JP7531627B2

JP7531627B2 - 新規なオキソピリダジニル－フェニル－カルボノヒドラゾノイルジシアニド化合物及びその用途

Info

Publication number: JP7531627B2
Application number: JP2022577313A
Authority: JP
Inventors: ニムベ，エ; キョンキム，ユン; ミンイム，サン; イム，ソンス; イ，ハウン; スンソン，ウ; ヨンイ，ヘ
Original assignee: コリア・インスティテュート・オブ・サイエンス・アンド・テクノロジー
Priority date: 2020-06-19
Filing date: 2021-06-18
Publication date: 2024-08-09
Anticipated expiration: 2041-06-18
Also published as: TWI783535B; KR20210157134A; CN115867279B; TW202200550A; KR102356644B1; AR122675A1; EP4169909A4; EP4169909A1; BR112022025634A2; US12612372B2; US20230278963A1; CN115867279A; WO2021256900A1; JP2023530314A

Description

本発明は、新規なオキソピリダジニル－フェニル－カルボノヒドラゾノイルジシアニド化合物及びその用途に関する。

タウタンパク質（tau(τ) protein）は、分子量５０，０００～７０，０００の神経細胞の軸索突起において主に発現する微小管結合タンパク質（microtubule-associated protein; MAP）であり、微小管を安定化する役割を果たし、リン酸化により分子多様性を示す。ヒトの場合、タウは、Ｎ末端部分の２９又は５８アミノ酸残基の挿入、Ｃ末端の３つ又は４つの反復構造（微小管結合部位という）のｍＲＮＡ選択的スプライシング（alternative splicing）により６つの同型が生成される。

健康な神経において、タウは、軸索突起（axon）からの成長及び神経細胞の極性化（polarization）を促進することにより微小管を安定化する。病理学的には、過剰リン酸化（hyperphosphorylation）されると、タウは、微小管から分離されて不溶性凝集を誘導する。また、タウ凝集を誘導する構造的骨格が提案されており、１０個の可溶性モノマーから不溶性フィラメントが形成され、そのフィラメントが神経原線維変化（neurofibrillary tangles, NFTs）と呼ばれる高次構造に結合する証拠が提示されている。ヒトの全長タウは、４つの保存された配列反復により構成される微小管結合ドメインを含む。このような反復配列のうち、正に帯電した残基は、高度に負に帯電した微小管（αβ－チューブリンダイマー当たり２０～３０個の電子）に結合する上で重要な機能を有する。タウ微小管に対する結合親和性もタウのリン酸化により能動的に制御されるが、そのリン酸化により微小管ネットワークの動的再配列が生じる。タウが異常に過剰リン酸化されると、その動的再配列のバランスが取れず、微小管に対する親和性も急激に減少する。

前記タウタンパク質の過剰リン酸化及び／又は凝集は、神経細胞におけるこれらタウタンパク質の異常な蓄積を誘発し、それは退行性神経疾患などの原因になるものと考えられる。タウタンパク質凝集体は、主に神経細胞の細胞体及び樹状突起において観察され、それらを神経原線維変化（neurofibrillary tangles; NFT）及び神経絨毛糸（neuropil threads）と呼ぶ。神経原線維変化の微細構造を見ると、それはタウタンパク質が細い糸のように絡まった対らせん状細線維（paired helical filaments; PHFs）からなり、正常なタウタンパク質とは異なり、凝集して過剰リン酸化されている。タウオパチーにおいても異常なタウタンパク質の凝集現象が現れるが、そのタウタンパク質の凝集がタウオパチーの疾患進行段階においていかなる役割を果たすかは明確に示されておらず、一般的な退行性脳疾患において共通して現れる凝集現象と同様に現れる。

このように、タウタンパク質の過剰リン酸化及び／又は凝集がアルツハイマー疾患及びタウオパチーをはじめとする様々な退行性脳疾患を誘発することが知られているが、それらタウタンパク質により媒介される疾患が具体的にいかなる機序によりシグナルを伝達し、毒性を示すかは、いまだ解明されておらず、それらの疾患を治療することのできる明確な治療法や治療剤もいまだ存在しない。

本発明者らは、タウタンパク質の凝集及び／又は過剰リン酸化を阻害する新規な小分子化合物を見出すべく鋭意研究を重ねた結果、一連の新規なオキソピリダジニル－フェニル－カルボノヒドラゾノイルジシアニド化合物がタウタンパク質の凝集を効率的に阻害すると共に活性濃度において細胞毒性を示さないことを確認し、本発明を完成するに至った。

本発明は、化学式（１）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩を提供することを目的とする。

化学式（１）において、

Ｒ_１は水素又はハロゲンであり、Ｒ_２は水素又はＣ_１－６アルキルであり、Ｒ_３はＣ_１－６アルキル、Ｃ_１－６アルコキシ－Ｃ_０－６アルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_３－６シクロアルキル又はＣ_１－６アルコキシ－Ｃ_６－１０アリールである。

また、本発明は、前記化合物の製造方法を提供することを目的とする。

さらに、本発明は、前記化合物を有効成分として含むタウタンパク質（tau protein）凝集阻害用組成物を提供することを目的とする。

さらに、本発明は、前記化合物を有効成分として含むタウタンパク質過剰リン酸化阻害用組成物を提供することを目的とする。

さらに、本発明は、前記化合物を有効成分として含む、タウタンパク質の凝集又は過剰リン酸化により誘発される疾患の予防又は治療用薬学的組成物を提供することを目的とする。

さらに、本発明は、前記薬学的組成物を必要とする個体に前記薬学的組成物を投与するステップを含む、タウタンパク質の凝集又は過剰リン酸化により誘発される疾患を予防又は治療する方法を提供することを目的とする。

本発明の新規なオキソピリダジニル－フェニル－カルボノヒドラゾノイルジシアニド化合物は、タウタンパク質の凝集及び／又は過剰リン酸化を効率的に阻害するので、それにより誘発される疾患、例えばアルツハイマー疾患やタウオパチーなどの予防又は治療に有用である。

本発明の第１態様は、化学式（１）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。

化学式（１）において、

具体的には、本発明の化合物において、Ｒ_１は水素、クロロ又はフルオロであり、Ｒ_２は水素又はメチルであり、Ｒ_３はメチル、エチル、イソプロピル、シクロプロピル、ジフルオロメチル、２，２，２－トリフルオロエチル、メトキシフェニル又はメトキシエチルであるが、これらに限定されるものではない。

例えば、本発明の化合物は、化学式（２）又は（３）で表される。

化学式（２）又は（３）において、各置換基は前記定義の通りである。

より具体的には、前記化合物は、１．（４－（１－イソプロピル－６－オキソ－１，４，５，６－テトラヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（(4-(1-isopropyl-6-oxo-1,4,5,6-tetrahydropyridazin-3-yl)phenyl)carbonohydrazonoyl dicyanide）、２．（４－（１－イソプロピル－４－メチル－６－オキソ－１，４，５，６－テトラヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（(4-(1-isopropyl-4-methyl-6-oxo-1,4,5,6-tetrahydropyridazin-3-yl)phenyl)carbonohydrazonoyl dicyanide）、３．（４－（１－エチル－４－メチル－６－オキソ－１，４，５，６－テトラヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（(4-(1-ethyl-4-methyl-6-oxo-1,4,5,6-tetrahydropyridazin-3-yl)phenyl)carbonohydrazonoyl dicyanide）、４．（４－（４－メチル－６－オキソ－１－（２，２，２－トリフルオロエチル）－１，４，５，６－テトラヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（(4-(4-methyl-6-oxo-1-(2,2,2-trifluoroethyl)-1,4,5,6-tetrahydropyridazin-3-yl)phenyl)carbonohydrazonoyl dicyanide）、５．（４－（１－（２－メトキシエチル）－４－メチル－６－オキソ－１，４，５，６－テトラヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（(4-(1-(2-methoxyethyl)-4-methyl-6-oxo-1,4,5,6-tetrahydropyridazin-3-yl)phenyl)carbonohydrazonoyl dicyanide）、６．（４－（１－シクロプロピル－４－メチル－６－オキソ－１，４，５，６－テトラヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（(4-(1-cyclopropyl-4-methyl-6-oxo-1,4,5,6-tetrahydropyridazin-3-yl)phenyl)carbonohydrazonoyl dicyanide）、７．（４－（１－（４－メトキシフェニル）－４－メチル－６－オキソ－１，４，５，６－テトラヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（(4-(1-(4-methoxyphenyl)-4-methyl-6-oxo-1,4,5,6-tetrahydropyridazin-3-yl)phenyl)carbonohydrazonoyl dicyanide）、８．（４－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（(4-(1-methyl-6-oxo-1,6-dihydropyridazin-3-yl)phenyl)carbonohydrazonoyl dicyanide）、９．（４－（１－イソプロピル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（(4-(1-isopropyl-6-oxo-1,6-dihydropyridazin-3-yl)phenyl)carbonohydrazonoyl dicyanide）、１０．（４－（１－（ジフルオロメチル）－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（(4-(1-(difluoromethyl)-6-oxo-1,6-dihydropyridazin-3-yl)phenyl)carbonohydrazonoyl dicyanide）、１１．（４－（１，４－ジメチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（(4-(1,4-dimethyl-6-oxo-1,6-dihydropyridazin-3-yl)phenyl)carbonohydrazonoyl dicyanide）、１２．（４－（１－イソプロピル－４－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（(4-(1-isopropyl-4-methyl-6-oxo-1,6-dihydropyridazin-3-yl)phenyl)carbonohydrazonoyl dicyanide）、１３．（３－クロロ－４－（１，４－ジメチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（(3-chloro-4-(1,4-dimethyl-6-oxo-1,6-dihydropyridazin-3-yl)phenyl)carbonohydrazonoyl dicyanide）、又は１４．（４－（１，４－ジメチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－３－フルオロフェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（(4-(1,4-dimethyl-6-oxo-1,6-dihydropyridazin-3-yl)-3-fluorophenyl)carbonohydrazonoyl dicyanide）であってもよい。

