JP7515406B2 - Ｐｃｓｋ９結合分子を含む組成物及びその使用方法 - Google Patents

Description

関連出願
本出願は、２０１８年５月１６日に出願された米国仮出願第６２／６７２，１８７号の利益及び当該仮出願に対する優先権を主張するものであり、その全体は参照により本明細書に組み込まれる。

開示の分野
本開示は、プロタンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）と結合するフィブロネクチン型足場ドメインタンパク質、ならびにその医薬組成物及び使用方法に関する。

プロタンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）は、ヒトの１番染色体上のＰＣＳＫ９遺伝子がコードする酵素である。ＰＣＳＫ９は、低密度リポタンパク質粒子（ＬＤＬ）用の受容体に結合する。肝臓及びその他細胞膜上のＬＤＬ受容体（ＬＤＬＲ）はＬＤＬ粒子と結合し、細胞外液から細胞内へのＬＤＬ粒子のエンドサイトーシスを開始させ、その結果、血中ＬＤＬ粒子濃度が低下する。ＰＣＳＫ９をブロックすると、より多くのＬＤＬＲが再利用されて細胞の表面上に存在するようになり、細胞外液からＬＤＬ粒子が除去される。それゆえ、ＰＣＳＫ９をブロックすることにより、血中ＬＤＬ粒子濃度を低下させることができる。

モノクローナル抗体ＰＣＳＫ９阻害剤であるアリロクマブ及びエボロクマブは、スタチン及び他の薬剤が十分に有効ではなかったまたは忍容性が不十分である場合にＬＤＬ粒子濃度を低下させるための、２週間に１回または毎月の皮下注射薬または注入薬として承認された。毎月の注射では、所望の用量に到達させるには数ミリリットルの医薬品製品が必要となる。より高濃度の活性剤を含む製剤がより望ましい投与スケジュール及び容量をもたらすことができ得るが、これらの投与スケジュール及び容量は、溶解限度、高い粘度、及び、凝集して粒子を形成する性質を含む、生物学的製剤の不安定性によって妨げられている。Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ ＪＦ，ｅｔ ａｌ．，Ｏｖｅｒｌｏｏｋｉｎｇ ｓｕｂｖｉｓｉｂｌｅ ｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｉｎ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｒｏｄｕｃｔｓ：Ｇａｐｓ ｔｈａｔ ｍａｙ ｃｏｍｐｒｏｍｉｓｅ ｐｒｏｄｕｃｔ ｑｕａｌｉｔｙ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｖｏｌ．９８，Ｉｓｓｕｅ ４（２００８）。

ＰＣＳＫ９を標的とし、かつ、概ね安全で忍容性が良好なプロファイルを維持しつつ、より望ましい投与スケジュール、より少ない容量、及び／または有効性の向上という潜在能力を有する医薬組成物が必要とされている。

本開示は、プロタンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）と高親和性で結合するフィブロネクチン足場タンパク質を含む組成物を提供し、当該組成物は、最大の生物学的作用、ならびに、より簡便な投与スケジュール、投与容量、及び患者が使いやすい送達デバイス用に、高濃度で安定的に製剤化することができる。ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質は、ＰＣＳＫ９結合モチーフ、及びヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）のアミノ酸配列を含む。ＰＣＳＫ９結合モチーフ及びＨＳＡアミノ酸配列は、遺伝子融合体として発現し得る、または、化学的にコンジュゲートされ得る。

本明細書に記載のＰＣＳＫ９結合モチーフは、第１０番目のヒトフィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン（１０Ｆｎ３）から誘導され高親和性で標的に結合するように遺伝子操作されたタンパク質ファミリーであるアドネクチンをベースとしている。本開示に従い、当該ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質は高濃度で安定的に製剤化され、最大の生物学的作用、ならびに簡便な投与スケジュール及び容量を可能とする。本組成物中におけるＰＣＳＫ９結合融合タンパク質の濃度は少なくとも１００ｍｇ／ｍＬである。一部の実施形態では、本組成物中におけるＰＣＳＫ９結合融合タンパク質の濃度は少なくとも約２００ｍｇ／ｍＬである。一部の実施形態では、本組成物中におけるＰＣＳＫ９結合融合タンパク質の濃度は、少なくとも約２５０ｍｇ／ｍＬ、または少なくとも約２７５ｍｇ／ｍＬ、または少なくとも約３００ｍｇ／ｍＬ、または少なくとも約３５０ｍｇ／ｍＬである。一部の実施形態では、ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質は、約２７５ｍｇ～約３２５ｍｇ（例えば、約３００ｍｇ）の単位用量で投与される。

ＰＣＳＫ９結合モチーフは、本明細書に記載の（配列番号１）のアミノ酸配列またはそのバリアントを含むまたはそれから構成される。ＰＣＳＫ９結合モチーフは、濃度依存的にナノモル未満の親和性でヒトＰＣＳＫ９に結合する。ＰＣＳＫ９結合モチーフは、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）アミノ酸配列と化学的にコンジュゲートしている、またはＣ末端融合している。様々な実施形態では、ＰＣＳＫ９結合モチーフは、Ｃ末端においてＨＳＡアミノ酸配列と融合しており、ＰＣＳＫ９結合モチーフとＨＳＡアミノ酸配列の間のアミノ酸のリンカー配列を含んでいてもよい。

ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質は、高濃度の液剤の形態で安定的に製剤化することができる。本製剤は、通常の長期保存条件、ならびに加速及び負荷条件下の短期保存において、大幅な劣化または粒子形成を示さない。例示的な製剤は、（上記の活性剤に加えて）、Ｌ－ヒスチジン、Ｌ－ヒスチジン一塩酸塩、塩化ナトリウム、及び任意選択的にポリソルベート８０、を含むまたは本質的にそれから構成される。

本開示の医薬組成物は、用量あたり所定量の本開示の活性剤を含有する単位投与剤形で都合よく提供されてもよい。一部の実施形態では、単位用量の容量は、約１．５ｍＬ以下、または約１ｍＬ以下である。一部の実施形態では、単位用量の容量は、０．８ｍＬ以下、または０．７ｍＬ以下である。更に他の実施形態では、本組成物は、例えば、０．５ｍＬ未満、または約０．２５ｍＬ未満、または約０．１５ｍＬ未満の容量を含むマイクロドーズで投与される。様々な実施形態では、本組成物は、約２０～約４５０ｍｇのＰＣＳＫ９結合融合タンパク質を含む単位用量で送達される。例えば、一部の実施形態では、毎週のマイクロドーズ（例えば、約０．２５ｍＬ未満または約０．１５ｍＬ未満の容量）で、２０～約７５ｍｇの用量を投与する。他の実施形態では、約２週間毎、毎月、または２か月間毎に、約０．７～１．５ｍＬの範囲の容量で約２００～約４５０ｍｇの用量を投与する。

本組成物または製剤は、皮下投与、筋肉内投与、皮膚内投与、または静脈内投与による投与に好適である。高濃度の製剤により、皮下投与に好適な、より少ない頻度の投与スケジュール及びより少ない投与容量が可能となる。本明細書で示すとおり、比較的低濃度のＰＣＳＫ９結合融合タンパク質でＰＣＳＫ９の最大抑制が達成され、またより高濃度により、より長い期間の抑制が可能となる。一部の実施形態では、週に約１回、２週間に１回、または３週間に約１回、または４週間に約１回（例えば、月に約１回）、または６週間に約１回、または８週間に約１回（２か月間に約１回）、本組成物の単位用量を対象に投与する。

一部の実施形態では、ほぼ毎週または約２週間毎に、例えば、約５０～約２５０μＬの容量などの本組成物のマイクロドーズを対象に投与する。

ヒト対象におけるＰＣＳＫ９関連疾患を治療するために、本組成物を投与してもよい。一部の実施形態では、患者はＬＤＬ（例えば、ＬＤＬ－Ｃ）の低下を必要としている。一部の実施形態では、対象は、高コレステロール血症及び／またはアテローム性動脈硬化症などのコレステロール関連疾患を示していてもよい。一部の実施形態では、対象は家族性高コレステロール血症を有する。一部の実施形態では、対象は、心血管疾患（例えば、動脈硬化性冠状動脈性心疾患）を有する、または、そのリスクが高い。

一部の実施形態では、スタチン治療薬または別の経口脂質低下治療薬と共に本組成物を投与する、あるいは、一部の実施形態では、高コレステロール血症用の唯一の治療薬として、つまり、経口脂質低下治療薬（例えば、スタチン治療薬）を用いずに、本組成物を提供する。

ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質の構造を示す。 非ヒト霊長類（ＮＨＰ）及びヒトにおけるＰＣＳＫ９の薬物動態－薬力学（ＰＫ－ＰＤ）モデルを示す。ＬＩＢ－００３は、ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質のことを意味する。 ＬＤＬＣを標的とするＰＣＳＫ９の作用を予測するためのＧａｄｋａｒモデルを示す。Ｇａｄｋａｒ Ｋ ｅｔ ａｌ．，Ａ Ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ Ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｏｆ ＬＤＬ Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ Ｌｏｗｅｒｉｎｇ ｂｙ ＰＣＳＫ９ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｄｙｓｌｉｐｉｄｅｍｉｃ Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ，ＣＰＴ Ｐｈａｒｍａｃｏｍｅｔｒｉｃｓ Ｓｙｓｔ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０１４；３（１１）。

本開示は、プロタンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）と高親和性で結合するフィブロネクチン足場融合タンパク質を含む組成物を提供し、当該組成物は、最大の生物学的作用、ならびに、より簡便な投与スケジュール及び投与容量、及び患者が使いやすい送達デバイス、例えば、注射器またはオートインジェクターなどを用いた送達用に、高濃度で安定的に製剤化することができる。ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質は、Ｃ末端に、ＰＣＳＫ９結合モチーフ、及びヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）をコードするアミノ酸配列を含む。

プロタンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型は、主に肝臓によって分泌され、肝臓のＬＤＬＲを再利用する上で重要な役割を果たす血中タンパク質であり、ＬＤＬ－Ｃを低下させるための有効な薬物標的として同定されている。ＬＤＬＲは、ＬＤＬ－コレステロール（ＬＤＬ－Ｃ）を血中から除去するための主要な経路である。血漿中のＰＣＳＫ９は、ＬＤＬ－Ｃと共に肝臓のＬＤＬＲに結合するが、ＰＣＳＫ９は、エンドサイトーシス及び分解のために受容体を標的とし、その結果、利用できる血中からＬＤＬ－Ｃを除去するＬＤＬＲを減少させる。ＰＣＳＫ９がＬＤＬＲへと結合するのを阻害することにより、ＬＤＬＲの分解が防止され、ＬＤＬＲの再利用が促進され、ＬＤＬ－Ｃのクリアランスが向上し、血中ＬＤＬ－Ｃレベルが低下する。

本明細書に記載のＰＣＳＫ９結合モチーフは、第１０番目のヒトフィブロネクチンＩＩＩ型ドメインから誘導され高親和性で標的に結合するように遺伝子操作されたタンパク質ファミリーである「アドネクチン」をベースとしている。「アドネクチン」は、免疫グロブリンとの配列相同性はないが、抗体可変領域に類似した様々なループを備えたβシート折りたたみ構造を有する、小さく（１２ｋＤａ以下の）コンパクトなタンパク質である。アドネクチンにはジスルフィドがなく、またグリコシル化されておらず、高い熱安定性及びモノマーの溶液挙動を示し、細菌、酵母菌、または哺乳動物の発現系を用いて効率的に作製される。足場残基をほぼ一定に維持しつつ可変ループ配列及び長さを調節することにより、構造的安定性を維持したまま、ナノモル未満の標的結合親和性を達成することができる。それらのサイズを考慮すると、アドネクチンは腎臓によって速やかに濾過されることから、ｉｎ ｖｉｖｏ用途用に、薬物動態（ＰＫ）を向上させるための調節が必要となる。例示的なＰＣＳＫ９結合モチーフ（アドネクチン）については、米国特許８，４２０，０９８、９，２３４，０２７、及び９，８５６，３０９に開示されており、それぞれの全体は参照により本明細書に組み込まれる。

本開示に従い、ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質は、最大の生物学的作用、ならびに簡便な投与スケジュール及び容量を可能とするために、高濃度で安定的に製剤化される。本組成物中におけるＰＣＳＫ９結合融合タンパク質の濃度は少なくとも１００ｍｇ／ｍＬである。一部の実施形態では、組成物中におけるＰＣＳＫ９結合融合タンパク質の濃度は、少なくとも約１５０ｍｇ／ｍＬであり、あるいは、一部の実施形態では、少なくとも約１７５ｍｇ／ｍＬ、または少なくとも約２００ｍｇ／ｍＬ、または少なくとも約２２５ｍｇ／ｍＬである。一部の実施形態では、本組成物中におけるＰＣＳＫ９結合融合タンパク質の濃度は、少なくとも約２５０ｍｇ／ｍＬ、または少なくとも約２７５ｍｇ／ｍＬ、または少なくとも約３００ｍｇ／ｍＬ、または少なくとも約３５０ｍｇ／ｍＬである。一部の実施形態では、組成物中におけるＰＣＳＫ９結合融合タンパク質の濃度は、約２５０ｍｇ／ｍＬ～約３５０ｍｇ／ｍＬである。一部の実施形態では、組成物中におけるＰＣＳＫ９結合融合タンパク質の濃度は、約２５０ｍｇ／ｍＬまたは約３００ｍｇ／ｍＬである。

ＰＣＳＫ９結合モチーフは、（配列番号１）、

のアミノ酸配列を含むまたはそれから構成される。ＰＣＳＫ９結合ループを下線で示す。一部の実施形態では、ＰＣＳＫ９結合モチーフは、配列番号１に対して、１～５つのアミノ酸置換、欠失、または挿入を有する、配列番号１のバリアントである。一部の実施形態では、アミノ酸改変が結合ループの外側で行われる。一部の実施形態では、１、２、または３つのアミノ酸改変が結合ループ内で行われる。

ＰＣＳＫ９結合モチーフは、野生型（ＷＴ）^１０Ｆｎ３配列を実質的に維持して固有の免疫原性を最小限としつつ、ＰＣＳＫ９を特異的に標的とするように設計されている。米国特許第８，４２０，０９８号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。ＰＣＳＫ９結合モチーフは、濃度依存的にナノモル未満の親和性でヒトＰＣＳＫ９に結合する。

様々な実施形態では、ＰＣＳＫ９結合モチーフは、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）アミノ酸配列とＣ末端融合している。一部の実施形態では、ＨＳＡは、配列番号２のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％の同一性、または少なくとも８５％の同一性、または少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性、または少なくとも９８％の同一性、または少なくとも９９％の同一性、を有する配列を含む。例えば、ＨＳＡアミノ酸配列は、配列番号２に対して、アミノ酸置換、欠失、及び挿入から独立して選択される１～１０、または１～５つの修飾を含んでいてもよい。一部の実施形態では、ＨＳＡアミノ酸配列は、配列番号２に示すように、配列番号２に対する３４位に対応する位置にアラニン残基を含む。様々な実施形態では、ＨＳＡアミノ酸配列は少なくとも５００アミノ酸長である。

一部の実施形態では、ＰＣＳＫ９結合モチーフ及びＨＳＡアミノ酸配列は、任意の既知の化学的コンジュゲート手法を用いて化学的にコンジュゲートされる。

ＨＳＡは、ヘリックスクラスターで構成され１７対のジスルフィド架橋を含有するマルチドメインタンパク質であり、天然のＨＳＡにおいては、唯１つのシステイン残基Ｃｙｓ３４が、遊離スルフヒドリル基として存在している。一部の実施形態では、ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質において、このＣｙｓがアラニン残基で置換されている。ＨＳＡ部分は、ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質の血中半減期を向上させる役割を果たす。様々な実施形態では、ＰＣＳＫ９結合モチーフ及びＨＳＡアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９結合融合タンパク質は、約７７ｋＤａの分子量を有する。

一部の実施形態では、ＨＳＡアミノ酸配列は、米国特許９，４９３，５４５、米国特許９，８２１，０３９、米国特許９，９４４，６９１、または米国２０１４／０３１５８１７（それぞれの全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているバリアントである。

一部の実施形態では、ＰＣＳＫ９結合モチーフとＨＳＡアミノ酸配列は遺伝子融合により連結しており、例えば、ＨＳＡアミノ酸配列が分子のＣ末端において連結している。短いアミノ酸リンカーでＰＣＳＫ９結合ドメインとＨＳＡアミノ酸配列を連結させてもよい。例えば、リンカーは、２～２０のアミノ酸を含んでいてもよく、あるいは、一部の実施形態では、４～１０のアミノ酸を含んでいてもよい。一部の実施形態では、ＰＣＳＫ９結合モチーフとＨＳＡアミノ酸配列は、６アミノ酸のリンカーを介して連結している。リンカーは、セリン、グリシン、スレオニン、及びアラニンアミノ酸で主に構成されていてもよい。例えば、リンカーはセリン／グリシンリンカーであってもよい。一部の実施形態では、リンカーは、アミノ酸配列ＧＳＧＳＧＳを含むまたはそれから構成される。

ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質は、高濃度の液剤の形態で安定的に製剤化することができる。例えば、本製剤は、約５℃（例えば、２～８℃）の温度などの長期保存条件下、または、周囲条件における短期保存条件（例えば、２５±３℃で１～６か月間）下で、大幅な劣化または粒子形成を示さない。ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質を、適切な生理溶液中、例えば、生理食塩水もしくはその他の薬理学的に許容される溶媒、または緩衝溶液中に懸濁させるが、界面活性剤（例えば、非イオン性界面活性剤）を任意選択的に含んでいてもよい。一部の実施形態では、本製剤は、緩衝剤、等張化剤、任意選択的に界面活性剤、及び溶媒を含む。

薬学的に許容される担体としては、水、生理食塩水、グリセロールが挙げられる。一部の実施形態では、本製剤は、固定油、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、またはその他の溶媒を含んでいてもよい。一部の実施形態では、溶媒は水である。

本製剤は通常、緩衝溶液である。本明細書で使用する場合、「緩衝剤」とは、ｐＨの大きな変動を伴わずに、ある一定量の酸または塩基を吸収することができる化学薬品のことを意味する。例示的な緩衝剤としては、クエン酸塩緩衝剤、リン酸塩緩衝剤、酢酸塩緩衝剤、コハク酸塩緩衝剤、及び重炭酸塩緩衝剤が挙げられる。一部の実施形態では、緩衝剤はＬ－ヒスチジン／Ｌ－ヒスチジン一塩酸塩を含んでいてもよい。例えば、Ｌ－ヒスチジン／Ｌ－ヒスチジン一塩酸塩緩衝系を使用する場合、Ｌ－ヒスチジン／Ｌ－ヒスチジン一塩酸塩は、約１ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬ、例えば、約２ｍｇ／ｍＬ～約５ｍｇ／ｍＬで存在していてもよい。一部の実施形態では、緩衝剤は、ｐＨ約５．５～ｐＨ約７．２，例えば、ｐＨ約６．８（例えば、ｐＨ６．６～７．０）の範囲内に製剤のｐＨを維持する。一部の実施形態では、例えば、塩酸及び／または水酸化ナトリウムを用いて、本製剤のｐＨを調節する。一部の実施形態では、Ｌ－ヒスチジン／Ｌ－ヒスチジン一塩酸塩の比率は、ｐＨ調節を必要としないようにする。

様々な実施形態では、単独または組み合わせで使用可能な等張化剤としては、ブドウ糖、ショ糖、グリセリン、トレハロース、マンニトール、ソルビトール、アルギニン、塩化ナトリウム、または塩化カリウム、が挙げられる。一部の実施形態では、等張化剤は、塩化ナトリウムを含むまたはそれから構成される。例えば、本製剤は、約２～約２０ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウム（例えば、６～１２ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウム）、または、２～２０ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウム（または６～１２ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウム）の浸透圧と同等の量の１種もしくは複数種の等張化剤、を含んでいてもよい。

