JP7536025B2 - 免疫調節性ポリヌクレオチドコンジュゲートと使用方法 - Google Patents

免疫調節性ポリヌクレオチドコンジュゲートと使用方法 Download PDF

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Description

［関連出願との相互参照］
この出願は、２０１８年１０月１７日に出願された米国仮出願第６２／７４７０７０号及び２０１８年１０月１８日に出願された米国仮出願第６２／７４７６１１号の優先権を主張し、それら出願のそれぞれをその全体について出典明示によりここに援用する。
［ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出］
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの次の提出書類の内容を、その全体について出典明示によりここに援用する：コンピュータ可読形式（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：１８６４９２０００３４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴ、記録日：２０１９年１０月１６日、サイズ：３４６ＫＢ）。
［分野］
ここに提供されるのは、ターゲティング部分及び免疫調節性ポリヌクレオチドを含む、ナチュラルキラー細胞又は骨髄系細胞を調節するためのコンジュゲートである。またここに提供されるのは、ターゲティング部分及び免疫調節性ポリヌクレオチドを含むコンジュゲートと薬学的に許容可能な添加物とを含む、ナチュラルキラー細胞又は骨髄系細胞を調節するための薬学的組成物である。加えてここに提供されるのは、ナチュラルキラー細胞又は骨髄系細胞を調節し、増殖性疾患を治療するためのそれらの使用方法である。
ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）は、自然免疫系に重要な細胞傷害性リンパ球であり、ＮＫ細胞は、抗体及びＭＨＣの非存在下で、ウイルス感染細胞及び腫瘍形成に迅速に応答する。ＮＫ細胞は、適応免疫応答へのインターフェースとしても機能し、抗体による腫瘍－抗原ターゲティングを伴うがん免疫療法において大きな役割を果たしうる。適応免疫応答では、ＮＫ細胞は免疫系のエフェクター細胞として機能し、特異的抗体によってマークされたその膜表面抗原を有する標的細胞を活発に溶解する。この細胞媒介性免疫防御のメカニズムは、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）として知られている。Hashimoto等, J. Infect. Dis. 1983, 148, 785-794。ＮＫ細胞によって媒介されるＡＤＣＣは、神経芽細胞腫、乳がん、及びＢ細胞リンパ腫のような独特の抗原を過剰発現する様々ながんの治療に使用される多くの抗がん抗体の治療効果の主要メカニズムである。Wang等, Front. Immunol. 2015, 6, 368；Zahavi等, Antibody Therapeut. 2018, 1，7-12。ＮＫ細胞活性を増強するアプローチは、ＡＤＣＣを増加させ、そのような抗がん治療薬の有効性を増強する場合がある。加えて、ＮＫ細胞は、腫瘍細胞の表面上のリガンドの発現の変化を検出するナチュラル細胞傷害受容体を有しており、これが最終的にＮＫ細胞活性化と腫瘍細胞溶解をトリガーする。ＮＫ細胞は長期にわたって発達し、様々な抗原に対する特異的な記憶を強調することが報告されている。Paust等, Nat. Immunol. 2011, 12, 500-508。研究では、ＮＫ細胞は悪性腫瘍の患者において頻繁に欠乏し、機能不全になることが示され、これががんの免疫回避と進行の重要な要因でありうることが示されている。更に、がん細胞機能の低さががんを発症するリスクの増加を予測することが見出されている。Berrien-Elliot等, Curr. Opin. Organ Transplant. 2015, 20, 671-680；Imai等, Lancet 2000, 356, 1795-1799。本質的に、ＮＫ細胞を活性化し、増やす戦略を開発することは、悪性腫瘍の治療に有利である。
ＮＫ細胞は、Ｂリンパ球及びＴリンパ球を産生するリンパ球系共通前駆細胞に由来する。それらは、循環に入る前に骨髄、リンパ節、脾臓、扁桃腺、及び胸腺において分化し、成熟する。ＮＫ細胞は、ＣＤ１６及びＣＤ５６表面マーカーを共通に発現する古典的及び非古典的サブセットとして存在する。（神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）とも呼ばれる）ＣＤ５６は、細胞間接着、神経突起伸長、シナプス可塑性、及び学習と記憶に関与している同種親和性結合糖タンパク質である。ＣＤ５６に陽性に染色される正常細胞には、ＮＫ細胞、活性化Ｔ細胞、脳及び小脳、並びに神経内分泌組織が含まれる。ＣＤ５６陽性である腫瘍には、骨髄腫、骨髄性白血病、神経内分泌腫瘍、ウィルムス腫瘍、成人神経芽細胞腫、ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、膵腺房細胞がん、褐色細胞腫、小細胞性肺がんが含まれる。Van Acker等, Front. Immunol. 2017, 8, 892。
骨髄系細胞は骨髄の造血幹細胞（ＨＳＣ）に起源をもつ一連の骨髄系前駆細胞に由来する。骨髄系細胞は体内で最も豊富な有核造血細胞であり、好中球、単球、マクロファージ、樹状細胞（ＤＣ）、好酸球、及び肥満細胞を含む、幾つかの種類の細胞からなる。病原体が侵入すると、骨髄系細胞が様々なケモカイン受容体を介して局所組織に迅速に補充され、そこで食作用並びに炎症性サイトカインの分泌のために活性化され、自然免疫において大きな役割を果たす。マクロファージは、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を介して腫瘍細胞を直接殺すことができる。骨髄系細胞はまた、主にＤＣ及びマクロファージによる抗原提示と適応免疫細胞の補充を通じて、自然免疫と適応免疫を関連付ける上で重要な役割を果たす。骨髄系細胞のサブセットにはまた腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）及び骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）が含まれる。ＴＡＭは、固形腫瘍の微小環境において大きい数で存在する異種機能及び表現型を有する組織マクロファージである。ＴＡＭは、腫瘍細胞の開始と転移を促進し、Ｔ細胞によって媒介される抗腫瘍免疫応答を阻害し、腫瘍血管新生とその後の腫瘍進行を刺激しうる。Yang及びZhang, J. Hematol. Oncol. 2017, 10, 58。更に、ＴＡＭは、進行がんにおける適応免疫の抑制に寄与する。単球性及び顆粒球性亜集団を含むＭＤＳＣは、Ｔ細胞適応免疫を無効にすることによってがん逃避を促進する免疫抑制ネットワークに寄与する。ＭＤＳＣはがん進行を通して蓄積され、臨床転帰不良並びにマウス腫瘍系における化学療法、放射線、及び免疫療法に対する耐性に関連している。Waight等, J. Clin. Investig. 2013, 123, 4464-4478；Alizadeh等, Cancer Res. 2014, 74, 104-118。マクロファージによるＡＤＣＰの増加、樹状細胞によるＡＰＣ機能の増強、ＴＡＭ及びＭＤＳＣの免疫抑制活性の低下などの骨髄系細胞活性の調節は、抗腫瘍自然及び適応免疫を促進し、チェックポイント阻害剤、ワクチン及びＴ細胞指向性免疫療法剤などの他の抗がん剤の有効性を増強しうる。
シグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）は、ＳＩＲＰα、ＳＩＲＰβ、及びＳＩＲＰγを含む、免疫細胞によって主に発現される幾つかの膜糖タンパク質からなる。ＳＩＲＰαは、主に骨髄系細胞によって発現される。ＳＩＲＰαは、その細胞質免疫受容抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）ドメインを介して抑制性受容体として作用し、広く発現している膜貫通タンパク質ＣＤ４７と相互作用する。この相互作用は、自然免疫細胞のエフェクター機能を負に制御する。ＳＩＲＰαはマクロファージ膜上で横方向に拡散し、食作用シナプスで蓄積してＣＤ４７に結合し、マクロファージによる食作用の細胞骨格集中的食作用プロセスを阻害する「自己」をシグナル伝達する。これは、ＭＨＣクラスＩ分子がＩｇ様又はＬｙ４９受容体を介してＮＫ細胞に提供する自己シグナルに類似している。ＳＩＲＰαは好中球、樹状細胞、ＭＤＳＣなどの他の骨髄系細胞においてもまた発現しており；これらの細胞集団の活性化と成熟を調節する抑制性受容体として機能しうる。ＳＩＲＰαと比較して、ＳＩＲＰβは骨髄系細胞において重複する発現を示すが、細胞質ドメインが異なり、ＣＤ４７以外の異なるリガンドと相互作用しうる。ＳＩＲＰγは、Ｔ細胞及びＭＫ細胞などのリンパ球系細胞において発現される。ＳＩＲＰγもまたＣＤ４７と相互作用するが、細胞質ドメインが短く、ＳＩＲＰαと同様のシグナル伝達特性を持つ可能性は低い。Barclay及びBrown, Nat. Rev. Immunol. 2006, 6, 457-64。
Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）は、細菌、ウイルス、真菌、及び原生動物に由来する病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を感知することによって病原体を認識する、自然免疫の重要なパターン認識受容体である。Akira等, Nat. Rev. Immunol. 2004, 4, 499-511；Zhang等, Science 2004, 303, 1522-1526。各ＴＬＲは、膜貫通ドメイン、ロイシンリッチリピートモチーフを持つ細胞外ＰＡＭＰ結合ドメイン、及びシグナル伝達カスケードを開始する細胞内Ｔｏｌｌ－ＩＬ－１受容体ドメインを含む。Gay及びGangloff, Annu. Rev. Biochem. 2007, 76, 141-165。ＴＬＲによる侵入微生物の認識は、サイトカイン及びケモカインを分泌する下流のシグナル伝達カスケードの活性化につながり、最終的には、病原体を浄化する自然免疫応答と適応免疫応答の両方の活性化をもたらす。Takeda及びAkira, Semin. Immunol. 2004, 16, 3-9；Shi等, J. Biol. Chem. 2016, 291, 1243-1250。ヒトでは、ＴＬＲ－１、ＴＬＲ－２、ＴＬＲ－３、ＴＬＲ－４、ＴＬＲ－５、ＴＬＲ－６、ＴＬＲ－７／８、ＴＬＲ－９、及びＴＬＲ－１０を含む、１０種のＴＬＲが同定されている。D’Arpa及びLeung, Adv. Wound Care 2017, 6, 330-343。
ＣＤ２８９とも命名されているＴｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）は、樹状細胞（ＤＣ）、Ｂリンパ球、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、及び他の抗原提示細胞を含む免疫系細胞において発現される重要な受容体である。ＴＬＲ９活性化は、細胞内シグナル伝達カスケードをトリガーし、これらの免疫細胞における活性化、成熟、増殖及びサイトカイン産生を導き、よって自然免疫と適応免疫の橋渡しをする。Martinez-Campos等, Viral Immunol. 2016, 30, 98-105；Notley等, Sci. Rep. 2017, 7, 42204。天然ＴＬＲ－９アゴニストは、非メチル化シトシン－グアニンジヌクレオチド（ＣｐＧ）含有オリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ ＯＤＮ）を含む。
ＣｐＧ ＯＤＮは、一般に、クラスＡ、クラスＢ、及びクラスＣの三クラスに分けられる。クラスＡのＣｐＧ ＯＤＮは、典型的には、３’及び５’末端にホスホロチオエート骨格を持つポリ－Ｇテールと、ホスフェート骨格を含む中央パリンドローム配列を含む。クラスＡのＣｐＧ ＯＤＮは、典型的には、その中央パリンドローム配列内にＣｐＧを含む。クラスＢのＣｐＧ ＯＤＮは、典型的には、完全ホスホロチオエート骨格を含み、５’末端のその配列はしばしばＴＬＲ９活性化に重要である。クラスＣのＣｐＧ ＯＤＮは、二重鎖の形成を可能にする３’末端配列を持つ完全ホスホロチオエート骨格を含む。しかし、ＣｐＧ ＯＤＮはしばしば血清中で分解されやすいため、ＣｐＧ ＯＤＮの薬物動態が治療薬としてのその開発における制限要因の一つになりうる。また、ＣｐＧ ＯＤＮは、しばしばインビボで不均一な組織分布を示し、主要な蓄積部位は肝臓、腎臓、及び脾臓にある。このような分布は、ＰＡＭＰに関連するオフターゲット活性と局所毒性を誘発する場合がある。従って、治療用途に対しては、ＣｐＧ ＯＤＮを安定化し送達するための効果的な方法が必要である。
ここに提供されるのは、ターゲティング部分及び免疫調節性ポリヌクレオチドを含む、ナチュラルキラー細胞又は骨髄系細胞を調節するためのコンジュゲートである。
またここに提供されるのは、ターゲティング部分及び免疫調節性ポリヌクレオチドを含むコンジュゲートと；薬学的に許容可能な担体とを含む、ナチュラルキラー細胞又は骨髄系細胞を調節するための薬学的組成物である。
加えてここに提供されるのは、ターゲティング部分及び免疫調節性ポリヌクレオチドを含むコンジュゲートに細胞を接触させることを含む、ナチュラルキラー細胞又は骨髄系細胞を調節する方法である。
更にここに提供されるのは、ターゲティング部分及び免疫調節性ポリヌクレオチドを含むコンジュゲートを対象に投与することを含む、対象における増殖性疾患を治療する方法である。
ここに提供されるのは、式（Ｃ）：
Figure 0007536025000001
のコンジュゲート又はその立体異性体、二以上のジアステレオマーの混合物、互変異性体、又は二以上の互変異性体の混合物；又はその薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、又は水和物であり；ここで、
Ａｂは、抗ＣＤ５６抗体又は抗ＳＩＲＰ抗体であり；
各ＬＮは、独立してリンカーであり；
各Ｑは、独立して免疫調節性ポリヌクレオチドであり；
各ｅは、独立して約１、約２、約３、又は約４の整数であり；かつ
ｆは、約１、約２、約３、又は約４の整数である。
図１は、対照：ＣｐＧヌクレオチド（ｐ４２５）単独、抗ＣＤ５６抗体（抗ＣＤ５６）単独、及び媒体（水平破線）との比較での、抗ＣＤ５６－ＣｐＧヌクレオチド（配列番号：４２５）コンジュゲート（抗ＣＤ５６－ＣＰＧ）を用いた末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の２４時間処理の際のＣＤ６９発現の増加によって測定したＮＫ細胞の活性化を示す。
図２は、対照：ＣｐＧヌクレオチド（ｐ４２５）単独、抗ＣＤ５６抗体（抗ＣＤ５６）単独、及び媒体（水平破線）との比較での、抗ＣＤ５６－ＣｐＧヌクレオチド（配列番号：４２５）コンジュゲート（抗ＣＤ５６－ＣＰＧ）を用いたＰＢＭＣの４８時間処理の際のＣＤ６９発現の増加によって測定したＮＫ細胞の活性化を示す。
図３は、対照：ＣｐＧヌクレオチド（ｐ４２５）単独、抗ＳＩＲＰα抗体（抗Ｓｉｒｐα１及び抗Ｓｉｒｐα２）単独、及び媒体（水平破線）との比較での、遮断抗ＳＩＲＰα抗体（抗Ｓｉｒｐα１）又は非遮断抗ＳＩＲＰα抗体（抗Ｓｉｒｐα２）を含む抗ＳＩＲＰα－ＣｐＧヌクレオチド（配列番号：４２５）コンジュゲート（抗Ｓｉｒｐα１－ＣｐＧ及び抗Ｓｉｒｐα２－ＣｐＧ）を用いたＰＢＭＣの処理の際のＣＤ１４＋細胞の増加を示す。
図４は、対照：ＣｐＧヌクレオチド（ｐ４２５）単独、抗ＳＩＲＰα抗体（抗Ｓｉｒｐα１及び抗Ｓｉｒｐα２）単独、及び媒体（水平破線）との比較での、遮断抗ＳＩＲＰα抗体（抗Ｓｉｒｐα１）又は非遮断抗ＳＩＲＰα抗体（抗Ｓｉｒｐα２）を含む抗ＳＩＲＰα－ＣｐＧヌクレオチド（配列番号：４２５）コンジュゲート（抗Ｓｉｒｐα１－ＣｐＧ及び抗Ｓｉｒｐα２－ＣｐＧ）を用いた精製ＣＤ１４＋細胞の処理の際のＣＤ１４＋細胞の増加を示す。
図５は、対応する構造と共に略語を示す一連の構造を示す。略語は表２で使用されているものである。
図６は、対応する構造と共に略語を示す一連の構造を示す。略語は表２で使用されているものである。
図７Ａ－７Ｄは、抗ＳＩＲＰα－ＣｐＧヌクレオチドコンジュゲートによる腫瘍増殖のインビボでの阻害を示す。図７Ａ：ＰＢＳ対照との比較での、三日あけて二回投与した１０ｍｇ／ｋｇの抗ＳＩＲＰα１コンジュゲート（遮断抗体）又は三日あけて二回投与した非コンジュゲート抗ＳＩＲＰα抗体を用いた処置後の経時的な平均ＣＴ２６腫瘍サイズの測定。 図７Ｂ：ＰＢＳ対照との比較での、両方共２ｑ３で投与された、３ｍｇ／ｋｇの抗ＳＩＲＰα１コンジュゲート（遮断抗体）又は抗ＳＩＲＰα２コンジュゲート（非遮断抗体）を用いた処置後の経間的な平均ＣＴ２６腫瘍サイズの測定。 図７Ｃ：ＰＢＳ対照との比較での、全て２ｑ３で投与された、１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、又は０．１ｍｇ／ｋｇの抗ＳＩＲＰα１コンジュゲート（遮断抗体）を用いた処置後の経時的な平均ＣＴ２６腫瘍サイズの測定。 図７Ｄ：対照との比較での、２ｑ３で投与された１０ｍｇ／ｋｇの抗ＳＩＲＰα１コンジュゲート（遮断抗体）を用いた処置後の経時的な平均ＭＣ３８腫瘍サイズの測定。ｍｐｋ＝ｍｇ／ｋｇ。２ｑ３＝３日空けて２用量。矢印はコンジュゲート又は対照の投与を示す。
図８Ａ及び８Ｂは、抗ＳＩＲＰα－ＣｐＧヌクレオチドコンジュゲートによる腫瘍増殖のインビボ阻害を示す。図８Ａ：ＰＢＳ対照との比較での、３日空けて２回投与された、又は７日空けて２回投与された、１ｍｇ／ｋｇの抗ＳＩＲＰα１コンジュゲート（遮断抗体）を用いた処置後の経時的な平均ＣＴ２６腫瘍サイズの測定。 図８Ｂ：図８Ａに記載のように投与されたＣＴ２６腫瘍モデルにおけるマウスの生存率曲線。ｍｐｋ＝ｍｇ／ｋｇ。２ｑ３＝３日空けて２用量。２ｑ７＝７日空けて２用量。矢印はコンジュゲート又は対照の投与を示す。
［定義］
ここに記載の開示の理解を容易にするために、幾つかの用語を以下に定義する。
一般に、ここで使用される命名法とここで記載される生物学、生化学、医薬品化学、有機化学、及び薬理学における検査手技は、当該分野においてよく知られ、一般に用いられているものである。特に定義されない限り、ここで使用される全ての技術及び科学用語は、一般に、この開示が属する分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。
「対象」という用語は、限定されないが、霊長類（例えば、ヒト）、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、及びマウスを含む、動物を指す。「対象」及び「患者」という用語は、例えば、ヒト対象などの哺乳類の対象、一実施態様では、ヒトを参照して、ここでは互換的に使用される。
ここで使用される「脱塩基スペーサー」という用語は、次の構造：
Figure 0007536025000002
の二価基を表し、ここで、
ｎ１は、約０又は約１の整数であり、
ｎ２は、約１から約６の整数であり、
Ｒ１は、免疫調節性ポリヌクレオチドにおけるヌクレオシドへの結合であり、
Ｒ２は、免疫調節性ポリヌクレオチドにおけるヌクレオシド又はキャッピング基への結合であり、
各Ｌ１は、独立して、ホスホジエステル又はホスホトリエステルであり、かつ
各Ｌ２は、糖アナログであり、
但し、
脱塩基スペーサーがヌクレオシド間の脱塩基スペーサーである場合、各ｎ１は１であり、かつＲ２はヌクレオシドへの結合であり、かつ、
脱塩基スペーサーが末端の脱塩基スペーサーである場合、各ｎ１は独立して約０又は約１の整数であり、かつＲ２はキャッピング基への結合である。
「約」又は「およそ」という用語は、当該分野における当業者によって決定される特定の値に対しての許容可能な誤差を意味し、その値がどのように測定され又は決定されるかに部分的に依存する。所定の実施態様では、「約」又は「およそ」という用語は、１、２、３、又は４標準偏差内を意味する。所定の実施態様では、「約」又は「およそ」という用語は、与えられた値又は範囲の５０％、２０％、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、又は０．０５％以内を意味する。
ここで使用される「アルカン－テトライル」という用語は、特に指定しない限り、１から１６個の炭素を有する四価、非環式、直鎖又は分岐鎖の飽和炭化水素基を表す。アルカン－テトライルは、アルキルについて記載されるように場合によっては置換されてもよい。
ここで使用される「アルカン－トリイル」という用語は、特に指定しない限り、１から１６個の炭素を有する三価、非環式、直鎖又は分岐鎖の飽和炭化水素基を表す。アルカン－トリイルは、アルキルについて記載されるように場合によっては置換されてもよい。
ここで使用される「アルカノイル」という用語は、カルボニル基を介して親分子基に結合する水素又はアルキル基を表し、ホルミル（すなわちカルボキシアルデヒド基）、アセチル、プロピオニル、ブチリル、及びイソ－ブチリルによって例示される。非置換アルカノイル基は、１から７個の炭素を含む。アルカノイル基は、アルキル基について記載されるように、非置換又は置換（例えば置換されていてもよいＣ１－７アルカノイル）されていてもよい。末尾の「－オイル」は、ここで定義される別の基に、例えば、アリール、シクロアルキル、及びヘテロシクリルに、「アリーロイル」、「シクロアルカノイル」、及び「（ヘテロシクリル）オイル」を定義するために加えることができる。これらの基は、それぞれアリール、シクロアルキル、又はヘテロシクリルに結合したカルボニル基を表す。「アリーロイル」、「シクロアルカノイル」、及び「（ヘテロシクリル）オイル」のそれぞれは、それぞれ「アリール」、「シクロアルキル」、又は「ヘテロシクリル」に対して定義されるように、場合によっては置換されてもよい。
ここで使用される「アルケニル」という用語は、一、二、又は三の炭素－炭素二重結合を含む非環式一価で直鎖又は分岐鎖の炭化水素基を表す。アルケニル基の非限定的な例には、エテニル、プロパ－１－エニル、プロパ－２－エニル、１－メチルエテニル、ブタ－１－エニル、ブタ－２－エニル、ブタ－３－エニル、１－メチルプロパ－１－エニル、２－メチルプロパ－１－エニル、及び１－メチルプロパ－２－エニルが含まれる。アルケニル基は、アルキルについてここで定義されるように場合によっては置換されてもよい。
ここで使用される「アルケニレン」という用語は、１個の水素が除去された直鎖又は分岐鎖のアルケニル基を指し、よってこの基は二価である。アルケニレン基の非限定的な例には、エテン－１，１－ジイル、エテン－１，２－ジイル；プロパ－１－エン－１，１－ジイル、プロパ－２－エン－１，１－ジイル；プロパ－１－エン－１，２－ジイル、プロパ－１－エン－１，３－ジイル；プロパ－２－エン－１，１－ジイル；プロパ－２－エン－１，２－ジイル；ブタ－１－エン－１，１－ジイル；ブタ－１－エン－１，２－ジイル；ブタ－１－エン－１，３－ジイル；ブタ－１－エン－１，４－ジイル；ブタ－２－エン－１，１－ジイル；ブタ－２－エン－１，２－ジイル；ブタ－２－エン－１，３－ジイル；ブタ－２－エン－１，４－ジイル；ブタ－２－エン－２，３－ジイル；ブタ－３－エン－１，１－ジイル；ブタ－３－エン－１，２－ジイル；ブタ－３－エン－１，３－ジイル；ブタ－３－エン－２，３－ジイル；ブタ－１，２－ジエン－１，１－ジイル；ブタ－１，２－ジエン－１，３－ジイル；ブタ－１，２－ジエン－１，４－ジイル；ブタ－１，３－ジエン－１，１－ジイル；ブタ－１，３－ジエン－１，２－ジイル；ブタ－１，３－ジエン－１，３－ジイル；ブタ－１，３－ジエン－１，４－ジイル；ブタ－１，３－ジエン－２，３－ジイル；ブタ－２，３－ジエン－１，１－ジイル；及びブタ－２，３－ジエン－１，２－ジイルが含まれる。アルケニレン基は、アルキルについて記載されるように、非置換か又は置換されてもよい（例えば、置換されていてもよいアルケニレン）。
ここで使用される「アルコキシ」という用語は、特に指定しない限り、ＲがＣ１－６アルキル基である式－ＯＲの化学置換基を表す。幾つかの実施態様では、アルキル基は、ここで定義されるように更に置換することができる。「アルコキシ」という用語は、ここで定義される他の用語、例えば、アリール、シクロアルキル、又はヘテロシクリルと組み合わされて、「アリールアルコキシ」、「シクロアルキルアルコキシ」、及び「（ヘテロシクリル）アルコキシ」基を定義することができる。これらの基は、それぞれアリール、シクロアルキル、又はヘテロシクリルによって置換されているアルコキシを表す。「アリールアルコキシ」、「シクロアルキルアルコキシ」、及び「（ヘテロシクリル）アルコキシ」のそれぞれは、各個々の部分についてここに定義されるように、場合によっては置換されてもよい。
ここで使用される「アルキル」という用語は、特に指定しない限り、非置換の場合に１から１２個の炭素を有する非環式で直鎖又は分岐鎖の飽和炭化水素基を指す。所定の好ましい実施態様では、非置換アルキルは１から６個の炭素を有する。アルキル基は、メチル；エチル；ｎ－及びイソ－プロピル；ｎ－、ｓｅｃ－、イソ－及びｔｅｒｔ－ブチル；ネオペンチル等によって例示され、場合によっては、結合価が許容されれば、アミノ；アリール；アリールオキシ；アジド；シクロアルキル；シクロアルコキシ；シクロアルケニル；シクロアルキニル；ハロ；ヘテロシクリル；（ヘテロシクリル）オキシ；ヒドロキシ；ニトロ；チオール；シリル；シアノ；＝Ｏ；＝Ｓ；＝ＮＲ’（ここで、Ｒ’はＨ、アルキル、アリール、又はヘテロキシクリルである）から独立して選択される１、２、３、又は、２個以上の炭素のアルキル基の場合には、４つ以上の置換基で置換されてもよい。置換基の各々は、それ自体が非置換であるか、又は結合価が許容されれば、各基それぞれについてここで定義された非置換の置換基で置換されてもよい。
ここで使用される「アルキルアミノ」という用語は、ＲＮ１が、ここで定義されるアルキルである式－Ｎ（ＲＮ１）２又は－ＮＨＲＮ１を有する基を指す。アルキルアミノのアルキル部分は、アルキルについて定義されるように場合によっては置換されてもよい。置換されたアルキルアミノ上の各任意の置換基は、それ自体は非置換か、又は結合価が許容されれば、各基それぞれについてここで定義された非置換の置換基で置換されてもよい。
ここで使用される「アルキルシクロアルキレン」という用語は、二つの結合価が２個の水素原子に代わるアルキルシクロアルカンである飽和二価炭化水素基を指す。好ましくは、二つの結合価のうちの少なくとも一つがシクロアルカン部分に存在する。アルカン及びシクロアルカン部分は、ここに記載される個々の基のように場合によっては置換されてもよい。
ここで使用される「アルキレン」という用語は、二つの結合価が２個の水素原子に代わる直鎖又は分岐鎖の飽和炭化水素である飽和二価炭化水素基を指す。ここで定義されるアルキレンの結合価には、任意の置換基を含まない。アルキレン基の非限定的な例には、メチレン、エタン－１，２－ジニル、エタン－１，１－ジイル、プロパン－１，３－ジイル、プロパン－１，２－ジイル、プロパン－１，１－ジイル、プロパン－２，２－ジイル、ブタン－１，４－ジイル、ブタン－１，３－ジイル、ブタン－１，２－ジイル、ブタン－１，１－ジイル、及びブタン－２，２－ジイル、ブタン－２，３－ジイルが含まれる。「Ｃｘ－ｙアルキレン」という用語は、ｘとｙの間の炭素を有するアルキレン基を表す。ｘの例示値は１、２、３、４、５、及び６であり、ｙの例示値は２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、及び１２である。アルキレンは、アルキルについてここに記載されるように場合によっては置換されてもよい。
ここで使用される「アルキルスルフェニル」という用語は、式－Ｓ－（アルキル）の基を表す。アルキルスルフェニルは、アルキルについて定義されるように場合によっては置換されてもよい。
ここで使用される「アルキルスルフィニル」という用語は、式－Ｓ（Ｏ）－（アルキル）の基を表す。アルキルスルフィニルは、アルキルについて定義されるように場合によっては置換されてもよい。
ここで使用される「アルキルスルホニル」という用語は、式－Ｓ（Ｏ）２－（アルキル）の基を表す。アルキルスルホニルは、アルキルについて定義されるように場合によっては置換されてもよい。
ここで使用される「アルキニル」という用語は、少なくとも一の炭素－炭素三重結合を含む２から６個の炭素原子の一価で直鎖又は分岐鎖の炭化水素基を表し、エチニル、１－プロピニル等によって例示される。アルキニル基は、アルキルについて定義されるように、非置換か又は置換されてもよい（例えば、置換されていてもよいアルキニル）。
ここで使用される「５－アルキニルウリジン」という用語は、核酸塩基が次の構造：
Figure 0007536025000003
の５－アルキニルウラシルであるヌクレオシドを表し、ここで、Ｒはヌクレオシドのペンタフラノースのアノマー炭素との結合であり、Ｘはアルキニルである。幾つかの実施態様では、Ｘはエチニル又はプロピニルである（例えば、Ｘはエチニルである）。
ここで使用される「アルキニレン」という用語は、一又は二の炭素－炭素三重結合を含み、非置換の場合にはＣとＨのみを含む直鎖又は分岐鎖の二価置換基を指す。アルキニレン基の非限定的な例には、エチン－１，２－ジイル；プロパ－１－イン－１，３－ジイル；プロパ－２－イン－１，１－ジイル；ブタ－１－イン－１，３－ジイル；ブタ－１－イン－１，４－ジイル；ブタ－２－イン－１，１－ジイル；ブタ－２－イン－１，４－ジイル；ブタ－３－イン－１，１－ジイル；ブタ－３－イン－１，２－ジイル；ブタ－３－イン－２，２－ジイル；及びブタ－１，３－ジイン－１，４－ジイルが含まれる。アルキニレン基は、アルキニル基について記載されるように、非置換か又は置換されてもよい（例えば、置換されていてもよいアルキニレン）。
ここで使用される「アミノ」という用語は、－Ｎ（ＲＮ１）２を表し、ここで、アミノが非置換の場合、両方のＲＮ１がＨであり；又は、アミノが置換されている場合、各ＲＮ１は、独立して、Ｈ、－ＯＨ、－ＮＯ２、－Ｎ（ＲＮ２）２、－ＳＯ２ＯＲＮ２、－ＳＯ２ＲＮ２、－ＳＯＲＮ２、－ＣＯＯＲＮ２、Ｎ－保護基、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アリール、アリールアルキル、アリールオキシ、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、又はヘテロシクリルであり、但し、少なくとも一つのＲＮ１がＨではなく、かつ各ＲＮ２が独立してＨ、アルキル、又はアリールである。置換基の各々は、それ自体が非置換か、又はそれぞれの各基についてここで定義された非置換基で置換されてもよい。幾つかの実施態様では、アミノは、非置換アミノ（すなわち、－ＮＨ２）又は置換アミノ（例えば－ＮＨＲＮ１）であり、ここで、ＲＮ１は独立して－ＯＨ、－ＳＯ２ＯＲＮ２、－ＳＯ２ＲＮ２、－ＳＯＲＮ２、－ＣＯＯＲＮ２、置換されていてもよいアルキル、又は置換されていてもよいアリールであり、かつ各ＲＮ２は置換されていてもよいアルキル又は置換されていてもよいアリールでありうる。幾つかの実施態様では、置換アミノは、アルキル基がアルキルについてここに記載されるように置換されていてもよいアルキルアミノでありうる。所定の実施態様では、アミノ基は、－ＮＨＲＮ１であり、ＲＮ１は、置換されていてもよいアルキルである。ＲＮ１が置換されていてもよいアルキルである－ＮＨＲＮ１の非限定的な例には、置換されていてもよいアルキルアミノ、タンパク質原性アミノ酸、非タンパク質性アミノ酸、タンパク質原性アミノ酸のＣ１－６アルキルエステル、及び非タンパク質性アミノ酸のＣ１－６アルキルエステルが含まれる。
ここで使用される「アミノアルキル」という用語は、ここで定義される一、二、又は三のアミノ基で置換されたアルキルを表す。アミノアルキルは、アルキル基について記載されるように更に場合によっては置換されてもよい。
ここで使用される「アレーン－テトライル」という用語は、３個の水素原子が結合価に置き換えられているアリール基である四価基を表す。アレーン－テトライルは、アリールについてここに記載されるように場合によっては置換されてもよい。
ここで使用される「アリール」という用語は、一又は二の芳香環を有する単環式、二環式、又は多環式炭素環系を表す。アリール基は、６から１０個の炭素原子を含みうる。非置換炭素環式アリール基内の全ての原子が炭素原子である。炭素環式アリール基の非限定的な例には、フェニル、ナフチル、１，２－ジヒドロナフチル、１，２，３，４－テトラヒドロナフチル、フルオレニル、インダニル、インデニル等が含まれる。アリール基は、非置換か、あるいはアルキル；アルケニル；アルキニル；アルコキシ；アルキルスルフィニル；アルキルスルフェニル；アルキルスルホニル；アミノ；アリール；アリールオキシ；アジド；シクロアルキル；シクロアルコキシ；シクロアルケニル；シクロアルキニル；ハロ；ヘテロアルキル；ヘテロシクリル；（ヘテロシクリル）オキシ；ヒドロキシ；ニトロ；チオール；シリル；及びシアノからなる群から独立して選択される一、二、三、四、又は五の置換基で置換されうる。置換基の各々は、それ自体が非置換か、あるいは各それぞれの基についてここで定義された非置換の置換基で置換されてもよい。
ここで使用される「アリールアルキル」という用語は、アリール基で置換されたアルキル基を表す。アリール及びアルキル部分は、場合によってはここに記載される個々の基として置換されてもよい。
ここで使用される「アリールアルキレン」という用語は、１個の水素原子が結合価に置換されるアリールアルキル基を表す。アリールアルキレンは、場合によってはアリールアルキルについてここに記載されているように置換されてもよい。
ここで使用される「アリーレン」という用語は、１個の水素原子が結合価に置換されるアリール基を表す。アリーレンは、場合によってはアリールについてここに記載されるように置換されてもよい。
ここで使用される「アリールオキシ」という用語は、特に指定しない限り、Ｒがアリール基である式－ＯＲの化学置換基を表す。置換されていてもよいアリールオキシにおいて、アリール基は、場合によってはアリールについてここに記載されるように置換される。
ここで使用される「補助部分」という用語は、親水性ポリマー、正電荷を持つポリマー、又は糖アルコールを含む一価基を表す。
ここで使用される「置換されていてもよいＮ」という用語は、二価の－Ｎ（ＲＮ１）－基又は三価の－Ｎ＝基を表す。アザ基は、非置換であり得、その場合、ＲＮ１はＨ又は不存在であり、あるいは置換されており、その場合、ＲＮ１は、「アミノ」について定義された通りであるが、但しＲＮ１はＨではない。二つのアザ基が連結されて「ジアザ」が形成されうる。
ここで使用される「置換されていてもよいＮ－保護アミノ」という用語は、ここで定義される置換アミノを表し、少なくとも一の置換基がＮ－保護基であり、他の置換基が、Ｎ－保護アミノが非置換の場合、Ｈであり、あるいはＮ－保護アミノが置換される場合、Ｈ以外の置換基である。
ここで使用される「アジド」という用語は、－Ｎ３基を表す。
ここで使用される「バルキー基」という用語は、ジスルフィドへ結合するラジカルが、ラジカルがｓｐ３混成炭素である場合、１個以下の水素原子を有し、ラジカルがｓｐ２混成炭素の場合、水素原子を有さない炭素原子である、ここで定義される任意の置換基又は置換基群を表す。ラジカルはｓｐ混成炭素ではない。バルキー基は、炭素原子を介してのみジスルフィドに結合する。
ここで使用される「５’－５’キャップ」という用語は、式Ｒ’－Ｎｕｃ１－Ｏ－（ＬＰ）ｎ－の基を表し、ここで、Ｒ’は、ホスフェート、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、ホスホジエステル、ヒドロキシル、又は水素であり；Ｎｕｃ１はヌクレオシドであり；各ＬＰは独立して－Ｐ（＝ＸＥ１）（－ＸＥ２－ＲＥ２Ａ）－Ｏ－であり；かつｎは１、２、又は３であり；
ここで、各ＸＥ１と各ＸＥ２は独立してＯ又はＳであり、各ＲＥ２Ａは、独立して水素、生物可逆性基、非生物可逆性基、補助部分、コンジュゲート基、ターゲティング部分に結合したリンカー、又はターゲティング部分と一又は複数の（例えば、１から６）の補助部分に結合したリンカーであり；かつ
ここで、Ｒ’はヌクレオシドの３’炭素に結合し、－Ｏ－はヌクレオシドの５’炭素に結合する。
ここで使用される「キャッピング基」という用語は、ポリヌクレオチドの５’又は３’末端に位置する一価又は二価の基を表す。キャッピング基は末端ホスホエステル；ジホスフェート；トリホスフェート；補助部分；生物可逆性基；非生物可逆性基；５’キャップ（例えば、５’－５’キャップ）；固体担体；ターゲティング部分と場合によっては一又は複数の（例えば、１から６）の補助部分に結合したリンカー；又は基－ＯＲ’（ここで、Ｒ’は、水素、生物可逆性基、非生物可逆性基、固体担体、及びＯ－保護基からなる群から選択される）である。基－ＯＲ’、ジホスフェート；トリホスフェート；生物可逆性基；非生物可逆性基、固体担体、及び補助部分は、一価のキャッピング基の例である。末端ホスホエステルは、末端ホスホエステルがターゲティング部分へのリンカーを含まない場合は一価であり、又は末端ホスホエステルがターゲティング部分へのリンカーを含む場合は二価でありうる、キャッピング基の例である。（補助部分と共に又は補助部分なしに）ターゲティング部分に結合したリンカーは、二価のキャッピング基の例である。
ここで使用される「炭素環式」という用語は、芳香族又は非芳香族でありうる環が炭素原子によって形成される、置換されていてもよいＣ３－１６単環式、二環式、又は三環式構造を表す。炭素環構造には、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、及び所定のアリール基が含まれる。
ここで使用される「カルボニル」という用語は、－Ｃ（Ｏ）－基を表す。
ここで使用される「Ｃｘ－ｙ」という表現は、その名前が表現に従う基は、非置換の場合、合計でｘからｙの炭素原子を含むことを示す。基が複合基（例えば、アリールアルキル）である場合、Ｃｘ－ｙは、その名前が表現に従う部分は、非置換の場合、合計でｘからｙの炭素原子を含むことを示す。例えば、（Ｃ６－１０－アリール）－Ｃ１－６－アルキルは、アリール部分が、非置換の場合、合計６から１０個の炭素原子を含み、アルキル部分が、非置換の場合、合計１から６個の炭素原子を含む、基である。
ここで使用される「シアノ」という用語は、－ＣＮ基を表す。
ここで使用される「環化付加反応」という用語は、活性化、化学触媒による活性化、又は熱エネルギーを使用する活性化の何れもない場合に、合計［４ｎ＋２］π電子が結合形成に関与し、ｎが１、２、又は３である、二成分反応を表す。環化付加反応は、また、［４ｎ］π電子が関与し、光化学的活性化があり、ｎが１、２、又は３である、二成分反応である。望ましくは、［４ｎ＋２］π電子が結合形成に関与し、ｎ＝１である。代表的な環化付加反応には、アルケンと１，３－ジエンの反応（Ｄｉｅｌｓ－Ａｌｄｅｒ反応）、アルケンとα，β－不飽和カルボニルの反応（ヘテロＤｉｅｌｓ－Ａｌｄｅｒ反応）、及びアルキンとアジド化合物の反応（例えば、ヒュスゲン環化付加）が含まれる。
ここで使用される「シクロアルケニル」という用語は、特に明記しない限り、環に少なくとも一つの二重結合と３から１０個の炭素（例えば、Ｃ３－Ｃ１０シクロアルケニル）を有する非芳香族炭素環式基を指す。シクロアルケニルの非限定的な例には、シクロプロパ－１－エニル、シクロプロパ－２－エニル、シクロブタ－１－エニル、シクロブタ－２－エニル、シクロペンタ－１－エニル、シクロペンタ－２－エニル、シクロペンタ－３－エニル、ノルボルネン－１－イル、ノルボルネン－２－イル、ノルボルネン－５－イル、及びノルボルネン－７－イルが含まれる。シクロアルケニル基は、シクロアルキルについて記載されているように、非置換又は置換（例えば、置換されていてもよいシクロアルケニル）されていてもよい。
ここで使用される「シクロアルケニルアルキル」という用語は、それぞれここで定義される、シクロアルケニル基で置換されたアルキル基を表す。シクロアルケニル及びアルキル部分は、ここで定義される個々の基として置換されうる。
ここで使用される「シクロアルケニレン」という用語は、１個の水素原子が結合価で置き換えられているシクロアルケニル基である二価基を表す。シクロアルケニレンは、シクロアルキルについてここに記載されるように、場合によっては置換されうる。シクロアルケニレンの非限定的な例は、シクロアルケン－１，３－ジイルである。
ここで使用される「シクロアルコキシ」という用語は、特に明記しない限り、式－ＯＲの化学置換基を表し、ここで、Ｒはシクロアルキル基である。幾つかの実施態様では、シクロアルキル基は、ここで定義されるように更に置換することができる。
ここで使用される「シクロアルキル」という用語は、別段の指定がない限り、３から１０個の炭素を有する環状アルキル基（例えば、Ｃ３－Ｃ１０シクロアルキル）を指す。シクロアルキル基は、単環式又は二環式でありうる。二環式シクロアルキル基は、ビシクロ［ｐ．ｑ．０］アルキルタイプであり得、ここで、ｐとｑのそれぞれは、独立して１、２、３、４、５、６、又は７であり、但しｐとｑの合計が２、３、４、５、６、７、又は８である。あるいは、二環式シクロアルキル基は、架橋シクロアルキル構造、例えばビシクロ［ｐ．ｑ．ｒ］アルキルを含み得、ここで、ｒは１、２、又は３であり、ｐとｑのそれぞれは、独立して１、２、３、４、５、又は６であり、但しｐ、ｑ、及びｒの合計が３、４、５、６、７、又は８である。シクロアルキル基は、スピロ環式基、例えば、スピロ［ｐ．ｑ］アルキルであり得、ここで、ｐとｑのそれぞれは、独立して２、３、４、５、６、又は７であり、但しｐとｑの合計が４、５、６、７、８又は９である。シクロアルキルの非限定的な例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、１－ビシクロ［２．２．１．］ヘプチル、２－ビシクロ［２．２．１．］ヘプチル、５－ビシクロ［２．２．１．］ヘプチル、７－ビシクロ［２．２．１．］ヘプチル、及びデカリニルが含まれる。シクロアルキル基は、非置換であるか、あるいはアルキル；アルケニル；アルキニル；アルコキシ；アルキルスルフィニル；アルキルスルフェニル；アルキルスルホニル；アミノ；アリール；アリールオキシ；アジド；シクロアルキル；シクロアルコキシ；シクロアルケニル；シクロアルキニル；ハロ；ヘテロアルキル；ヘテロシクリル；（ヘテロシクリル）オキシ；ヒドロキシ；ニトロ；チオール；シリル；シアノ；＝Ｏ；＝Ｓ；＝ＮＲ’（ここで、Ｒ’はＨ、アルキル、アリール、又はヘテロシクリルである）からなる群から独立して選択される一、二、三、四、又は五の置換基で置換されうる（例えば、置換されていてもよいシクロアルキル）。置換基のそれぞれは、それ自体が非置換であるか、又はそれぞれの各基についてここで定義される非置換の置換基で置換されていてもよい。
ここで使用される「シクロアルキルアルキル」という用語は、それぞれここで定義されるようなシクロアルキル基で置換されたアルキル基を表す。シクロアルキル及びアルキル部分は、ここに記載の個々の基として場合によっては置換されうる。
ここで使用される「シクロアルキレン」という用語は、１個の水素原子が結合価で置き換えられているシクロアルキル基である二価基を表す。シクロアルキレンの非限定的な例は、シクロアルカン－１，３－ジイルである。シクロアルキレンは、シクロアルキルについてここに記載されるように場合によっては置換されうる。
ここで使用される「シクロアルキニル」という用語は、別段の指定がない限り、一つ又は二つの炭素－炭素三重結合を有し、８から１２個の炭素を有する一価の炭素環式基を指す。シクロアルキニルは、一つの渡環結合又は架橋を含みうる。シクロアルキニルの非限定的な例には、シクロオクチニル、シクロノニニル、シクロデシニル、及びシクロデカジイニルが含まれる。シクロアルキニル基は、シクロアルキルについて定義されているように、非置換か又は置換（例えば、置換されていてもよいシクロアルキニル）でありうる。
ここで使用される「ジヒドロピリダジン基」という用語は、１，２，４，５－テトラジン基とひずみシクロアルケニルとの間の環化付加によって得ることができる二価基を表す。
ここで使用される「ハロ」という用語は、臭素、塩素、ヨウ素、及びフッ素から選択されるハロゲンを表す。
ここで使用される「５－ハロウジン」という用語は、核酸塩基が次の構造：
Figure 0007536025000004
の５－ハロウラシルである、ヌクレオシドを表し、ここで、Ｒはヌクレオシドのペンタフラノースのアノマー炭素への結合であり、Ｘはフルオロ、クロロ、ブロモ、又はヨードである。幾つかの実施態様では、Ｘはブロモ又はヨードである。
ここで使用される「ヘテロアルカン－テトライル」という用語は、１個のヘテロ原子によって一回；毎回、独立して、１個のヘテロ原子によって二回；毎回、独立して、１個のヘテロ原子によって三回；又は毎回、独立して、１個のヘテロ原子によって四回、中断されたアルカン－テトライル基を指す。各ヘテロ原子は、独立して、Ｏ、Ｎ、又はＳである。幾つかの実施態様では、ヘテロ原子は、Ｏ又はＮである。非置換ＣＸ－Ｙヘテロアルカン－テトライルは、ここで定義されるＸからＹの炭素原子並びにヘテロ原子を含む。ヘテロアルカン－テトライル基は、ヘテロアルキルについて記載されているように、非置換か又は置換されていてもよい（例えば、置換されていてもよいヘテロアルカン－テトライル）。
ここで使用される「ヘテロアルカン－トリイル」という用語は、１個のヘテロ原子によって一回；毎回、独立して、１個のヘテロ原子によって二回；毎回、独立して、１個のヘテロ原子によって三回；又は毎回、独立して、１個のヘテロ原子によって四回、中断されたアルカン－トリイル基を指す。各ヘテロ原子は、独立して、Ｏ、Ｎ、又はＳである。幾つかの実施態様では、ヘテロ原子は、Ｏ又はＮである。非置換ＣＸ－Ｙヘテロアルカン－トリイルは、ここで定義されるＸからＹの炭素原子並びにヘテロ原子を含む。ヘテロアルカン－トリイル基は、ヘテロアルキルについて記載されているように、非置換か又は置換されていてもよい（例えば、置換されていてもよいヘテロアルカン－トリイル）。
ここで使用される「ヘテロアルキル」という用語は、１又は２個のヘテロ原子によって一回；毎回、独立して、１又は２個のヘテロ原子によって二回；毎回、独立して、１又は２個のヘテロ原子によって三回；又は毎回、独立して、１又は２個のヘテロ原子によって四回、中断されたアルキル、アルケニル、又はアルキニル基を指す。各ヘテロ原子は、独立して、Ｏ、Ｎ、又はＳである。幾つかの実施態様では、ヘテロ原子は、Ｏ又はＮである。ヘテロアルキル基の何れも、二の近接する酸素又は硫黄原子を含まない。ヘテロアルキル基は、非置換か又は置換されていてもよい（例えば、置換されていてもよいヘテロアルキル）。ヘテロアルキルが置換され、置換基がヘテロ原子に結合している場合、置換基は、ヘテロ原子の性質及び結合価に従って選択される。従って、結合価が許す限り、ヘテロ原子に結合した置換基は、＝Ｏ、－Ｎ（ＲＮ２）２、－ＳＯ２ＯＲＮ３、－ＳＯ２ＲＮ２、－ＳＯＲＮ３、－ＣＯＯＲＮ３、Ｎ－保護基、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、ヘテロシクリル、又はシアノからなる群から選択され、ここで、各ＲＮ２は、独立して、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、又はヘテロシクリルであり、各ＲＮ３は、独立して、アルキル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、又はヘテロシクリルである。これらの置換基のそれぞれは、それ自体が非置換か、又はそれぞれの各基についてここで定義される非置換の置換基で置換されうる。ヘテロアルキルが置換され、置換基が炭素に結合している場合、置換基は、アルキルについて記載されたものから選択され、但し、ヘテロ原子に結合している炭素原子上の置換基はＣｌ、Ｂｒ、又はＩではない。炭素原子がヘテロアルキル基の末端に見出されることが理解される。
ここで使用される「ヘテロアリールオキシ」という用語は、Ｒがヘテロアリールである構造－ＯＲを指す。ヘテロアリールオキシは、ヘテロシクリルに対して定義されたように場合によっては置換されうる。
ここで使用される「ヘテロシクリル」という用語は、特に明記しない限り、窒素、酸素、及び硫黄からなる群から独立して選択される１、２、３、又は４個のヘテロ原子を含む、縮合又は架橋した５、６、７、又は８員環を有する単環式、二環式、三環式、又は四環式環系を表す。ヘテロシクリルは芳香族又は非芳香族でありうる。非芳香族５員ヘテロシクリルはゼロ又は一の二重結合を有し、非芳香族６及び７員ヘテロシクリル基はゼロから二の二重結合を有し、非芳香族８員ヘテロシクリル基はゼロから二の二重結合及び／又はゼロ又は一の炭素－炭素三重結合を有する。ヘテロシクリル基は、特に明記しない限り、１から１６個の炭素原子を含む。所定のヘテロシクリル基は、最大９個の炭素原子を含みうる。非芳香族複素環基には、ピロリニル、ピロリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピペリジニル、ホモピペリジニル、ピペラジニル、ピリダジニル、オキサゾリジニル、イソオキサゾリジニイル、モルホリニル、チオモルホリニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル、チアゾリジニル、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、ジヒドロチエニル、ジヒドロインドリル、テトラヒドロキノリル、テトラヒドロイソキノリル、ピラニル、ジヒドロピラニル、ジチアゾリル等々が含まれる。複素環系が少なくとも一の芳香族共鳴構造又は少なくとも一の芳香族互変異性体を有する場合、そのような構造は芳香族ヘテロシクリル（すなわち、ヘテロアリール）である。ヘテロアリール基の非限定的な例には、ベンズイミダゾリル、ベンゾフリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチエニル、ベンゾオキサゾリル、フリル、イミダゾリル、インドリル、イソインダゾリル、イソキノリニル、イソチアゾリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、プリニル、ピロリル、ピリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、クナゾリニル、キノリニル、チアジアゾリル（例えば、１，３，４－チアジアゾール）、チアゾリル、チエニル、トリアゾリル、テトラゾリル等々が含まれる。「ヘテロシクリル」という用語はまた、一又は複数の炭素及び／又はヘテロ原子が単環式環の二つの非隣接員を架橋する架橋多環式構造を有する複素環式化合物、例えばキヌクリジン、トロパン、又はジアザ－ビシクロ［２．２．２］オクタンを表す。「複素環」という用語は、上記の複素環の何れかが一、二、又は三の炭素環、例えば、アリール環、シクロヘキサン環、シクロヘキセン環、シクロペンタン環、シクロペンテン環、又は別の単環式複素環に縮合している二環式、三環式、及び四環式基を含む。縮合ヘテロシクリルの例には、１，２，３，５，８，８ａ－ヘキサヒドロインドリジン；２，３－ジヒドロベンゾフラン；２，３－ジヒドロインドール；及び２，３－ジヒドロベンゾチオフェンが含まれる。ヘテロシクリル基は、非置換であるか、あるいはアルキル；アルケニル；アルキニル；アルコキシ；アルキルスルフィニル；アルキルスルフェニル；アルキルスルホニル；アミノ；アリール；アリールオキシ；アジド；シクロアルキル；シクロアルコキシ；シクロアルケニル；シクロアルキニル；ハロ；ヘテロアルキル；ヘテロシクリル；（ヘテロシクリル）オキシ；ヒドロキシ；ニトロ；チオール；シリル；シアノ；＝Ｏ；＝Ｓ；＝ＮＲ’（ここで、Ｒ’は、Ｈ、アルキル、アリール、又はヘテロシクリルである）からなる群から独立して選択される一、二、三、四又は五の置換基で置換されうる。置換基のそれぞれは、それ自体が非置換であるか、又はそれぞれの各基についてここで定義される非置換の置換基で置換されてもよい。
ここで使用される「ヘテロシクリルアルキル」という用語は、それぞれがここで定義される、ヘテロシクリル基に置換されたアルキル基を表す。ヘテロシクリル及びアルキル部分は、ここに記載される個々の基として場合によっては置換されうる。
ここで使用される「（ヘテロシクリル）アザ」という用語は、式－Ｎ（ＲＮ１）（ＲＮ２）の化学置換基を表し、ここで、ＲＮ１はヘテロシクリル基であり、ＲＮ２はＨ、－ＯＨ、－ＮＯ２、－Ｎ（ＲＮ２）２、－ＳＯ２ＯＲＮ２、－ＳＯ２ＲＮ２、－ＳＯＲＮ２、－ＣＯＯＲＮ２、Ｎ－保護基、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アリール、アリールアルキル、アリールオキシ、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、又はヘテロシクリルである。好ましくは、ＲＮ２はＨである。
ここで使用される「ヘテロシクリレン」という用語は、１個の水素原子が結合価で置き換えられているヘテロシクリル基を表す。ヘテロシクリレンは、ヘテロシクリルについて記載された形で場合によっては置換されうる。ヘテロシクリレンの非限定的な例は、複素環－１，３－ジイルである。
ここで使用される「（ヘテロシクリル）オキシ」という用語は、特に明記しない限り、式－ＯＲの化学置換基を表し、Ｒはヘテロシクリル基である。（ヘテロシクリル）オキシは、ヘテロシクリルについて記載された形で場合によっては置換されうる。
ここで交換可能に使用される「ヒドロキシル」及び「ヒドロキシ」という用語は、－ＯＨ基を表す。
ここで使用される「免疫調節性ポリヌクレオチド」という用語は、ヌクレオシド間ホスホエステルと場合によってはヌクレオシド間脱塩基スペーサーとからなる群から独立して選択されるヌクレオシド間架橋基によって共有結合された合計６から５０の近接ヌクレオシドを含むポリヌクレオチドコンストラクトを表す。免疫調節性ポリヌクレオチドは、５’－及び３’－末端がそれぞれ５’－及び３’－キャッピング基でキャップされている。免疫調節性ポリヌクレオチドは、例えば、（例えば、免疫調節性ポリヌクレオチドが送達されなかった別の抗原提示細胞と比較して）免疫調節性ポリヌクレオチドが送達された抗原提示細胞における少なくとも一つのＩ型インターフェロン又は少なくとも一つの炎症性サイトカインの分泌の変化又はＮＦκＢの活性化の変化によって決定されるように、自然免疫応答を調節することができる。免疫調節性ポリヌクレオチドは、コンジュゲート基又は免疫調節性ポリヌクレオチドがコンジュゲートの一部である場合、ターゲティング部分と場合によっては一又は複数（例えば、１から６）の補助部分（例えば、ポリエチレングリコール）に結合したリンカーを含みうる。コンジュゲート基又はリンカーは、ホスホトリエステル又は末端キャッピング基の一部でありうる。
ここで使用される「免疫刺激性ポリヌクレオチド」という用語は、例えば、（例えば、免疫刺激性ポリヌクレオチドが送達されなかった別の抗原提示細胞と比較して）免疫刺激性ポリヌクレオチドが送達された抗原提示細胞における少なくとも一つのＩ型インターフェロン又は少なくとも一つの炎症性サイトカインの分泌の増加又はＮＦκＢの活性化の増加によって決定されるように、自然免疫応答を活性化することができる免疫調節性ポリヌクレオチドを表す。幾つかの実施態様では、免疫刺激性ポリヌクレオチドは、少なくとも一つのシチジン－ｐ－グアノシン（ＣｐＧ）配列を含み、ここで、ｐは、ヌクレオシド間ホスホジエステル（例えば、ホスフェート又はホスホロチオエート）又はヌクレオシド間ホスホトリエステル又はホスホチオトリエステルである。ここで使用される場合、ＣｐＧ含有免疫刺激性ポリヌクレオチドは、細菌又はウイルス由来のＣｐＧ ＯＤＮなど、天然に存在するか、又は合成されうる。例えば、幾つかの実施態様では、免疫刺激性ポリヌクレオチドのＣｐＧ配列は、２’－デオキシリボースを含む。幾つかの実施態様では、免疫刺激性ポリヌクレオチドのＣｐＧ配列はメチル化されていない。幾つかの実施態様では、免疫刺激性ポリヌクレオチドは、ここで提供される式（Ａ）のポリヌクレオチドである。幾つかの実施態様では、免疫刺激性ポリヌクレオチドは、ここで提供される式（Ｂ）の化合物である。
ここで使用される「免疫抑制性ポリヌクレオチド」という用語は、例えば、（例えば、免疫抑制性ポリヌクレオチドが送達されなかった別の抗原提示細胞と比較して）免疫抑制性ポリヌクレオチドが送達された抗原提示細胞における少なくとも一つのＩ型インターフェロン又は少なくとも一つの炎症性サイトカインの分泌の減少又はＮＦκＢの活性化の減少によって決定されるように、自然免疫応答をアンタゴナイズすることができる免疫調節性ポリヌクレオチドを表す。
ここで使用される「ヌクレオシド間架橋基」という用語は、ヌクレオシド間ホスホエステル又はヌクレオシド間脱塩基スペーサーを表す。
ここで使用される「５－修飾シチジン」という用語は、核酸塩基が次の構造：
Figure 0007536025000005
であるヌクレオシドを表し、ここで、Ｒはヌクレオシドのペンタフラノースのアノマー炭素への結合であり、Ｘはハロゲン、アルキニル、アルケニル、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、又はアリールである。幾つかの実施態様では、５－修飾シチジンは、５－ハロシチジン（例えば、５－ヨードシチジン又は５－ブロモシチジン）である。他の実施形態では、５－修飾シチジンは、５－アルキニルシチジンである。
ここで使用される「５－修飾ウリジン」という用語は、核酸塩基が次の構造：
Figure 0007536025000006
であるヌクレオシドを表し、ここで、Ｒはヌクレオシドのペンタフラノースのアノマー炭素への結合であり、Ｘはハロゲン、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、又はアリールであり、但し、５－修飾ウリジンはチミジンではない。幾つかの実施態様では、５－修飾ウリジンは、５－ハロウリジン（例えば、５－ヨードウリジン又は５－ブロモウリジン）である。他の実施態様では、５－修飾ウリジンは、５－アルキニルウリジンである。幾つかの実施態様では、５－修飾ウリジンは、２－デオキシリボースを含むヌクレオシドである。
ここで使用される「非生物可逆性」という用語は、エンドソーム内に存在する条件下での分解に耐性がある化学基を指す。非生物可逆性基は、チオエステル及び／又はジスルフィドを含まない。
ここで使用される「核酸塩基」という用語は、ヌクレオチド又はヌクレオシドの糖部分の１’位に結合した窒素含有複素環を表す。核酸塩基は未修飾又は修飾型でありうる。ここで使用される場合、「未修飾」又は「天然」核酸塩基は、プリン塩基アデニン（Ａ）及びグアニン（Ｇ）、並びにピリミジン塩基チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）及びウラシル（Ｕ）を含む。修飾核酸塩基には、他の合成及び天然核酸塩基、例えば５－メチルシトシン（５－ｍｅ－Ｃ又はｍ５ｃ）、５－ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２－アミノアデニン、アデニンとグアニンの６－メチル及び他のアルキル誘導体、アデニンとグアニンの２－プロピル及び他のアルキル誘導体、２－チオウラシル、２－チオチミン及び２－チオシトシン、５－ハロウラシル及びシトシン、５－プロピニルウラシル及びシトシン、６－アゾウラシル、シトシン及びチミン、５－ウラシル（シュードウラシル）、４－チオウラシル、８－ハロ、８－アミノ、８－チオール、８－チオアルキル、８－ヒドロキシル及び他の８－置換アデニン及びグアニン、５－ハロ、特に５－ヨード、５－ブロモ、５－トリフルオロメチル及び他の５－置換ウラシル及びシトシン、５－アルキニル（例えば、５－エチニル）ウラシル、５－アセトアミド－ウラシル、７－メチルグアニン及び７－メチルアデニン、８－アザグアニン及び８－アザアデニン、７－デアザグアニン及び７－デアザアデニン及び３－デアザグアニン及び３－デアザアデニンが含まれる。更なる核酸塩基には、米国特許第３６８７８０８号に開示されているもの；The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering, p858-859, Kroschwitz, J. I.編 John Wiley & Sons, 1990に開示されているもの；Englisch等, Angewandte Chemie, International Edition, 1991, 30, 613によって開示されているもの；及びSanghvi, Y. S., Chapter 15, Antisense Research and Applications, pages 289 302, (Crooke等編, CRC Press, 1993)によって開示されているものが含まれる。所定の核酸塩基は、５－置換ピリミジン、６－アザピリミジン、及びＮ－２、Ｎ－６及びＯ－６置換プリンを含み、２－アミノプロピルアデニン、５－プロピニルウラシル及び５－プロピニルシトシンを含む、本発明のハイブリダイズしたポリヌクレオチドの結合親和性を増加させるために特に有用である。５－メチルシトシン置換は、核酸二重鎖の安定性を０．６－１．２℃増加させることが示されている（Sanghvi等編, Antisense Research and Applications 1993, CRC Press, Boca Raton, pages 276-278）。これらは、特定の実施態様では、２’－Ｏ－メトキシエチル糖修飾と組み合わせることができる。これらの修飾核酸塩基並びに他の修飾核酸塩基の所定のものの調製を教示する米国特許には、限定されないが、上述した米国特許第３６８７８０８号、第４８４５２０５号；第５１３０３０２号；第５１３４０６６号；第５１７５２７３号；第５３６７０６６号；第５４３２２７２号；第５４５７１８７号；第５４５９２５５号；第５４８４９０８号；第５５０２１７７号；第５５２５７１１号；第５５５２５４０号；第５５８７４６９号；第５５９４１２１号；第５５９６０９１号；第５６１４６１７号；及び第５６８１９４１号が含まれる。本開示の目的のために、ここで使用される「修飾核酸塩基」は、ここに記載の一又は複数の保護基を含む、天然又は非天然の核酸塩基を更に表す。