さらに、これらの化合物は、表１の化学式で表される化合物であってもよい。

なお、本発明の化合物は、薬学的に許容される塩の形態で存在してもよい。前記塩としては、薬学的に許容される遊離酸（free acid）により形成された酸付加塩が有用である。本発明における「薬学的に許容される塩」とは、患者に比較的非毒性かつ無害な有効作用を示す濃度において、その塩による副作用が化学式（１）で表される化合物の有利な効能を低下させない前記化合物の任意のあらゆる有機又は無機付加塩を意味する。

酸付加塩は、通常の方法、例えば化合物を過剰量の酸水溶液に溶解し、その塩を水混和性有機溶媒、例えばメタノール、エタノール、アセトン又はアセトニトリルを用いて沈殿させて作製する。等モル量の化合物及び水中の酸又はアルコール（例えば、グリコールモノメチルエーテル）を加熱し、次に前記混合物を蒸発させて乾燥させるか、又は析出した塩を吸引濾過してもよい。

ここで、遊離酸としては有機酸と無機酸を用いることができ、無機酸としては塩酸、リン酸、硫酸、硝酸、スズ酸などを用いることができ、有機酸としては、メタンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、マレイン酸（maleic acid）、コハク酸、シュウ酸、安息香酸、酒石酸、フマル酸（fumaric acid）、マンデル酸、プロピオン酸（propionic acid）、クエン酸（citric acid）、乳酸（lactic acid）、グリコール酸（glycollic acid）、グルコン酸（gluconic acid）、ガラクツロン酸、グルタミン酸、グルタル酸（glutaric acid）、グルクロン酸（glucuronic acid）、アスパラギン酸、アスコルビン酸、カルボン酸、バニリン酸、ヨウ化水素酸（hydroiodic acid）などを用いることができるが、これらに限定されるものではない。

また、塩基を用いて薬学的に許容される金属塩を形成することができる。アルカリ金属塩又はアルカリ土類金属塩は、例えば化合物を過剰量のアルカリ金属水酸化物又はアルカリ土類金属水酸化物溶液に溶解し、溶解しない化合物の塩を濾過して濾液を蒸発、乾燥させて得る。ここで、金属塩としては、特にナトリウム、カリウム又はカルシウム塩を用いることが製薬上好ましいが、これらに限定されるものではない。また、これに相当する銀塩は、アルカリ金属塩又はアルカリ土類金属塩を好適な銀塩（例えば、硝酸銀）と反応させて得ることができる。

本発明の化合物の薬学的に許容される塩には、特に断らない限り、化学式（１）～（３）の化合物に存在する酸性基又は塩基性基の塩が含まれる。例えば、薬学的に許容される塩としては、ヒドロキシ基のナトリウム塩、カルシウム塩、カリウム塩などが挙げられ、アミノ基のその他の薬学的に許容される塩としては、臭化水素酸塩、硫酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、リン酸水素塩、リン酸二水素塩、酢酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、乳酸塩、マンデル酸塩、メタンスルホン酸塩（メシル酸塩）、ｐ－トルエンスルホン酸塩（トシル酸塩）などが挙げられ、当該技術分野で公知の塩の作製方法で作製することができる。

本発明の化学式（１）～（３）の化合物の塩としては、薬学的に許容される塩であって、化学式（１）の化合物と同等の薬理活性を示す、例えばタウタンパク質の凝集及び／又は過剰リン酸化を阻害する化学式（１）～（３）の化合物の塩であれば、いかなるものを用いてもよい。

また、本発明による化学式（１）～（３）で表される化合物には、その薬学的に許容される塩だけでなく、それから作製できる水和物などの溶媒和物及び立体異性体が全て含まれる。化学式（１）～（３）で表される化合物の溶媒和物及び立体異性体は、当該技術分野で公知の方法を用いて化学式（１）～（３）で表される化合物から製造することができる。

さらに、本発明による化学式（１）～（３）で表される化合物は、結晶形態又は非結晶形態に製造することができ、結晶形態に製造される場合、任意に水和又は溶媒和することができる。本発明においては、化学式（１）～（３）で表される化合物の化学量論的水和物だけでなく、様々な量の水を含有する化合物が含まれる。本発明による化学式（１）～（３）で表される化合物の溶媒和物には、化学量論的溶媒和物及び非化学量論的溶媒和物の両方が含まれる。

本発明の第２態様は、化学式（１）で表される化合物の製造方法を提供する。

例えば、本発明の化合物は、酸存在下で、一末端に反応性アミノ基を含む、化学式（４）で表される化合物を亜硝酸ナトリウム及びマロノニトリル（malononitrile）と反応させてイミン結合を形成するステップを含む工程で製造することができる。

化学式（４）において、Ｒ_１～Ｒ_３は前記定義の通りである。

具体的には、前記工程は、Ｃ_１－４の低級アルコール溶媒に化学式（４）の化合物と亜硝酸ナトリウムを溶解させ、－５～５℃で酸水溶液を添加してジアゾニウム塩を形成する第１ステップと、前記第１ステップで得られたジアゾニウム塩を含む反応溶液にマロノニトリルを添加して１５～４０℃で反応させる第２ステップと、前記第２ステップの反応溶液に塩基水溶液を添加して中和する第３ステップとを含む一連の過程により行われるが、これらに限定されるものではない。

具体的には、本発明の化合物の製造に用いられる化学式（４）の化合物は、化学式（４－ａ）又は（４－ｂ）で表される化合物であってもよい。

より具体的には、化学式（４－ａ）で表される化合物は、４－（４－アセトアミドフェニル－４－オキソ－（非置換もしくはＲ_２で置換された）－酪酸をヒドラジンと反応させる第ａ－１ステップと、前のステップで得られたＮ－（６－オキソ－（非置換もしくはＲ_２で置換された）－１，４，５，６－テトラヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）アセトアミドを酸と反応させる第ａ－２ステップと、Ｒ_３が水素以外の置換基であれば、選択的に、前のステップで得られた６－（４－アミノフェニル）－（非置換もしくはＲ_２で置換された）－４，５－ジヒドロピリダジン－３（２Ｈ）－オンをＲ_３Ｘ（Ｘはハロゲン）と塩基条件下で反応させる第ａ－３ステップとを含む一連の過程により、又は４－（４－アミノフェニル）－４－オキソ－（非置換もしくはＲ_２で置換された）－酪酸を非置換もしくはＲ_３で置換されたヒドラジンと反応させる第ａ－１’ステップにより準備されるが、これらに限定されるものではない。

例えば、化学式（４－ａ）で表される化合物は、市販の化合物を購入して用いてもよく、前記各ステップの反応物又は中間体を購入して当該技術分野で公知の単一反応により又は数種の反応を組み合わせて合成してもよいが、これらに限定されるものではない。

また、各反応の後に、必要に応じて生成物を分離及び／又は精製する過程をさらに含んでもよく、それは当該技術分野で公知の様々な方法により行うことができる。

例えば、第ａ－１ステップの反応は、Ｃ_１－４の低級アルコール、例えばエタノールやプロパノールを溶媒として用いて、７０～１３０℃で１～１２時間行うが、これらに限定されるものではない。

また、第ａ－２ステップの反応は、溶媒として水を含有する水溶液相で９０～１３０℃にて３０分～６時間行い、次に塩基を添加して中和する過程をさらに含むが、これに限定されるものではない。

さらに、第ａ－３ステップの反応は、塩基性物質としてＮａＨ又はＫ_２ＣＯ_３を用い、溶媒として有機溶媒、例えばジメチルホルムアミド（dimethylformamide; DMF）又はメチルピロリドン（methylpyrrolidone; NMP）を用いて行うが、これらに限定されるものではない。例えば、前記反応は、０℃付近の低温で５～２４時間攪拌しながら行うが、これに限定されるものではない。

一方、第ａ－１’ステップの反応は、有機溶媒としてＣ_１－４の低級アルコール、例えばプロパノールを用いて、８０～１２０℃にてマイクロ波で３０分～６時間攪拌して行うが、これに限定されるものではない。

より具体的には、化学式（４－ｂ）で表される化合物は、３，６－ジハロ（非置換又はＲ_２で置換された）ピリダジンを酸に溶解して反応させ、その後塩基を添加して固体化する第ｂ－１ステップと、Ｒ_３が水素以外の置換基であれば、選択的に、前のステップで得られた６－ハロ－（非置換又はＲ_２で置換された）ピリダジン－３（２Ｈ）－オンをＲ_３Ｘ（Ｘはハロゲン）と塩基条件下で反応させる第ｂ－２ステップと、前のステップで得られた６－ハロ－２－（非置換又はＲ_３で置換された）－（非置換又はＲ_２で置換された）ピリダジン－３（２Ｈ）－オンを４－アミノ又はニトロ－（非置換又はＲ_１で置換されたフェニル）ボロン酸ピナコールエステルとＰｄ（ＰＰｈ_３）_２触媒下で反応させる第ｂ－３ステップと、第ｂ－３ステップで４－ニトロ－（非置換又はＲ_１で置換されたフェニル）ボロン酸ピナコールエステルと反応させたものであれば、選択的に、前のステップで得られた一末端にニトロ置換基を有する化合物を水素雰囲気にてＰｄ／Ｃ触媒下で反応させて前記ニトロ基をアミノ基に還元する第ｂ－４ステップとを含む一連の過程により準備されるが、これらに限定されるものではない。

例えば、化学式（４－ｂ）で表される化合物は、市販の化合物を購入して用いてもよく、前記各ステップの反応物又は中間体を購入して当該技術分野で公知の単一反応により又は数種の反応を組み合わせて合成してもよいが、これらに限定されるものではない。

例えば、第ｂ－１ステップの反応は、酸溶液を１００～１１５℃で攪拌しながら６～２４時間反応させ、水溶液の形態で塩基を添加して常温で攪拌して行うが、これに限定されるものではない。ここで、前記酸としては、酢酸又は塩酸を用いるが、これらに限定されるものではない。一方、前記塩基としては、炭酸水素ナトリウム、酢酸カリウム又は水酸化ナトリウムを用いるが、これらに限定されるものではなく、前述した酸の添加により酸性化した溶液を中和することにより、中和した反応生成物が得られるものであれば、いかなる種類であってもよい。

また、第ｂ－２ステップの反応は、有機溶媒、例えばＤＭＦに溶解した溶液において、塩基として炭酸カリウムを用いて、常温で３０分～１０時間攪拌しながら行うが、これに限定されるものではない。