一部の実施形態では、本製剤は、可溶化剤として機能することができる界面活性剤を含む。一部の実施形態では、界面活性剤は非イオン性界面活性剤である。例示的な非イオン性界面活性剤としては、ポリソルベート界面活性剤、例えば、ポリソルベート２０、４０、６０、または８０などが挙げられる。例えば、本製剤はポリソルベート８０を含んでいてもよい。その他の薬学的に許容される非イオン性界面活性剤もまた、単独または組み合わせで用いてもよい。一部の実施形態では、本製剤は界面活性剤を含まない。

例示的な製剤は、クエン酸塩緩衝剤（例えば、１０～５０ｍＭ、ｐＨ５．６～６．０）、ヒスチジン緩衝剤（例えば、１０ｍＭ～５０ｍＭ、ｐＨ６．０～７．０）、またはコハク酸塩緩衝剤（例えば、１０～５０ｍＭ、ｐＨ５．５～６．０）、を含む。一部の実施形態では、本製剤は、アルギニン（例えば、１００～２００ｍＭ）、ＮａＣｌ（例えば、１００～２００ｍＭ）、ソルビトール（例えば、１００～３００ｍＭ）、またはショ糖（例えば、１００～３００ｍＭ）から選択される賦形剤を含む。一部の実施形態では、本製剤は、界面活性剤、例えば、ポリソルベート８０（例えば、０．０１～０．５ｍｇ／ｍＬ）などを含む。一部の実施形態では、本製剤は界面活性剤を含有しない。

一部の実施形態では、本製剤は、防腐剤、例えば、フェノール、メタ－クレゾール、または安息香酸ナトリウムなどを更に含む。

一部の実施形態では、ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質製剤は、（上記の活性剤に加えて）、Ｌ－ヒスチジン、Ｌ－ヒスチジン一塩酸塩、塩化ナトリウム、及びポリソルベート８０から本質的になる。例示的な実施形態について、以下の表１に示す。

本開示の医薬組成物は、用量あたり所定量の本開示の活性剤を含有する単位投与剤形で都合よく提供されてもよい。

一部の実施形態では、本組成物は注射ペン内に含有される。オートインジェクター、例えば、「注射ペン」などは、特定の薬剤の用量を送達するように設計されたバネ仕掛けの注射器である。設計上、注射ペンは使い易く、患者による自己投与、または訓練を受けていないスタッフによる投与を目的としている。注射ペンは、針型の薬剤送達デバイスを用いた自己投与に伴う躊躇を克服するように設計されている。注射ペンは注射前において針の先端部が覆われた状態のままとなっており、不測のファイヤー（注射）を防止するための受動的安全機構も有している。注射深度は調節可能または固定であることができ、針の遮蔽物を取り除くための機能を組み込んでもよい。ボタンを押すことにより、注射器の針が自動的に皮下組織内に挿入されて、薬剤が送達される。一部の注射ペンには、一旦注射が完了すると、全用量が送達されたことを確認するための可視または可聴式の通知がある。

一部の実施形態では、注射ペンは、１～１０の単位用量、または１～５つの単位用量を含有する。一部の実施形態では、単位用量の容量は、約１．５ｍＬ以下、または１ｍＬである（注射ペンが含有または送達するかどうかにかかわらず）。一部の実施形態では、単位用量の容量は、０．８ｍＬ以下、または０．７ｍＬ以下である。一部の実施形態では、注射ペンは、例えば、約５０μＬ～約５００μＬの範囲の容量、または約７５μＬ～約２５０μＬの範囲の容量を含むマイクロドーズを送達する。一部の実施形態では、マイクロドーズは１００～２００μＬの容量を有する。様々な実施形態では、注射ペン、または皮下送達用のその他のデバイスは、３０～約４５０ｍｇのＰＣＳＫ９結合融合タンパク質を含む用量を提供する。様々な実施形態では、単位用量は、約５０～約４００ｍｇ、または約５０～約３００ｍｇである。一部の実施形態では、単位用量は、少なくとも２００ｍｇ、または少なくとも２５０ｍｇ、または少なくとも３００ｍｇである。一部の実施形態では、単位用量は、約２５０ｍｇ～約３５０ｍｇ（例えば、約３００ｍｇ）である。単位用量あたりに送達される活性剤の量は、所望の投与頻度に基づいて調節することができる。例えば、一部の実施形態では、毎週のマイクロドーズ（例えば、約０．２５ｍＬ未満または約０．１５ｍＬ未満の容量）で、２０～約７５ｍｇの用量を投与する。他の実施形態では、約２週間毎、毎月、または２か月間毎に、約０．７～１．５ｍＬの範囲の容量で約２００～約４５０ｍｇの用量を投与する。一部の実施形態では、約２７５ｍｇ～約３５０ｍｇ（例えば、約３００ｍｇ）の用量を、４週間毎、約１．５ｍＬ以下または約１ｍＬ以下の容量で、皮下注射で投与する。

本組成物または製剤は、皮下投与、筋肉内投与、皮膚内投与、または静脈内投与による投与に好適である。高濃度で、比較的粘度が低く、適切な浸透圧の製剤により、患者の忍容性、より少ない頻度の投与スケジュール、及びより少ない容量が可能となる。本明細書で示すとおり、比較的低濃度のＰＣＳＫ９結合融合タンパク質でＰＣＳＫ９の最大抑制が達成され、またより高濃度により、より長い期間の抑制が可能となった。一部の実施形態では、１週間に約１回（例えば、マイクロドーズの毎週の投与により）、または２週間に約１回、または３週間に約１回、または４週間に約１回（例えば、月に約１回）、または６週間に約１回、または８週間に約１回（２か月間に約１回）、本組成物の単位用量を対象に投与する。

ヒト対象におけるＰＣＳＫ９関連疾患を治療するために、本組成物を投与してもよい。ＰＣＳＫ９関連疾患については、米国特許８，４２０，０９８、９，２３８，０２７、及び９，８５６，３０６に記載されており、それら全体は参照により本明細書に組み込まれる。一部の実施形態では、患者はＬＤＬ（例えば、ＬＤＬ－コレステロール）の低下を必要としている。一部の実施形態では、対象は、高コレステロール血症及び／またはアテローム性動脈硬化症などのコレステロール関連疾患を示していてもよい。様々な実施形態では、対象は、脂質異常症、高コレステロール血症、高リポタンパク血症、高脂血症、異常脂血症、冠状動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化症、及び糖尿病、から選択される症状を示す。一部の実施形態では、対象は家族性高コレステロール血症を有する。一部の実施形態では、対象は、心血管疾患（例えば、動脈硬化性冠状動脈性心疾患）を有する、または、そのリスクが高い。

高コレステロール血症は、高い血清コレステロールを特徴とする症状である。高い血清コレステロールレベルはかなりの割合の人口に影響を及ぼしており、アテローム性動脈硬化症及び心筋梗塞の重要なリスク因子である。ＨＭＧ－ＣｏＡ還元酵素阻害薬（「スタチン」）などのコレステロール低下薬が、通常、高コレステロール血症患者に投与される。「家族性高コレステロール血症」（ＦＨ）は、血中の高いコレステロールレベル、具体的には極めて高レベルの低密度リポタンパク質（例えば、ＬＤＬ－コレステロール）、及び早期の心血管疾患を特徴とする遺伝性疾患である。ＦＨを有する個人の高いコレステロールレベルに対する、通常のコレステロール制御法（例えば、スタチン療法）の効果はより少ない。

ＦＨは、ＬＤＬ受容体（ＬＤＬ－Ｒ）遺伝子または脂質制御に関与するその他の遺伝子における、１つの変異または複数の変異、著しく高いＬＤＬ－Ｃ、及びアテローム性動脈硬化症の早期発症を特徴とする、常染色体優性の代謝性疾患である。一部の実施形態では、高コレステロール血症は、母性ＬＤＬ－Ｒ遺伝子と父性ＬＤＬ－Ｒ遺伝子の両方における変異を特徴とする症状であるホモ接合性家族性高コレステロール血症すなわちＨｏＦＨである。

一部の実施形態では、対象はヘテロ接合性ＦＨを有する。ヘテロ接合性ＦＨは通常、スタチン、胆汁酸隔離剤、またはコレステロールレベルを低下させるその他の脂質低下剤を用いて治療される。

一部の実施形態では、高コレステロール血症は、様々な遺伝的要因の影響に起因する高いコレステロールを特徴とする症状である多遺伝子性高コレステロール血症である。ある特定の実施形態では、多遺伝子性高コレステロール血症は、脂質の食事摂取によって悪化し得る。

一部の実施形態では、スタチン治療薬またはその他の経口脂質低下治療薬と共に本組成物を投与する。このような実施形態の組成物は、相加的なＬＤＬ－Ｃの低下をもたらす。一部の実施形態では、高コレステロール血症用の唯一の治療薬として、つまり、スタチン治療薬またはその他の経口脂質低下治療薬を用いずに、本組成物を提供する。例えば、このような実施形態では、対象はスタチン不耐性を示していてもよい。「スタチン不耐性」は、副作用、または、血液検査後の肝機能もしくは筋機能（クレアチンキナーゼ）が示す異常の発生により、患者がスタチンの使用を継続できなくなるときに発生する。一部の実施形態では、スタチン不耐性は、部分的（すなわち、一定用量の一部のスタチンのみ）または完全（すなわち、あらゆる用量の全てのスタチン）のいずれかであり得る。一部の実施形態では、スタチン不耐性は、筋肉痛、疼痛、筋力低下、または痙攣（すなわち、筋肉痛）を引き起こし、これは治療患者の最大１５％に発生する。