ここで使用される「ヌクレオシド」という用語は、ペンタフラノース－核酸塩基の組み合わせを表す。ペンタフラノースは、２－デオキシリボース、あるいは２位がＯＲ、Ｒ、ハロ（例えば、Ｆ）、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲ２、又はＣＮで置換され、Ｒは、置換されていてもよいＣ１－６アルキル（例えば、Ｃ１－６アルキル又は（Ｃ１－６アルコキシ）－Ｃ１－６－アルキル）又は置換されていてもよい（Ｃ６－１４アリール）－Ｃ１－４－アルキルであるその修飾型である。所定の実施態様では、２位は、ＯＲ又はＦで置換され、ここで、Ｒは、Ｃ１－６アルキル又は（Ｃ１－６－アルコキシ）－Ｃ１－６－アルキルである。ペンタフラノースは、アノマー炭素で核酸塩基に結合している。幾つかの実施態様では、「ヌクレオシド」という用語は、次の構造：
Figure 0007536025000007
を有する二価基を指し、ここで、Ｂ１は核酸塩基であり；Ｙは、Ｈ、ハロゲン（例えば、Ｆ）、ヒドロキシル、置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ（例えば、メトキシ又はメトキシエトキシ）、又は保護されたヒドロキシル基であり；Ｙ１はＨ又はＣ１－６アルキル（例えば、メチル）であり；３’と５’のそれぞれは、別の基への結合の位置を示す。
ここで使用される「ヌクレオチド」という用語は、ホスフェート、ホスホロチオエート、又はホスロジチオエートに結合したヌクレオシドを指す。
ここで使用される「ホスホエステル」という用語は、少なくとも一つの結合価が非水素置換基に共有結合し、但し少なくとも一つの非水素置換基が少なくとも一つのヌクレオシドを含む基である、ホスフェート、ホスホロチオエート、又はホスホロジチオエートを含む基を表す。ヌクレオシドを含む基に一つの結合価のみが共有結合しているホスホエステルは、末端ホスホエステルである。ヌクレオシド含有基に二つの結合価が共有結合しているホスホエステルは、ヌクレオシド間ホスホエステルである。ホスホエステルは、次の構造：
Figure 0007536025000008
の基であり得、ここで、
ＸＥ１とＸＥ２のそれぞれは、独立してＯ又はＳであり；
ＲＥ１とＲＥ３のそれぞれは、独立して、水素又はヌクレオシドへの結合；脱塩基スペーサーの糖アナログ；生物可逆性基；非生物可逆性基；補助部分；コンジュゲート基；ターゲティング部分に結合したリンカー；ターゲティング部分と一又は複数（例えば、１から６）の補助部分に結合したリンカー；又は式－Ｐ（＝ＸＥ１）（－ＸＥ２－ＲＥ２Ａ）－Ｏ－の基のリン原子であり、
ここで、ＲＥ２Ａは、水素、生物可逆性基、非生物可逆性基、補助部分、コンジュゲート基、ターゲティング部分に結合したリンカー、又はターゲティング部分と一又は複数（例えば、１から６）の補助部分に結合したリンカーであり；
但し、ＲＥ１とＲＥ３の少なくとも一つは、少なくとも一つのヌクレオシドを含む基への結合である。
ＲＥ１とＲＥ３のそれぞれが独立して、少なくとも一つのヌクレオシドを含む基への結合である場合、ホスホエステルはヌクレオシド間ホスホエステルである。ＲＥ１とＲＥ３の一つがヌクレオシドを含まない基への結合である場合、ホスホエステルは末端ホスホエステルである。
ここで使用される「ホスホジエステル」という用語は、三つの結合価のうちの二つが非水素置換基で置換され、残りの結合価が水素で置換されるホスホエステルを指す。ホスホジエステルは、ホスフェート、ホスホロチオエート、又はホスホロジチオエート；ヌクレオシド、脱塩基スペーサー、及び／又はホスホリル基への一又は二の結合；及びホスホジエステルがヌクレオシド、脱塩基スペーサー、又はホスホリル基への結合を一つのみ含む場合は、生物可逆性基；非生物可逆性基；補助部分；コンジュゲート基；ターゲティング部分に結合したリンカー；及びターゲティング部分と一又は複数（例えば、１から６）の補助部分に結合したリンカーからなる群から独立して選択される一つの基からなる。末端ホスホジエステルは、ヌクレオシドを含む基への一つの結合と、生物可逆性基；非生物可逆性基；補助部分；コンジュゲート基；ホスホリル基；及びターゲティング部分と場合によっては一又は複数（例えば、１から６）の補助部分に結合したリンカーからなる群から選択される一つの基を含む。ヌクレオシド間ホスホジエステルは、ヌクレオシド含有基への二つの結合を含む。ホスホジエステルは、次の構造：
Figure 0007536025000009
の基であり得、ここで、
ＸＥ１とＸＥ２のそれぞれは、独立してＯ又はＳであり；
ＲＥ１とＲＥ３のそれぞれは、独立して、水素又はヌクレオシドへの結合；脱塩基スペーサーの糖アナログ；生物可逆性基；非生物可逆性基；補助部分；コンジュゲート基；ターゲティング部分に結合したリンカー；ターゲティング部分と一又は複数（例えば、１から６）の補助部分に結合したリンカー；又は式－Ｐ（＝ＸＥ１）（－ＸＥ２－ＲＥ２Ａ）－Ｏ－の基のリン原子であり、
ここで、ＲＥ２Ａは、水素、生物可逆性基、非生物可逆性基、補助部分、コンジュゲート基、ターゲティング部分に結合したリンカー、又はターゲティング部分と一又は複数（例えば、１から６）の補助部分に結合したリンカーであり；かつ
ＲＥ２は、水素、生物可逆性基、非生物可逆性基、補助部分、コンジュゲート基、ターゲティング部分に結合したリンカー、又はターゲティング部分と一又は複数（例えば、１から６）の補助部分に結合したリンカーであり；
但し、ＲＥ１、ＲＥ２、及びＲＥ３の一つだけが水素であり；かつ
但し、ＲＥ１とＲＥ３の少なくとも一つは、少なくとも一つのヌクレオシドを含む基への結合である。
ＲＥ１及びＲＥ３の両方が少なくとも一つのヌクレオシドを含む基への結合である場合、ホスホジエステルはヌクレオシド間ホスホジエステルである。ＲＥ１とＲＥ３の一つだけがヌクレオシドを含む基への結合である場合、ホスホジエステルは末端ホスホジエステルである。
ここで使用される「ホスホリル」という用語は、式
Figure 0007536025000010
の置換基を指し、ここで、
ＸＥ１とＸＥ２のそれぞれは、独立してＯ又はＳであり；
ＲＥ２Ａは、水素、生物可逆性基、非生物可逆性基、補助部分、コンジュゲート基、ターゲティング部分に結合したリンカー、又はターゲティング部分と一又は複数（例えば、１から６）の補助部分に結合したリンカーであり；かつ
ＲＥ３Ａは水素又は開放結合価である。
基がホスホリルに結合していると特定された場合、その基は、ホスホリルのリン原子に結合している。
ここで使用される「ホスホトリエステル」という用語は、三つの結合価の全てが非水素置換基で置換されているホスホエステルを指す。ホスホトリエステルは、ホスフェート、ホスホロチオエート、又はホスホロジチオエート；ヌクレオシド、又は脱塩基スペーサー、及び／又はホスホリル基への一又は二の結合；生物可逆性基；非生物可逆性基；補助部分；コンジュゲート基；及びターゲティング部分と場合によっては一又は複数（例えば、１から６）の補助部分に結合したリンカーからなる。末端ホスホトリエステルは、ヌクレオシドを含む基への一つの結合と、生物可逆性基；非生物可逆性基；補助部分；コンジュゲート基；ホスホリル基；及びターゲティング部分と場合によっては一又は複数（例えば、１から６）の補助部分に結合したリンカーからなる群から独立して選択される二つの基を含む。幾つかの実施態様では、末端ホスホトリエステルは、ターゲティング部分と場合によっては一又は複数（例えば、１から６）の補助部分に結合した１又は０のリンカーを含む。ホスホトリエステルは、次の構造：
Figure 0007536025000011
の基であり得、ここで、
ＸＥ１とＸＥ２のそれぞれは、独立してＯ又はＳであり；
ＲＥ１とＲＥ３のそれぞれは、独立して、ヌクレオシドへの結合；脱塩基スペーサーの糖アナログ；生物可逆性基；非生物可逆性基；補助部分；コンジュゲート基；ターゲティング部分に結合したリンカー；ターゲティング部分と一又は複数（例えば、１から６）の補助部分に結合したリンカー；又は式－Ｐ（＝ＸＥ１）（－ＸＥ２－ＲＥ２Ａ）－Ｏ－の基のリン原子であり、
ここで、ＲＥ２Ａは、水素；生物可逆性基；非生物可逆性基；補助部分；コンジュゲート基；ターゲティング部分に結合したリンカー；又はターゲティング部分と一又は複数（例えば、１から６）の補助部分に結合したリンカーであり；かつ
ＲＥ２は、生物可逆性基；非生物可逆性基；補助部分；コンジュゲート基；ターゲティング部分に結合したリンカー；又はターゲティング部分と一又は複数（例えば、１から６）の補助部分に結合したリンカーであり；
但し、ＲＥ１とＲＥ３の少なくとも一つは、少なくとも一つのヌクレオシドを含む基への結合である。
ＲＥ１とＲＥ３の両方が少なくとも一つのヌクレオシドを含む基への結合である場合、ホスホトリエステルはヌクレオシド間ホスホトリエステルである。ＲＥ１とＲＥ３の一つだけがヌクレオシドを含む基への結合である場合、ホスホトリエステルは末端ホスホトリエステルである。
ここで使用される「ピリド－２－イルヒドラゾン」という用語は、構造：
Figure 0007536025000012
の基を表し、ここで各Ｒ’は、独立してＨ又は置換されていてもよいＣ１－６アルキルである。ピリド－２－イルヒドラゾンは、非置換でありうる（すなわち、各Ｒ’はＨである）。
ここで使用される「立体化学的に富化された」という用語は、同じ基の反対の立体異性体配置よりも記載された基の一つの立体異性体配置に対する局所的な立体化学的優先性を指す。従って、立体化学的に富化されたホスホロチオエートを含むポリヌクレオチドは、予め定まった立体化学のホスホロチオエートが反対の立体化学のホスホロチオエートよりも優先して存在する鎖である。この優先性は、予め定まった立体化学のホスホロチオエートに対してジアステレオマー比を使用して数値的に表すことができる。予め定まった立体化学のホスホロチオエートに対するジアステレオマー比は、反対の立体化学を有する特定されたホスホロチオエートを有するジアステレオマーに対する、予め定まった立体化学を有する特定されたホスホロチオエートを有するジアステレオマーのモル比である。予め定まった立体化学のホスホロチオエートのジアステレオマー比は、１．１以上（例えば、４以上、９以上、１９以上、又は３９以上）でありうる。
ここで使用される「Ｑタグ」という用語は、－ＮＨ２アミンを含む化合物とのトランスグルタミナーゼ媒介反応の際に、ポリペプチドの一部を含むコンジュゲートを提供するグルタミン残基を含むポリペプチドの一部を指し、グルタミン残基は、化合物に結合したアミドを含むように修飾された側鎖を含む。Ｑタグは当該技術分野で知られている。Ｑタグの非限定的な例は、ＬＬＱＧＧ（配列番号：５８２）及びＧＧＧＬＬＱＧＧ（配列番号：５８３）である。
ここで使用される「ひずみシクロアルケニル」という用語は、開放結合価がＨで置換された場合、少なくとも１６ｋｃａｌ／モルの環ひずみエネルギーを有するシクロアルケニル基を指す。
ここで使用される「糖アナログ」という用語は、ホスフェート、ホスホロチオエート、又はホスホロジチオエートの酸素原子、又はキャッピング基への結合で二つのヒドロキシル基を置き換えるように修飾された、Ｃ３－６単糖又はＣ３－６アルジトール（例えば、グリセロール）である二価又は三価の基を表す。糖アナログは、相補鎖の核酸塩基との水素結合に関与することができる核酸塩基を含まない。糖アナログは環式又は非環式である。糖アナログに含まれる更なる任意の修飾は、残りのヒドロキシル基又は炭素結合水素原子の一つ、二つ、又は三つのＨでの置換；ここで定義された、置換されていてもよいＣ１－６アルキル；ここで定義された、－ｌｉｎｋＡ（－Ｔ）ｐ；コンジュゲート基；－（ＣＨ２）ｔ１－ＯＲＺ（ここで、ｔ１は１から６の整数であり、ＲＺは、置換されていてもよいＣ１－６アルキル、置換されていてもよいＣ２－６アルケニル、置換されていてもよいＣ２－６アルキニル、置換されていてもよいＣ６－１４アリール、置換されていてもよいＣ３－８シクロアルキル、置換されていてもよい（Ｃ１－９ヘテロシクリル）－Ｃ１－６－アルキル、置換されていてもよい（Ｃ６－１０アリール）－Ｃ１－６－アルキル、又は置換されていてもよい（Ｃ３－８シクロアルキル）－Ｃ１－６－アルキルである）；一又は二の不飽和の導入（例えば、一又は二の二重結合）；及び一つ、二つ、又は三つの水素又はヒドロキシル基の、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、又はヘテロシクリルについて定義された置換基での置換である。糖アナログの非限定的な例は、置換されていてもよいＣ２－６アルキレン、置換されていてもよいＣ２－６アルケニレン、置換されていてもよいＣ５シクロアルカン－１，３－ジイル、置換されていてもよいＣ５シクロアルケン－１，３－ジイル、置換されていてもよい複素環－１，３－ジイル（例えば、置換されていてもよいピロリジン－２，５－ジイル、置換されていてもよいテトラヒドロフラン－２，５－ジイル、又は置換されていてもよいテトラヒドロチオフェン－２，５－ジイル）、又は置換されていてもよい（Ｃ１－４アルキル）－（Ｃ３－８シクロアルキレン）（例えば、置換されていてもよい（Ｃ１アルキル）－（Ｃ３シクロアルキレン））である。
ここで使用される「ジスルフィド」という用語は、二価の－Ｓ－又は＝Ｓ基を表す。ジスルフィドは－Ｓ－Ｓ－である。
ここで使用される「ターゲティング部分」という用語は、所与の標的細胞集団（例えば、抗原提示細胞（ＡＰＣ；例えば、プロフェッショナルＡＰＣ（例えば、Ｂ細胞、ｐＤＣ、又はマクロファージ）））に関連する受容体又は他の受容性部分に特異的に結合し又は反応的に結合し又は複合体を形成する部分（例えば、小分子、例えば炭水化物）を表す。ここで提供されるコンジュゲートは、ターゲティング部分を含む。ターゲティング部分は、抗体又は抗原結合断片又はその操作された誘導体（例えば、Ｆｃａｂ又は融合タンパク質（例えば、ｓｃＦｖ））でありうる。ターゲティング部分は、ポリペプチドでありうる。あるいは、ターゲティング部分は、小分子（例えば、マンノース）又は小分子クラスター（例えば、マンノースのクラスター）でありうる。ターゲティング部分を含む本発明のコンジュゲートは、ターゲティング部分が結合する標的に対して１００ｎＭ未満のＫｄを示しうる。Ｋｄは、当該技術分野で知られている方法を使用して、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥＴＭシステム（GE Healthcare, Little Chalfont, the United Kingdom）を使用して測定される。
ここで使用される「１，２，４，５－テトラジン基」という用語は、次の式：
Figure 0007536025000013
の基を表し、ここで、Ｒ’は、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいヘテロシクリルであり；かつＲ”は、置換されていてもよいアルキレン、置換されていてもよいヘテロアルキレン、置換されていてもよいアリーレン、置換されていてもよいシクロアルキレン、置換されていてもよいヘテロシクリレン、又は基－Ｒａ－Ｒｂ－（ここで、ＲａとＲｂのそれぞれが独立して置換されていてもよいアルキレン、置換されていてもよいヘテロアルキレン、置換されていてもよいアリーレン、置換されていてもよいシクロアルキレン、又は置換されていてもよいヘテロシクリレンである）である。
「治療効果」という用語は、薬理学的に活性な物質によって引き起こされる、対象、特に哺乳動物、より具体的にはヒトにおける局所的又は全身的効果を指す。従って、該用語は、疾患の診断、治癒、緩和、治療又は予防、あるいは動物又はヒトの望ましい身体的又は精神的発達及び状態の増強に使用されることを意図した任意の物質を意味する。ここで使用される「治療有効量」又は「治療有効用量」という用語は、治療される疾患の症状を改善し、治療し、又は少なくとも部分的に抑止するために必要な免疫調節性ポリヌクレオチド又はコンジュゲートの量を表す。この使用に有効な量は、疾患の重症度と、対象の体重と一般的状態に依存する。典型的には、インビトロで使用される投薬量は、薬学的組成物のインビボ投与に有用な量で有用なガイダンスを提供し得、動物モデルは、特定の疾患の治療のための効果的な投薬量を決定するために使用されうる。
ここで使用される「チオカルボニル」は、Ｃ（＝Ｓ）基を表す。
ここで使用される「チオヘテロシクリレン」という用語は、Ｒがヘテロシクリレンである基－Ｓ－Ｒ－を表す。チオヘテロシクリレンは、ヘテロシクリルについて記載した形で場合によっては置換されうる。
ここで使用される「チオール」という用語は、－ＳＨ基を表す。
患者の疾患又は状態に関して使用される「治療」という用語は、本発明のポリヌクレオチド又はコンジュゲートを患者に投与することによって、患者において有益な又は所望の結果、例えば、臨床結果を得ることを指すことが意図される。有益な又は所望の結果には、疾患又は状態の一又は複数の症状の軽減又は寛解；疾患又は状態の程度の減少；疾患又は状態の安定化（すなわち、悪化しない）；疾患又は状態の伝播の防止；疾患又は状態の進行の遅延化又は緩徐化；疾患又は状態の緩和；及び寛解（部分的又は全体的）が含まれうる。疾患又は状態を「緩和する」とは、本発明のポリヌクレオチド又はコンジュゲートでの治療がない場合の程度又は時間経過と比較して、疾患又は状態の程度及び／又は望ましくない臨床症状が軽減され、及び／又は進行の時間経過が遅くなることを意味する。
ここで使用される「トリアゾロシクロアルケニレン」という用語は、８員環に縮合した１，２，３－トリアゾール環を含むヘテロシクリレンを指し、その全ての環内原子は炭素原子であり、橋頭原子はｓｐ２－混成炭素原子である。トリアゾシクロアルケニレンは、ヘテロシクリルについて記載された形で場合によっては置換されうる。
ここで使用される「トリアゾロヘテロシクリレン」という用語は、少なくとも１個のヘテロ原子を含む８員環に縮合した１，２，３－トリアゾール環を含むヘテロシクリレンを指す。トリアゾロヘテロシクリレンの橋頭堡原子は炭素原子である。トリアゾロヘテロシクリレンは、ヘテロシクリルについて記載された形で場合によっては置換されうる。
「免疫調節性ポリヌクレオチド」、「免疫刺激性ポリヌクレオチド」、「免疫抑制性ポリヌクレオチド」、及び「コンジュゲート」という用語は、それぞれ、免疫調節性ポリヌクレオチド、免疫刺激性ポリヌクレオチド、免疫抑制性ポリヌクレオチド、及びコンジュゲートの塩を包含することが理解されるべきである。例えば、「免疫調節性ポリヌクレオチド」、「免疫刺激性ポリヌクレオチド」、「免疫抑制性ポリヌクレオチド」、及び「コンジュゲート」という用語は、ホスフェート、ホスホロチオエート、又はホスホロジチオエートのプロトン化中性形態（Ｐ－ＸＨ部分（ここで、ＸはＯ又はＳである））と、ホスフェート、ホスホロチオエート、又はホスホロジチオエートの脱プロトン化イオン形態（Ｐ－Ｘ－部分（ここで、ＸはＯ又はＳである））の両方を包含する。従って、水素としてＲＥ１、ＲＥ２、及びＲＥ３の一又は複数を有すると記載されるホスホエステル及びホスホジエステルは、ホスフェート、ホスホロチオエート、又はホスホロジチオエートが脱プロトン化されたイオン形態で存在する塩を包含することが理解されるべきである。
「自然免疫応答」及び「自然免疫」という用語は、当該技術分野で認識されており、様々な経路を介したサイトカイン産生及び細胞死を含む、異なる形態の細胞活性を伴う、病原体関連分子パターンの認識時に身体の免疫系が開始する非特異的防御機構を指す。ここで使用される場合、自然免疫応答には、ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）によって媒介されるＣｐＧ含有免疫刺激性ポリヌクレオチドに対する細胞応答が含まれ、これには、限定されないが、炎症サイトカインの産生の増加（例えば、Ｉ型インターフェロン又はＩＬ－１０産生）、ＮＦκＢ経路の活性化、免疫細胞の増殖、成熟、分化及び／又は生存の増加、及び場合によっては細胞アポトーシスの誘導が含まれる。自然免疫の活性化は、（ＮＦ）－κＢ活性化を測定するなど、当該技術分野で知られている方法を使用して検出することができる。
「適応免疫応答」及び「適応免疫」という用語は、当該技術分野で認識されており、体液性応答と細胞性応答の両方を含む、特定の抗原の認識時に身体の免疫系が開始する抗原特異的防御機構を指す。ここで使用される場合、適応免疫応答には、ＣｐＧ含有免疫刺激性ポリヌクレオチドによって誘発され及び／又は増強される細胞応答が含まれる。幾つかの実施態様では、免疫刺激性ポリヌクレオチド又はその一部は、抗原特異的適応免疫応答の抗原標的である。他の実施態様では、免疫刺激性ポリヌクレオチドは、抗原特異的適応免疫応答の抗原標的ではないが、それにもかかわらず、適応免疫応答を増強する。適応免疫応答の活性化は、抗原特異的抗体産生、又は抗原特異的細胞媒介性細胞傷害のレベルを測定するなど、当該技術分野で知られている方法を使用して検出することができる。
「Ｔｏｌｌ様受容体」（又は「ＴＬＲ」）という用語は、当該技術分野で認識されており、微生物病原体を認識する自然免疫系のセンサーとして最初は同定されたパターン認識受容体のファミリーを指す。ＴＬＲは、しばしば「ＰＡＭＰ」（病原体関連分子パターン）と呼ばれる微生物の異なる構造を認識する。ＴＬＲに結合するリガンドは、自然免疫応答及び／又は適応免疫応答を誘導する細胞内シグナル伝達経路のカスケードを発動させる。ここで使用される場合、「Ｔｏｌｌ様受容体」又は「ＴＬＲ」という用語はまた細胞によって発現されるｔｏｌｌ様受容体タンパク質の機能的断片を指す。ヒトでは、ＴＬＲ－１、－２、－３、－４、－５、－６、－７／８、－９、及び－１０を含む、十のＴＬＲが同定されている。D’Arpa及びLeung, Adv. Wound Care, 2017, 6, 330-343。ＴＬＲをコードするヒト遺伝子は知られている。
ＣＤ２８９（表面抗原分類２８９）とも命名されるＴｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）は、ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）ファミリーのメンバーである。Du等, Eur. Cytokine Netw., 11:362-371 (2000)。ＴＬＲ９は、樹状細胞（ＤＣ）、Ｂリンパ球、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、及び他の抗原提示細胞を含む免疫系細胞で発現される重要な受容体である。ＴＬＲ９活性化は、自然免疫と適応免疫を橋渡しするシグナル伝達カスケードをトリガーする。Martinez-Campos等, Viral Immunol., 30:98-105 (2016)；Notley等, Sci. Rep., 7:42204 (2017)。天然のＴＬＲ－９アゴニストには、非メチル化シトシン－グアニンジヌクレオチド（ＣｐＧ）を含むオリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ ＯＤＮ）が含まれる。本開示において使用が見いだされるＴＬＲ－９リガンドには、限定されないが、天然に存在するか又は合成のＣｐＧ ＯＤＮ、並びにここで提供される他のＣｐＧ含有免疫刺激性ポリヌクレオチド及び／又はイムノコンジュゲートが含まれる。ＴＬＲ９シグナル伝達経路の活性化は、ミエロイド系分化抗原８８（ＭｙＤ８８）の動員の測定、核内因子（ＮＦ）－κＢ、ｃ－Ｊｕｎ Ｎ末端キナーゼ（ＪＮＫ）、及びｐ３８マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）シグナル伝達経路の活性化、インターフェロン調節因子－７の活性化、Ｉ型インターフェロン（ＩＦＮ）、インターロイキン（ＩＬ）－６、ＩＬ－１０、及びＩＬ－１２などの一又は複数のサイトカインの発現レベル、ＮＫ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、単球などの一又は複数の免疫細胞集団の活性化、及び細胞傷害性リンパ球（ＣＴＬ）及びＴヘルパー－１（Ｔｈ１）応答のレベル、及び免疫グロブリン分泌のレベルの測定などの当該技術分野で知られている方法を使用して、検出することができる。
ここで使用される「ＴＬＲ発現細胞」という用語は、ｔｏｌｌ様受容体を発現し、ｔｏｌｌ様受容体がアゴニストに結合するときにｔｏｌｌ様受容体シグナル伝達経路を活性化することができる細胞を指す。ｔｏｌｌ様受容体は、細胞表面上、及び／又はエンドソーム又はファゴソームなどの細胞の一又は複数の細胞内区画の膜上に発現されうる。ＴＬＲ発現細胞は、ｔｏｌｌ様受容体以外の一又は複数の細胞表面抗原を更に発現しうる。所定の免疫細胞はＴＬＲを発現し、免疫細胞におけるＴＬＲシグナル伝達経路の活性化は、自然免疫応答及び／又は適応免疫応答を誘発する。ＴＬＲシグナル伝達経路によって活性化される免疫細胞は、体から他の罹患細胞を排除するのに役立ちうる。所定の罹患細胞（例えば、がん細胞又はウイルス感染細胞）はＴＬＲを発現し、罹患細胞におけるＴＬＲシグナル伝達経路の活性化は、誘導されたアポトーシスを介するなど、罹患細胞の死をもたらしうる。ＴＬＲ９発現細胞の例には、限定されないが、樹状細胞（ＤＣ）、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ランゲルハンス細胞、ケラチノサイト、肥満細胞、内皮細胞、筋線維芽細胞、及び初代線維芽細胞が含まれる。細胞がｔｏｌｌ様受容体（例えば、ＴＬＲ９）を発現するかどうかの決定は、細胞内のｔｏｌｌ様受容体のｍＲＮＡの検出など、当該技術分野で知られている方法を使用して実施することができる。
「免疫細胞」という用語は当該技術分野で認識されており、ここで使用される場合、炎症誘発性サイトカインを産生する細胞、及び組織損傷及び／又は病態形成に関与する細胞などの宿主防御機構に関与する任意の細胞を指す。免疫細胞の例には、限定されないが、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、好中球、肥満細胞、マクロファージ、抗原提示細胞（ＡＰＣ）、好塩基球、及び好酸球が含まれる。
「抗原提示細胞」又は「ＡＰＣ」という用語は、当該技術分野で認識されており、Ｔ細胞などの所定のリンパ球による認識のために抗原をプロセシングし提示することによって細胞性免疫応答を媒介する免疫細胞の異種群を指す。抗原提示細胞の例示的なタイプには、限定されないが、例えば、Ｂ細胞、単球、樹状細胞、及びランゲルハンス細胞を含むプロフェッショナル抗原提示細胞、並びに例えば、ケラチノサイト、内皮細胞、星状細胞、線維芽細胞、及びオリゴ樹状細胞を含む他の抗原提示細胞が含まれる。ここで使用される場合、「抗原提示細胞」という用語は、インビボで見出される抗原提示細胞とインビボ細胞に由来するインビトロ細胞培養物で見出されるものを含む。ここで使用される場合、抗原提示細胞はまた、ｔｏｌｌ様受容体（例えば、ＴＬＲ９）を発現するように、又はｔｏｌｌ様受容体（例えば、ＴＬＲ９）の発現レベルを調節するように遺伝子改変されるなど、人工的に改変されているＡＰＣを含む。
「樹状細胞」又は「ＤＣ」という用語は、当該技術分野で認識されており、特殊化抗原感知及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）の異種群を指す。ヒトＤＣは、形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）、骨髄系ＤＣ（ｍＤＣ）、及び単球由来ＤＣ（ＭＤＤＣ）の三つの主要サブセットに分けられる。Schraml等, Curr. Opin. Immunol., 32:13-20 (2015)。ＤＣのサブセットは、異なるＴＬＲ発現パターンに基づいて識別されうる。一例として、ＤＣの骨髄系又は「コンベンショナル」サブセット（ｍＤＣ）は、刺激されるとＴＬＲ１－８を発現し、活性化マーカー（例えば、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＭＨＣクラスＩ及びＩＩ、ＣＣＲ７）のカスケード、炎症誘発性サイトカイン、及びケモカインが生成される。この刺激と結果として生じる発現の結果は、抗原特異的ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞のプライミングである。これらのＤＣは、抗原を取り込み、適切な形でそれらをＴ細胞に提示する向上した能力を獲得する。ＤＣの形質細胞様サブセット（ｐＤＣ）は、活性化時にＴＬＲ７及びＴＬＲ９を発現し、その結果、ＮＫ細胞及びＴ細胞を活性化する。
ここで使用される「抗原」という用語は、自然免疫応答と適応免疫応答の両方を含む免疫応答を誘発することができる分子又はその抗原性断片を指す。ここで使用される場合、抗原は、タンパク質、ペプチド、多糖類、脂質、核酸、特にＲＮＡ及びＤＮＡ、ヌクレオチド、及び他の生物学的又は生化学的物質でありうる。「免疫応答を誘発する」という用語は、抗原などの刺激に応答してインビボで免疫細胞を刺激することを指す。免疫応答は、Ｔ細胞及びマクロファージ刺激などの細胞性免疫応答と、Ｂ細胞及び補体刺激並びに抗体産生などの体液性免疫応答の両方からなる。免疫応答は、限定されないが、抗体イムノアッセイ、増殖アッセイなどを含む、当該技術分野で周知の技術を使用して測定することができる。
「抗原性断片」及び「抗体結合断片」という用語は、ここでは互換的に使用される。ここで使用される抗原性断片は、特定の反応において、抗原結合分子、例えば、抗体と複合体を形成することができる。ここで言及される特定の反応は、抗原又は抗原性断片が、他の抗原によって誘発されうる多数の他の抗体ではなく、その対応する抗体と非常に選択的な形で反応することを示す。このような反応の特異性は、抗原中の一又は複数のエピトープ（免疫原性決定基）の存在によって決定される。ここで使用される場合、抗原又はその抗原性断片は、一つのエピトープを有しうるか、又は一を超えるエピトープを有しうる。
ここで使用される「Ｔ細胞エピトープ」という用語は、Ｔ細胞によって産生される抗原の任意のエピトープを指す。
ここで使用される「腫瘍関連抗原」又は「ＴＡＡ」という用語は、ここで提供される治療又は予防的ケアを受けている（例えば、治療用量の免疫刺激性ポリヌクレオチド又はＣｐＧ－Ａｂイムノコンジュゲートの投与を受けている）がん患者のがん細胞又は固形腫瘍のストロマによって発現される抗原を指す。ＴＡＡは、ここで提供される治療又は予防的ケアにおいて標的とされても又は標的とされなくてもよい。ＴＡＡは、がん細胞で過剰発現され、変異され、又は誤調節される必要はないが、ＴＡＡが正常細胞において有するものと同じ機能を有することができる。幾つかの実施態様では、ＴＡＡは、がん細胞において過剰発現され、変異され、又は誤調節されうる。ＴＡＡは、タンパク質、核酸、脂質、又は他の抗原でありうる。ＴＡＡは、細胞表面に発現されたＴＡＡ、細胞内ＴＡＡ、又は核内ＴＡＡでありうる。固形腫瘍との関連で、ＴＡＡは固形腫瘍塊のストロマで発現されうる。ここで使用される「ストロマ」という用語は、がん細胞以外の固形腫瘍塊中の成分を指す。例えば、ストロマは、線維芽細胞、上皮細胞、他の血管成分又は細胞外マトリックス成分を含みうる。ここで使用される場合、「ストロマ」という用語は、免疫細胞（例えば、Ｂ細胞、Ｔ細胞、樹状細胞、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞等）などの免疫系の構成要素を含まない。様々なＴＡＡが当該技術分野で知られている。ＴＡＡの同定は、Zhang et al., Methods Mol. Biol., 520:1-10 (2009)に開示されているものなど、当該技術分野で知られている方法を使用して実施することができる。
「抗体」、「免疫グロブリン」、及び「Ｉｇ」という用語は、ここでは交換可能に使用され、最も広い意味で使用され、具体的には、例えば、個々のモノクローナル抗体（アゴニスト、アンタゴニスト、中和抗体、全長又はインタクトなモノクローナル抗体）、ポリエピトープ又はモノエピトープ特異性を有する抗体組成物、ポリクローナル又は一価抗体、多価抗体、少なくとも二つのインタクトな抗体から形成された多重特異性抗体（例えば、それらが所望の生物学的活性を示す限り、二重特異性抗体）、一本鎖抗体、及び抗体の断片を包含する。抗体は、ヒト、ヒト化、キメラ、及び／又はアフィニティー成熟、並びに他の種、例えば、マウス及びウサギ由来の抗体でありうる。
「抗体」という用語は、特異的抗原に結合することができ、ポリペプチド鎖の二つの同一対から構成される、ポリペプチドの免疫グロブリンクラス内のＢ細胞のポリペプチド産物を含むことを意図し、ここで、各対は一つの重鎖（約５０－７０ｋＤａ）と一つの軽鎖（約２５ｋＤａ）を有し、各鎖の各アミノ末端部分は、約１００から約１３０以上のアミノ酸の可変領域を含み、各鎖の各カルボキシル末端部分は、定常領域を含む。Borrebaeck 編 (1995) Antibody Engineering, 2版, Oxford University Press.；Kuby (1997) Immunology, 3版, W.H. Freeman and Company, New Yorkを参照のこと。抗体には、また限定されないが、合成抗体、モノクローナル抗体、組換え抗体、多重特異性抗体（二重特異性抗体を含む）、ヒト抗体、ヒト化抗体、ラクダ化抗体、キメラ抗体、イントラボディ、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、及び断片が由来する抗体の結合活性の一部又は全てを保持する抗体重鎖又は軽鎖ポリペプチドの一部を意味する、その機能的断片が含まれる。抗体の機能的断片の非限定的な例には、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）（例えば、単一特異性又は二重特異性を含む）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、Ｆ（ａｂ）２断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、及びミニボディが含まれる。特に、ここで提供される抗体には、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、例えば、抗原に結合する抗原結合部位（例えば、抗ＣＤ５６抗体又は抗ＳＩＲＰα抗体の一又は複数の相補性決定領域（ＣＤＲ））を含む抗原結合ドメイン又は分子が含まれる。そのような抗体断片は、例えば、Harlow及びLane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York (1989)；Myers編, Molec. Biology and Biotechnology: A Comprehensive Desk Reference, New York: VCH Publisher, Inc.；Huston等, Cell Biophysics 1993, 22, 189-224；Plueckthun及びSkerra, Meth. Enzymol. 1989, 178, 497-515；及びDay, Advanced Immunochemistry, 2版, Wiley-Liss, Inc., New York, NY (1990)に記載されている。ここで提供される抗体は、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＹ）、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）、又は任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ）の免疫グロブリン分子でありうる。
「抗原」という用語は、抗体が選択的に結合することができる予め定まった抗原を指す。標的抗原は、ポリペプチド、炭水化物、核酸、脂質、ハプテン、又は他の天然に存在する又は合成の化合物でありうる。一実施態様では、標的抗原はポリペプチドである。
「抗原結合断片」、「抗原結合ドメイン」、及び「抗原結合領域」という用語は、抗原と相互作用し、結合剤に抗原に対するその特異性と親和性を与えるアミノ酸残基（例えば、相補性決定領域（ＣＤＲ））を含む抗体の一部を指す。
特定のポリペプチド又は特定のポリペプチド標的上のエピトープに対する「特異的結合」、「特異的に結合する」、又は「特異的」という用語は、例えば、少なくとも約１０－４Ｍ、少なくとも約１０－５Ｍ、少なくとも約１０－６Ｍ、少なくとも約１０－７Ｍ、少なくとも約１０－８Ｍ、少なくとも約１０－９Ｍ、少なくとも約１０－１０Ｍ、少なくとも約１０－１１Ｍ、又は少なくとも約１０－１２Ｍの標的への解離定数（Ｋｄ）を有する分子（例えば、抗体）によって示されうる。一実施態様では、「特異的結合」という用語は、分子が、任意の他のポリペプチド又はポリペプチドエピトープに実質的に結合することなく、特定のポリペプチド又は特定のポリペプチド上のエピトープに結合する結合を指す。
４鎖抗体単位は、二つの同一の軽（Ｌ）鎖と二つの同一の重鎖（Ｈ）から構成されるヘテロ四量体糖タンパク質である。ＩｇＧの場合、４鎖単位は一般に約１５００００ダルトンである。各Ｌ鎖は一つの共有ジスルフィド結合によってＨ鎖に結合され、二つのＨ鎖は、Ｈ鎖アイソタイプに応じて一又は複数のジスルフィド結合によって互いに結合される。各Ｈ及びＬ鎖は、また規則的に間隔を開けた鎖内ジスルフィド架橋を有する。各Ｈ鎖は、Ｎ末端に、可変ドメイン（ＶＨ）と、それに続き、α及びγ鎖のそれぞれに対して３つの定常ドメイン（ＣＨ）を、μ及びεアイソタイプに対して４つのＣＨドメインを有する。各Ｌ鎖は、Ｎ末端に、可変ドメイン（ＶＬ）と、それに続き、その他方の末端に定常ドメイン（ＣＬ）を有する。ＶＬはＶＨと整列され、ＣＬは重鎖の第一定常ドメイン（ＣＨ１）と整列される。特定のアミノ酸残基は、軽鎖と重鎖の可変ドメイン間の界面を形成すると考えられる。ＶＨとＶＬの対形成は、単一の抗原結合部位を形成する。異なるクラスの抗体の構造と特性については、例えば、Basic and Clinical Immunology, 8版, Stites等編, Appleton及びLange, Norwalk, CT, 1994の７１頁と６章を参照のこと。
「可変領域」又は「可変ドメイン」という用語は、一般に軽鎖又は重鎖のアミノ末端に位置し、重鎖に約１２０から１３０のアミノ酸長、軽鎖に約１００から１１０のアミノ酸長を有し、その特定の抗原に対する各特定の抗体の結合及び特異性に使用される、抗体の軽鎖又は重鎖の一部を指す。重鎖の可変領域は「ＶＨ」と呼ばれうる。軽鎖の可変領域は「ＶＬ」と呼ばれうる。「可変」という用語は、可変領域の所定のセグメントが抗体間で配列において大きく異なるという事実を指す。Ｖ領域は抗原結合を媒介し、その特定の抗原に対する特定の抗体の特異性を定める。しかし、可変性は、可変領域の１１０アミノ酸スパンにわたって均等には分布していない。代わりに、Ｖ領域は、それぞれが約９－１２アミノ酸長である「超可変領域」と呼ばれるより大きな可変性（例えば、極度の可変性）のより短い領域によって分離された約１５－３０アミノ酸のフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより可変性の低い（例えば、比較的インバリアントな）ストレッチで構成される。重鎖及び軽鎖の可変領域は、それぞれ、三つの超可変領域によって連結された、主にβシート配置を採用する４つのＦＲを含み、これが、βシート構造を連結し、場合によってはβシート構造の一部を形成するループを形成する。各鎖の超可変領域は、ＦＲによって近接して保持され、他の鎖の超可変領域と共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（例えば、Kabat等, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5版 Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991を参照）。定常領域は、抗体の抗原への結合に直接関与していないが、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）への抗体の関与など、様々なエフェクター機能を示す。可変領域は、異なる抗体間で配列が大きく異なる。配列の可変性はＣＤＲに集中しているが、可変領域の可変性の低い部分はフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。軽鎖と重鎖のＣＤＲは、主に抗体と抗原の相互作用に関与している。特定の実施態様では、可変領域はヒト可変領域である。
「Ｋａｂａｔのような可変領域残基番号付け」又は「Ｋａｂａｔのようなアミノ酸位置番号付け」という用語と、それらの変形語は、Kabat等, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5版 Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)において抗体の編集の重鎖可変領域又は軽鎖可変領域に使用される番号付けシステムを指す。この番号付けシステムを使用すると、実際の直鎖状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲ又はＣＤＲの短縮又は挿入に対応するより少ない又は追加のアミノ酸を含みうる。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後に単一のアミノ酸インサート（Ｋａｂａｔによる残基５２ａ）と重鎖ＦＲ残基８２の後に挿入された残基（例えば、Ｋａｂａｔによる残基８２ａ、８２ｂ、及び８２ｃなど）を含みうる。残基のＫａｂａｔ番号付けは、「標準的な」Ｋａｂａｔ番号付け配列との抗体の配列の相同性領域でのアラインメントによって、所与の抗体について決定されうる。Ｋａｂａｔ番号付けシステムは、可変ドメインの残基（およそ軽鎖の残基１－１０７と重鎖の残基１－１１３）に言及する場合に一般に使用される（例えば、Kabat等, Sequences of Immunological Interest. 5版 Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)）。「ＥＵ番号付けシステム」又は「ＥＵインデックス」は、免疫グロブリン重鎖定常領域の残基に言及するときに一般に使用される（例えば、上掲のＫａｂａｔ等で報告されたＥＵインデックス）。「ＫａｂａｔのようなＥＵインデックス」は、ヒトＩｇＧ１ ＥＵ抗体の残基番号付けを指す。例えば、ＡｂＭ、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｃｏｎｔａｃｔ、ＩＭＧＴ、及びＡＨｏｎを含む、他の番号付けシステムが記載されている。
「インタクトな」抗体は、抗原結合部位並びにＣＬと少なくとも重鎖定常領域ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３を含むものである。定常領域は、ヒト定常領域又はそのアミノ酸配列変異体を含みうる。好ましくは、インタクトな抗体は、一又は複数のエフェクター機能を有する。
「抗体断片」という用語は、インタクトな抗体の一部、好ましくはインタクトな抗体の抗原結合又は可変領域を指す。抗体断片の例には、限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片；ダイアボディ及びジダイアボディ（例えば、Holliger等, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1993, 90, 6444-8；Lu等, J. Biol. Chem. 2005, 280, 19665-72；Hudson等, Nat. Med. 2003, 9, 129-134；国際公開第９３／１１１６１号；及び米国特許第５８３７２４２号及び第６４９２１２３号を参照）；一本鎖抗体分子（例えば、米国特許第４９４６７７８号；第５２６０２０３号；第５４８２８５８号及び第５４７６７８６号を参照）；二重可変ドメイン抗体（例えば、米国特許第７６１２１８１号を参照）；単一可変ドメイン抗体（ＳｄＡｂ）（例えば、Woolven等, Immunogenetics 1999, 50, 98-101 Streltsov等, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 2004, 101, 12444-12449を参照）；抗体断片から形成された多重特異性抗体が含まれる。
抗体の「機能的断片」、「結合断片」、又は「抗原結合断片」という用語は、インタクトな抗体に起因する生物学的機能の少なくとも一つを示す分子を指し、その機能は、少なくとも標的抗原への結合を含む。
抗体に関して使用される場合の「重鎖」という用語は、アミノ末端部分が約１２０から１３０以上のアミノ酸の可変領域を含み、カルボキシル末端部分が定常領域を含む、約５０－７０ｋＤａのポリペプチド鎖を指す。定常領域は、重鎖定常領域のアミノ酸配列に基づいて、アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）及びミュー（μ）と呼ばれる５つの異なるタイプ（例えば、アイソタイプ）の一つでありうる。異なる重鎖はサイズが異なる：α、δ及びγはおよそ４５０のアミノ酸を含む一方、μ及びεはおよそ５５０のアミノ酸を含む。軽鎖と組み合わせると、重鎖のこれらの異なるタイプは、ＩｇＧの４つのサブクラス、すなわちＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含む、それぞれ５つのよく知られたクラス（例えば、アイソタイプ）の抗体ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭを生じる。重鎖はヒト重鎖でありうる。
抗体に関して使用される場合の「軽鎖」という用語は、アミノ末端部分が約１００から約１１０以上のアミノ酸の可変領域を含み、カルボキシル末端部分が定常領域を含む、約２５ｋＤａのポリペプチド鎖を指す。軽鎖のおおよその長さは２１１から２１７アミノ酸である。定常ドメインのアミノ酸配列に基づいてラムダ（λ）、カッパ（κ）と呼ばれる２つの異なるタイプがある。軽鎖アミノ酸配列は当該技術分野でよく知られている。軽鎖はヒト軽鎖でありうる。
ここで使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、例えば、集団を構成する個々の抗体は、少量で存在しうる可能性のある天然に生じる変異を除いて同一であり、各モノクローナル抗体は典型的には抗原上の単一のエピトープを認識する。特定の実施態様では、ここで使用される「モノクローナル抗体」は、単一のハイブリドーマ又は他の細胞によって生産される抗体であり、抗体は、例えば、ＥＬＩＳＡ又は当該技術分野で知られている他の抗原結合又は競合的結合アッセイによって決定されて、ベータクロトーエピトープのみに結合する。「モノクローナル」という用語は、抗体を作製するための特定の方法に限定されない。例えば、本開示において有用なモノクローナル抗体は、Kohler等, Nature 1975, 256, 495によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって調製され得；又は、細菌、真核動物又は植物細胞において組換えＤＮＡ法を使用して作製されうる（例えば、米国特許第４８１６５６７号を参照）。「モノクローナル抗体」はまた、例えばClackson等, Nature 1991, 352, 624-628及びMarks等, J. Mol. Biol. 1991, 222, 581-597に記載された技術を使用して、ファージ抗体ライブラリーから単離されうる。クローン細胞株とそれによって発現されるモノクローナル抗体を調製するための他の方法は、当該技術分野においてよく知られている（例えば、Short Protocols in Molecular Biology, (2002) 5版, Ausubel等編, John Wiley and Sons, New Yorkの１１章を参照）。モノクローナル抗体を生産する例示的な方法は、ここの実施例に提供される。
非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」型は、天然ＣＤＲ残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット、ウサギ、又は非ヒト霊長類など、非ヒト種（例えば、ドナー抗体）の対応するＣＤＲからの残基によって置き換えられているヒト免疫グロブリン（例えば、レシピエント抗体）を含むキメラ抗体である。場合によっては、ヒト免疫グロブリンの一又は複数のＦＲ領域残基が、対応する非ヒト残基によって置き換えられる。更に、ヒト化抗体は、レシピエント抗体又はドナー抗体には見いだせない残基を含みうる。これらの改変は、抗体の性能を更に洗練するために行われる。ヒト化抗体の重鎖又は軽鎖は、少なくとも一又は複数の可変領域の実質的に全てを含み得、ＣＤＲの全て又は実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲの全て又は実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のものである。所定の実施態様では、ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンのものを含むであろう。更なる詳細については、Jones等, Nature 1986, 321, 522-525；Riechmann等, Nature 1988, 332, 323-329；Presta, Curr. Opin. Biotechnol. 1992, 3, 394-398；Carter等, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1992, 89, 4285-4289；及び米国特許第６８００７３８号、第６７１９９７１号、第６６３９０５５号、第６４０７２１３号、及び第６０５４２９７号を参照のこと。
「ヒト抗体」は、ヒトによって産生される抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有し、及び／又はここに開示されるヒト抗体を作製するための技術の何れかを使用して作製されたものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を特に除外している。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリー（Hoogenboom及びWinter, J. Mol. Biol. 1991, 227, 381；Marks等, J. Mol. Biol. 1991, 222, 581）及び酵母ディスプレイライブラリー（Chao等, Nature Protocols 2006, 1, 755-768）を含む、当該技術分野で知られている様々な技術を使用して生産できる。ヒトモノクローナル抗体の調製にまた利用できるのは、Cole等, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985)；Boerner等, J. Immunol. 1991, 147, 86-95に記載されている方法である。ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答してそのような抗体を産生するように改変されているが、その内因性遺伝子座が無効にされている遺伝子導入動物、例えばマウスに抗原を投与することによって調製することができる（例えば、Jakobovits, Curr. Opin. Biotechnol. 1995, 6, 561-566；Brueggemann及びTaussing, Curr. Opin. Biotechnol. 1997, 8, 455-458；及び米国特許第６０７５１８１号及び第６１５０５８４号（ＸＥＮＯＭＯＵＳＥＴＭ技術に関し））。また、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術によって作製されたヒト抗体に関して、Li等, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 2006, 103, 3557-3562を参照のこと。
「ＣＤＲ」は、免疫グロブリン（Ｉｇ又は抗体）ＶＨβシートフレームワークの非フレームワーク領域内の三つの超可変領域（Ｈ１、Ｈ２、又はＨ３）のうちの一つ、又は抗体ＶＬβシートフレームワークの非フレームワーク領域内の三つの超可変領域（Ｌ１、Ｌ２、又はＬ３）のうちの一つを指す。従って、ＣＤＲは、フレームワーク領域配列内に散在する可変領域配列である。ＣＤＲ領域は当業者によく知られており、例えば、抗体可変（Ｖ）ドメイン内で最も超可変性の領域としてＫａｂａｔによって定義されている。Kabat等, J. Biol. Chem. 1977, 252, 6609-6616；Kabat, Adv. Protein Chem. 1978, 32, 1-75。ＣＤＲ領域配列は、また、保存されたβシートフレームワークの一部ではない残基としてＣｈｏｔｈｉａによって構造的に定義されており、異なる立体構造に適応できる。Chothia及びLesk, J. Mol. Biol. 1987, 196, 901-917。両方の用語は当該技術分野でよく認識されている。ＣＤＲ領域配列は、また、ＡｂＭ、Ｃｏｎｔａｃｔ及びＩＭＧＴによって定義されている。標準の抗体可変領域内のＣＤＲの位置は、多くの構造の比較によって決定されている。Al-Lazikani等, J. Mol. Biol. 1997, 273, 927-948；Morea等, Methods. 2000, 20, 267-279。超可変領域内の残基の数は異なる抗体において変わるため、標準の位置に対する追加の残基は、慣習的に、標準の可変領域の番号付けスキームの残基番号の次にａ、ｂ、ｃなどで番号が付される。上掲のAl-Lazikani等(1997)。そのような命名法は、同様に当業者によく知られている。
ここで使用される場合、「超可変領域」、「ＨＶＲ」、又は「ＨＶ」という用語は、配列が超可変であり、及び／又は構造的に定義されたループを形成する抗体可変領域の領域を指す。一般に、抗体は６つの超可変領域を含む；ＶＨに３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、ＶＬに３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）。多くの超可変領域の描写が使用され、ここに含まれる。Ｋａｂａｔ相補性決定領域（ＣＤＲ）は、配列の可変性に基づいており、最も一般的に使用されている（例えば、Kabat等, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5版 Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)を参照）。Ｃｈｏｔｈｉａは、代わりに構造ループの位置を指す。例えば、Chothia及びLesk, J. Mol. Biol. 1987, 196, 901-917を参照のこと。Ｋａｂａｔ番号付け規則を使用して番号を付した場合のＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１ループの末端は、ループの長さに応じてＨ３２とＨ３４の間で変わる（これは、Ｋａｂａｔ番号付けスキームが挿入をＨ３５ＡとＨ３５Ｂに配置するためであり；Ｈ３５ＡもＨ３５Ｂも存在しない場合、ループは３２で終了し；３５Ａのみが存在する場合、ループは３３で終了し；３５Ａと３５Ｂの両方が存在する場合、ループは３４で終了する）。ＡｂＭ超可変領域は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造ループの間の妥協点を表しており、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使用される（例えば、Martin, in Antibody Engineering, Vol. 2, Chapter 3, Springer Verlagを参照）。「ｃｏｎｔａｃｔ」超可変領域は、利用可能な複合体結晶構造の分析に基づいている。これらの超可変領域又はＣＤＲのそれぞれからの残基を以下に示す。
最近、普遍的な番号付けシステムＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）情報システムが開発され、広く採用されている。Lafranc等, Dev. Comp. Immunol. 2003, 27, 55-77。ＩＭＧＴは、免疫グロブリン（ＩＧ）、Ｔ細胞受容体（ＴＲ）、並びにヒト及びその他の脊椎動物の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）に特化した統合情報システムである。ここでは、ＣＤＲは、アミノ酸配列と軽鎖又は重鎖内の位置の両方に関して言及される。免疫グロブリン可変ドメインの構造内のＣＤＲの「位置」は種間で保存され、ループと呼ばれる構造中に存在するため、構造的特徴に従って可変ドメイン配列を整列させる番号付けシステムを使用することにより、ＣＤＲ及びフレームワーク残基は容易に識別される。この情報は、ある種の免疫グロブリン由来のＣＤＲ残基を、典型的にはヒト抗体由来のアクセプターフレームワークに移植し置換する際に使用できる。追加の番号付けシステム（ＡＨｏｎ）は、Honegger及びPlueckthun, J. Mol. Biol. 2001, 309, 657-670によって開発されている。例えば、Ｋａｂａｔ番号付け及びＩＭＧＴ固有の番号付けシステムを含む番号付けシステム間の対応は、当業者によく知られている（例えば、上掲のKabat；上掲のChothia 及びLesk；上掲のMartin；上掲のLefranc等を参照のこと）。ここに示される例示的システムは、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａの組み合わせである。
超可変領域は、次のような「拡張超可変領域」を含みうる：ＶＬにおける、２４－３６又は２４－３４（Ｌ１）、４６－５６又は５０－５６（Ｌ２）及び８９－９７又は８９－９６（Ｌ３）並びにＶＨにおける２６－３５又は２６－３５Ａ（Ｈ１）、５０－６５又は４９－６５（Ｈ２）及び９３－１０２、９４－１０２、又は９５－１０２（Ｈ３）。ここで使用される場合、「ＨＶＲ」という用語と「ＣＤＲ」という用語は交換可能に使用される。
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「定常領域」又は「定常ドメイン」という用語は、抗体の抗原への結合に直接関与しないが、Ｆｃ受容体との相互作用などの様々なエフェクター機能を示す、軽鎖及び重鎖のカルボキシル末端部分を指す。該用語は、抗原結合部位を含む、免疫グロブリンの他の部分、すなわち可変領域と比較して、より保存されたアミノ酸配列を有する免疫グロブリン分子の部分を意味する。定常領域は、重鎖のＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３領域と軽鎖のＣＬ領域を含みうる。
「フレームワーク」又は「ＦＲ」残基という用語は、ＣＤＲに隣接するその可変領域残基である。ＦＲ残基は、例えば、キメラ、ヒト化、ヒト、ドメイン抗体、ダイアボディ、直鎖抗体、及び二重特異性抗体に存在する。ＦＲ残基は、超可変領域残基又はＣＤＲ残基以外の可変ドメイン残基である。
「親和性成熟」抗体は、変化を有さない親抗体と比較して、抗原に対する抗体の親和性の改善をもたらす、一又は複数の変化（例えば、変化、付加及び／又は欠失を含むアミノ酸配列変異）をその一又は複数のＨＶＲに有するものである。好ましい親和性成熟抗体は、標的抗原に対してナノモル又はピコモルの親和性を有するであろう。親和性成熟抗体は、当該技術分野で知られている手順によって産生される。概説には、Hudson及びSouriau, Nat. Med. 2003, 9, 129-134；Hoogenboom, Nat. Biotechnol. 2005, 23, 1105-1116；Quiroz及びSinclair, Revista Ingenieria Biomedica 2010, 4, 39-51を参照のこと。
「遮断」抗体又は「アンタゴニスト」抗体は、抗原の結合を阻害し又は低減するものである。所定の実施態様では、遮断抗体又はアンタゴニスト抗体は、抗原の結合を実質的に又は完全に遮断する。所定の実施態様では、「遮断」抗体又は「アンタゴニスト」抗体は、それが結合する抗原の生物学的活性を阻害し又は低下させるものである。他の実施態様では、遮断抗体又はアンタゴニスト抗体は、抗原の生物学的活性を実質的に又は完全に阻害する。例えば、遮断抗ＳＩＲＰ抗体は、ＳＩＰＲαとＣＤ４７の間の相互作用を実質的に又は完全に妨げる。