さらに、第ｂ－３ステップの反応は、有機溶媒、例えば１，４－ジオキサンにおいて、リン酸カリウム水溶液存在下で１３０～１８０℃に加熱してマイクロ波で１０分～５時間攪拌して行うが、これに限定されるものではない。例えば、前記反応は、０℃付近の低温で５～２４時間攪拌しながら行うが、これに限定されるものではない。

さらに、第ｂ－４ステップの反応は、有機溶媒、例えば１，４－ジオキサン溶液相で行うが、これに限定されるものではない。

本発明の第３態様は、本発明の化合物を有効成分として含むタウタンパク質（tau protein）凝集阻害用組成物を提供する。

本発明の第４態様は、本発明の化合物を有効成分として含むタウタンパク質過剰リン酸化阻害用組成物を提供する。

本発明の第５態様は、本発明の化合物を有効成分として含む、タウタンパク質の凝集又は過剰リン酸化により誘発される疾患の予防又は治療用薬学的組成物を提供する。

本発明の具体的な実施例においては、化学式（１）で表される化合物１～１４の計１４種の化合物を新たに合成し、そのタウタンパク質凝集及び過剰リン酸化阻害効果を確認した。さらに、薬学的組成物としての活用可能性を検証するために、細胞に対して毒性を示さないことを確認した。

本発明における「予防」とは、本発明の薬学的組成物の投与によりタウタンパク質の凝集又は過剰リン酸化により誘導される疾患の発生、拡散及び再発を抑制又は遅延させるあらゆる行為を意味し、「治療」とは、本発明の薬学的組成物の投与により前記疾患の症状を好転又は有利に変化させるあらゆる行為を意味する。

前述したように、本発明の化合物は、タウタンパク質の凝集又は過剰リン酸化を阻害するだけでなく、細胞に対する毒性を示さないので、それを有効成分として含む薬学的組成物は、タウタンパク質の凝集又は過剰リン酸化により誘発される疾患の予防又は治療に用いられる。前記本発明の薬学的組成物を適用することのできる、タウタンパク質の凝集又は過剰リン酸化により誘発される疾患は、アルツハイマー疾患、パーキンソン疾患、血管性認知症、急性脳卒中、外傷、脳血管疾患、脳コード外傷、脊髄外傷、末梢神経障害、網膜症、緑内障又はタウオパチー（tauopathies）であってもよい。前記タウオパチーの例としては、慢性外傷性脳症（chronic traumatic encephalopathy; CTE）、原発性年齢関連タウオパチー（primary age-related tauopathy）、進行性核上性麻痺（progressive supranuclear palsy）、大脳皮質基底核変性症（corticobasal degeneration）、ピック病（Pick's disease）、嗜銀顆粒病（argyrophilic grain disease; AGD）、前頭側頭型認知症（frontotemporal dementia; FTD）、１７番染色体に連鎖するパーキンソニズム（Parkinsonism linked to chromosome 17）、リティコ・ボディグ病（Lytico-Bodig disease, Parkinson-dementia complex of Guam）、神経節膠腫（ganglioglioma）、神経節細胞腫（gangliocytoma）、髄膜血管腫症（meningioangiomatosis）、脳炎後パーキンソニズム（postencephalitic parkinsonism）、亜急性硬化性全脳炎（subacute sclerosing panencephalitis）、鉛脳症（lead encephalopathy）、結節性硬化症（tuberous sclerosis）、パントテン酸キナーゼ関連神経変性症（Pantothenate kinase-associated neurodegeneration）、リポフスチン症（lipofuscinosis）及び外傷性脳損傷（traumatic brain injury）が挙げられるが、これらに限定されるものではない。

例えば、本発明の組成物は、薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤をさらに含んでもよく、それぞれの使用目的に応じて、通常の方法で散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁剤、エマルジョン剤、シロップ剤、エアゾール剤などの経口剤形、滅菌注射溶液の注射剤など、様々な形態に剤形化して用いることができ、経口投与することもでき、静脈内、腹腔内、皮下、直腸、局所投与などの様々な経路で投与することもできる。これらの組成物に含まれるのに適した担体、賦形剤又は希釈剤の例としては、ラクトース、グルコース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリトリトール、マルチトール、デンプン、アカシアゴム、アルギン酸塩、ゼラチン、リン酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、微晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、タルク、ステアリン酸マグネシウム、鉱油などが挙げられる。また、本発明の組成物は、充填剤、抗凝集剤、滑沢剤、湿潤剤、香料、乳化剤、防腐剤などをさらに含んでもよい。

経口用固形製剤としては、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤などが挙げられ、これらの固形製剤は、前記組成物に少なくとも１つの賦形剤、例えばデンプン、炭酸カルシウム、スクロース、ラクトース、ゼラチンなどを混合して剤形化する。また、通常の賦形剤以外に、ステアリン酸マグネシウム、タルクなどの滑沢剤も用いられる。

経口用液体製剤としては、懸濁剤、内用液剤、乳剤、シロップ剤などが挙げられ、通常用いられる通常の希釈剤である水、液体パラフィン以外にも種々の賦形剤、例えば湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤などが用いられる。

非経口投与製剤としては、滅菌水溶液剤、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤、坐剤が挙げられる。非水性溶剤、懸濁剤としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油などの植物性油、オレイン酸エチルなどの注射可能なエステルなどが用いられる。坐剤の基剤としては、ウィテップゾール、マクロゴール、ツイーン６１、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロゼラテンなどが用いられる。一方、注射剤には、溶解剤、等張化剤、懸濁化剤、乳化剤、安定化剤、防腐剤などの従来の添加剤が含まれてもよい。

前記剤形は、通常の混合、顆粒化又はコーティング法により製造することができ、活性成分を約０．１～７５重量％、好ましくは約１～５０重量％の範囲で含有する。約５０～７０ｋｇの哺乳動物に対する単位剤形は、約１０～２００ｍｇの活性成分を含有する。

ここで、本発明の組成物は、薬学的に有効な量で投与する。本発明における「薬学的に有効な量」とは、医学的治療に適用できる合理的な利益／リスク比で疾患を治療するのに十分であり、副作用を起こさない程度の量を意味し、有効用量レベルは、患者の健康状態、疾患の種類、重症度、薬物の活性、薬物に対する感受性、投与方法、投与時間、投与経路及び排出率、治療期間、配合又は同時に用いられる薬物が含まれる要素、並びにその他医学分野で公知の要素により決定される。本発明の組成物は、単独で又は他の治療剤と併用して投与してもよく、従来の治療剤と順次又は同時に投与してもよく、単一又は多重投与してもよい。前記要素を全て考慮して副作用なく最小限の量で最大限の効果が得られる量を投与することが重要であり、これは当業者により容易に決定される。

例えば、投与経路、疾患の重症度、性別、体重、年齢などにより増減するので、前記投与量はいかなる方法であれ本発明を限定するものではない。

本発明の化合物の好ましい投与量は、患者の状態及び体重、疾患の程度、薬物の形態、投与経路及び期間によって異なるが、当業者により適宜選択される。しかし、望ましい効果を得るために、本発明の化合物を１日０．０００１～１００ｍｇ／ｋｇ（体重）、好ましくは０．００１～１００ｍｇ／ｋｇ（体重）で投与するとよい。１日１回又は分割して経口又は非経口経路で投与してもよい。

本発明の第６態様は、本発明の前記薬学的組成物を必要とする個体に前記薬学的組成物を投与するステップを含む、タウタンパク質の凝集や過剰リン酸化により誘発される疾患を予防又は治療する方法を提供する。

本発明における「個体」とは、タウタンパク質の凝集又は過剰リン酸化により誘発される疾患が発症したか、発症するリスクのある、ヒトをはじめとして、サル、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ニワトリ、シチメンチョウ、ウズラ、ネコ、イヌ、マウス、ラット、ウサギ、モルモットを含むあらゆる動物を意味し、本発明の薬学的組成物を個体に投与することにより、前記疾患を効果的に予防又は治療することができる。また、本発明の薬学的組成物は、タウタンパク質の凝集又は過剰リン酸化を阻害することにより治療効果を発揮するので、従来の治療剤と並行して投与することによりシナジー的な効果を発揮する。

本発明における「投与」とは、任意の適切な方法で患者に所定の物質を提供することを意味し、本発明の組成物の投与経路は、標的組織に送達できるものであれば、いかなる一般的な経路で投与してもよい。腹腔内投与、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、皮内投与、経口投与、局所投与、鼻腔内投与、肺内投与、直腸内投与が挙げられるが、これらに限定されるものではない。また、本発明の薬学的組成物は、活性物質を標的細胞に送達することのできる任意の装置により投与することができる。好ましい投与方法及び製剤は、静脈注射剤、皮下注射剤、皮内注射剤、筋肉注射剤、点滴注射剤などである。注射剤は、生理食塩液、リンゲル液などの水性溶剤や、植物油、高級脂肪酸エステル（例えば、オレイン酸エチルなど）、アルコール類（例えば、エタノール、ベンジルアルコール、プロピレングリコール、グリセリンなど）などの非水性溶剤などを用いて作製することができ、変質を防止する安定化剤（例えば、アスコルビン酸、亜硫酸水素ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、ＢＨＡ、トコフェロール、ＥＤＴＡなど）、乳化剤、ｐＨを調節する緩衝剤、微生物の発育を阻止する保存剤（例えば、硝酸フェニル水銀、チメロサール、塩化ベンザルコニウム、フェノール、クレゾール、ベンジルアルコールなど）などの薬学的担体を含んでもよい。

以下、実施例を挙げて本発明をより詳細に説明する。これらの実施例は本発明をより具体的に説明するためのものであり、本発明がこれらの実施例に限定されるものではない。

［実施例１］
（４－（１－イソプロピル－６－オキソ－１，４，５，６－テトラヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（化合物１）の製造
ステップ１－１：６－（４－アミノフェニル）－２－イソプロピル－４，５－ジヒドロピリダジン－３（２Ｈ）－オンの作製
６－（４－アミノフェニル）－４，５－ジヒドロピリダジン－３（２Ｈ）－オン（１０５ｍｇ，０．５５ｍｍｏｌ）と６０％水素化ナトリウム（２４ｍｇ，０．６１ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（dimethylformamide; DMF）に溶解し、その後２－ヨウ化プロパン（５８μＬ，０．５８ｍｍｏｌ）を添加して０℃で１２時間攪拌した。反応終了後に、蒸留水と酢酸エチルを用いて抽出し、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、次いで濾過した。濾過液を減圧濃縮し、その後濃縮液をカラムクロマトグラフィーで精製して表題化合物１２１ｍｇ（収率９９％）を得た。

