JP7585166B2 - 物質送達キャリア及び組成物 - Google Patents

Description

本発明の実施形態は、物質送達キャリア及び組成物に関する。

骨髄性腫瘍は、骨髄性白血病及び骨髄性リンパ腫を含む悪性腫瘍性疾患である。種々の悪性腫瘍の治療及び診断のために、腫瘍細胞に特異的に治療薬又は診断薬を送達することが求められている。しかしながら、骨髄性腫瘍細胞を標的とした薬剤の送達は困難で、特に核酸送達は臨床的には実現していない。

本発明が解決しようとする課題は、骨髄性腫瘍細胞に目的物質を送達することができる物質送達キャリア及び組成物を提供することである。

実施形態に従う物質送達キャリア及び組成物は、骨髄性腫瘍細胞に目的物質を送達するための物質送達キャリア及び組成物である。物質送達キャリアは、脂質粒子と、前記脂質粒子に内包された前記目的物質とを備える。脂質粒子は、その構成成分として式（Ｉ）の第１脂質を少なくとも含む。

図１は、第１実施形態の脂質粒子の一例を示す断面図である。 図２は、第２実施形態の物質送達キャリアの一例を示す断面図である。 図３は、第２実施形態の物質送達方法の一例を示すフローチャートである。 図４は、第２実施形態の物質送達方法の一例を示す模式図である。 図５は、例１の実験結果を示すグラフであり、（ａ）は、ヒト白血病細胞株ＴＦ－１に、ｓｉＮＴ又はｓｉＲＵＮＸ１を内包する組成Ａの脂質粒子を導入した後の細胞数の経時変化を示す。（ｂ）は、ヒト白血病細胞株ＴＦ－１に、ｓｉＮＴ又はｓｉＲＵＮＸ１を内包する組成Ｂの脂質粒子を導入した後の細胞数の経時変化を示す。（ｃ）は、ヒト白血病細胞株ＴＦ－１に、ｓｉＮＴ又はｓｉＲＵＮＸ１を内包する組成Ｃの脂質粒子を導入した後の細胞数の経時変化を示す。 図６は、例１の実験結果を示すグラフであり、（ａ）は、ヒト白血病細胞株ＴＦ－１に、ｓｉＮＴ又はｓｉＲＵＮＸ１を内包する組成Ｂ又はＣの脂質粒子を導入した後の細胞数の経時変化を示す。（ｂ）は、ヒト白血病細胞株Ｋａｓｕｍｉ－１に、ｓｉＮＴ又はｓｉＲＵＮＸ１を内包する組成Ｂ又はＣの脂質粒子を導入した後の細胞数の経時変化を示す。（ｃ）は、ヒト白血病細胞株ＯＣＩ－ＡＭＬ３に、ｓｉＮＴ又はｓｉＲＵＮＸ１を内包する組成Ｂ又はＣの脂質粒子を導入した後の細胞数の経時変化を示す。（ｄ）は、ヒト白血病細胞株Ｍｏｌｍ１３に、ｓｉＮＴ又はｓｉＲＵＮＸ１を内包する組成Ｂ又はＣの脂質粒子を導入した後の細胞数の経時変化を示す。 図７は、例１の実験結果を示す図であり、（ａ）は、ヒト白血病細胞株ＴＦ－１又はＫａｓｕｍｉ－１に、ｓｉＮＴ又はｓｉＲＵＮＸ１内包脂質粒子を導入した後の細胞内から抽出したタンパク質解析結果を示す。（ｂ）は、ヒト白血病細胞株ＯＣＩ－ＡＭＬ３にｓｉＮＴ又はｓｉＲＵＮＸ１内包脂質粒子を導入した後の細胞内から抽出したタンパク質解析結果を示す。（ｃ）は、ヒト白血病細胞株Ｍｏｌｍ１３にｓｉＮＴ又はｓｉＲＵＮＸ１内包脂質粒子を導入した後の細胞内から抽出したタンパク質解析結果を示す。 図８は、例２の実験結果を示すグラフであり、骨髄性白血病の患者から単離した細胞であるＰＤＸ－ＡＭＬ－１に、組成Ｂ又はＣのｓｉＮＴ又はｓｉＲＵＮＸ１内包脂質粒子を導入した場合の細胞数の経時変化を示す。 図９は、例２の実験結果を示す図であり、骨髄性白血病の患者から単離した細胞であるＰＤＸ－ＡＭＬ－１へとｓｉＮＴ又はｓｉＲＵＮＸ１内包脂質粒子を導入した後の細胞内から抽出したタンパク質のうち、ＲＵＮＸ１発現タンパク質に関する解析結果を示す。

以下、実施形態について、添付の図面を参照して説明する。なお、各実施形態において、実質的に同一の構成部位には同一の符号を付し、その説明を一部省略する場合がある。図面は模式的なものであり、各部の厚さと平面寸法との関係、各部の厚さの比率等は現実のものとは異なる場合がある。

（第１実施形態）
・脂質粒子
第１実施形態によれば、骨髄性腫瘍細胞内に目的物質を導入するための脂質粒子が提供される。図１に示す通り、脂質粒子１は、略球状の中空体であり、その中心の内腔２に目的物質３を内包することができる。

脂質粒子１は、骨髄性腫瘍細胞と接触することにより、例えば該細胞内にエンドサイトーシスにより取り込まれ得る。そして、目的物質３が該細胞内に放出され得る。

ここで、骨髄性腫瘍とは、骨髄性細胞又はリンパ系細胞の悪性腫瘍化に起因する疾患である。骨髄性腫瘍細胞とは、悪性腫瘍化した骨髄性細胞、例えば、骨髄性細胞由来の白血病細胞及びリンパ腫細胞等を含む。

目的物質３は、骨髄性腫瘍細胞内に送達することが望まれる物質である。目的物質３は、脂質粒子１内に内包することができるものであれば何れの物質であってもよいが、例えば、核酸、タンパク質、ペプチド、他の有機化合物、無機化合物、骨髄性腫瘍の治療薬又は診断薬などであり得る。

脂質粒子１は、例えばその材料である複数の脂質の分子が非共有結合で配列してできた脂質膜から構成され得る。脂質粒子１は、その構成成分として第１脂質１ａを少なくとも含む。第１脂質１ａは下記式（Ｉ）を有する脂質化合物である。