特に明記しない限り、「約」という用語は、本明細書で使用する場合、それに伴う数値の±１０％のことを意味する。

[項１]
少なくとも１００ｍｇ／ｍＬのＰＣＳＫ９結合融合タンパク質を含む組成物であって、前記融合タンパク質は、配列番号１のＰＣＳＫ９結合モチーフまたはそのバリアント、及びヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）アミノ酸配列、ならびに薬学的に許容される担体を含む、前記組成物。
[項２]
前記ＰＣＳＫ９結合モチーフは、前記融合タンパク質のＣ末端における、前記ＨＳＡアミノ酸配列との遺伝子融合体である、項１に記載の組成物。
[項３]
前記ＰＣＳＫ９結合モチーフは、前記ＨＳＡアミノ酸配列との化学的コンジュゲートである、項１に記載の組成物。
[項４]
少なくとも約１５０ｍｇ／ｍＬの前記ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質を含む、項１から項３のいずれか１項に記載の組成物。
[項５]
少なくとも約２００ｍｇ／ｍＬの前記ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質を含む、項４に記載の組成物。
[項６]
少なくとも約２５０ｍｇ／ｍＬの前記ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質を含む、項４に記載の組成物。
[項７]
少なくとも約３００ｍｇ／ｍＬの前記ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質を含む、項４に記載の組成物。
[項８]
約２７５ｍｇ～約３２５ｍｇの前記ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質の単位用量を含む、項４に記載の組成物。
[項９]
約３００ｍｇの前記ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質の単位用量を含む、項８に記載の組成物。
[項１０]
前記薬学的に許容される担体は、緩衝剤、等張化剤、任意選択的に界面活性剤、及び溶媒を含む、項１から項９のいずれか１項に記載の組成物。
[項１１]
前記緩衝剤は、アミノ酸緩衝剤、クエン酸塩緩衝剤、リン酸塩緩衝剤、酢酸塩緩衝剤、コハク酸塩緩衝剤、及び／または重炭酸塩緩衝剤を含む、項１０に記載の組成物。
[項１２]
前記緩衝剤は、Ｌ－ヒスチジン／Ｌ－ヒスチジン一塩酸塩を含む、項１０または項１１に記載の組成物。
[項１３]
前記等張化剤は、塩化ナトリウム、ブドウ糖、ショ糖、グリセリン、マンニトール、ソルビトール、アルギニン、または塩化カリウム、のうちの１種または複数種を含む、項１０から項１２のいずれか１項に記載の組成物。
[項１４]
前記等張化剤は塩化ナトリウムを含む、項１３に記載の組成物。
[項１５]
前記界面活性剤はポリソルベート界面活性剤を含む、項１０から項１４のいずれか１項に記載の組成物。
[項１６]
前記界面活性剤はポリソルベート８０である、項１５に記載の組成物。
[項１７]
界面活性剤を含まない、項１０から項１４のいずれか１項に記載の組成物。
[項１８]
前記溶媒は水である、項１０から項１７のいずれか１項に記載の組成物。
[項１９]
フェノール、メタ－クレゾール、及び安息香酸ナトリウムから任意選択的に選択される防腐剤、を更に含む、項１から項１８のいずれか１項に記載の組成物。
[項２０]
前記ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質は、前記ＰＣＳＫ９結合モチーフと前記ＨＳＡアミノ酸配列の間にリンカーを更に含む、項１から項１９のいずれか１項に記載の組成物。
[項２１]
前記リンカーは、２～２０のアミノ酸を含み、かつ、セリン、グリシン、スレオニン、及び／またはアラニンを主に含む、項２０に記載の組成物。
[項２２]
前記リンカーは、４～１０のアミノ酸を含み、かつ、セリン及び／またはグリシンから本質的になる、項２１に記載の組成物。
[項２３]
前記ＨＳＡアミノ酸配列は少なくとも５００のアミノ酸を含む、項１から項２２のいずれか１項に記載の組成物。
[項２４]
前記ＨＳＡアミノ酸配列は、１～１０のアミノ酸置換、欠失、または挿入を任意選択的に有する、配列番号２を含む、項２３に記載の組成物。
[項２５]
前記ＨＳＡアミノ酸配列は、配列番号２に対する３４位にアラニン残基を含む、項２３または項２４に記載の組成物。
[項２６]
前記ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質は、１～１０のアミノ酸置換、挿入、及び／または欠失を任意選択的に有する、配列番号３のアミノ酸配列を有する、項１から項２５のいずれか１項に記載の組成物。
[項２７]
注射ペン内に含有される、項１から項２６のいずれか１項に記載の組成物。
[項２８]
前記注射ペンは、約３０～約４５０ｍｇの前記ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質の単位用量を含有または送達する、項２７に記載の組成物。
[項２９]
前記注射ペンは、約２７５ｍｇ～約３００ｍｇの前記ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質の単位用量を含有及び送達する、項２８に記載の組成物。
[項３０]
前記注射ペンは、約３００ｍｇの前記ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質の単位用量を含有及び送達する、項２９に記載の組成物。
[項３１]
前記単位用量の容量は、約１．５ｍＬ以下、または約１ｍＬ以下である、項２８から項３０のいずれか１項に記載の組成物。
[項３２]
前記単位用量の容量は０．８ｍＬ以下である、項３１に記載の組成物。
[項３３]
前記単位用量の容量は約０．２５ｍＬ以下である、項３１に記載の組成物。
[項３４]
項１から項３３のいずれか１項に記載の組成物を、必要とする対象に投与することを含む、ＰＣＳＫ９関連疾患を治療するための方法。
[項３５]
前記対象は、脂質異常症、高コレステロール血症、異常脂血症、冠状動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化症、高血圧、２型糖尿病、及び胆汁うっ滞性肝疾患、から選択される症状を有するヒトである、項３４に記載の方法。
[項３６]
前記対象は高コレステロール血症を有する、項３５に記載の方法。
[項３７]
前記対象は家族性高コレステロール血症を有する、項３６に記載の方法。
[項３８]
前記対象は、アテローム動脈硬化性心血管疾患（ＡＳＣＶＤ）を有する、または、（ＡＳＣＶＤ）のリスクが高い、項３５に記載の方法。
[項３９]
前記対象は、スタチンを用いた治療を受けていない、または、脂質低下経口治療薬を用いた治療を受けていない、項３４から項３８のいずれか１項に記載の方法。
[項４０]
前記対象は、スタチンまたは別の脂質低下経口治療薬を用いた治療を受けている、項３４から項３８のいずれか１項に記載の方法。
[項４１]
前記対象はスタチン不耐性を示す、項３９に記載の方法。
[項４２]
前記組成物は、皮下投与、筋肉内投与、皮膚内投与、または静脈内投与で投与される、項３４から項４１のいずれか１項に記載の方法。
[項４３]
前記対象は、週に１回から２か月間に１回、前記組成物の単位用量を投与される、項３４から項４２のいずれか１項に記載の方法。
[項４４]
前記対象は、月に約１回または４週間に約１回、前記組成物の単位用量を投与される、項４３に記載の方法。
[項４５]
前記単位用量は０．７～１．５ｍＬの容量を有する、項４４に記載の方法。
[項４６]
前記対象は、週に約１回、前記組成物の単位用量を投与される、項４３に記載の方法。
[項４７]
前記単位用量は約０．０５～約０．２５ｍＬの容量を有する、項４６に記載の方法。
ここで、以下の実施例により、本発明の実施形態について説明する。

実施例１：ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質及び薬物動態－薬力学挙動
ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質は、プロタンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）を標的とする修飾フィブロネクチンドメイン（アドネクチン）、及びヒト血清アルブミンを含む（図１）。当該融合タンパク質は、約７７，０００ダルトンの総分子量を有する。ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質は、ヒトＰＣＳＫ９に対して高い結合親和性、及びカニクイザルＰＣＳＫ９に対して１００倍超弱い親和性を有している。結合親和性におけるこの違いにもかかわらず、非ヒト霊長類（ＮＨＰ）は、遊離ＰＣＳＫ９の最大抑制及び最大ＬＤＬ－Ｃ低下がＮＨＰにおいて達成されることから、ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質の安全性及び薬効を試験するのに適切な種であると考えられている。

ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質は、例えば、高コレステロール血症（家族性高コレステロール血症または高コレステロール血症及び動脈硬化性冠状動脈性心疾患（ＣＨＤ）を有する患者におけるものを含む）を治療するための、皮下（ＳＣ）投与用に開発されている。ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質における薬物動態の２つの主な決定因子は、その標的であるＰＣＳＫ９との相互作用、及び、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）を介して再利用されて腎臓の濾過作用を最小限とし、それによりＰＣＳＫ９結合融合タンパク質のクリアランスを低下させて半減期を向上させる能力である。野生型マウスを用いた研究では、ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質がマウスＰＣＳＫ９へと効果的に結合せず、ＨＳＡがマウスＦｃＲｎと相互作用しないことから、これら決定因子のいずれもの、ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質の薬物動態に対する影響に対処することはできない。そのため、カニクイザルがＰＣＳＫ９結合融合タンパク質における薬物動態－薬力学を評価するための最も好適なｉｎ ｖｉｖｏモデルを提供する。それは、このモデルにおけるＰＣＳＫ９への結合性が、遊離ＰＣＳＫ９とＬＤＬ－Ｃの両方における低下をもたらすことに加え、ＨＳＡがＮＨＰ ＦｃＲｎ受容体を介して効率的に再利用され得るからである。

ｈＰＣＳＫ９トランスジェニックマウスを用いて、ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質のｈＰＣＳＫ９に対するｉｎ ｖｉｖｏ結合親和性に関する調査を行い、ｈＦｃＲｎマウスを用いて、ｈＦｃＲｎを介したＰＣＳＫ９結合融合タンパク質の再利用能についても評価を行った。このヒトＦｃＲｎマウスモデルは、マウスＦｃＲｎ遺伝子のヌル変異、及び、ヒトＦｃＲｎ α鎖をその天然ヒトプロモーターの制御下で発現する導入遺伝子、を有している。その結果、これらのマウスは、モノクローナル抗体及びヒト血清アルブミンの薬物動態を評価するためのモデルとして機能する。