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.51 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.58 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 5.51 (s, 2H), 4.84 (p, J = 6.6 Hz, 1H), 2.79 (dd, J = 8.9, 7.3 Hz, 2H), 2.39 (dd, J = 8.9, 7.2 Hz, 2H), 1.17 (d, J = 6.6 Hz, 6H).
ステップ１－２：（４－（１－イソプロピル－６－オキソ－１，４，５，６－テトラヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニドの作製
窒素下にて、ステップ１－１で得られた６－（４－アミノフェニル）－２－イソプロピル－４，５－ジヒドロピリダジン－３（２Ｈ）－オン（１１０ｍｇ，０．４７ｍｍｏｌ）と亜硝酸ナトリウム（１５ｍｇ，０．２３ｍｍｏｌ）をエタノールに溶解し、その後０℃で１．０Ｍ塩酸水溶液（０．３ｍＬ，０．３０ｍｍｏｌ）を添加した。その反応混合物を０℃で１０分間攪拌してジアゾニウム塩を形成した。前記ジアゾニウム塩を含む反応混合物にマロノニトリル（１９ｍｇ，０．２８ｍｍｏｌ）を添加し、常温で１０分間攪拌した。その後、水酸化ナトリウム水溶液を用いて反応混合物のｐＨを６．０に調整し、次いで常温でさらに１時間攪拌した。反応終了後に、蒸留水と酢酸エチルで抽出し、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、次いで濾過した。濾過液を減圧濃縮し、濃縮液をカラムクロマトグラフィーで精製して表題化合物１４０ｍｇ（収率９５％）を得た。

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 13.11 (s, 1H), 7.87 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.53 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 4.88 (p, J = 6.6 Hz, 1H), 2.92 (dd, J = 8.9, 7.5 Hz, 2H), 2.49 (m, 2H), 1.20 (d, J = 6.7 Hz, 6H).
［実施例２］
（４－（１－イソプロピル－４－メチル－６－オキソ－１，４，５，６－テトラヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（化合物２）の製造
ステップ２－１：６－（４－アミノフェニル）－２－イソプロピル－５－メチル－４，５－ジヒドロピリダジン－３（２Ｈ）－オンの作製
６－（４－アミノフェニル）－４，５－ジヒドロピリダジン－３（２Ｈ）－オンに代えて６－（４－アミノフェニル）－５－メチル－４，５－ジヒドロピリダジン－３（２Ｈ）－オン（２００ｍｇ，０．９８ｍｍｏｌ）を用いることを除いて、実施例１のステップ１－１と同様に反応させ、表題化合物１９４ｍｇ（収率７５％）を得た。

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.53 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 6.59 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 5.53 (s, 2H), 4.88 (p, J = 6.7 Hz, 1H), 3.31 - 3.19 (m, 1H), 2.59 (dd, J = 16.5, 6.6 Hz, 1H), 2.23 (dd, J = 16.5, 1.6 Hz, 1H), 1.22 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.12 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 1.00 (d, J = 7.3 Hz, 3H).
ステップ２－２：（４－（１－イソプロピル－４－メチル－６－オキソ－１，４，５，６－テトラヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニドの作製
６－（４－アミノフェニル）－２－イソプロピル－４，５－ジヒドロピリダジン－３（２Ｈ）－オンに代えてステップ２－１で得られた６－（４－アミノフェニル）－２－イソプロピル－５－メチル－４，５－ジヒドロピリダジン－３（２Ｈ）－オン（１８０ｍｇ，０．７３ｍｍｏｌ）を用いることを除いて、実施例１のステップ１－２と同様に反応させ、表題化合物２２９ｍｇ（収率９７％）を得た。

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 13.14 (s, 1H), 7.90 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.54 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.91 (p, J = 6.6 Hz, 1H), 2.71 (dd, J = 16.6, 6.8 Hz, 1H), 2.32 (dd, J = 16.6, 1.5 Hz, 1H), 1.25 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.16 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 1.04 (d, J = 7.2 Hz, 3H).
［実施例３］
（４－（１－エチル－４－メチル－６－オキソ－１，４，５，６－テトラヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（化合物３）の製造
ステップ３－１：６－（４－アミノフェニル）－２－エチル－５－メチル－４，５－ジヒドロピリダジン－３（２Ｈ）－オンの作製
６－（４－アミノフェニル）－４，５－ジヒドロピリダジン－３（２Ｈ）－オンに代えて６－（４－アミノフェニル）－５－メチル－４，５－ジヒドロピリダジン－３（２Ｈ）－オン（１００ｍｇ，０．５３ｍｍｏｌ）を用い、ヨウ化プロパンに代えて２－ヨウ化エタン（４７μＬ，０．５８ｍｍｏｌ）を用いることを除いて、実施例１のステップ１－１と同様に反応させ、表題化合物７９ｍｇ（収率６５％）を得た。

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.51 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.58 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 5.53 (s, 2H), 3.73 (ddq, J = 51.9, 13.8, 7.1 Hz, 2H), 3.30 - 3.24 (m, 1H), 2.89 (s, 1H), 2.73 (s, 1H), 2.61 (dd, J = 16.5, 6.6 Hz, 1H), 2.23 (d, J = 16.6 Hz, 1H), 1.13 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.02 (d, J = 7.3 Hz, 3H).
ステップ３－２：（４－（１－エチル－４－メチル－６－オキソ－１，４，５，６－テトラヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニドの作製
６－（４－アミノフェニル）－２－イソプロピル－４，５－ジヒドロピリダジン－３（２Ｈ）－オンに代えてステップ３－１で得られた６－（４－アミノフェニル）－２－エチル－５－メチル－４，５－ジヒドロピリダジン－３（２Ｈ）－オン（７０ｍｇ，０．３０ｍｍｏｌ）を用いることを除いて、実施例１のステップ１－２と同様に反応させ、表題化合物３３ｍｇ（収率３５％）を得た。

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 13.13 (s, 1H), 7.88 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.53 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 3.79 (ddt, J = 32.0, 13.5, 6.8 Hz, 2H), 2.73 (dd, J = 16.6, 6.7 Hz, 1H), 2.35 - 2.23 (m, 1H), 1.16 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.07 (d, J = 7.2 Hz, 3H).
［実施例４］
（４－（４－メチル－６－オキソ－１－（２，２，２－トリフルオロエチル）－１，４，５，６－テトラヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（化合物４）の製造
ステップ４－１：６－（４－アミノフェニル）－５－メチル－２－（２，２，２－トリフルオロエチル）－４，５－ジヒドロピリダジン－３（２Ｈ）－オンの作製
４－（４－アミノフェニル）－３－メチル－４－オキソ酪酸塩酸塩（１００ｍｇ，０．４１ｍｍｏｌ）及び６５％（２，２，２－トリフルオロエチル）ヒドラジン（８３μＬ，０．６１ｍｍｏｌ）をプロパノールに溶解し、その後反応混合物を１００℃のマイクロ波で３時間攪拌した。反応終了後に、蒸留水と酢酸エチルを用いて抽出し、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、次いで濾過した。その後、濾過液を減圧濃縮し、次いでカラムクロマトグラフィーで精製して表題化合物５２ｍｇ（収率４５％）を得た。

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.52 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 6.59 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 5.61 (s, 2H), 4.81 (dq, J = 15.1, 9.3 Hz, 1H), 4.25 (dq, J = 15.1, 9.2 Hz, 1H), 3.41 - 3.35 (m, 1H), 2.75 (dd, J = 16.7, 6.4 Hz, 1H), 2.38 (dd, J = 16.7, 1.6 Hz, 1H), 1.04 (d, J = 7.2 Hz, 3H).
ステップ４－２：（４－（４－メチル－６－オキソ－１－（２，２，２－トリフルオロエチル）－１，４，５，６－テトラヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニドの作製
６－（４－アミノフェニル）－２－イソプロピル－４，５－ジヒドロピリダジン－３（２Ｈ）－オンに代えてステップ４－１で得られた６－（４－アミノフェニル）－５－メチル－２－（２，２，２－トリフルオロエチル）－４，５－ジヒドロピリダジン－３（２Ｈ）－オン（５０ｍｇ，０．１７ｍｍｏｌ）を用いることを除いて、実施例１のステップ１－２と同様に反応させ、表題化合物４５ｍｇ（収率７０％）を得た。

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 13.14 (s, 1H), 7.88 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.55 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 4.86 (dq, J = 15.2, 9.3 Hz, 1H), 4.34 (dq, J = 15.1, 9.1 Hz, 1H), 3.49 (td, J = 7.1, 1.7 Hz, 1H), 2.86 (dd, J = 16.8, 6.6 Hz, 1H), 2.49 - 2.44 (m, 1H), 1.09 (d, J = 7.2 Hz, 3H).
［実施例５］
（４－（１－（２－メトキシエチル）－４－メチル－６－オキソ－１，４，５，６－テトラヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（化合物５）の製造
ステップ５－１：６－（４－アミノフェニル）－２－（２－メトキシエチル）－５－メチル－４，５－ジヒドロピリダジン－３（２Ｈ）－オンの作製
６－（４－アミノフェニル）－４，５－ジヒドロピリダジン－３（２Ｈ）－オンに代えて６－（４－アミノフェニル）－５－メチル－４，５－ジヒドロピリダジン－３（２Ｈ）－オン（１００ｍｇ，０．５３ｍｍｏｌ）を用い、ヨウ化プロパンに代えて１－ブロモ－２－メトキシエタン（５５μＬ，０．５８ｍｍｏｌ）を用いることを除いて、実施例１のステップ１－１と同様に反応させ、表題化合物８４ｍｇ（収率６１％）を得た。