また、脂質粒子１の構成成分として、下記式（ＩＩ）を有する脂質化合物である第２脂質１ｂを含んでもよい。

脂質粒子１は、第１脂質１ａ及び第２脂質１ｂの他に更なる脂質を含んでもよい。脂質粒子１を構成する脂質分子材料の組成のうち、第１脂質１ａが占める組成を、以下「第１画分」と称する。また、第１脂質１ａ以外の脂質分子材料からなる画分を以下「第２画分」と称する。第２画分に含まれる脂質をまとめて以下「第３脂質１ｃ」とも称する。すなわち、上記の第２脂質１ｂは、第３脂質１ｃを構成する脂質のうちの一つであり、その画分は第２画分を構成する。

第１画分及び第２画分という言葉は、脂質粒子１の構成成分の組成を表すものであって、そこに含まれる脂質の物理的な位置を示すものではない。例えば、第１画分及び第２画分の構成成分は脂質粒子１の中でそれぞれ１つのまとまりになっている必要はなく、第１画分に含まれる脂質と第２画分に含まれる脂質とは混ざり合って存在し得る。

脂質粒子１を構成する脂質材料全体に対する第１脂質１ａ（すなわち、第１画分）の配合割合（モル比）は、例えば１０％以上５０％以下であることが好ましい。その場合、目的物質３導入の骨髄性腫瘍細胞特異性、及び目的物質３の導入効率が向上し得る。また第１脂質１ａの配合割合が１５％以上である場合、特に生体内、即ち、インビボにおける目的物質３の導入量が向上し得るためより好ましい。第１脂質１ａの配合割合が３０％以上であれば更に好ましい。一方で、第１脂質１ａの配合割合の上限は８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％であり得る。

第１脂質１ａの配合割合により、脂質粒子１の粒子径及び細胞への浸透性が変化する場合もある。例えば、第１脂質１ａが多いほど脂質粒子１の粒子径は大きくなり得る。脂質粒子１の平均粒子径は、用途に応じて変更することが可能であり、例えば約５０ｎｍ～約２００ｎｍに調節することが好ましい。例えばインビボで用いる場合は、約５０ｎｍ～約１００ｎｍとすることが好ましい場合がある。

脂質粒子１の第２画分に含まれる第３脂質１ｃの種類は限定されるものではないが、例えば、第２画分はベース脂質を含む。ベース脂質として、例えば、生体膜の主成分である脂質を用いることができる。ベース脂質は、リン脂質又はスフィンゴ脂質、例えば、ジアシルホスファチジルコリン、ジアシルホスファチジルエタノールアミン、セラミド、スフィンゴミエリン、ジヒドロスフィンゴミエリン、ケファリン又はセレブロシド、或いはこれらの組み合わせ等である。

例えば、ベース脂質として、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２－ステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、１，２－ジ－Ｏ－オクタデシル－３－トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＭＡ）、１，２－ジオレオイル－３－ジメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＤＡＰ）、１，２－ジミリストイル－３－ジメチルアンモニウムプロパン（１４：０ ＤＡＰ）、１，２－ジパルミトイル－３－ジメチルアンモニウムプロパン（１６：０ ＤＡＰ）、１，２－ジステアロイル－３－ジメチルアンモニウムプロパン（１８：０ ＤＡＰ）、Ｎ－（４－カルボキシベンジル）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－２，３－ビス（オレオイロキシ）プロパン（ＤＯＢＡＱ）、１，２－ジオレオイル－３－トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＡＰ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホクロリン（ＤＯＰＣ）、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホクロリン（ＤＬＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－Ｌ－セリン（ＤＯＰＳ）、又はコレステロール、或いはこれらの何れかの組み合わせ等を用いることが好ましい。

上記ベース脂質として、特にカチオン性脂質又は中性脂質の脂質を用いることが好ましく、その含有量によって脂質粒子１の酸解離定数を調節することができる。カチオン性脂質としてＤＯＴＡＰを用いることが好ましく、中性脂質としてＤＯＰＥを用いることが好ましい。

第２画分は、脂質粒子１の凝集を防止する脂質を含むこともまた、好ましい。例えば、凝集を防止する脂質は、ＰＥＧ修飾した脂質、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ジミリストイルグリセロール（ＤＭＧ－ＰＥＧ）、オメガ－アミノ（オリゴエチレングリコール）アルカン酸モノマーから誘導されるポリアミドオリゴマー（米国特許第６，３２０，０１７号）又はモノシアロガングリオシド等を更に含むことが好ましい。

第２画分は、更に、毒性を調整するための相対的に毒性の低い脂質；脂質粒子１に配位子を結合させる官能基を有する脂質；ステロール、例えばコレステロール等の内包物の漏出を抑制するための脂質等の脂質を含んでもよい。特に、コレステロールを含ませることが好ましい。例えば、第２画分は、ＤＯＰＥと、ＤＯＴＡＰと、コレステロールと、ＰＥＧとを含む場合、目的物質３の送達効率が優れているため好ましい。

第２画分に用いる脂質の種類及びその組成は、目的とする脂質粒子１の酸解離定数（ｐＫａ）若しくは脂質粒子１の粒子径、目的物質３の種類、或いは細胞中での安定性等を考慮して適切に選択される。

また、図４の（ａ）及び（ｂ）に示すように、脂質粒子１は、弱カチオン性であることにより骨髄性腫瘍細胞に対して取り込まれやすく、正常な骨髄細胞等の他の細胞７には取り込まれにくいという選択性を示す。具体的には、脂質粒子１の脂質組成は、例えば脂質粒子１の酸解離定数（ｐＫａ）が８．４以下となるように構成されることが好ましい。脂質粒子の酸解離定数（ｐＫａ）は、その周囲のイオン強度（Ｉ）によって変動する。イオン強度（Ｉ）は、下記式（１）によって算出されるものである。本明細書における酸解離定数（ｐＫａ）は、イオン強度（Ｉ）が３．５９９×１０^－３ｍｏｌ／ｄｍ^３の環境下の値とする。