「非遮断」抗体は、抗原の結合を阻害し又は低減しないものである。所定の実施態様では、「非遮断」抗体は、それが結合する抗原の生物学的活性を阻害し又は低減しないものである。他の実施態様では、非遮断抗体は、抗原が結合する別個の非重複エピトープに結合する。幾つかの実施態様では、非遮断抗体はアゴニスト抗体である。
「アゴニスト抗体」は、応答を誘発する抗体、例えば、目的のポリペプチドの機能的活性の少なくとも一つを模倣するものである。アゴニスト抗体は、例えば、リガンドが細胞表面受容体に結合し、結合が細胞間細胞シグナル伝達経路を介して細胞シグナル伝達又は活性を誘導し、抗体が同様の細胞シグナル伝達又は活性化を誘導する、リガンドミメティックである抗体を含む。
抗体「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域（例えば、天然配列Ｆｃ領域又はアミノ酸配列変異体Ｆｃ領域）に起因する生物学的活性を指し、抗体アイソタイプによって変わる。抗体エフェクター機能の例には、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）のダウンレギュレーション；及びＢ細胞の活性化が含まれる。
ここでの「Ｆｃ領域」という用語は、例えば、天然配列Ｆｃ領域、組換えＦｃ領域、及び変異体Ｆｃ領域を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変わりうるが、ヒトＩｇＧ重鎖のＦｃ領域は、Ｃｙｓ２２６の位置のアミノ酸残基から、又はＰｒｏ２３０からそのカルボキシル末端まで伸長するとしばしば定義される。Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵ番号付けシステムによる残基４４７）は、例えば、抗体の産生又は精製中に、又は抗体の重鎖をコードする核酸を組換え操作することによって除去されうる。従って、インタクトな抗体の組成物は、全てのＫ４４７残基が除去された抗体集団、Ｋ４４７残基が除去されていない抗体集団、及びＫ４４７残基がある抗体とない抗体の混合物を有する抗体集団を含みうる。
「治療する（treat）」、「治療する（treating）」、及び「治療」という用語は、状態、障害、又は疾患、あるいは状態、障害、又は疾患に関連する一又は複数の症状を緩和し又は無効にすること；あるいは状態、障害、又は疾患自体の原因を緩和し又は根絶することを含むことを意味する。
「予防する（prevent）」、「予防する（preventing）」、及び「予防」という用語は、状態、障害、又は疾患、及び／又はそれに付随する症状の発症を遅延させ、及び／又は防止し；対象が状態、障害、又は疾患を獲得することを妨げ；あるいは状態、障害、又は疾患にかかる対象のリスクを低減させる方法を含むことを意味する。
「接触する（contacting）」又は「接触（contact）」という用語は、そのような接触の結果として生理学的及び／又は化学的効果が生じるように、治療薬と細胞又は組織とを一緒にすることを指すことを意味する。接触は、インビトロ、エクスビボ、又はインビボで行うことができる。一実施態様では、治療薬は、細胞培養において細胞と接触されて（インビトロ）、細胞に対する治療薬の効果が決定される。別の実施態様では、治療薬と細胞又は組織との接触は、接触される細胞又は組織を有する対象への治療薬の投与を含む。
「治療有効量」という用語は、投与されたときに、治療されている状態、障害、又は疾患の症状の一又は複数の発症を予防するか、又はある程度緩和するのに十分な化合物の量を含むことを意味する。「治療有効量」という用語はまた、研究者、獣医、医師、又は臨床医によって求められている、生体分子（例えば、タンパク質、酵素、ＲＮＡ、又はＤＮＡ）、細胞、組織、系、動物、又はヒトの生物学的又は医学的応答を誘発するのに十分な化合物の量を意味する。
「薬学的に許容可能な担体」、「薬学的に許容可能な添加物」、「生理学的に許容可能な担体」、又は「生理学的に許容可能な添加物」という用語は、液体又は固体充填剤、希釈剤、溶媒、又はカプセル化材料などの薬学的に許容可能な材料、組成物、又はビヒクルを意味する。一実施態様では、各成分は、薬学的製剤の他の成分と適合性があるという意味で「薬学的に許容可能」であり、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、免疫原性、又は他の問題もしくは合併症なしに、合理的なベネフィット／リスク比に釣り合ってヒト及び動物の組織又は器官と接触されて使用されるのに適している。Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22版; Allen編: Philadelphia, PA, 2012；Handbook of Pharmaceutical Excipients, 7版; Rowe等編; The Pharmaceutical Press and the American Pharmaceutical Association: 2012；Handbook of Pharmaceutical Additives, 3版; Ash及びAsh編; Gower Publishing Company: 2007；Pharmaceutical Preformulation and Formulation, 2版; Gibson編; CRC Press LLC: Boca Raton, FL, 2009を参照のこと。
ここで使用される「ＣｐＧ－Ａｂイムノコンジュゲート」又は「ＣｐＧ－Ａｂ」という用語は、抗体（Ａｂ）又はその抗原結合断片と、ここに記載のＣｐＧ含有免疫刺激性ポリヌクレオチドとの結合を指す。
ここで使用される「Ｔ細胞アゴニスト」という用語は、混合された開始細胞集団からのＴ細胞の増殖、分化、及び／又は生存を選択的に刺激する任意の薬剤を指す。従って、結果として生じる細胞集団は、細胞の開始集団と比較して増加した数のＴ細胞で富化される。本開示での使用が見出されるＴ細胞アゴニストには、限定されないが、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）に特異的に結合する抗原分子、並びにＴ細胞共刺激分子が含まれる。Ｔ細胞共刺激分子の例には、限定されないが、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１６０、Ｂ７－Ｈ３及びＣＤ８３リガンドが含まれる。特定の実施態様では、Ｔ細胞アゴニストは、Ｔ細胞共刺激分子に対する抗体である。特定の実施態様では、Ｔ細胞アゴニストは腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）である。特定の実施態様では、Ｔ細胞アゴニストは病原性抗原である。
ここで使用される場合、「免疫チェックポイント」又は「免疫チェックポイント分子」は、シグナルを調節する免疫系の分子である。免疫チェックポイント分子は、刺激性チェックポイント分子、すなわちシグナルを上げる分子、あるいは阻害性チェックポイント分子、すなわちシグナルを下げる分子でありうる。特定の実施態様では、免疫チェックポイントは、Ｔ細胞又は抗原提示細胞（ＡＰＣ）の何れかによって発現されるタンパク質である。所定の種類のがん細胞は、免疫チェックポイントタンパク質を発現して免疫クリアランスを逃れる。がん細胞によって発現される免疫チェックポイントタンパク質とＴ細胞によって発現される免疫チェックポイントタンパク質との間の相互作用を阻害するための免疫チェックポイントモジュレーターの使用が、所定のがん治療において効果的であることが証明されている。
ここで使用される場合、「免疫チェックポイントモジュレーター」は、対象における免疫チェックポイントの活性を変化させることができる薬剤である。所定の実施態様では、免疫チェックポイントモジュレーターは、限定されないが、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＴＩＭ－３、ＬＡＧ－３、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－５、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、ＣＤ４７、２Ｂ４、及びＴＧＦＲを含む一又は複数の免疫チェックポイント分子の機能を変化させる。免疫チェックポイントモジュレーターは、免疫チェックポイントのアゴニスト又はアンタゴニストでありうる。幾つかの実施態様では、免疫チェックポイントモジュレーターは、免疫チェックポイント結合タンパク質（例えば、抗体、抗体Ｆａｂ断片、二価抗体、抗体薬物コンジュゲート、ｓｃＦｖ、融合タンパク質、二価抗体、又は四価抗体）である。他の実施態様では、免疫チェックポイントモジュレーターは小分子である。特定の実施態様では、免疫チェックポイントモジュレーターは、抗ＰＤ１又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。
ここで使用される「標的化送達」という用語又は動詞形「標的」は、他のどの器官、組織、細胞、又は細胞内コンパートメント（非標的位置と呼ばれる）よりも特定の器官、組織、細胞及び／又は細胞内コンパートメント（標的位置と呼ばれる）への送達薬剤（免疫刺激性ポリヌクレオチドなど）の到達を促進するプロセスを指す。標的化送達は、当該技術分野で知られている方法を使用して、例えば、標的細胞集団における送達された薬剤の濃度を、全身投与後の非標的細胞集団における送達された薬剤の濃度と比較することによって検出することができる。ここに提供されるように、標的化送達は、非標的位置と比較して、標的位置で少なくとも２倍高い濃度をもたらす。標的化送達は、標的化細胞に関連する受容部分へのターゲティング部分の特異的結合によって達成されうる。ここで使用される場合、標的細胞に関連する受容部分は、標的化細胞の表面上又は細胞質ゾル内に位置しうる。幾つかの実施態様では、受容部分は、標的化細胞に関連する抗原である。
「ＤＡＲ」という用語は、免疫調節性ポリヌクレオチド抗体コンジュゲートの薬物－抗体比、より具体的には免疫調節性ポリヌクレオチド－抗体比を意味する。
［免疫調節性ポリヌクレオチド］
一実施態様では、ここに提供されるのは、免疫調節性（例えば、免疫刺激性）ポリヌクレオチドである。
所定の実施態様では、免疫調節性ポリヌクレオチドは、５修飾ウリジン又は５修飾シチジンを含む。所定の実施態様では、免疫調節性ポリヌクレオチドの５’末端（例えば、２つの５’末端ヌクレオシドの間）に５修飾ウリジン（例えば、５－エチニル－ウリジン）を含めると、ポリヌクレオチドの免疫調節特性が増強される。所定の実施態様では、免疫調節性ポリヌクレオチドは、長さが１８から２８ヌクレオチドである典型的なＣｐＧ ＯＤＮよりも短い（例えば、合計で約６から約１６ヌクレオチド又は約１２から約１４ヌクレオチドを含む）。所定の実施態様では、より短い免疫調節性ポリヌクレオチド（例えば、合計で約６から約１６ヌクレオチド又は約１２から約１４ヌクレオチドを含むもの）は、より長い、典型的なＣｐＧ ＯＤＮの免疫調節活性を保持し；又は、より長いＣｐＧ ＯＤＮと比較して、（例えば、ＮＦκＢ活性化によって、又は少なくとも一つのサイトカイン（例えば、ＩＬ－６又はＩＬ－１０）の発現レベルの変化によって測定して）より高い免疫調節活性を示す。所定の実施態様では、免疫調節性ポリヌクレオチドは、脱塩基スペーサーを含む。所定の実施態様では、免疫調節性ポリヌクレオチドは、ヌクレオシド間ホスホトリエステルを含む。免疫調節性ポリペプチドの例示的な説明は、国際公開第２０１８１８９３８２号に見出すことができる。
所定の実施態様では、ここに提供される免疫調節性ポリヌクレオチドは、その免疫刺激活性を実質的に犠牲にすることなく、ほとんどのヌクレオシド間ホスフェート（例えば、５０％を超えるヌクレオシド間ホスフェート）を含むＣｐＧ ＯＤＮよりも優れた安定性（例えば、ヌクレアーゼに対する安定性）を示す。この効果は、例えば、少なくとも５０％（例えば、少なくとも７０％）のヌクレオシド間ホスホロチオエート又はホスホロジチオエートを含めることによって、又はヌクレオシド間ホスホトリエステル及び／又はヌクレオシド間脱塩基スペーサーを含めることによって、達成することができる。ホスホトリエステル及び脱塩基スペーサーはまたターゲティング部分へのコンジュゲーションに便利である。完全なホスホロチオエート骨格を有するポリヌクレオチドと比較して、ホスフェートベースのホスホトリエステルと脱塩基スペーサーをまた使用して、オフターゲット活性を低下させることもできる。理論に拘束されることは望まないが、この効果は、標的細胞へのターゲティング部分媒介送達を妨害することなく自己送達を減少させることによって達成されうる。従って、ここで提供されるポリヌクレオチドは、約１５以下、約１４以下、約１３以下、約１２以下、約１１以下、又は約１０以下の近接ヌクレオシド間ホスホロチオエートを含みうる。例えば、合計で約１２から約１６のヌクレオシドを含む免疫刺激性ポリヌクレオチドは、約１０以下の近接ヌクレオシド間ホスホロチオエートを含むことができる。
ここで提供される免疫刺激性ポリヌクレオチドは、合計で約５０以下、約３０以下、約２８以下、又は約１６以下のヌクレオシドを含むことができる。免疫刺激性ポリヌクレオチドは、合計で少なくとも６、約１０以上、又は約１２以上のヌクレオシドを含むことができる。例えば、免疫刺激性ポリヌクレオチドは、合計で約６から約３０、約６から約２８、約６から約２０、約６から約１６、約１０から約２０、約１０から約１６、約１２から約２８、約１２から約２０、又は約１２から約１６のヌクレオシドを含むことができる。
所定の実施態様では、免疫刺激性ポリヌクレオチドは、一又は複数のホスホトリエステル（例えば、ヌクレオシド間ホスホトリエステル）及び／又はホスホロチオエート（例えば、約１から約６又は約１から約４）を例えば一方又は両方の末端に含む（例えば、６つの５’末端ヌクレオシド又は６つの３’末端ヌクレオシド内）。一又は複数のヌクレオシド間ホスホトリエステル及び／又はホスホロチオエートを含めることにより、エキソヌクレアーゼ媒介性分解の速度を低下させることにより、ポリヌクレオチドの安定性を高めることができる。
所定の実施態様では、免疫刺激性ポリヌクレオチドは、ホスホトリエステル又は末端ホスホジエステルを含み、ここで、ホスホトリエステル又は末端ホスホジエステルは、ターゲティング部分又はコンジュゲート基に、また場合によっては一又は複数（例えば、約１から約６）の補助部分に結合したリンカーを含む。所定の実施態様では、免疫刺激性ポリヌクレオチドは、一つのリンカーのみを含む。所定の実施態様では、免疫刺激性ポリヌクレオチドは、一つのコンジュゲート基のみを含む。
ここでで提供されるポリヌクレオチドは、鎖とその部分的又は全体的な相補鎖を含むハイブリダイズしたポリヌクレオチドでありうる。ハイブリダイズしたポリヌクレオチドは、少なくとも６つ（例えば、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約１６、約１７、約１８、約１９、約２０、約２１、約２２、又は約２３）で、含まれるより短い鎖に存在するヌクレオチドの全数までの相補塩基対を有しうる。例えば、ハイブリダイズしたポリヌクレオチドのハイブリダイズ部分は、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約１６、約１７、約１８、約１９、約２０、約２１、約２２、又は約２３の塩基対を含むことができる。
一実施態様では、ここに提供されるのは、式（Ａ）：
Figure 0007536025000015
の免疫刺激性ポリヌクレオチド又はその立体異性体、二以上のジアステレオマーの混合物、互変異性体、又は二以上の互変異性体の混合物；又はその薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、又は水和物であり；
ここで、
各ＸＮは、独立してヌクレオチドであり；
Ｘ３’は、３’末端ヌクレオチドであり；
Ｘ５’は、５’末端ヌクレオチドであり；
ＹＰは、ヌクレオシド間ホスホトリエステルであり；かつ
ｂとｃは、それぞれ約０から約２５の範囲の整数であり；但し、その合計が５以上である。
所定の実施態様では、免疫刺激性ポリヌクレオチドは、修飾された核酸塩基を有するヌクレオチドを含む。
所定の実施態様では、ｂは約１から約１５の範囲の整数である。所定の実施態様では、ｂは約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、又は約１５の整数である。所定の実施態様では、ｂは約３、約４、約１１、又は約１４の整数である。所定の実施態様では、ｂは約３の整数である。所定の実施態様では、ｂは約４の整数である。所定の実施態様では、ｂは約１１の整数である。所定の実施態様では、ｂは約１４の整数である。
所定の実施態様では、ｃは約０から約１０の範囲の整数である。所定の実施態様では、ｃは約０、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、又は約１０の整数である。所定の実施態様では、ｃは約０又は約８の整数である。所定の実施態様では、ｃは約０の整数である。所定の実施態様では、ｃは約８の整数である。
所定の実施態様では、ｂは約３の整数であり、ｃは約８の整数である。所定の実施態様では、ｂは約４の整数であり、ｃは約８の整数である。所定の実施態様では、ｂは約１１の整数であり、ｃは約０の整数である。所定の実施態様では、ｂは約１４の整数であり、ｃは約０の整数である。
所定の実施態様では、ｂ及びｃは合計で約５から約２０の範囲である。所定の実施態様では、ｂ及びｃは合計で約５から約１５の範囲である。所定の実施態様では、ｂ及びｃは合計で約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、又は約１５である。所定の実施態様では、ｂ及びｃは合計で約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、又は約１４である。所定の実施態様では、ｂ及びｃは合計で約１１である。所定の実施態様では、ｂ及びｃは合計で約１２である。所定の実施態様では、ｂ及びｃは合計で約１４である。
所定の実施態様では、各ＸＮは、独立して、２’－デオキシリボヌクレオチド又は２’修飾リボヌクレオチドである。所定の実施態様では、各ＸＮは、独立して、２’－デオキシアデノシン（Ａ）、２’－デオキシグアノシン（Ｇ）、２’－デオキシシチジン（Ｃ）、５－ハロ－２’－デオキシシチジン、２’－デオキシチミジン（Ｔ）、２’－デオキシウリジン（Ｕ）、５－ハロ－２’－デオキシウリジン、２’－フルオロリボヌクレオチド、２’－メトキシリボヌクレオチド、又は２’－（２－メトキシエトキシ）リボヌクレオチドである。所定の実施態様では、各ＸＮは独立して２’－デオキシリボヌクレオチドである。所定の実施態様では、各ＸＮは、独立して、２’－デオキシアデノシン、２’－デオキシグアノシン、２’－デオキシシチジン、５－ハロ－２’－デオキシシチジン、２’－デオキシチミジン、２’－デオキシウリジン、又は５－ハロ－２’－デオキシウリジンである。所定の実施態様では、各ＸＮは、独立して、２’－デオキシアデノシン、２’－デオキシグアノシン、２’－デオキシシチジン、２’－デオキシチミジン、５－ブロモ－２’－デオキシウリジン、又は５－ヨード－２’－デオキシウリジンである。
所定の実施態様では、Ｘ３’は、２’－デオキシリボヌクレオチド又は２’修飾リボヌクレオチドである。所定の実施態様では、Ｘ３’は、２’－デオキシリボヌクレオチドである。所定の実施態様では、Ｘ３’は、２’－デオキシアデノシン、２’－デオキシグアノシン、２’－デオキシシチジン、５－ハロ－２’－デオキシシチジン、２’－デオキシチミジン、２’－デオキシウリジン、５－ハロ－２’－デオキシウリジン、２’－フルオロリボヌクレオチド、２’－メトキシリボヌクレオチド、又は２’－（２－メトキシエトキシ）リボヌクレオチドである。所定の実施態様では、Ｘ３’は、２’－デオキシアデノシン、２’－デオキシグアノシン、２’－デオキシシチジン、５－ハロ－２’－デオキシシチジン、２’－デオキシチミジン、２’－デオキシウリジン、又は５－ハロ－２’－デオキシウリジンである。所定の実施態様では、Ｘ３’は、２’－デオキシチミジンである。所定の実施態様では、Ｘ３’は、置換ピリミジン塩基を有する２’－デオキシリボヌクレオチドである。所定の実施態様では、Ｘ３’は、５置換ピリミジン塩基を有する２’－デオキシリボヌクレオチドである。所定の実施態様では、Ｘ３’は、２’－デオキシチミジン、５－ハロ－２’－デオキシシチジン、又は５－ハロ－２’－デオキシウリジンである。所定の実施態様では、Ｘ３’は、２’－デオキシチミジン、５－ブロモ－２’－デオキシシチジン、５－ヨード－２’－デオキシシチジン、５－ブロモ－２’－デオキシウリジン、又は５－ヨード－２’－デオキシウリジンである。所定の実施態様では、Ｘ３’は、２’－デオキシチミジン、５－ブロモ－２’－デオキシウリジン、又は５－ヨード－２’－デオキシウリジンである。所定の実施態様では、Ｘ３’は、３’キャッピング基を含む末端ヌクレオチドである。所定の実施態様では、３’キャッピング基は、末端ホスホエステルである。所定の実施態様では、３’キャッピング基は、３－ヒドロキシル－プロピルホスホリル（すなわち、－Ｐ（Ｏ２）－ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ）である。
所定の実施態様では、Ｘ５’は、２’－デオキシリボヌクレオチド又は２’修飾リボヌクレオチドである。所定の実施態様では、Ｘ５’は２’－デオキシリボヌクレオチドである。所定の実施態様では、Ｘ５’は、２’－デオキシアデノシン、２’－デオキシグアノシン、２’－デオキシシチジン、５－ハロ－２’－デオキシシチジン、２’－デオキシチミジン、２’－デオキシウリジン、５－ハロ－２’－デオキシウリジン、２’－フルオロリボヌクレオチド、２’－メトキシリボヌクレオチド、又は２’－（２－メトキシエトキシ）リボヌクレオチドである。所定の実施態様では、Ｘ５’は、２’－デオキシアデノシン、２’－デオキシグアノシン、２’－デオキシシチジン、５－ハロ－２’－デオキシシチジン、２’－デオキシチミジン、２’－デオキシウリジン、又は５－ハロ－２’－デオキシウリジンである。所定の実施態様では、Ｘ５’は、置換ピリミジン塩基を有する２’－デオキシリボヌクレオチドである。所定の実施態様では、Ｘ５’は、５置換ピリミジン塩基を有する２’－デオキシリボヌクレオチドである。所定の実施態様では、Ｘ５’は、２’－デオキシチミジン、５－ハロ－２’－デオキシシチジン、又は５－ハロ－２’－デオキシウリジンである。所定の実施態様では、Ｘ５’は、５－ハロ－２’－デオキシシチジンである。所定の実施態様では、Ｘ５’は、５－ハロ－２’－デオキシウリジンである。所定の実施態様では、Ｘ５’は、２’－デオキシチミジン、５－ブロモ－２’－デオキシシチジン、５－ヨード－２’－デオキシシチジン、５－ブロモ－２’－デオキシウリジン、又は５－ヨード－２’－デオキシウリジンである。所定の実施態様では、Ｘ５’は、２’－デオキシチミジン、５－ブロモ－２’－デオキシウリジン、又は５－ヨード－２’－デオキシウリジンである。所定の実施態様では、Ｘ５’は、５－ブロモ－２’－デオキシウリジンである。所定の実施態様では、Ｘ５’は、５－ヨード－２’－デオキシウリジンである。所定の実施態様では、Ｘ５’は３’－ホスホロチオエート基を有する。所定の実施態様では、Ｘ５’は、Ｒｐのキラリティーを有する３’－ホスホロチオエート基を有する。所定の実施態様では、Ｘ５’は、Ｓｐのキラリティーを有する３’－ホスホロチオエート基を有する。
所定の実施態様では、ＹＰは、ヌクレオシド間ホスホチオトリエステルである。
所定の実施態様では、ＹＰは、
Figure 0007536025000016
であり、ここで、ＺはＯ又はＳであり；ｄは、約０から約５０の範囲の整数である。所定の実施態様では、ＺはＯである。所定の実施態様では、ＺはＳである。所定の実施態様では、ｄは約０から約１０の範囲の整数である。所定の実施態様では、ｄは約０から約５の範囲の整数である。所定の実施態様では、ｄは、約０、約１、約２、約３、約４、又は約５の整数である。所定の実施態様では、ｄは、約０、約１、又は約３の整数である。
所定の実施態様では、ＹＰは、
Figure 0007536025000017
であり、ここで、ＺはＯ又はＳであり；ｄは、約０から約５０の範囲の整数である。所定の実施態様では、ＹＰは、
Figure 0007536025000018
であり、ここで、ＺはＯ又はＳであり；ｄは、約０から約５０の範囲の整数である。所定の実施態様では、ＹＰは、
であり、ここで、ＺはＯ又はＳであり；ｄは、約０から約５０の範囲の整数である。所定の実施態様では、ＺはＯである。所定の実施態様では、ＺはＳである。所定の実施態様では、ｄは約０から約１０の範囲の整数である。所定の実施態様では、ｄは約０から約５の範囲の整数である。所定の実施態様では、ｄは、約０、約１、約２、約３、約４、又は約５の整数である。所定の実施態様では、ｄは、約０、約１、又は約３の整数である。
所定の実施態様では、式（Ａ）の免疫刺激性ポリヌクレオチドは、一つの追加のヌクレオシド間ホスホトリエステルを含む。一実施態様では、追加のヌクレオシド間ホスホトリエステルは、Ｃ１－６アルキルホスホトリエステルである。別の実施態様では、追加のヌクレオシド間ホスホトリエステルは、エチルホスホトリエステルである。
所定の実施態様では、式（Ａ）の免疫刺激性ポリヌクレオチドは、一つの５－ハロ－２’－デオキシウリジンを含む。一実施態様では、５－ハロ－２’－デオキシウリジンは、５－フルオロ－２’－デオキシウリジン、５－ブロモ－２’－デオキシウリジン、又は５－ヨード－２’－デオキシウリジンである。別の実施態様では、５－ハロ－２’－デオキシウリジンは、５－ブロモ－２’－デオキシウリジン又は５－ヨード－２’－デオキシウリジンである。更に別の実施態様では、５－ハロ－２’－デオキシウリジンは、５－フルオロ－２’－デオキシウリジンである。更に別の実施態様では、５－ハロ－２’－デオキシウリジンは、５－ブロモ－２’－デオキシウリジンである。更に別の実施態様では、５－ハロ－２’－デオキシウリジンは、５－ヨード－２’－デオキシウリジンである。
所定の実施態様では、式（Ａ）の免疫刺激性ポリヌクレオチドは、三以上の２’－デオキシシチジンを含む。所定の実施態様では、式（Ａ）の免疫刺激性ポリヌクレオチドは、三の２’－デオキシシチジンを含む。
所定の実施態様では、式（Ａ）の免疫刺激性ポリヌクレオチドは、四以上の２’－デオキシグアノシンを含む。所定の実施態様では、式（Ａ）の免疫刺激性ポリヌクレオチドは、四の２’－デオキシグアノシンを含む。
所定の実施態様では、式（Ａ）の免疫刺激性ポリヌクレオチドは、三の２’－デオキシシチジンと四の２’－デオキシグアノシンを含む。所定の実施態様では、式（Ａ）の免疫刺激性ポリヌクレオチドは、一、二、又は三のＣＧジヌクレオチドを含む。所定の実施態様では、式（Ａ）の免疫刺激性ポリヌクレオチドは、三のＣＧジヌクレオチドを含む。
所定の実施態様では、式（Ａ）の免疫刺激性ポリヌクレオチドは、三以上の２’－デオキシチミジンを含む。所定の実施態様では、式（Ａ）の免疫刺激性ポリヌクレオチドは、三、四、五、六、七、又は八の２’デオキシチミジンを含む。所定の実施態様では、式（Ａ）の免疫刺激性ポリヌクレオチドは、三、四、五、又は八の２’－デオキシチミジンを含む。
所定の実施態様では、式（Ａ）の免疫刺激性ポリヌクレオチドは、２’－デオキシアデノシンを含まない。所定の実施態様では、式（Ａ）の免疫刺激性ポリヌクレオチドは、一又は二の２’－デオキシアデノシンを含む。
所定の実施態様では、式（Ａ）の免疫刺激性ポリヌクレオチドは、約５から約２０、又は約６から約１５の範囲の長さを有する。所定の実施態様では、式（Ａ）の免疫刺激性ポリヌクレオチドは、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、又は約１５の長さを有する。所定の実施態様では、式（Ａ）の免疫刺激性ポリヌクレオチドは、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、又は約１５の長さを有する。
所定の実施態様では、式（Ａ）の免疫刺激性ポリヌクレオチドは、一又は複数のヌクレオシド間ホスホロチオエートを含む。所定の実施態様では、式（Ａ）の免疫刺激性ポリヌクレオチドにおける全てのヌクレオシド間ホスホエステルは、ヌクレオシド間ホスホロチオエートである。所定の実施態様では、式（Ａ）の免疫刺激性ポリヌクレオチドは、一又は複数のキラルヌクレオシド間ホスホロチオエートを含む。
所定の実施態様では、式（Ａ）の免疫刺激性ポリヌクレオチドは、ｐ２７５、ｐ２７６、ｐ３１３、又はｐ３４７である。所定の実施態様では、式（Ａ）の免疫刺激性ポリヌクレオチドは、ｐ２３６、ｐ２３８、ｐ２４３、ｐ２４６、ｐ３０８、ｐ３６１、ｐ３６２、又はｐ４２５である。所定の実施態様では、式（Ａ）の免疫刺激性ポリヌクレオチドは、ｐ２３６、ｐ２３８、ｐ２４３、ｐ２４６、ｐ２７５、ｐ２７６、ｐ３０８、ｐ３１３、ｐ３４７、ｐ３６１、ｐ３６２、ｐ４２５、ｐ４３３、ｐ４３４、ｐ４３５、ｐ４３６、ｐ４３７、ｐ４３８、ｐ４７７、ｐ４７８、ｐ４７９、ｐ４８０、ｐ４８１、ｐ４８２、ｐ４８３、ｐ４８４、ｐ４８５、ｐ４８６、ｐ４８７、ｐ４８８、又はｐ４８９である。
一実施態様では、ここで提供されるのは、Ｎ１Ｎ２ＣＧＮ３ＣＧ（Ｔ）ｘＧＮ４ＣＧＮ５Ｔ（配列番号：５８６）の配列を有する免疫刺激性ポリヌクレオチド、又はその立体異性体、二以上のジアステレオマーの混合物、互変異性体、又は二以上の互変異性体の混合物；あるいはその薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、又は水和物であり；ここで、
ｘは、約１から約４の範囲の整数であり；
Ｎ１は、存在しないか、２’－デオキシチミジンであり；
Ｎ２は、修飾核酸塩基を有する２’－デオキシリボヌクレオチドであり；
Ｎ３は、２’－デオキシアデノシン又は２’－デオキシチミジンで、それぞれが場合によっては３’－ホスホトリエステルを含み；
Ｎ４は、２’－デオキシアデノシン又は２’－デオキシチミジンであり；
Ｎ５は、場合によっては３’－ホスホトリエステルを含む２’－デオキシチミジンであり；かつ
Ｃは２’－デオキシシチジンであり、Ｇは２’－デオキシグアノシンである。
所定の実施態様では、Ｎ１Ｎ２ＣＧＮ３ＣＧ（Ｔ）ｘＧＮ４ＣＧＮ５Ｔ（配列番号：５８６）において、ｘは、約１、約２、約３、又は約４の整数である。所定の実施態様では、Ｎ１Ｎ２ＣＧＮ３ＣＧ（Ｔ）ｘＧＮ４ＣＧＮ５Ｔ（配列番号：５８６）において、ｘは約１の整数である。所定の実施態様では、Ｎ１Ｎ２ＣＧＮ３ＣＧ（Ｔ）ｘＧＮ４ＣＧＮ５Ｔ（配列番号：５８６）において、ｘは約４の整数である。
所定の実施態様では、Ｎ１Ｎ２ＣＧＮ３ＣＧ（Ｔ）ｘＧＮ４ＣＧＮ５Ｔ（配列番号：５８６）において、Ｎ１は存在しない。所定の実施態様では、Ｎ１Ｎ２ＣＧＮ３ＣＧ（Ｔ）ｘＧＮ４ＣＧＮ５Ｔ（配列番号：５８６）において、Ｎ１は２’－デオキシチミジンである。
所定の実施態様では、Ｎ１Ｎ２ＣＧＮ３ＣＧ（Ｔ）ｘＧＮ４ＣＧＮ５Ｔ（配列番号：５８６）において、Ｎ２は、置換ピリミジン塩基を有する２’－デオキシリボヌクレオチドである。所定の実施態様では、Ｎ１Ｎ２ＣＧＮ３ＣＧ（Ｔ）ｘＧＮ４ＣＧＮ５Ｔ（配列番号：５８６）において、Ｎ２は５置換ピリミジン塩基を有する２’－デオキシリボヌクレオチドである。所定の実施態様では、Ｎ１Ｎ２ＣＧＮ３ＣＧ（Ｔ）ｘＧＮ４ＣＧＮ５Ｔ（配列番号：５８６）において、Ｎ２は５－ハロ－２’－デオキシシチジン又は５－ハロ－２’－デオキシウリジンである。所定の実施態様では、Ｎ１Ｎ２ＣＧＮ３ＣＧ（Ｔ）ｘＧＮ４ＣＧＮ５Ｔ（配列番号：５８６）において、Ｎ２は５－ブロモ－２’－デオキシリジン又は５－ヨード－２’－デオキシウリジンである。
所定の実施態様では、Ｎ１Ｎ２ＣＧＮ３ＣＧ（Ｔ）ｘＧＮ４ＣＧＮ５Ｔ（配列番号：５８６）において、Ｎ３は、３’－ホスホトリエステルを含む２’－デオキシアデノシンである。所定の実施態様では、Ｎ１Ｎ２ＣＧＮ３ＣＧ（Ｔ）ｘＧＮ４ＣＧＮ５Ｔ（配列番号：５８６）において、Ｎ３は２’－デオキシチミジンである。所定の実施態様では、Ｎ１Ｎ２ＣＧＮ３ＣＧ（Ｔ）ｘＧＮ４ＣＧＮ５Ｔ（配列番号：５８６）において、Ｎ３は、３’－ホスホトリエステルを含む２’－デオキシチミジンである。
所定の実施態様では、Ｎ１Ｎ２ＣＧＮ３ＣＧ（Ｔ）ｘＧＮ４ＣＧＮ５Ｔ（配列番号：５８６）において、Ｎ４は２’－デオキシアデノシンである。所定の実施態様では、Ｎ１Ｎ２ＣＧＮ３ＣＧ（Ｔ）ｘＧＮ４ＣＧＮ５Ｔ（配列番号：５８６）において、Ｎ４は２’－デオキシチミジンである。
所定の実施態様では、Ｎ１Ｎ２ＣＧＮ３ＣＧ（Ｔ）ｘＧＮ４ＣＧＮ５Ｔ（配列番号：５８６）において、Ｎ５は２’－デオキシチミジンである。所定の実施態様では、Ｎ１Ｎ２ＣＧＮ３ＣＧ（Ｔ）ｘＧＮ４ＣＧＮ５Ｔ（配列番号：５８６）において、Ｎ５は３’－ホスホトリエステルを含む２’－デオキシチミジンである。
所定の実施態様では、Ｎ１Ｎ２ＣＧＮ３ＣＧ（Ｔ）ｘＧＮ４ＣＧＮ５Ｔ（配列番号：５８６）の免疫刺激性ポリヌクレオチドは、一又は複数のヌクレオシド間ホスホロチオエートを含む。所定の実施態様では、Ｎ１Ｎ２ＣＧＮ３ＣＧ（Ｔ）ｘＧＮ４ＣＧＮ５Ｔ（配列番号：５８６）の免疫刺激性ポリヌクレオチドは、少なくとも一のキラルヌクレオシド間ホスホロチオエートを含む。
所定の実施態様では、Ｎ１Ｎ２ＣＧＮ３ＣＧ（Ｔ）ｘＧＮ４ＣＧＮ５Ｔの免疫刺激性ポリヌクレオチドは、ｐ２７５、ｐ２７６、又はｐ３１３である。所定の実施態様では、Ｎ１Ｎ２ＣＧＮ３ＣＧ（Ｔ）ｘＧＮ４ＣＧＮ５Ｔ（配列番号：５８６）の免疫刺激性ポリヌクレオチドは、ｐ２３６、ｐ２３８、ｐ２４３、ｐ２４６、ｐ３０８、ｐ３６１、ｐ３６２、又はｐ４２５である。所定の実施態様では、Ｎ１Ｎ２ＣＧＮ３ＣＧ（Ｔ）ｘＧＮ４ＣＧＮ５Ｔの免疫刺激性ポリヌクレオチドは、ｐ２３６、ｐ２３８、ｐ２４３、ｐ２４６、ｐ２７５、ｐ２７６、ｐ３０８、ｐ３１３、ｐ３４７、ｐ３６１、ｐ３６２、ｐ４２５、ｐ４３３、ｐ４３４、ｐ４３５、ｐ４３６、ｐ４３７、ｐ４３８、ｐ４７７、ｐ４７８、ｐ４７９、ｐ４８０、ｐ４８１、ｐ４８２、ｐ４８３、ｐ４８４、ｐ４８５、ｐ４８６、ｐ４８７、ｐ４８８、又はｐ４８９である。
所定の実施態様では、ここで提供される免疫刺激性ポリヌクレオチドは、免疫刺激性ポリヌクレオチドである。所定の実施態様では、ここで提供される免疫刺激性ポリヌクレオチドは、ＰＡＭＳとして機能する。所定の実施態様では、ここで提供される免疫刺激性ポリヌクレオチドは、ＴＬＲ９シグナル伝達を誘発することにより、自然免疫応答を活性化するか、又は適応免疫応答を刺激する。所定の実施態様では、ここで提供される免疫刺激性ポリヌクレオチドは、ＴＬＲ９アゴニストである。
所定の実施態様では、ここで提供される免疫刺激性ポリヌクレオチドは、クラスＢ ＣｐＧポリヌクレオチド、又は５－ハロウリジン又は５－アルキニルウリジンを含むその修飾体、又はそれらの切断型（例えば、合計約６から約１６のヌクレオシドを含むもの）である。所定の実施態様では、ここで提供される切断型免疫刺激性ポリヌクレオチドは、切断型クラスＢ ＣｐＧポリヌクレオチド配列（例えば、一又は複数の３’末端ヌクレオチドが除去され、あるいは一又は複数の配列内ヌクレオチドが切除されたクラスＢ ＣｐＧポリヌクレオチド配列）を含む。
所定の実施態様では、ここに提供される免疫刺激性ポリヌクレオチドは、少なくとも一の免疫刺激性配列（ＩＳＳ）を含む。所定の実施態様では、ここに提供される免疫刺激性ポリヌクレオチドは、約１、約２、約３、又は約４のＩＳＳを含む。免疫刺激性ポリヌクレオチドにおけるＩＳＳは、標的生物に依存する。ここに提供される免疫刺激性ポリヌクレオチドに使用されるＩＳＳの共通の特徴は、シチジンｐ－グアノシン配列であり、ここで、ｐは、ヌクレオシド間ホスホジエステル（例えば、ホスフェート又はホスホロチオエート）又はヌクレオシド間ホスホトリエステルである。所定の実施態様では、ＩＳＳにおけるシチジン及びグアノシンは、それぞれ独立して２’－デオキシリボースを含む。所定の実施態様では、ここに提供される免疫刺激性ポリヌクレオチドは、約１、約２、又は約３人のヒトＩＳＳを含む。所定の実施態様では、ヒトＩＳＳは、
Figure 0007536025000020
所定の実施態様では、修飾ウリジン又はシチジンは、５－ハロウリジン（例えば、５－ヨードウリジン又は５－ブロモウリジン）、５－アルキニルウリジン（例えば、５－エチニルウリジン又は５－プロピニルウリンジン）、５－ヘテロアリールウリジン、又は５－ハロシチジンである。所定の実施態様では、修飾グアノシンは７－デアザグアノシンである。所定の実施態様では、ヒトＩＳＳは、
Figure 0007536025000021
所定の実施態様では、ヒトＩＳＳは
Figure 0007536025000022
所定の実施態様では、ヒトを標的とするここに提供される免疫刺激性ポリヌクレオチドは、５’末端ヌクレオチドを含む４つの連続したヌクレオチド内にＩＳＳを含む。所定の実施態様では、ヒトを標的とするここに提供される免疫刺激性ポリヌクレオチドは、５’末端ＩＳＳを含む。所定の実施態様では、ここに提供される免疫刺激性ポリヌクレオチドは、マウスＩＳＳを含む。所定の実施態様では、マウスＩＳＳは、六量体ヌクレオチド配列：Ｐｕ－Ｐｕ－ＣＧ－Ｐｙ－Ｐｙであり、ここで、各Ｐｕは独立してプリンヌクレオチドであり、各Ｐｙは独立してピリミジンヌクレオチドである。
所定の実施態様では、ここで提供される免疫刺激性ポリヌクレオチド中のＣｐＧに対する５’フランキングヌクレオチドは、２’－アルコキシリボースを含まない。所定の実施態様では、ここで提供される免疫刺激性ポリヌクレオチド中のＣｐＧに対する５’フランキングヌクレオチドは、糖として２’－デオキシリボースのみを含む。
所定の実施態様では、ここに提供される免疫刺激性ポリヌクレオチドは、（１）ホスホロチオエートの含有量が高い（例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、又は少なくとも８０％のヌクレオシドがホスホロチオエートによって連結され得る）；（２）ポリＧテールが存在しない；（３）免疫刺激性ポリヌクレオチド中のヌクレオシドは、２’デオキシリボース又は２’修飾リボース（例えば、２’－ハロ（例えば、２’－フルオロ）又は置換されていてもよい２’－アルコキシ（例えば、２’－メトキシ）を含む；及び／又は（４）５’末端ＩＳＳが含まれ、該末端ＩＳＳは
Figure 0007536025000023
所定の実施態様では、ここに提供される免疫調節性ポリヌクレオチドは、（例えば、ＴＬＲ９拮抗作用を介して）ＴＬＲ９シグナル伝達の活性化を減少させることによって適応免疫応答を抑制する。所定の実施態様では、ここに提供される免疫抑制性ポリヌクレオチドは、Ｎ１－Ｎ２－ＣＧの式で記載されるＣｐＧに対して５’フランキングである少なくとも二つの２’－アルコキシヌクレオチドを含み、ここでＮ１及びＮ２はそれぞれ独立して２’－アルコキシリボース（例えば、２’－メトキシリボース）を含むヌクレオチドである。
［免疫調節性ポリヌクレオチドの構造の特徴］
［脱塩基スペーサー］
所定の実施態様では、ここに提供される免疫調節性ポリヌクレオチドは、一又は複数の、一実施態様では、一又は二の脱塩基スペーサーを含み、そのそれぞれは、独立してヌクレオシド間脱塩基スペーサー又は末端脱塩基スペーサーである。免疫調節性ポリヌクレオチドが二以上の脱塩基スペーサーを含む場合、脱塩基スペーサーの構造は同じでも異なっていてもよい。
一実施態様では、脱塩基スペーサーは、式（Ｉ）：
Figure 0007536025000024
のものであり、ここで、
ｎ１は、約０又は約１の整数であり、
ｎ２は、約１から約６の整数であり、
Ｒ１は、免疫調節性ポリヌクレオチド中のヌクレオシドとの結合であり、
Ｒ２は、免疫調節性ポリヌクレオチド中のヌクレオシド又はキャッピング基との結合であり、
各Ｌ１は、独立してホスホジエステル又はホスホトリエステルであり、
各Ｌ２は、糖アナログである。
所定の実施態様では、脱塩基スペーサーがヌクレオシド間脱塩基スペーサーである場合、ｎ１は約１であり、Ｒ２はヌクレオシドとの結合であり；かつ、脱塩基スペーサーが末端脱塩基スペーサーである場合、ｎ１は約０又は約１であり、Ｒ２はキャッピング基との結合である。
所定の実施態様では、脱塩基スペーサーは、ヌクレオシド間脱塩基スペーサーである。所定の実施態様では、脱塩基スペーサーは、３’末端脱塩基スペーサーである。所定の実施態様では、それぞれの２つの近接Ｌ２基は、Ｌ１基によって分離されている（例えば、ｎ１は、２つの近接Ｌ２基間に配置されたＬ１について、１である）。
所定の実施態様では、ここに提供される免疫刺激性ポリヌクレオチドは、免疫刺激性ポリヌクレオチドの５’末端ヌクレオチドを含む４つの近接したヌクレオチド内に配置されたＩＳＳを含み、ここで、ＩＳＳは、
［糖アナログ］
一実施態様では、糖アナログは、Ｃ３－６単糖又はＣ３－６アルジトールである二価又は三価の基（例えば、グリセロール）であり、これは、二つのヒドロキシル基を、（ｉ）一つのホスホエステル中の酸素原子、及び（ｉｉ）別のホスホエステル中の酸素原子又はキャッピング基への結合で置き換えるように修飾される。糖アナログは環状又は非環状である。糖アナログに含まれる更なる任意の修飾は、残りのヒドロキシル基又は炭素結合水素原子の１個、２個、又は３個の、Ｈ；置換されていてもよいＣ１－６アルキル；ここで定義される、－ｌｉｎｋＡ（－Ｔ）ｐ；コンジュゲート基；－（ＣＨ２）ｔ１－ＯＲＺ（ここで、ｔ１は約１から約６の整数であり、ＲＺは置換されていてもよいＣ１－６アルキル、置換されていてもよいＣ２－６アルケニル、置換されていてもよいＣ２－６アルキニル、置換されていてもよいＣ６－１４アリール、置換されていてもよいＣ３－８シクロアルキル、置換されていてもよい（Ｃ１－９ヘテロシクリル）－Ｃ１－６－アルキル、置換されていてもよい（Ｃ６－１０アリール）－Ｃ１－６－アルキル、又は置換されていてもよい（Ｃ３－８シクロアルキル）－Ｃ１－６－アルキルである）での置換；一又は二の不飽和（例えば、一又は二の二重結合）の導入；一、二、又は三の水素又はヒドロキシル基の、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、又はヘテロシクリルに対して定義された置換基での置換である。幾つかの実施態様では、ＲＺは、置換されていてもよいＣ１－６アミノアルキル（例えば、－ＮＨ２を含む置換されていてもよいＣ１－６アミノアルキル）である。
糖アナログの非限定的な例は、置換されていてもよいＣ２－６アルキレン、置換されていてもよいＣ２－６アルケニレン、置換されていてもよいＣ５シクロアルカン－１，３－ジイル、置換されていてもよいＣ５シクロアルケン－１，３－ジイル、置換されていてもよいヘテロ環－１，３－ジイル（例えば、置換されていてもよいピロリジン－２，５－ジイル、置換されていてもよいテトラヒドロフラン－２，５－ジイル、又は置換されていてもよいテトラヒドロチオフェン－２，５－ジイル）、又は置換されていてもよい（Ｃ１－４アルキル）－（Ｃ３－８シクロアルキレン）（例えば、置換されていてもよい（Ｃ１アルキル）－（Ｃ３シクロアルキレン））である。糖アナログの非限定的な例は、
Figure 0007536025000026
であり、ここで、
Ｒ１とＲ２のそれぞれは、独立してホスホエステル中の酸素原子への結合であり；
Ｒ３とＲ４のそれぞれは、独立してＨ；置換されていてもよいＣ１－６アルキル；－（ＣＨ２）ｔ１－ＯＲＺ；又は－ＬｉｎｋＡ－ＲＴであり；
ここで、ｔ１は約１から約６の整数であり；
ＲＺは、置換されていてもよいＣ１－６アルキル、置換されていてもよいＣ２－６アルケニル、置換されていてもよいＣ２－６アルキニル、置換されていてもよいＣ６－１４アリール、置換されていてもよいＣ３－８シクロアルキル、置換されていてもよい（Ｃ１－９ヘテロシクリル）－Ｃ１－６－アルキル、置換されていてもよい（Ｃ６－１０アリール）－Ｃ１－６－アルキル、置換されていてもよい（Ｃ３－８シクロアルキル）－Ｃ１－６－アルキルであり；
ＬｉｎｋＡはリンカーであり；かつ
ＲＴはターゲティング部分への結合；コンジュゲーション部分；置換されていてもよいＣ１－６アルキル、置換されていてもよいＣ２－６アルケニル、置換されていてもよいＣ２－６アルキニル、置換されていてもよいＣ６－１４アリール、置換されていてもよいＣ３－８シクロアルキル、置換されていてもよい（Ｃ１－９ヘテロシクリル）－Ｃ１－６－アルキル、置換されていてもよい（Ｃ６－１０アリール）－Ｃ１－６－アルキル、又は置換されていてもよい（Ｃ３－８シクロアルキル）－Ｃ１－６－アルキルである。
所定の実施態様では、ＲＺは、置換されていてもよいＣ１－６アミノアルキル（例えば、－ＮＨ２を含む置換されていてもよいＣ１－６アミノアルキル）である。
［ホスホエステル］
所定の実施態様では、ここに提供される免疫調節性ポリヌクレオチドは、一又は複数のヌクレオシド間ホスホトリエステル及び／又は一又は二の末端ホスホジエステル及び／又はホスホトリエステルを含む。所定の実施態様では、ホスホトリエステルは、ホスフェート、ホスホロチオエート、又はホスホロジチオエートを含み、一又は二の結合価がヌクレオシド及び／又は脱塩基スペーサーで置換され、残りの結合価が、生物可逆性基、非生物可逆性基、ターゲティング部分に結合したリンカー、又はコンジュゲート基に結合される。所定の実施態様では、ヌクレオシド間ホスホトリエステルは、二つのヌクレオシド及び／又は脱塩基スペーサーに結合し、残りの結合価は、生物可逆性基、非生物可逆性基、ターゲティング部分に結合したリンカー、又はコンジュゲート基に結合する。所定の実施態様では、ヌクレオシド間ホスホジエステルは、二つのヌクレオシド及び／又は脱塩基性スペーサーに結合する。所定の実施態様では、末端ホスホジエステルは、免疫調節性ポリヌクレオチドの５’又は３’末端にホスフェート、ホスホロチオエート、又はホスホロジチオエートを含み、残りの二つの結合価のうち一つが、生物可逆性基、非生物可逆性基、ターゲティング部分に結合したリンカー、又はコンジュゲート基に結合される。
［リンカー及びコンジュゲーション部分］
所定の実施態様では、ここに提供される免疫調節性ポリヌクレオチドは、ターゲティング部分と場合によっては一又は複数の補助部分に結合されたリンカーを含む。所定の実施態様では、リンカーは、第一の結合価がヌクレオシド間又は末端ホスフェート、ヌクレオシド間又は末端ホスホロチオエート、ヌクレオシド間又は末端ホスホロジチオエート、脱塩基スペーサー、キャッピング基、又は核酸塩基に結合し、第二の結合価がターゲティング部分に結合している多価基である。所定の実施態様では、リンカーは、それぞれが補助部分に独立して結合している一又は複数の結合価を更に含む。所定の実施態様では（例えば、ターゲティング部分が小分子である場合）、ここで提供される免疫調節性ポリヌクレオチドは、複数のターゲティング部分への複数のリンカーを含む。所定の実施態様では（例えば、ターゲティング部分が抗体又はその抗原結合断片である場合）、ここで提供される免疫調節性ポリヌクレオチドは、ターゲティング部分への一つのリンカーを含む。
所定の実施態様では、ここに提供される免疫調節性ポリヌクレオチドは、コンジュゲート基を含む。コンジュゲート基は、コンジュゲーション反応、例えば、環化付加反応（例えば、双極性環化付加）、アミド化反応、又は芳香族求核置換を受けることができる官能基である。相補的反応性基と反応すると、コンジュゲート基は、ここで提供される免疫調節性ポリヌクレオチドにリンカーを生成する。
所定の実施態様では、ターゲティング部分に結合したリンカーは、ヌクレオシド間ホスホトリエステルの一部である。所定の実施態様では、ターゲティング部分に結合したリンカーは、脱塩基スペーサーの一部である。
所定の実施態様では、リンカー又はコンジュゲート基は、式（ＩＩ）：
Figure 0007536025000027
のものであり、ここで、
Ｚ１は、二価基、三価基、四価基、又は五価基であり、結合価の一つがＱＡ１に結合し、第二の結合価が開いているか、又は式（ＩＩ）がリンカーの場合は、ＲＴに結合し、かつ残りの結合価のそれぞれは、存在する場合、補助部分に独立して結合しており；
Ｚ２は、存在しないか、二価基、三価基、四価基、又は五価基であり、結合価の一つがＱＡ１に結合し、第二の結合価がＱＡ２又はＲＴに結合し、残りの結合価のそれぞれは、存在する場合、補助部分に独立して結合しており；
Ｚ３は、存在しないか、二価基、三価基、四価基、又は五価基であり、結合価の一つがＱＡ２に結合し、第二の結合価がＲＴに結合し、残りの結合価のそれぞれは、存在する場合、補助部分に独立して結合しており；
ＲＴは、存在しないか又はターゲティング部分への結合であり；
ｋは、約０又は約１の整数である。
式（ＩＩ）がリンカーの場合、
ＱＡ１とＱＡ２は、独立して、存在しないか、置換されていてもよいＣ２－１２ヘテロアルキレン（－Ｃ（Ｏ）－Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）－Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）２－Ｎ（Ｈ）－又は－Ｎ（Ｈ）－Ｓ（Ｏ）２－を含むヘテロアルキレン）、置換されていてもよいＣ１－１２チオヘテロシクリレン
Figure 0007536025000028
置換されていてもよいＣ１－１２ヘテロシクリレン
Figure 0007536025000029
シクロブタ－３－エン－１，２－ジオン－３，４－ジイル、ピリド－２－イルヒドラゾン、置換されていてもよいＣ６－１６トリアゾロヘテロシクリレン
Figure 0007536025000030
置換されていてもよいＣ８－１６トリアゾロシクロアルケニレン
Figure 0007536025000031
又はジヒドロピリダジン基
Figure 0007536025000032
であり；かつ
ＲＴは、ターゲティング部分への結合であり；
但し、ＱＡ１とＱＡ２の少なくとも一つが存在する。
式（ＩＩ）がコンジュゲート基の場合、
（ｉ）ＱＡ２が存在せず、ＱＡ１は、コンジュゲーション部分、例えば、置換されていてもよいＣ２－１２アルキニル、置換されていてもよいＮ－保護アミノ、アジド、Ｎ－マレイミド、Ｓ－保護チオール、
Figure 0007536025000033
又はそのＮ－保護型、
Figure 0007536025000034
、
環内炭素－炭素三重結合
Figure 0007536025000035
を含む置換されていてもよいＣ６－１６ヘテロシクリル、１，２，４，５－テトラジン基
Figure 0007536025000036
又は置換されていてもよいＣ８－１６シクロアルキニル
Figure 0007536025000037
－ＮＨＲＮ１、置換されていてもよいＣ４－８ひずみシクロアルケニル（例えば、トランス－シクロオクテニル又はノルボルネニル）、又は－ＣＯＯＲ１２又は－ＣＨＯを含む置換されていてもよいＣ１－１６アルキルであり；かつ
ｋは約０の整数であり；
あるいは
（ｉｉ）ＱＡ１はリンカーに対して定義された通りであり、かつＱＡ２は、コンジュゲーション部分、例えば、置換されていてもよいＣ２－１２アルキニル、置換されていてもよいＮ－保護アミノ、アジド、Ｎ－マレイミド、Ｓ－保護チオール、
Figure 0007536025000038
又はそのＮ－保護型、
Figure 0007536025000039
、
環内炭素－炭素三重結合
Figure 0007536025000040
を含む置換されていてもよいＣ６－１６ヘテロシクリル、１，２，４，５－テトラジン基
Figure 0007536025000041
又は置換されていてもよいＣ８－１６シクロアルキニル
Figure 0007536025000042
－ＮＨＲＮ１、置換されていてもよいＣ４－８ひずみシクロアルケニル（例えば、トランス－シクロオクテニル又はノルボルネニル）、又は－ＣＯＯＲ１２又は－ＣＨＯを含む置換されていてもよいＣ１－１６アルキルであり；かつ
ｋは約１の整数であり；
ここで、
ＲＮ１は、Ｈ、Ｎ－保護基、又は置換されていてもよいＣ１－６アルキルであり；
各Ｒ１２は、独立してＨ又は置換されていてもよいＣ１－６アルキルであり；
Ｒ１３はハロゲン又はＦであり；かつ
Ｚ３とＲＴは存在しない。
所定の実施態様では、Ｚ１は分岐基と二つの二価セグメントを有し、ここで分岐基は二つの二価セグメントのそれぞれに結合し、
ここで、
二価セグメントの一つは、ヌクレオシド間又は末端ホスフェート、ヌクレオシド間又は末端ホスホロチオエート、ヌクレオシド間又は末端ホスホロジチオエート、脱塩基スペーサー、又は核酸塩基に結合し、残りの二価セグメントはＱＡ１に結合し；
分岐基は、置換されていてもよいＣ１－１２アルカン－トリイル又は置換されていてもよいＣ２－１２ヘテロアルカン－トリイルで、二つの結合価が二価セグメントで置換され、残りの結合価が
Figure 0007536025000043
で置換され、ここで、
ｐ１は、約１、約２、又は約３の整数であり；
各ｓ２は、独立して、約０から約１０の整数であり；
各ＱＢ及びＱＤは、独立して、存在しないか、－ＣＯ－、－ＮＨ－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＳＯ２－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＣＯＯ－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、－ＣＨ２－、－ＣＨ２ＮＨ－、－ＮＨＣＨ２－、－ＣＨ２Ｏ－、又は－ＯＣＨ２－であり；
各ＱＣは、独立して、存在しないか、置換されていてもよいＣ１－１２アルキレン、置換されていてもよいＣ２－１２アルケニレン、置換されていてもよいＣ２－１２アルキニレン、置換されていてもよいＣ２－１２ヘテロアルキレン、置換されていてもよいＣ１－９ヘテロシクリレン、又は－Ｐ（Ｚ）（ＯＨ）－（ここで、ＺはＯ又はＳである）であり；
各ＱＧは、独立して、置換されていてもよいＣ１－６アルカン－トリイル、置換されていてもよいＣ１－６アルカン－テトライル、置換されていてもよいＣ２－６ヘテロアルカン－トリイル、又は置換されていてもよいＣ２－６ヘテロアルカン－テトライルであり；かつ
各ＱＨは、独立して、ＲＭ１又は－ＱＧ［（－ＱＢ－ＱＣ－ＱＤ）ｓ２－ＲＭ１］ｐ１であり、ここで、各ＲＭ１は独立して補助部分への結合である。
所定の実施態様では、Ｚ2は分岐基と二つの二価セグメントを有し、ここで分岐基は二つの二価セグメントのそれぞれに結合し、
ここで、
二価セグメントの一つは、ターゲティング部分又はＱＡ２に結合し、残りの二価セグメントはＱＡ１に結合し；
分岐基は、置換されていてもよいＣ１－１２アルカン－トリイル又は置換されていてもよいＣ２－１２ヘテロアルカン－トリイルで、二つの結合価が二価セグメントで置換され、残りの結合価が
Figure 0007536025000044
で置換され、ここで、
ｐ１は、約１、約２、又は約３の整数であり；
各ｓ２は、独立して、約０から約１０の整数であり；
各ＱＢ及びＱＤは、独立して、存在しないか、－ＣＯ－、－ＮＨ－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＳＯ２－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＣＯＯ－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、－ＣＨ２－、－ＣＨ２ＮＨ－、－ＮＨＣＨ２－、－ＣＨ２Ｏ－、又は－ＯＣＨ２－であり；
各ＱＣは、独立して、存在しないか、置換されていてもよいＣ１－１２アルキレン、置換されていてもよいＣ２－１２アルケニレン、置換されていてもよいＣ２－１２アルキニレン、置換されていてもよいＣ２－１２ヘテロアルキレン、置換されていてもよいＣ１－９ヘテロシクリレン、又は－Ｐ（Ｚ）（ＯＨ）－（ここで、ＺはＯ又はＳである）であり；
各ＱＧは、独立して、置換されていてもよいＣ１－６アルカン－トリイル、置換されていてもよいＣ１－６アルカン－テトライル、置換されていてもよいＣ２－６ヘテロアルカン－トリイル、又は置換されていてもよいＣ２－６ヘテロアルカン－テトライルであり；かつ
各ＱＨは、独立して、ＲＭ１又は－ＱＧ［（－ＱＢ－ＱＣ－ＱＤ）ｓ２－ＲＭ１］ｐ１であり、ここで、各ＲＭ１は独立して補助部分への結合である。
所定の実施態様では、Ｚ３は分岐基と二つの二価セグメントを有し、ここで分岐基は二つの二価セグメントのそれぞれに結合し、
ここで、
二価セグメントの一つは、ターゲティング部分に結合し、残りの二価セグメントはＱＡ２に結合し；
分岐基は、置換されていてもよいＣ１－１２アルカン－トリイル又は置換されていてもよいＣ２－１２ヘテロアルカン－トリイルで、二つの結合価が二価セグメントで置換され、残りの結合価が
Figure 0007536025000045
で置換され、ここで、
ｐ１は、約１、約２、又は約３の整数であり；
各ｓ２は、独立して、約０から約１０の整数であり；
各ＱＢ及びＱＤは、独立して、存在しないか、－ＣＯ－、－ＮＨ－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＳＯ２－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＣＯＯ－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、－ＣＨ２－、－ＣＨ２ＮＨ－、－ＮＨＣＨ２－、－ＣＨ２Ｏ－、又は－ＯＣＨ２－であり；
各ＱＣは、独立して、存在しないか、置換されていてもよいＣ１－１２アルキレン、置換されていてもよいＣ２－１２アルケニレン、置換されていてもよいＣ２－１２アルキニレン、置換されていてもよいＣ２－１２ヘテロアルキレン、置換されていてもよいＣ１－９ヘテロシクリレン、又は－Ｐ（Ｚ）（ＯＨ）－（ここで、ＺはＯ又はＳである）であり；
各ＱＧは、独立して、置換されていてもよいＣ１－６アルカン－トリイル、置換されていてもよいＣ１－６アルカン－テトライル、置換されていてもよいＣ２－６ヘテロアルカン－トリイル、又は置換されていてもよいＣ２－６ヘテロアルカン－テトライルであり；かつ
各ＱＨは、独立して、ＲＭ１又は－ＱＧ［（－ＱＢ－ＱＣ－ＱＤ）ｓ２－ＲＭ１］ｐ１であり、ここで、各ＲＭ１は独立して補助部分への結合である。
所定の実施態様では、Ｚ１、Ｚ２、又はＺ３の二価セグメントは－（－ＱＢ－ＱＣ－ＱＤ－）ｓ１－であり、ここで、
各ｓ１は、独立して、約１から約５０又は約１から約３０の整数であり；
各ＱＢ及びＱＤは、独立して、存在しないか、－ＣＯ－、－ＮＨ－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＳＯ２－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＣＯＯ－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、－ＣＨ２－、－ＣＨ２ＮＨ－、－ＮＨＣＨ２－、－ＣＨ２Ｏ－、又は－ＯＣＨ２－であり；かつ
各ＱＣは、独立して、存在しないか、置換されていてもよいＣ１－１２アルキレン、置換されていてもよいＣ２－１２アルケニレン、置換されていてもよいＣ２－１２アルキニレン、置換されていてもよいＣ２－１２ヘテロアルキレン、又は置換されていてもよいＣ１－９ヘテロシクリレンであり；
但し、ＱＢ、ＱＣ、及びＱＤの少なくとも一つが存在する。
所定の実施態様では、少なくとも一つのＱＣが二価セグメントに存在する。所定の実施態様では、ＱＣは、二価セグメントの各モノマー単位に存在する。所定の実施態様では、Ｚ１は、存在するＱＣを介して結合される。所定の実施態様では、ＱＢ及びＱＤの少なくとも一つが、Ｚ１の各モノマー単位に存在する。所定の実施態様では、ＱＢ及びＱＤの少なくとも一つが、Ｚ２の各モノマー単位に存在する。所定の実施態様では、Ｚ１、Ｚ２、及びＺ３の一つだけが、存在する場合、分岐基を含む。
所定の実施態様では、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３の一つ、二つ、又は三つは、独立して
Figure 0007536025000046
であり、ここで、
各ｓ１は、独立して約１から約５０又は約１から約３０の整数であり；
各ＱＢ及びＱＤは、独立して、非存在、－ＣＯ－、－ＮＨ－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＳＯ２－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＣＯＯ－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、－ＣＨ２－、－ＣＨ２ＮＨ－、－ＮＨＣＨ２－、－ＣＨ２Ｏ－。、又は－ＯＣＨ２－であり；
各ＱＣは、独立して、存在しないか、置換されていてもよいＣ１－１２アルキレン、置換されていてもよいＣ２－１２アルケニレン、置換されていてもよいＣ２－１２アルキニレン、置換されていてもよいＣ２－１２ヘテロアルキレン、置換されていてもよいＣ１－９ヘテロシクリレン、又は－Ｐ（Ｚ）（ＯＨ）－（ここでＺはＯ又はＳである）であり；かつ
ＱＥは、存在しないか又は式（ＩＶ）：
Figure 0007536025000047
の分岐基であり、
ここで、
ｐ１は、約１、約２、又は約３の整数であり；
各ｓ２は、独立して約０から約１０の整数であり；
ＱＦは、置換されていてもよいＣ１－１２アルカン－トリイル又は置換されていてもよいＣ２－１２ヘテロアルカン－トリイルであり；かつ
各ＱＧは、独立して、置換されていてもよいＣ１－６アルカン－トリイル、置換されていてもよいＣ１―６アルカン－テトライル、置換されていてもよいＣ２－６ヘテロアルカン－トリイル、又は置換されていてもよいＣ２－６ヘテロアルカン－テトライルであり；
各ＱＨは、独立してＲＭ１又は－ＱＧ［（－ＱＢ－ＱＣ－ＱＤ）ｓ２－ＲＭ１］ｐ１であり、ここで各ＲＭ１は独立して補助部分への結合である。
式（ＩＶ）において、ｐ１が約１である場合、ＱＧは存在せず；かつｐ１が２又は３の場合、少なくとも一つのＱＧが存在する。