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.52 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.58 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 5.56 (s, 2H), 4.11 - 4.05 (m, 1H), 3.74 - 3.63 (m, 1H), 3.58 - 3.49 (m, 2H), 3.29 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 3.24 (s, 3H), 2.63 (dd, J = 16.5, 6.5 Hz, 1H), 2.25 (dd, J = 16.5, 1.5 Hz, 1H), 1.03 (d, J = 7.3 Hz, 3H).
ステップ５－２：（４－（１－（２－メトキシエチル）－４－メチル－６－オキソ－１，４，５，６－テトラヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニドの作製
６－（４－アミノフェニル）－２－イソプロピル－４，５－ジヒドロピリダジン－３（２Ｈ）－オンに代えてステップ５－１で得られた６－（４－アミノフェニル）－２－（２－メトキシエチル）－５－メチル－４，５－ジヒドロピリダジン－３（２Ｈ）－オン（８０ｍｇ，０．３１ｍｍｏｌ）を用いることを除いて、実施例１のステップ１－２と同様に反応させ、表題化合物３５ｍｇ（収率３４％）を得た。

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 13.14 (s, 1H), 7.88 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.54 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 4.10 (dt, J = 12.8, 6.0 Hz, 1H), 3.75 (dt, J = 13.6, 5.6 Hz, 1H), 3.62 - 3.52 (m, 2H), 3.24 (s, 3H), 2.74 (dd, J = 16.6, 6.7 Hz, 1H), 2.33 (d, J = 16.6 Hz, 1H), 1.07 (d, J = 7.2 Hz, 3H).
［実施例６］
（４－（１－シクロプロピル－４－メチル－６－オキソ－１，４，５，６－テトラヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（化合物６）の製造
ステップ６－１：６－（４－アミノフェニル）－２－シクロプロピル－５－メチル－４，５－ジヒドロピリダジン－３（２Ｈ）－オンの作製
６－（４－アミノフェニル）－５－メチル－４，５－ジヒドロピリダジン－３（２Ｈ）－オン（１００ｍｇ，０．５３ｍｍｏｌ）と６０％水素化ナトリウム（２５ｍｇ，０．６３ｍｍｏｌ）をメチルピロリドン（methylpyrrolidone; NMP）に溶解し、その後臭化シクロプロパン（４６μＬ，０．５８ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を１８０℃のマイクロ波で１２時間攪拌した。反応終了後に、蒸留水と酢酸エチルを用いて抽出し、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、次いで濾過した。濾過液を減圧濃縮し、その後濃縮液をエーテルで固体化して表題化合物４１ｍｇ（収率３０％）を得た。

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.48 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.57 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 5.54 (s, 2H), 3.50 (tt, J = 7.5, 4.2 Hz, 1H), 3.26 (dd, J = 7.9, 6.1 Hz, 1H), 2.63 (dd, J = 16.6, 6.6 Hz, 1H), 2.26 (d, J = 16.6 Hz, 1H), 0.98 (d, J = 7.3 Hz, 3H), 0.92 - 0.82 (m, 1H), 0.79 - 0.68 (m, 3H).
ステップ６－２：（４－（１－シクロプロピル－４－メチル－６－オキソ－１，４，５，６－テトラヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニドの作製
６－（４－アミノフェニル）－２－イソプロピル－４，５－ジヒドロピリダジン－３（２Ｈ）－オンに代えてステップ６－１で得られた６－（４－アミノフェニル）－２－シクロプロピル－５－メチル－４，５－ジヒドロピリダジン－３（２Ｈ）－オン（３０ｍｇ，０．１２ｍｍｏｌ）を用いることを除いて、実施例１のステップ１－２と同様に反応させ、表題化合物３６ｍｇ（収率９６％）を得た。

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 13.11 (s, 1H), 7.85 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.52 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 3.50 (p, J = 6.4 Hz, 1H), 3.39-3.35 (m, 1H), 2.74 (dd, J = 16.7, 6.8 Hz, 1H), 2.34 (d, J = 16.6 Hz, 1H), 1.03 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 0.96 - 0.85 (m, 1H), 0.83 - 0.70 (m, 3H).
［実施例７］
（４－（１－（４－メトキシフェニル）－４－メチル－６－オキソ－１，４，５，６－テトラヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（化合物７）の製造
ステップ７－１：６－（４－アミノフェニル）－２－（４－メトキシフェニル）－５－メチル－４，５－ジヒドロピリダジン－３（２Ｈ）－オンの作製
（２，２，２－トリフルオロエチル）ヒドラジンに代えて（４－メトキシフェニル）ヒドラジン塩酸塩（１０７ｍｇ，０．６１ｍｍｏｌ）を用いることを除いて、実施例４のステップ４－１と同様に反応させ、表題化合物３４ｍｇ（収率２７％）を得た。

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.54 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.39 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 6.96 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 6.58 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 5.58 (s, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.46 - 3.37 (m, 1H), 2.86 (dd, J = 16.5, 6.5 Hz, 1H), 2.40 (dd, J = 16.5, 1.6 Hz, 1H), 1.15 (d, J = 7.3 Hz, 3H).
ステップ７－２：（４－（１－（４－メトキシフェニル）－４－メチル－６－オキソ－１，４，５，６－テトラヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニドの作製
６－（４－アミノフェニル）－２－イソプロピル－４，５－ジヒドロピリダジン－３（２Ｈ）－オンに代えてステップ７－１で得られた６－（４－アミノフェニル）－２－（４－メトキシフェニル）－５－メチル－４，５－ジヒドロピリダジン－３（２Ｈ）－オン（３０ｍｇ，０．２９ｍｍｏｌ）を用いることを除いて、実施例１のステップ１－２と同様に反応させ、表題化合物２９ｍｇ（収率７７％）を得た。

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 13.15 (s, 1H), 7.90 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.54 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.39 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 6.98 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 3.79 (s, 3H), 3.59 - 3.46 (m, 1H), 2.97 (dd, J = 16.6, 6.6 Hz, 1H), 2.45 (s, 1H), 1.20 (d, J = 7.3 Hz, 3H).
［実施例８］
（４－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（化合物８）の製造
ステップ８－１：６－クロロピリダジン－３（２Ｈ）－オンの作製
３，６－ジクロロピリダジン（１ｇ，６．７１ｍｍｏｌ）を酢酸（２６ｍＬ）に溶解し、その後反応混合物を１１０℃で１２時間攪拌した。反応終了後に、反応混合物を濃縮し、次いで炭酸水素ナトリウム水溶液を添加し、常温で攪拌して反応物を固体化し、減圧濃縮して表題化合物４２０ｍｇ（収率４８％）を得た。

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 13.18 (s, 1H), 7.52 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 9.9 Hz, 1H).
ステップ８－２：６－クロロ－２－メチルピリダジン－３（２Ｈ）－オンの作製
実施例８のステップ８－１で得られた６－クロロピリダジン－３（２Ｈ）－オン（１００ｍｇ，０．７７ｍｍｏｌ）とヨウ化メタン（９５μＬ，１．５３ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（２１２ｍｇ，１．５３ｍｍｏｌ）をＤＭＦに溶解し、その後反応混合物を常温で４時間攪拌した。反応終了後に、蒸留水と酢酸エチルを用いて抽出し、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、次いで濾過した。濾過液を減圧濃縮し、その後濃縮液をカラムクロマトグラフィーで精製して表題化合物８２ｍｇ（収率７４％）を得た。

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 13.05 (s, 1H), 7.45 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 2.06 (d, J = 1.4 Hz, 3H).
ステップ８－３：６－（４－アミノフェニル）－２－メチルピリダジン－３（２Ｈ）－オンの作製
実施例８のステップ８－２で得られた６－クロロ－２－メチルピリダジン－３（２Ｈ）－オン（６５ｍｇ，０．４５ｍｍｏｌ）及び４－アミノフェニルボロン酸ピナコールエステル（９８ｍｇ，０．４５ｍｍｏｌ）を１，４－ジオキサン溶液に溶解し、その後Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_２（５２ｍｇ，０．０４ｍｍｏｌ）と２．０Ｍリン酸カリウム水溶液（０．９ｍＬ，１．８０ｍｍｏｌ）を添加した。その反応混合物を１６０℃にてマイクロ波で１．５時間攪拌した。反応終了後に、蒸留水と酢酸エチルを用いて抽出し、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、次いで濾過した。濾過液を減圧濃縮し、濃縮液をカラムクロマトグラフィーで精製して表題化合物８６ｍｇ（収率９５％）を得た。

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.90 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.94 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 6.62 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 5.50 (s, 2H), 3.68 (s, 3H).
ステップ８－４：（４－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニドの作製
６－（４－アミノフェニル）－２－イソプロピル－４，５－ジヒドロピリダジン－３（２Ｈ）－オンに代えてステップ８－３で得られた６－（４－アミノフェニル）－２－メチルピリダジン－３（２Ｈ）－オン（５０ｍｇ，０．２５ｍｍｏｌ）を用いることを除いて、実施例１のステップ１－２と同様に反応させ、表題化合物４１ｍｇ（収率５９％）を得た。

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 13.14 (s, 1H), 8.06 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 7.95 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.57 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.05 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 3.74 (s, 3H).
［実施例９］
（４－（１－イソプロピル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（化合物９）の製造
ステップ９－１：６－クロロ－２－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オンの作製
ヨウ化メタンに代えて２－ヨウ化プロパン（１５３μＬ，１．５３ｍｍｏｌ）を用いることを除いて、実施例８のステップ８－２と同様に反応させ、表題化合物１０７ｍｇ（収率８１％）を得た。

¹H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.14 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 5.23 (pd, J = 6.7, 0.8 Hz, 1H), 1.36 (dd, J = 6.6, 0.9 Hz, 6H).
ステップ９－２：６－（４－アミノフェニル）－２－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オンの作製
６－クロロ－２－メチルピリダジン－３（２Ｈ）－オンに代えてステップ９－１で得られた６－クロロ－２－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オン（１００ｍｇ，０．５８ｍｍｏｌ）を用いることを除いて、実施例８のステップ８－３と同様に反応させ、表題化合物７７ｍｇ（収率５８％）を得た。

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.86 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 7.61 (d, J = 3.6 Hz, 2H), 6.90 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 6.64 (d, J = 3.8 Hz, 2H), 5.49 (s, 2H), 5.18 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 1.33 (s, 6H).
ステップ９－３：（４－（１－イソプロピル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニドの作製
６－（４－アミノフェニル）－２－イソプロピル－４，５－ジヒドロピリダジン－３（２Ｈ）－オンに代えてステップ９－２で得られた６－（４－アミノフェニル）－２－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オン（６０ｍｇ，０．２６ｍｍｏｌ）を用いることを除いて、実施例１のステップ１－２と同様に反応させ、表題化合物７４ｍｇ（収率９２％）を得た。