上記（１）式中、ｍ_ｉは周囲に存在する各イオンのモル濃度であり、ｚ_ｉはそれらイオンの電荷量である。

酸解離定数（ｐＫａ）を８．４以下とするためには、脂質粒子１の脂質組成においてカチオン性脂質がアニオン性脂質よりも多く含まれることで達成され得る。ｐＫａが８．４以下の酸解離定数を示す脂質粒子の組成（モル比）としては、例えば、第１脂質１ａ：ＤＯＰＥ：ＤＯＴＡＰ：コレステロール：ＰＥＧ＝３１．７：４．５：９．０：５１．４：３．４である組成（この場合、脂質粒子のｐＫａは８．１）、又は第２脂質１ｂ：第１脂質１ａ：ＤＯＰＥ：ＤＯＴＡＰ：コレステロール：ＰＥＧ＝１５．０：３０．１：９．０：４．０：３７．９：４．０といった組成（この場合、脂質粒子のｐＫａは７．６）が挙げられる。ここで、カチオン性脂質とは、正電荷を持つ基を有している脂質を指す。上記の脂質組成のうちのカチオン性脂質は、第１脂質１ａ、第２脂質１ｂ及びＤＯＴＡＰである。

脂質粒子１に目的物質３を内包して骨髄性腫瘍細胞に接触させる（例えば、投与する）簡単な手順により、従来のように抗体又は受容体を用いることなく目的物質３を効率よく骨髄性腫瘍細胞に導入することができる。故に、脂質粒子１は骨髄性腫瘍細胞に選択的又は特異的に目的物質３を送達することが求められる様々な用途において用いることができる。

脂質粒子１内には、目的物質３の他に、必要に応じて更なる成分が内包されていてもよい。更なる成分は、例えば、ｐＨ調整剤、浸透圧調整剤又は骨髄性腫瘍細胞の他の治療薬、他の診断薬等である。ｐＨ調整剤は、例えば、クエン酸などの有機酸及びその塩等である。浸透圧調整剤は、糖又はアミノ酸等である。 目的物質３及び必要に応じて他の物質を内包する脂質粒子１は、例えば、小分子を脂質粒子に封入する際に用いられる公知の方法、例えば、バンガム法、有機溶媒抽出法、界面活性剤除去法又は凍結融解法等を用いて製造することができる。例えば、脂質粒子１の材料を所望の比率でアルコール等の有機溶媒に含有させて得られた脂質混合物と、目的物質３等の内包するべき成分を含む水性緩衝液を用意し、脂質混合物に水性緩衝液を添加する。得られた混合物を撹拌して懸濁することにより目的物質３等を内包した脂質粒子１が形成される。

脂質粒子１の構成成分の配合比は、脂質混合物中の各材料の配合比を変えることで容易に調節することができる。例えば、脂質粒子１の構成成分の混合比は、脂質混合物中の各材料の混合比と略同一であり得る。また、脂質粒子１に内包する物質の量比は、水性緩衝液中の両者の量比を変えることにより容易に調節することができる。

以下、目的物質３を内包した状態の脂質粒子１を「物質送達キャリア」とも称する。

・組成物
物質送達キャリアは、適切な担体に含ませた液体の組成物として提供されてもよい。担体は、例えば、水、生理食塩水のような食塩水、グリシン水溶液又は緩衝液等である。或いは、物質送達キャリアは乾燥した粉末状の組成物として提供されてもよい。粉末状の組成物は、使用者が上記担体のような適切な液体を加えることによって使用可能となる。

組成物は、物質送達キャリアの他に保管安定性を向上させる物質（すなわち、保管保護剤）を更に含んでもよい。保管保護剤は、限定されるものではないが、例えば、アルブミン、リポタンパク、アポリポタンパク、グロブリン等の糖タンパク等：ｐＨ調整剤、緩衝化剤、張度調整剤等；ナトリウムアセテート、ナトリウムラクテート、ナトリウムクロリド、カリウムクロリド、カルシウムクロリド等の製薬学的に許容可能であり、組成物を生理的状態に近づける関与剤；フリーラジカルによるダメージを抑制する、α－トコフェロールのような脂肪親和性フリーラジカルクエンチャー；脂質の過酸化損傷を抑制し、貯蔵安定性を改良するためのフェリオキサミンのような水溶性キレーター等の脂質保護剤、ショ糖、トレハロースなどの糖類、グリセリン、ジメチルスルホキシドなどの凍結保護剤等である。

物質送達キャリアを生体への投与に用いる場合、組成物は薬学的に許容され得る組成を有し、公知の方法で滅菌されていることが好ましい。

（第２実施形態）
第２実施形態においては、骨髄性腫瘍細胞を減少又は消滅させるために脂質粒子１を用いる例について説明する。この場合、目的物質３として骨髄性腫瘍細胞の増殖を低減させるための物質が用いられ得る。以下、図２を用いてこのような目的物質３を内包する脂質粒子１、即ち、物質送達キャリア１０の一例について説明する。

・物質送達キャリア
図２に示すように、物質送達キャリア１０は、脂質粒子１と、脂質粒子１に内包されているＲＮＡ４とを備える。

脂質粒子１として、第１実施形態で説明した何れかの脂質粒子１を使用することができる。

ＲＮＡ４は、骨髄性腫瘍細胞の発症及び進展に関わる遺伝子の発現を抑制する作用を示す。骨髄性腫瘍細胞の発症及び進展に関わる遺伝子の発現は、例えば、その遺伝子の転写物を破壊することによって抑制することができる。転写物とは、例えばｍＲＮＡ（メッセンジャーＲＮＡ）である。ＲＮＡ４は、例えば、ｍＲＮＡをＲＮＡ干渉作用により分解する作用を示す、ｓｉＲＮＡ（Ｓｍａｌｌ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ ＲＮＡ）であり得る。ｓｉＲＮＡが分解対象とするｍＲＮＡは、スプライシング前のＰｒｅ－ｍＲＮＡであってもよいし、スプライシング後の成熟ｍＲＮＡであってもよい。ＲＮＡ４は、骨髄性腫瘍細胞の発症及び進展に関わる遺伝子の配列の一部と相補的な配列を有するセンス鎖とそのアンチセンス鎖からなるｓｉＲＮＡであってよい。