所定の実施態様では、Ｚ１は、ヌクレオシド間又は末端ホスフェート、ヌクレオシド間又は末端ホスホロチオエート、ヌクレオシド間又は末端ホスホロジチオエート、脱塩基スペーサー、キャッピング基、又は核酸塩基に、存在するＱＣを介して結合する。
所定の実施態様では、二価セグメントにＱＢ、ＱＣ、ＱＤ、及びＱＥの少なくとも一つが存在する（例えば、少なくとも一つのＱＣが存在し、ＱＥが存在し、又はＱＥが存在しない）。所定の実施態様では、各ＱＢ及びＱＤは、独立して、存在しないか、－ＣＯ－、－ＮＨ－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＳＯ２－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、－ＣＨ２－、－ＣＨ２ＮＨ－、－ＮＨＣＨ２－、－ＣＨ２Ｏ－、又は－ＯＣＨ２－である。
所定の実施態様では、－（－ＱＢ－ＱＣ－ＱＤ－）ｓ１－は組み合わせて基：
Figure 0007536025000048
を形成し、ここで、
ｇ２は、約１から約５０の整数であり；
ｇ１は約１の整数で、ＱＢは－ＮＨＣＯ－、－ＣＯＮＨ－、又は－Ｏ－であり；ｇ１は約０の整数で、ＱＤは－ＮＨＣＯ－であり；かつ
ｇ３は約１の整数で、ＱＢは－ＮＨＣＯ－、－ＣＯＮＨ－、又は－Ｏ－であり；又はｇ３は約０の整数であり、ＱＤは－ＣＯＮＨ－である。
コンジュゲート部分は、補助部分がポリヌクレオチドにコンジュゲートされるまで保護されうる。例えば、保護されるコンジュゲーション部分は、－ＣＯＯＲＰＧＯ又は－ＮＨＲＰＧＮを含み得、ここでＲＰＧＯはＯ－保護基（例えばカルボキシル保護基）であり、ＲＰＧＮはＮ－保護基である。
所定の実施態様では、ＬｉｎｋＡは、
Figure 0007536025000049
であり、ここで、
ＱＡ１とＱＡ２は、それぞれ独立して、存在しないか、置換されていてもよいＣ２－１２ヘテロアルキレン（例えば、－Ｃ（Ｏ）－Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）－Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）２－Ｎ（Ｈ）－、又は－Ｎ（Ｈ）－Ｓ（Ｏ）２－を含むヘテロアルキレン）、置換されていてもよいＣ１－１２チオヘテロシクリレン
Figure 0007536025000050
置換されていてもよいＣ１－１２ヘテロシクリレン
Figure 0007536025000051
シクロブタ－３－エン－１，２－ジオン－３，４－ジイル、ピリド－２－イルヒドラゾン、置換されていてもよいＣ６－１６トリアゾロヘテロシクリレン
Figure 0007536025000052
置換されていてもよいＣ８－１６トリアゾロシクロアルケニレン
Figure 0007536025000053
又はジヒドロピリダジン基
Figure 0007536025000054
であり、但し、ＱＡ１とＱＡ２の少なくとも一つが存在し；
ＲＴは、ターゲティング部分への結合であり；
ＲＰは、ヌクレオシド間架橋基、核酸塩基、キャッピング基、又は脱塩基スペーサーへの結合であり；
各ＱＴは、独立して、－ＣＯ－、－ＮＨ－、－ＮＨ－ＣＨ２－、又は－ＣＯ－ＣＨ２－であり；
各ＱＳは、独立して、置換されていてもよいＣ２－１２アルキレン、置換されていてもよいＣ２－１２アルケニレン、置換されていてもよいＣ２－１２アルキニレン、又は置換されていてもよい（Ｃ６－１０アリール）－Ｃ１－６－アルキレンであり；
各ＲＭは、独立して、Ｈ、補助部分、－（ＣＨ２）ｑ７－ＣＯ－Ｎ（ＲＭ１）２、又は－Ｃ［－ＣＨ２Ｏ－（ＣＨ２）ｑ７－ＣＯ－Ｎ（ＲＭ１）２］３であり、ここで、各ｑ７は独立して約１から約５の整数であり、各ＲＭ１は独立してＨ又は補助部分であり；
各Ｘ１、Ｘ３、及びＸ５は、独立して、存在しないか、－Ｏ－、－ＮＨ－、－ＣＨ２－ＮＨ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－ＣＨ２－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、又は－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－であり；
Ｘ７は、存在しないか、－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＯＨ）－Ｏ－、－ＮＨ－、－ＣＨ２－ＮＨ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－ＣＨ２－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、又は－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－であり；
Ｘ２、Ｘ４、及びＸ６のそれぞれは、独立して、存在しないか、－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、又は－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－であり；
ｘ１と各ｘ５は、独立して、約０又は約１の整数であり；
各ｘ２は、独立して、約０から約５０、約１から約４０、又は約１から約３０の整数であり；
各ｘ３は、独立して、約１から約１１の整数であり；
ｘ４は、約０、約１、又は約２の整数であり；かつ
各ｘ６は、独立して、約０から約１０又は約１から約６の整数であり、但し両方のｘ６の合計が約１２以下である。
所定の実施態様では、ＬｉｎｋＡは、
Figure 0007536025000055
Figure 0007536025000056
Figure 0007536025000057
であり、ここで、
ＱＡ１は、置換されていてもよいＣ２－１２ヘテロアルキレン（例えば、－Ｃ（Ｏ）－Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）－Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）２－Ｎ（Ｈ）－又は－Ｎ（Ｈ）－Ｓ（Ｏ）２－を含むヘテロアルキレン）、置換されていてもよいＣ１－１２チオヘテロシクリレン
Figure 0007536025000058
置換されていてもよいＣ１－１２ヘテロシクリレン
Figure 0007536025000059
シクロブタ－３－エン－１，２－ジオン－３，４－ジイル、又はピリド－２－イルヒドラゾン、置換されていてもよいＣ６－１６トリアゾロヘテロシクリレン
Figure 0007536025000060
置換されていてもよいＣ８－１６トリアゾロシクロアルケニレン
Figure 0007536025000061
又はジヒドロピリダジン基
Figure 0007536025000062
であり；
各ＲＭ１は、独立してＨ又は補助部分であり；
各ＲＴは、独立して、ターゲティング部分への結合であり；
各ＲＰは、独立して、ヌクレオシド間架橋基、核酸塩基、キャッピング基、又は脱塩基スペーサーへの結合であり；
各ＱＴは、独立して、－ＣＯ－、－ＮＨ－、－ＮＨ－ＣＨ２－又は－ＣＯ－ＣＨ２－であり；
各ＱＰは、独立して、－Ｃ（Ｏ）－Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）－Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）２－Ｎ（Ｈ）－、又は－Ｎ（Ｈ）－Ｓ（Ｏ）２－であり；
各ＱＳは、独立して、置換されていてもよいＣ２－１２アルキレン、置換されていてもよいＣ２－１２アルケニレン、置換されていてもよいＣ２－１２アルキニレン、又は置換されていてもよい（Ｃ６－１０アリール）－Ｃ１－６－アルキレンであり；
各ｑ１、ｑ３、及びｑ７は、独立して、約０又は約１の整数であり；
各ｑ２とｑ８は、独立して、約０から約５０、約１から約４０、又は約１から約３０の整数であり；
各ｑ４は、独立して、約０から約１０の整数であり；
各ｑ５及びｑ６は、独立して、約１から約１０又は約１から約６の整数であり；かつ
各ｑ９は、独立して、約１から約１０の整数である。
所定の実施態様では、ＬｉｎｋＡは、
Figure 0007536025000063
Figure 0007536025000064
Figure 0007536025000065
であり、ここで、
各構造式において、
Figure 0007536025000066
各ＲＭ１は、独立してＨ又は補助部分であり；
各ＲＴは、独立して、ターゲティング部分への結合であり；
各ＲＰは、独立して、ヌクレオシド間架橋基、核酸塩基、キャッピング基、又は脱塩基スペーサーへの結合であり；
各ＱＴは、独立して、－ＣＯ－、－ＣＯ－ＣＨ２－、－ＮＨ－、又は－ＮＨ－ＣＨ２－であり；
各ＱＰは、独立して、－Ｃ（Ｏ）－Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）－Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）２－Ｎ（Ｈ）－、又は－Ｎ（Ｈ）－Ｓ（Ｏ）２－であり；
各ＱＳは、独立して、置換されていてもよいＣ２－１２アルキレン、置換されていてもよいＣ２－１２アルケニレン、置換されていてもよいＣ２－１２アルキニレン、又は置換されていてもよい（Ｃ６－１０アリール）－Ｃ１－６－アルキレンであり；
各ｑ１、ｑ３、及びｑ７は、独立して、約０又は約１の整数であり；
各ｑ２とｑ８は、独立して、約０から約５０、約１から約４０、又は約１から約３０の整数であり；
各ｑ４は、独立して、約０から約１０の整数であり；
各ｑ５及びｑ６は、独立して、約１から約１０又は約１から約６の整数であり；かつ
各ｑ９は、独立して、約１から約１０の整数である。
所定の実施態様では、ｑ５は０である。所定の実施態様では、ｑ５は約２から約６の整数である。
所定の実施態様では、コンジュゲート基は、
Figure 0007536025000067
であり、ここで、
ＱＡ１は、独立して、置換されていてもよいＣ２－１２ヘテロアルキレン（例えば、－Ｃ（Ｏ）－Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）－Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）２－Ｎ（Ｈ）－、又は－Ｎ（Ｈ）－Ｓ（Ｏ）２－を含むヘテロアルキレン）、置換されていてもよいＣ１－１２チオヘテロシクリレン
Figure 0007536025000068
置換されていてもよいＣ１－１２ヘテロシクリレン
Figure 0007536025000069
シクロブタ－３－エン－１，２－ジオン－３，４－ジイル、又はピリド－２－イルヒドラゾン、置換されていてもよいＣ６－１６トリアゾロヘテロシクリレン
Figure 0007536025000070
置換されていてもよいＣ８－１６トリアゾロシクロアルケニレン
Figure 0007536025000071
又はジヒドロピリダジン基
Figure 0007536025000072
であり；
ＱＡ２は、置換されていてもよいＣ２－１２アルキニル、置換されていてもよいＮ－保護アミノ、アジド、Ｎ－マレイミド、Ｓ－保護チオール、
Figure 0007536025000073
又はそのＮ－保護型、
Figure 0007536025000074
、
環内炭素－炭素三重結合
Figure 0007536025000075
を含む置換されていてもよいＣ６－１６ヘテロシクリル、１，２，４，５－テトラジン基
Figure 0007536025000076
又は置換されていてもよいＣ８－１６シクロアルキニル
Figure 0007536025000077
－ＮＨＲＮ１、置換されていてもよいＣ４－８ひずみシクロアルケニル（例えば、トランス－シクロオクテニル又はノルボルネニル）、又は－ＣＯＯＲ１２又は－ＣＨＯを含む置換されていてもよいＣ１－１６アルキルであり；
ＲＮ１は、Ｈ、Ｎ－保護基、又は置換されていてもよいＣ１－６アルキルであり；
各Ｒ１２は、独立してＨ又は置換されていてもよいＣ１－６アルキルであり；
Ｒ１３はハロゲン又はＦであり；
ＲＰは、ヌクレオシド間架橋基、核酸塩基、キャッピング基、又は脱塩基スペーサーへの結合であり；
各ＱＳは、独立して、置換されていてもよいＣ２－１２アルキレン、置換されていてもよいＣ２－１２アルケニレン、置換されていてもよいＣ２－１２アルキニレン、又は置換されていてもよい（Ｃ６－１０アリール）－Ｃ１－６－アルキレンであり；
各ＲＭは、独立して、Ｈ、補助部分、－（ＣＨ２）ｑ７－ＣＯ－Ｎ（ＲＭ１）２、又は－Ｃ［－ＣＨ２Ｏ－（ＣＨ２）ｑ７－ＣＯ－Ｎ（ＲＭ１）２］３であり、ここで、各ｑ７は独立して約１から約５の整数であり、各ＲＭ１は独立してＨ又は補助部分であり；
各Ｘ３及びＸ５は、独立して、存在しないか、－Ｏ－、－ＮＨ－、－ＣＨ２－ＮＨ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－ＣＨ２－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、又は－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－であり；
Ｘ７は、存在しないか、－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＯＨ）－Ｏ－、－ＮＨ－、－ＣＨ２－ＮＨ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－ＣＨ２－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、又は－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－であり；
各Ｘ２、Ｘ４、及びＸ６は、独立して、存在しないか、－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、又は－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－であり；
ｘ１と各ｘ５は、独立して、約０又は約１の整数であり；
各ｘ２は、独立して、０から５０（例えば、１から４０又は１から３０）の整数であり；
各ｘ３は、独立して、１から１１の整数であり；
ｘ４は、０、１、又は２の整数であり；かつ
各ｘ６は、独立して、０から１０（例えば、１から６）の整数であり、但し両方のｘ６の合計が１２以下である。
所定の実施態様では、コンジュゲート基は、
Figure 0007536025000078
であり、ここで、
ＱＡ１は、置換されていてもよいＣ２－１２アルキニル、置換されていてもよいＮ－保護アミノ、アジド、Ｎ－マレイミド、Ｓ－保護チオール、
Figure 0007536025000079
又はそのＮ－保護型、
Figure 0007536025000080
、
環内炭素－炭素三重結合
Figure 0007536025000081
を含む置換されていてもよいＣ６－１６ヘテロシクリル、１，２，４，５－テトラジン基
Figure 0007536025000082
又は置換されていてもよいＣ８－１６シクロアルキニル
Figure 0007536025000083
－ＮＨＲＮ１、置換されていてもよいＣ４－８ひずみシクロアルケニル（例えば、トランス－シクロオクテニル又はノルボルネニル）、又は－ＣＯＯＲ１２又は－ＣＨＯを含む置換されていてもよいＣ１－１６アルキルであり；
ＲＮ１は、Ｈ、Ｎ－保護基、又は置換されていてもよいＣ１－６アルキルであり；
各Ｒ１２は、独立してＨ又は置換されていてもよいＣ１－６アルキルであり；
Ｒ１３はハロゲン（例えば、Ｆ）であり；
ＲＰは、ヌクレオシド間架橋基、核酸塩基、キャッピング基、又は脱塩基スペーサーへの結合であり；
各ＱＳは、独立して、置換されていてもよいＣ２－１２アルキレン、置換されていてもよいＣ２－１２アルケニレン、置換されていてもよいＣ２－１２アルキニレン、又は置換されていてもよい（Ｃ６－１０アリール）－Ｃ１－６－アルキレンであり；
Ｘ７は、存在しないか、－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＯＨ）－Ｏ－、－ＣＨ２－ＮＨ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－ＣＨ２－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、又は－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－であり；
Ｘ６は、存在しないか、－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、又は－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－であり；
ｘ１は、独立して０又は１であり；
各ｘ２は、独立して、０から５０、１から４０、又は１から３０の整数であり；
各ｘ３は、独立して、１から１１の整数であり；かつ
ｘ４は、０、１、又は２である。
所定の実施態様では、コンジュゲート基は、
Figure 0007536025000084
であり、ここで、
ＱＡ１は、置換されていてもよいＣ２－１２アルキニル、置換されていてもよいＮ－保護アミノ、アジド、Ｎ－マレイミド、Ｓ－保護チオール、
Figure 0007536025000085
又はそのＮ－保護型、
Figure 0007536025000086
、
環内炭素－炭素三重結合
Figure 0007536025000087
を含む置換されていてもよいＣ６－１６ヘテロシクリル、１，２，４，５－テトラジン基
Figure 0007536025000088
又は置換されていてもよいＣ８－１６シクロアルキニル
Figure 0007536025000089
－ＮＨＲＮ１、置換されていてもよいＣ４－８ひずみシクロアルケニル（例えば、トランス－シクロオクテニル又はノルボルネニル）、又は－ＣＯＯＲ１２又は－ＣＨＯを含む置換されていてもよいＣ１－１６アルキルであり；
ＲＮ１は、Ｈ、Ｎ－保護基、又は置換されていてもよいＣ１－６アルキルであり；
各Ｒ１２は、独立してＨ又は置換されていてもよいＣ１－６アルキルであり；
Ｒ１３はハロゲン（例えば、Ｆ）であり；
ＲＰは、ヌクレオシド間架橋基、核酸塩基、キャッピング基、又は脱塩基スペーサーへの結合であり；
ＱＰは、－Ｃ（Ｏ）－Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）－Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）２－Ｎ（Ｈ）－、又は－Ｎ（Ｈ）－Ｓ（Ｏ）２－であり；
各ＱＳは、独立して、置換されていてもよいＣ２－１２アルキレン、置換されていてもよいＣ２－１２アルケニレン、置換されていてもよいＣ２－１２アルキニレン、又は置換されていてもよい（Ｃ６－１０アリール）－Ｃ１－６－アルキレンであり；
ｑ１とｑ３のそれぞれは、独立して、０又は１であり；
ｑ２は、０から５０、１から４０、又は１から３０の整数であり；
ｑ４は、０から１０の整数であり；かつ
ｑ５は、１から１０又は１から６の整数である。
更にさらなる実施形態では、コンジュゲート基は、
Figure 0007536025000090
であり、ここで、
ＲＰは、ヌクレオシド間架橋基、核酸塩基、キャッピング基、又は脱塩基スペーサーへの結合であり；
ＱＰは、－Ｃ（Ｏ）－Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）－Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）２－Ｎ（Ｈ）－、又は－Ｎ（Ｈ）－Ｓ（Ｏ）２－であり；
各ＱＳは、独立して、置換されていてもよいＣ２－１２アルキレン、置換されていてもよいＣ２－１２アルケニレン、置換されていてもよいＣ２－１２アルキニレン、又は置換されていてもよい（Ｃ６－１０アリール）－Ｃ１－６－アルキレンであり；
ｑ１とｑ３のそれぞれは、独立して、０又は１であり；
ｑ２は、０から５０、１から４０、又は１から３０の整数であり；
ｑ４は、０から１０の整数であり；かつ
ｑ５は、１から１０又は１から６の整数である。
所定の例示的な実施態様では、コンジュゲート基は、
Figure 0007536025000091
Figure 0007536025000092
Figure 0007536025000093
Figure 0007536025000094
Figure 0007536025000095
Figure 0007536025000096
Figure 0007536025000097
Figure 0007536025000098
Figure 0007536025000099
Figure 0007536025000100
であり、ここで、ｑ２は約１から約５０の整数（例えば、約１から約２４又は約１から約８（例えば、約２又は約３）の整数）であり、ｑ４は約０から約１０（例えば、約０、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、又は約８）の整数であり、ｑ１０は約０から約８（例えば、約１、約２、約３、約４、約５、又は約６）の整数であり、ｑ１１は約０又は約１であり、ＺはＯ又はＳであり、かつ各ＲＭは、独立して、Ｈ、補助部分、－（ＣＨ２）ｑ７－ＣＯ－Ｎ（ＲＭ１）２、又は－Ｃ［－ＣＨ２Ｏ－（ＣＨ２）ｑ７－ＣＯ－Ｎ（ＲＭ１）２）３であり、ここで、各ｑ７は、独立して約１から約５の整数であり、各ＲＭ１は独立してＨ又は補助部分である。
所定の実施態様では、金属触媒環化付加によるターゲティング部分へのコンジュゲーションのためのコンジュゲート基は、
Figure 0007536025000101
Figure 0007536025000102
Figure 0007536025000103
であり、ここでｑ２は約１から約５０の整数（例えば、約１から約２４、又は約１から約８（例えば、約２又は約３）の整数）であり、ｑ４は約０から約１０（例えば、約０、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、又は約８）の整数であり、ｑ１０は約０から約８（例えば、約１、約２、約３、約４、約５、又は約６）の整数であり、ｑ１１は約０又は約１であり、かつＺはＯ又はＳである。
所定の実施態様では、金属フリー環化付加によるターゲティング部分へのコンジュゲーションのためのコンジュゲート基は、
Figure 0007536025000104
Figure 0007536025000105
Figure 0007536025000106
Figure 0007536025000107
Figure 0007536025000108
Figure 0007536025000109
Figure 0007536025000110
Figure 0007536025000111
Figure 0007536025000112
であり、ここで、ｑ２は約１から約５０の整数（例えば、約１から約２４又は約１から約８（例えば、約２又は約３）の整数）であり、ｑ４は約０から約１０（例えば、約０、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、又は約８）の整数であり、ｑ１０は約０から約８（例えば、約１、約２、約３、約４、約５、又は約６）の整数であり、ｑ１１は約０又は約１であり、ＺはＯ又はＳであり、かつ各ＲＭは、独立して、Ｈ、補助部分、－（ＣＨ２）ｑ７－ＣＯ－Ｎ（ＲＭ１）２、又は－Ｃ［－ＣＨ２Ｏ－（ＣＨ２）ｑ７－ＣＯ－Ｎ（ＲＭ１）２）３であり、ここで、各ｑ７は、独立して約１から約５の整数であり、各ＲＭ１は独立してＨ又は補助部分である。
所定の実施態様では、アミド形成によるターゲティング部分へのコンジュゲーションのためのコンジュゲート基は、
Figure 0007536025000113
であり、ここで、ｑ２は約０から約５０の整数（例えば、約１から約８（例えば、約２又は約３）の整数）であり、かつｑ１２は約１から約１１の整数（例えば、約１から約５（例えば、約１、約２、約３、約４、又は約５）の整数である。
［生物可逆性基］
所定の実施態様では、生物可逆性基はジスルフィド（－Ｓ－Ｓ－）を含む。所定の実施態様では、生物可逆性基は、生理学的条件下で細胞内で切断可能である。
所定の実施態様では、生物可逆性基は式（ＸＸＩＩ）：
Figure 0007536025000114
のものであり、ここで、
ＬｉｎｋＢは、ホスフェート、ホスホロチオエート、又はホスホロジチオエートに結合したｓｐ３混成炭素原子と、－Ｓ－Ｓ－に結合した炭素原子を含む二価基であり、Ｒ５は置換されていてもよいＣ１－６アルキル、置換されていてもよいＣ６－１０アリール、又は－ＬｉｎｋＣ（－ＲＭ）ｒであり、あるいはＬｉｎｋＢは、ホスフェート、ホスホロチオエート、又はホスホロジチオエートに結合したｓｐ３混成炭素原子と、－Ｓ－Ｓ－に結合した炭素原子を含む三価リンカーであり、ＬｉｎｋＢの第三の結合価は－Ｓ－Ｓ－及びＲ５と組み合わされて置換されていてもよいＣ３－９ヘテロシクリレンを形成し；
ＬｉｎｋＣは多価基であり；
各ＲＭは、独立して、Ｈ、補助部分、又は－ＱＧ［（－ＱＢ－ＱＣ－ＱＤ）ｓ２－ＲＭ１］ｐ１であり、
ここで、
各ＲＭ１は独立してＨ又は補助部分であり、
各ＱＢ及び各ＱＤは、独立して、存在しないか、－ＣＯ－、－ＮＨ－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＳＯ２－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＣＯＯ－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、－ＣＨ２－、－ＣＨ２ＮＨ－、－ＮＨＣＨ２－、－ＣＨ２Ｏ－。、又は－ＯＣＨ２－であり、
各ＱＣは、独立して、存在しないか、置換されていてもよいＣ１－１２アルキレン、置換されていてもよいＣ２－１２アルケニレン、置換されていてもよいＣ２－１２アルキニレン、置換されていてもよいＣ２－１２ヘテロアルキレン、置換されていてもよいＣ１－９ヘテロシクリレンであり、
各ＱＧは、独立して、置換されていてもよいＣ１－６アルカン－トリイル、置換されていてもよいＣ１―６アルカン－テトライル、置換されていてもよいＣ２－６ヘテロアルカン－トリイル、又は置換されていてもよいＣ２－６ヘテロアルカン－テトライルであり、
各ｓ２は、独立して０から１０の整数であり；かつ
ｐ１は２又は３であり；
かつ
ｒは、１から６（例えば、１、２、又は３）の整数である。
所定の実施態様では、ＬｉｎｋＢ及び／又はＲ５は、－Ｓ－Ｓ－に結合したバルキー基を含む。－Ｓ－Ｓに結合したバルキー基を含めると、例えば、ポリヌクレオチド合成中の硫黄－硫黄結合の安定性を高めうる。
更なる実施態様では、ＬｉｎｋＢは、１、２、又は３の基からなり、各基は、独立して、置換されていてもよいＣ１－１２アルキレン、置換されていてもよいＣ２－１２アルケニレン、置換されていてもよいＣ２－１２アルキニレン、置換されていてもよいＣ６－１０アリーレン、置換されていてもよいＣ２－１２ヘテロアルキレン、及び置換されていてもよいＣ１－９ヘテロシクリレンからなる群から選択される。
特定の実施態様では、ＬｉｎｋＢと－Ｓ－Ｓ－は組み合わさって、
Figure 0007536025000115
Figure 0007536025000116
からなる群から選択される構造を形成し、ここで、
各Ｒ６は、独立して、Ｃ２－７アルカノイル；Ｃ１－６アルキル；Ｃ２－６アルケニル；Ｃ２－６アルキニル；Ｃ１－６アルキルスルフィニル；Ｃ６－１０アリール；アミノ；（Ｃ６－１０アリール）－Ｃ１－４－アルキル；Ｃ３－８シクロアルキル；（Ｃ３－８シクロアルキル）－Ｃ１－４－アルキル；Ｃ３－８シクロアルケニル；（Ｃ３－８シクロアルケニル）－Ｃ１－４－アルキル；ハロ；Ｃ１－９ヘテロシクリル；Ｃ１－９ヘテロアリール；（Ｃ１－９ヘテロシクリル）オキシ；（Ｃ１－９ヘテロシクリル）アザ；ヒドロキシ；Ｃ１－６チオアルコキシ；（ＣＨ２）ｑＣＯ２ＲＡ（ここで、ｑは０から４の整数であり、ＲＡはＣ１－６アルキル、Ｃ６－１０アリール、及び（Ｃ６－１０アリール）－Ｃ１－４－アルキルからなる群から選択される）；－（ＣＨ２）ｑＣＯＮＲＢＲＣ（ここで、ｑは０から４の整数であり、ＲＢとＲＣは、水素、Ｃ１－６アルキル、Ｃ６－１０アリール、及び（Ｃ６－１０アリール）－Ｃ１－４－アルキルからなる群から選択される）；－（ＣＨ２）ｑＳＯ２ＲＤ（ここで、ｑは０から４の整数であり、ＲＤはＣ１－６アルキル、Ｃ６－１０アリール、及び（Ｃ６－１０アリール）－Ｃ１－４－アルキルからなる群から選択される）；－（ＣＨ２）ｑＳＯ２ＮＲＥＲＦ（ここで、ｑは０から４の整数であり、ＲＥとＲＦのそれぞれは、独立して、水素、アルキル、アリール、及び（Ｃ６－１０アリール）－Ｃ１－４－アルキルからなる群から選択される）；チオール；アリールオキシ；シクロアルコキシ；アリールアルコキシ；（Ｃ１－９ヘテロシクリル）－Ｃ１－４－アルキル；（Ｃ１－９ヘテロアリール）－Ｃ１－４－アルキル；Ｃ３－１２シリル；シアノ；又は－Ｓ（Ｏ）ＲＨ（ここで、ＲＨは、水素、Ｃ１－Ｃ６アルキル、Ｃ６－１０アリール、及び（Ｃ６－１０アリール）－Ｃ１－４－アルキルからなる群から選択される）であり；あるいは、二つの隣接するＲ６基が、Ｒ６基のそれぞれが結合している原子と共に組み合わさって、Ｃ６アリール、Ｃ２－５ヘテロシクリル、又はＣ２－５ヘテロアリールからなる群から選択される環状基を形成し、ここで、環状基は、Ｃ２－７アルカノイル；Ｃ１－６アルキル；Ｃ２－６アルケニル；Ｃ２－６アルキニル；Ｃ１－６アルキルスルフィニル；Ｃ６－１０アリール；アミノ；（Ｃ６－１０アリール）－Ｃ１－４－アルキル；Ｃ３－８シクロアルキル；（Ｃ３－８シクロアルキル）－Ｃ１－４－アルキル；Ｃ３－８シクロアルケニル；（Ｃ３－８シクロアルケニル）－Ｃ１－４－アルキル；ハロ；Ｃ１－９ヘテロシクリル；Ｃ１－９ヘテロアリール；（Ｃ１－９ヘテロシクリル）オキシ；（Ｃ１－９ヘテロシクリル）アザ；ヒドロキシ；Ｃ１－６チオアルコキシ；－（ＣＨ２）ｑＣＯ２ＲＡ（ここで、ｑは０から４までの整数であり、ＲＡはＣ１－６アルキル、Ｃ６－１０アリール、及び（Ｃ６－１０アリール）－Ｃ１－４－アルキルからなる群から選択される）；－（ＣＨ２）ｑＣＯＮＲＢＲＣ（ここで、ｑは０から４の整数であり、ＲＢとＲＣは、水素、Ｃ１－６アルキル、Ｃ６－１０アリール、及び（Ｃ６－１０アリール）－Ｃ１－４－アルキルからなる群から独立して選択される）；－（ＣＨ２）ｑＳＯ２ＲＤ（ここで、ｑは０から４の整数であり、ＲＤはＣ１－６アルキル、Ｃ６－１０アリール、及び（Ｃ６－１０アリール）－Ｃ１－４－アルキルからなる群から選択される）；－（ＣＨ２）ｑＳＯ２ＮＲＥＲＦ（ここで、ｑは０から４の整数であり、ＲＥとＲＦのそれぞれは、独立して、水素、アルキル、アリール、及び（Ｃ６－１０アリール）－Ｃ１－４－アルキルからなる群から選択される）；チオール；アリールオキシ；シクロアルコキシ；アリールアルコキシ；（Ｃ１－９ヘテロシクリル）－Ｃ１－４－アルキル；（Ｃ１－９ヘテロアリール）－Ｃ１－４－アルキル；Ｃ３－１２シリル；シアノ；及び－Ｓ（Ｏ）ＲＨ（ここで、ＲＨは、水素、Ｃ１－Ｃ６アルキル、Ｃ６－１０アリール、及び（Ｃ６－１０アリール）－Ｃ１－４－アルキルからなる群から選択される）からなる群から選択される１、２、又は３の置換基で置換され；
ｍ１は０、１、又は２であり；かつ
ｍ２は０、１、２、３、又は４であり；
あるいはＬｉｎｋＢ、－Ｓ－Ｓ－及びＲ５は、組み合わされて、
Figure 0007536025000117
を含む基を形成する。
また更なる実施態様では、ＬｉｎｋＣは、０から３の多価モノマー（例えば、置換されていてもよいＣ１－６アルカン－トリイル、置換されていてもよいＣ１－６アルカン－テトライル、又は三価窒素原子）と一又は複数の二価モノマー（例えば、１から４０）を含み得、ここで、各二価モノマーは、独立して、置換されていてもよいＣ１－６アルキレン；置換されていてもよいＣ２－６アルケニレン；置換されていてもよいＣ２－６アルキニレン；置換されていてもよいＣ３－８シクロアルキレン；置換されていてもよいＣ３－８シクロアルケニレン；置換されていてもよいＣ６－１４アリーレン；Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１から４個のヘテロ原子を有する置換されていてもよいＣ１－９ヘテロアリーレン；Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１から４個のヘテロ原子を有する置換されていてもよいＣ１－９ヘテロシクリレン；イミノ；置換されていてもよいＮ；Ｏ；又はＳ（Ｏ）ｍ（ここで、ｍは０、１、又は２である）である。幾つかの実施態様では、各モノマーは、独立して、置換されていてもよいＣ１－６アルキレン；置換されていてもよいＣ３－８シクロアルキレン；置換されていてもよいＣ３－８シクロアルケニレン；置換されていてもよいＣ６－１４アリーレン；Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１から４個のヘテロ原子を有する置換されていてもよいＣ１－９ヘテロアリーレン；Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１から４個のヘテロ原子を有する置換されていてもよいＣ１－９ヘテロシクリレン；イミノ；置換されていてもよいＮ；Ｏ；又はＳ（Ｏ）ｍ（ここで、ｍは０、１、又は２である（例えば、ｍは２である））である。所定の実施態様では、各モノマーは、独立して、置換されていてもよいＣ１－６アルキレン；置換されていてもよいＣ３－８シクロアルキレン；置換されていてもよいＣ３－８シクロアルケニレン；置換されていてもよいＣ６－１４アリーレン；Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１から４個のヘテロ原子を有する置換されていてもよいＣ１－９ヘテロアリーレン；Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１から４個のヘテロ原子を有する置換されていてもよいＣ１－９ヘテロシクリレン；置換されていてもよいＮ；Ｏ；又はＳ（Ｏ）ｍ（ここで、ｍは０、１、又は２である（例えば、ｍは２である））である。補助部分をコンジュゲーション部分又はその反応生成物に連結する非生物可逆性リンカーは、２から５００（例えば、２から３００、２から２００、２から１００、又は２から５０）のそのようなモノマーを含みうる。ＬｉｎｋＣは、一又は複数のポリエチレングリコールを含みうる（例えば、ポリエチレングリコールは、８８Ｄａから１ｋＤａ（例えば、８８Ｄａから５００Ｄａ）の分子量を有しうる。
式（ＩＩａ）の基－ＬｉｎｋＣ（－ＲＭ）ｒの調製に使用することができる化合物は、本明細書及び国際公開第２０１５／１８８１９７号に記載されている。－ＬｉｎｋＣ（－ＲＭ）ｒの非限定的な例は、
Figure 0007536025000118
Figure 0007536025000119
Figure 0007536025000120
を含み、ここで、
Ｒ１４は－Ｓ－Ｓ－への結合であり、
ＲＭは、補助部分又は－ＱＧ［（－ＱＢ－ＱＣ－ＱＤ）ｓ２－ＲＭ１］ｐ１であり、
ここで、
各ＲＭ１は、独立してＨ又は補助部分であり、
各ＱＢと各ＱＤは、独立して、存在しないか、－ＣＯ－、－ＮＨ－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＳＯ２－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＣＯＯ－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、－ＣＨ２－、－ＣＨ２ＮＨ－、－ＮＨＣＨ２－、－ＣＨ２Ｏ－、又は－ＯＣＨ２－であり；
各ＱＣは、独立して、存在しないか、置換されていてもよいＣ１－１２アルキレン、置換されていてもよいＣ２－１２アルケニレン、置換されていてもよいＣ２－１２アルキニレン、置換されていてもよいＣ２－１２ヘテロアルキレン、又は置換されていてもよいＣ１－９ヘテロシクリレンであり；
各ＱＧは、独立して、置換されていてもよいＣ１－６アルカン－トリイル、置換されていてもよいＣ１－６アルカン－テトライル、置換されていてもよいＣ２－６ヘテロアルカン－トリイル、又は置換されていてもよいＣ２－６ヘテロアルカン－テトライルであり；
各ｓ２は、独立して０から１０の整数であり、
ｐ１は２又は３であり；
各ｒ４は、独立して１から６の整数であり；かつ
各ｒ５は、独立して０から１０の整数である。
所定の実施態様では、ＲＭは補助部分である。幾つかの実施態様では、少なくとも一つのＲＭ１は補助部分である。
所定の実施態様では、生物可逆性リンカー基は、
Figure 0007536025000121
であり、ここで、基の一方の末端がポリヌクレオチドに連結され、他方の末端がターゲティング部分（一実施態様では、抗体）に連結される。
［非生物可逆性基］
非生物可逆性基は、血清又はエンドソーム中において生理学的条件下で切断可能な結合（例えば、エステル、チオエステル、又はジスルフィド）を含まない一価の置換基である。非生物可逆性基は、置換されていてもよいＣ２－１６アルキル；置換されていてもよいＣ３－１６アルケニル；置換されていてもよいＣ３－１６アルキニル；置換されていてもよいＣ３－８シクロアルキル；置換されていてもよいＣ３－８シクロアルケニル；置換されていてもよい（Ｃ３－８シクロアルキル）－Ｃ１－４－アルキル；置換されていてもよい（Ｃ３－８シクロアルケニル）－Ｃ１－４－アルキル；置換されていてもよいＣ６－１４アリール；置換されていてもよい（Ｃ６－１４アリール）－Ｃ１－４－アルキル；Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１から４個のヘテロ原子を有する置換されていてもよいＣ１－９ヘテロアリール；Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１から４個のヘテロ原子を有する置換されていてもよい（Ｃ１－９ヘテロアリール）－Ｃ１－４－アルキル；Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１から４個のヘテロ原子を有する置換されていてもよいＣ２－９ヘテロシクリル（ここで、ヘテロシクリルはＳ－Ｓ結合を含まない）；Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１から４個のヘテロ原子を有する置換されていてもよい（Ｃ２－９ヘテロシクリル）－Ｃ１－４－アルキル（ここで、ヘテロシクリルはＳ－Ｓ結合を含まない）；又は式（ＸＸＩＩＩ）：
Figure 0007536025000122
の基であり得、ここで、
Ｌ３は、Ｃ２－６アルキレンであり；
Ｒ７は、置換されていてもよいＣ２－６アルキル；置換されていてもよいＣ６－１４アリール；置換されていてもよい（Ｃ６－１４アリール）－Ｃ１－４－アルキル；置換されていてもよいＣ３－８シクロアルキル；置換されていてもよい（Ｃ３－８シクロアルキル）－Ｃ１－４－アルキル；Ｎ、Ｏ、及びＳからなる群から選択される１から４個のヘテロ原子を有する置換されていてもよいＣ１－９ヘテロアリール；Ｎ、Ｏ、及びＳからなる群から選択される１から４個のヘテロ原子を有する置換されていてもよい（Ｃ１－９ヘテロアリール）－Ｃ１－４－アルキル；Ｎ、Ｏ、及びＳからなる群から選択される１から４個のヘテロ原子を有する置換されていてもよいＣ２－９ヘテロシクリル（ここで、ヘテロシクリルはＳ－Ｓ結合を含まない）；Ｎ、Ｏ、及びＳからなる群から選択される１から４個のヘテロ原子を有する置換されていてもよい（Ｃ２－９ヘテロシクリル）－Ｃ１－４－アルキル（ここで、ヘテロシクリルはＳ－Ｓ結合を含まない）；及び－ＯＨ、Ｃ１－６アルコキシ、又は－ＣＯＯＨで終端されたポリ（エチレングリコール）であり；かつ
Ｒ８は、Ｈ又はＣ１－６アルキルである。
非生物可逆ホスホトリエステルは、
コンジュゲート基、Ｃ２－１６アルキル、
Figure 0007536025000123
又は
Figure 0007536025000124
のアジド含有基質との環化付加反応によって形成される基である置換基で置換されたホスフェート又はホスホロチオエートであり得、ここで、
ｎは、１から６の整数であり；
Ｒ９は、置換されていてもよいＣ６アリール；１又は２個の窒素原子を含む６員環である置換されていてもよいＣ４－５ヘテロアリール；又は１又は２個の窒素原子を含む６員環である置換されていてもよいＣ４－５ヘテロシクリルであり；
Ｒ１０は、Ｈ又はＣ１－６アルキルであり；
Ｒ１１は、ハロゲン、－ＣＯＯＲ１１Ａ、又は－ＣＯＮ（Ｒ１１Ｂ）２であり、ここで、Ｒ１１Ａ及びＲ１１Ｂのそれぞれは、独立して、Ｈ、置換されていてもよいＣ１－６アルキル、置換されていてもよいＣ６－１４アリール、置換されていてもよいＣ１－９ヘテロアリール、又は置換されていてもよいＣ２－９ヘテロシクリルであり；かつ
アジド含有基質は、
Figure 0007536025000125
である。
幾つかの実施態様では、非生物可逆性基は－ＬｉｎｋＤ（－ＲＭ１）ｒ１であり、ここで、ＬｉｎｋＤは多価リンカーであり、各ＲＭ１は独立してＨ又は補助部分であり、ｒ１は１から６の整数である。
場合によっては、－ＬｉｎｋＤ（－ＲＭ１）ｒ１は、式（ＸＸＩＶ）：
Figure 0007536025000126
のものであり、ここで、
ｒ１は１から６の整数であり；
各ｒ２は、独立して、０から５０（例えば、０から３０）の整数であり、ここで、繰り返し単位は同じか又は異なり；
ＱＲは、［－Ｑ４－Ｑ５－Ｑ６］ｒ２－ＱＬ－であり、ここで、ＱＬは、置換されていてもよいＣ２－１２ヘテロアルキレン（例えば、－Ｃ（Ｏ）－Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）－Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）２－Ｎ（Ｈ）－、又は－Ｎ（Ｈ）－Ｓ（Ｏ）２－を含むヘテロアルキレン）、置換されていてもよいＣ１－１２チオヘテロシクリレン
Figure 0007536025000127
置換されていてもよいＣ１－１２ヘテロシクリレン
Figure 0007536025000128
シクロブタ－３－エン－１，２－ジオン－３，４－ジイル、ピリド－２－イルヒドラゾン、置換されていてもよいＣ６－１６トリアゾロヘテロシクリレン
Figure 0007536025000129
置換されていてもよいＣ８－１６トリアゾロシクロアルケニレン
Figure 0007536025000130
又はジヒドロピリダジン基
Figure 0007536025000131
であり；
Ｑ３は、ｒ１が１の場合、直鎖状基（例えば、［－Ｑ４－Ｑ５－Ｑ６］ｒ２－）か、又はｒ１が２から６の整数の場合、分岐基（例えば、［－Ｑ４－Ｑ５－Ｑ６］ｓ－Ｑ８（－Ｑ４－Ｑ５－Ｑ６］ｒ２－（Ｑ８）ｒ３）ｒ４で、ここでｒ３は０又は１、ｒ４は０、１、２、又は３である）であり；各ｒ２は、独立して、０から５０（例えば、０から３０）の整数であり、ここで、繰り返し単位は同じか又は異なり；
各Ｑ４と各Ｑ６は、独立して、存在しないか、－ＣＯ－、－ＮＨ－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＳＯ２－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＣＯＯ－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、－ＣＨ２－、－ＣＨ２ＮＨ－、－ＮＨＣＨ２－、－ＣＨ２Ｏ－、又は－ＯＣＨ２－であり；
各Ｑ５は、独立して、存在しないか、置換されていてもよいＣ１－１２アルキレン、置換されていてもよいＣ２－１２アルケニレン、置換されていてもよいＣ２－１２アルキニレン、置換されていてもよいＣ２－１２ヘテロアルキレン、又は置換されていてもよいＣ１－９ヘテロシクリレンであり；
各Ｑ７は、独立して、存在しないか、－ＣＯ－、－ＮＨ－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＳＯ２－、－ＣＨ２－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨ－ＣＨ（Ｒａ）－Ｃ（Ｏ）－、又は－（ＣＯ）－ＣＨ（Ｒａ）－ＮＨ－であり；
各Ｑ８は、独立して、置換されていてもよいＣ１－６アルカン－トリイル、置換されていてもよいＣ１－６アルカン－テトライル、置換されていてもよいＣ２－６ヘテロアルカン－トリイル、又は置換されていてもよいＣ２－６ヘテロアルカン－テトライルであり；かつ
各Ｒａは、独立して、Ｈ又はアミノ酸側鎖であり；かつ
各ＲＭ１は、独立してＨ又は補助部分への結合である。
式（ＸＸＩＶ）において、Ｑ４、Ｑ５、及びＱ６の少なくとも一つが存在する。式（ＸＸＩＶ）において、ＬｉｎｋＤは、各ｒ３が０の場合は単一の分岐点を含み得、又は少なくとも一つのｒ３が１の場合は複数の分岐点を含みうる。式（ＸＸＩＶ）において、ＱＲは、－Ｑ５－Ｑ４－ＱＬ－であり得、ここで、Ｑ５は置換されていてもよいＣ２－１２ヘテロアルキレン又は置換されていてもよいＣ１－１２アルキレンであり、Ｑ４は－ＣＯ－、－ＮＨ－、又は－Ｏ－である。式（ＸＸＩＶ）において、ＱＬは、
Figure 0007536025000132
でありうる。
式（ＸＸＩＶ）において、Ｑ３は、式［－Ｑ４－Ｑ５－Ｑ６］ｒ２－の直鎖状基であり得、ここで、Ｑ４、Ｑ５、及びＱ６は、式（ＸＸＩＶ）について定義された通りである。あるいは、Ｑ３は、分岐基［－Ｑ４－Ｑ５－Ｑ６］ｒ２－Ｑ８（［－Ｑ４－Ｑ５－Ｑ６］ｒ２－（Ｑ８）ｒ３）ｒ４であり得、ここで、各Ｑ８は、独立して、置換されていてもよいＣ１－６アルカン－トリイル、置換されていてもよいＣ１－６アルカン－テトライル、置換されていてもよいＣ２－６ヘテロアルカン－トリイル、又は置換されていてもよいＣ２－６ヘテロアルカン－テトライルであり；
ここで、
各ｒ２は、独立して、０から５０（例えば、０から３０）の整数であり、ここで、繰り返し単位は同じか又は異なり；
ｒ３は０又は１であり；
ｒ４は０、１、２、又は３であり；
ここで、
ｒ３が０の場合、ＬｉｎｋＤは三価又は四価基であり、かつ
ｒ３が１の場合、ＬｉｎｋＤは四価、五価、又は六価基である。
所定の実施態様では、ｒ３は０である。
幾つかの実施態様では、Ｑ８は、
Figure 0007536025000133
である。
式（Ｉ）の基－ＬｉｎｋＤ（－ＲＭ１）ｐの調製に使用されうる化合物は、本明細書並びに国際公開第２０１５／１８８１９７号に記載されている。
所定の実施態様では、非生物可逆性リンカー基は、
Figure 0007536025000134
であり、ここで、基の一方の末端がポリヌクレオチドに連結され、他方の末端がターゲティング部分（一実施態様では、抗体）に連結される。
［補助部分］
補助部分は、色素又は親水性基又はそれらの組み合わせ（例えば、親水性ポリマー（例えば、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ））、正に帯電したポリマー（例えば、ポリ（エチレンイミン））、又は糖アルコール（例えば、グルシトール））を含む一価の基である。補助部分は、１００Ｄａから２．５ｋＤａ（例えば、３５０Ｄａから２．５ｋＤａ、１００Ｄａから１２００Ｄａ、又は１ｋＤａから２．５ｋＤａ）の理論的分子量を有しうる。
色素は、細胞内での本発明のコンジュゲートの取り込みの視覚化又はコンジュゲートの動きのモニタリングを目的として（例えば、蛍光退色後回復測定（ＦＲＡＰ）を使用して）、ホスホエステル基に含まれうる。当該技術分野で知られている色素は、５’又は３’末端にホスフェート又はホスホロチオエートを介して、又は二つの連続するヌクレオシドを一緒に結合するホスフェート又はホスホロチオエートを介してポリヌクレオチドに連結された補助部分として含まれうる。色素として使用できる有用な構造の非限定的な例には、ＦＩＴＣ、ＲＤ１、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）、ａＣＦＴＭ色素（Biotium, Hayward, CA）、ＢＯＤＩＰＹ（InvitrogenTM 10 of Life Technologies, Carlsbad, CA）、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）（InvitrogenTM of Life Technologies, Carlsbad, CA）、ＤｙＬｉｇｈｔ Ｆｌｕｏｒ（Thermo Scientific Pierce Protein Biology Products, Rockford, IL）、ＡＴＴＯ（ATTO-TEC GmbH, Siegen, Germany）、ＦｌｕｏＰｒｏｂｅ（Ｉnterchim SA, Motlucon, France）、及びＡｂｂｅｒｉｏｒ Ｐｒｏｂｅｓ（Abberior GmbH, Goettingen, Germany）が含まれる。
本発明の免疫調節性ポリヌクレオチド及び本発明のコンジュゲートにおいて補助部分として使用されうる親水性ポリマー及び正に帯電したポリマーは、当該技術分野で知られている。親水性ポリマーの非限定的な例はポリ（エチレングリコール）である。正に帯電したポリマーの非限定的な例はポリ（エチレンイミン）である。
糖アルコールベースの補助部分は、例えば、アミノ末端グルシトール又はグルシトールクラスターでありうる。アミノ末端グルシトール補助部分は、
Figure 0007536025000135
である。
グルシトールクラスターの非限定的な例は、
Figure 0007536025000136
である。
一実施態様において、ここに提供されるのは、式（Ｂ）：
Figure 0007536025000137
の化合物又は立体異性体、二以上のジアステレオマーの混合物、互変異性体、又は二以上の互変異性体の混合物；又はその薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、又は水和物であり；
ここで、
Ｒｘはコンジュゲート基であり；
ＬＮはリンカーであり；
各Ｑは、独立して、ホスホトリエステルを含むポリヌクレオチドであり；かつ
ｅは、１、２、３、又は４の整数である。
所定の実施態様では、式（Ｂ）において、Ｒｘは、
Figure 0007536025000138
である。
所定の実施態様では、式（Ｂ）において、ＬＮは、ポリエチレングリコールを含むリンカーである。
所定の実施態様では、式（Ｂ）において、ＬＮは、
Figure 0007536025000139
であり、ここで、ｄは約０から約５０の範囲の整数である。所定の実施態様では、ｄは約０から約１０の範囲の整数である。所定の実施態様では、ｄは約０から約５の範囲の整数である。所定の実施態様では、ｄは、約０、約１、又は約３の整数である。
所定の実施態様では、式（Ｂ）において、ｅは１の整数である。
所定の実施態様では、式（Ｂ）において、各Ｑは独立して式（Ｄ）：
Figure 0007536025000140
の構造を有し、ここで、ＸＮ、Ｘ３’、Ｘ５’、ＹＰ、ｂ、及びｃは、それぞれここで定義されている通りである。
［ターゲティング部分］
ここに提供されるコンジュゲートにおいて使用されるターゲティング部分は、コンジュゲート型ペイロードポリヌクレオチドの標的送達のための体内の標的特異的細胞及び組織に対するものである。所定の実施態様では、ここに提供されるコンジュゲートによって標的とされる細胞は、ナチュラルキラー細胞である。所定の実施態様では、ここに提供されるコンジュゲートによって標的とされる細胞は、骨髄系細胞である。所定の実施態様では、ここに提供されるコンジュゲートによって標的とされる細胞は、好中球である。所定の実施態様では、ここに提供されるコンジュゲートによって標的とされる細胞は、単球である。所定の実施態様では、ここに提供されるコンジュゲートによって標的とされる細胞は、マクロファージである。所定の実施態様では、ここに提供されるコンジュゲートによって標的とされる細胞は、樹状細胞（ＤＣ）である。所定の実施態様では、ここに提供されるコンジュゲートによって標的とされる細胞は、肥満細胞である。所定の実施態様では、ここに提供されるコンジュゲートによって標的とされる細胞は、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）である。所定の実施態様では、ここに提供されるコンジュゲートによって標的とされる細胞は、骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である。
所定の実施態様では、ターゲティング部分は抗原結合部分である。所定の実施態様では、ターゲティング部分は抗体又はその抗原結合断片である。
所定の実施態様では、ここに提供されるコンジュゲート中の抗原結合部分は、抗体又はその抗原結合断片（例えば、Ｆ（ａｂ）２又はＦａｂ）又はその操作誘導体（例えば、Ｆｃａｂ又は融合タンパク質（例えば、ｓｃＦｖ））である。所定の実施態様では、ここに提供されるコンジュゲート中の抗原結合部分は、ヒト又はキメラ（例えば、ヒト化）抗体である。
抗原結合部分は、抗原結合部分によって認識される表面抗原を有する細胞を標的とする。
所定の実施態様では、ターゲティング部分は、ＮＫ細胞によって発現される抗原に結合する抗体である。ＮＫ細胞によって発現され、ここで提供されるコンジュゲートによって標的とされうる例示的抗原には、限定されないが、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１６／３２、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ５６（ＮＣＡＭ）、ＣＤ５７、ＣＤ６９、ＣＤ９４、ＣＤ１２２、ＣＤ１５８（Ｋｉｒ）、ＣＤ１６１（ＮＫ－１．１）、ＣＤ２４４（２Ｂ４）、ＣＤ３１４（ＮＫＧ２Ｄ）、ＣＤ３１９（ＣＲＡＣＣ）、ＣＤ３２８（Ｓｉｇｌｅｃ－７）、ＣＤ３３５（ＮＫｐ４６）、Ｌｙ４９、Ｌｙ１０８、Ｖα２４－Ｊα１８ＴＣＲ（ｉＮＫＴ）、グラニュリシン、グランザイム、パーフォリン、ＳＩＲＰ－α、ＬＡＩＲ１、ＳＩＧＬＥＣ－３（ＣＤ３３）、ＳＩＧＬＥＣ－７、ＳＩＧＬＥＣ－９、ＬＩＲ１（ＩＬＴ２、ＬＩＬＲＢ１）、ＮＫＲ－Ｐ１Ａ（ＫＬＲＢ１）、ＣＤ９４－ＮＫＧ２Ａ、ＫＬＲＧ１、ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ、ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＫＩＲ２ＤＳ２、ＫＩＲ２ＤＳ３、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＫＩＲ２ＤＳ５、ＫＩＲ３ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＣＤ９４－ＮＫＧ２Ｃ／Ｅ、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１６（ＦｃγＲＩＩＩＡ）、ＮＫｐ４６（ＮＣＲ１）、ＮＫｐ３０（ＮＣＲ３）、ＮＫｐ４４（ＮＣＲ２）、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＣＲＴＡＭ、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＮＴＢ－Ａ（ＳＬＡＭＦ６）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１，ＣＬＥＣ５Ｃ）、ＳＬＡＭＦ７（ＣＲＡＣＣ，ＣＳ１，ＣＤ３１９）、及びＣＤ２４４（２Ｂ４，ＳＬＡＭＦ４）が含まれる。
所定の実施態様では、ターゲティング部分は、骨髄系細胞によって発現される抗原に結合する抗体である。骨髄系細胞によって発現され、ここで提供されるコンジュゲートによって標的とされうる例示的抗原には、限定されないが、シグレック－３、シグレック７、シグレック９、シグレック１５、ＣＤ２００、ＣＤ２００Ｒ、ＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ２、ＬＩＬＲＢ３、ＬＩＬＲＢ４、ＬＩＬＲＢ５、Ｍ－ＣＳＦ、ＣＳＦ－１Ｒ、ＧＭ－ＣＳＦ Ｒ、ＩＬ４Ｒ、アルギナーゼ、ＩＤＯ、ＴＤＯ、ＭＰＯ、ＥＰ２、ＣＯＸ－２、ＣＣＲ２、ＣＣＲ－７、ＣＸＣＲ１、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ７、ｃ－Ｋｉｔ、ＣＤ２４４、Ｌ－セレクチン／ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ６８、ＣＤ１６３、ＣＤ２０４、ＤＥＣ２０５、ＩＬ－１Ｒ、ＣＤ３１、ＳＩＲＰα、ＳＩＲＰβ、ＰＤ－Ｌ１、ＣＥＡＣＡＭ－８／ＣＤ６６ｂ、ＣＤ１０３、ＢＤＣＡ－１、ＢＤＣＡ２、ＢＤＣＡ－４、ＣＤ１２３、及びＩＬＴ－７が含まれる。
所定の実施態様では、ターゲティング部分は、ＭＤＳＣによって発現される抗原に結合する抗体である。ＭＤＳＣによって発現され、ここで提供されるコンジュゲートによって標的とされうる例示的抗原には、限定されないが、シグレック－３、シグレック７、シグレック９、シグレック１５、ＣＤ２００、ＣＤ２００Ｒ、ＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ２、ＬＩＬＲＢ３、ＬＩＬＲＢ４、ＬＩＬＲＢ５、Ｍ－ＣＳＦ、ＣＳＦ－１Ｒ、ＧＭ－ＣＳＦ Ｒ、ＩＬ４Ｒ、アルギナーゼ、ＩＤＯ、ＴＤＯ、ＭＰＯ、ＥＰ２、ＣＯＸ－２、ＣＣＲ２、ＣＣＲ－７、ＣＸＣＲ１、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ７、ｃ－Ｋｉｔ、ＣＤ２４４、Ｌ－セレクチン／ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ６８、ＣＤ１６３、ＣＤ２０４、ＤＥＣ２０５、ＩＬ－１Ｒ、ＣＤ３１、ＳＩＲＰα、ＳＩＲＰβ、ＰＤ－Ｌ１、ＣＥＡＣＡＭ－８／ＣＤ６６ｂ、ＣＤ１０３、ＢＤＣＡ－１、ＢＤＣＡ２、ＢＤＣＡ－４、ＣＤ１２３、及びＩＬＴ－７が含まれる。
所定の実施態様では、ターゲティング部分は、ＴＡＭによって発現される抗原に結合する抗体である。ＴＡＭによって発現され、ここで提供されるコンジュゲートによって標的とされうる例示的抗原には、限定されないが、シグレック－３、シグレック７、シグレック９、シグレック１５、ＣＤ２００、ＣＤ２００Ｒ、ＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ２、ＬＩＬＲＢ３、ＬＩＬＲＢ４、ＬＩＬＲＢ５、Ｍ－ＣＳＦ、ＣＳＦ－１Ｒ、ＧＭ－ＣＳＦ Ｒ、ＩＬ４Ｒ、アルギナーゼ、ＩＤＯ、ＴＤＯ、ＭＰＯ、ＥＰ２、ＣＯＸ－２、ＣＣＲ２、ＣＣＲ－７、ＣＸＣＲ１、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ７、ｃ－Ｋｉｔ、ＣＤ２４４、Ｌ－セレクチン／ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ６８、ＣＤ１６３、ＣＤ２０４、ＤＥＣ２０５、ＩＬ－１Ｒ、ＣＤ３１、ＳＩＲＰα、ＳＩＲＰβ、ＰＤ－Ｌ１、ＣＥＡＣＡＭ－８／ＣＤ６６ｂ、ＣＤ１０３、ＢＤＣＡ－１、ＢＤＣＡ２、ＢＤＣＡ－４、ＣＤ１２３、及びＩＬＴ－７が含まれる。
所定の実施態様では、ターゲティング部分は、ＮＫ細胞に特異的な抗原に結合する抗体である。所定の実施態様では、ＮＫ細胞は抗ＣＤ５６抗体によって標的とされる。所定の実施態様では、ターゲティング部分は抗ＣＤ５６抗体である。所定の実施態様では、抗体はモノクローナル抗ＣＤ５６抗体である。所定の実施態様では、抗体はマウス抗ＣＤ５６抗体である。所定の実施態様では、マウス抗ＣＤ５６抗体は、クローン５．１Ｈ１１（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，カタログ番号：３６２５０２）である。所定の実施態様では、マウス抗ＣＤ５６抗体は、クローンＭＥＭ－１８８（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，３０４６０１）である。所定の実施態様では、マウス抗ＣＤ５６抗体は、クローンＱＡ１７Ａ１６（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，カタログ番号：３９２４０２）である。所定の実施態様では、抗体は、ヒト化抗ＣＤ５６抗体である。所定の実施態様では、抗体はヒト抗ＣＤ５６抗体である。所定の実施態様では、抗体はヒト化抗ＣＤ５６抗体である
所定の実施態様では、ターゲティング部分は、骨髄系細胞に特異的な抗原に結合する抗体である。所定の実施態様では、骨髄系細胞は、抗ＳＩＲＰα抗体によって標的とされる。所定の実施態様では、ターゲティング部分は抗ＳＩＲＰα抗体である。所定の実施態様では、抗体はモノクローナル抗ＳＩＲＰα抗体である。所定の実施態様では、抗体は、マウス抗ＳＩＲＰα抗体である。所定の実施態様では、抗体は、ヒト化抗ＳＩＲＰα抗体である。所定の実施態様では、抗体はヒト抗ＳＩＲＰα抗体である。
所定の実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体（１１９又は１１９生殖系列変異体）は、ＶＨ及びＶＬを含むヒト抗体であり、ここで、ＶＨは、以下に列挙される配列から独立して選択され：
Figure 0007536025000141
かつＶＬは、以下に列挙される配列から独立して選択される：
Figure 0007536025000142
所定の実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体（１１９又は１１９生殖系列変異体）は、ＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、ＨＶＲ－Ｈ３、ＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、及びＨＶＲ－Ｌ３を含むヒト抗体であり、これらのそれぞれは以下の表から独立して選択される。