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 13.14 (s, 1H), 8.03 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 7.99 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.57 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.02 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 5.21 (p, J = 6.6 Hz, 1H), 1.35 (d, J = 6.7 Hz, 6H).
［実施例１０］
（４－（１－（ジフルオロメチル）－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（化合物１０）の製造
ステップ１０－１：６－クロロ－２－（ジフルオロメチル）ピリダジン－３（２Ｈ）－オン及び３－クロロ－６－（ジフルオロメトキシ）ピリダジンの作製
ヨウ化メタンに代えてナトリウム２－クロロ－２，２－ジフルオロアセテート（２３４ｍｇ，１．５３ｍｍｏｌ）を用いることを除いて、実施例８のステップ８－２と同様に反応させ、表題化合物を混合物として得て、溶媒を除去してさらに精製することなく次のステップに用いた。

ステップ１０－２：６－（４－アミノフェニル）－２－（ジフルオロメチル）ピリダジン－３（２Ｈ）－オン及び４－（６－（ジフルオロメトキシ）ピリダジン－３－イル）アニリンの作製
６－クロロ－２－メチルピリダジン－３（２Ｈ）－オンに代えてステップ１０－１で得られた６－クロロ－２－（ジフルオロメチル）ピリダジン－３（２Ｈ）－オン及び３－クロロ－６－（ジフルオロメトキシ）ピリダジン混合物（１００ｍｇ，０．５５ｍｍｏｌ）を用いることを除いて、実施例８のステップ８－３と同様に反応させ、表題化合物６－（４－アミノフェニル）－２－（ジフルオロメチル）ピリダジン－３（２Ｈ）－オン３５ｍｇ（収率２７％）及び４－（６－（ジフルオロメトキシ）ピリダジン－３－イル）アニリン４１ｍｇ（収率３１％）を得た。

６－（４－アミノフェニル）－２－（ジフルオロメチル）ピリダジン－３（２Ｈ）－オン
¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.06 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 7.93 (t, J = 60.0 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.07 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 6.65 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 5.68 (s, 2H);
４－（６－（ジフルオロメトキシ）ピリダジン－３－イル）アニリン
¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.19 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 7.89 (t, J = 72.1 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.47 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 6.67 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 5.61 (s, 2H).
ステップ１０－３：（４－（１－（ジフルオロメチル）－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニドの作製
６－（４－アミノフェニル）－２－イソプロピル－４，５－ジヒドロピリダジン－３（２Ｈ）－オンに代えてステップ１０－２で得られた６－（４－アミノフェニル）－２－（ジフルオロメチル）ピリダジン－３（２Ｈ）－オン（２６ｍｇ，０．１１ｍｍｏｌ）を用いることを除いて、実施例１のステップ１－２と同様に反応させ、表題化合物２０ｍｇ（収率５９％）を得た。

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 13.12 (s, 1H), 8.19 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 7.99 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.98 (t, J = 58.2 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.20 (d, J = 10.0 Hz, 1H).
［実施例１１］
（４－（１，４－ジメチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（化合物１１）の製造
ステップ１１－１：６－クロロ－２，５－ジメチルピリダジン－３（２Ｈ）－オンの作製
６－クロロピリダジン－３（２Ｈ）－オンに代えて６－クロロ－５－メチルピリダジン－３（２Ｈ）－オン（１００ｍｇ，０．６９ｍｍｏｌ）を用いることを除いて、実施例８のステップ８－２と同様に反応させ、表題化合物５３ｍｇ（収率４９％）を得た。

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 6.79 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 3.73 (s, 3H), 2.26 (d, J = 1.3 Hz, 3H).
ステップ１１－２：６－（４－アミノフェニル）－２，５－ジメチルピリダジン－３（２Ｈ）－オンの作製
６－クロロ－２－メチルピリダジン－３（２Ｈ）－オンに代えてステップ１１－１で得られた６－クロロ－２，５－ジメチルピリダジン－３（２Ｈ）－オン（５０ｍｇ，０．３１ｍｍｏｌ）を用いることを除いて、実施例８のステップ８－３と同様に反応させ、表題化合物５１ｍｇ（収率７６％）を得た。

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.82 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.61 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 5.47 (s, 2H), 3.68 (s, 3H), 2.13 (d, J = 1.2 Hz, 3H).
ステップ１１－３：（４－（１，４－ジメチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニドの作製
６－（４－アミノフェニル）－２－イソプロピル－４，５－ジヒドロピリダジン－３（２Ｈ）－オンに代えてステップ１１－２で得られた６－（４－アミノフェニル）－２，５－ジメチルピリダジン－３（２Ｈ）－オン（３５ｍｇ，０．１６ｍｍｏｌ）を用いることを除いて、実施例１のステップ１－２と同様に反応させ、表題化合物３７ｍｇ（収率７７％）を得た。

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 13.14 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.94 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.56 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 3.74 (s, 3H), 2.16 (d, J = 1.2 Hz, 3H).
［実施例１２］
（４－（１－イソプロピル－４－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（化合物１２）の製造
ステップ１２－１：６－クロロ－２－イソプロピル－５－メチルピリダジン－３（２Ｈ）－オンの作製
６－クロロピリダジン－３（２Ｈ）－オンに代えて６－クロロ－５－メチルピリダジン－３（２Ｈ）－オン（２００ｍｇ，１．３８ｍｍｏｌ）を用い、ヨウ化メタンに代えて２－ヨウ化プロパン（１６６μＬ，１．６６ｍｍｏｌ）を用いることを除いて、実施例８のステップ８－２と同様に反応させ、表題化合物１１２ｍｇ（収率４３％）を得た。

¹H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.03 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.26 (p, J = 6.6 Hz, 1H), 2.21 (d, J = 1.3 Hz, 4H), 1.35 (d, J = 6.7 Hz, 6H).
ステップ１２－２：６－（４－アミノフェニル）－２－イソプロピル－５－メチルピリダジン－３（２Ｈ）－オンの作製
６－クロロ－２－メチルピリダジン－３（２Ｈ）－オンに代えてステップ１２－１で得られた６－クロロ－２－イソプロピル－５－メチルピリダジン－３（２Ｈ）－オン（１００ｍｇ，０．５３ｍｍｏｌ）を用いることを除いて、実施例８のステップ８－３と同様に反応させ、表題化合物８４ｍｇ（収率６４％）を得た。

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.78 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.62 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 5.45 (s, 2H), 5.20 (p, J = 6.6 Hz, 1H), 2.13 (s, 2H), 1.32 (d, J = 6.6 Hz, 6H).
ステップ１２－３：（４－（１－イソプロピル－４－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニドの作製
６－（４－アミノフェニル）－２－イソプロピル－４，５－ジヒドロピリダジン－３（２Ｈ）－オンに代えてステップ１２－２で得られた６－（４－アミノフェニル）－２－イソプロピル－５－メチルピリダジン－３（２Ｈ）－オン（７０ｍｇ，０．２９ｍｍｏｌ）を用いることを除いて、実施例１のステップ１－２と同様に反応させ、表題化合物８８ｍｇ（収率９５％）を得た。

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 13.13 (s, 1H), 8.03 - 7.93 (m, 3H), 7.57 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 5.24 (p, J = 6.6 Hz, 1H), 2.16 (d, J = 1.2 Hz, 3H), 1.35 (d, J = 6.6 Hz, 6H).
［実施例１３］
（３－クロロ－４－（１，４－ジメチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（化合物１３）の製造
ステップ１３－１：６－（４－アミノ－２－クロロフェニル）－２，５－ジメチルピリダジン－３（２Ｈ）－オンの作製
４－アミノフェニルボロン酸ピナコールエステルに代えて４－アミノ－２－クロロフェニルボロン酸ピナコールエステル（１６４ｍｇ，１．０４ｍｍｏｌ）を用い、６－クロロ－２－メチルピリダジン－３（２Ｈ）－オンに代えて実施例１１のステップ１１－１で得られた６－クロロ－２，５－ジメチルピリダジン－３（２Ｈ）－オン（１５０ｍｇ，０．９５ｍｍｏｌ）を用いることを除いて、実施例８のステップ８－３と同様に反応させ、表題化合物１８１ｍｇ（収率７７％）を得た。

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.49 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 7.16 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.68 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 6.57 (dd, J = 8.4, 2.2 Hz, 1H), 3.68 (s, 3H), 2.11 (d, J = 1.2 Hz, 3H).
ステップ１３－２：（４－（１，４－ジメチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－３－クロロフェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニドの作製
６－（４－アミノフェニル）－２－イソプロピル－４，５－ジヒドロピリダジン－３（２Ｈ）－オンに代えてステップ１３－１で得られた６－（４－アミノ－２－クロロフェニル）－２，５－ジメチルピリダジン－３（２Ｈ）－オン（１５０ｍｇ，０．６０ｍｍｏｌ）を用いることを除いて、実施例１のステップ１－２と同様に反応させ、表題化合物１１５ｍｇ（収率５９％）を得た。

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.61 - 7.55 (m, 3H), 7.51 (dd, J = 8.5, 2.1 Hz, 1H), 3.72 (s, 3H), 2.14 (d, J = 1.2 Hz, 3H).
［実施例１４］
（４－（１，４－ジメチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－３－フルオロフェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（化合物１４）の製造
ステップ１４－１：６－（４－アミノ－２－フルオロフェニル）－２，５－ジメチルピリダジン－３（２Ｈ）－オンの作製
４－アミノフェニルボロン酸ピナコールエステルに代えて４－アミノ－２－フルオロフェニルボロン酸ピナコールエステル（１９７ｍｇ，０．８３ｍｍｏｌ）を用い、６－クロロ－２－メチルピリダジン－３（２Ｈ）－オンに代えて実施例１１のステップ１１－１で得られた６－クロロ－２，５－ジメチルピリダジン－３（２Ｈ）－オン（１２０ｍｇ，０．７６ｍｍｏｌ）を用いることを除いて、実施例８のステップ８－３と同様に反応させ、表題化合物１４６ｍｇ（収率８３％）を得た。