骨髄性腫瘍細胞の発症及び進展に関わる遺伝子として、例えば、転写因子（ＲＵＮＸ１，ＲＵＮＸ２，ＭＥＣＯＭ，ＭＹＢ，ＭＹＣ，ＨＯＸＡ９，ＭＥＩＳ１，ＨＨＥＸ，及びＥＲＧ）、融合遺伝子（ＲＵＮＸ１－ＲＵＮＸ１Ｔ１，ＫＭＴ２Ａ－ＡＦＦ１，ＫＭＴ２Ａ－ＭＬＬＴ１，ＫＭＴ２Ａ－ＭＬＬＴ３，ＢＣＲ－ＡＢＬ）、エピゲノム制御因子（ＥＺＨ２，ＥＥＤ，ＢＡＰ１，ＫＤＭ１Ａ，ＲＣＯＲ１，ＳＥＴＤＢ１，ＴＲＩＭ３３，ＪＡＲＩＤ２，ＣＡＲＭ１，ＳＥＴＤ１Ｂ，ＢＲＤ２，ＢＲＤ４，ＰＲＭＴ１，ＰＲＭＴ４，ＰＲＭＴ５，ＤＯＴ１Ｌ，ＣＡＲＭ１，ＮＳＤ１）、リン酸化酵素（ＣＤＫ９，ＡＸＬ）、免疫抑制因子（ＣＤ２７４，ＣＤ３８，ＣＤ４７，ＣＤ１５５，ＣＤ１１２）、ユビキチン関連因子（ＦＢＸＷ７，ＵＢＥ２Ｅ１）、アポトーシス制御因子（ＢＣＬ２，ＭＣＬ１，ＢＣＬ２Ｌ１）、ｎｏｎ－ｃｏｄｉｎｇ ＲＮＡ（ＮＥＡＴ１，ＭＡＬＡＴ１，ＨＯＴＡＩＲ，ｍｉＲ－１２５）等が挙げられる。ＲＵＮＸ１，ＲＵＮＸ２，ＭＥＣＯＭ，ＭＹＢ，ＭＹＣ，ＨＯＸＡ９，ＭＥＩＳ１，ＨＨＥＸ，及びＥＲＧは特に望ましい。

実施形態に係るＲＮＡ４は、例えば、転写因子ＲＵＮＸ１の配列の一部と相補的な配列を有するＲＵＮＸ１＿ＲＮＡ（配列番号１、表１参照）およびアンチセンスＲＵＮＸ１＿ＲＮＡ（配列番号２、表１参照）からなるｓｉＲＮＡであってもよい。

あるいは、実施形態に係るＲＮＡ４は、例えば、融合遺伝子ＲＵＮＸ１－ＲＵＮＸ１Ｔ１の配列の一部と相補的な配列を有するｓｉＲＮＡであってもよい。

ＲＮＡ４は、骨髄性腫瘍細胞の発症及び進展に関わる遺伝子の発現を抑制するｓｉＲＮＡの配列に加えて更なる配列を含んでもよい。更なる配列とは、例えばオーバーハング配列であってもよい。

また、ＲＮＡ４は、修飾されたＲＮＡであってもよく、例えば分解耐性を有するように修飾されていてもよい修飾は、ＲＮａｓｅ等によりＲＮＡが分解されないようにする公知の修飾であればよく、例えば、ＲＮＡへの天然修飾ヌクレオチド又は非天然ヌクレオチドの使用／導入、非天然配列の使用／付加、等である。

天然修飾ヌクレオチドは、例えば、シュードウリジン、５－メチルシチジン、１－メチルアデノシン等である。非天然ヌクレオチドは、例えば、ＢＮＡ（Ｂｒｉｄｇｅｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ）、ＬＮＡ（Ｌｏｃｋｅｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ）、又はＰＮＡ（Ｐｅｐｔｉｄｅ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ）等である。

非天然配列は、例えば、人工的に作成された天然には存在しない塩基配列であり、例えば、配列の一部にミスマッチな塩基を含んでもよい。

ＲＮＡ４をより大量に投与することで、骨髄性腫瘍細胞の発症及び進展に関わる遺伝子の発現をより抑制することができる。従って、脂質粒子１がより大量のＲＮＡ４を内包していることが好ましい。例えば脂質粒子１内に約２０００コピー以上含まれていることが好ましい。ＲＮＡ４の内包量は、ＲＮＡ４の立体構造及び塩基配列長、並びに脂質粒子１の脂質組成により左右される。

ＲＮＡ４は、そのままの状態で脂質粒子１に内包されてもよいし、核酸凝縮ペプチドによって凝縮された状態で脂質粒子１に内包されてもよい。核酸凝縮ペプチドを用いた場合、核酸を小さく凝縮することにより、脂質粒子１内に多くのＲＮＡ４を内包し、脂質粒子１の粒径を小さくすることができる。また、脂質粒子１外に残存するＲＮＡ４の量が減少され、それによって物質送達キャリア１０同士の凝集が防止される。その結果、ＲＮＡ４の送達効率が向上し得る。

好ましい核酸凝縮ペプチドは、例えば、カチオン性のアミノ酸を全体の４５％以上含むペプチドである。より好ましい核酸凝縮ペプチドは、一方の端にＲＲＲＲＲＲ（第１のアミノ酸配列）を有し、他方の端が配列ＲＱＲＱＲ（第２のアミノ酸配列）を有する。第１のアミノ酸配列と第２アミノ酸配列との間には、ＲＲＲＲＲＲ又はＲＱＲＱＲからなる中間配列を０個又は１個以上含む。また、第１のアミノ酸配列、第２のアミノ酸配列及び中間配列のうち、隣り合う２つの配列の間に２つ以上の中性アミノ酸を含む。中性アミノ酸は、例えば、Ｇ又はＹである。或いは、他方の端は第２のアミノ酸配列に変えて、ＲＲＲＲＲＲ（第１のアミノ酸配列）を有してもよい。

上記核酸凝縮ペプチドは、好ましくは、以下のアミノ酸配列を有する：
ＲＱＲＱＲＹＹＲＱＲＱＲＧＧＲＲＲＲＲＲ （配列番号３）
ＲＱＲＱＲＧＧＲＲＲＲＲＲ （配列番号４）
ＲＲＲＲＲＲＹＹＲＱＲＱＲＧＧＲＲＲＲＲＲ （配列番号５）。