Figure 0007536025000143
１１９ヒト抗体はＣＤ４７遮断薬であり、これは、その開示がその全体において出典明示によりここに援用される国際公開第２０１８／０５７６６９Ａ１号の表Ｐに記載されている。
所定の実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体（１３５又は１３５生殖系列変異体）は、ＶＨ及びＶＬを含むヒト抗体であり、ここで、ＶＨは以下に列挙される配列から独立して選択され：
Figure 0007536025000144
かつＶＬは、以下に列挙される配列から独立して選択される：
Figure 0007536025000145
所定の実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体（１３５又は１３５生殖系列変異体）は、ＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、ＨＶＲ－Ｈ３、ＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、及びＨＶＲ－Ｌ３を含むヒト抗体であり、これらのそれぞれは以下の表から独立して選択される。
Figure 0007536025000146
１３５ヒト抗体はＣＤ４７遮断薬であり、これは、その開示がその全体において出典明示によりここに援用される国際公開第２０１８／０５７６６９Ａ１号の表Ｐに記載されている。
所定の実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体（ＡＢ２１、ＡＢ２１生殖系列変異体又はＡＢ２１のヒト化型）は、ＶＨ及びＶＬを含む抗体であり、ここで、ＶＨは以下に列挙される配列から独立して選択され：
Figure 0007536025000147
かつＶＬは、以下に列挙される配列から独立して選択される：
Figure 0007536025000148
所定の実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体（ＡＢ２１、ＡＢ２１生殖系列変異体又はＡＢ２１のヒト化型）は、ＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、ＨＶＲ－Ｈ３、ＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、及びＨＶＲ－Ｌ３を含むヒト化抗体であり、これらのそれぞれは以下の表から独立して選択される。
Figure 0007536025000149
ＡＢ２１ヒト化抗体はＣＤ４７遮断薬であり、これは、その開示がその全体において出典明示によりここに援用される国際公開第２０１８／０５７６６９Ａ１号の表Ｐに記載されている。
所定の実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体（１３６又は１３６生殖系列変異体）は、ＶＨ及びＶＬを含むヒト抗体であり、ここで、ＶＨは以下に列挙される配列から独立して選択され：
Figure 0007536025000150
かつＶＬは、以下に列挙される配列から独立して選択される：
Figure 0007536025000151
所定の実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体（１３６又は１３６生殖系列変異体）は、ＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、ＨＶＲ－Ｈ３、ＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、及びＨＶＲ－Ｌ３を含むヒト抗体であり、これらのそれぞれは以下の表から独立して選択される。
Figure 0007536025000152
１３６ヒト抗体は非遮断薬であり、これは、その開示がその全体において出典明示によりここに援用される国際公開第２０１８／０５７６６９Ａ１号の表Ｐに記載されている。
所定の実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体（２１８又はヒト化２１８）は、ＶＨ及びＶＬを含む抗体であり、ＶＨは、ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＲＰＧＥＳＬＴＬＳＣＴＡＳＧＦＴＦＴＳＳＴＭＮＷＶＲＱＡＰＧＥＧＬＤＷＶＳＳＩＳＴＳＧＶＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＡＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＲＬＦＳＬＲＡＤＤＴＡＩＹＹＣＡＴＤＴＦＤＨＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：５８４）の配列を有しており；かつＶＬは、以下に列挙される配列から独立して選択される：
Figure 0007536025000153
２１８ヒト抗体は非遮断薬であり、これは、その開示がその全体において出典明示によりここに援用される国際公開第２０１８／０５７６６９Ａ１号の表Ｐに記載されている。
幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：４９８－５００からなる群から選択される配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号：５０１の配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び配列番号：５０２の配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；及び／又は配列番号：５０３の配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号：５０４の配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び配列番号：５０５の配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：４９８の配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号：５０１の配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び配列番号：５０２の配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；及び／又は配列番号：５０３の配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号：５０４の配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び配列番号：５０５の配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：４９９の配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号：５０１の配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び配列番号：５０２の配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；及び／又は配列番号：５０３の配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号：５０４の配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び配列番号：５０５の配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５００の配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号：５０１の配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び配列番号：５０２の配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；及び／又は配列番号：５０３の配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号：５０４の配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び配列番号：５０５の配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：４９０－４９５からなる群から選択される配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：４９６又は４９７の配列を含むＶＬドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：４９０の配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：４９６の配列を含むＶＬドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：４９１の配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：４９６の配列を含むＶＬドメインを含む。 幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：４９２の配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：４９６の配列を含むＶＬドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：４９３の配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：４９６の配列を含むＶＬドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：４９４の配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：４９６の配列を含むＶＬドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：４９５の配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：４９６の配列を含むＶＬドメインを含む。 幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：４９０の配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：４９７の配列を含むＶＬドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：４９１の配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：４９７の配列を含むＶＬドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：４９１の配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：４９７の配列を含むＶＬドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：４９２の配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：４９７の配列を含むＶＬドメインを含む。 幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：４９３の配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：４９７の配列を含むＶＬドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：４９４の配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：４９７の配列を含むＶＬドメインを含む。 幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：４９５の配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：４９７の配列を含むＶＬドメインを含む。
幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５１２－５１４からなる群から選択される配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号：５１５の配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び配列番号：５１６の配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；及び／又は配列番号：５１７の配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号：５１８の配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び配列番号：５１９の配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５１２の配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号：５１５の配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び配列番号：５１６の配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；及び／又は配列番号：５１７の配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号：５１８の配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び配列番号：５１９の配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５１３の配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号：５１５の配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び配列番号：５１６の配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；及び／又は配列番号：５１７の配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号：５１８の配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び配列番号：５１９の配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５１４の配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号：５１５の配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び配列番号：５１６の配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；及び／又は配列番号：５１７の配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号：５１８の配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び配列番号：５１９の配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５０６－５０９からなる群から選択される配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：５１０又は５１１の配列を含むＶＬドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５０６の配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：５１０の配列を含むＶＬドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５０７の配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：５１０の配列を含むＶＬドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５０８の配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：５１０の配列を含むＶＬドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５０９の配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：５１０の配列を含むＶＬドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５０６の配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：５１１の配列を含むＶＬドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５０７の配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：５１１の配列を含むＶＬドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５０８の配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：５１１の配列を含むＶＬドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５０９の配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：５１１の配列を含むＶＬドメインを含む。
幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号５３３－５３５からなる群から選択される配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号：５３６の配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び配列番号：５３７の配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；及び／又は配列番号５３８－５４２からなる群から選択される配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号：５４３の配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び配列番号：５４４－５４６からなる群から選択される配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５３４の配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号：５３６の配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び配列番号：５３７の配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；及び／又は配列番号：５３９の配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号：５４３の配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び配列番号：５４５の配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５３３の配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号：５３６の配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び配列番号：５３７の配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；及び／又は配列番号：５４２の配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号：５４３の配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び配列番号：５４６の配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：４９８の配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号：５０１の配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び配列番号：５０２の配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；及び／又は配列番号：５０３の配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号：５０４の配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び配列番号：５０５の配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５５４の配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号：５５７の配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び配列番号：５５８の配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；及び／又は配列番号：５５９の配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号：５６０の配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び配列番号：５６１の配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５２０－５２３からなる群から選択される配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：５２５－５３２からなる群から選択される配列を含むＶＬドメインを含む。
幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５５４－５５６からなる群から選択される配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号：５５７の配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び配列番号：５５８の配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；及び／又は配列番号：５５９の配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号：５６０の配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び配列番号：５６１の配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５５４の配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号：５５７の配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び配列番号：５５８の配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；及び／又は配列番号：５５９の配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号：５６０の配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び配列番号：５６１の配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５５５の配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号：５５７の配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び配列番号：５５８の配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；及び／又は配列番号：５５９の配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号：５６０の配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び配列番号：５６１の配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５５６の配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号：５５７の配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び配列番号：５５８の配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；及び／又は配列番号：５５９の配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号：５６０の配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び配列番号：５６１の配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５４７－５５０からなる群から選択される配列を含むＶＨドメイン、及び／又は配列番号：５５１－５５３からなる群から選択される配列を含むＶＬドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５４７の配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：５５１の配列を含むＶＬドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５４８の配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：５５１の配列を含むＶＬドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５４９の配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：５５１の配列を含むＶＬドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５５０の配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：５５１の配列を含むＶＬドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５４７の配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：５５２の配列を含むＶＬドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５４８の配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：５５２の配列を含むＶＬドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５４９の配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：５５２の配列を含むＶＬドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５５０の配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：５５２の配列を含むＶＬドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５４７の配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：５５３の配列を含むＶＬドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５４８の配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：５５３の配列を含むＶＬドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５４９の配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：５５３の配列を含むＶＬドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５５０の配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：５５３の配列を含むＶＬドメインを含む。
幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５８４の配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：５８５、５６２、及び５６３からなる群から選択される配列を含むＶＬドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５８４の配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：５８５の配列を含むＶＬドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５８４の配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：５６２の配列を含むＶＬドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５８４の配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：５６３の配列を含むＶＬドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５８４の配列の３つのＨＶＲを含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：５８５の配列の３つのＨＶＲを含むＶＬドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５８４の配列の３つのＨＶＲを含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：５６２の配列の３つのＨＶＲを含むＶＬドメインを含む。幾つかの実施態様では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号：５８４の配列の３つのＨＶＲを含むＶＨドメイン及び／又は配列番号：５６３の配列の３つのＨＶＲを含むＶＬドメインを含む。
追加の抗ＳＩＲＰ抗体は、米国特許出願公開第２０１８／００３７６５２Ａ１号；国際公開第２０１６／２０５０４２Ａ１号；国際公開第２０１７／１７８６５３Ａ２号；国際公開第２０１８／１０７０５８Ａ１号；及び国際公開第２０１８／０５７６６９Ａ１号に開示され；その各々の開示は、その全体について出典明示によりここに援用される。
幾つかの実施態様では、ここに提供される抗体は、ヒトＦｃ領域、例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４ Ｆｃ領域を含む。
幾つかの実施態様では、ここで提供される抗体のＦｃ領域は、安定性、グリコシル化又は他の修飾のパターン、エフェクター細胞機能、薬物動態等々のような一又は複数の抗体特性に影響を与える一又は複数の変異を含む。幾つかの実施態様では、ここで提供される抗体は、グリコシル化が減少しているか又は最小である。幾つかの実施態様では、ここで提供される抗体は、エフェクター機能が除去され又は低減している。例示的なＦｃ変異には、限定されないが、（ｉ）ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａ；（ｉｉ）ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域変異Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ及びＮ２９７Ａ；及び（ｉｉｉ）ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域変異Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、及びＮ２９７Ａ（ＥＵ番号付け）が含まれる。幾つかの実施態様では、ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域は、Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓ変異を含む。幾つかの実施態様では、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域は、Ｓ２８８Ｐ変異を含む。幾つかの実施態様では、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域は、Ｓ２８８Ｐ及びＬ２３５Ｅ変異を含む。
幾つかの実施態様では、ここで提供される抗体は、ＥＵ番号付けに従って、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３７Ａ変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む。幾つかの実施態様では、ここで提供される抗体は、ＥＵ番号付けに従って、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａ変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む。幾つかの実施態様では、ここで提供される抗体は、ＥＵ番号付けに従って、Ｎ２９７Ａ変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む。幾つかの実施態様では、ここで提供される抗体は、ＥＵ番号付けに従って、Ｄ２６５Ａ変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む。幾つかの実施態様では、ここで提供される抗体は、ＥＵ番号付けに従って、Ｄ２６５Ａ及びＮ２９７Ａ変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む。幾つかの実施態様では、ここで提供される抗体は、ＥＵ番号付けに従って、Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓ変異を含むヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域を含む。幾つかの実施態様では、ここで提供される抗体は、ＥＵ番号付けに従って、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａ変異を含むヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域を含む。幾つかの実施態様では、ここで提供される抗体は、ＥＵ番号付けに従って、Ｎ２９７Ａ変異を含むヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域を含む。幾つかの実施態様では、ここで提供される抗体は、ＥＵ番号付けに従って、Ｓ２２８Ｐ変異を含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域を含む。幾つかの実施態様では、ここで提供される抗体は、ＥＵ番号付けに従って、Ｓ２２８Ｐ及びＤ２６５Ａ変異を含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域を含む。幾つかの実施態様では、ここで提供される抗体は、ＥＵ番号付けに従って、Ｓ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅ変異を含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域を含む。幾つかの実施態様では、ここで提供される抗体は、ＥＵ番号付けに従って、Ｓ２２８Ｐ及びＮ２９７Ａ変異を含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域を含む。幾つかの実施態様では、ここで提供される抗体は、ＥＵ番号付けに従って、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、及びＮ２９７Ａ変異を含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域を含む。幾つかの実施態様では、ここで提供される抗体は、配列番号：５６４－５７８からなる群から選択される配列を含むＦｃ領域を含む。
幾つかの実施態様では、ここで提供される抗体は、ヒトカッパ軽鎖定常ドメイン、例えば、配列番号：５７９の配列を含むＦｃ領域を含む。幾つかの実施態様では、ここで提供される抗体は、ヒトラムダ軽鎖定常ドメイン、例えば、ＩＧＬＣ１又はＩＧＬＣ２（それぞれ、配列番号：５８０及び５８１に示される例示的なＦｃ領域配列など）を含む。
細胞表面抗原を標的とする抗体は、免疫細胞上のＦｃ受容体（ＦｃＲ）結合に関連する免疫刺激及びエフェクター機能を誘発しうる。ＩｇＧ（ガンマ受容体）、ＩｇＥ（イータ受容体）、ＩｇＡ（アルファ受容体）、ＩｇＭ（ミュー受容体）を含む、特定クラスの抗体に特異的な多くのＦｃ受容体がある。細胞表面上のＦｃ受容体へのＦｃ領域の結合は、抗体被覆粒子の食作用（抗体依存性細胞媒介性食作用、又はＡＤＣＰ）、免疫複合体のクリアランス、キラー細胞による抗体被覆細胞の溶解（抗体依存性細胞傷害、又はＡＤＣＣ）及び、炎症性メディエーターの放出、経胎盤移行、及び免疫グロブリン産生の制御を含む、多くの生物学的反応をトリガーしうる。加えて、抗体への補体Ｃ１成分の結合は、補体系を活性化させうる。補体活性化は、細胞病原体の溶解に重要でありうる。しかし、補体活性化はまた炎症反応を刺激し得、自己免疫性過敏症又は他の免疫障害にも関与する場合がある。所定のＦｃ受容体に結合する能力が低下し又は除去された変異体Ｆｃ領域は、局所細胞又は組織を損傷し又は破壊することなく、リガンド機能を標的にし、活性化し、又は中和することによって作用する治療用抗体及びＦｃ融合ポリペプチドコンストラクトの開発に役立つ。
幾つかの実施態様では、Ｆｃドメインモノマーは、第二及び第三の抗体定常ドメイン（例えば、ＣＨ２及びＣＨ３）を含むポリペプチド鎖を指す。幾つかの実施態様では、Ｆｃドメインモノマーはまたヒンジドメインを含む。幾つかの実施態様では、Ｆｃドメインモノマーは、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、及びＩｇＤを含む任意の免疫グロブリン抗体アイソタイプのものである。加えて、幾つかの実施態様では、Ｆｃドメインモノマーは、任意のＩｇＧサブタイプ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ２ｃ、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４）のものである。幾つかの実施態様では、Ｆｃドメインモノマーは、ＦｃドメインとＦｃ受容体の間の相互作用を変化させる野生型Ｆｃドメインモノマー配列からの最大１０個の変化（例えば、１－１０、１－８、１－６、１－４アミノ酸置換、付加又は挿入、欠失、あるいはそれらの組み合わせ）を含む。
幾つかの実施態様では、免疫グロブリンのＦｃドメインモノマー又はＦｃドメインモノマーの断片は、別のＦｃドメインモノマーとＦｃドメインを形成することができる。幾つかの実施態様では、免疫グロブリンのＦｃドメインモノマー又はＦｃドメインモノマーの断片は、別のＦｃドメインモノマーとＦｃドメインを形成することができない。幾つかの実施態様では、Ｆｃドメインモノマー又はＦｃドメインの断片は、ポリペプチドの血清半減期を増加させるために、本開示のポリペプチドに融合される。幾つかの実施態様では、本開示のポリペプチドに融合されたＦｃドメインモノマー又はＦｃドメインモノマーの断片は、第二のＦｃドメインモノマーと二量体化して、Ｆｃ受容体に結合するＦｃドメインを形成するか、又は代わりに、ＦｃドメインモノマーがＦｃ受容体に結合する。幾つかの実施態様では、ポリペプチドの血清半減期を増加させるためにポリペプチドに融合されたＦｃドメイン又はＦｃドメインの断片は、如何なる免疫系関連応答も誘導しない。Ｆｃドメインは、ＣＨ３抗体定常ドメイン間の相互作用によって二量体化される二つのＦｃドメインモノマーを含む。
野生型Ｆｃドメインは、Ｆｃ受容体、例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩｂ、及びＦｃγＲＩＶに結合する最小構造を形成する。幾つかの実施態様では、本開示の抗体におけるＦｃドメインは、一又は複数のアミノ酸置換、付加又は挿入、欠失、又は抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の減少、補体依存性細胞溶解（ＣＤＣ）の減少、抗体依存性細胞媒介性食作用（ＡＤＣＰ）の減少、又はそれらの任意の組み合わせなどのエフェクター機能の低下を生じるそれらの任意の組み合わせを含む。例えば、本開示の抗体は、ヒトＦｃ受容体への結合の低下（例えば、最小の結合又は結合の欠如）及び補体タンパク質Ｃ１ｑへの結合の低下（例えば、最小の結合又は結合の欠如）；ヒトＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、ＦｃγＲＩＩＩＢ、ＦｃγＲＩＩＩＢ、又はそれらの任意の組み合わせ、及びＣ１ｑへの結合の低下（例えば、最小の結合又は結合の欠如）；ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、ＡＤＣＰ、又はそれらの任意の組み合わせなどの抗体依存性エフェクター機能の変化又は低下等々を示しうる。例示的な変異には、限定されないが、Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｇ２３６、Ｇ２３７、Ｄ２６５、Ｄ２７０、Ｎ２９７、Ｅ３１８、Ｋ３２０、Ｋ３２２、Ａ３２７、Ａ３３０、Ｐ３３１、又はＰ３２９（ＫａｂａｔのＥＵインデックスによる番号付け（Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5版 Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)）での一又は複数のアミノ酸置換が含まれる。
幾つかの実施態様では、本開示の抗体では、ＣＤ１６ａ、ＣＤ３２ａ、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３２ｃ、及びＣＤ６４ Ｆｃγ受容体への結合が低下し又は除去されている。幾つかの実施態様では、ここに記載の非天然Ｆｃ領域を有する抗体は、野生型Ｆｃ領域を含む抗体と比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又はそれ以上のＣ１ｑ結合の低下を示す。幾つかの実施態様では、ここに記載の非天然Ｆｃ領域を有する抗体は、野生型Ｆｃ領域を含む抗体と比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又はそれ以上のＣＤＣの低下を示す。
幾つかの実施態様では、ここでのＦｃ変異体は、野生型配列と比較して、グリコシル化が最小か又はグリコシル化が減少している。 幾つかの実施態様では、脱グリコシル化は、Ｎ２９７Ａの変異によって、又はＮ２９７をＮではない任意のアミノ酸に変異させることによって達成される。
幾つかの実施態様では、抗体ＩｇＧ定常領域の変異体（例えば、Ｆｃ変異体）は、Ｆｃγ受容体に特異的に結合する能力が低下しているか、又は食作用を誘導する能力が低下している。幾つかの実施態様では、抗体ＩｇＧ定常領域の変異体（例えば、Ｆｃ変異体）は、Ｆｃγ受容体に特異的に結合する能力が低下しており、かつ食作用を誘導する能力が低下している。例えば、幾つかの実施態様では、Ｆｃドメインは、「死んだ」Ｆｃドメインに典型的な、エフェクター機能を欠くように変異される。例えば、幾つかの実施態様では、Ｆｃドメインは、ＦｃドメインとＦｃγ受容体との間の相互作用を最小化することが知られている特定のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施態様では、Ｆｃドメインモノマーは、ＩｇＧ１抗体に由来し、一又は複数のアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａ（Ｋａｂａｔ等，１９９１によるＥＵ番号付けシステムに従って指定）を含む。幾つかの実施態様では、Ｆｃドメインモノマーは、ＩｇＧ１抗体に由来し、一又は複数のアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＧ２３７Ａ（Ｋａｂａｔ等，１９９１によるＥＵ番号付けシステムに従って指定）を含む。幾つかの実施態様では、Ｆｃドメインモノマーは、ＩｇＧ１抗体に由来し、Ｎ２９７Ａ（Ｋａｂａｔ等，１９９１によるＥＵ番号付けシステムに従って指定）を含む。幾つかの実施態様では、Ｆｃドメインモノマーは、ＩｇＧ１抗体に由来し、Ｄ２６５Ａ（Ｋａｂａｔ等，１９９１によるＥＵ番号付けシステムに従って指定）を含む。幾つかの実施態様では、Ｆｃドメインモノマーは、ＩｇＧ１抗体に由来し、一又は複数のアミノ酸置換Ｄ２６５Ａ及びＮ２９７Ａ（Ｋａｂａｔ等，１９９１によるＥＵ番号付けシステムに従って指定）を含む。幾つかの実施態様では、一又は複数の追加の変異がそのようなＩｇＧ１ Ｆｃ変異体に含まれる。ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ変異体に対するそのような追加の変異の非限定的な例には、Ｅ３１８Ａ及びＫ３２２Ａが含まれる。場合によっては、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ変異体は、野生型ヒトＩｇＧ１配列と比較して、合計で最大１２、１１、１０、９、８、７、６、５、又は４又はそれ以下の変異を有する。幾つかの実施態様では、一又は複数の追加の欠失が、そのようなＩｇＧ１ Ｆｃ変異体に含まれる。例えば、幾つかの実施態様では、Ｆｃ ＩｇＧ１重鎖定常領域のＣ末端リジンが、例えば、ポリペプチドが細菌又は哺乳動物細胞で産生されるときにポリペプチドの均一性を高めるために欠失される。場合によっては、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ変異体は、野生型ヒトＩｇＧ１配列と比較して、合計で最大１２、１１、１０、９、８、７、６、５、又は４又はそれ以下の欠失を有している。
幾つかの実施態様では、Ｆｃドメインモノマーは、ＩｇＧ２抗体に由来し、アミノ酸置換Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、又はＡ３３０ＳとＰ３３１Ｓの両方を含む。前述のアミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ等（１９９１）に従って定義される。アミノ酸残基のＫａｂａｔ番号付けは、所与の抗体について、「標準的な」Ｋａｂａｔ番号付けされた配列との抗体の配列相同領域のアラインメントによって、決定することができる。幾つかの実施態様では、Ｆｃ変異体は、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ及びＮ２９７Ａアミノ酸置換（Ｋａｂａｔ等（１９９１）によるＥＵ番号付けシステムに従って指定）の一又は複数を含むヒトＩｇＧ２ Ｆｃ配列を含む。幾つかの実施態様では、Ｆｃ変異体は、Ｄ２６５Ａ及びＮ２９７Ａアミノ酸置換（Ｋａｂａｔ等（１９９１）によるＥＵ番号付けシステムに従って指定）の一又は複数を含むヒトＩｇＧ２ Ｆｃ配列を含む。幾つかの実施態様では、Ｆｃ変異体は、Ｎ２９７Ａアミノ酸置換（Ｋａｂａｔ等（１９９１）によるＥＵ番号付けシステムに従って指定）を含むヒトＩｇＧ２ Ｆｃ配列を含む。幾つかの実施態様では、一又は複数の追加の変異がそのようなＩｇＧ２ Ｆｃ変異体に含まれる。ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ変異体に対するそのような追加の変異の非限定的な例には、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｖ３０９Ｌ、及びＨ２６８Ａ（Ｋａｂａｔ等（１９９１）によるＥＵ番号付けシステムに従って指定）が含まれる。場合によっては、ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ変異体は、野生型ヒトＩｇＧ２配列と比較して、合計で最大１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３又はそれ以下の変異を有する。幾つかの実施態様では、一又は複数の追加の欠失が、そのようなＩｇＧ２ Ｆｃ変異体に含まれる。
Ｆｃ変異体がＩｇＧ４ Ｆｃ変異体である場合、幾つかの実施態様では、そのようなＦｃ変異体は、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、又はｄｅｌＧ２３６変異（Ｋａｂａｔ等（１９９１）に従って指定）を含む。他の例では、そのようなＦｃ変異体は、Ｓ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅ変異（Ｋａｂａｔ等（１９９１）に従って指定）を含む。場合によっては、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ変異体は、野生型ヒトＩｇＧ４配列と比較して、合計で最大１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、又は１の変異を有している。
幾つかの実施態様では、Ｆｃ変異体は、野生型ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域と比較して、対象のＦｃ受容体への結合の低下を示す。幾つかの実施態様では、Ｆｃ変異体は、野生型ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域と比較して、対象のＦｃ受容体への結合の除去を示す。幾つかの実施態様では、Ｆｃ変異体は、野生型ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域と比較して、食作用の低下を示す。幾つかの実施態様では、Ｆｃ変異体は、野生型ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域と比較して、食作用の除去を示す。
ここではＡＤＣＣとも呼ばれる抗体依存性細胞媒介性細胞傷害は、ある種の細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞及び好中球）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）に結合した分泌Ｉｇがこれら細胞傷害性エフェクター細胞を抗原保有標的細胞に特異的に結合させ、続いて標的細胞を死滅させる細胞傷害性の形態を指す。ここではＡＤＣＰとも呼ばれる抗原依存性細胞媒介性食作用は、ある種の食細胞（例えば、マクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）に結合した分泌Ｉｇがこれら食細胞エフェクター細胞を抗原保有標的細胞に特異的に結合させ、続いて標的細胞を貪食し消化する細胞傷害性の形態を指す。標的細胞の表面に向けられたリガンド特異的高親和性ＩｇＧ抗体は、細胞傷害性又は食細胞を刺激することができ、そのような死滅に使用されうる。幾つかの実施態様では、ここに記載のＦｃ変異体を含むポリペプチドコンストラクトは、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチドコンストラクトと比較して、低下したＡＤＣＣ又はＡＤＣＰを示す。幾つかの実施態様では、ここに記載のＦｃ変異体を含むポリペプチドコンストラクトは、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチドコンストラクトと比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又はそれ以上のＡＤＣＣ又はＡＤＣＰの低下を示す。幾つかの実施態様では、ここに記載されるようなＦｃ変異体を含む抗体は、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチドコンストラクトと比較して、除去されたＡＤＣＣ又はＡＤＣＰを示す。
ここではＣＤＣとも呼ばれる補体指向性細胞傷害は、抗体Ｆｃに結合する補体成分Ｃ１ｑによって補体カスケードが活性化される細胞傷害の一形態を指す。幾つかの実施態様では、ここに記載のＦｃ変異体を含むポリペプチドコンストラクトは、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチドコンストラクトと比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又はそれ以上のＣ１ｑ結合の低下を示す。場合によっては、ここに記載のＦｃ変異体を含むポリペプチドコンストラクトは、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチドコンストラクトと比較して、ＣＤＣの低下を示す。幾つかの実施態様では、ここに記載のＦｃ変異体を含むポリペプチドコンストラクトは、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチドコンストラクトと比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又はそれ以上のＣＤＣの低下を示す。場合によっては、ここに記載のＦｃ変異体を含む抗体は、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチドコンストラクトと比較して、無視できる程度のＣＤＣを示す。
ここでのＦｃ変異体は、野生型ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域と比較して、Ｆｃγ受容体への結合の低下を示すものを含む。例えば、幾つかの実施態様では、Ｆｃ変異体は、野生型ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域によって示されるＦｃγ受容体への結合よりも少ないＦｃγ受容体への結合を示す。場合によっては、Ｆｃ変異体は、Ｆｃγ受容体への結合を１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％（エフェクター機能の完全な除去）の係数で低下させる。幾つかの実施態様では、結合の低下は、任意の一又は複数のＦｃγ受容体、例えば、ＣＤ１６ａ、ＣＤ３２ａ、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３２ｃ、又はＣＤ６４に対するものである。
幾つかの例では、ここに開示されるＦｃ変異体は、その野生型ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域と比較して、食作用の低下を示す。そのようなＦｃ変異体は、その野生型ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域と比較して食作用の低下を示し、ここで、食作用活性の低下は、例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の係数のものである。場合によっては、Ｆｃ変異体は、その野生型ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域と比較して食作用の除去を示す。
幾つかの実施態様では、ここに開示されるＦｃ変異体は、一又は複数の融合パートナーに結合される。場合によっては、融合パートナーは、本開示の細胞傷害性剤などの治療薬部分である。場合によっては、融合パートナーは、発現タンパク質の標的化、精製、スクリーニング、ディスプレイなどを可能にするように選択される。幾つかの実施態様では、融合パートナーはまたＦｃ受容体への結合の程度又は食作用の低下の程度いに影響を与える。
幾つかの実施態様では、ターゲティング部分は、二重特異性抗体である。所定の実施態様では、二重特異性抗体は、ヒトＣＤ５６ポリペプチドの細胞外ドメインに結合する第一抗原結合ドメインと、がん細胞によって発現される抗原に結合する第二抗原結合ドメインとを含む。所定の実施態様では、二重特異性抗体は、ヒトＳＩＲＰ－αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する第一抗原結合ドメインと、がん細胞によって発現される抗原に結合する第二抗原結合ドメインとを含む。所定の実施態様では、がん細胞によって発現される抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＳ１／ＳＬＡＭＦ７、Ｔｒｏｐ－２、５Ｔ４、ＥｐｈＡ４、ＢＣＭＡ、ムチン１、ムチン１６、ＰＤ－Ｌ１、ＰＴＫ７、ＳＴＥＲＡＰ１、エンドセリンＢ受容体、メソセリン、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＮＰＰ３、ＳＬＣ４４Ａ４、ＧＮＭＢ、ネクチン４、ＮａＰｉ２ｂ、ＬＩＶ－１Ａ、グアニリルシクラーゼＣ、ＤＬＬ３、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、インテグリンαＶβ３、インテグリンα５β１、ＭＥＴ、ＩＧＦ１Ｒ、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＲＡＮＫＬ、ＦＡＰ、テネイシン、Ｌｅｙ、ＥｐＣＡＭ、ＣＥＡ、ｇｐＡ３３、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ７２、ムチン、ＣＡＩＸ、ＥＰＨＡ３、葉酸受容体α、ＧＤ２、ＧＤ３、及びＮＹ－ＥＳＯ－１／ＬＡＧＥ由来のペプチドを含むＭＨＣ／ペプチド複合体、ＳＳＸ－２、ＭＡＧＥファミリータンパク質、ＭＡＧＥ－Ａ３、ｇｐ１００／ｐｍｅｌ１７、メラン－Ａ／ＭＡＲＴ－１、ｇｐ７５／ＴＲＰ１、チロシナーゼ、ＴＲＰ２、ＣＥＡ、ＰＳＡ、ＴＡＧ－７２、未成熟ラミニン受容体、ＭＯＫ／ＲＡＧＥ－１、ＷＴ－１、ＳＡＰ－１、ＢＩＮＧ－４、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ１、ＰＲＡＭＥ、サバイビン、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＣＤＫ４、ＣＭＬ６６、ＭＡＲＴ－２、ｐ５３、Ｒａｓ、β－カテニン、ＴＧＦ－βＲＩＩ、ＨＰＶ Ｅ６、又はＨＰＶＥ７からなる群から選択される。所定の実施態様では、抗体は、ヒトＣＤ５６ポリペプチドの細胞外ドメインに結合する第一抗原結合ドメインと、免疫細胞によって発現される抗原に結合する第二抗原結合ドメインとを含む。所定の実施態様では、抗体は、ヒトＳＩＲＰ－αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する第一抗原結合ドメインと、免疫細胞によって発現される抗原に結合する第二抗原結合ドメインとを含む。幾つかの実施態様では、免疫細胞によって発現される抗原は、ＢＤＣＡ２、ＢＤＣＡ４、ＩＬＴ７、ＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ２、ＬＩＬＲＢ３、ＬＩＬＲＢ４、ＣＳＦ－１Ｒ、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ１６３、ＣＤ２０６、ＤＥＣ２０５、ＣＤ４７、ＣＤ１２３、ＩＤＯ、ＴＤＯ、４１ＢＢ、ＣＴＬＡ４、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＴＩＭ－３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ－３、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、ＣＣＲ４、ＣＤ２５、ＣＤ１０３、ＫＩｒｇ１、Ｎｒｐ１、ＣＤ２７８、Ｇｐｒ８３、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１５４、ＣＤ１６０、ＰＶＲＩＧ、ＤＮＡＭ、及びＩＣＯＳからなる群から選択される。