抗ＰＣＳＫ９抗体に関して、全身の遊離ＰＣＳＫ９レベルの抑制と血清ＬＤＬ－Ｃの低下の間の関係を支持するかなりのデータセットが存在している。Ｇａｄｋａｒ Ｋ ｅｔ ａｌ．，Ａ Ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ Ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｏｆ ＬＤＬ Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ Ｌｏｗｅｒｉｎｇ ｂｙ ＰＣＳＫ９ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｄｙｓｌｉｐｉｄｅｍｉｃ Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ，ＣＰＴ Ｐｈａｒｍａｃｏｍｅｔｒｉｃｓ Ｓｙｓｔ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０１４；３（１１）：１－９、Ｓｑｕｉｚｚａｔｏ Ａ，ｅｔ ａｌ．，ＰＣＳＫ９ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｆｏｒ ｔｒｅａｔｉｎｇ ｄｙｓｌｉｐｉｄｅｍｉａ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｒｉｓｋ：ａ ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｒｅｖｉｅｗ ａｎｄ ｍｅｔａ－ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｅｍｅｒｇ．Ｍｅｄ．２０１７、Ｊｕｌ：ｅ１－１１。図３を参照されたい。ＬＤＬ－Ｃ低下における所望の目標レベルを達成するのに必要な、ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質（ＬＩＢ００３、配列番号３）のヒト用量を推定するために、上記研究のデータをアロメトリックスケーリングして、ＰＣＳＫ９とＬＤＬ－Ｃの間の既知の関係を含む、半機械的トランスレーショナルモデルへと組み込んだ。図２。このモデルを用いて、ＬＩＢ００３と血清ＬＤＬ－Ｃの予測用量－効果関係を構築した。

非ヒト霊長類における毒性動力学－薬力学
単回投与非ＧＬＰ用量範囲設定（ＤＲＦ）試験における静脈内（ＩＶ）投与及び皮下（ＳＣ）投与（１０、３０、１００、２００ｍｇ／ｋｇのＩＶ用量、２００ｍｇ／ｋｇのＳＣ用量）の後、及び、４週間（１００ｍｇ／ｋｇのＩＶ用量、３０及び１００ｍｇ／ｋｇのＳＣ用量）、１２週間（３０及び１００ｍｇ／ｋｇのＳＣ用量）、または２６週間（３０及び１００ｍｇ／ｋｇのＳＣ用量）にわたる、ＧＬＰ毒性試験における反復投与の後に、ＬＩＢ００３の毒性動力学－薬力学挙動の特徴を調べた。

ｈＰＣＳＫ９を捕捉用試薬とし、ルテニウム標識したウサギ抗ＨＳＡポリクローナル抗体を検出用試薬とすることで、標的捕捉電気化学蛍光アッセイとして、ＬＩＢ００３の毒性動力学アッセイを構築する。ＮＨＰにおいて、このアッセイは総ＬＩＢ００３を測定する（ＮＨＰ ＰＣＳＫ９と比較して、捕捉用試薬である ｈＰＣＳＫ９に対するより強力な親和性に起因する）。代替的に、毒性動力学アッセイでは、ＬＩＢ００３特異的ｍＡｂを捕捉用試薬として、ルテニウム標識したウサギ抗ＨＳＡポリクローナル抗体を検出用試薬として使用した。このアッセイ形式もまた総ＬＩＢ００３を測定する。これらの試験の結果は、この用量範囲における静脈内投与と皮下投与の両方の後、総ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質の動態がほぼ線形で用量比例的であることを示している。

ＤＲＦ試験では、１０ｍｇ／ｋｇを超える全ての用量レベルで、持続的な抗薬物抗体（ＡＤＡ）反応が示された。ＬＩＢ００３の単回投与後、この試験におけるＡＤＡの存在は、ほとんどの場合で、ＬＩＢ００３への曝露の急速な低下と関連しており、標的捕捉の低下（遊離ＰＣＳＫ９の減少）に続いた。ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質の毎週の投与（４週間、１２週間、及び２６週間のＧＬＰ毒性試験）後、ほとんどの動物においてＡＤＡが検出されたが、ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質への曝露は投与間隔中にわたって維持され、毒性動力学／薬力学に対するＡＤＡの影響は、２頭の動物（４週間の試験）、１頭の動物（１２週間の試験）、及び１頭の動物（２６週間の試験）においてのみ明白であった。

ＡＤＡの影響がないと、ＬＩＢ００３の除去は緩慢で、血清中消失半減期の範囲は、ＤＲＦ試験において８．３～１０．４日間（平均９日間）、４週間のＧＬＰ毒性試験から回復した動物において７．６～９．２日間（平均８．３日間）であり、非ヒト霊長類におけるアルブミン様分子の挙動と一致した。１２週間及び２６週間のＧＬＰ毒性試験において、同様の結果が認められた。ＤＲＦ試験では、単回のＩＶ投与後、クリアランス（ＣＬ）の範囲は、測定可能な動物において５．６３～７．６５ｍＬ／日／ｋｇ（平均６．６４ｍＬ／日／ｋｇ）であり、分布容積（Ｖｚ）の範囲は、測定可能な動物において６７．６～１０３．８ｍＬ／ｋｇ（平均８６．４ｍＬ／ｋｇ）であった。

総ＰＣＳＫ９濃度（ＬＩＢ００３に結合分及び非結合分）の上昇は緩慢で、投与後７日頃にピークに達したが、この時点における総ＰＣＳＫ９濃度は、血中ＬＩＢ００３濃度の１０％未満であった。標的捕捉は、遊離ＰＣＳＫ９及びＬＤＬの低下により測定した際、ＤＲＦ試験における全用量において最大であり、このことは、試験を行った中で最も少ない用量（１０ｍｇ／ｋｇ）において標的抑制が最大であることを示している。ＡＤＡの不在下でＬＩＢ００３の用量を増加させると、標的捕捉が最大となる期間が長くなることを結果が示している。

用量または投与経路のいずれにも関係なく、血清ＬＤＬが約６０％抑制され、全ての用量レベルにおける最大薬力学的効果と一致した。予想どおり、ＬＤＬ抑制の低下及びベースラインレベルへの回復は、最大ＰＣＳＫ９捕捉の低下と一致した。総合的に言えば、これらの試験は、最大薬力学的効果が達成され、より多い用量が遊離ＰＣＳＫ９またはＬＤＬのいずれのより大きな抑制も生じさせるものではないということを示している。

皮下投与後、同一用量レベルの低速ＩＶボーラスと比較して、Ｃ_ｍａｘがより低下し、Ｔ_ｍａｘが遅れたが、このことは、注射部位から体循環へと吸収されていることを示している。皮下経路の絶対バイオアベイラビリティは、ＤＲＦ試験において約７６％と推定し、４週間のＧＬＰ毒性試験において６６．５～８９．７％と推定されるが、両方の推定は、ＡＤＡの存在、及び皮下投与後に総曲線下面積（ＡＵＣ）を明らかにできないことにより、損なわれる。母集団薬物動態モデルを用いて両方の試験を組み合わせて解析を行うことにより、皮下投与後のバイオアベイラビリティは９２％と推定されるが、このモデルが両方の投与経路における総ＡＵＣの推定を生じることから、より信頼性の高い推定であると考えられる。

ヒトにおける予測される薬物動態－薬力学挙動
複数の試験に由来するデータを組み合わせて、ヒトにおけるＬＩＢ００３の予測薬物動態－薬力学挙動の予測を行った。つまり、ＮＨＰデータ（ＤＲＦ試験及び４週間のＧＬＰ毒性試験）から、ＬＩＢ００３への曝露及びＰＣＳＫ９の抑制を記述する母集団２コンパートメント薬物動態－薬力学結合モデルを構築した。これらのパラメータをヒトへとスケーリングする際、ｈＰＣＳＫ９に対するｉｎ ｖｉｖｏ結合親和性は、ｈＰＣＳＫ９トランスジェニックマウスにおけるＰＫ－ＰＤ試験から導いた。これらのデータは、皮下投与後のデータのみが入手可能であったことから、１コンパートメント薬物動態モデルによって適切に記述されたが、このモデルは、ＮＨＰデータに使用したモデルと同等であった。ＮＨＰ ＰＣＳＫ９及びｈＰＣＳＫ９に対するＬＩＢ００３の結合親和性において認められた差異は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ由来データとｉｎ ｖｉｖｏ由来データの両方と一致し、ｈＰＣＳＫ９トランスジェニックマウスのｉｎ ｖｉｖｏ由来Ｋ_Ｄ値をヒトへの予測用に使用した。

ＮＨＰとｈＦｃＲｎマウスの両方におけるＬＩＢ００３のクリアランスが、これらの動物におけるＨＳＡの予測クリアランスと一致したことから、ＬＩＢ００３のクリアランスが、ヒトにおけるＨＳＡのクリアランス（半減期１９日間、アロメトリック指数０．７４）を模倣するものと予測された。その他のパラメータについては、サイズが約７７ｋＤａの治療用アルブミン融合タンパク質の予測係数を用いてアロメトリックスケーリングを行った。

遊離ＰＣＳＫ９の捕捉及び抑制を記述するＮＨＰ及びヒトのＰＫ－ＰＤ結合モデルの全体的な構成を、図２及び図３に示す。ヒトにおけるスタチン及び抗ＰＣＳＫ９抗体の作用機序を記述するための定量系薬理学モデルが、これまでに確立されている。Ｇａｄｋａｒ Ｋ ｅｔ ａｌ．，Ａ Ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ Ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｏｆ ＬＤＬ Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ Ｌｏｗｅｒｉｎｇ ｂｙ ＰＣＳＫ９ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｄｙｓｌｉｐｉｄｅｍｉｃ Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ，ＣＰＴ Ｐｈａｒｍａｃｏｍｅｔｒｉｃｓ Ｓｙｓｔ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０１４；３（１１）。このモデルを採用して、ヒトにおける予測ＰＣＳＫ９抑制と、ヒト初回（ＦＩＨ）試験における皮下及び静脈内によるＬＩＢ００３の単回投与後の経時的なＬＤＬ－Ｃ低下の間を結びつけた。