更に、次のようなアミノ酸配列を有する核酸凝縮ペプチドを上記の何れかの核酸凝縮ペプチドと組み合わせて用いることもできる：
ＧＮＱＳＳＮＦＧＰＭＫＧＧＮＦＧＧＲＳＳＧＰＹＧＧＧＧＱＹＦＡＫＰＲＮＱＧＧＹ（Ｍ９）（配列番号６）。

このペプチドは、上記核酸凝縮ペプチドで凝縮した核酸凝集体を更に凝縮することができる。

例えば、脂質粒子１に内包する前に、ＲＮＡ４を核酸凝縮ペプチドと撹拌混合することによってＲＮＡ４を凝縮することができる。

脂質粒子１は、ＲＮＡ４の他に、必要に応じてｐＨ調整剤、浸透圧調整剤、又は骨髄性腫瘍細胞の他の治療薬等を内包してもよい。

・物質送達方法
以下に、第２実施形態の物質送達キャリア１０を用いて、骨髄性腫瘍細胞に骨髄性腫瘍細胞の発症及び進展に関わる遺伝子の発現を抑制するＲＮＡを送達することで、骨髄性腫瘍細胞の増殖を抑制する物質送達方法について説明する。第２実施形態の物質送達方法は、図３に示すように、実施形態の物質送達キャリア１０を骨髄性腫瘍細胞に接触させること（接触工程Ｓ１）を含む。

骨髄性腫瘍細胞は、例えば対象の生体内に存在するものである。対象は、好ましくはヒトであるが、ヒトを除く動物であってもよい。動物は、哺乳動物であることが好ましい。対象は、骨髄性腫瘍と診断された対象、骨髄性腫瘍に罹患している又はそれが予想される対象等であってもよい。

この場合、接触工程Ｓ１は、物質送達キャリア１０を含む組成物を対象に投与することによって行われる。投与経路は特に限定されるものではなく、例えば、静脈注射、皮下注射、筋肉内注射、動脈注射、硬膜外注射、脳脊髄腔注射、胸腔内注射、腹腔内注射、局所・病巣内注射等、或いは点滴等によって全身投与する。投与スケジュールは、用途、対象の性別、年齢、体重又は病態等を考慮して選択すればよく、単回投与であってもよいし、連続的又は定期的な複数回投与であってもよい。投与によって、物質送達キャリア１０は例えば血液により運ばれ、体内の骨髄性腫瘍細胞６と接触する。

図４の（ａ）に示すように、骨髄性腫瘍細胞６と接触した物質送達キャリア１０は、例えばエンドサイトーシスにより骨髄性腫瘍細胞６に取り込まれる。それによってＲＮＡ４が骨髄性腫瘍細胞６に導入され、骨髄性腫瘍細胞６内でＲＮＡ４が、骨髄性腫瘍細胞の発症及び進展に関わる遺伝子８の発現を抑制する。例えば、ＲＮＡ４がｓｉＲＮＡである場合、ｓｉＲＮＡは細胞内への導入後に一本鎖へと解離され、アンチセンス鎖にアルゴノートが結合し、核酸タンパク質複合体であるＲＮＡ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ ｃｏｍｐｌｅｘ（ＲＩＳＣ）９を形成する。このＲＩＳＣ９が、例えば骨髄性腫瘍細胞の発症及び進展に関わる遺伝子の転写物であるｍＲＮＡ１１と特異的に結合し、結合箇所を切断することによりｍＲＮＡ１１を分解する。このように遺伝子発現が抑制される結果、対象内の骨髄性腫瘍細胞６の増殖を抑制することが可能である。

ｓｉＲＮＡを細胞内へと導入する方法として、ｓｉＲＮＡをコードするＤＮＡ（ｓｈＲＮＡ）を、例えばレンチウイルスベクター等を用いて対象の細胞のゲノムに組み込み、ゲノムの発現により細胞内でｓｉＲＮＡを産生させる方法や、ｓｈＲＮＡを例えばプラスミドといったベクターによって細胞内に導入し、ｓｈＲＮＡの転写により産生させる方法が知られている。しかしながら、これら既知の方法は、１細胞あたりの導入コピー数が数十コピーと少ないためにその発現量が限定的であること、発現するまでに期間が必要であり治療としての即効性が十分でないこと、又は、宿主細胞のゲノムが改変されるため安全性に対する担保が必要であること、が技術的課題であった。

実施形態に係る物質送達キャリア１０は、ＲＮＡをｓｉＲＮＡの形態で導入するものであり、対象の細胞内での遺伝子発現を必要としない。このため、骨髄性腫瘍細胞の増殖抑制作用を即時に対象に及ぼすことができ、かつ、物質送達キャリア１０の使用による対象への影響を一過的な影響に留めることができる。すなわち、実施形態に係る物質送達キャリア１０を使用することで、既知の方法よりも治療期間を短縮することができ、かつ、上記既知の方法よりも対象への負担を軽減することができ、安全性の面で優れているため好ましい。

また、実施形態に係る物質送達キャリア１０は、約１０００コピーのｓｉＲＮＡを内包することができる。そのため、実施形態に係る物質送達キャリア１０は、１つの骨髄性腫瘍細胞に、上記既知の方法よりも多量のｓｉＲＮＡのコピーを導入することが可能である。従って、本実施形態に係る物質送達キャリア１０は、より優れた骨髄性腫瘍に対する治療効果を呈する。

［例］
以下、実施形態の物質送達キャリアを製造して使用した例について説明する。

例１ 骨髄性腫瘍への脂質粒子取込量の評価
・物質送達キャリアの調製
脂質粒子に内包するｓｉＲＮＡとエタノール溶解脂質溶液とを複数種類用意した。内包するｓｉＲＮＡの塩基配列を表２に、エタノール溶解脂質溶液の組成を表３に示す。