所定の実施態様では、抗体は、以下の表から選択される定常領域配列を含む。
Figure 0007536025000154
Figure 0007536025000155
Figure 0007536025000156
所定の実施態様では、ターゲティング部分はポリペプチドである。所定の実施態様では、ターゲティング部分は、ＲＧＤペプチド、狂犬病ウイルス糖タンパク質（ＲＶＧ）、又はＤＣ３ペプチドである。所定の実施態様では、ターゲティング部分はアプタマーである。所定の実施態様では、ターゲティング部分は、小分子を含む。所定の実施態様では、ターゲティング部分は、葉酸、マンノース、又はＰＳＭＡリガンドを含む。
［コンジュゲート］
一実施態様では、ここに提供されるコンジュゲートは、ターゲティング部分と一又は複数の免疫調節性ポリヌクレオチド、所定の実施態様では、約１から約６又は約１から約４、約１、又は約２の免疫調節性ポリヌクレオチドを含む。所定の実施態様では、コンジュゲートは、ターゲティング部分を免疫調節性ポリヌクレオチドに共有的に連結させるリンカーを含む。所定の実施態様では、リンカーは、免疫調節性ポリヌクレオチドにおいて、核酸塩基、脱塩基スペーサー、ホスフェート、ホスホロチオエート、又はホスロジチオエートに結合する。
一実施態様では、ここに提供されるのは、式（Ｃ）：
Figure 0007536025000157
のコンジュゲート又はその立体異性体、二以上のジアステレオマーの混合物、互変異性体、又は二以上の互変異性体の混合物；又はその薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、又は水和物であり；ここでＡｂはターゲティング部分であり；ｆは１、２、３、又は４の整数であり；かつＬＮ、Ｑ、及びｅはそれぞれここで定義された通りである。
所定の実施態様では、式（Ｃ）において、Ａｂは抗体である。所定の実施態様では、式（Ｃ）において、Ａｂはモノクローナル抗体である。
所定の実施態様では、式（Ｃ）において、ｆは１又は２の整数である。所定の実施態様では、式（Ｃ）において、ｆは１の整数である。
所定の実施態様では、式（Ｃ）において、ｅとｆの両方がそれぞれ１の整数である。
一実施態様では、ＣｐＧ抗体コンジュゲートは、約１から約２０、約１から約１０、約１から約８、約１から約４、又は約１から約２の範囲のＤＡＲを有する。別の実施態様では、ＣｐＧ抗体コンジュゲートは、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、又は約８のＤＡＲを有する。
［コンジュゲートの調製］
［コンジュゲーション］
ターゲティング部分を免疫調節性ポリヌクレオチドにコンジュゲートさせるのに有用な反応は、限定されないが、トリアゾール部分を形成するアジドとアルキン系コンジュゲート基（例えば、環内炭素－炭素三重結合を含む置換されていてもよいＣ６－１６ヘテロシクリレン又は置換されていてもよいＣ８－１６シクロアルキニル）の間のヒュスゲン環化付加（金属触媒又は金属不含）；求ジエン体とジエン／ヘテロジエンの間のディールス・アルダー反応；エン反応などのペリ環状反応経由の結合の形成；アミド又はチオアミド結合の形成；スルホンアミド結合の形成（例えば、アジド化合物による）；アルコール又はフェノールのアルキル化（例えば、ウィリアムソンのアルキル化）、オキシム、ヒドラゾン、又はセミカルバジド基を形成する縮合反応；求核試薬（例えば、アミン及びチオール）による共役付加反応；ジスルフィド結合の形成；及びカルボニル（例えば、ペンタフルオロフェニル（ＰＦＰ）エステル又はテトラフルオロフェニル（ＴＦＰ）エステルなどの活性カルボン酸エステル）又は求電子性アレーン（例えば、オリゴフッ素化アレーンでのＳＮＡｒ、フルオロベンゾニトリル基、又はフルオロニトロベンゼン基）での求核置換（例えば、アミン、チオール、又はヒドロキシル求核試薬）を含み、当該分野において知られている。
所定の実施態様では、コンジュゲーション反応は双極性環化付加であり、コンジュゲーション部分は、アジド、環内炭素－炭素三重結合を含む置換されていてもよいＣ６－１６ヘテロシクリレン、又は置換されていてもよいＣ８－１６シクロアルキニルを含む。相補的反応性基とコンジュゲート基は、それらの相互相補性のために選択される。例えば、アジドがコンジュゲート基と相補的反応性基の一方に使用され、アルキンがコンジュゲート基と相補的反応性基の他方に使用される。
［免疫調節性ポリヌクレオチドの調製］
ここに提供される免疫調節性ポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチドの化学合成の技術分野で知られている方法に従って、例えばヌクレオシドホスホラミダイトから調製することができる。ホスホラミダイトは、ホスホラミダイトのリン原子に共有的に連結されたコンジュゲート基を含みうる。
［ターゲティング部分部の調製］
ターゲティング部分は、免疫調節性ポリヌクレオチド中のコンジュゲート基とターゲティング部分に結合した相補的反応性基との間に結合を形成することによって、免疫調節性ポリヌクレオチドにコンジュゲートさせることができる。所定の実施態様では、ターゲティング部分は、相補的反応性基（例えば、抗体又は抗原結合断片又はその操作された誘導体におけるＱタグ（例えば、ＬＬＱＧＧ（配列番号：５８２）又はＧＧＧＬＬＱＧＧ（配列番号：５８３））を本質的に有する。所定の実施態様では、ターゲティング部分は、（例えば、相補的反応性基をＱタグに結合させることによって）相補的反応性基を含むように改変される。そのような相補的反応性基をターゲティング部分に導入する方法は、当該技術分野で知られている。
所定の実施態様では、相補的反応性基は、置換されていてもよいＣ２－１２アルキニル、置換されていてもよいＮ－保護アミノ、アジド、Ｎ－マレイミド、Ｓ－保護チオール、
Figure 0007536025000158
又はそのＮ－保護部分、
Figure 0007536025000159
環内炭素－炭素三重結合
Figure 0007536025000160
を含む置換されていてもよいＣ６－１６ヘテロキシクリル、１，２，４，５－テトラジン基
Figure 0007536025000161
置換されていてもよいＣ８－１６シクロアルキニル
Figure 0007536025000162
－ＮＨＲＮ１、置換されていてもよいＣ４－８ひずみシクロアルケニル（例えば、トランス－シクロオクテニル又はノルボルネニル）、又は－ＣＯＯＲ１２又は－ＣＨＯを含む置換されていてもよいＣ１－１６アルキルであり；
ＲＮ１は、Ｈ、Ｎ－保護基、又は置換されていてもよいＣ１－６アルキルであり；
ここで、
各Ｒ１２は、独立してＨ、置換されていてもよいＣ１－６アルキル、又はＯ－保護基（例えば、カルボキシル保護基）であり；かつ
Ｒ１３はハロゲン（例えばＦ）である。
所定の実施態様では、相補的反応性基は、コンジュゲーション反応まで保護される。例えば、保護される相補的反応性基は、－ＣＯＯＲＰＧＯ又は－ＮＨＲＰＧＮを含むことができ、ここで、ＲＰＧＯはＯ－保護基（例えばカルボキシル保護基）であり、ＲＰＧＮはＮ－保護基である。
所定の実施態様では、相補的反応性基は－Ｚ３－ＱＡ３であり、
ここで、
Ｚ３は、二価、三価、四価、又は五価の基であり、ここで、結合価の一つがＱＡ３で置換され、結合価の一つが開いており、残りの結合価の各々の、存在する場合は、独立して補助部分で置換され；
ＱＡ３は、置換されていてもよいＣ２－１２アルキニル、置換されていてもよいＮ－保護アミノ、アジド、Ｎ－マレミミド、Ｓ－保護チオール、
Figure 0007536025000163
又はそのＮ－保護型、
Figure 0007536025000164
環内炭素－炭素三重結合
Figure 0007536025000165
を含む置換されていてもよいＣ６－１６ヘテロキシクリル、１，２，４，５－テトラジン基
Figure 0007536025000166
置換されていてもよいＣ８－１６シクロアルキニル
Figure 0007536025000167
－ＮＨＲＮ１、置換されていてもよいＣ４－８ひずみシクロアルケニル（例えば、トランス－シクロオクテニル又はノルボルネニル）、又は－ＣＯＯＲ１２又は－ＣＨＯを含む置換されていてもよいＣ１－１６アルキルであり；
ここで、
ＲＮ１は、Ｈ、Ｎ－保護基、又は置換されていてもよいＣ１－６アルキルであり；
各Ｒ１２は、独立してＨ、置換されていてもよいＣ１－６アルキル、Ｏ－保護基、又はカルボキシル保護基であり；
Ｒ１３はハロゲン又はＦである。
所定の実施態様では、Ｚ３は分岐基と二つの二価セグメントを含み、ここで分岐基は２つの二価セグメントのそれぞれに結合し、二価セグメントの一つが開放結合価を有し、残りの二価セグメントはＱＡ３に結合し；分岐基は、置換されていてもよいＣ１－１２アルカン－トリイル、置換されていてもよいＣ１－１２アルカン－テトライル、置換されていてもよいＣ２－１２ヘテロアルカン－トリイル、及び置換されていてもよいＣ２－１２ヘテロアルカン－テトライルからなる群から独立して選択される一又は二のモノマーを含み、分岐基の二つの結合価は二つの二価セグメントに結合し、かつ残りの結合価の各々は独立して補助部分で置換される。
所定の実施態様では、Ｚ３中の二価セグメントは、－（－ＱＢ－ＱＣ－ＱＤ－）ｓ１－であり、ここで、
ｓ１は、約１から約５０又は約１から約３０の整数であり；
各ＱＢ及びＱＤは、独立して非存在、－ＣＯ－、－ＮＨ－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＳＯ２－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＣＯＯ－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、－ＣＨ２－、－ＣＨ２ＮＨ－、－ＮＨＣＨ２－、－ＣＨ２Ｏ－、又は－ＯＣＨ２－であり；かつ
各ＱＣは、独立して非存在、置換されていてもよいＣ１－１２アルキレン、置換されていてもよいＣ２－１２アルケニレン、置換されていてもよいＣ２－１２アルキニレン、置換されていてもよいＣ２－１２ヘテロアルキレン、又は置換されていてもよいＣ１－９ヘテロシクリレンである。
所定の実施態様では、ＱＢとＱＤの少なくとも一つが、Ｚ３の各モノマー単位中に存在する。
所定の実施態様では、－Ｚ３－ＱＡ３は、
Figure 0007536025000168
であり、ここで、
各ｓ１は、独立して約１から約５０又は約１から約３０の整数であり；
ＱＡ３はここに記載されている通りであり；
各ＱＢ及びＱＤは、独立して非存在、－ＣＯ－、－ＮＨ－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＳＯ２－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＣＯＯ－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、－ＣＨ２－、－ＣＨ２ＮＨ－、－ＮＨＣＨ２－、－ＣＨ２Ｏ－、又は－ＯＣＨ２－であり；かつ
各ＱＣは、独立して非存在、置換されていてもよいＣ１－１２アルキレン、置換されていてもよいＣ２－１２アルケニレン、置換されていてもよいＣ２－１２アルキニレン、置換されていてもよいＣ２－１２ヘテロアルキレン、又は置換されていてもよいＣ１－９ヘテロシクリレンであり；
ＱＥは、非存在か又はここに記載される式（ＩＶ）の分岐基である。
所定の実施態様では、－（－ＱＢ－ＱＣ－ＱＤ－）ｓ１－は、基：
Figure 0007536025000169
であり、ここで、
（ｉ）ｇ２は、約１から約５０、約１から約４０、又は約１から約３０の整数であり；
（ｉｉ）ｇ１は１であり、ＱＢは、－ＮＨＣＯ－、－ＣＯＮＨ－、又は－Ｏ－であり；ｇ１は０であり、ＱＤは－ＮＨＣＯ－であり；かつ
（ｉｉｉ）ｇ３は１であり、ＱＢは、－ＮＨＣＯ－、－ＣＯＮＨ－、又は－Ｏ－であり；又はｇ３は０であり、ＱＤは－ＣＯＮＨ－である。
所定の実施態様では、相補的反応性基は、
Figure 0007536025000170
であり、ここで、
ＱＡ２は、非存在、置換されていてもよいＣ２－１２ヘテロアルキレン（例えば、－Ｃ（Ｏ）－Ｎ（Ｈ））－、－Ｎ（Ｈ）－Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）２－Ｎ（Ｈ）－、又は－Ｎ（Ｈ）－Ｓ（Ｏ）２－を含むヘテロアルキレン）、置換されていてもよいＣ１－１２チオヘテロシクリルレン
Figure 0007536025000171
置換されていてもよいＣ１－１２ヘテロシクリルレン
Figure 0007536025000172
シクロブタ－３－エン－１，２－ジオン－３，４－ジイル、ピリド－２－イルヒドラゾン、置換されていてもよいＣ６－１６トリアゾロヘテロシクリレン
Figure 0007536025000173
置換されていてもよいＣ８－１６トリアゾロシクロアルケニレン
Figure 0007536025000174
又はジヒドロピリダジン基
Figure 0007536025000175
であり；
各ＱＡ３は、独立して置換されていてもよいＣ２－１２アルキニル、置換されていてもよいＮ－保護アミノ、アジド、Ｎ－マレイミド、Ｓ－保護チオール、
Figure 0007536025000176
又はそのＮ－保護型、
Figure 0007536025000177
環内炭素－炭素三重結合
Figure 0007536025000178
を含む置換されていてもよいＣ６－１６ヘテロキシクリル、１，２，４，５－テトラジン基
Figure 0007536025000179
又は置換されていてもよいＣ８－１６シクロアルキニル
Figure 0007536025000180
－ＮＨＲＮ１、置換されていてもよいＣ４－８ひずみシクロアルケニル（例えば、トランス－シクロオクテニル又はノルボルネニル）、又は－ＣＯＯＲ１２又は－ＣＨＯを含む置換されていてもよいＣ１－１６アルキルであり；
ＲＮ１は、Ｈ、Ｎ－保護基、又は置換されていてもよいＣ１－６アルキルであり；
各Ｒ１２は、独立してＨ又は置換されていてもよいＣ１－６アルキルであり；
Ｒ１３はハロゲン又はＦであり；
各ＲＴは、独立してターゲティング部分への結合であり；
各ＱＴは、独立して－ＣＯ－、－ＮＨ－、－ＮＨ－ＣＨ２－又は－ＣＯ－ＣＨ２－であり；
各Ｘ１、Ｘ３、及びＸ５は、独立して非存在、－Ｏ－、－ＮＨ－、－ＣＨ２－ＮＨ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－ＣＨ２－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、又は－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－であり、
各Ｘ２及びＸ４は、独立して非存在、－Ｏ－、－ＮＨ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、又は－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－であり；
各ｘ２は、独立して約０から約５０、約１から約４０、又は約１から約３０の整数であり；
各ｘ３は、独立して約１から約１１の整数であり；かつ
各ｘ５は、独立して約０又は約１の整数であり；かつ
各ｘ６は、独立して約０から約１０、又は約１から約６の整数であり、但し、両方のｘ６の合計が約１２以下である。
所定の実施態様では、相補的反応性基は、
Figure 0007536025000181
Figure 0007536025000182
Figure 0007536025000183
Figure 0007536025000184
であり、ここで、
各ＱＡ３は、独立して置換されていてもよいＣ２－１２アルキニル、置換されていてもよいＮ－保護アミノ、アジド、Ｎ－マレイミド、Ｓ－保護チオール、
Figure 0007536025000185
又はそのＮ－保護型、
Figure 0007536025000186
環内炭素－炭素三重結合
Figure 0007536025000187
を含む置換されていてもよいＣ６－１６ヘテロキシクリル、１，２，４，５－テトラジン基
Figure 0007536025000188
又は置換されていてもよいＣ８－１６シクロアルキニル
Figure 0007536025000189
－ＮＨＲＮ１、置換されていてもよいＣ４－８ひずみシクロアルケニル（例えば、トランス－シクロオクテニル又はノルボルネニル）、又は－ＣＯＯＲ１２又は－ＣＨＯを含む置換されていてもよいＣ１－１６アルキルであり；
各ＲＭ１は、独立してＨ又は補助部分であり；
各ＲＮ１は、独立してＨ、Ｎ－保護基、又は置換されていてもよいＣ１－６アルキルであり；
各Ｒ１２は、独立してＨ又は置換されていてもよいＣ１－６アルキルであり；
各Ｒ１３は、独立してハロゲン又はＦであり；
各ＱＴは、独立して－ＣＯ－、－ＮＨ－、－ＮＨ－ＣＨ２－、又は－ＣＯ－ＣＨ２－であり；
各ＲＴは、独立してターゲティング部分への結合であり；
各ｑ５及びｑ６は、独立して約１から約１０又は約１から約６の整数であり；
各ｑ７は、独立して約０又は約１の整数であり；
各ｑ８は、独立して約０から約５０、約１から約４０、又は約１から約３０の整数であり；かつ
各ｑ９は、独立して約１から約１０の整数である。
所定の実施態様では、相補的反応性基は、
Figure 0007536025000190
Figure 0007536025000191
Figure 0007536025000192
Figure 0007536025000193
であり、ここで、
各ＲＭ１は、独立してＨ又は補助部分であり；
各ＱＴは、独立して－ＣＯ－、－ＮＨ－、－ＮＨ－ＣＨ２－、又は－ＣＯ－ＣＨ２－であり；
各ＲＴは、独立してターゲティング部分への結合であり；
各ｑ５及びｑ６は、独立して約１から約又は約１から約６の整数であり；
各ｑ７は、独立して約０又は約１の整数であり；
各ｑ８は、独立して約０から約５０、約１から約４０、又は約１から約３０の整数であり；かつ
各ｑ９は、独立して約１から約１０の整数である。
［薬学的組成物］
ここに提供されるコンジュゲートの送達は、当該技術分野の当業者に知られている様々な方法を使用して細胞をコンジュゲートと接触させることによって達成できる。所定の実施態様では、ここに提供されるコンジュゲートは、薬学的に許容可能な添加物を含む薬学的組成物として製剤化される。所定の実施態様では、薬学的組成物は、液体又は固体である（例えば、凍結乾燥）。
ここに提供されるコンジュゲートは、単独で又は意図された投与経路と標準的薬務に関して選択される薬学的に許容可能な添加物と混合して投与されうる。このように使用される薬学的組成物は、一又は複数の生理学的に許容される担体、添加物、及びコンジュゲートを薬学的に使用できる製剤に処理しやすくする補助剤を使用して一般的な方法で製剤化できる。
よく使用される担体又は添加物には、糖類（例えば、ラクトース、マンニトール）、牛乳タンパク質、ゼラチン、デンプン、ビタミン、セルロースとその誘導体、ポリ（エチレングリコール）及び溶媒、例えば滅菌水、アルコール、グリセロール、及び多価アルコールが含まれる。静脈内ビヒクルには、水分及び栄養補給剤を含めることができる。他の薬学的に許容可能な担体には、例えば、Remington：The Science and Practice of Pharmacy、21版、Gennaro編、Lippencott Williams及びWilkins（2005）、及び米国薬局方：The National Formulary（USP 36 NF31）、2013年発行に記載されているように、水溶液、非毒性添加物、例えば塩、保存料、バッファーが含まれる。薬学的組成物の様々な成分のｐＨと正確な濃度は、当該技術分野の通例の実務に従って調整することができる。Goodman及び Gilman's、The Pharmacological Basis for Therapeuticsを参照のこと。
薬学的組成物の製造において、活性成分は、典型的には、添加物と混合されるか（例えば、凍結乾燥製剤）、又は添加物によって希釈される。添加物が希釈剤となる場合、それは、活性成分に対してビヒクル、担体、又は媒体として作用する固体、半固体、又は液体材料（例えば、リン酸緩衝生理食塩水）でありうる。よって、組成物は、錠剤、散剤、エリキシル剤、懸濁剤、乳剤、溶液、及びシロップの形態でありうる。当該技術分野で知られているように、希釈剤のタイプは、意図される投与経路に応じて変わりうる。得られる組成物は、追加の薬剤、例えば、保存料を含みうる。製剤は追加的に、潤滑剤、例えば、タルク、ステアリン酸マグネシウム、及び鉱油；湿潤剤；乳化及び懸濁剤；保存剤、例えば、メチル－及びプロピルヒドロキシベンゾエート；甘味料；及び香味料を含みうる。他の例示的な添加物は、Handbook of Pharmaceutical Excipients, 6版, Rowe等編, Pharmaceutical Press (2009)に記載されている。保存料は、抗菌剤、抗酸化剤、キレート剤、及び不活性ガスを含みうる。
これらの薬学的組成物は、通常の方法で、例えば、通常の混合、溶解、顆粒化、糖衣錠製造、ゲル状化（levigating）、乳化、カプセル化、封入、又は凍結乾燥プロセスによって製造することができる。製剤を製造するための当該技術分野における周知の方法は、例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21版, Gennaro編, Lippencott Williams及びWilkins (2005)、及びEncyclopedia of Pharmaceutical Technology, J. Swarbrick及びJ. C. Boylan編, 1988-1999, Marcel Dekker, New Yorkに見出される。適切な製剤は、選択される投与経路に依存する。そのような組成物の製剤及び調製物は、薬学的製剤の当業者によく知られている。製剤の調製において、他の成分と組み合わせる前に、コンジュゲートを粉砕して適切な粒径にすることができる。
［投与経路］
薬学的組成物は、局所的又は全身的に投与することができる。治療上有効な量は、対象における疾患の進行の程度、年齢、性別、及び個体の体重などの要因によって変わる。投与計画は、最適な治療反応をもたらすように調整することができる。例えば、幾つかの分割量を毎日投与することができ、又は治療状況の緊急性によって示されるように、用量を比例的に減らすことができる。
当業者によって理解されるように、薬学的組成物は、選択された投与経路に応じて様々な形態で患者に投与することができる。ここに記載の方法で使用されるコンジュゲートは、例えば、非経口投与によって投与することができる。非経口投与には、筋肉内、静脈内、動脈内、頭蓋内、皮下、眼窩内、脳室内、脊髄内、髄腔内、腹腔内、直腸、及び局所投与経路が含まれる。局所投与経路には、経皮、皮内、頬側、及び舌下の投与経路が含まれる。薬学的組成物は、選択された投与経路に従って製剤化される。非経口投与は、選択された期間にわたる持続注入によって行うことができる。
［非経口投与のための製剤］
ここに提供されるコンジュゲートは、ここに記載の薬学的に許容可能な非経口（例えば、静脈内、筋肉内、又は皮下）製剤でそれを必要とする患者に投与することができる。薬学的製剤はまた、従来の非毒性の薬学的に許容可能な担体及びアジュバントを含む剤形又は製剤で非経口的に（例えば、静脈内、筋肉内、又は皮下に）投与することができる。特に、非経口投与に適した製剤には、抗酸化剤、バッファー、静菌剤、及び製剤を患者の血液と等張にする溶質を含みうる水性及び非水性の滅菌注射液；及び懸濁剤と増粘剤を含みうる水性及び非水性滅菌懸濁剤が含まれる。例えば、そのような組成物を調製するために、ここで提供されるコンジュゲートは、非経口的に許容可能な液体ビヒクルに溶解又は懸濁させることができる。用いられうる許容可能なビヒクル及び溶媒としては、水、適切な量の塩酸、水酸化ナトリウム又は適切なバッファーの添加により適切なｐＨに調整された水（例えば、リン酸緩衝生理食塩水）、１，３－ブタンジオール、リンゲル液及び等張塩化ナトリウム溶液がある。水性製剤はまた一又は複数種の保存料、例えば、メチル、エチル又はｎ－プロピルｐ－ヒドロキシベンゾエートを含みうる。非経口製剤に関する追加情報は、例えば、出典明示によりここに援用される米国薬局方－国民医薬品集（ＵＳＰ－ＮＦ）に見出すことができる。
ここで提供されるコンジュゲートの非経口製剤は、非経口投与に適しているとＵＳＰ－ＮＦによって特定された４種の一般的タイプの調製物の何れか一つでありうる：
（１）「注射用薬物」：薬物注射としての非経口投与のための適切な滅菌ビヒクルと組み合わされる乾燥（例えば、凍結乾燥）固体としての原薬（例えば、ここで提供されるコンジュゲート）；
（２）「薬物注射用乳濁剤」：適切な乳剤媒体に溶解又は分散された原薬（例えば、ここで提供されるコンジュゲート）の液体調製物；
（３）「薬物注射用懸濁剤」：適切な液体媒体に懸濁された原薬（例えば、ここで提供されるコンジュゲート）の液体調製物；及び
（４）「注射用懸濁剤のための薬物」：薬物注射用懸濁剤としての非経口投与のための適切な滅菌ビヒクルと組み合わされる乾燥固体としての原薬（例えば、ここで提供されるコンジュゲート）。
非経口投与のための例示的な製剤は、界面活性剤、例えば、ヒドロキシプロピルセルロースと適切に混合された水中で調製された、ここで提供されるコンジュゲートの溶液を含む。分散剤は、また、グリセロール、液体ポリ（エチレングリコール）、ＤＭＳＯ及びアルコールとのもしくはアルコールなしのそれらの混合物で、また油で調製することができる。通常の保管及び使用条件下では、これらの製剤は、微生物の増殖を防ぐための保存料を含みうる。適切な製剤の選択と調製のための通例の手順及び成分は、例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21版, Gennaro編, Lippencott Williams及びWilkins (2005)及び２０１３年発行の米国薬局方：国民医薬品集（ＵＳＰ３６ＮＦ３１）に記載されている。
生体適合性、生分解性ラクチドポリマー、ラクチド／グリコリドコポリマー、又はポリオキシエチレン－ポリオキシプロピレンコポリマーを使用して、ここで提供されるコンジュゲートの放出を制御することができる。ここで提供されるコンジュゲートのための他の潜在的に有用な非経口送達システムには、エチレン－酢酸ビニルコポリマー粒子、浸透圧ポンプ又は移植可能な注入システムが含まれる。非経口製剤は、ポリヌクレオチド及び／又はコンジュゲートの迅速な放出又は徐放／持続放出用に製剤化することができる。ここで提供されるコンジュゲートの非経口放出のための例示的な製剤には、水溶液、再構成用の粉末、共溶媒溶液、油／水エマルジョン、懸濁液、ミクロスフェア、及びポリマーゲルが含まれる。
［使用方法］
一実施態様では、ここで提供されるのは、ここで開示される治療有効量のコンジュゲートを対象に投与することを含む、対象における増殖性疾患の一又は複数の症状を治療し、予防し、又は寛解させるための方法である。
所定の実施態様では、対象は哺乳動物である。所定の実施態様では、対象はヒトである。所定の実施態様では、対象は、ヒト以外の霊長類、ウシなどの家畜、スポーツ動物、又はウマ、イヌ、又はネコなどのペットである。
所定の実施態様では、増殖性疾患は腫瘍である。所定の実施態様では、増殖性疾患は、液性又は血液腫瘍である。所定の実施態様では、増殖性疾患は固形腫瘍である。所定の実施態様では、増殖性疾患は腫瘍性疾患である。
所定の実施態様では、増殖性疾患はがんである。所定の実施態様では、がんは再発したがんである。所定の実施態様では、がんは薬剤耐性がんである。所定の実施態様では、がんは再発した薬剤耐性がんである。所定の実施態様では、がんは多剤耐性がんである。所定の実施態様では、がんは再発した多剤耐性がんである。
所定の実施態様では、ここで提供されるコンジュゲートで治療可能ながんには、限定されないが、（１）限定されないが、急性白血病、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、例えば骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性、赤白血病白血病及び骨髄異形成症候群又はその症状（貧血、血小板減少症、好中球減少症、二血球減少症又は汎血球減少症など）、不応性貧血（ＲＡ）、環状鉄芽球を伴うＲＡ（ＲＡＲＳ）、芽球増加を伴うＲＡ（ＲＡＥＢ）、移行期のＲＡＥＢ（ＲＡＥＢ－Ｔ）、前白血病、及び慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）を含む、白血病（２）限定されないが、慢性骨髄球性（顆粒球性）白血病、慢性リンパ球性白血病、及びヘアリー細胞白血病を含む、慢性白血病；（３）真性赤血球増加症；（４）限定されないが、ホジキン病及び非ホジキン病を含む、リンパ腫；（５）限定されないが、くすぶり型多発性骨髄腫、非分泌型骨髄腫、骨硬化性骨髄腫、形質細胞性白血病、孤立性形質細胞腫、及び髄外性形質細胞腫を含む、多発性骨髄腫；（６）ヴァルデンストレームマクログロブリン血症；（７）意義不明の単クローン性γグロブリン血症；（８）良性単クローン性γグロブリン血症；（９）重鎖病；（１０）限定されないが、骨肉腫（bone sarcoma）、骨肉腫（osteosarcoma）、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性巨細胞腫、骨線維肉腫、脊索腫、骨膜肉腫、軟部組織肉腫、血管肉腫（angiosarcoma）（血管肉腫（hemangiosarcoma））、線維肉腫、カポシ肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、リンパ管肉腫、転移性がん、神経鞘腫、横紋筋肉腫、及び滑膜肉腫を含む、骨及び結合組織肉腫；（１１）限定されないが、神経膠腫、星状細胞腫、脳幹神経膠腫、上衣腫、乏突起神経膠腫、非膠細胞腫瘍、聴神経鞘腫、頭蓋咽頭腫、髄芽腫、髄膜腫、松果体細胞腫、松果体芽細胞腫、及び原発性脳リンパ腫を含む、脳腫瘍；（１２）限定されないが、腺がん、小葉（小細胞）がん、乳管内がん、髄様乳がん、粘液性乳がん、管状乳がん、乳頭状乳がん、原発性がん、パジェット病、及び炎症性乳がんを含む、乳がん；（１３）限定されないが、褐色細胞腫及び副腎皮質がんを含む、副腎がん；（１４）限定されないが、乳頭状又は濾胞性甲状腺がん、髄様甲状腺がん、及び未分化甲状腺がんを含む、甲状腺がん；（１５）限定されないが、インスリノーマ、ガストリノーマ、グルカゴノーマ、ビポーマ、ソマトスタチン分泌腫瘍、及びカルチノイド又は膵島細胞腫瘍を含む、膵臓がん；（１６）限定されないが、クッシング病、プロラクチン分泌腫瘍、先端巨大症、及び尿崩症を含む、下垂体がん；（１７）限定されないが、眼の黒色腫、例えば虹彩黒色腫、脈絡膜黒色腫、毛様体黒色腫、及び網膜芽細胞腫を含む、眼がん；（１８）限定されないが、扁平上皮癌、腺癌、及び黒色腫を含む、膣癌；（１９）限定されないが、扁平上皮がん、黒色腫、腺がん、基底細胞がん、肉腫、及びパジェット病を含む、外陰がん；（２０）限定されないが、扁平上皮がん、及び腺がんを含む、子宮頸がん；（２１）限定されないが、子宮内膜がん及び子宮肉腫を含む、子宮がん；（２２）限定されないが、卵巣上皮がん、境界型腫瘍、胚細胞腫瘍、及び間質性腫瘍を含む、卵巣がん；（２３）限定されないが、扁平上皮がん、腺がん、腺様嚢胞がん、粘表皮がん、腺扁平上皮がん、肉腫、黒色腫、形質細胞腫、疣状がん、及び燕麦細胞（小細胞）がんを含む、食道がん；（２４）限定されないが、腺がん、菌状（ポリープ状）、潰瘍形成、表在拡大型、散在性拡大型、悪性リンパ腫、脂肪肉腫、線維肉腫、及び癌肉腫を含む、胃がん；（２５）結腸がん；（２６）直腸がん；（２７）限定されないが、肝細胞がん及び肝芽腫を含む、肝がん；（２８）限定されないが、腺がんを含む、胆嚢がん；（２９）限定されないが、乳頭状、結節性、及びびまん性を含む、胆管がん；（３０）限定されないが、非小細胞肺がん、扁平上皮がん（類表皮がん）、腺がん、大細胞がん、及び小細胞肺がんを含む、肺がん；（３１）限定されないが、胚性腫瘍、セミノーマ、未分化、古典的（典型的）、精母細胞性、非セミノーマ、胚性がん腫、奇形腫がん腫、及び絨毛がん（卵黄嚢腫瘍）を含む精巣がん；（３２）限定されないが、腺癌、平滑筋肉腫、及び横紋筋肉腫を含む、前立腺がん；（３３）ペナル（penal）がん；（３４）限定されないが、扁平上皮がんを含む、口腔がん；（３５）基底細胞がん；（３６）限定されないが、腺がん、粘表皮がん、及び腺様嚢胞がん腫を含む、唾液腺がん；（３７）限定されないが、扁平上皮がん及び 疣状を含む、咽頭がん；（３８）限定されないが、基底細胞がん、扁平上皮がん及び黒色腫、表在性拡大型黒色腫、結節型黒色腫、黒子型悪性黒色腫、及び末端黒子型黒色腫を含む、皮膚がん；（３９）限定されないが、腎細胞がん、腺がん、グラヴィッツ腫瘍、線維肉腫、及び移行上皮がん（腎盂及び／又は尿管）を含む、腎がん；（４０）ウィルムス腫瘍；（４１）限定されないが、移行上皮がん、扁平上皮がん、腺がん、及びがん肉腫を含む、膀胱がん；並びに、限定されないが、粘液肉腫、骨形成肉腫、内皮肉腫、リンパ管内皮肉腫、中皮腫、滑膜腫、血管芽細胞腫、上皮がん、嚢胞腺がん、気管支原性肺がん、汗腺がん、脂腺がん、乳頭がん、及び乳頭腺がんを含む、他のがんが含まれる（Fishman等, 1985, Medicine, 2版, J.B. Lippincott Co., Philadelphia及びMurphy等, 1997, Informed Decisions: The Complete Book of Cancer Diagnosis, Treatment, and Recovery, Viking Penguin, Penguin Books U.S.A., Inc., United States of America）。
所定の実施態様では、ここで提供されるコンジュゲートで治療可能ながんには、限定されないが、Ｂ細胞がん、例えば、多発性骨髄腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、重鎖病、例えば、アルファ鎖病、ガンマ鎖病、ミュー鎖病、良性単クローン性高ガンマグロブリン血症、及び免疫球性アミロイドーシス、黒色腫、乳がん、肺がん、気管支がん、結腸直腸がん、前立腺がん、膵臓がん、胃がん、卵巣がん、膀胱がん、脳又は中枢神経系がん、末梢神経系がん、食道がん、子宮頸がん、子宮又は子宮内膜がん、口腔又は咽頭のがん、肝がん、腎がん、精巣がん、胆道がん、小腸又は虫垂がん、唾液腺がん、甲状腺がん、副腎がん、骨肉腫、軟骨肉腫、及び血液組織のがんが含まれる。
所定の実施態様では、ここで提供されるコンジュゲートで治療可能ながんには、限定されないが、ヒト肉腫及びがん腫、例えば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨形成肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸がん、結腸直腸がん、膵臓がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、扁平上皮がん、基底細胞がん、腺がん、汗腺がん、脂腺がん、乳頭がん、乳頭状腺がん、嚢胞腺がん、髄様がん、気管支原性がん、腎細胞がん、肝細胞がん、胆管がん、肝がん、絨毛がん、セミノーマ、胚性がん、ウィルムス腫瘍、頸部がん、骨がん、脳腫瘍、精巣がん、肺がん、小細胞肺がん、膀胱がん、上皮がん、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫；白血病、例えば、急性リンパ性白血病及び急性骨髄性白血病（骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性及び赤白血病）；慢性白血病（慢性骨髄性（顆粒球性）白血病及び慢性リンパ性白血病）；真性赤血球増加症、リンパ腫（ホジキン病及び非ホジキン病）、多発性骨髄腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、及び重鎖病が含まれる。
所定の実施態様では、がんは、限定されないが、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、結腸がん、婦人科癌、腎癌、喉頭がん、肺がん、口腔がん、頭頸部がん、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、及び皮膚がんを含み、本質的に上皮性である。所定の実施態様では、がんは、乳がん、前立腺がん、肺がん、又は結腸がんである。所定の実施態様では、上皮がんは、非小細胞肺がん、非乳頭状腎細胞がん、子宮頸がん、卵巣がん（例えば、漿液性卵巣がん）、又は乳がんである。
所定の実施態様では、増殖性疾患は炎症性疾患である。所定の実施態様では、増殖性疾患は免疫障害である。所定の実施態様では、増殖性疾患は感染症である。所定の実施態様では、増殖性疾患はウイルス感染症である。
別の実施態様では、ここで提供されるのは、ここで開示される有効量のコンジュゲートを対象に投与することを含む、対象におけるナチュラルキラー細胞を調節する方法である。
また別の実施態様では、ここで提供されるのは、ここで開示される有効量のコンジュゲートを対象に投与することを含む、対象における骨髄系細胞を調節する方法である。
治療される障害、疾患、又は状態、及び対象の状態に応じて、ここで提供されるコンジュゲート又は薬学的組成物は、経口、非経口（例えば、筋肉内、腹腔内、静脈内、ＩＣＶ、大槽内注射又は注入、皮下注射、又はインプラント）、吸入、鼻腔、膣内、直腸内、舌下、又は外用（例えば、経皮又は局所）投与経路によって投与することができ、単独で、又は各投与経路に適した薬学的に許容可能な添加物、担体、補助剤、及びビヒクルと適切な投薬単位で一緒に製剤化されうる。また提供されるのはデポ製剤でのここに提供されるコンジュゲート又は薬学的組成物の投与であり、ここで、活性成分は、予め定まった期間にわたって放出される。
ここに記載の障害、疾患、又は状態の一又は複数の症状の治療、予防、又は寛解において、適切な投薬量レベルは、一般に、約０．００１から１００ｍｇ／ｋｇ対象体重／日（ｍｇ／ｋｇ／日）、約０．０１から約７５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．１から約５０ｍｇ／ｋｇ／日、約０．５から約２５ｍｇ／ｋｇ／日、又は約１から約２０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であり、これは単一又は複数用量で投与することができる。この範囲内で、投薬量は、約０．００５から約０．０５、約０．０５から約０．５、約０．５から約５．０、約１から約１５、約１から約２０、又は約１から約５０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲でありうる。
しかしながら、任意の特定の患者に対する特定の用量レベルと投薬頻度は変動し得、用いられる特定の化合物の活性、代謝安定性及びその化合物の作用の長さ、年齢、体重、一般的な健康状態、性別、食事、投与の方法と時間、排出速度、薬物の組み合わせ、特定の状態の重症度、及び治療を受けているホストを含む、様々な要因に依存することが理解される。
ここに提供されるコンジュゲートはまた、ここに提供されるコンジュゲートが有用である状態、障害、又は疾患の一又は複数の症状の治療、予防、又は寛解に有用な他の薬剤又は治療法と組み合わせることができ又は組み合わせて使用することができる。
適切な他の治療薬には、また、限定されないが、（１）アルファアドレナリン作用薬；（２）抗不整脈薬；（３）ＡＣＡＴ阻害剤などの抗アテローム性動脈硬化症薬；（４）アントラサイクリン、ブレオマイシン、マイトマイシン、ダクチノマイシン、及びプリカマイシンなどの抗生物質；（５）抗がん剤及び細胞傷害性剤、例えばナイトロジェンマスタード、アルキルスルホネート、ニトロソウレア、エチレンイミン、及びトリアゼンなどのアルキル化剤；（６）アセノクマロール、アルガトロバン、ビバリルジン、レピルジン、フォンダパリヌクス、ヘパリン、フェニンジオン、ワルファリン、及びキシメラガトランなどの抗凝固剤；（７）ビグアニド（例えば、メトホルミン）、グルコシダーゼ阻害剤（例えば、アカルボース）、インスリン、メグリチニド（例えば、レパグリニド）、スルホニル尿素（例えば、グリメピリド、グリブリド、及びグリピジド）、チオゾリジンジオン（例えば、トログリタゾン、ロシグリタゾン、及びピオグリタゾン）、及びＰＰＡＲ－ガンマアゴニストなどの抗糖尿病薬；（８）アモロルフィン、アンホテリシンＢ、アニデュラファンギン、ビフォナゾール、ブテナフィン、ブトコナゾール、カスポファンギン、シクロピロックス、クロトリマゾール、エコナゾール、フェンチコナゾール、フィリピン、フルコナゾール、イソコナゾール、イトラコナゾール、ケトコナゾール、ミカファンギン、ミコナゾール、ナフチフィン、ナタマイシン、ナイスタチン、オキシコナゾール、ラブコナゾール、ポサコナゾール、リモシジン、セルタコナゾール、スルコナゾール、テルビナフィン、テルコナゾール、チオコナゾール、及びボリコナゾールなどの抗真菌剤；（９）抗炎症薬、例えば、アセクロフェナク、アセメタシン、アモキシプリン、アスピリン、アザプロパゾン、ベノリラート、ブロムフェナク、カルプロフェン、セレコキシブ、サリチル酸コリンマグネシウム、ジクロフェナク、ジフルニサル、エトドラク、エトリコキシブ、ファイスラミン（faislamine）、フェンブフェン、フェノプロフェン、フルルビプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、ケトロラック、ロルノキシカム、ロキソプロフェン、ルミラコキシブ、メクロフェナム酸、メフェナム酸、メロキシカム、メタミゾール、サリチル酸メチル、サリチル酸マグネシウム、ナブメトン、ナプロキセン、ニメスリド、オキシフェンブタゾン、パレコキシブ、フェニルブタゾン、ピロキシカム、サリチル酸サリチル、スリンダク、スルフィンピラゾン、スプロフェン、テノキシカム、チアプロフェン酸、及びトルメチン；（１０）葉酸拮抗薬、プリンアナログ、及びピリミジンアナログなどの代謝拮抗薬；（１１）ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ遮断薬（例えば、アブシキシマブ、エプチフィバチド、及びチロフィバン）、Ｐ２Ｙ（ＡＣ）拮抗薬（例えば、クロピドグレル、チクロピジン及びＣＳ－７４７）、シロスタゾール、ジピリダモール、及びアスピリンなどの抗血小板薬；（１２）メトトレキサート、ＦＫ５０６（タクロリムス）、及びミコフェノール酸モフェチルなどの抗増殖剤；（１３）エタネルセプト、ラパマイシン、及びレフルンイミドなどの抗ＴＮＦ抗体又は可溶性ＴＮＦ受容体；（１４）ａＰ２阻害剤；（１５）カルベジロール及びメトプロロールなどのベータアドレナリン作用薬；（１６）クエストランなどの胆汁酸吸着剤；（１７）ベシル酸アムロジピンなどのカルシウムチャネル遮断薬；（１８）化学療法剤；（１９）セレコキシブ及びロフェコキシブなどのシクロオキシゲナーゼ－２（ＣＯＸ－２）阻害剤；（２０）シクロスポリン；（２１）アザチオプリン及びシクロホスファミドなどの細胞傷害性薬；（２２）クロロチアジド、ヒドロクロロチアジド、フルメチアジド、ヒドロフルメチアジド、ベンドロフルメチアジド、メチルクロロチアジド、トリクロロメチアジド、ポリチアジド、ベンゾチアジド、エタクリン酸、チクリナフェン、クロルタリドン、フロセニド、ムゾリミン、ブメタニド、トリアムテレン、アミロライド、及びスピロノラクトンなどの利尿薬；（２３）ホスホラミドンなどのエンドセリン変換酵素（ＥＣＥ）阻害剤；（２４）Ｌ－アスパラギナーゼなどの酵素；（２５）第ＶＩＩａ因子阻害剤及び第Ｘａ因子阻害剤；（２６）ファルネシル－タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤；（２７）フィブラート系薬剤；（２８）ＰＤＧＦ活性のモジュレーターなどの増殖因子阻害剤；（２９）成長ホルモン分泌促進物質；（３０）プラバスタチン、ロバスタチン、アトルバスタチン、シンバスタチン、ＮＫ－１０４（イタバスタチン、ニスバスタチン（nisvastatin）、又はニスバスタチン（nisbastatin）としても知られる）、及びＺＤ－４５２２（ロスバスタチン、アタバスタチン、又はビサスタチンとしても知られる）などのＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼ阻害剤；中性エンドペプチダーゼ（ＮＥＰ）阻害剤；（３１）糖質コルチコイド（例えば、コルチゾン）、エストロゲン／抗エストロゲン、アンドロゲン／抗アンドロゲン、プロゲスチン、及び黄体形成ホルモン放出ホルモン拮抗薬、及び酢酸オクトレオチドなどのホルモン剤；（３２）免疫抑制剤；（３３）スピロノラクトン及びエプレレノンなどの鉱質コルチコイド受容体遮断薬；（３４）エクチナサイジンなどの微小管撹乱剤；（３５）パクリタキセル、ドセタキセル、及びエポチロンＡ－Ｆなどの微小管安定剤；（３６）ＭＴＰ阻害剤；（３７）ナイアシン；（３８）ＰＤＥ ＩＩＩ阻害剤（例えば、シロスタゾール）及びＰＤＥ Ｖ阻害剤（例えば、シルデナフィル、タダラフィル、及びバルデナフィル）などのホスホジエステラーゼ阻害剤；（３９）ビンカアルカロイド、エピポドフィロトキシン、及びタキサンなどの植物由来生成物；（４０）血小板活性化因子（ＰＡＦ）拮抗薬；（４１）シスプラチン、サトラプラチン、及びカルボプラチンなどの白金配位錯体；（４２）カリウムチャネル開口薬；（４３）プレニル－タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤；（４４）プロテインチロシンキナーゼ阻害剤；（４５）レニン阻害剤；（４６）スクアレン合成酵素阻害剤；（４７）アルドステロン、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、酢酸デオキシコルチコステロン、フルドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン（コルチゾール）、プレドニゾロン、プレドニゾン、メチルプレドニゾロン、デキサメタゾン、及びトリアムシノロンなどのステロイド；（４８）テニダップなどのＴＮＦ－α阻害剤；（４９）ヒルジンなどのトロンビン阻害剤；（５０）アニストレプラーゼ、レテプラーゼ、テネクテプラーゼ、組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔＰＡ）、組換えｔＰＡ、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、プロウロキナーゼ、及びアニソイル化プラスミノーゲンストレプトキナーゼ活性化因子複合体（ＡＰＳＡＣ）などの血栓溶解剤；（５１）イフェトロバンなどのトロンボキサン受容体拮抗薬；（５２）トポイソメラーゼ阻害剤；（５３）オマパトリラト及びゲモパトリラトなどのバソペプチダーゼ阻害剤（二重ＮＥＰ－ＡＣＥ阻害剤）；及び（５４）ヒドロキシ尿素、プロカルバジン、ミトタン、ヘキサメチルメラミン、及び金化合物などの他の種々の薬剤が含まれうる。
所定の実施態様では、ここで提供されるコンジュゲートと組み合わせて使用されうる他の治療薬には、抗がん剤及び細胞傷害剤、例えば、ナイトロジェンマスタード、アルキルスルホネート、ニトロソウレア、エチレンイミン、及びトリアゼンなどのアルキル化剤；例えば、ナイトロジェンマスタード、アルキルスルホネート、ニトロソウレア、エチレンイミン、及びトリアゼンなどのアルキル化剤が含まれる。
所定の実施態様では、ここで提供されるコンジュゲートと組み合わせて使用することができる他の治療薬には、限定されないが、免疫チェックポイント調節因子が含まれる。所定の実施態様では、免疫チェックポイント調節因子は、ＰＤ－１阻害剤である。所定の実施態様では、免疫チェックポイント調節因子は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤である。所定の実施態様では、ＰＤ－１阻害剤は、抗ＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片である。所定の実施態様では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合断片である。所定の実施態様では、免疫チェックポイント調節因子は、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との間の相互作用を遮断する。
所定の実施態様では、ここで提供されるコンジュゲートと組み合わせて使用することができる他の治療薬には、限定されないが、Ｔ細胞共刺激分子と免疫チェックポイント調節因子が含まれる。所定の実施態様では、Ｔ細胞共刺激分子は、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１／ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１６０、Ｂ７－Ｈ３、又はＣＤ８３、又はそれらのリガンドである。所定の実施態様では、Ｔ細胞共刺激分子は、抗ＯＸ４０抗体、抗ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８抗体、又は抗４－１ＢＢ／ＣＤ１３７抗体、又はそれらの抗原結合断片である。所定の実施態様では、免疫チェックポイント調節因子は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＴＩＭ－３、ＬＡＧ－３、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－５、ＣＬＴＡ－４、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ４７、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ１７２ａ、及びＴＧＦＲから選択される免疫チェックポイント分子の阻害剤である。所定の実施態様では、免疫チェックポイント調節因子は、抗ＣＤ４７抗体、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、又はそれらの抗原結合断片である。
所定の実施態様では、ここで提供されるコンジュゲートと組み合わせて使用することができる他の治療法には、限定されないが、外科手術、内分泌療法、生物学的反応修飾物質（例えば、インターフェロン、インターロイキン、及び腫瘍壊死因子（ＴＮＦ））、温熱療法と寒冷療法、及び副作用を減弱させる薬剤（例えば、制吐薬）が含まれる。
そのような他の薬剤又は薬物は、ここで提供されるコンジュゲートと同時に又は逐次的に、そのために通例使用される経路及び量で投与することができる。ここで提供されるコンジュゲートを一又は複数の他の薬物と同時に使用する場合、ここで提供されるコンジュゲートに加えてそのような他の薬物を含む薬学的組成物を利用することができるが、必須ではない。従って、ここで提供される薬学的組成物は、ここで提供されるコンジュゲートに加えて、一又は複数の他の活性成分又は治療剤をまた含むものを含む。
所定の実施態様では、ここに提供されるコンジュゲートは、第二抗体、例えば、がんによって発現される抗原に結合する抗体（例えば、有効量の第二抗体）と組み合わせて投与される。がんによって発現される例示的な抗原は、当該技術分野で知られており、限定されないが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＳ１／ＳＬＡＭＦ７、Ｔｒｏｐ－２、５Ｔ４、ＥｐｈＡ４、ＢＣＭＡ、ムチン１、ムチン１６、ＰＴＫ７、ＰＤ－Ｌ１、ＳＴＥＲＡＰ１、エンドセリンＢ受容体、メソテリン、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＮＰＰ３、ＳＬＣ４４Ａ４、ＧＮＭＢ、ネクチン４、ＮａＰｉ２ｂ、ＬＩＶ－１Ａ、グアニリルシクラーゼＣ、ＤＬＬ３、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、インテグリンαＶβ３、インテグリンα５β１、ＭＥＴ、ＩＧＦ１Ｒ、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＲＡＮＫＬ、ＦＡＰ、テネイシン、Ｌｅｙ、ＥｐＣＡＭ、ＣＥＡ、ｇｐＡ３３、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ７２、ムチン、ＣＡＩＸ、ＥＰＨＡ３、葉酸受容体α、ＧＤ２、ＧＤ３、及びＮＹ－ＥＳＯ－１／ＬＡＧＥ由来のペプチドを含むＭＨＣ／ペプチド複合体、ＳＳＸ－２、ＭＡＧＥファミリータンパク質、ＭＡＧＥ－Ａ３、ｇｐ１００／ｐｍｅｌ１７、メラン－Ａ／ＭＡＲＴ－１、ｇｐ７５／ＴＲＰ１、チロシナーゼ、ＴＲＰ２、ＣＥＡ、ＰＳＡ、ＴＡＧ－７２、未成熟ラミニン受容体、ＭＯＫ／ＲＡＧＥ－１、ＷＴ－１、ＳＡＰ－１、ＢＩＮＧ－４、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ１、ＰＲＡＭＥ、サバイビン、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＣＤＫ４、ＣＭＬ６６、ＭＡＲＴ－２、ｐ５３、Ｒａｓ、β－カテニン、ＴＧＦ－βＲＩＩ、ＨＰＶ Ｅ６、又はＨＰＶＥ７を含む。所定の実施態様では、ここで提供されるコンジュゲートは、タラコツズマブ（ＣＳＬ３６２及びＪＮＪ－５６０２２４７３としても知られる）などの、ＣＤ１２３（ＩＬ－３受容体アルファとしても知られる）に結合するモノクローナル抗体と組み合わせて投与される。所定の実施態様では、ここで提供されるコンジュゲートは、ＥＧＦＲに結合するモノクローナル抗体（セツキシマブなど）と組み合わせて投与される。所定の実施態様では、二次抗体は、一又は複数のエフェクター機能、例えば、限定されないが、ＡＤＣＣ又はＡＤＣＰ、及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を含む、免疫細胞上のＦｃ受容体（ＦｃＲ）結合に関連するエフェクター機能を含む。理論に拘束されることを望まないが、そのような抗体をここで提供されるコンジュゲートと組み合わせることが、例えば、ＮＫ又は骨髄系細胞の活性を調節しながら第二抗体が結合する腫瘍細胞を標的とするようＦｃＲ発現白血球を方向づけるのに、特に有利であると考えられる。
所定の実施態様では、ここに提供されるコンジュゲートは、免疫療法剤（例えば、有効量の免疫療法剤）と組み合わせて投与される。免疫療法剤は、免疫系を標的とし、共刺激経路のモジュレーター、がんワクチン、組換え修飾免疫細胞などの免疫系の治療的リダイレクションを促進する任意の治療薬を指しうる。例示的及び非限定的な免疫療法剤は、以下に記載される。理論に拘束されることを望まないが、ここに提供されるコンジュゲートは、例えば、腫瘍細胞を標的とするマクロファージ及びＴエフェクター細胞などの他の免疫細胞の両方を活性化することで、腫瘍細胞を標的とする相補的な作用機序のため免疫療法剤との使用に適していると考えられる。
所定の実施態様では、免疫療法剤は抗体を含む。免疫療法抗体の例示的抗原は、当該技術分野において知られており、限定されないが、ＢＤＣＡ２、ＢＤＣＡ４、ＩＬＴ７、ＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ２、ＬＩＬＲＢ３、ＬＩＬＲＢ４、ＣＳＦ－１Ｒ、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ１６３、ＣＤ２０６、ＤＥＣ２０５、ＣＤ４７、ＣＤ１２３、ＩＤＯ、ＴＤＯ、４１ＢＢ、ＣＴＬＡ４、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＴＩＭ－３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ－３、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、ＣＣＲ４、ＣＤ２５、ＣＤ１０３、ＫＩｒｇ１、Ｎｒｐ１、ＣＤ２７８、Ｇｐｒ８３、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１５４、ＣＤ１６０、ＰＶＲＩＧ、ＤＮＡＭ、及びＩＣＯＳを含む。承認されており、又は後期臨床試験中の免疫療法剤には、限定されないが、イピリムマブ、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ等が含まれる。所定の実施態様では、本開示の抗体は、ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１経路の阻害剤、例えば、抗ＰＤ－Ｌ１又は抗ＰＤ－１抗体と組み合わせて投与される。ここで証明されるように、本開示の抗ＳＩＲＰ－α抗体とＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１経路の阻害剤の併用投与は、相乗的な抗腫瘍活性をもたらしうる。
所定の実施態様では、免疫療法剤は、ワクチン、腫瘍退縮ウイルス、養子細胞療法、サイトカイン、又は小分子免疫療法剤を含む。そのような免疫療法剤の例は当該技術分野で知られている。例えば、養子細胞療法と治療薬には、限定されないが、キメラ抗原受容体Ｔ細胞療法（ＣＡＲ－Ｔ）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ＴＣＲ操作ＮＫ細胞、及びマクロファージ細胞産物が含まれる。ワクチンには、限定されないが、ポリヌクレオチドワクチン、ポリペプチドワクチン、又は細胞ベース（例えば、腫瘍又は樹状細胞ベース）のワクチンが含まれうる。がんの治療に有用な様々なサイトカインが知られており、限定されないが、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、及びＩＦＮが含まれる。小分子免疫治療剤には、限定されないが、ＩＤＯ／ＴＤＯ阻害剤、アルギナーゼ阻害剤、Ａ２ａＲ阻害剤、ＴＬＲアゴニスト、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及びＲｉｇ－１アゴニストが含まれる。
所定の実施態様では、ここで提供されるコンジュゲートは、限定されないが、メトトレキサート（ＲＨＥＵＭＡＴＲＥＸ（登録商標）、アメトプテリン）シクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））、サリドマイド（ＴＨＡＬＩＤＯＭＩＤ（登録商標））、アクリジンカルボキサミド、アクチミド（登録商標）、アクチノマイシン、１７－Ｎ－アリルアミノ－１７－デメトキシゲルダナマイシン、アミノプテリン、アムサクリン、アントラサイクリン、抗悪性腫瘍薬（antineoplastic）、抗新生物薬（antineoplaston）、５－アザシチジン、アザチオプリン、ＢＬ２２、ベンダムスチン、ビリコダール、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ボスタチン、ブスルファン、カリクリン、カンプトテシン、カペシタビン、カルボプラチン、セツキシマブ、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロファラビン、シタラビン、ダカルバジン、ダサチニブ、ダウノルビシン、デシタビン、ジクロロ酢酸、ディスコードオリド（discode olide）、ドセタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン、エポチロン、エリブリン、エストラムスチン、エトポシド、エキサテカン、エキシスリンド、フェルギノール、フロクスウリジン、フルダラビン、フルオロウラシル、フォスフェストロール、フォテムスチン、ガンシクロビル、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、ＩＴ－１０１、イダルビシン、イフォスファミド、イミキモド、イリノテカン、イロフルベン、イキサベピロン、ラニキダール、ラパチニブ、レナリドミド、ロムスチン、ルルトテカン、マフォスファミド、マソプロコール、メクロレタミン、メルファラン、メルカプトプリン、マイトマイシン、ミトタン、ミトキサントロン、ネララビン、ニロチニブ、オブリメルセン、オキサリプラチン、ＰＡＣ－１、パクリタキセル、ペメトレキセド、ペントスタチン、ピポブロマン、ピキサントロン、プリカマイシン、プロカルバジン、プロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ）、ラルチトレキセド、レベッカマイシン、レブリミド（登録商標）、ルビテカン、ＳＮ－３８、サリノスポラミドＡ、サトラプラチン、ストレプトゾトシン、スウェインソニン、タリキダール、タキサン、テガフールウラシル、テモゾロミド、テストトラクトン、チオテパ、チオグアニン、トポテカン、トラベクテジン、トレチノイン、四硝酸トリプラチン、トリス（２－クロロエチル）アミン、トロキサシタビン、ウラシルマスタード、バルビシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ボリノスタット、又はゾスキダルを含む治療剤との組み合わせで投与される。