実施例２：配合及び安定性評価
ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質の製剤における様々な緩衝剤及び賦形剤の性能に対する評価を行った。

本製剤に用いる適切な緩衝剤及びｐＨを見極めるために、２ｍｇ／ｍＬのＬＩＢ００３で、６つの異なる緩衝剤を用いた緩衝剤及びｐＨの１８の異なる条件について、ＤＳＣによる解析で熱安定性を評価し、ＤＬＳによる解析で凝集形成を評価した。５未満かつ７超のｐＨでは、タンパク質の変性が５０℃未満の温度（Ｔ_開始）で始まってしまうことから、これらのｐＨ値についてはこれらの実験から除外した。

解析を行った緩衝剤／ｐＨの組み合わせを、以下の表３に示す。更なるスクリーニング用に選択した組み合わせを、太字及び下線を施したｐＨ値により示す。

条件に合ったｐＨ範囲及び適切な緩衝剤を特定した後、所定の緩衝剤及びｐＨと組み合わせて、賦形剤についての検証を行った。２ｍｇ／ｍＬのＬＩＢ００３で、緩衝剤／賦形剤の合計１５の異なる組み合わせを調製してから、ＤＳＣによる解析で熱安定性を評価し、ＤＬＳによる解析で凝集形成を評価した。緩衝剤／賦形剤の組み合わせのうちの３つについては、Ｔ_開始が５５℃未満であることから除外した。更に、ショ糖、ソルビトール、及び低濃度のＮａＣｌを使用すると凝集が生じ、その結果、その後の配合におけるそれらの使用が限定されるということが、ＤＬＳデータにより示唆された。

解析を行った緩衝剤／賦形剤の組み合わせを、以下の表４に示す。更なるスクリーニング用に選択した組み合わせを、太字及び下線を施した賦形剤により示す。

高濃度で配合されたＬＩＢ００３の安定性を維持するための、緩衝剤及び賦形剤の好適な組み合わせを決定するために、上の表４で特定した１２の異なる配合物について溶解度スクリーニングを実施した。これらの配合物を、２００ｍｇ／ｍＬ、２５０ｍｇ／ｍＬ、３００ｍｇ／ｍＬ、及び３４０ｍｇ／ｍＬの目標濃度へと濃縮した。濁度は全ての配合物にわたり同等であり、ＳＥＣ－ＨＰＬＣを用いて評価した際に凝集は認められなかった。これらのパラメータに基づき、これらの配合物は同等であるとみなされた。

ＬＩＢ００３候補配合物へと界面活性剤を添加することの潜在的な効果を評価するために、表４の緩衝剤／賦形剤の８つの組み合わせにポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含有させるかまたは含有させないかのいずれかを行い、２５０ｍｇ／ｍＬのＬＩＢ００３で合計１６の配合物（表５）について評価を行った。凝集及び粒子形成を防止するのにＰＳ８０が効果的となり得ることから、候補配合物について、それらが凍結と解凍及び攪拌の繰り返しの応力に耐える能力を評価した。復元、濁度、または凝集の性質に基づく差異は認められなかった（ＤＬＳ及びＳＥＣを用いて評価した）。長期保存時及び製品搬送時におけるＰＳ８０の予測される効果により、ＰＳ８０を含有する全ての配合物を先へと進めた。

ＬＩＢ００３の濃度が高い場合であっても、ＬＩＢ００３の安定性、及び標準的な保存条件下の配合物と剪断応力下の配合物の間に差異が欠如しているということは、長期保存条件に耐えうるＬＩＢ００３の配合物を同定するための代替アプローチが必要であることを示唆した。緩衝剤／賦形剤スクリーニング（表４）で同定した目標濃度３４０ｍｇ／ｍＬの配合物に０．０２％のＰＳ８０を添加し、２～８℃または５０℃で３週間保存してから、ＳＥＣ－ＨＰＬＣで解析した。一般的に、５０℃で３週間保存した後には、低レベルの高分子量（ＨＭＷ）化学種及び低分子量（ＬＭＷ）化学種が認められた。賦形剤のアルギニン及びソルビトールを含有する配合物中におけるＨＭＷ化学種の低いパーセンテージに基づいて、クエン酸塩を含有する配合物を、アルギニン及びソルビトールに絞った。最も高いパーセンテージのメインピーク化学種に基づいて、ヒスチジン配合物のうち、１５０ｍＭのＮａＣｌを追加の実験用に選択した。最後に、２～８℃の比較用対照試料と比較して、５０℃で保存したほとんどのコハク酸塩配合物中に認められた高レベルのＨＭＷ化学種及びＬＭＷ化学種に基づいて、更なる考察からコハク酸塩を除外した。

これらの解析の結果を以下の表６に示す。選択した配合物を、太字及び下線のフォントで示す。

候補配合物を更に探索するために、ＰＳ８０を含む緩衝剤／賦形剤の３つの組み合わせ、３つの異なるｐＨで、２５０ｍｇ／ｍＬのＬＩＢ００３を配合した（表７）。劣化を誘発させるために２～８℃または５０℃で３週間試料を保存してから、ＬＩＢ００３の濃度／復元（Ａ２８０）、粒子（ＤＬＳ）、凝集（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）、電荷特性（ｉｃＩＥＦ）、クリッピング（ＣＥ－ＳＤＳ）、力価、濁度及び熱安定性（ＤＳＣ）について解析を行った。５０℃で３週間保存した後の電荷特性、凝集／粒子形成の性質、及び相対力価の比較を行ったところ、配合物間でいくらかの差異が明らかとなった（表８、９、１０及び１１）。ＣＥ－ＳＤＳ特性、復元、濁度及び熱安定性については配合物間で同等であった。

２７Ｇまたはより小さな穴の針を備えたオートインジェクターを使用して０．２５～１．５ｍＬのＳＣ注射でＬＩＢ００３を送達するという目的を考慮して、２５０ｍｇ／ｍＬで配合されたＬＩＢ００３がオートインジェクターによるＳＣ注射に好適な特性を有し得るかどうかを確認するために、追加の実験を実施した。それぞれにおける中央程度のｐＨを有する上位３つの２５０ｍｇ／ｍＬの配合物について、粘度、浸透圧、及び粒子の評価を行った。目標は、１５ｃＰ未満の粘度、２５０～３５０ｍＯｓｍの浸透圧、及び調節限界を十分に下回る粒子レベルであった。結果を以下の表１１に示す。粒子レベルは全配合物にわたり同等に低かった。

追加の安定性試験用に、２０ｍＭのヒスチジン、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０２％（重量／体積）のポリソルベート８０、ｐＨ６．８で、注射（皮下）用の滅菌液剤としてＰＣＳＫ９結合融合タンパク質を製剤化した。これらの安定性試験には、長期保存条件下、加速条件下に加え、負荷条件下における評価が含まれていた。ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質製品の所定の長期保存温度は５±３℃であり、短期保存（１～６か月間以下）は２５℃±３℃であった。

１か月間の安定性データを、目的の保存温度（５±３℃）に加え、加速（２５±２℃／６０±５％相対湿度）及び負荷（４０±２℃／７５±５％相対湿度）保存条件において取得した。

例示的なＰＣＳＫ９結合融合タンパク質製品ロットにおける、安定性プロトコルの安定性を示すパラメータ（ｉｃＩＥＦ、力価、ＣＥ－ＳＤＳ、及びＳＥＣ－ＨＰＬＣ）を含む全評価パラメータのデータは、検査時点（１か月）及びそれぞれの保存条件において許容基準内であった。更に、長期保存条件において、凝集もしくは劣化した化学種の大幅な増加、または力価の低下は認められなかった。加速及び負荷条件についてＳＥＣ－ＨＰＬＣにより凝集にわずかな増加（約１％）が認められたが、ＳＥＣ－ＨＰＬＣによるメインピークの結果は十分に許容基準内であり、力価の変化は認められなかった。同様に、負荷条件における還元ＣＥ－ＳＤＳにより断片にわずかな増加（約２％）が認められたが、この場合もまた、それに付随する力価の変化は認められなかった。それぞれの保存条件におけるｉｃＩＥＦにより、メインピーク種の減少に付随して酸性電荷バリアント種にわずかな増加（約１～４％）が認められた（薬物において逆の傾向が認められたが、おそらく、認められた変化は方法のばらつき内に収まることを示していると留意されたい）。外観、物理化学的パラメータ、または力価の変化は認められなかった。まとめると、安定性データは、評価を行った長期、加速及び負荷保存条件において、ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質製品が１か月間安定であることを示している。

更に、１８か月間の長期安定性データを、目的の保存温度（５±３℃）において取得し、加えて、９か月間については加速保存条件（２５±２℃／６０±５％相対湿度）、３か月間については負荷（４０±２℃／７５±５％相対湿度）保存条件において取得した。