脂質粒子が内包しているｓｉＲＮＡは２本鎖ＲＮＡであり、ＲＵＮＸ１＿ＲＮＡ（配列番号１）の一部とＡｎｔｉｓｅｎｓｅ＿ＲＵＮＸ１＿ＲＮＡ（配列番号６）の一部とが相補的に結合しているｓｉＲＮＡ（以下、ｓｉＲＵＮＸ１とする）と、ＮＴ＿ＲＮＡ（配列番号７）の一部とＡｎｔｉｓｅｎｓｅ＿ＮＴ＿ＲＮＡ（配列番号８）の一部とが相補的に結合しているｓｉＲＮＡ（以下、ｓｉＮＴとする）を用意した。

ｓｉＲＵＮＸ１は、骨髄性腫瘍細胞の発症及び進展に関わる遺伝子の転写物であるｍＲＮＡを分解し、破壊する作用を有するｓｉＲＮＡである。他方で、ｓｉＮＴはｓｉＲＵＮＸ１と略同一長（約２０ｂｐ）の塩基配列であるものの、そのようなｍＲＮＡを分解し破壊する作用を示さないｓｉＲＮＡである。従って、ｓｉＮＴを内包した脂質粒子を対照区として、ｓｉＲＵＮＸ１を内包する脂質粒子と同様の実験を行うことで、目的物質がｓｉＲＵＮＸ１であることの効果を明らかにすることができる。

表３は、本例で使用した３種のエタノール溶解脂質溶液の組成Ａ，Ｂ及びＣ（モル比）を示す。前述したように、脂質粒子１の構成成分の混合比は脂質混合物中の各材料の混合比と略同一であるから、組成Ａ，Ｂ及びＣはエタノール溶解脂質溶液を用いて作成される各脂質粒子のモル比組成である。「ＦＦＴ－２０」は式（Ｉ）の化合物であり、「ＦＦＴ－１０」は式（ＩＩ）の化合物である。また、表３中の「Ｃｈｏｌ」は、コレステロールを指す。

表３に記載のエタノール溶解脂質溶液に、表２に記載のｓｉＲＮＡを溶解させた１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ （ｐＨ７．３）を添加し、ピペッティングにより懸濁させた。この溶液に７倍量の１０ｍＭＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．３）を添加したあと、限外ろ過装置（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ－０．５ｍＬ、Ｕｌｔｒａｃｅｌ－５０Ｋ ミリポア）で溶液の濃縮と１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．３）への溶液置換を行って、ｓｉＲＮＡを内包した脂質粒子をそれぞれ得た。脂質粒子に内包されている総ＲＮＡ量は、ＲＮＡ定量キットであるＱｕａｎｔｉＦｌｕｏｒ（登録商標）ＲＮＡ Ｓｙｓｔｅｍ（プロメガ製）で測定した。総脂質粒子数は、粒子特性測定装置であるナノサイト（Ｍａｌｖｅｒｎ社製）で測定した。１つの脂質粒子に内包されるＲＮＡ量は、測定された総ＲＮＡ量と総脂質粒子数で除することで換算して算出した。

・結果
表４に、組成Ａ又はＢの脂質粒子に内包されたＲＮＡのコピー数を示す。

表４の結果を参照すると、組成Ｂの脂質粒子における内包核酸の量は組成Ａの脂質粒子における内包核酸の量よりも多く、組成Ｂの脂質粒子がより多量の核酸を内包できることが分かる。この結果は、脂質粒子の組成が、内包し得る核酸コピー数に影響を与えることを示しており、内包する核酸量をより高濃度にするためには脂質粒子の脂質組成を組成Ｂにする、又は、組成Ｂにより近づけることが好ましいことが分かる。

・脂質粒子の酸解離定数（ｐＫａ）の測定
表３に記載の脂質組成で構成される脂質粒子０．１μｇを、１０ｍＬの１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．３）で希釈した。脂質粒子を取り込ませたＨＥＰＥＳ緩衝液は、動的光拡散式測定装置であるゼータサイザーナノＺＳＰ（Ｍａｌｖｅｒｎ社製）の測定用セルに装填し、０．２５Ｍ 塩酸及び０．２５Ｍ 水酸化ナトリウム水溶液を用いて、ｐＨ５．０～１１．０の範囲で滴定を行った。さらに、滴定結果から酸解離定数を算出した。なお、酸解離定数は、物質毎に固有の値を示すとともにイオン強度によって変動ことから、今回の実験に用いた１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ－Ｎａ緩衝液（ｐＨ７．３）のイオン強度（Ｉ）は、Ｉ＝３．５９９×１０^－３ｍｏｌ／ｄｍ^３と理論上計算した。

・結果
表５に、脂質組成がＡ、Ｂ、又はＣである各脂質粒子の酸解離定数を示す。

表５の結果を参照すると、組成Ｂ及び組成Ｃの脂質粒子の酸解離定数は、組成Ａの脂質粒子の酸解離定数よりも低い。この結果は、脂質粒子の組成が脂質粒子の酸解離定数に影響を与えることを示唆している。すなわち、脂質粒子の酸解離定数をより低くするためには、脂質粒子の脂質組成を、組成Ａよりも組成Ｂ又はＣへと近づけると好ましいことが分かる。「組成Ａよりも組成Ｂ又はＣに近づける」とは、脂質組成のうち、組成Ａは満たさないが組成Ｂ及びＣが共通して満たしている数値範囲があれば、その数値範囲に設定することを指す。具体的には、脂質粒子の脂質組成は、ＦＦＴ－２０を少なくとも含んでいることが好ましい。また、脂質粒子の脂質組成は、ＦＦＴ－２０の占める割合（モル比）を約３０％以上にするとより好ましい。

・骨髄性腫瘍細胞の調製
骨髄性腫瘍細胞として、種々のヒト白血病細胞株を用意した。具体的には、ＴＦ－１（赤白血病由来）、Ｋａｓｕｍｉ－１（急性骨髄芽球性白血病由来）、ＯＣＩ－ＡＭＬ３（急性骨髄性白血病由来）、Ｍｏｌｍ－１３（急性骨髄性白血病由来）を用意した。これらの細胞は、２４ウェル培養プレートに１×１０^５／１０００μｌで播種されるように調製した。