所定の実施態様では、ここで提供されるコンジュゲートは、限定されないが、３Ｆ８、８Ｈ９、アバゴボマブ、アブシキシマブ、アビツズマブ、アブリルマブ、アクトクスマブ、アダリムマブ、アデカツムマブ、アデュカヌマブ、アフェリモマブ、アフツズマブ、アラシズマブペゴル、ＡＬＤ５１８、アレムツズマブ、アリロクマブ、アルツモマブペンテテート、アマツキシマブ、アナツモマブマフェナトックス、アネツマブラブタンシン、アニフロルマブ、キンズマブ（ＩＭＡ－６３８）、アポリズマブ、アルシツモマブ、アスクリンバクマブ、アセリズマブ、アテゾリズマブ、アチヌマブ、アトリズマブ（トシリズマブ）、アトロリムマブ、バピネオズマブ、バシリキシマブ、バビツキシマブ、ベクツモマブ、ベゲロマブ、ベリムマブ、ベンラリズマブ、ベルチリムマブ、ベシレソマブ、ベバシズマブ、ベズロトクスマブ、ビシロマブ、ビマグルマブ、ビメキズマブ、ビバツズマブメルタンシン、ブリナツモマブ、ブロソズマブ、ボコシズマブ、ブレンツキシマブベドチン、ブリアキヌマブ、ブロダルマブ、ブロルシズマブ、ブロンチクツズマブ、カナキヌマブ、カンツズマブメルタンシン、カンツズマブラブタンシン、カプラシズマブ、カプロマブペンデチド、カルルマブ、カツマキソマブ、ｃＢＲ９６－ドキソルビシン免疫複合体、ＣＣ４９、セデリズマブ、セルトリズマブペゴル、セツキシマブ、Ｃｈ．１４．１８、シタツズマブボガトックス、シクスツムマブ、クラザキズマブ、クレノリキシマブ、クリバツズマブテトラキセタン、コドリツズマブ、コルツキシマブラブタンシン（Coltuximab ravtansine）、コナツムマブ、コンシズマブ、クレネズマブ、ＣＲ６２６１、ダセツズマブ、ダクリズマブ、ダロツズマブ、ダピロリズマブペゴル、ダラツムマブ、デクトレクマブ、デムシズマブ、デニンツズマブマフォドチン、デノスマブ、デルロツキシマブビオチン、デツモマブ、ジヌツキシマブ、ディリダブマブ、ドルリモマブアリトックス（Dorlimomab aritox）、ドロジツマブ、デュリゴツズマブ（Duligotumab）、デュピルマブ、デュルバルマブ、デュシギツマブ（Dusigitumab）、エクロメキシマブ、エクリズマブ、エドバコマブ、エドレコロマブ、エファリズマブ、エングマブ、エルデルマブ、エルゲムツマブ、エロツズマブ、エルシリモマブ、エマクツズマブ、エミベツズマブ、エナバツズマブ、エンフォルツマブベドチン、エンリモマブペゴル、エノブリツズマブ、エノキズマブ、エノチクマブ、エンシツキシマブ（Ensituximab）、エピツモマブシテュウキセタン（Epitumomab cituxetan）、エプラツズマブ、エルリズマブ（Erlizumab）、エルツマクソマブ、エタラシズマブ、エトロリズマブ、エビナクマブ、エボロクマブ、エクスビビルマブ、ファノレソマブ、ファラリモマブ、ファーレツズマブ、ファシヌマブ、ＦＢＴＡ０５、フェルビズマブ、フェザキヌマブ、フィクラツズマブ、フィギツムマブ、フィリブマブ、フランボツマブ、フレチクマブ、フォントリズマブ、フォラルマブ、フォラビルマブ、フレソリムマブ、フルラヌマブ（Fulranumab）、フツキシマブ、ガリキシマブ、ガニツマブ、ガンテネルマブ、ガビリモマブ、ゲムツズマブオゾガマイシン、ゲボキズマブ、ギレンツキシマブ（Giren-tuximab）、グレンバツムマブベドチン、ゴリムマブ、ゴミリキシマブ、グセルクマブ、イバリズマブ、イブリツモマブチウキセタン、イクルクマブ、イダルシズマブ、イゴボマブ、ＩＭＡＢ３６２、イマルマブ、イムシロマブ、イムガツズマブ、インクラクマブ、インダツキシマブラブタンシン（Indatuximab ravtansine）、インダサツマブベドチン（Indusatumab vedotin）、イニキシマブ（In iximab）、インテツムマブ、イノリモマブ、イノツズマブオゾガマイシン、イピリムマブ、イラツムマブ、イサツキシマブ、イトリズマブ、イキセキズマブ、ケリキシマブ、ラベツズマブ、ランブロリズマブ、ランパリズマブ、レブリキズマブ、レマレソマブ、レンジルマブ、レルデリムマブ、レキサツムマブ、リビビルマブ、リファスツズマブベドチン、リゲリズマブ、リロトマブサテトラキセタン、リンツズマブ、リリルマブ、ロデルシズマブ、ロキベットマブ、ロルボツズマブメルタンシン、ルカツムマブ、ルリズマブペゴル、ルミリキシマブ、ルムレツズマブ、マパツムマブ、マルゲツキシマブ、マスリモマブ、マブリリムマブ、マツズマブ、メポリズマブ、メテリムマブ、ミラツズマブ、ミンレツモマブ、ミツモマブ、モガムリズマブ、モロリムマブ、モタビズマブ、モクセツモマブパスドトックス、ムロモナブ－ＣＤ３、ナコロマブタフェナトックス、ナミルマブ、ナプツモマブエスタフェナトックス、ナマツマブ（Namatumab）、ナタリズマブ、ネバクマブ、ネシツムマブ、ネモリズマブ、ネレリモマブ、ネスバクマブ、ニモツズマブ、ニボルマブ、ノフェツモマブメエンタン（Nofetumomab me entan）、オビルトキサキシマブ、オカラツズマブ、オクレリズマブ、オドゥリモマブ（Odulimomab）、オファツムマブ、オララツマブ、オロキズマブ、オマリズマブ、オナルツズマブ、オンツキシズマブ、オピシヌマブ、オポルツズマブモナトックス、オレゴボマブ、オルチクマブ、オテリキシズマブ、オトレルツズマブ、オクセルマブ（Oxelumab）、オザネズマブ、オゾラリズマブ、パギバキシマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、パンコマブ、パノバクマブ、パルサツズマブ、パスコリズマブ、パソツキシズマブ、パテクリズマブ、パトリツマブ、ペムブロリズマブ、ペムツモマブ、ペラキズマブ、ペルツズマブ、ペキセリズマブ、ピジリズマブ、ピナツズマブベドチン、ピンツモマブ、プラクルマブ（Placulumab）、ポラツズマブベドチン、ポネズマブ、プリリキシマブ、プリトキサキシマブ、プリツムマブ、ＰＲＯ１４０、キリズマブ、ラコツモマブ、ラドレツマブ、ラビルマブ、ラルパンシズマブ、ラムシルマブ、ラニビズマブ、ラキシバクマブ、レファネズマブ、レガビルマブ、レスリズマブ、リロツムマブ、リヌクマブ、リツキシマブ、ロバツムマブ、ロレドマブ（Roledumab）、ロモソズマブ、ロンタリズマブ、ロベリズマブ、ルプリズマブ、サマリズマブ、サリルマブ、サツモマブペンデチド、セクキヌマブ、セリバンツマブ、セトキサキシマブ、セビルマブ、シブロツズマブ、ＳＧＮ－ＣＤ１９Ａ、ＳＧＮ－ＣＤ３３Ａ、シファリムマブ、シルツキシマブ、シムツズマブ、シプリズマブ、シルクマブ、ソツズマブベドチン、ソラネズマブ、ソリトマブ、ソネプシズマブ、ソンツズマブ、スタムルマブ、スレソマブ、スビズマブ、タバルマブ、タカツズマブテトラキセタン、タドシズマブ、タリズマブ、タネズマブ、タプリツマブパプトックス、タレクツマブ（Tarextumab）、テバズマブ（Te bazumab）、テリモマブアリトックス、テナツモマブ、テネリキシマブ、テプリズマブ、テプロツムマブ、テシドルマブ、ＴＧＮ１４１２、チシリムマブ（トレメリムマブ）、ティルドラキズマブ、チガツズマブ、ＴＮＸ６５０、トシリズマブ（アトリズマブ）、トラリズマブ、トサトクスマブ、トシツモマブ、トベツマブ、トラロキヌマブ、トラスツズマブ、ＴＲＢＳ０７、トレガリズマブ、トレメリムマブ、ツコツズマブセルモロイキン、ツビルマブ、ウブリツキシマブ、ウロクプルマブ、ウレルマブ、ウルトキサズマブ、ウステキヌマブ、バンドルツズマブベドチン、バンチクツマブ、バヌシズマブ、バパリキシマブ、バルリルマブ（Varlilumab）、バテリズマブ、ベドリズマブ、ベルツズマブ、ベパリモマブ、ベセンクマブ、ビシリズマブ、ボロシキシマブ、ボルセツズマブマフォドチン、ボツムマブ（Votumumab）、ザルツムマブ、ザノリムマブ、ザツキシマブ、ジラリムマブ、又はゾリモマブアリトックス（Zolimomab aritox）を含む治療剤との組み合わせで投与される。
限定されないが、がん腫、肉腫、リンパ腫、白血病、リンパ腫、及び芽細胞腫などの、当該技術分野で知られている任意のがん型が含まれうる。そのようながんのより具体的な例には、限定されないが、肺がん、扁平上皮がん、脳腫瘍、神経膠芽細胞腫、頭頸部がん、肝細胞がん、結腸直腸がん（例えば、結腸又は直腸がん）、肝臓がん、膀胱がん、胃（gastric又はstomach）がん、膵臓がん、子宮頸がん、卵巣がん、尿路がん、乳がん、腹膜がん、子宮がん、唾液腺がん、腎臓（kidney又はrenal）がん、前立腺がん、外陰がん、甲状腺がん、肛門がん 、陰茎がん、黒色腫、多発性骨髄腫及びＢ細胞リンパ腫（非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）；メルケル細胞がん；へアリー細胞白血病；慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）；及び関連する転移が含まれる。
ここで提供されるコンジュゲートはまた当業者に周知の包装材料を使用する製造品として提供することができる。例えば、米国特許第５３２３９０７号；第５０５２５５８号；及び第５０３３２５２号を参照のこと。薬学的包装材料の例には、限定されないが、ブリスターパック、ボトル、チューブ、吸入器、ポンプ、バッグ、バイアル、容器、シリンジ、及び選択された製剤と意図された投与と治療の方法に適した任意の包装材料が含まれる。
ここにまた提供されるのは、医療従事者によって使用される場合、対象への適切な量の活性成分の投与を簡素化することができるキットである。所定の実施態様では、ここに提供されるキットは、容器とここに提供されるコンジュゲートの剤形を含む。
所定の実施態様では、キットは、ここに記載される一又は複数の他の治療薬を含む容器中にここに提供されるコンジュゲートの剤形を含む容器を含む。
ここで提供されるキットは、活性成分を投与するために使用される装置を更に含みうる。そのような装置の例には、限定されないが、シリンジ、無針注射器ドリップバッグ、パッチ、及び吸入器が含まれる。ここで提供されるキットはまた活性成分の投与のためのコンドームを含みうる。
ここで提供されるキットは、一又は複数の活性成分を投与するために使用することができる薬学的に許容可能なビヒクルを更に含みうる。例えば、非経口投与のために再構成しなければならない固体形態で活性成分が提供される場合、キットは、活性成分を溶解して非経口投与に適した粒子のない滅菌溶液を形成することができる適切なビヒクルの密封容器を含みうる。薬学的に許容可能なビヒクルの例には、限定されないが、注射用水ＵＳＰ、塩化ナトリウム注射液、リンガー注射液、デキストロース注射液、デキストロース及び塩化ナトリウム注射液、及び乳酸リンゲル注射液を含む、水性ビヒクル；限定されないが、エチルアルコール、ポリエチレングリコール、及びポリプロピレングリコールを含む、水混和性ビヒクル；及び限定されないが、コーン油、綿実油、落花生油、ゴマ油、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、及び安息香酸ベンジルを含む、非水性ビヒクルが含まれる。
開示は次の非限定的実施例によって更に理解される。
実施例１．ヌクレオチドとポリヌクレオチドの合成と精製
免疫調節性ポリヌクレオチドとその前駆体の例示的合成を以下に記載する。
［前駆体］
本発明のポリヌクレオチドの調製に有用な前駆体は、国際公開第２０１５／１８８１９７号に提供されている（例えば、ホスホラミダイト、ターゲティング部分、及びＰＥＧ鎖を含む生物可逆性基）。
［ホスホラミダイトと他のモノマー］
本発明のポリヌクレオチドの合成に有用なヌクレオシド含有中間体は、国際公開第２０１５／１８８１９７号に開示されている（国際公開第２０１５／１８８１９７号における例えば化合物Ｕ１－Ｕ５４、Ａ１－Ａ１５、Ｃ１－９、及びＧ１－Ｇ１２）。
市販のホスホラミダイトは、Ｇｌｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｓｔｅｒｌｉｎｇ，ＶＡ）又はＣｈｅｍＧｅｎｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）から購入した。他のホスロアミダイトを、必要に応じて、ここでの他の場所に記載した標準的反応条件を使用して適切に保護されたヌクレオシドから調製した。
［化合物Ｓ６１Ｂ］
Figure 0007536025000194
ＤＣＭ（５．０ｍＬ）中のＳ６１（０．４８ｇ，２．０ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｓ６１Ａ（０．６０ｇ，２．０ｍｍｏｌ）とＥＴＴ（アセトニトリル中０．２５Ｍ，４．８ｍＬ，１．２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２時間撹拌した。揮発性物質の蒸発により残留物を得、これを、酢酸エチル／ヘキサンを使用してフラッシュシリカゲルカラム精製（Ｃｏｍｂｉ Ｆｌａｓｈ Ｒｆ機器で０－３０％勾配）に供し、無色の油として化合物Ｓ６１Ｂ（０．４９ｇ，５５％）を得た。３１Ｐ ＮＭＲ（２０２ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３；ｐｐｍ）：δ１４７．８３（ｓ）。
［化合物Ｓ１０８］
Figure 0007536025000195
ジオキサン（１００ｍＬ）中の２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］エタノール（Ｓ１０８Ａ，２５．０ｇ，１６７ｍｍｏｌ）及びＮ－メチルモルホリン（２１．０ｍＬ，１９１ｍｍｏｌ）の撹拌混合物に、ジオキサン（５０ｍＬ）中のＦｍｏｃ－ＯＳｕ（６２．２ｇ，１８４ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加えた。一晩撹拌した後、反応物を真空中で濃縮して、淡黄色の油を得た。粗物質をＥｔＯＡｃに再溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３（水性）及びブラインで洗浄した。有機層を真空中で除去して油を得、これをＳｉＯ２クロマトグラフィーによって精製して、ＦｍｏｃＮＨ－ＰＥＧ２－ＯＨ（Ｓ１０８，５５ｇ，８８％収率）を得た。ＥＳＩ＋ ｍ／ｚ 計算値３７１．４，実測値３７２．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
Ｘ１及びＸ２脱塩基スペーサー合成－一般スキーム：
Figure 0007536025000196
［化合物Ｓ１１０］
Figure 0007536025000197
アルゴン下０℃においてＴＨＦ（４０ｍＬ）中のＮａＨ（１３．２ｇ，鉱物油中６０％，２３０．０ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＴＨＦ（２０ｍＬ）中のジオール（Ｓ１０９，４．９２ｇ，２２．０ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加えた；得られた混合物を室温まで温め、１時間撹拌した。反応混合物を０℃に冷却し、ＴＨＦ（２５ｍＬ）中の臭化プロパルギル（１８．６ｇ，１５８．４ｍｍｏｌ）の溶液をゆっくりと加え、得られた混合物を室温まで温め、４０℃において一晩撹拌した。ＴＬＣで観察して生成物が消費した後、０℃で水を滴下して加えて反応をクエンチし、得られた混合物をジクロロメタン（５０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させて残留物を得、これを、ＩＳＣＯコンパニオン（ヘキサン／酢酸エチル，０－３０％）を使用してフラッシュシリカゲルカラムによって精製して、５．９２ｇ（８９．５％）の化合物Ｓ１１０を油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３；ｐｐｍ）：δ７．４９－７．４７（ｄｄ，Ｊ８．０，１．５Ｈｚ，２Ｈ），７．３８－７．３４（ｍ，３Ｈ），５．４３（ｓ，１Ｈ），４．２１（ｄ，Ｊ２．５Ｈｚ，２Ｈ），４．１２（ｔ，Ｊ２．５Ｈｚ，４Ｈ），４．１０（ｓ，１Ｈ），３．９１（ｓ，１Ｈ），３．８９（ｓ，１Ｈ），３．３７（ｓ，２Ｈ）；Ｃ１８Ｈ２０Ｏ４に対するＥＳＩ ＭＳ 計算値３００．３４，実測値［Ｍ＋Ｈ］＋３０１．３。
［化合物Ｓ１１１］
Figure 0007536025000198
ビス－プロパルギル化合物Ｓ１１０（５．９ｇ，１９．６４ｍｍｏｌ）を酢酸／水混合物（６０ｍＬ，７５：２５）に溶解させ、５０℃において反応を２時間継続した。反応の完了後、溶液を蒸発させ、トルエン（２×２０ｍＬ）で共蒸発させた。残留物を、ＩＳＣＯコンパニオン（ヘキサン／酢酸エチル、２０－８０％）を使用するフラッシュシリカゲルカラムを使用して、ワークアップなしで直接精製して、３．０２ｇ（７２．５％）の化合物Ｓ１１１を油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３：ｐｐｍ）：δ４．１５（ｄ，Ｊ２．５Ｈｚ，４Ｈ），３．６８（ｓ，４Ｈ），３．５９（ｓ，４Ｈ），２．４４（ｔ，Ｊ２．５Ｈｚ，２Ｈ），２．３０－２．４０（ｂｒ，２Ｈ）；Ｃ１１Ｈ１６Ｏ４に対してのＥＳＩ ＭＳ 計算値２１２．２４，実測値［Ｍ＋Ｈ］＋２１３．２。
［化合物Ｓ１１２］
Figure 0007536025000199
０℃においてジクロロメタン（２５ｍＬ）中のジオールＳ１１１（３．０ｇ，１４．２ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（３．１５ｍＬ，１７．０ｍｍｏｌ）、及びＤＭＡＰ（０．３６ｇ，２．８３ｍｍｏｌ）の溶液に、ジクロロメタン（４０ｍＬ）中のジメトキシトリチルクロリド（４．８ｇ，１４．２ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加え、室温において一晩反応を続けた。混合物をジクロロメタンで希釈し、水と続いてブラインで洗浄し、有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。得られた残留物を、ＩＳＣＯコンパニオン（ヘキサン／酢酸エチル，０－４０％）を使用してフラッシュシリカゲルカラムで精製し、５．２９ｇ（７３％）のモノＤＭＴ保護化合物Ｓ１１２を白色固形物として得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３：ｐｐｍ）：δ７．４－７．４２（ｍ，２Ｈ），７．３２－７．３１（ｍ，４Ｈ），７．２８－７．２５（ｍ，２Ｈ），６．８４－６．８１（ｍ，４Ｈ），４．０９（ｄ，Ｊ２．５Ｈｚ，４Ｈ），３．７９（ｓ，６Ｈ），３．６７（ｄ，Ｊ６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．６４－３．５６（ｍ，４Ｈ），３．１３（ｓ，２Ｈ），２．３９（ｔ，Ｊ２．５Ｈｚ，２Ｈ）；Ｃ３２Ｈ３４Ｏ６に対するＥＳＩ ＭＳ 計算値５１４．６，実測値［Ｍ＋Ｎａ］＋ ５３７．４。
［化合物Ｓ１１３］
Figure 0007536025000200
ジクロロメタン（４ｍＬ）中のＤＭＴ保護化合物Ｓ１１２（０．５ｇ，０．９８ｍｍｏｌ）の溶液に、室温においてジクロロメタン（３ｍＬ）中の２’－シアノエチル－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトライソプロピルホスホラミダイト（０．５８ｇ，１．９５ｍｍｏｌ）の溶液を、ついでアルゴン雰囲気下で５－ベンジルチオ－１Ｈ－テトラゾール（ＢＴＴ；アセトニトリル中の０．２５Ｍ溶液，０．７８ｍＬ，０．１８ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。反応を開始物質が消失するまで継続し（２時間）、粗混合物を２０ｍＬのジクロロメタンで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１０ｍＬ）とブライン（１０ｍＬ）で順次洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空中で蒸発させ、３％のトリエチルアミンを含む酢酸エチル／ヘキサンを共溶媒として使用する（Ｃｏｍｂｉ Ｆｌａｓｈ Ｒｆ機器で０－３０％勾配）シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、０．５３ｇの化合物Ｓ１１３（７５％）を油として得た。Ｃ４１Ｈ５１Ｎ２Ｏ７Ｐに対するＥＳＩ ＭＳ 計算値７１４．８２，実測値７１５．６［Ｍ＋Ｈ］＋；３１Ｐ ＮＭＲ（２０２ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１４７．８９。
［化合物Ｓ１１４］
Figure 0007536025000201
アルゴン雰囲気下で８．０ｍＬの無水ジクロロメタン中のＤＭＴ保護化合物Ｓ１１２（０．９８ｇ，１．９ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．３９ｍＬ，２．０９ｍｍｏｌ）の－７８℃溶液に、ビス－（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルアミノ）－クロロホスフィン（０．５６ｇ，２．０９ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（４．０ｍＬ）溶液を滴下して加えた。反応混合物を、撹拌を１時間維持しながら、室温まで温めた。２．０ｍＬの無水ジクロロメタン中の３－ブチン－１－オール（０．１４ｇ，１．９ｍｍｏｌ）の溶液を室温において加えた；得られた混合物を１０分間撹拌し、その時点でアセトニトリル中のＥＴＴの０．２５Ｍ溶液（４．６ｍＬ，１．１５ｍｍｏｌ）を加え、更に３時間撹拌を続けた。ＴＬＣによる出発物質の消失により観察して、反応完了後、粗混合物を２０ｍＬのジクロロメタンで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１０ｍＬ）とブライン（１０ｍＬ）で順次洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。揮発性物質を真空中で蒸発させ、粗混合物を、溶媒系として３％のトリエチルアミンと共に酢酸エチル／ヘキサン（Ｃｏｍｂｉ Ｆｌａｓｈ Ｒｆ機器で０－４０％勾配）を使用するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、０．３３ｇの化合物Ｓ１１４（２５％）を油として得た。Ｃ４２Ｈ５２ＮＯ７Ｐに対するＥＳＩ ＭＳ 計算値７１３．８３，実測値７１４．７［Ｍ＋Ｈ］＋；３１Ｐ ＮＭＲ（２０２ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１４６．８９。
Ｘ３及びＸ４脱塩基スペーサーの合成－一般スキーム：
Figure 0007536025000202
［化合物Ｓ１１６］
Figure 0007536025000203
化合物Ｓ１１６を、化合物Ｓ１１０について記載したプロトコルを使用して油として９１％の収率で調製した。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３；ｐｐｍ）：δ７．５１（ｄ，Ｊ７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．３７－７．３２（ｍ，３Ｈ），５．５６（ｓ，１Ｈ），３．３７－３．３５（ｍ，４Ｈ），４．１０－４．０７（ｄｄ，Ｊ１３．０Ｈｚ，Ｊ２．５Ｈｚ，２Ｈ），３．６５－３．６４（ｍ，１Ｈ），２．４３－２．４２（ｔ，Ｊ６．５Ｈｚ，１Ｈ）；Ｃ１３Ｈ１４Ｏ３に対するＥＳＩ ＭＳ 計算値２１８．２４，実測値［Ｍ＋Ｈ］＋ ２１９．２。
［化合物Ｓ１１７］
Figure 0007536025000204
化合物Ｓ１１７を、化合物Ｓ１１１について記載したプロトコルを使用して油として９１％の収率で調製した。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３；ｐｐｍ）：δ４．３３（ｓ，２Ｈ），３．８３－３．７０（ｍ，５Ｈ），２．４８（ｓ，１Ｈ），２．０４（ｂｒ，２Ｈ）；Ｃ６Ｈ１０Ｏ３に対するＥＳＩ ＭＳ 計算値１３０．１４，実測値［Ｍ＋Ｎａ］＋１５３．０。
［化合物Ｓ１１８］
Figure 0007536025000205
化合物Ｓ１１８を、化合物Ｓ１１２について記載したプロトコルを使用して白色固形物として５４％の収率で調製した。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３；ｐｐｍ）：δ７．４３（ｄ，Ｊ７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．３７－７．２７（ｍ，５Ｈ），７．２３－７．１６（ｍ，２Ｈ），６．８３（ｄ，Ｊ９．０Ｈｚ，３Ｈ），６．７８－６．７６（ｄｄ Ｊ８．５Ｈｚ，１Ｈ），４．３５－４．２２（ｍ，２Ｈ），３．７７（ｓ，６Ｈ）３．７６－３．７２（ｍ，２Ｈ），３．７１－３．６４（ｍ，１Ｈ），３．２７－３．１９（ｍ，２Ｈ），２．４８（ｔ，Ｊ４．５Ｈｚ，１Ｈ），２．０３－１．９６（ｍ，１Ｈ）；Ｃ２７Ｈ２８Ｏ５に対するＥＳＩ ＭＳ 計算値４３２．５０，実測値［Ｍ＋Ｎａ］＋ ４５５．４。
［化合物Ｓ１１９］
Figure 0007536025000206
化合物Ｓ１１９を、化合物Ｓ１１３について記載したプロトコルを使用して油として８６％の収率で調製した。Ｃ３６Ｈ４５Ｎ２Ｏ６Ｐに対するＥＳＩ ＭＳ 計算値４３２．７２，実測値４３３．５［Ｍ＋Ｈ］＋；３１Ｐ ＮＭＲ（２０２ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１４９．０５，１４８．９６。
［化合物Ｓ１２０］
Figure 0007536025000207
化合物Ｓ１２０を、化合物Ｓ１１４について記載したプロトコルを使用して油として４７％の収率で調製した。Ｃ３７Ｈ４６ＮＯ６Ｐに対するＥＳＩ ＭＳ 計算値４３１．７３，実測値４３２．５［Ｍ＋Ｈ］＋；３１Ｐ ＮＭＲ（２０２ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１４７．８０，１４７．７１。
Ｘ５及びＸ６脱塩基スペーサーの合成－一般スキーム：
Figure 0007536025000208
［化合物Ｓ１２１］
Figure 0007536025000209
ジオキサン（２５ｍＬ）中のＳ１１６（４．０ｇ，２２．２ｍｍｏｌ）の溶液に最小量の水に溶解したＫＯＨ（０．１２ｇ，２．２ｍｍｏｌ）の溶液を加え、得られた混合物を室温において少なくとも３０分間撹拌した。この混合物を０℃に冷却し、ジオキサン（１５ｍＬ）中のアクリロニトリル（２．３５ｇ，４４．４ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加え、得られた混合物を室温において一晩反応させた。揮発性物質を真空中で蒸発させ、残留物を水で希釈し、ｐＨを中性近くに調整した。粗生成物を酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させて残留物を得、これを、ＩＳＣＯコンパニオン（ジクロロメタン／メタノール，０－５％）を使用するフラッシュシリカゲルカラムによって精製して、３．１ｇ（６０％）の化合物Ｓ１２１を白色固形物として得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３；ｐｐｍ）：δ７．４９（ｄ，Ｊ７．０Ｈｚ，２Ｈ），７．３６－７．３４（ｍ，３Ｈ），５．５６（ｓ，１Ｈ），３．３６（ｄ，Ｊ １３．０Ｈｚ ２Ｈ），４．１０－４．０７（ｄｄ，Ｊ １３．０Ｈｚ，Ｊ ２．０Ｈｚ，２Ｈ），３．８４（ｔ，Ｊ ６．５Ｈｚ，２Ｈ），３．４２（ｍ，１Ｈ），３．６９（ｔ，Ｊ ６．５Ｈｚ，２Ｈ）；Ｃ１３Ｈ１５ＮＯ３に対するＥＳＩ ＭＳ 計算値２３３．２，実測値［Ｍ＋Ｎａ］＋ ２５６．３。
［化合物Ｓ１２２］
Figure 0007536025000210
０℃でのＴＨＦ（１０ｍＬ）中の水素化アルミニウムリチウム（０．８３ｇ，４．０ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＴＨＦ（１５ｍＬ）中の化合物Ｓ１２１（１．２８ｇ，５．５ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加え、得られた混合物を室温まで温め、撹拌を３時間続けた。反応の完了後、反応混合物を０℃に冷却し、必要に応じて水（約２－３ｍＬ）を滴下して加えてクエンチした。追加の約８ｍＬの水を加え、粗生成物を酢酸エチル（２×２５ｍＬ）に抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させて化合物Ｓ１２２を得、これを更に精製することなく次の工程で使用した。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３；ｐｐｍ）：δ７．４９（ｄ，Ｊ ７．０Ｈｚ，２Ｈ），７．４０－７．３２（ｍ，３Ｈ），５．５５（ｄ，Ｊ ５．０Ｈｚ，１Ｈ），４．３４（ｄ，Ｊ １３．０Ｈｚ，１Ｈ），４．２０－４．１１（ｄｄ，Ｊ １２．０Ｈｚ ４Ｈ），４．０５－４．０３（ｄ，Ｊ １３．０Ｈｚ，Ｊ ２．０Ｈｚ，１Ｈ），３．６６－３．６２（ｍ，２Ｈ），３．２７（ｍ，１Ｈ），２．８６（ｔ，Ｊ ６．５Ｈｚ，１Ｈ），２．１６（ｂｒ，２Ｈ）；Ｃ１３Ｈ１９ＮＯ３に対するＥＳＩ ＭＳ 計算値２３７．２，実測値［Ｍ＋Ｈ］＋ ２３８．２。
［化合物Ｓ１２３］
Figure 0007536025000211
０℃でのジクロロメタン（８ｍＬ）中の化合物Ｓ１２２（１．０ｇ，４．２ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（２．３ｍＬ，１２．６ｍｍｏｌ）に、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕ（１．７ｇ，５．０ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加え、得られた混合物を室温において３時間反応させた。完了後、反応混合物をジクロロメタン（１０ｍＬ）で希釈し、水と続いてブラインで洗浄した。有機層を分離し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させて残留物を得た。残留物を、ＩＳＣＯコンパニオン（ヘキサン／酢酸エチル，０－５０％）を使用するフラッシュシリカゲルカラムによって精製して、０．６５ｇ（３５％）の化合物Ｓ１２３を白色固形物として得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３；ｐｐｍ）：δ７．７５（ｄ，Ｊ ７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．５８（ｄ，Ｊ ７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．５１（ｄ，Ｊ ７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．３７（ｔ，Ｊ ７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．３１－７．２６（ｍ，５Ｈ），５．５７（ｓ，１Ｈ），５．４８（ｂｒ，１Ｈ），４．４６－４．３２（ｍ，４Ｈ），４．１５（ｄ，Ｊ ７．０Ｈｚ，１Ｈ），４．０６（ｔ，Ｊ １２．５Ｈｚ ２Ｈ），３．６７（ｍ，２Ｈ），３．５４（ｍ，２Ｈ），３．４１（ｓ，１Ｈ），１．８８（ｔ，Ｊ ６．０Ｈｚ，２Ｈ）；Ｃ２８Ｈ２９ＮＯ５に対するＥＳＩ ＭＳ 計算値４５９．５，実測値［Ｍ＋Ｎａ］＋ ４８２．５。
［化合物Ｓ１２４］
Figure 0007536025000212
化合物Ｓ１２４を、化合物Ｓ１１１について記載したプロトコルを使用して、油として定量的収率で調製した。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３；ｐｐｍ）：δ７．７６（ｄ，Ｊ ７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．５８（ｄ，Ｊ ７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．３９（ｔ，Ｊ ７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．３２（ｔ，Ｊ ７．５Ｈｚ，２Ｈ），５．１８（ｂｒ，１Ｈ），４．４４（ｄ，Ｊ ６．５Ｈｚ，２Ｈ），４．２１（ｔ，Ｊ ６．５Ｈｚ，１Ｈ），４．７６－４．７３（ｄｄ，Ｊ １１．５，３．５Ｈｚ ２Ｈ），３．６７－６０（ｍ，４Ｈ），３．４２（ｍ，１Ｈ），３．３７（ｂｒ，２Ｈ），２．０７（ｍ，２Ｈ），１．７５（ｂｒ，２Ｈ）；Ｃ２１Ｈ２５ＮＯ５に対するＥＳＩ ＭＳ 計算値３７１．４，実測値［Ｍ＋Ｎａ］＋ ３９４．３。
［化合物Ｓ１２５］
Figure 0007536025000213
化合物Ｓ１２５を、化合物Ｓ１１２について記載したプロトコルを使用して、白色固形物として４８％の生成物（Ｓ１２５）収率で調製した。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３；ｐｐｍ）：δ７．７５（ｔ，Ｊ ７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．５８（ｔ，Ｊ ７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．４０－７．３８（ｍ，３Ｈ），７．３２－２７（ｍ，７Ｈ），７．１８－７．１６（ｍ，３Ｈ），６．８３（ｔ，Ｊ ７．０Ｈｚ，４Ｈ），５．１６（ｂｒ，１Ｈ），４．４４（ｄ，Ｊ ６．５Ｈｚ，２Ｈ），４．２０（ｍ，１Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ），３．７９（ｍ，１Ｈ），３．７６（ｓ，３Ｈ），３．７４（ｍ，２Ｈ），３．６６－３．６２（ｍ，４Ｈ），３．４３－３．３７（ｍ，２Ｈ），２．３１（ｂｒ，１Ｈ），１．７６（ｂｒ，２Ｈ）；Ｃ４２Ｈ４３ＮＯ７に対するＥＳＩ ＭＳ 計算値６７３．７，実測値［Ｍ＋Ｎａ］＋ ６９６．７。
［化合物Ｓ１２６］
Figure 0007536025000214
化合物Ｓ１２６を、化合物Ｓ１１３について記載したプロトコルを使用して、油として７８％の生成物（Ｓ１２６）収率で調製した。Ｃ５１Ｈ６０Ｎ３Ｏ８Ｐに対するＥＳＩ ＭＳ 計算値８７４．０，実測値８９６．９［Ｍ＋Ｎａ］＋，９１３．０［Ｍ＋Ｋ］＋；３１Ｐ ＮＭＲ（２０２ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３；ｐｐｍ）：δ１４８．９０，１４８．７６。
脱塩基スペーサーＳ１３１の合成－一般スキーム：
Figure 0007536025000215
［化合物Ｓ１２７］
Figure 0007536025000216
アルゴン下でジクロロメタン（５０ｍＬ）中のＳ１０９（２．５６ｇ，１１．４ｍｍｏｌ）の溶液に、ブロモアセトニトリル（３．０１ｇ，２５．１ｍｍｏｌ）、酸化銀（Ｉ）（５．２８ｇ，２２．８ｍｍｏｌ）、及びヨウ化テトラブチルアンモニウム（０．８４ｇ，２．２８ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を一晩撹拌した。混合物をセライト（登録商標）で濾過し、濾液を蒸発させて黒色残留物を得、これをＩＳＣＯコンパニオン（ヘキサン／酢酸エチル，１５－９０％）でのフラッシュシリカゲルカラム精製に供して、１．３４ｇ（３９％）の所望の化合物Ｓ１２７を粘稠な油として得た。Ｃ１６Ｈ１８Ｎ２Ｏ４に対するＥＳＩ ＭＳ 計算値３０２．３，実測値［Ｍ＋Ｈ］＋ ３０３．３。
［化合物Ｓ１２８］
Figure 0007536025000217
ＴＨＦ（３０ｍＬ）中の化合物Ｓ１２７（１．３４ｇ，４．４３ｍｍｏｌ）の溶液に、アルゴン下でＴＨＦ（２Ｍ，８．９ｍＬ，１７．７ｍｍｏｌ）中のＬｉＡｌＨ４の溶液を加え、混合物を４時間５５℃に加熱した。ＴＨＦ中のＬｉＡｌＨ４のもう一部（２Ｍ，４ｍＬ，８．０ｍｍｏｌ）を加え、撹拌を４時間続けた。反応の完了後、混合物を室温まで冷却し、Ｎａ２ＳＯ４・１０Ｈ２Ｏでクエンチした。固形物を濾別し、酢酸エチルで洗浄した。濾液を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。混合物を濾過し、蒸発させて残留物を得、これをジクロロメタン（２０ｍＬ）に溶解した。この溶液に、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕ（１．５ｇ，４．４３ｍｍｏｌ）とＤＩＥＡ（０．８７ｍＬ，５．０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１時間撹拌し、ついで蒸発させて残留物を得、これをＩＳＣＯコンパニオン（ヘキサン／酢酸エチル，２０－９０％）でのフラッシュシリカゲルカラム精製に供して、１．０４ｇ（３１％）の化合物Ｓ１２８を白色泡状物として得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３；ｐｐｍ）：δ７．７５（４Ｈ，ｄｄ，Ｊ ７．５，４．５Ｈｚ），７．５８（４Ｈ，ｔ，Ｊ ７．０Ｈｚ），７．４８（２Ｈ，ｄ，Ｊ ７．０Ｈｚ），７．４１－７．３４（７Ｈ，ｍ），７．３２－７．２６（４Ｈ，ｍ），５．４４（１Ｈ，ｓ），５．１５－５．０５（２Ｈ，ｍ），４．４４（２Ｈ，ｄ，Ｊ ５．５Ｈｚ），４．３８（２Ｈ，ｄ，Ｊ ６．０Ｈｚ），４．２５－４．１５（２Ｈ，ｍ），４．１０（２Ｈ，ｄ，Ｊ １１．５Ｈｚ），３．８２（２Ｈ，ｄ，Ｊ １１．５Ｈｚ），３．７８（２Ｈ，ｓ），３．５３（２Ｈ，ｓ），３．４２（２Ｈ，ｓ），３．３６－３．２７（４Ｈ，ｍ），３．２５（２Ｈ，ｓ）；Ｃ４６Ｈ４６Ｎ２Ｏ８に対するＥＳＩ ＭＳ 計算値７５４．９，実測値［Ｍ＋Ｈ］＋ ７５５．３。
［化合物Ｓ１２９］
Figure 0007536025000218
化合物Ｓ１２８（１．１ｇ，１．５１ｍｍｏｌ）をＡｃＯＨ／Ｈ２Ｏ混合物（１０ｍＬ，３：１）に溶解させ、反応を５５℃で５時間続けた。反応の完了後、揮発性物質を蒸発させ、トルエン（２×２０ｍＬ）と共蒸発させ、残留物をＩＳＣＯコンパニオン（ヘキサン／酢酸エチル，３０－１００％）でフラッシュシリカゲルカラム精製に供して、０．５４ｇ（５４％）の化合物Ｓ１２９を白色泡状物として得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３；ｐｐｍ）：δ７．７５（４Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５Ｈｚ），７．５８（４Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５Ｈｚ），７．３９（４Ｈ，ｔ，Ｊ ７．５Ｈｚ），７．３０（４Ｈ，ｔ，Ｊ ７．５Ｈｚ），５．２０－５．０５（２Ｈ，ｍ），４．４１（４Ｈ，ｄ，Ｊ ６．５Ｈｚ），４．２１（４Ｈ，ｔ，Ｊ ６．５Ｈｚ），３．６４（４Ｈ，ｓ），３．４８（８Ｈ，ｓ），３．３６（４Ｈ，ｓ）；Ｃ３９Ｈ４２Ｎ２Ｏ８に対するＥＳＩ ＭＳ 計算値６６６．７，実測値［Ｍ＋Ｈ］＋ ６６７．３。
［化合物Ｓ１３０］
Figure 0007536025000219
０℃でのジクロロメタン（６ｍＬ）中のジオールＳ１２９（０．７３ｇ，１．１ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．１９ｍＬ，１．１ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（０．０１３ｇ，０．１１ｍｍｏｌ）の溶液に、ジクロロメタン（１ｍＬ）中のＤＭＴｒＣｌ（ ０．３４ｇ，０．９９ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。得られた混合物を室温まで温め、一晩撹拌した。混合物を蒸発させて残留物を得、これをＩＳＣＯ（ヘキサン／酢酸エチル，２０－１００％）でのフラッシュシリカゲルカラム精製に供して、０．４７ｇ（４４％）のモノジメトキシトリチル保護化合物Ｓ１３０を白色泡状物として得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３；ｐｐｍ）：δ７．７５（４Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５Ｈｚ），７．５８（４Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５Ｈｚ），７．３９（４Ｈ，ｔ，Ｊ ７．５Ｈｚ），７．３２－７．２５（８Ｈ，ｍ），７．１７（４Ｈ，ｄ，Ｊ ６．５Ｈｚ），６．８３（４Ｈ，ｄ，Ｊ ６．５Ｈｚ），５．２０－５．０５（２Ｈ，ｍ），４．４１（４Ｈ，ｄ，Ｊ ６．５Ｈｚ），４．２１（４Ｈ，ｔ，Ｊ ６．５Ｈｚ），３．８２（６Ｈ，ｓ），３．６４（４Ｈ，ｓ），３．４８（８Ｈ，ｓ），３．３６（４Ｈ，ｓ）；Ｃ６０Ｈ６０Ｎ２Ｏ１０に対するＥＳＩ ＭＳ 計算値９６９．１，実測値［Ｍ＋Ｎａ］＋ ９９１．３。
［化合物Ｓ１３１］
Figure 0007536025000220
無水ＣＨ２Ｃｌ２（１．０ｍＬ）中のビス－（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルアミノ）－クロロホスフィン（０．０８５ｇ，０．３２ｍｍｏｌ）の溶液を、－７８℃の無水ＣＨ２Ｃｌ２（３．０ｍＬ）中の３－Ｆｍｏｃ－アミノ－プロパン－１－オール（０．０９０ｇ，０．３０ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．１８ｍＬ，１．０５ｍｍｏｌ）の溶液に滴下して加えた。反応混合物を室温まで温め、１．５時間撹拌した。１．０ｍＬの無水ＣＨ２Ｃｌ２中の化合物Ｓ１３０（０．３０ｇ，０．３０ｍｍｏｌ）の溶液を加え、得られた混合物を１０分間撹拌した。ＥＴＴの溶液（０．７２ｍＬ，アセトニトリル中０．２５Ｍ，０．１８ｍｍｏｌ）を反応混合物に加え、得られた混合物を３時間撹拌した。混合物をＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）で希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（２０ｍＬ）及びブライン（２０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾液を真空中で蒸発させて残留物を得、これを、共溶媒系（０－３０％の勾配）として３％のトリエチルアミンと共に酢酸エチル／ヘキサンを使用するＩＳＣＯコンパニオンでのフラッシュシリカゲルカラム精製に供し、０．１２ｇの生成物Ｓ１３１（３２％）を白色泡状物として得た。Ｃ８４Ｈ９１Ｎ４Ｏ１３Ｐに対するＥＳＩ ＭＳ 計算値１３９５．６，実測値１３９５．７［Ｍ］＋；３１Ｐ ＮＭＲ（２０２ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１４６．４１。
［化合物ｄＴ４］
Figure 0007536025000221
ＦｍｏｃＮＨ－ＰＥＧ２－ヒドロキシル－ジイソプロピルアミノ－ｄＴ（５’－ＤＭＴ）ホスホラミダイト（ｄＴ４）の合成。ＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ）中の５’－ＤＭＴ－デオキシチミジン（４．３０ｇ，７．８９ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（１．５１ｍＬ，８．６８ｍｍｏｌ）の撹拌懸濁液を、アルゴン下で－７８℃に冷却した。ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中のビス（ジイソプロピルアミノ）クロロホスフィン（２．３２ｇ，８．６８ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加えた。混合物を冷却浴から取り出し、１時間撹拌した。ＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）中のＦｍｏｃＮＨ－ＰＧＥ２－ＯＨ（Ｓ１０８，２．９３ｇ，７．８９ｍｍｏｌ）を反応混合物に加え、続いてＥＴＴの溶液（アセトニトリル中０．２５Ｍ，１８．９ｍＬ）を加えた。一晩撹拌した後、混合物を真空中で濃縮し、ＥｔＯＡｃに再溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３（水性）とブラインで洗浄した。有機層を真空中で除去して白色泡状物を得た。この粗物質をＳｉＯ２クロマトグラフィーで精製して、表題のホスホラミダイト（ｄＴ４，４．１ｇ，５０％収率）を得た。
上に記載した合成プロトコルを、様々なトリエステルの他のホスホラミダイト前駆体の合成に使用した。
［化合物ｄＵ６］
Figure 0007536025000222
室温においてＡｒ（ｇ）下でＴＨＦ（１０ｍＬ）中のｄＵ１（３．３ｇ，５．０ｍｍｏｌ）、１－メチルイミダゾール（１．２ｍＬ，１５．０ｍｍｏｌ）及びヨウ素（１．９ｇ，１５．０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＨＦ（５ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルクロリド（０．８ｇ，５．５ｍｍｏｌ）の溶液を撹拌しながら滴下して加えた。反応物を室温において１時間撹拌した。ＴＬＣにより反応の完了を確認した。溶媒を真空中で除去し、粗物質を酢酸エチルに溶解し、水性Ｎａ２Ｓ２Ｏ３（濃）で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過して液を蒸発させた。粗物質を、ＩＳＣＯコンパニオン（ヘキサン／酢酸エチル，０－５０％）を使用するフラッシュシリカゲルカラムによって精製して、ｄＵ２を固形物として定量的収率で得た。ＮＭＲは公表されているものと一致。Nucleic Acids Research, 2011, Vol. 39, No. 9, 3962-3971。
トリイソプロピルシラン（１．０ｍＬ，５．０ｍｍｏｌ）を含む８０％の酢酸水溶液（４０ｍＬ）に溶解させたｄＵ２（３．９ｇ，５．０ｍｍｏｌ）の溶液を、室温において１時間撹拌した。ＴＬＣにより反応の完了を確認した。真空中で溶媒を除去した。粗物質を、ＩＳＣＯコンパニオン（ヘキサン／酢酸エチル，０－６０％）を使用するフラッシュシリカゲルカラムによって精製して、１ｇ（４３％）の所望の化合物ｄＵ３を固形物として得た。Ｃ１５Ｈ２５ＩＮ２Ｏ５Ｓｉに対するＥＳＩ ＭＳ 計算値４６８．４，実測値［Ｍ＋Ｎａ］＋ ４９１．０。
Ａｒ（ｇ）下で氷水浴中で０℃に冷却したＴＨＦ（２０ｍＬ）中のｄＵ３（１．０ｇ，２．２ｍｍｏｌ）の溶液に、水素化ナトリウム（６０％分散液，０．２ｇ，４．７ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を０℃において３０分間撹拌した。ヨードメタン（０．７ｍＬ，１０．８ｍｍｏｌ）を滴下して加え、反応物を０℃において３時間撹拌した。ＲＰ－ＨＰＬＣ／ＭＳにより反応の完了を確認した。反応を０℃において２０ｍＬのメタノールでクエンチし、室温まで温めた。水性ＮａＨＣＯ３（飽和）を加え、混合物をＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、液を真空中で濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル，０－５０％）による精製により、固形物のｄＵ４（０．６ｇ，５８％収率）を得た。Ｃ１６Ｈ２７ＩＮ２Ｏ５Ｓｉに対するＥＳＩ ＭＳ 計算値４８２．４，実測値［Ｍ＋Ｈ］＋ ４８３．１。
フッ化Ｔｅｒｔ－ブチルアンモニウム（１Ｍ ＴＨＦ，３ｍＬ，３．０ｍｍｏｌ）を、Ａｒ（ｇ）下でＴＨＦ（２０ｍＬ）に溶解したｄＵ４（０．６ｇ，１．３ｍｍｏｌ）の冷却（０℃）溶液に撹拌しながら滴下して加えた。冷却した溶液を３０分間撹拌した後、室温まで温めた。３．５時間後、ＲＰ－ＨＰＬＣ／ＭＳにより反応の完了を確認した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール，０－１０％）により精製して、固形物のｄＵ５（０．４ｇ，９２％収率）を得た。Ｃ１０Ｈ１３ＩＮ２Ｏ５に対するＥＳＩ ＭＳ 計算値３６８．１，実測値［Ｍ＋Ｈ］＋ ３６９．０。
室温においてＡｌ（ｇ）下でジクロロメタン（５ｍＬ）中のｄＵ５（０．４ｇ，１．２ｍｍｏｌ）の溶液に、ジクロロメタン（５ｍＬ）中の２’－シアノエチル－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトライソプロピルホスホラミダイト（０．４ｍＬ，１．３ｍｍｏｌ）の溶液を撹拌しながら滴下して加えた。反応物を室温において３０分間撹拌した。次に、エチルチオテトラゾール（ＡＣＮ中の０．２５Ｍ溶液、２．９ｍＬ，０．７ｍｍｏｌ）を加え、反応を一晩続けた。ＴＬＣにより反応の完了を確認した。溶媒を真空中で除去し、粗混合物を２０ｍＬのジクロロメタンで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１０ｍＬ）とブライン（１０ｍＬ）で連続して洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過して液を蒸発させた。粗混合物を酢酸エチルに溶解させ、Ｉｓｃｏコンパニオン（ヘキサン／酢酸エチル，０－１００％）を使用するシリカゲルカラムにより精製して、０．３ｇ（４９．９％）の所望の化合物ｄＵ６を固形物として得た。Ｃ１９Ｈ３０Ｎ４Ｏ６Ｐに対するＥＳＩ ＭＳ 計算値５６８．３，実測値５６７．３［Ｍ－Ｈ］－；３１Ｐ ＮＭＲ（２０２ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ｐｐｍ）：δ１４９．２５。
［化合物ｄＵ９］
以下に示す標準的反応条件下でｄＵ３を反応させることにより、表題化合物を調製した。３１Ｐ－ＮＭＲ（２０２ｍＨｚ，ＣＤＣｌ３，ｐｐｍ）：δ１４９．４２，１４９．３１；ＭＳ ＥＳＩ－ｍ／ｚ実測値６６７．１［Ｍ－Ｈ］。ＭＳ ＥＳＩ＋ｍ／ｚ実測値６６９．２［Ｍ＋Ｈ］，６９１．３［Ｍ＋Ｎａ］。
Figure 0007536025000223
補助部分に結合したリンカーの調製：
［化合物ＰＰ２、ＰＰ３、及びＰＰ４］
Figure 0007536025000224
（５－アジドバレリル）－ε－Ｎ－Ｂｏｃリジン（ＰＰ１）の調製。ε－Ｎ－Ｂｏｃリジン（９．４６ｇ，３８．４ｍｍｏｌ）とＫ２ＣＯ３（２．６７ｇ，１９．３ｍｍｏｌ）を、１：１のＴＨＦ：Ｈ２Ｏ（６０ｍＬ）に溶解させた。ＴＨＦ（１０ｍＬ）中のペンタフルオロフェニル－５－アジドバレレート（１０．８ｇ，３４．９ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温において一晩撹拌した。所望の生成物をＲＰ－ＨＰＬＣ－ＭＳにより実測した，３９４．２［Ｍ＋Ｎａ］。反応物を１ＮのＨＣｌ（水性）での滴定によりｐＨ５に酸性化し、生成物をＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）で抽出した。有機層をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）とブライン（５０ｍＬ）で順次洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮して濃厚なシロップを得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、所望の生成物ＰＰ２を白色の針状物として得た（８．１ｇ、６２％収率）。ＥＳＩ ＭＳ＋質量計算値Ｃ１６Ｈ２９Ｎ５Ｏ５：３７１．４，実測値：３９４．２［Ｍ＋Ｎａ］＋。
ＰＰ１のペグ化のための一般的プロトコル：（５－アジドバレリル）－ε－Ｎ－（ＮＨ－ＢｏｃＰＥＧ２４）リジン（ＰＰ４）の調製。ＰＰ１（０．７４ｇ，２．０ｍｍｏｌ）をＨＣｌ（２ｍＬ，ジオキサン中４Ｎ）で４時間処理した。ＨＰＬＣ－ＭＳは完全な脱保護を示した、２７２．２［Ｍ＋Ｈ］＋。反応物を１：１のＨ２Ｏ：アセトニトリル（１０ｍＬ）で希釈し、凍結させ、一晩凍結乾燥させて、ＰＰ２を白色固形物として定量的収率で得た。ＤＭＦ（３ｍＬ）中のＮＨＢｏｃ－ＰＥＧ２４酸（１．１ｇ，０．８８ｍｍｏｌ）をＨＡＴＵ（０．３４ｇ，０．８８ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（０．１４ｇ，０．８８ｍｍｏｌ）、及びＤＩＥＡ（０．７ｍＬ，４．０ｍｍｏｌ）で活性化させ、ＰＰ２（０．２４ｇ，０．８ｍｍｏｌ）で２時間処理した。ＲＰ－ＨＰＬＣＭＳは、所望のＰＰ４の形成を示した。粗物質をＲＰ－ＨＰＬＣにより精製して、ＰＰ４を白色固形物として得た（０．５５ｇ，４６％収率）。ＥＳＩ ＭＳ＋質量計算値Ｃ６７Ｈ１３０Ｎ６Ｏ３０：１４９９．７７，実測値：１４９９．９［Ｍ＋Ｈ］＋，１４００．８［Ｍ－Ｂｏｃ］＋。
Figure 0007536025000225
ＢｉｓＰｅｇＸ－ＮＨ２及びＴｒｉｓＰｅｇＸ－ＮＨ２（ここで、Ｘ＝様々なＰＥＧ長）を、国際公開第２０１５／１８８１９７号に記載された手順を使用して、市販の出発材料から調製した。
ＰＰ２、ＰＰ３、及びＰＰ４のペグ化のための一般的プロトコル：ＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解したリジンＰＰ１（３８ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）を、ＨＡＴＵ（３７ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（４９ｍＬ，０．３ｍｍｏｌ）、及びｍＰＥＧ４８－ＮＨ２（２００ｍｇ，０．０９ｍｍｏｌ）で処理した。ＲＰ－ＨＰＬＣ－ＭＳは、ＰＰ１への完全なＰＥＧ４８の添加を示した。粗生成物をＲＰ－ＨＰＬＣにより精製して、ＮＨＢｏｃＰＰ７を白色固形物として得た（９７ｍｇ，４２％収率）。ＥＳＩ ＭＳ＋質量計算値Ｃ１１３Ｈ２２４Ｎ６Ｏ５２：２４９９．０３，実測値：８３３．７［Ｍ＋３Ｈ］３＋，６２５．６［Ｍ＋４Ｈ］４＋。ＰＰ７をＨＣｌ（２ｍＬ，ジオキサン中４Ｎ）で４時間脱保護した。出発物質の質量を有するピークの消失によって観察して、ＨＰＬＣ－ＭＳは完全な脱保護を示した。反応物を１：１のＨ２Ｏ：アセトニトリル（１０ｍＬ）で希釈し、凍結させ、一晩凍結乾燥させて、白色固形物ＰＰ８を定量的に得た。ＥＳＩ ＭＳ＋質量計算値Ｃ１０８Ｈ２１６Ｎ６Ｏ５０：２３９８．８８，実測値：１１９９．８［Ｍ＋２Ｈ］２＋，８００．３［Ｍ＋３Ｈ］３＋，６００．５［Ｍ＋４Ｈ］４＋，４８０．６［Ｍ＋５Ｈ］５＋。
Figure 0007536025000226
このスキームにおいて、条件は以下の通りである：
Ａ）６－メチルテトラジン－ＯＳｕ、ＨＡＴＵ、ヒューニッヒの塩基、ＤＭＦ；及び
Ｂ）ＤＢＣＯ－ＣｐＧ、アセトニトリル／Ｈ２Ｏ；
ここで、６－メチルテトラジン－ＯＳｕは次の式のものである：
Figure 0007536025000227
及び
ＤＢＣＯ－ＣｐＧは次の式のものである：
Figure 0007536025000228
［ポリヌクレオチド（ＰＰ２８及びＰＰ３０）を添加したリンカーの調製のための一般的プロトコル］
ＰＰ１２及びＰＰ１６のテトラジン－コンジュゲーションハンドル：ＰＰ１２（４３ｍｇ，０．１２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（０．５ｍＬ）に溶解させ、ＨＡＴＵ（４．６ｍｇ，０．１２ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（１２．７μＬ，０．７３ｍｍｏｌ）で、そして５分後に６－メチル－テトラジン－ＯＳｕ（１９．９ｍｇ，０．６１ｍｍｏｌ）で処理した。粗反応物を室温において３０分間撹拌した。ＲＰ－ＨＰＬＣＭＳにより、６－メチル－テトラジンカルボキシレートのＰＰ１２への完全なカップリングが示された。粗生成物をＲＰ－ＨＰＬＣにより精製し、プールした画分を凍結乾燥して、ＰＰ２７を紫色の固形物として得た（３９ｍｇ，８５％収率）。ＥＳＩ ＭＳ＋質量計算値Ｃ１７０Ｈ３２５Ｎ１１Ｏ７６：３７３９．４７，実測値：８３３．７［Ｍ＋３Ｈ］３＋，６２５．６［Ｍ＋４Ｈ］４。純粋なＰＰ２７をアセトニトリル：水（１：１）中のＤＢＣＯ－ＣｐＧで処理し、３７℃において１－２時間、室温において更に１時間インキュベートして、ＰＰ２８を得た。ＰＰ２８を分取ＡＥＸ（２０ｍＭのホスフェート及び２０ｍＭのホスフェート－１Ｍの臭化ナトリウム）によって精製した。
ＣｐＧを添加したリンカーＰＰ２８及びＰＰ３０への代替のワンポット経路。ＰＰ１２（４００ｎｍｏｌ）をアセトニトリル：水（１：１）中のＤＢＣＯ－ＣｐＧ（４２０ｎｍｏｌ）で処理し、３７℃において１－２時間、ついで室温において更に１時間インキュベートする。ＤＭＳＯ原液中のテトラジン－ＯＳｕ（４０００ｎｍｏｌ）を粗ＰＰ１２－ＤＢＣＯ－ＣｐＧ溶液に加え、紫色の溶液を３時間室温において１－２時間反応させてＰＰ２８を得る。粗ＰＰ２８を分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（水中５０ｍＭのＴＥＡＡ及び１０％アセトニトリル：水）又は分取ＡＥＸ（２０ｍＭのリン酸塩及び２０ｍＭのリン酸塩－１Ｍの臭化ナトリウム）によって精製した。
テトラジン－ＰＥＧ２４－ＯＰＦＰ（ＰＰ３２）の調製。Ａｒ（ｇ）下でＤＭＦ／水（１：１，１２ｍＬ）中のアミノ－ＰＥＧ２４－カルボン酸（１．０ｇ，０．９ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．８ｍＬ，４．４ｍｍｏｌ）の溶液にＤＭＦ（３ｍＬ）中のメチルテトラジンフェニルアセチルスクシンイミジルエステル（３７０ｍｇ，１．１ｍｍｏｌ）を撹拌しながら滴下して加えた。反応物を室温において２時間撹拌した。ＲＰ－ＨＰＬＣ／ＭＳにより生成物の形成が示された。溶媒を真空中で除去し、粗物質をＲＰ－ＨＰＬＣ（ＴＦＡモディファイヤー）によって精製して、ＰＰ３１，１．１ｇ（８０％）を得た。Ｃ６２Ｈ１１１Ｎ５Ｏ２７に対するＥＳＩ ＭＳ 計算値１３５８．５６，実測値［Ｍ＋Ｈ］＋１３５８．８。Ａｒ（ｇ）下でジクロロメタン（３ｍＬ）中のＰＰ３１（１０９ｍｇ，０．０８ｍｍｏｌ）の溶液に、無水ピリジン（３２ｍｇ，０．４ｍｍｏｌ）及びペンタフルオロフェニルトリフルオロアセテート（６７ｍｇ，０．２４ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温において一晩撹拌した。溶媒を真空中で除去した。粗生成物をＥｔＯＡｃに再溶解させ、水性ＮａＨＣＯ３（５％ｗ／ｖ）（３×）及びブライン（１×）で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、ＰＰ３２を定量的に得た。更に精製することなく次の工程で使用した。Ｃ６８Ｈ１１０Ｆ５Ｎ５Ｏ２７に対するＥＳＩ ＭＳ計算値１５２４．６１，実測値［Ｍ＋２Ｈ］２＋ ７６３．０。
Figure 0007536025000230
ＰＰ３４の調製。Ａｒ（ｇ）下でＤＭＦ／水（１：１，１０ｍＬ）中のｍＰＥＧ４８－アミン（２．１５ｇ，１．００ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．８７ｍＬ，５．００ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＭＦ（５ｍＬ）中のＮα－Ｃｂｚ－Ｎε－Ｂｏｃ－Ｌ－リジンスクシンイミジルエステル（５７０ｍｇ，１．２ｍｍｏｌ）を撹拌しながら滴下して加えた。反応混合物を室温において２時間撹拌した。ＲＰ－ＨＰＬＣ／ＭＳにより、生成物ＰＰ３３の形成が示された。反応混合物を真空中で濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ ０－１０％）により精製した。回収したＰＰ３３を次の反応において直接使用した。Ｃ１１６Ｈ２２３Ｎ３Ｏ５３に対するＥＳＩ ＭＳ 計算値２５０８．０，［Ｍ＋３Ｈ］３＋ ８３６．７，［Ｍ＋４Ｈ］４＋ ６２７．９実測値。ＭｅＯＨ中のＰＰ３３（１．００ｍｍｏｌ）の溶液を窒素（ｇ）でフラッシングし、活性炭担持パラジウム（１０重量％，触媒）を加えた。溶液を交互に排気し、水素（ｇ）（３Ｘ）をパージした。２時間後のＲＰ－ＨＰＬＣ／ＭＳにより、ＰＰ３４の形成が示された。不均一な混合物をセライト層を通して濾過し、大量のメタノールで洗浄した。真空中で溶媒を除去して、ＰＰ３４を得た（２．０ｇ，８４％収率、２工程）。Ｃ１０８Ｈ２１７Ｎ３Ｏ５１に対するＥＳＩ ＭＳ 計算値２３７３．８７，［Ｍ＋３Ｈ］３＋ 実測値７９２．０。
Figure 0007536025000231