例示的なＰＣＳＫ９結合融合タンパク質製品ロットについて、安定性プロトコルの安定性を示すパラメータ（ｉｃＩＥＦ、力価、ＣＥ－ＳＤＳ、及びＳＥＣ－ＨＰＬＣ）を含む全評価パラメータのデータは、検査時点及びそれぞれの保存条件において許容基準内であった。更に、長期保存条件において、凝集もしくは劣化した化学種の大幅な増加、または力価の低下は認められなかった。全ての保存条件におけるＳＥＣ－ＨＰＬＣにより凝集にわずかな増加（約１％）が認められたが、ＳＥＣ－ＨＰＬＣによるメインピークの結果は十分に許容基準内であり、力価の変化は認められなかった（アッセイのばらつき内）。同様に、長期保存条件における還元ＣＥ－ＳＤＳにより断片にわずかな増加（最大約２％）が認められたが、この場合もまた、対応する力価の変化は認められなかったため、方法のばらつき内に収まるものと考えられ得る。還元及び非還元ＣＥ－ＳＤＳによる断片の増加は、時間及び温度の増加（負荷条件において最大約５％の変化）と相関してした。長期保存条件におけるｉｃＩＥＦにより酸及びメインピーク種に変動（最大約８％）が認められたが、その変動は方法のばらつき内に収まっていた。加速及び負荷条件におけるｉｃＩＥＦの結果は当初、酸性種に対する正の傾向（最大約７％）、及びそれに対応するメインピーク種に対する負の傾向を示すものと思われたが、それに付随する力価の変化は認められなかった。しかし、別の時点では、観察された小さな変化も、方法のばらつきに関連する変動であった可能性があることが示された。可視未満の粒子が時間の経過とともにわずかに変動するようであったが、十分に許容限界内であった（長期条件と加速条件の両方における９か月時点において、２μｍ以上及び５μｍ以上の粒子について典型的でない結果が認められたが、１２か月及び１８か月の時点では、粒子数が予測レベルにまで戻ったということに留意されたい）。外観、物理化学的パラメータ、または力価の変化は認められなかった。

更に、１２か月間の長期安定性データを、目的の保存温度（５±３℃）において取得し、加えて、１２か月間の加速保存条件（２５±２℃／６０±５％相対湿度）において取得した。

例示的なＰＣＳＫ９結合融合タンパク質製品ロットについて、安定性プロトコルの安定性を示すパラメータ（ｉｃＩＥＦ、力価、ＣＥ－ＳＤＳ、及びＳＥＣ－ＨＰＬＣ）を含む全評価パラメータのデータは、検査時点及びそれぞれの保存条件において許容基準内であった。更に、長期保存条件において、凝集もしくは劣化した化学種の大幅な増加や、力価の低下も認められなかった。両方の保存条件においてＳＥＣ－ＨＰＬＣにより凝集にわずかな増加（最大約１％）が認められたが、ＳＥＣ－ＨＰＬＣによるメインピークの結果は十分に許容基準内であり、力価の変化は認められなかった（アッセイのばらつき内）。同様に、還元ＣＥ－ＳＤＳ条件による長期保存条件（最大約２％）及び負荷保存条件（約３％）、ならびに非還元ＣＥ－ＳＤＳによる負荷保存条件（約３％）において、断片にわずかな増加が認められたが、この場合もまた、対応する力価の変化は認められなかった（アッセイのばらつき内）。両方の保存条件におけるｉｃＩＥＦにより、メインピーク種の減少に付随して酸性電荷バリアント種に増加（最大約５％）が認められた（後の時点においては酸性種の割合（％）がより少なかったことから、アッセイのばらつきによるものであり得る）。外観、物理化学的パラメータ、または力価の変化は認められなかった。

実施例３：ヒト初回試験
ＬＩＢ００３について、１８歳以上７０歳以下の年齢の６３名の被験者（女性２４名、男性３９名、４５名はＬＩＢ００３、１８名はプラセボ）を含む第１相ＳＡＤ試験において試験を行い、投与後少なくとも４３日間にわたりモニタリングを行った。本試験はプラセボ対照二重盲検であった。９つのコホートのそれぞれに７名の被験者（５名はＬＩＢ－００３治療患者、２名はプラセボ治療患者）がおり、結果として、４３名の被験者がＬＩＢ００３による治療を受け、１８名の被験者がプラセボによる治療を受けた。脂質低下療法を受けておらず、ベースラインＬＤＬ－Ｃが１００ｍｇ／ｄＬ以上１９０ｍｇ／ｄＬ以下である、一定した食事を摂っている健康な被験者に、皮下用量のＬＩＢ００３を２５ｍｇ、７５ｍｇ、１５０ｍｇ、３００ｍｇ、及び６００ｍｇで投与した。１５０ｍｇ及び３００ｍｇの用量はまた、ベースラインＬＤＬ－Ｃが１００ｍｇ／ｄＬ以上であり一定したスタチン療法を受けている患者にもＳＣ投与した。全ての被験者は２５０ｍｇ／ｄＬ以下のＴＧを有していた。脂質低下療法を受けておらず、ＳＣコホートと同一の脂質登録基準を有する、２つの追加コホートの健康な被験者に、３００ｍｇ及び６００ｍｇのＬＩＢ００３をＩＶで投与した。

安全性結果の概要
ドロップアウトする、すなわち４３日目の前に終了となる患者を出すことなく、６３名の被験者全員が試験を完了させた。総合的に、ＬＩＢ００３は、健康な被験者における単回ＳＣ投与と単回ＩＶ投与の両方、ならびに、スタチン療法中の高コレステロール血症を有する患者において、安全で良好な忍容性を示した。

薬力学（有効性）結果の概要
遊離ＰＣＳＫ９の平均値の低下は全ての用量において速やかであり、１２時間以内に９９％超に達し、脂質低下療法を受けておらず１５０ｍｇ以上のＬＩＢ００３を投与されたコホートにおけるほぼ全ての被験者において少なくとも３週間（２２日目）にわたり持続した。ＬＩＢ００３の３００ｍｇ用量は遊離ＰＣＳＫ９の９９％抑制を２９日間にわたり維持したが、脂質低下療法を受けていない１５０ｍｇ用量の被験者では、遊離ＰＣＳＫ９は、ベースラインの１２％にまで低下し、スタチンを受けている被験者ではベースラインの５４％にまで低下した。遊離ＰＣＳＫ９のより小さな低下は、ＬＤＬ－Ｃ及びａｐｏＢの低下に反映された一方で、脂質低下療法を受けていない被験者においてはより大きな低下が維持された。しかし、これらの低下は、スタチンを受けている患者において４週間（２９日目）にわたっては維持されなかった。単回３００ｍｇ用量は、非スタチン治療被験者とスタチン治療被験者の両方において、遊離ＰＣＳＫ９、ＬＤＬ－Ｃ、及びａｐｏ Ｂのより安定かつ最大の低下をもたらした。加えて、ｍＡｂを用いた試験の先行データに基づいて、複数回の投与により、遊離ＰＣＳＫ９抑制とＬＤＬ－Ｃ低下の両方の期間がより長くなることが予測された。更に、広範囲にわたる先行データは、高強度スタチンを受けている患者及びＦＨを有する患者が、より高いベースラインＰＣＳＫ９レベルを有しており、ＰＣＳＫ９の合成が上昇していると考えられ、遊離ＰＣＳＫ９とＬＤＬ－Ｃの両方を４週間にわたり完全に抑制するためには、３００ｍｇ以上の用量が必要となることを示した。

薬物動態結果の概要
ＳＣ投与による総ＬＩＢ００３のＣ_ｍａｘ、ＡＵＣ_０－ｔ、及びＡＵＣ_ｉｎｆは、７５ｍｇ～３００ｍｇのＬＩＢ００３において用量比例的に増加し、２５ｍｇ～７５ｍｇ（４～５倍の増加）及び３００ｍｇ～６００ｍｇ（３倍の増加）においてより小さな上記の用量比例を示した。同様に、スタチン治療被験者は、１５０ｍｇ～３００ｍｇの用量範囲にわたる総ＬＩＢ００３において用量比例的な増加を示したが、総ＬＩＢ００３の曝露（ＡＵＣ_０－ｔ及びＡＵＣ_ｉｎｆ）は全体的に、非スタチン治療被験者における曝露と比較してより少ないものであった。ＩＶ投与された総ＬＩＢ００３のＣ_ｍａｘ、ＡＵＣ_０－ｔ、及びＡＵＣ_ｉｎｆは、用量比例的に増加した。

総ＬＩＢ００３のＴ_ｍａｘ中央値は、全てのＳＣ用量レベルにわたり、７２～１６８時間の範囲（範囲は３６～２２０時間の範囲で変化可能であった）であった。Ｔ－ＨＡＬＦ、ＣＬ／Ｆ、及びＶｚ／Ｆの全てについても、試験を行ったＳＣ用量に加えて、スタチンと共にＬＩＢ００３を投与した際の全体にわたり同様であった。総ＬＩＢ００３のＴ_ｍａｘ中央値は、両方のＩＶ用量レベルにわたり、０．３３～１．０８時間の範囲であった。Ｔ－ＨＡＬＦ、ＣＬ、及びＶｚは全て、試験を行った両方のＩＶ用量にわたり同様であった。

それぞれ３００ｍｇ及び６００ｍｇのＬＩＢ００３の単回ＳＣ投与後における、総ＬＩＢ００３の絶対バイオアベイラビリティは、６７％～１１１％の範囲であった。

第２相試験における用量レベルの論理的根拠
第１相の遊離ＰＣＳＫ９データ及びＬＤＬ－Ｃデータ、ならびに、オートインジェクターによる単回ＳＣ注射と一致する容量（１．５ｍＬ以下）で、少なくともＱ４Ｗの投与を得るという目的に基づいて、一定のスタチン及び／またはエゼチミブを受けている、ＡＳＣＶＤを有する、もしくはＡＳＣＶＤのリスクが高い、または、ＣＶＤを伴わないＨｅＦＨを有する、約８０名の患者を含む第２相用量設定試験を計画した。この第２相用量設定試験におけるＱ４Ｗ投与用に選択した用量には、１５０ｍｇ、３００ｍｇ、及び３５０ｍｇが含まれる。第１相における最大６００ｍｇ（ＳＣとＩＶの両方）のヒトＬＩＢ００３曝露と、１２週間の非ヒト霊長類ＧＬＰ毒性試験において到達したレベル、の両方において報告がないことから、全３用量は、安全であると予測された。