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.55 (s, 1H), 7.34 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 6.45 (dd, J = 8.4, 2.1 Hz, 1H), 6.38 (dd, J = 14.3, 2.1 Hz, 1H), 5.77 (s, 2H), 3.69 (s, 3H), 2.12 (d, J = 1.2 Hz, 3H).
ステップ１４－２：（４－（１，４－ジメチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－３－フルオロフェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニドの作製
６－（４－アミノフェニル）－２－イソプロピル－４，５－ジヒドロピリダジン－３（２Ｈ）－オンに代えてステップ１４－１で得られた６－（４－アミノ－２－フルオロフェニル）－２，５－ジメチルピリダジン－３（２Ｈ）－オン（１００ｍｇ，０．４３ｍｍｏｌ）を用いることを除いて、実施例１のステップ１－２と同様に反応させ、表題化合物８８ｍｇ（収率６６％）を得た。

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.73 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.42 - 7.33 (m, 3H), 3.74 (s, 3H), 2.15 (s, 3H).
［製剤例］
一方、本発明による化学式（１）で表される新規化合物は、目的に応じて様々な形態に製剤化することができる。以下、本発明による化学式（１）で表される化合物を活性成分として含有するいくつかの製剤化方法を例示するが、本発明がこれらに限定されるものではない。

製剤例１：直接加圧による錠剤の製造
実施例１～１４で作製した活性成分５．０ｍｇを篩にかけ、その後ラクトース１４．１ｍｇ、クロスポビドンＵＳＮＦ０．８ｍｇ及びステアリン酸マグネシウム０．１ｍｇを混合し、加圧して錠剤として製造した。

製剤例２：湿式造粒による錠剤の製造
実施例１～１４で作製した活性成分５．０ｍｇを篩にかけ、その後ラクトース１６．０ｍｇ及びデンプン４．０ｍｇと混合した。ポリソルベート８００．３ｍｇを純水に溶解し、その後前記混合物にこの溶液を適量添加して微粒化した。乾燥後に微粒を篩にかけ、コロイド性二酸化ケイ素（silicon dioxide）２．７ｍｇ及びステアリン酸マグネシウム２．０ｍｇと混合し、微粒を加圧して錠剤として製造した。

製剤例３：粉末及びカプセル剤の製造
実施例１～１４で作製した活性成分５．０ｍｇを篩にかけ、その後ラクトース１４．８ｍｇ、ポリビニルピロリドン１０．０ｍｇ及びステアリン酸マグネシウム０．２ｍｇと共に混合した。混合物を適切な装置にてＮｏ.５硬質ゼラチンカプセルに充填し、カプセル剤として製造した。

製剤例４：注射剤の製造
実施例１～１４で作製した活性成分１００ｍｇを含有し、その他にマンニトール１８０ｍｇ、Ｎａ_２ＨＰＯ_４・１２Ｈ_２Ｏ２６ｍｇ及び蒸留水２９７４ｍｇをさらに含有する注射剤として製造した。

実験例１：細胞モデルを用いたタウ凝集阻害物質の選択
新たなタウ凝集阻害物質を選択するために、生きた細胞内におけるタウオリゴマー形成の観察が容易なタウ－ＢｉＦＣ細胞モデルを用いた。タウ－ＢｉＦＣ細胞を３８４ウェルプレートに分注し、翌日、タウキナーゼＰＫＡを活性化してタウ凝集を誘導する化合物であるＦｏｒｓｋｏｌｉｎ（処理濃度３０μＭ）と共に、実施例１～１４で作製した化合物を用いて、それぞれ１、３及び１０μＭの濃度で処理した。４８時間後に、Ｈｏｅｃｈｓｔ（処理濃度２μｇ／ｍＬ）を用いて細胞内の核を染色し、Ｏｐｅｒｅｔｔａ（PerkinElmer）を用いて自動でＢｉＦＣ蛍光強度を数値化し、全プレートにおいて各ウェル内の染色された核を計数した。タウ凝集を誘導するＦｏｒｓｋｏｌｉｎでのみ処理したグループを１００％のタウ凝集状態の基準とし、「本発明の実施例で合成した化合物によるＢｉＦＣ蛍光強度／（タウ凝集を誘導するＦｏｒｓｋｏｌｉｎでのみ処理した対照群の蛍光強度－未処理対照群の蛍光強度）×１００」の式によりその効果を確認した。また、新たに合成された化合物により誘導された細胞毒性の程度も、Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎでのみ処理したグループを１００％の生存率の基準とし、「（化合物で処理したグループの染色された核の数／Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎで処理したグループの染色された核の数）×１００」の式により化合物の細胞毒性値を算出した。処理結果から、化合物処理濃度１０μＭにおける７０％以上のタウ凝集抑制及び１００％の細胞生存率をボーダーラインとし、細胞内のタウ凝集を阻害する物質を一連の候補群から選択した。

実験例２：新規化合物の濃度依存的タウ凝集阻害効果の確認
実験例１で選択した化合物の各濃度におけるタウ凝集阻害効果を確認するために、タウ凝集誘導物質であるＦｏｒｓｋｏｌｉｎ（処理濃度３０μＭ）と共に、選択した化合物を用いてそれぞれ０．０．０３、．０．０１、０．３、１、３、１０及び３０μＭの濃度でタウ－ＢｉＦＣ細胞を処理した。４８時間後に、細胞イメージを確認してタウ凝集反応及び細胞毒性の程度を分析した。化合物のＩＣ_５０及び毒性（toxicity）は、Ｐｒｉｓｍソフトウェア（GraphPad）の非線形回帰分析（nonlinear regression analysis）法で分析した。代表的な化合物の算出結果を表２に示す。共に比較した比較例の化合物の構造式を表３に示す。

表２及び表３に示すように、本発明の化合物は、公知の物質であるレボシメンダンに比べて優れたタウ凝集阻害効果を発揮するのに対して、本発明の化合物に類似した骨格を母核とすると共に、ピリダジノン及び４，５－ジヒドロピリダジノンの２番目の窒素上の置換基の有無及びそれらのフェニル基との結合位置を変えて準備した比較例においては、基準物質であるレボシメンダンに比べてタウ凝集阻害効果が低いことが確認された。

実験例３：新規化合物のＣＹＰ同酵素活性抑制効果
実施例１～１４で作製した化合物によるＣＹＰ同酵素活性抑制効果を確認した。具体的には、ヒト肝ミクロソーム（０．２５ｍｇ／ｍＬ）、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）、５種の薬物代謝酵素の基質薬物カクテル（Ｐｈｅｎａｃｅｔｉｎ５０μＭ、Ｄｉｃｌｏｆｅｎａｃ１０μＭ、Ｓ－ｍｅｐｈｅｎｙｔｏｉｎ１００μＭ、Ｄｅｘｔｒｏｍｅｔｈｏｒｐｈａｎ５μＭ、及びＭｉｄａｚｏｌａｍ２．５μＭ）、並びに化合物をそれぞれ０又は１０μＭの濃度で添加し、３７℃で予め５分間培養し、その後ＮＡＤＰＨｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ溶液を添加し、３７℃でさらに１５分間培養した。その後、内部標準物質（Terfenadine）を含むアセトニトリル溶液を添加して反応を終結し、５分間遠心分離（１４，０００ｒｐｍ，４℃）し、次いで上清をＬＣ－ＭＳ／ＭＳシステムに注入して基質薬物の代謝物を同時に分析することにより、薬物代謝酵素阻害能を評価した。

前記反応により生成された各ＣＹＰ同酵素指標薬物の代謝物は、ＳｈｉｍａｄｚｕＮｅｘｅｒａＸＲシステム及びＴＳＱｖａｎｔａｇｅ（Thermo）を用いて分析した。ＨＰＬＣカラムとしては、ＫｉｎｅｔｅｘＣ１８（２．１×１００ｍｍ，２．６μｍ，粒子サイズ；Phenomenex, USA）を用い、移動相としては、（Ａ）０．１％ギ酸含有蒸留水、及び（Ｂ）０．１％ギ酸含有アセトニトリルを用い、表４に示す勾配プログラムを用いた。

生成された代謝物はＭＲＭ（multiple Reaction Monitoring）定量モードを用いて定量し、データ分析にはＸｃａｌｉｂｕｒ（version 1.6.1）を用いた。本発明の実施例で作製した新規化合物のＣＹＰ同酵素活性抑制効果を確認するために、化合物を添加していない対照群（control）におけるＣＹＰ同酵素の活性率を表５に示す。

実験例４：新規化合物の肝ミクロソーム安定性の確認
実施例１～１４で作製した化合物による肝ミクロソーム安定性を確認した。具体的には、４種の肝ミクロソーム（ヒト、イヌ、ラット及びマウス，それぞれ０．５ｍｇ，ｍＬ）、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）、化合物を１μＭの濃度で添加し、３７℃で予め５分間培養し、その後ＮＡＤＰＨｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ溶液を添加し、３７℃でさらに３０分間培養した。その後、内部標準物質（chloropropamide）を含むアセトニトリル溶液を添加して反応を終結し、５分間遠心分離（１４，０００ｒｐｍ，４℃）し、次いで上清をＬＣ－ＭＳ／ＭＳシステムに注入して基質薬物を分析することにより、８種の化合物における代謝安定性を評価した。

前記反応で残った基質の量は、ＳｈｉｍａｄｚｕＮｅｘｅｒａＸＲシステム及びＴＳＱｖａｎｔａｇｅ（Thermo）を用いて分析した。ＨＰＬＣカラムとしては、ＫｉｎｅｔｅｘＸＢ－Ｃ１８（２．１×１００ｍｍ，２．６μｍ，粒子サイズ；Phenomenex, USA）を用い、移動相としては、（Ａ）０．１％ギ酸含有蒸留水、及び（Ｂ）０．１％ギ酸含有アセトニトリルを用いた。データ分析には、Ａｎａｌｙｓｔｓｏｆｔｗａｒｅ（ｖｅｒｓｉｏｎ１．６．３）及びＸｃａｌｉｂｕｒ（ｖｅｒｓｉｏｎ１．６．１）を用いた。算出結果を表６に示す。