・骨髄性腫瘍細胞への脂質粒子の導入
各骨髄性腫瘍細胞が播種されたプレートに１μｇの脂質粒子を添加し、ピペッティングでよく混合してから、３７℃、５％ＣＯ_２雰囲気のインキュベータ内で培養した。２日ごとに培養プレートから同細胞を回収して細胞数を計測し、当該回収と計測の度に５分の１の細胞を再び２４ウェル培養プレートに播種し、そこに１μｇの脂質粒子を添加して培養を再開していた。培養開始から８日目に同細胞を回収し、Ｌｙｓｉｓ Ｂｕｆｆｅｒで処理を行い、ゲル電気泳動により分離し、ウェスタンブロッティングを行った。染色は、抗ＲＵＮＸ１抗体を用いて行った。

・結果
図５の（ａ）には、ヒト白血病細胞株ＴＦ－１に、ｓｉＮＴ又はｓｉＲＵＮＸ１を内包する組成Ａの脂質粒子を導入した後の細胞数の経時変化を示した。図５の（ｂ）には、ヒト白血病細胞株ＴＦ－１に、ｓｉＮＴ又はｓｉＲＵＮＸ１を内包する組成Ｂの脂質粒子を導入した後の細胞数の経時変化を示した。図５の（ｃ）には、ヒト白血病細胞株ＴＦ－１に、ｓｉＮＴ又はｓｉＲＵＮＸ１を内包する組成Ｃの脂質粒子を導入した後の細胞数の経時変化を示した。図５の（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）において、破線は内包するｓｉＲＮＡがｓｉＮＴであり、実線は内包するｓｉＲＮＡがｓｉＲＵＮＸ１であることを示す。

図５の（ａ）を参照すると、脂質組成Ａの脂質粒子を導入した骨髄性腫瘍細胞の細胞数は、ｓｉＮＴを用いた場合でもｓｉＲＵＮＸ１を用いた場合でもほぼ同様に増加し、ｓｉＲＵＮＸ１による増殖抑制効果は微少であった。図５の（ｂ）及び（ｃ）を参照すると、ｓｉＲＵＮＸ１を内包した脂質組成Ｂ又はＣの脂質粒子を導入した骨髄性腫瘍細胞は、その増殖が抑制されていることが分かる。特に脂質組成Ｂである場合に、ｓｉＲＵＮＸ１内包脂質粒子の導入による増殖抑制効果が顕著であることが分かる。

従って、ｓｉＲＵＮＸ１内包脂質粒子による細胞増殖抑制効果は、脂質粒子の脂質組成に影響され、組成Ａよりも組成Ｂ及びＣの方が顕著であることが分かる。これは、前述したように、脂質粒子の脂質組成が、内包可能な核酸コピー数、及び脂質粒子の酸解離定数に影響を与えることに起因するためと推測される。

図６の（ａ）には、ヒト白血病細胞株ＴＦ－１に、ｓｉＮＴ又はｓｉＲＵＮＸ１を内包する組成Ｂ又はＣの脂質粒子を導入した後の細胞数の経時変化を示した。図６の（ｂ）には、ヒト白血病細胞株Ｋａｓｕｍｉ－１に、ｓｉＮＴ又はｓｉＲＵＮＸ１を内包する組成Ｂ又はＣの脂質粒子を導入した後の細胞数の経時変化を示した。図６の（ｃ）には、ヒト白血病細胞株ＯＣＩ－ＡＭＬ３に、ｓｉＮＴ又はｓｉＲＵＮＸ１を内包する組成Ｂ又はＣの脂質粒子を導入した後の細胞数の経時変化を示した。図６の（ｄ）には、ヒト白血病細胞株Ｍｏｌｍ１３に、ｓｉＮＴ又はｓｉＲＵＮＸ１を内包する組成Ｂ又はＣの脂質粒子を導入した後の細胞数の経時変化を示した。図６の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）又は（ｄ）において、縦軸は細胞数（Ｃｅｌｌｓ×１０^３）、横軸は培養経過日数（Ｄａｙｓ）である。また、図６の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）又は（ｄ）において、▲のシンボルは組成ＢのｓｉＲＵＮＸ１内包脂質粒子を導入した場合の細胞数の経時変化、●のシンボルは組成ＣのｓｉＲＵＮＸ１内包脂質粒子を導入した場合の細胞数の経時変化を示し、破線は内包するｓｉＲＮＡがｓｉＮＴであり、実線は内包するｓｉＲＮＡがｓｉＲＵＮＸ１であることを示す。

図６の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）又は（ｄ）を参照すると、ヒト白血病細胞株ＴＦ－１、Ｋａｓｕｍｉ－１、ＣＯＩ－ＡＭＬ３及びＭｏｌｍ１３のいずれも、脂質組成がＢ又はＣであるｓｉＮＴ内包脂質粒子を導入した場合には細胞数が増加している一方で、脂質組成がＢ又はＣであるｓｉＲＵＮＸ１内包脂質粒子を導入した場合には細胞増殖抑制効果が確認できた。従って、骨髄性腫瘍細胞の種類に関わらず、脂質組成がＢ又はＣであるｓｉＲＵＮＸ１内包脂質粒子は、骨髄性腫瘍細胞の抑制効果を有することが示された。

図７の（ａ）には、ヒト白血病細胞株ＴＦ－１又はＫａｓｕｍｉ－１に、ｓｉＮＴ又はｓｉＲＵＮＸ１内包脂質粒子を導入した後の細胞内から抽出したタンパク質解析結果を示した。図７の（ｂ）には、ヒト白血病細胞株ＯＣＩ－ＡＭＬ３にｓｉＮＴ又はｓｉＲＵＮＸ１内包脂質粒子を導入した後の細胞内から抽出したタンパク質解析結果を示した。図７の（ｃ）には、ヒト白血病細胞株Ｍｏｌｍ１３にｓｉＮＴ又はｓｉＲＵＮＸ１内包脂質粒子を導入した後の細胞内から抽出したタンパク質解析結果を示した。

図７の（ａ）、（ｂ）、又は（ｃ）を参照すると、組成Ｂ又はＣのｓｉＲＵＮＸ１内包脂質粒子を投与した全ての細胞群で、図７において右向き▲で示したＲＵＮＸ１タンパク質のバンドの存在度が低下していることが分かる。従って、骨髄性腫瘍細胞の種類に関わらず、脂質組成がＢ又はＣであるｓｉＲＵＮＸ１内包脂質粒子を導入することによって、ＲＵＮＸ１タンパク質の発現が抑制されていたことが示された。

