
図１４Ａは、イノトジオールのＦＴ－ＩＲ結果を示す図であり、図１４Ｂは、イノトジオールのオレイン酸エステルのＦＴ－ＩＲ結果を示す図である。
図１５Ａは、イノトジオールのＦＴ－ＩＲ結果を示す図であり、図１５Ｂは、イノトジオールのコハク酸エステルのＦＴ－ＩＲ結果を示す図である。

実験例６イノトジオールの脂肪酸エステルの溶解度の確認
イノトジオールのエステルの水に対する溶解度を測定するために、試料５ｍｇを蒸留水１ｍＬに懸濁し、次いで超音波水浴で３０分間処理した。次いで混合物を超音波水浴（Ｐｏｗｅｒｓｏｎｉｃ４１０）で３０分間処理した。その後、混合物を３０℃で３時間インキュベートした。遠心分離（２０，０００ｘｇ、１０分）後に得られた上澄み液をＡＤＶＡＮＴＥＣ（Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）の０．４５μｍメンブレンフィルターで濾過して未溶解結晶を除去した。イノトジオールのコハク酸エステルの測定は、Ａｇｉｌｅｎｔ－１２９０ＵＰＬＣ／６４７０Ａ（ＡｇｉｌｅｎｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓＫｏｒｅａ、Ｓｅｏｕｌ、ＳｏｕｔｈＫｏｒｅａ）で行った。上澄み液中のイノトジオールのコハク酸エステル濃度は、確立された標準曲線（０～５ｍｇ／ｍＬ、Ｒ²＝０．９９９８）を用いて計算した。
その結果、下記表２および３に示すように、イノトジオールと比較して前駆体であるイノトジオールの脂肪酸エステルの溶解度が高いことを確認した。

上述した本発明の説明は例示のためのものであり、本発明が属する技術分野の通常の知識を有する者は、本発明の技術的思想や必須の特徴を変更することなく他の具体的な形態に容易に変形が可能であることが理解できるだろう。したがって、以上で説明した実施形態はすべての点で例示的なものであり、限定的なものではないと理解すべきである。

Claims

下記の化学式で表されるイノトジオールのエステル誘導体化合物またはその薬学的に許容可能な塩

［前記式中、Ｒ^１およびＲ^２は互いに独立して、ＯＨ、または－ＯＣ（Ｏ）－Ｒ^３であり、Ｒ^３は２～３０個の炭素数を有する直線状または分岐状アルキル鎖であり、
Ｒ^１およびＲ^２のうちの少なくとも１つは－ＯＣ（Ｏ）－Ｒ^３である］。
請求項１に記載のイノトジオールのエステル誘導体化合物またはその薬学的に許容可能な塩の製造方法であって、前記イノトジオールのエステル誘導体化合物が下記の化学式：

で表されるイノトジオール化合物のヒドロキシル基とＣ _２～Ｃ _３０の飽和脂肪酸のカルボキシル基とのエステル縮合反応によって形成されることを含む、方法。
前記飽和脂肪酸がカプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、ベヘン酸、リグノセリン酸、セロチン酸、およびミリスチン酸からなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
前記イノトジオールおよび脂肪酸が１：１０～３０のモル比で混合される、請求項２に記載の方法。