以上の説明から、本発明の属する技術分野の当業者であれば、本発明がその技術的思想や必須の特徴を変更することなく、他の具体的な形態で実施できることを理解するであろう。なお、前記実施例はあくまで例示的なものであり、限定的なものでないことを理解すべきである。本発明には、明細書ではなく請求の範囲の意味及び範囲とその等価概念から導かれるあらゆる変更や変形された形態が含まれるものと解釈すべきである。

Claims

下記化学式（１）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩。

前記化学式（１）において、

Ｒ_１は水素又はハロゲンであり、
Ｒ_２は水素又はＣ_１－６アルキルであり、
Ｒ_３はＣ_１－６アルキル、Ｃ_１－６アルコキシ－Ｃ_０－６アルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_３－６シクロアルキル又はＣ_１－６アルコキシ－Ｃ_６－１０アリールである。
Ｒ_１は水素、クロロ又はフルオロであり、
Ｒ_２は水素又はメチルであり、
Ｒ_３はメチル、エチル、イソプロピル、シクロプロピル、ジフルオロメチル、２，２，２－トリフルオロエチル、メトキシフェニル又はメトキシエチルである、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
下記化学式（２）又は（３）で表される、請求項１又は２に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
前記化合物は、
１．（４－（１－イソプロピル－６－オキソ－１，４，５，６－テトラヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（(4-(1-isopropyl-6-oxo-1,4,5,6-tetrahydropyridazin-3-yl)phenyl)carbonohydrazonoyl dicyanide）、
２．（４－（１－イソプロピル－４－メチル－６－オキソ－１，４，５，６－テトラヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（(4-(1-isopropyl-4-methyl-6-oxo-1,4,5,6-tetrahydropyridazin-3-yl)phenyl)carbonohydrazonoyl dicyanide）、
３．（４－（１－エチル－４－メチル－６－オキソ－１，４，５，６－テトラヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（(4-(1-ethyl-4-methyl-6-oxo-1,4,5,6-tetrahydropyridazin-3-yl)phenyl)carbonohydrazonoyl dicyanide）、
４．（４－（４－メチル－６－オキソ－１－（２，２，２－トリフルオロエチル）－１，４，５，６－テトラヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（(4-(4-methyl-6-oxo-1-(2,2,2-trifluoroethyl)-1,4,5,6-tetrahydropyridazin-3-yl)phenyl)carbonohydrazonoyl dicyanide）、
５．（４－（１－（２－メトキシエチル）－４－メチル－６－オキソ－１，４，５，６－テトラヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（(4-(1-(2-methoxyethyl)-4-methyl-6-oxo-1,4,5,6-tetrahydropyridazin-3-yl)phenyl)carbonohydrazonoyl dicyanide）、
６．（４－（１－シクロプロピル－４－メチル－６－オキソ－１，４，５，６－テトラヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（(4-(1-cyclopropyl-4-methyl-6-oxo-1,4,5,6-tetrahydropyridazin-3-yl)phenyl)carbonohydrazonoyl dicyanide）、
７．（４－（１－（４－メトキシフェニル）－４－メチル－６－オキソ－１，４，５，６－テトラヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（(4-(1-(4-methoxyphenyl)-4-methyl-6-oxo-1,4,5,6-tetrahydropyridazin-3-yl)phenyl)carbonohydrazonoyl dicyanide）、
８．（４－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（(4-(1-methyl-6-oxo-1,6-dihydropyridazin-3-yl)phenyl)carbonohydrazonoyl dicyanide）、
９．（４－（１－イソプロピル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（(4-(1-isopropyl-6-oxo-1,6-dihydropyridazin-3-yl)phenyl)carbonohydrazonoyl dicyanide）、
１０．（４－（１－（ジフルオロメチル）－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（(4-(1-(difluoromethyl)-6-oxo-1,6-dihydropyridazin-3-yl)phenyl)carbonohydrazonoyl dicyanide）、
１１．（４－（１，４－ジメチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（(4-(1,4-dimethyl-6-oxo-1,6-dihydropyridazin-3-yl)phenyl)carbonohydrazonoyl dicyanide）、
１２．（４－（１－イソプロピル－４－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（(4-(1-isopropyl-4-methyl-6-oxo-1,6-dihydropyridazin-3-yl)phenyl)carbonohydrazonoyl dicyanide）、
１３．（３－クロロ－４－（１，４－ジメチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（(3-chloro-4-(1,4-dimethyl-6-oxo-1,6-dihydropyridazin-3-yl)phenyl)carbonohydrazonoyl dicyanide）、又は
１４．（４－（１，４－ジメチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－３－フルオロフェニル）カルボノヒドラゾノイルジシアニド（(4-(1,4-dimethyl-6-oxo-1,6-dihydropyridazin-3-yl)-3-fluorophenyl)carbonohydrazonoyl dicyanide）である、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
酸存在下で、一末端に反応性アミノ基を含む、下記化学式（４）で表される化合物を亜硝酸ナトリウム及びマロノニトリル（malononitrile）と反応させてイミン結合を形成するステップを含む、請求項１の化合物の製造方法。

前記化学式（４）において、Ｒ_１～Ｒ_３は請求項１において定義した通りである。
Ｃ_１－４の低級アルコール溶媒に化学式（４）の化合物と亜硝酸ナトリウムを溶解させ、－５～５℃で酸水溶液を添加してジアゾニウム塩を形成する第１ステップと、
前記第１ステップで得られたジアゾニウム塩を含む反応溶液にマロノニトリルを添加して１５～４０℃で反応させる第２ステップと、
前記第２ステップの反応溶液に塩基水溶液を添加して中和する第３ステップとを含む一連の過程により行われる、請求項５に記載の製造方法。
前記化学式（４）の化合物は、下記化学式（４－ａ）又は（４－ｂ）で表される化合物である、請求項５に記載の製造方法。
前記化学式（４－ａ）で表される化合物は、
４－（４－アセトアミドフェニル）－４－オキソ－（３－非置換もしくはＲ_２で置換された）－酪酸をヒドラジンと反応させる第ａ－１ステップと、
前のステップで得られた（Ｎ－（６－オキソ－（４－非置換もしくはＲ_２で置換された）－１，４，５，６－テトラヒドロピリダジン－３－イル）フェニル）アセトアミドを酸と反応させる第ａ－２ステップと、
Ｒ_３が水素以外の置換基であれば、選択的に、前のステップで得られた６－（４－アミノフェニル）－（４－非置換もしくはＲ_２で置換された）－４，５－ジヒドロピリダジン－３（２Ｈ）－オンをＲ_３Ｘ（Ｘはハロゲン）と塩基条件下で反応させる第ａ－３ステップとを含む一連の過程により、又は
４－（４－アミノフェニル）－４－オキソ－（３－非置換もしくはＲ_２で置換された）－酪酸を非置換もしくはＲ_３で置換されたヒドラジンと反応させる第ａ－１’ステップにより準備される、請求項７に記載の製造方法。
前記化学式（４－ｂ）で表される化合物は、
３，６－ジハロ（４－非置換又はＲ_２で置換された）ピリダジンを酸に溶解して反応させ、その後塩基を添加して固体化する第ｂ－１ステップと、
Ｒ_３が水素以外の置換基であれば、選択的に、前のステップで得られた６－ハロ－（５－非置換又はＲ_２で置換された）ピリダジン－３（２Ｈ）－オンをＲ_３Ｘ（Ｘはハロゲン）と塩基条件下で反応させる第ｂ－２ステップと、
前のステップで得られた６－ハロ－（２－非置換又はＲ_３で置換された）－（５－非置換又はＲ_２で置換された）ピリダジン－３（２Ｈ）－オンを４－アミノ又はニトロ－（２－非置換又はＲ_１で置換されたフェニル）ボロン酸ピナコールエステルとＰｄ（ＰＰｈ_３）_２触媒下で反応させる第ｂ－３ステップと、
前記第ｂ－３ステップで４－ニトロ－（２－非置換又はＲ_１で置換されたフェニル）ボロン酸ピナコールエステルと反応させたものであれば、選択的に、前のステップで得られた一末端にニトロ置換基を有する化合物を水素雰囲気にてＰｄ／Ｃ触媒下で反応させて前記ニトロ基をアミノ基に還元する第ｂ－４ステップとを含む一連の過程により準備される、請求項７に記載の製造方法。
請求項１に記載の化合物を有効成分として含むタウタンパク質（tau protein）凝集阻害用組成物。
請求項１に記載の化合物を有効成分として含むタウタンパク質過剰リン酸化阻害用組成物。
請求項１に記載の化合物を有効成分として含む、タウタンパク質の凝集又は過剰リン酸化により誘発される疾患の予防又は治療用薬学的組成物。
前記タウタンパク質の凝集又は過剰リン酸化により誘発される疾患は、アルツハイマー疾患、パーキンソン疾患、血管性認知症、急性脳卒中、外傷、脳血管疾患、脳コード外傷、脊髄外傷、末梢神経障害、網膜症、緑内障及びタウオパチー（tauopathies）からなる群から選択されるものである、請求項１２に記載の薬学的組成物。
前記タウオパチーは、慢性外傷性脳症（chronic traumatic encephalopathy; CTE）、原発性年齢関連タウオパチー（primary age-related tauopathy）、進行性核上性麻痺（progressive supranuclear palsy）、大脳皮質基底核変性症（corticobasal degeneration）、ピック病（Pick's disease）、嗜銀顆粒病（argyrophilic grain disease; AGD）、前頭側頭型認知症（frontotemporal dementia; FTD）、１７番染色体に連鎖するパーキンソニズム（Parkinsonism linked to chromosome 17）、リティコ・ボディグ病（Lytico-Bodig disease, Parkinson-dementia complex of Guam）、神経節膠腫（ganglioglioma）、神経節細胞腫（gangliocytoma）、髄膜血管腫症（meningioangiomatosis）、脳炎後パーキンソニズム（postencephalitic parkinsonism）、亜急性硬化性全脳炎（subacute sclerosing panencephalitis）、鉛脳症（lead encephalopathy）、結節性硬化症（tuberous sclerosis）、パントテン酸キナーゼ関連神経変性症（Pantothenate kinase-associated neurodegeneration）、リポフスチン症（lipofuscinosis）及び外傷性脳損傷（traumatic brain injury）からなる群から選択されるものである、請求項１３に記載の薬学的組成物。