例２ 骨髄性白血病の患者由来の細胞への脂質粒子取込量の評価
・骨髄性白血病の患者由来の細胞の調製、及び脂質粒子の導入
骨髄性白血病の患者由来の細胞であるＰＤＸ－ＡＭＬ－１を用意した。脂質粒子の導入は、前述の骨髄性腫瘍細胞への導入と同様に行い、細胞数の培養中の経時変化の測定も骨髄性腫瘍細胞の測定と同様に行った。

・結果
図８には、骨髄性白血病の患者から単離した細胞であるＰＤＸ－ＡＭＬ－１に、組成Ｂ又はＣのｓｉＮＴ又はｓｉＲＵＮＸ１内包脂質粒子を導入した場合の細胞数の経時変化を示した。図８において、縦軸は細胞数（Ｃｅｌｌｓ）、横軸は培養経過日数（Ｄａｙｓ）であり、▲のシンボルは組成Ｂの脂質粒子を導入した場合の細胞数の経時変化、●のシンボルは組成Ｃの脂質粒子を導入した場合の細胞数の経時変化を示し、破線は内包するｓｉＲＮＡがｓｉＮＴであり、実線は内包するｓｉＲＮＡがｓｉＲＵＮＸ１であることを示す。

図９には、骨髄性白血病の患者から単離した細胞であるＰＤＸ－ＡＭＬ－１へとｓｉＮＴ又はｓｉＲＵＮＸ１内包脂質粒子を導入した後に当該細胞内から抽出したタンパク質のうち、ＲＵＮＸ１発現タンパク質に関する解析結果を示す。

図８を参照すると、脂質組成が組成Ｂ又はＣであるｓｉＮＴ内包脂質粒子が導入された場合と比較すると、脂質組成が組成Ｂ又はＣであるｓｉＲＵＮＸ１内包脂質粒子が導入された場合には細胞増殖が抑制されていることが確認できた。また、図９を参照すると、組成Ｂ又はＣのｓｉＲＵＮＸ１内包脂質粒子を導入することで、ＲＵＮＸ１発現タンパク質の存在度が低下し、ＲＵＮＸ１の発現が抑制されていたことが示された。

従って、骨髄性腫瘍細胞が患者由来のものであっても、脂質組成が組成Ｂ又はＣであるｓｉＲＵＮＸ１内包脂質粒子は、骨髄性腫瘍細胞増殖及びＲＵＮＸ１発現の抑制効果を有することが示された。

本発明のいくつかの実施形態を説明したが、これらの実施形態は、例として提示したものであり、発明の範囲を限定することは意図していない。これら新規な実施形態は、その他の様々な形態で実施されることが可能であり、発明の要旨を逸脱しない範囲で、種々の省略、置き換え、変更を行うことができる。これら実施形態やその変形は、発明の範囲や要旨に含まれるとともに、特許請求の範囲に記載された発明とその均等の範囲に含まれる。

１…脂質粒子、１ａ…第１脂質、１ｂ…第２脂質、３…目的物質、４…ＲＮＡ、６…骨髄性腫瘍細胞、７…細胞、１０…物質送達キャリア、Ｓ１…接触工程。

Claims (14)

1. 骨髄性腫瘍細胞に目的物質を送達するための物質送達キャリアであって、
   脂質粒子と、前記脂質粒子に内包された前記目的物質とを備え、
   前記脂質粒子は、その構成成分として式（Ｉ）の第１脂質を少なくとも含む、物質送達キャリア。
   

   
2. 前記脂質粒子の脂質組成における前記第１脂質の割合（モル比）は１０％以上５０％以下である、請求項１に記載の物質送達キャリア。
3. 前記脂質粒子が弱カチオン性を示す、請求項１又は２に記載の物質送達キャリア。
4. イオン強度が３．５９９×１０^－３ｍｏｌ／ｄｍ^３の環境下で、前記脂質粒子の酸解離定数（ｐＫａ）は８．４以下である、請求項３に記載の物質送達キャリア。
5. 前記脂質粒子は、カチオン性脂質、中性脂質、凝集を防止する脂質及びコレステロールのうち少なくとも１種を更に構成成分として含む、請求項１～４の何れか１項に記載の物質送達キャリア。
6. 前記骨髄性腫瘍細胞の発症及び進展を抑制するために用いられる、請求項１～５の何れか１項に記載の物質送達キャリア。
7. 対象における骨髄性腫瘍を治療するために用いられる、請求項１～５の何れか１項に記載の物質送達キャリア。
8. 前記目的物質は、前記骨髄性腫瘍細胞の発症及び進展に関わる遺伝子の発現を抑制するｓｉＲＮＡを含む、請求項１～７の何れか１項に記載の物質送達キャリア。
9. 前記ｓｉＲＮＡは、前記遺伝子の一部と相補的な配列を含む、請求項８に記載の物質送達キャリア。
10. 前記遺伝子は、転写因子、融合遺伝子、エピゲノム制御因子、リン酸化酵素関連遺伝子、免疫抑制因子、ユビキチン関連因子、アポトーシス制御因子、及び、ｎｏｎ－ｃｏｄｉｎｇ ＲＮＡからなる群から選択される少なくとも１つである、請求項８又は９に記載の物質送達キャリア。
11. 前記遺伝子は、ＲＵＮＸ１，ＲＵＮＸ２，ＭＥＣＯＭ，ＭＹＢ，ＭＹＣ，ＨＯＸＡ９，ＭＥＩＳ１，ＨＨＥＸ，及びＥＲＧから選択される少なくとも１つである、請求項８または９に記載の物質送達キャリア。
12. 前記脂質粒子がｐＨ調整剤及び／又は浸透圧調整剤を更に内包する、請求項１～１１の何れか１項に記載の物質送達キャリア。
13. 前記請求項１乃至請求項１２のいずれか１項に記載の物質送達キャリアを含み、
    担体と保管保護剤の少なくともどちらか1つを更に含む、組成物。
14. 前記保管保護剤が、ジメチルスルホキシドである請求項１３に記載の組成物。

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