ＰＰ３７の調製。Ａｒ（ｇ）下でＤＭＦ／水（１：１，１０ｍＬ）中のＰＰ３２（１２４ｍｇ，０．０８ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（３１ｍｇ，０．２４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＭＦ／水（１：１，１０ｍＬ）中のＰＰ３４（２３０ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）を撹拌しながら滴下して加えた。反応物を室温において２時間撹拌し、ＲＰ－ＨＰＬＣ／ＭＳにより生成物ＰＰ３５の形成が示された。溶媒を真空中で除去し、ＰＰ３５を更に精製することなく次の工程で使用した。Ｃ１７０Ｈ３２６Ｎ８Ｏ７７に対するＥＳＩ ＭＳ 計算値３７１４．４，［Ｍ＋４Ｈ］４＋ ９２９．５，［Ｍ＋５Ｈ］５＋ ７４３．８実測値。粗ＰＰ３５（０．０８ｍｍｏｌ）をＡｒ（ｇ）下でＨＣｌ（ジオキサン中４Ｎ，５ｍＬ）で処理した。反応物を室温において２時間撹拌し、ＲＰ－ＨＰＬＣ／ＭＳにより、Ｂｏｃ保護基の完全な除去が示された。溶媒を真空中で除去し、アミンを、ＤＭＦ（５ｍＬ）及びジイソプロピルエチルアミン（１４０μＬ，０．８ｍｍｏｌ）中のビス－Ｐｅｇ３－ＰＦＰエステル（２３０ｍｇ，０．４ｍｍｏｌ）の溶液でアシル化した。２時間後、ＲＰ－ＨＰＬＣ／ＭＳにより、生成物ＰＰ３７の形成が示された。溶媒を真空中で除去し、粗物質をＲＰ－ＨＰＬＣ（ＴＦＡモディファイヤー）によって精製して、ＰＰ３７をテトラ－ＴＦＡ塩として、３１ｍｇ、８．７％の収率で得た。Ｃ１８１Ｈ３３３Ｆ５Ｎ８Ｏ８１に対するＥＳＩ ＭＳ 計算値４０１２．５６，実測値［Ｍ＋３Ｈ］３＋ １３３８．３，［Ｍ＋４Ｈ］４＋ １００４．０，［Ｍ＋５Ｈ］５＋ ８０３．４，［Ｍ＋６Ｈ］６＋ ６６９。
［補助部分を含むリンカーのリスト］
Figure 0007536025000232
Figure 0007536025000233
上の表において、Ｙ又はＺとして特定された基は、次の構造を有する：
Figure 0007536025000234
上の表において、「ｐ３１３＋Ｎ３－バレルアミド」として特定された基Ｚは、ｐ３１３と、ＺとしてＮ３－バレルアミドを有するリンカーとの間の環化付加反応の生成物を指す。
表１に示されるホスホラミダイトモノマーは、ここと国際公開第２０１５／１８８１９７号に記載されている標準的な合成手順を使用して合成した。
キラルホスホロチオエートオリゴヌクレオチド合成に使用される二環式オキサアザホスホリジンモノマーは、Wada, J. Am. Chem. Soc. 130:16031-16037, 2008によって報告されている文献のプロトコルを使用して調製した。
Figure 0007536025000235
Figure 0007536025000236
Figure 0007536025000237
Figure 0007536025000238
Figure 0007536025000239
Figure 0007536025000240
Figure 0007536025000241
Figure 0007536025000242
［キラル脱塩基スペーサー－化合物Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９及びＸ１０］
Figure 0007536025000243
［Ｘ７及びＸ８の合成］
Figure 0007536025000244
［Ｘ９及びＸ１０の合成］
Figure 0007536025000245
次は、当該技術分野で知られている方法とここに記載の方法を使用して調製することができる更なる親水性ヌクレオシドホスホラミダイトである：
Figure 0007536025000246
ここで、ＲはＯＨ、置換されていてもよいアミノ、又は－ＣＯ２Ｒ１（Ｒ１はＨ又は対イオンである）であり、ｎは１から４の整数である；
Figure 0007536025000247
ここで、ＲはＯＨ、ＯＡｃ、ＯＭｅ、置換されていてもよいアミノ、又はＣＯ２Ｒ１（Ｒ１はＨ又は対イオンである）であり、ｎは１から５１の整数である。
次は、当該技術分野で知られている方法とここに記載の方法を使用して調製することができる更なる置換ヌクレオシドホスホラミダイトである：
Figure 0007536025000248
ここで、Ｒ及びＲ１のそれぞれは、独立してＨ又は置換されていてもよいＣ１－６アルキル（例えば、Ｍｅ、Ｅｔ、ｉ－Ｐｒ、又はｎ－Ｂｕ）である。
次のホスホラミダイトは、Ｇｌｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｓｔｅｒｌｉｎｇ，ＶＡ）又はＣｈｅｍＧｅｎｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）から購入されるか、又はここに記載の標準的プロトコルを使用して調製される：
Figure 0007536025000249
Figure 0007536025000250
これらの中間体は、本発明のポリヌクレオチド（例えば、５’末端修飾ヌクレオシドを含むポリヌクレオチド）の調製に使用することができる。５’末端修飾ヌクレオシドの非限定的な例は、５－ハロウリジン、５－アルキニルウリジン、５－ヘテロアリールウリジン、及び５－ハロシチジンである。
５’－キャッピング：
ａ）５’－５’－キャッピング：
Figure 0007536025000251
ｂ）５’－ホスフェート又はホスホロチオエートキャッピング：
Figure 0007536025000252
［小分子系ターゲティング部分の合成］
小分子系ターゲティング部分の調製に有用な例示的な化合物は、国際公開第２０１５／１８８１９７号に記載されている（例えば、国際公開第２０１５／１８８１９７号に記載されている化合物Ｍ１－Ｍ３０）。
［グルシトール補助部分の合成］
グルシトール系補助部分の調製に有用な例示的な化合物は、国際公開第２０１５／１８８１９７号に記載されている（例えば、国際公開第２０１５／１８８１９７号に記載されている化合物ＰＯＨ１－ＰＯＨ１０）。
［一般的ポリヌクレオチド合成］
一般的スキーム：
［実験の詳細］
自動ポリヌクレオチド合成（１μｍｏｌスケール）を、次の試薬及び溶媒を用いてＭｅｒＭａｄｅ６又は１２で実施した：
酸化剤－ＴＨＦ／ピリジン／Ｈ２Ｏ中０．０２ＭのＩ２（１サイクル当たり６０秒の酸化）、
浸硫試薬ＩＩ－ジチアゾール誘導体／ピリジン／アセトニトリル（０．０５Ｍ，６：４ピリジン：アセトニトリル中）（１サイクル当たり６０秒）
デブロック－３％のトリクロロ酢酸（１サイクル当たり２×４０秒のデブロック）、
キャップミックスＡ－ＴＨＦ／２，６－ルチジン／Ａｃ２Ｏ（１サイクル当たり６０秒のキャッピング）、及び
キャップミックスＢ－ＴＨＦ中１６％のメチルイミダゾール（１サイクル当たり６０秒のキャッピング）
標準的なポリヌクレオチド合成条件に対する例外は次の通りであった：
－ Ｕｎｙ－リンカーと呼ばれる非ヌクレオシドリンカーを含むＣＰＧ担体を使用した。
－ 全ての２’－デオキシリボース－ホスホラミダイトは、合成前に１００％の無水アセトニトリルに１００ｍＭまで再懸濁させた。但し、一部の修飾２’－デオキシ－ホスホラミダイトは、出発物質の溶解度に応じてＴＨＦ／アセトニトリル混合物（１：４）に１００ｍＭまで溶解させた。
－ ホスホラミダイトの活性化は、２．５倍モル過剰の５－ベンジルチオ－１Ｈ－テトラゾール（ＢＴＴ）を用いて実施した。活性化された２’－デオキシリボース－ホスホラミダイトを、挿入ごとに２×１分間のカップリングでカップリングさせ、修飾されたホスホラミダイトは、挿入ごとに２×３分間のカップリングでカップリングさせた。
－ 骨格の硫化を、ピリジン／アセトニトリル（６：４）中の０．０５Ｍの浸硫試薬ＩＩを用いて１分間実施した。
［ポリヌクレオチドの脱保護及び精製プロトコル］
自動ポリヌクレオチド合成に続いて、固体担体及び塩基保護基（Ａ－Ｂｚ、Ｃ－Ａｃ、Ｇ－ｉＢｕなど）及びホスホトリエステルのメチルエステルを、室温で２時間以上、１ｍＬのＡＭＡ（メタノール中１：１の比の３６％水性アンモニアと４０％メチルアミン）で切断し脱保護し続いて遠心蒸発させた。
粗ポリヌクレオチドペレットを１００μＬの５０％アセトニトリルに再懸濁させ、６５℃に手短に加熱し、十分にボルテックスした。
ポリヌクレオチドの精製では、１００μＬの粗ポリヌクレオチドを、次のバッファー／勾配でＲＰ－ＨＰＬＣに注入した：
－ バッファーＡ＝水中５０ｍＭのＴＥＡＡ；
－ バッファーＢ＝９０％のアセトニトリル；及び
－ 流量＝１ｍＬ／分；
－ 勾配：
・ ０－２分（１００％バッファーＡ／０％バッファーＢ）、
・ ２－４２分（０％から６０％のバッファーＢ）、及び
・ ４２－５５分（６０％から１００％のバッファーＢ）。
［ＤＢＣＯコンジュゲーション及び精製プロトコル］
ここで記載するように、ＤＢＣＯ ＮＨＳエステルを粗２’－デオキシＤＭＴ－ポリヌクレオチドにコンジュゲートさせた。粗ポリヌクレオチドペレットを４５μＬのＤＭＳＯに懸濁させ、６５℃に手短に加熱し、十分にボルテックスした。５μＬのＤＩＰＥＡを加え、続いてＤＢＣＯ－ＮＨＳエステル（３０当量）を加え、ＤＭＳＯ（１Ｍ）に予め溶解させた。反応を１０分間、又は生成物の形成がＭＡＬＤＩによって確認されるまで放置した。合計８０μＬの粗ポリヌクレオチドサンプルを、次のバッファー／勾配を用いてＲＰ－ＨＰＬＣに注入した：
－ バッファーＡ＝水中５０ｍＭのＴＥＡＡ
－ バッファーＢ＝９０％のアセトニトリル
－ 流量＝１ｍＬ／分
－ 勾配：
・ ０－２分（９０％バッファーＡ／１０％バッファーＢ）
・ ２－４２分（０％から６０％のバッファーＢ）
・ ４２－５５分（６０％から１００％のバッファーＢ）。
ドミナントなＲＰ－ＨＰＬＣピークにわたって、０．５ｍＬの画分を集め、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析によって分析して、所望の質量の存在を確認した。質量を選択され、精製された画分を凍結し凍結乾燥した。乾燥した後、画分を再懸濁し、対応する画分と合わせ、凍結し凍結乾燥した。
ＤＭＴ切断：凍結乾燥ペレットを２０μＬの５０％アセトニトリルに懸濁し、８０μＬの酢酸を加え、サンプルを室温において１時間静置し、凍結し凍結乾燥した。乾燥したサンプルを２０％アセトニトリルに再溶解し、ＮＡＰ１０（ＳｅｐｈａｄｅｘＴＭ－Ｇ２５ ＤＮＡグレード）カラムで脱塩した。集めた純粋な画分を、最終生成物のために凍結し凍結乾燥した。
［脱塩基スペーサーを使用する一般的コンジュゲーションスキーム］
クリック反応－一般的スキーム：
Figure 0007536025000254
ここで、
各ｑは、０又は１であり；
各ｍは、０から５の整数であり；
Ｚは、Ｏ又はＳであり；
ＲＯは、ポリヌクレオチド中のヌクレオシドへの結合であり；
Ｒは、Ｈ、ポリヌクレオチド中のヌクレオシド、固体担体、又はキャッピング基（例えば、－（ＣＨ２）３－ＯＨ）への結合であり；
各Ｒ’は独立して、Ｈ、－Ｑ１－ＱＡ１、生物可逆性基、又は非生物可逆性基であり；
各Ｒ”は独立して、Ｈ、－Ｑ１－ＱＡ－Ｑ２－Ｔ、生物可逆性基、又は非生物可逆性基であり；
各ＲＡは独立して、Ｈ又は－ＯＲＣ（ここで、ＲＣは－Ｑ１－ＱＡ１、生物可逆性基、非生物可逆性基、又は固体担体への結合である）であり；
各ＲＢは独立して、Ｈ又は－ＯＲＤ（ここで、ＲＤは－Ｑ１－ＱＡ－Ｑ２－Ｔ、生物可逆性基、又は非生物可逆性基である）であり；
ここで、
各Ｑ１は独立して、二価、三価、四価、又は五価の基で、一つの結合価がＱＡ又はＱＡ１に結合し；第二の結合価は開いており、残りの結合価のそれぞれは、存在する場合、独立して補助部分に結合しており；
各Ｑ２は独立して、二価、三価、四価、又は五価の基で、一つの結合価がＱＡに結合し；第二の結合価はＴに結合し、残りの結合価のそれぞれは、存在する場合、独立して補助部分に結合しており；
ＱＡは、１，２，３－トリアゾール－１，４－ジイル、置換されていてもよいＣ６－１６トリアゾロヘテロシクリレン
Figure 0007536025000255
置換されていてもよいＣ８－１６トリアゾロシクロアルケニレン
Figure 0007536025000256
又はジヒドロピリダジン基
Figure 0007536025000257
であり；
ＱＡ１は、置換されていてもよいＣ２－１２アルキニル、環内炭素－炭素三重結合
Figure 0007536025000258
を含む置換されていてもよいＣ６－１６ヘテロシクリル、置換されていてもよいＣ８－１６シクロアルキニル
Figure 0007536025000259
又は置換されていてもよいＣ４－８ひずみシクロアルケニル（例えば、トランス－シクロオクテニル）であり；かつ
Ｔはターゲティング部分であり、
但し、出発物質が少なくとも一つの－Ｑ１－ＱＡ１を含み、かつ生成物が－Ｑ１－ＱＡ－Ｑ２－Ｔを含み；かつ
但し、出発物質及び生成物が、固体担体への０又は１の結合を含む。
［コンジュゲーション法］
［Ｃｕ触媒クリック反応］
［銅－ＴＨＰＴＡ錯体の調製］
硫酸銅五水和物（ＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ）の５ｍＭ水溶液とトリス（３－ヒドロキシプロピルトリアゾリルメチル）アミン（ＴＨＰＴＡ）の１０ｍＭ水溶液を１：１（ｖ／ｖ）（１：２のモル比）で混合し、室温で１時間放置した。この錯体は、例えば、以下の一般的なコンジュゲーションスキームに示されているように、ヒュスゲン環化付加を触媒するために使用することができる。
［一般的手順（１００ｎＭスケール）］
１．７ｍＬのエッペンドルフ管中の７１０μＬの水と１００μＬのｔｅｒｔ－ブタノール（１０％の最終容量）の溶液に、６０μＬの銅－ＴＨＰＴＡ錯体と、続いて５０μＬのオリゴの２ｍＭ溶液、６０μＬの２０ｍＭアスコルビン酸ナトリウム水溶液及び２０μＬのターゲティング部分－アジドの１０ｍＭ溶液を加えた。徹底的に混合した後、溶液を室温で１時間放置した。反応の完了は、ゲル分析によって確認した。反応混合物を、５－１０倍モル過剰のＳｉｌｉａＭｅｔＳ（登録商標）ＴＡＡｃＯＮａ（樹脂結合ＥＤＴＡナトリウム塩）を含むスクリューキャップバイアルに添加する。混合物を１時間撹拌する。次に、この混合物をｉｌｌｕｓｔｒａＴＭＮａｐＴＭ－１０カラムＳｅｐｈａｄｅｘＴＭで溶出させる。次に、得られた溶液を凍結させ、一晩凍結乾燥させる。
［アミド結合によるコンジュゲーション］
アミド化によるコンジュゲーションは、当該技術分野で知られているアミド化反応条件下で実施することができる。例えば、 Aaronson等, Bioconjugate Chem. 22:1723-1728, 2011を参照のこと。
Figure 0007536025000260
ここで、
各ｑは、０又は１であり；
各ｍは、０から５の整数であり；
Ｚは、Ｏ又はＳであり；
ＲＯは、ポリヌクレオチド中のヌクレオシドへの結合であり；
Ｒは、Ｈ、ポリヌクレオチド中のヌクレオシド、固体担体、又はキャッピング基（例えば、－（ＣＨ２）３－ＯＨ）への結合であり；
各Ｒ’は独立して、Ｈ、－Ｑ１－ＱＡ１、生物可逆性基、又は非生物可逆性基であり；
各Ｒ”は独立して、Ｈ、－Ｑ１－ＱＡ－Ｑ２－Ｔ、生物可逆性基、又は非生物可逆性基であり；
各ＲＡは独立して、Ｈ又は－ＯＲＣ（ここで、ＲＣは－Ｑ１－ＱＡ１、生物可逆性基、非生物可逆性基、又は固体担体への結合である）であり；
各ＲＢは独立して、Ｈ又は－ＯＲＤ（ここで、ＲＤは－Ｑ１－ＱＡ－Ｑ２－Ｔ、生物可逆性基、又は非生物可逆性基である）であり；
ここで、
各Ｑ１は独立して、二価、三価、四価、又は五価の基で、一つの結合価がＱＡ又はＱＡ１に結合し；第二の結合価は開いており、残りの結合価のそれぞれは、存在する場合、独立して補助部分に結合しており；
各Ｑ２は独立して、二価、三価、四価、又は五価の基で、一つの結合価がＱＡに結合し；第二の結合価はＴに結合し、残りの結合価のそれぞれは、存在する場合、独立して補助部分に結合しており；
ＱＡは、－Ｃ（Ｏ）－Ｎ（Ｈ）－又は－Ｎ（Ｈ）－Ｃ（Ｏ）－を含む置換されていてもよいＣ２－１２ヘテロアルキレンであり；
ＱＡ１は、－ＮＨＲＮ１又は－ＣＯＯＲ１２であり、ここで、ＲＮ１はＨ、Ｎ－保護基、又は置換されていてもよいＣ１－６アルキルであり、Ｒ１２はＨ、置換されていてもよいＣ１－６アルキル、又はＯ－保護基であり；かつ
Ｔはターゲティング部分であり、
但し、出発物質は少なくとも一つの－Ｑ１－ＱＡ１を含み、かつ生成物は－Ｑ１－ＱＡ－Ｑ２－Ｔを含む。
［液相コンジュゲーション］
Figure 0007536025000261
ここで、
ｍは、０から５の整数であり；
Ｚは、Ｏ又はＳであり；
ＲＯは、ポリヌクレオチド中のヌクレオシドへの結合であり；
Ｒは、Ｈ、ポリヌクレオチド中のヌクレオシド、又はキャッピング基への結合であり；
各Ｒ’は独立して、Ｈ、－Ｑ１－ＮＨ２、生物可逆性基、又は非生物可逆性基であり；
各Ｒ”は独立して、Ｈ、－Ｑ１－ＮＨ－ＣＯ－Ｑ２－Ｔ、生物可逆性基、又は非生物可逆性基であり；
各ＲＡは独立して、Ｈ又は－ＯＲＣ（ここで、ＲＣは－Ｑ１－ＮＨ２、生物可逆性基、又は非生物可逆性基である）であり；
各ＲＢは独立して、Ｈ又は－ＯＲＤ（ここで、ＲＤは－Ｑ１－ＮＨ－ＣＯ－Ｑ２－Ｔ、生物可逆性基、又は非生物可逆性基である）であり；
ここで、
各Ｑ１は独立して、二価、三価、四価、又は五価の基で、一つの結合価が－ＮＨ－ＣＯ－又は－ＮＨ２に結合し；第二の結合価は開いており、残りの結合価のそれぞれは、存在する場合、独立して補助部分に結合しており；
各Ｑ２は独立して、二価、三価、四価、又は五価の基で、一つの結合価が－ＮＨ－ＣＯ－に結合し；第二の結合価はＴへの結合であり、残りの結合価のそれぞれは、存在する場合、独立して補助部分に結合しており；かつ
Ｔはターゲティング部分であり、
但し、出発物質は少なくとも一つの－Ｑ１－ＮＨ２を含み、かつ生成物は－Ｑ１－ＮＨ－ＣＯ－Ｑ２－Ｔを含む。
［担体上コンジュゲーション］
Figure 0007536025000262
ここで、
Ｚは、Ｏ又はＳであり；
ＲＯは、ポリヌクレオチド中のヌクレオシドへの結合であり；
各Ｑ２は独立して、二価、三価、四価、又は五価の基で、一つの結合価が－ＮＨ－ＣＯ－に結合し；第二の結合価はＴへの結合であり、残りの結合価のそれぞれは、存在する場合、独立して補助部分に結合しており；かつ
Ｔはターゲティング部分である。
Figure 0007536025000263
ここで、
ｎは、１から８の整数であり；
Ａは、Ｏ又は－ＣＨ２－であり；
Ｚは、Ｏ又はＳであり、
ＲＯは、ポリヌクレオチド中のヌクレオシドへの結合であり；
各Ｑ２は独立して、二価、三価、四価、又は五価の基で、一つの結合価がアジド又はトリアゾールに結合し；第二の結合価はＴに結合し、残りの結合価のそれぞれは、存在する場合、独立して補助部分に結合しており；かつ
Ｔはターゲティング部分である。
Figure 0007536025000264
ここで、
ｎは、１から８の整数であり；
Ａは、Ｏ又は－ＣＨ２－であり；
Ｚは、Ｏ又はＳであり、
ＲＯは、ポリヌクレオチド中のヌクレオシドへの結合であり；
各Ｑ２は独立して、二価、三価、四価、又は五価の基で、一つの結合価がアジド又はトリアゾールに結合し；第二の結合価はＴに結合し、残りの結合価のそれぞれは、存在する場合、独立して補助部分に結合しており；かつ
Ｔはターゲティング部分である。
Figure 0007536025000265
ここで、
ｎは、１から８の整数であり；
Ａは、Ｏ又は－ＣＨ２－であり；
Ｚは、Ｏ又はＳであり、
ＲＯは、ポリヌクレオチド中のヌクレオシドへの結合であり；
各Ｑ２は独立して、二価、三価、四価、又は五価の基で、一つの結合価がアジド又はトリアゾールに結合し；第二の結合価はＴに結合し、残りの結合価のそれぞれは、存在する場合、独立して補助部分に結合しており；かつ
各Ｔは独立してターゲティング部分である。
［ホスホトリエステルのＦｍｏｃ脱保護の代表的な例］
Ｆｍｏｃ保護アミンを有するホスホトリエステルを含むポリヌクレオチドを脱保護条件に供し、ホスホトリエステルのホスホジエステルへの観察可能な転換なしにＦｍｏｃ脱保護を行った。
Figure 0007536025000266
ｐ６８へのＤＢＣＯ－ＮＨＳコンジュゲーション－代表的な例：
質量分析によって証明されるように、ホスホトリエステル中のアミノ基へのＤＢＣＯ－ＮＨＳコンジュゲーションは、室温において１０分で完了した。
Figure 0007536025000267
ＤＢＣＯコンジュゲート基を含むｐ６８（表２を参照）のＲＰ－ＨＰＬＣ精製を、次の条件を使用して実施した：
－ バッファーＡ＝水中５０ｍＭのＴＥＡＡ；
－ バッファーＢ＝９０％のアセトニトリル；及び
－ 流量＝１ｍＬ／分；
－ 勾配：
・ ０－２分（１００％のバッファーＡ／０％のバッファーＢ）、
・ ２－２２分（０％から１００％のバッファーＢ）、及び
・ ２２－２５分（１００％のバッファーＢ）。
同様の手順を使用して、例えば、ここに記載されているものなどの２’修飾ヌクレオシドホスホラミダイトを使用してポリヌクレオチドを調製することができる。そのような手順は、国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０３４７４９に提供されている；ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０３４７４９におけるジスルフィドホスホトリエステルオリゴヌクレオチド合成の開示は、出典明示によりここに援用される。
表２に列挙された免疫調節性ポリヌクレオチドを調製するために、ここに記載の一般的な手順に従った。
Figure 0007536025000268
Figure 0007536025000269
Figure 0007536025000270
Figure 0007536025000271
Figure 0007536025000272
Figure 0007536025000273
Figure 0007536025000274
Figure 0007536025000275
Figure 0007536025000276
Figure 0007536025000277
Figure 0007536025000278
Figure 0007536025000279
Figure 0007536025000280
Figure 0007536025000281
Figure 0007536025000282
Figure 0007536025000283
Figure 0007536025000284
Figure 0007536025000285
Figure 0007536025000286
Figure 0007536025000287
Figure 0007536025000288
Figure 0007536025000289
Figure 0007536025000290
Figure 0007536025000291
Figure 0007536025000292
Figure 0007536025000293
Figure 0007536025000294
二本鎖ＣｐＧ：
アニーリングとゲル分析：
ポリヌクレオチドｐ８８（１ｍＬ，５ｍＭストック）を、ＤＰＢＳ（２４．７ｍＬ）と共にｐ１４４（３．３ｍＬ，２ｍＭストック）に加えた。ポリヌクレオチドｐ８８を同様の方法でｐ１４５で処理した。混合物を６５℃に１０分間加熱した。ＴＢＥ尿素ゲルによる分析により、ｐ８８の完全なアニーリングが示された（図２を参照）。各サンプル１μＬを取り出し、５μＬのホルムアミド添加バッファーに加え、ウェルごとに１５％ＴＢＥ－尿素ゲルに２００ボルトで４０分間添加した後、エチジウムブロマイド（ＥｔＢｒ）で染色した。ｐ８８、ｐ１４４、及びｐ１４５の構造については、表２を参照のこと。
ｐ８８／ｐ１４４を使用する二本鎖ＣｐＧ－代表的な例（１）：
Figure 0007536025000295
ｐ８８／ｐ１４５を使用する二本鎖ＣｐＧ－代表的な例（２）：
Figure 0007536025000296
実施例２：抗体－ＣｐＧコンジュゲートの調製
Ａ．抗ＳＩＲＰα抗体－ＣｐＧヌクレオチドコンジュゲートの調製
二種の抗ＳＩＲＰα抗体を選択した。抗ＳＩＲＰα抗体の一方はＣＤ４７の結合を遮断し、そのエピトープはＣＤ４７の結合部位とオーバーラップする（遮断）。他方の抗ＳＩＲＰα抗体は、ＣＤ４７の結合部位とは異なるエピトープに結合する（非遮断）。その開示がその全体について出典明示によりここに援用される国際公開第２０１８／０５７６６９号を参照のこと。抗ＳＩＲＰα抗体は、トランスグルタミナーゼ（「ｍＴＧａｓｅ」）反応を介してコンジュゲートされた。
コンジュゲーションのために選択した遮断抗体である抗ＳＩＲＰα１のＶＨ及びＶＬは、それぞれ、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＮＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＧＩＳＡＧＧＳＤＴＹＹＰＡＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＴＷＮＨＬＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：５２１）及びＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＲＩＴＣＳＧＧＳＹＳＳＹＹＹＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＴＬＩＹＳＤＤＫＲＰＳＮＩＰＥＲＦＳＧＳＳＳＧＴＴＶＴＬＴＩＳＧＶＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＧＧＹＤＱＳＳＹＴＮＰＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号：５２５）である。
コンジュゲーションのために選択した非遮断抗体である抗ＳＩＲＰα２のＶＨ及びＶＬは、それぞれ、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＤＶＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＬＩＳＧＳＧＥＩＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＥＮＮＲＹＲＦＦＤＤＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：５４８）及びＥＴＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＹＴＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＳＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＹＤＲＰＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号：５５３）である。
ヒトＩｇＧ１にＮ２９７Ａ変異を有する抗ＳＩＲＰα抗体を、脱塩カラムを使用して、２５ｍＭのトリス、１５０ｍＭのＮａＣｌ，ｐＨ８にバッファー交換した。ＳＩＲＰα抗体溶液に、ｍＴＧａｓｅとＮ３－ＣＨ２ＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）２３－ＮＨ２の構造を有するＮ３－ＰＥＧ２３－ＮＨ２リンカーを加えた。Ｎ２９７Ａ変異があると、コンジュゲーションはグルタミン２９５（ＥＵ番号付け）の側鎖を介して生じうる。得られた混合物を室温で一晩放置した。ｍＴＧａｓｅ反応混合物では、最終抗体濃度は５０μＭであり；抗体対ｍＴＧａｓｅの比は約１０であり、リンカー対抗体の比は約５であった。ｍＴＧａｓｅと遊離ＰＥＧリンカーはプロテインＡ精製によって除去した。修飾抗体を、脱塩カラムを使用して１×ＰＢＳにバッファー交換した。配列番号：４２５のＣｐＧヌクレオチド中のアルキンと修飾抗体中のアジド基とのその後のヒュスゲン環化付加により、式（Ｄ）又は（Ｅ）の構造を有する抗ＳＩＲＰα－ＣｐＧヌクレオチドコンジュゲートが得られた：
Figure 0007536025000297
ここで、Ａｂは遮断又は非遮断抗ＳＩＲＰα抗体であり；ｃは２’－デオキシシチジンであり；ｇは２’－デオキシグアノシンであり；ｔはチミジンであり；Ｘは５－ブロモ－２’－デオキシウリジンであり；Ｚは
Figure 0007536025000298
である。
Ｂ．抗ＣＤ５６抗体－ＣｐＧヌクレオチドコンジュゲートの調製
マウスモノクローナル抗ＣＤ５６抗体（クローン５．１Ｈ１１）を商業的に入手した。抗ＣＤ５６抗体を、活性化ペンタフルオロフェニル（ＰＦＰ）エステルを介してコンジュゲートさせた。ダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）バッファー（～２．５μｇ／μＬ）中の抗ＣＤ５６抗体の溶液に、Ｎ３－ＣＨ２ＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）８－ＣＨ２ＣＯ－ＰＦＰの構造を有するアジド－ＰＥＧ８－ＰＦＰエステルを、２０のリンカー対抗体比で加えた。得られた混合物を室温で一晩放置して、アジド含有抗体を形成した。次に、過剰なアジド－ＰＥＧ８－ＰＦＰを、ＤＰＢＳを溶離液として使用するＡｍｉｃｏｎ３０ｋＤスピンコンセントレーターによるバッファー交換により除去した。続いて、配列番号：４２５のＣｐＧヌクレオチド中のアルキンの修飾抗体中のアジド基とのヒュスゲン環化付加により、式（Ｆ）又は（Ｇ）の構造を有する抗ＣＤ５６－ＣｐＧヌクレオチドコンジュゲートが得られた：
Figure 0007536025000299
ここで、Ａｂは抗ＣＤ５６抗体であり；ｓは約３又は約４の整数であり；ｃは２’－デオキシシチジンであり；ｇは２’－デオキシグアノシンであり；ｔはチミジンであり；Ｘは５－ブロモ－２’－デオキシウリジンであり；Ｚは
Figure 0007536025000300
である。
実施例３．抗体－ＣｐＧヌクレオチドコンジュゲートの生物学的評価
Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｐａｃｉｆｉｃからトリマ残留物を受け取り、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で１：４希釈した。希釈した血液を４本のチューブに分け、１５ｍＬのＦｉｃｏｌｌ（登録商標）Ｐａｑｕｅ密度勾配培地（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）で控えめにした。チューブを４００×ｇで３０分間遠心分離した。ＰＢＭＣを界面から回収し、ＦＡＣＳバッファー（０．５％のウシ血清アルブミンを含むＰＢＳ）に再懸濁させた。ＣＤ１４＋単球を、Ｍｏｎｏｃｙｔｅ ＩｓｏｌａｔｉｏｎキットＩＩ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）とＬＳカラム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を製造業者のプロトコルに従って使用して、ネガティブ選択により精製した。
ＰＢＭＣ又はＣＤ１４＋細胞を、ロズウェルパーク記念研究所完全培地（ＲＰＭＩ）で９６ウェルフォーマット（５００Ｋ／ウェル）に直ちに蒔いた。３７℃で５％ＣＯ２下で２４又は４８時間、１００ｎＭから６．４ｐＭの抗体と抗体ＣｐＧヌクレオチドコンジュゲートと配列番号：４２５のＣｐＧポリヌクレオチドの１μＭから６４ｐＭの５倍の連続希釈液を細胞に加えた。細胞を４００×ｇで５分間遠心分離してペレット化し、ＰＢＳで１：２０００で希釈した１００μＬの固定可能生存率色素ｅＦｌｕｏｒ７８０（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）で４℃で染色した。細胞を遠心分離し、２μＬのＦｃγＲ遮断試薬と、１．２５μＬの、抗ＳＩＲＰαアッセイでは抗ＣＤ１４、抗ＣＤ３、抗ＣＤ１９を、抗ＣＤ５６アッセイでは抗ＣＤ５６、抗ＣＤ１６、抗ＣＤ６９、抗ＣＤ１４、抗ＣＤ３及び抗ＣＤ１９を含む、１００μＬのＦＡＣＳバッファーで４℃において３０分間染色した。細胞を遠心分離し、２００μＬのＦＡＣＳバッファーで２回洗浄し、１００μＬの０．５％パラホルムアルデヒドで固定した。細胞数をカウントするために各ウェルにＣｏｕｎｔＢｒｉｇｈｔ絶対計数ビーズを加えた。細胞をＡｔｔｕｎｅ ＮｘＴフローサイトメーターで分析し、Ｆｌｏｗｊｏ１０．７によりその後にデータ解析した。死細胞を、ｅＦｌｕｏｒ７８０－陰性集団上でのゲーティングによって排除した。系列特異的細胞を先ず、ＣＤ１４＋細胞のゲーティングの前に（ＣＤ１９、ＣＤ３）、そしてＣＤ５６＋ＣＤ１６＋細胞のゲーティングの前に（ＣＤ１９、ＣＤ３、ＣＤ１４）、排除した。
図１及び図２に示されるように、抗ＣＤ５６－ＣｐＧヌクレオチドコンジュゲートは、それぞれ２４時間及び４８時間でＣｐＧヌクレオチド及び抗ＣＤ５６単独と比較してＮＫ細胞の活性化を増強した。ＣＤ６９発現により決定して、抗ＣＤ５６－ＣｐＧヌクレオチドコンジュゲートはＮＫ細胞活性化を誘導することができた。
図３及び図４に示されるように、遮断抗体（抗ＳＩＲＰα１）又は非遮断抗体（抗ＳＩＲＰα２）との抗ＳＩＲＰα－ＣｐＧヌクレオチドコンジュゲートは、全ＰＢＭＣ及び精製ＣＤ１４＋集団内でＣＤ１４＋単球の増殖を誘導した。ＣＤ１４＋単球の絶対数を決定するためにカウントビーズを使用して、遮断抗体（抗ＳＩＲＰα１）又は非遮断抗体（抗ＳＩＲＰα２）の何れかとの抗ＳＩＲＰα－ＣｐＧヌクレオチドコンジュゲートは、ＣｐＧヌクレオチド及び抗ＳＩＲＰα抗体単独と比較して増殖を誘導した。精製ＣＤ１４＋単球を使用する実験は、細胞数の増加が抗ＳＩＲＰ抗体によって細胞中にＣｐＧヌクレオチドを送達した結果であることを示している。これらのデータは、まとめると、異なるエピトープに結合する抗ＳＩＲＰα抗体は、遮断であれ非遮断であれ、ＣＰＧヌクレオチドをＣＤ１４＋単球に送達し、その細胞数の増殖をもたらすことを示している。
実施例４：ＫＤの決定
様々な種（ヒトｖ１、ヒトｖ２、カニクイザル、マウス１２９、ＢＬ６、ＢＡＬＢｃ、ＮＯＤ）由来のＳＩＲＰα、ＳＩＲＰβ、及びＳＩＲＰγとの抗ＳＩＲＰα抗体の相互作用を、次のプロトコルに従って、二つの方法、（ＧＬＣチップを介する）抗体の直接固定化法を使用して分析した。全ての実験は、ＧＬＣ又はＮＬＣセンサーチップを備えたＳＰＲベースのＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６バイオセンサー（ＢｉｏＲａｄ社，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）を使用して２５℃において実施した。抗体は、ＦＲＥＥＳＴＹＬＥＴＭ２９３－ＦＳ細胞（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を使用して発現させた。精製は、標準的なプロテインＡアフィニティーカラムクロマトグラフィーによって行い、溶出抗体をＰＢＳバッファーで保存した。
ランニングバッファーは、０．０１％のＴＷＥＥＮ－２０を含むＰＢＳ，ｐＨ７．４（ＰＢＳＴ＋）であった。全ての分析物は、Ａ２８０吸光度によって決定されたその名目濃度で、そのモル計算された吸光係数を使用して、使用した。分析物は、記載されているように「ワンショット」動態モードで注入した（例えば、Bravman等, Anal. Biochem. 2006, 358, 281-288を参照）。
ＧＬＣチップを使用する方法では、Ｐｒｏｔｅｏｎアミンカップリングキットを使用して、ＧＬＣチップ上に固定化した抗ＳＩＲＰα抗体（～１０００ＲＵ）上に注入し、流した。固定化ステップでは、ＧＬＣチップを、２５μＬ／分で３００秒１／１００に希釈したＥＤＡＣ／スルホ－ＮＨＳ １：１（Ｂｉｏｒａｄ）で活性化した。抗ＳＩＲＰα抗体を１０ｍＭの酢酸ナトリウムバッファーｐＨ４．５で８０ｎＭの濃度に希釈し、５０秒、３０μＬ／分でチップに固定化した。チップを２５μＬ／分で３００秒、エタノールアミンで不活性化した。分析物（例えば、異なる種由来のＳＩＲＰ－α、ＳＩＲＰ－β、ＳＩＲＰ－γ）を、１００、３３、１１、３．７、１．２、及び０ｎＭの名目濃度で「ワンショット」動態モードで注射した。結合時間を１００ｕＬ／分で９０秒間モニターし、解離時間を１２００秒モニターした。表面はＰｉｅｒｃｅ ＩｇＧ溶出バッファー／４ＭのＮａＣｌの２：１ｖ／ｖブレンドで再生した。
バイオセンサーデータは、反応スポットデータ（固定化タンパク質）からスポット間データ（固定化タンパク質を含まない）を差し引き、ついで分析物注射のものからバッファー「ブランク」分析物注射の反応を差し引くことによって、二重参照とした。二重参照データを単純なＬａｎｇｍｕｉｒモデルに包括的に適合させ、ＫＤ値を、見かけの動態速度定数の比（ＫＤ＝ｋｄ／ｋａ）から計算した。
異なる種由来の様々なＳＩＲＰ－α、ＳＩＲＰ－β、ＳＩＲＰ－γに対するブロッカー１１９、１３５及び非ブロッカー１３６ヒト抗体の結合動態を決定した。これらの抗体は、ヒトｖ１、ヒトｖ２、及びカニクイザル由来のＳＩＲＰ－αに高親和性で結合する。それらは様々なマウスＳＩＲＰ－αには結合しない。しかし、それらはヒトＳＩＲＰ－βとヒトＳＩＲＰ－γに高い親和性結合を示した。従って、これらの抗体は、種々の骨髄系細胞集団の活性を調節するために、ＣｐＧ免疫調節性ポリヌクレオチドのコンジュゲーション及び送達に有用な汎抗ＳＩＲＰであろう。結果を表３にまとめる。
異なる種由来の様々なＳＩＲＰ－α、ＳＩＲＰ－β、ＳＩＲＰ－γに対するヒト化ＡＢ２１遮断抗体の結合動態を決定した。ＡＢ２１抗体は、ヒトｖ１、ヒトｖ２、カニクイザル由来のＳＩＲＰ－α、様々なマウスＳＩＲＰ－α（ＮＯＤ、ＢＬ６、及びＢＡＬＢｃ）、ヒトＳＩＲＰ－β及びヒトＳＩＲＰ－γに高親和性で結合する。従って、ＡＢ２１遮断抗体は、様々な骨髄系細胞集団の活性を調節するために、ＣｐＧ免疫調節性ポリヌクレオチドのコンジュゲーション及び送達に有用な汎抗ＳＩＲＰであろう。結果を表４にまとめる。
Figure 0007536025000301
Figure 0007536025000302
Figure 0007536025000303
実施例５：抗体－ＣｐＧヌクレオチドコンジュゲートのインビボ評価
ＣＴ２６及びＭＣ３８細胞を、それぞれＢＡＬＢ／ｃ及びＣ５７ＢＬ／６雌マウスの右脇腹に、ＲＰＭＩ１６４０（ＣＴ２６に対して）又はＤＭＥＭ（ＭＣ３８に対して）中マウス１匹当たり２×１０６細胞の濃度で注射した。腫瘍を、研究に応じて平均腫瘍サイズが７５－３００ｍｍ３の間に達するまでモニターした。研究に応じて１コホート当たり５－７匹のマウスとして、マウスを、ＰＢＳ対照、遮断抗体（抗ＳＩＲＰα１）との抗ＳＩＲＰα－ＣｐＧヌクレオチドコンジュゲート、及び非遮断抗体（抗ＳＩＲＰα２）との抗ＳＩＲＰα－ＣｐＧヌクレオチドコンジュゲート群にランダム化した。抗ＳＩＲＰα抗体の配列は実施例２に記載されている；ＣｐＧはｐ３１３に対応した。抗ＳＩＲＰα－ＣｐＧヌクレオチドコンジュゲート処置マウスは、合計で２回、３日間あけて０．１－１０ｍｇ／ｋｇを投与した。薬物は双方とも腹腔内投与した。腫瘍を、キャリパーを用いて２次元で測定し、腫瘍体積は、長さ×幅×幅×０．５として計算し、長さは２回の測定値のうち大きい方とした。
ＣＴ２６腫瘍を持つマウスを測定し、腫瘍体積によってランダム化した。４日目に、５匹のマウスの各コホートは７５ｍｍ３の平均腫瘍サイズであった。３日あけて２回投与した１０ｍｇ／ｋｇの抗ＳＩＲＰα１コンジュゲート処置マウスは腫瘍根絶（４／５マウス）を示す一方、３日あけて２回投与した１０ｍｇ／ｋｇの非コンジュゲート対照抗ＳＩＲＰａ抗体での処置マウスは、ＰＢＳと比較して次善の腫瘍阻害を示した（図７Ａ）。ＣＴ２６腫瘍を持つマウスを測定し、腫瘍体積によってランダム化した。８日目に、腫瘍は１群当たり７匹のマウスで１００ｍｍ３の平均腫瘍サイズを有し、３日間あけての３ｍｇ／ｋｇの抗ＳＩＲＰα１コンジュゲート及び抗ＳＩＲＰα２コンジュゲートでの２回の処置は、完全な腫瘍根絶を示した（図７Ｂ）。２４日目に、抗ＳＩＲＰα１コンジュゲート（抗ＳＩＲＰα遮断抗体コンジュゲート）で処置した７匹のマウスのうち７匹と、抗ＳＩＲＰα２コンジュゲート（抗ＳＩＲＰα非遮断抗体コンジュゲート）で処置した７匹のマウスうち６匹が完全な腫瘍根絶を示した。図７Ｃに示すように、３００ｍｍ３の平均腫瘍サイズで、コホート５匹のＣＴ２６腫瘍を持つマウスを、３日間あけて、０．１、０．３及び１ｍｇ／ｋｇの抗ＳＩＲＰα１コンジュゲートで２回処置した。腫瘍阻害における用量応答は、１ｍｇ／ｋｇが最も強力であると観察された。５匹中４匹のマウスは、１ｍｇ／ｋｇの抗ＳＩＲＰα１コンジュゲートで処置した群について２１日目に腫瘍根絶を示した。図７Ｄに示すように、３日間あけて２用量の１０ｍｇ／ｋｇの抗ＳＩＲＰα１コンジュゲートで処置した１５５ｍｍ３の平均腫瘍体積のＭＣ３８腫瘍を持つマウスは、２１日目に腫瘍の完全な根絶を示した。まとめると、これらのデータは、複数の腫瘍モデルにおける腫瘍根絶、非コンジュゲートＳＩＲＰａ抗体と比較したＳＩＲＰａ－ＣｐＧの比活性、ＳＩＲＰａ遮断及び非遮断抗体ＣｐＧコンジュゲートの両方での腫瘍根絶、及びマウスを１ｍｇ／ｋｇと少ない抗ＳＩＲＰα１コンジュゲートで処置した場合の腫瘍根絶を示す。
平均腫瘍サイズが３００ｍｍ３に達するまで腫瘍をモニターした。マウスを、１コホート当たり５匹のマウスとして、ＰＢＳ対照と遮断抗体（抗ＳＩＲＰα１）との抗ＳＩＲＰα－ＣｐＧヌクレオチドコンジュゲートにランダム化した。抗ＳＩＲＰα抗体の配列は実施例２に記載されている；ＣｐＧはｐ３１３に対応した。抗ＳＩＲＰα－ＣｐＧヌクレオチドコンジュゲート処置マウスでは、ＣＴ２６モデルに対して１ｍｇ／ｋｇを、全部で２回、３日間又は７日間あけて投与した。抗ＳＩＲＰα－ＣｐＧヌクレオチドコンジュゲートを腹腔内に投与した。腫瘍は、キャリパーを用いて２次元で測定し、腫瘍体積は、長さ×幅×幅×０．５として計算し、長さは２回の測定値のうち大きい方とした。
ＣＴ２６腫瘍を持つマウスを測定し、腫瘍体積によってランダム化した。１０日目に、腫瘍は３００ｍｍ３の平均腫瘍サイズを有しており、３又は７日間あけて２回投与した１ｍｇ／ｋｇの抗ＳＩＲＰα１コンジュゲートでの処置により、腫瘍の根絶が示された（図８Ａ）。２５日目に、５匹のマウスのうち４匹が双方の群で腫瘍がなかった。６３日目に、３日間あけて処置した４匹の生存マウスのうち、全てで腫瘍がなかった一方、７日間あけて処置したマウスもまた４匹の生存マウスであったが、２匹だけが腫瘍がなかった（図８Ｂ）。
上に記載した実施例は、請求項記載の実施態様を如何に作製し使用するかの完全な開示と説明を当該技術分野における当業者に与えるために提供されるものであり、ここに開示されるものの範囲を制限することを意図したものではない。当業者に明らかな変更は、次の特許請求の範囲に含まれることが意図される。この明細書に引用される全ての刊行物、特許、及び特許出願は、各々のそのような刊行物、特許又は特許出願が出典明示によってここに援用されることが具体的かつ個別に示されているかのように、出典明示によりここに援用される。

Claims (39)

  1. ターゲティング部分、免疫調節性ポリヌクレオチド、及びリンカーを含むコンジュゲートであって、ターゲティング部分が抗ＳＩＲＰα抗体であり、リンカーがターゲティング部分を免疫調節性ポリヌクレオチドに共有的に結合させ、免疫調節性ポリヌクレオチドは、Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）を活性化するシトシン－グアニンジヌクレオチド（ＣｐＧ）含有オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）である、コンジュゲート。
  2. 免疫調節性ポリヌクレオチドがヌクレオシド間ホスホトリエステルを含む、請求項１に記載のコンジュゲート。
  3. 免疫調節性ポリヌクレオチドが、修飾された核酸塩基を有するヌクレオチドを含む、請求項１又は２に記載のコンジュゲート。
  4. コンジュゲートが、式（Ｃ）：
    Figure 0007536025000304
    の構造を有し、又はその立体異性体、二以上のジアステレオマーの混合物、互変異性体、又は二以上の互変異性体の混合物；又はその薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、又は水和物であり；
    ここで、
    Ａｂはターゲティング部分であり；
    各ＬＮは独立してリンカーであり；
    各Ｑは独立して免疫調節性ポリヌクレオチドであり；
    各ｅは、独立して約１、約２、約３、又は約４の整数であり；かつ
    ｆは、約１、約２、約３、又は約４の整数である、請求項１から３の何れか一項に記載のコンジュゲート。
  5. ＬＮが、ポリエチレングリコールを含むリンカーである、請求項４に記載のコンジュゲート。
  6. ＬＮが、
    Figure 0007536025000305
    であり、ここで、ｄが約０から約５０の範囲の整数である、ｄが約０から約１０の範囲の整数である、ｄが約０から約５の範囲の整数である、又はｄが約０、約１、若しくは約３の整数である、請求項５に記載のコンジュゲート。
  7. ＬＮが、
    Figure 0007536025000306
    であり、ここで、ｄが約０から約５０の範囲の整数である、ｄが約０から約１０の範囲の整数である、ｄが約０から約５の範囲の整数である、又はｄが約０、約１、若しくは約３の整数である、請求項５に記載のコンジュゲート。
  8. ｅが約１の整数である、請求項４から７の何れか一項に記載のコンジュゲート。
  9. 各Ｑが、独立して式（Ｄ）
    Figure 0007536025000307
    の構造を有し、
    ここで、
    各ＸＮは独立してヌクレオチドであり；
    Ｘ３’は３’末端ヌクレオチドであり；
    Ｘ５’は５’末端ヌクレオチドであり；
    ＹＰは、ヌクレオシド間ホスホトリエステルであり；かつ
    ｂ及びｃはそれぞれ約０から約２５の範囲の整数であり；但し、その合計が５以上であり；
    任意選択的に、ｂが、約１から約１５の範囲の整数、又は約３、約４、約１１、若しくは約１４の整数である；かつ／又はｃが、約０から約１０の範囲の整数、又は約０若しくは約８の整数である、
    請求項４から８の何れか一項に記載のコンジュゲート。
  10. ｂとｃの合計が約５から約２０の範囲、約５から約１５の範囲、又は約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、若しくは約１４である、請求項９に記載のコンジュゲート。
  11. 各ＸＮが独立して２’－デオキシリボヌクレオチドであり；
    任意選択的に：
    （ａ）各ＸＮが、独立して２’－デオキシアデノシン、２’－デオキシグアノシン、２’－デオキシシチジン、５－ハロ－２’－デオキシシチジン、２’－デオキシチミジン、２’－デオキウリジン、又は５－ハロ－２’－デオキシウリジンである；又は
    （ｂ）各ＸＮが、独立して２’－デオキシアデノシン、２’－デオキシグアノシン、２’－デオキシシチジン、２’－デオキシチミジン、５－ブロモ－２’デオキシウリジン、又は５－ヨード－２’－デオキシウリジンである、
    請求項９又は１０に記載のコンジュゲート。
  12. Ｘ３’が２’－デオキシリボヌクレオチドであり；
    任意選択的に：
    （ａ）Ｘ３’が、２’－デオキシアデノシン、２’－デオキシグアノシン、２’－デオキシシチジン、５－ハロ－２’－デオキシシチジン、２’－デオキシチミジン、２’－デオキシウリジン、又は５－ハロ－２’－デオキシウリジンである、
    （ｂ）Ｘ３’が２’－デオキシチミジンである；
    （ｃ）Ｘ３’が２’－修飾リボヌクレオチドである；又は
    （ｄ）Ｘ３’が、２’－メトキシリボヌクレオチド又は２’－エトキシメトキシリボヌクレオチドである、
    請求項９から１１の何れか一項に記載のコンジュゲート。
  13. Ｘ５’が２’－デオキシリボヌクレオチドであり；、
    任意選択的に：
    （ａ）Ｘ５’が、２’－デオキシアデノシン、２’－デオキシグアノシン、２’－デオキシシチジン、５－ハロ－２’－デオキシシチジン、２’－デオキシチミジン、２’－デオキシウリジン、又は５－ハロ－２－デオキシウリジンである；
    （ｂ）Ｘ５’が、置換ピリミジン塩基を有する２’－デオキシリボヌクレオチドである；
    （ｃ）Ｘ５’が、５－置換ピリミジン塩基を有する２’－デオキシリボヌクレオチドである；
    （ｄ）Ｘ５’が、２’－デオキシチミジン、５－ハロ－２’－デオキシシチジン、若しくは５－ハロ－２’－デオキシウリジンである；
    （ｅ）Ｘ５’が、２’－デオキシチミジン、５－ブロモ－２’デオキシシチジン、５－ヨード－２’－デオキシシチジン、５－ブロモ－２’－デオキシウリジン、又は５－ヨード－２’－デオキシウリジンである；又は
    （ｆ）Ｘ５’が、２’－デオキシチミジン、５－ブロモ－２’－デオキシウリジン、又は５－ヨード－２’－デオキシウリジンである、
    請求項９から１２の何れか一項に記載のコンジュゲート。
  14. Ｘ５’が３’－ホスホロチオエート基を有し；任意選択的に３’－ホスホロチオエートがキラルであり；任意選択的に、３’－ホスホロチオエートがＲｐ若しくはＳｐのキラリティーを有する、請求項９から１３の何れか一項に記載のコンジュゲート。
  15. Ｘ５’が、Ｒｐのキラリティーを有する３’－ホスホロチオエート基を有し、かつＸ３’が、２’－メトキシリボヌクレオチド又は２’－エトキシメトキシリボヌクレオチドである；又はＸ５’が、Ｓｐのキラリティーを有する３’－ホスホロチオエート基を有し、かつＸ３’が、２’－メトキシリボヌクレオチド又は２’－エトキシメトキシリボヌクレオチドである、請求項９から１４の何れか一項に記載のコンジュゲート。
  16. ＹＰが
    Figure 0007536025000308
    であり、ここでＺがＯ又はＳであり；かつｄが約０から約５０の範囲の整数、約０から約１０の範囲の整数、約０から約５の範囲の整数、又は約０、約１、若しくは約３の整数である、請求項９から１５の何れか一項に記載のコンジュゲート。
  17. ＹＰが
    であり、ここでＺがＯ又はＳであり；かつｄが約０から約５０の範囲の整数、約０から約１０の範囲の整数、約０から約５の範囲の整数、又は約０、約１、若しくは約３の整数である、請求項１６に記載のコンジュゲート。
  18. ＺがＯ又はＳである、請求項１６又は請求項１７に記載のコンジュゲート。
  19. 免疫調節性ポリヌクレオチドが、追加のヌクレオシド間ホスホトリエステルを含み；任意選択的に、追加のヌクレオシド間ホスホトリエステルがアルキルホスホトリエステル若しくはエチルホスホトリエステルである、請求項１から１８の何れか一項に記載のコンジュゲート。
  20. 免疫調節性ポリヌクレオチドが一の５－ハロ－２’－デオキシウリジンを含み；任意選択的に、５－ハロ－２’－デオキシウリジンが、５－ブロモ－２’－デオキシウリジン又は５－ヨード－２’－デオキシウリジンである、請求項１から１９の何れか一項に記載のコンジュゲート。
  21. 免疫調節性ポリヌクレオチドが三以上の２’－デオキシシチジンを含み；任意選択的に、免疫調節性ポリヌクレオチドが三の２’－デオキシシチジンを含む、請求項１から２０の何れか一項に記載のコンジュゲート。
  22. 免疫調節性ポリヌクレオチドが四以上の２’－デオキシグアノシンを含み；任意選択的に、免疫調節性ポリヌクレオチドが四の２’－デオキシグアノシンを含む、請求項１から２１の何れか一項に記載のコンジュゲート。
  23. 免疫調節性ポリヌクレオチドが、
    （ａ）三の２’－デオキシシチジンと四の２’－デオキシシチジン；又は
    （ｂ）三以上の２’－デオキシチミジン
    を含み、任意選択的に、三、四、五、六、七、又は八の２’－デオキシチミジンを含んでもよい、請求項１から２２の何れか一項に記載のコンジュゲート。
  24. 免疫調節性ポリヌクレオチドが、ゼロ、一、又は二の２’－デオキシアデノシンを含む、請求項１から２３の何れか一項に記載のコンジュゲート。
  25. 免疫調節性ポリヌクレオチドが一又は複数のヌクレオシド間ホスホロチオエートを含み；任意選択的に、免疫調節性ポリヌクレオチドが約１２のヌクレオシド間ホスホロチオエートを含む、請求項１から２４の何れか一項に記載のコンジュゲート。
  26. 抗ＳＩＲＰα抗体がヒト抗体である、請求項１から２５の何れか一項に記載のコンジュゲート。
  27. 抗ＳＩＲＰα抗体が遮断抗ＳＩＲＰα抗体であり、
    任意選択的に、遮断抗ＳＩＲＰα抗体が、
    （ａ）配列番号：４９８－５００からなる群から選択される配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号：５０１の配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び配列番号：５０２の配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインと；配列番号：５０３の配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号：５０４の配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び配列番号：５０５の配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとを含む；
    （ｂ）配列番号：４９０－４９５からなる群から選択される配列を含むＶＨドメインと、配列番号：４９６又は４９７の配列を含むＶＬドメインとを含む；
    （ｃ）配列番号：５１２－５１４からなる群から選択される配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号：５１５の配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び配列番号：５１６の配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインと；配列番号：５１７の配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号：５１８の配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び配列番号：５１９の配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとを含む；
    （ｄ）配列番号：５０６－５０９からなる群から選択される配列を含むＶＨドメインと、配列番号：５１０又は５１１の配列を含むＶＬドメインとを含む；
    （ｅ）配列番号：５３３－５３５からなる群から選択される配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号：５３６の配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び配列番号：５３７の配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインと；配列番号：５３８－５４２からなる群から選択される配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号：５４３の配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び配列番号：５４４－５４６からなる群から選択される配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとを含む；又は
    （ｆ）配列番号：５２０－５２３からなる群から選択される配列を含むＶＨドメインと、配列番号：５２５－５３２からなる群から選択される配列を含むＶＬドメインとを含む、請求項１から２６の何れか一項に記載のコンジュゲート。
  28. 抗ＳＩＲＰα抗体が非遮断抗ＳＩＲＰα抗体であり、
    任意選択的に、非遮断抗ＳＩＲＰα抗体が、
    （ａ）配列番号：５５４－５５６からなる群から選択される配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号：５５７の配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び配列番号：５５８の配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインと；配列番号：５５９の配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号：５６０の配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び配列番号：５６１の配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとを含む；
    （ｂ）配列番号：５４７－５５０からなる群から選択される配列を含むＶＨドメインと、配列番号：５５１－５５３からなる群から選択される配列を含むＶＬドメインとを含む；又は
    （ｃ）配列番号５８４の配列を含むＶＨドメインと、配列番号：５８５、５６２、及び５６３からなる群から選択される配列を含むＶＬドメインとを含む、
    請求項１から２６の何れか一項に記載のコンジュゲート。
  29. 抗体がヒトＦｃ領域を含み；
    任意選択的に、Ｆｃ領域が、
    （ａ）ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４ Ｆｃ領域；
    （ｂ）ＥＵ番号付けに従って、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３７Ａ変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域；
    （ｃ）ＥＵ番号付けに従って、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａ変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域；
    （ｄ）ＥＵ番号付けに従って、Ｎ２９７Ａ変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域；
    （ｅ）ＥＵ番号付けに従って、Ｄ２６５Ａ変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域；
    （ｆ）ＥＵ番号付けに従って、Ｄ２６５Ａ及びＮ２９７Ａ変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域；
    （ｇ）ＥＵ番号付けに従って、Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓ変異を含むヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域；
    （ｈ）ＥＵ番号付けに従って、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａ変異を含むヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域；
    （ｉ）ＥＵ番号付けに従って、Ｎ２９７Ａ変異を含むヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域；
    （ｊ）ＥＵ番号付けに従って、Ｓ２２８Ｐ変異を含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域；
    （ｋ）ＥＵ番号付けに従って、Ｓ２２８Ｐ及びＤ２６５Ａ変異を含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域；
    （ｌ）ＥＵ番号付けに従って、Ｓ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅ変異を含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域；
    （ｍ）ＥＵ番号付けに従って、Ｓ２２８Ｐ及びＮ２９７Ａ変異を含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域；
    （ｎ）ＥＵ番号付けに従って、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、及びＮ２９７Ａ変異を含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域；又は
    （о）配列番号：５６４－５７８からなる群から選択される配列を含むＦｃ領域
    である、
    請求項１から２８の何れか一項に記載のコンジュゲート。
  30. 抗体が、
    （ａ）ヒトカッパ軽鎖定常ドメインを含み、任意選択的に、配列番号：５７９の配列を含む軽鎖定常ドメインを含む；又は
    （ｂ）ヒトラムダ軽鎖定常ドメインを含み、任意選択的に、配列番号：５８０又は５８１の配列を含む、
    請求項１から２９の何れか一項に記載のコンジュゲート。
  31. 請求項１から３０の何れか一項に記載のコンジュゲートと薬学的に許容可能な添加物とを含む薬学的組成物。
  32. 組成物が非経口投与のために製剤化される、請求項３１に記載の薬学的組成物。
  33. 組成物が単一剤形として製剤化される、請求項３１又は３２に記載の薬学的組成物。
  34. 組成物が静脈内剤形として製剤化される、請求項３１から３３の何れか一項に記載の薬学的組成物。
  35. 第二治療剤を更に含む、請求項３１から３４の何れか一項に記載の薬学的組成物。
  36. 対象において増殖性疾患の一又は複数の症状を治療し、予防し、又は寛解させるための医薬であって、請求項１から３０の何れか一項に記載のコンジュゲートを含む、医薬。
  37. 増殖性疾患ががんである、請求項３６に記載の医薬。
  38. 対象において骨髄系細胞を調節するための医薬であって、請求項１から３０の何れか一項に記載のコンジュゲートを含む、医薬。
  39. 骨髄系細胞が単球である、請求項３８に記載の医薬。
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