実施例４：一定した脂質低下療法を受けており、更なるＬＤＬ－Ｃ低下が必要な患者における、ＬＩＢ００３の有効性及び安全性を評価するための無作為化二重盲検、プラセボ対照、第２相、用量設定
１２週間の無作為化、二重盲検、プラセボ対照、用量設定第２相試験において、様々な用量のＬＩＢ００３を毎月（Ｑ４Ｗ）投与して、ＬＩＢ００３についての試験を行い、それに続く、４週間のフォローアップ評価期間において、ＬＤＬ－Ｃレベルのベースラインからの変化率（１２週目における１０週目と１２週目の平均値として、Ｆｒｉｅｄｅｗａｌｄ式で算出した）の評価を行った。この試験には、アテローム動脈硬化性心血管疾患（ＡＳＣＶＤ）を有する、もしくはＡＳＣＶＤのリスクが高い（１０％以上の５年リスクまたは７．５％以上の１０年リスク）、ＡＳＣＶＤを有するもしくはＣＶＤリスクを有する被験者（算出したＬＤＬ－Ｃはが８０ｍｇ／ｄＬ以上）、または、ヘテロ接合性家族性高コレステロール血症を有しＣＶＤを有さない被験者（算出したＬＤＬ－Ｃが１００ｍｇ／ｄＬ以上）、のいずれかである、１８歳以上の年齢の合計で８１名の男性及び女性が参加した。スタチン（エゼチミブを伴ってまたは伴わずに）などの一定した脂質低下経口薬物療法を受けている全ての被験者は、４００ｍｇ／ｄＬ以下のＴＧを有していた。これらの被験者を、３つの活性剤治療群、及び対応する１つのプラセボ治療群へとグループ分けした。それぞれの群には、１名のプラセボ被験者毎に無作為化された３名のＬＩＢ００３被験者が含まれたが、それはすなわち、治療群あたり２０名のＬＩＢ００３被験者及び２０名のプラセボということである。１５０ｍｇ、３００ｍｇ、もしくは３５０ｍｇのＬＩＢ００３またはプラセボの皮下用量を、一定した規定食及び経口ＬＤＬ－Ｃ低下薬物療法を受けている高コレステロール血症を有する被験者に毎月（Ｑ４Ｗ）皮下投与した。

本試験に登録された被験者の人口統計の一覧を以下の表１２に示す。

安全性結果の概要
総合的に、ＬＩＢ００３は、本試験において、最大３５０ｍｇ Ｑ４Ｗの皮下用量として、安全で概ね良好な忍容性を示した。全てのＬＩＢ００３用量、すなわち１５０ｍｇ、３００ｍｇ、及び３５０ｍｇは、良好な忍容性を示し、安全性懸念は何ら明らかとならなかった。８１名の被験者のうち、７９名の被験者が試験を完了させ、２名の被験者が中止となった。中止は有害事象によるものではなかった。更に、本試験における有害事象が死亡に至ることはなかった。

本試験中に被験者が経験した、治療下で発現した有害事象（ＴＥＡＥ）の一覧を以下の表１３に示す。

８１名の被験者のうちの合計４３名（５３％）がＴＥＡＥを示し、プラセボの２０名のうちの１０名（５０％）がＴＥＡＥを示し、混合ＬＩＢ００３治療群の６１名のうちの３３名（５４％）がＴＥＡＥを示した。大部分のＴＥＡＥの重症度は軽度から中程度であった。最も一般的に報告されたＴＥＡＥは、疲労、注射部位の紫斑、上気道感染症、及び呼吸困難であった。他の全てのＴＥＡＥは３名以下の被験者から報告された。

８１名の被験者のうちの６名（７％）のみが試験薬関連ＴＥＡＥを示し、プラセボの２０名のうちの２名（１０％）が試験薬関連ＴＥＡＥを示し、混合ＬＩＢ００３治療群の６１名のうちの４名（７％）が試験薬関連ＴＥＡＥを示した。大部分の試験薬関連ＴＥＡＥの重症度は軽度であり、重症とみなされるものはいなかった。最も多く報告された試験薬関連ＴＥＡＥは注射部位の紅斑であった。他の全ての試験薬関連ＴＥＡＥは１名以下の被験者から報告された。

８１名の被験者のうちの６名（７％）がＳＡＥを示し、プラセボの１名（５％）及び混合ＬＩＢ００３治療群の５名（８％）がＳＡＥを示したが、そのどれもが試験薬に関連するとはみなされなかった。５件のＳＡＥ、すなわちプラセボの１件（５％）及び混合ＬＩＢ００３治療群の４件（７％）の強度が重症であり、ＬＩＢ００３治療群の１件（２％）の強度が中程度であった。

異常検査値に関連するＴＥＡＥは認められなかった。いかなる治療群での肝機能検査（ＡＬＴ、ＡＳＴ、またはビリルビン）においても、臨床的に有意な増加もしくは傾向は認められず、また、プラセボもしくはＬＩＢ００３治療群間における差異も認められなかった。具体的には、３×ＵＬＮ超のＡＬＴまたはＡＳＴの増加を経験した被験者はおらず、２×ＵＬＮ超のビリルビンを示したものはいなかった。全治療群において幾人かの被験者が非持続性のＣＫの増加を経験したが、それは運動または活動に関連するものであり、５×ＵＬＮを超えるものはいなかった。腎機能、グルコース、その他の化学または血液パラメータにおいて、臨床的に有意な増加は認められず、または、治療群間に差異は認められなかった。

バイタルサイン、ＥＣＧ、及び理学的検査の結果に、臨床的に有意な所見は認められなかった。試験薬の投与後１５分時点において、合計５件の注射部位紅斑のインシデントが記録された。プラセボ群における１名の被験者はまた、１日目の投与後１５分に注射部位の掻痒を報告した。投与後１５分に生じた注射部位における反応の全て（プラセボ群の１件、及び混合ＬＩＢ００３治療群の４件）の重症度は軽度であった。

有効性結果の概要
試験を行った全てのＬＩＢ００３用量、すなわち１５０ｍｇ、３００ｍｇ、及び３５０ｍｇは、ＬＤＬ－Ｃレベル及び遊離ＰＣＳＫ９レベルの、速やかで、持続的で、著しい、平均値低下を引き起こした。ＬＤＬ－Ｃの最も大きな平均値低下は、３００ｍｇのＬＩＢ００３投与コホートで認められた。これまでの試験と一致して、より高い、３５０ｍｇのＬＩＢ００３用量では、更なるＬＤＬ－Ｃ低下は生じなかった。投与間の全４週間において最大ＬＤＬ－Ｃ低下を得るのに、１５０ｍｇ用量では不十分であることが判明した。

本試験の有効性データの一覧を以下の表１４に示す。

ＬＩＢ００３の投与後、Ｆｒｉｅｄｅｗａｌｄ式で算出すると、ベースラインから１０週目ＬＯＣＦと１２週目ＬＯＣＦの平均値への、１２週目ＬＯＣＦへの、ＬＤＬ－Ｃレベルの大きく持続的な平均値低下が認められた。ＬＩＢ００３コホートとプラセボ群の間における、ベースラインから１０週目ＬＯＣＦと１２週目ＬＯＣＦの平均値への、１２週目ＬＯＣＦへの、ＬＤＬ－ＣのＬＳ平均値変化率の最大差異（９５％ＣＩ）は、３００ｍｇのＬＩＢ００３投与コホートで生じ、それぞれ、－７６．１％（［－８６．０％、－６６．２％］、ｐ＜０．０００１）及び－７７．３％（［－９０．５％、－６４．１％］、ｐ＜０．０００１）であった。分取超遠心分離及びＨｏｐｋｉｎｓ式を用いて、ＬＤＬ－Ｃレベルの平均値変化率を評価することにより、同様の知見が得られた。

ＰＣＳＫ９の最大抑制が一旦達成されると更なるＬＤＬ－Ｃ低下は生じないということを示すこれまでの試験と一致して、より多い用量の３５０ｍｇのＬＩＢ００３では、更なるＬＤＬ－Ｃレベルの低下は生じなかった。投与後の全ての２週間において、１５０ｍｇ用量が、３００ｍｇ用量及び３５０ｍｇ用量と同様の低下を達成したが、投与間の全ての４週間において最大ＬＤＬ－Ｃ低下を維持するには不十分であった。

ＬＩＢ００３の投与後、ベースラインから１０週目ＬＯＣＦと１２週目ＬＯＣＦの平均値への、１２週目ＬＯＣＦへの、遊離ＰＣＳＫ９レベルの大きく持続的な平均値低下が認められた。ＬＩＢ００３コホートとプラセボ群の間における、ベースラインから１０週目ＬＯＣＦと１２週目ＬＯＣＦの平均値への、１２週目ＬＯＣＦへの、遊離ＰＣＳＫ９レベルのＬＳ平均値変化率の差異（９５％ＣＩ）は、３００及び３５０ｍｇコホートで生じ、それぞれ、－８９．７％（［－１００．０％、－７９．４％］、ｐ＜０．０００１）及び－９２．８％（［－１０２．９％、－８２．６％］、ｐ＜０．０００１）であった。それぞれ３００及び３５０ｍｇコホートの、ＬＩＢ００３コホートとプラセボ群の間における、ベースラインから１２週目ＬＯＣＦへの、遊離ＰＣＳＫ９レベルのＬＳ平均値変化率の差異（９５％ＣＩ）は、－８４．１％（［－９９．５％、－６８．７％］、ｐ＜０．０００１）及び－９０．２％（［－１０５．４％、－７５．０％］、ｐ＜０．０００１）であった。３５０ｍｇ ＬＩＢ００３用量が、１２週目において、３００ｍｇ用量と比較してわずかにより多くのＰＣＳＫ９を抑制した（それぞれ、９０．２％対８４．１％）が、このことは、より高いＬＤＬ－Ｃ効果をもたらさなかった。

更に、ＬＩＢ００３の投与後、ベースラインから１０週目ＬＯＣＦと１２週目ＬＯＣＦの平均値への、１２週目ＬＯＣＦへの、総ＰＣＳＫ９レベルの大きく持続的な平均値低下が認められた。ベースラインから１０週目ＬＯＣＦと１２週目ＬＯＣＦの平均値への、ＬＩＢ００３の１５０ｍｇ、３００ｍｇ、及び３５０ｍｇコホートの平均値変化率は、それぞれ、９５．５５５％、９０．２７３％、及び９０．０８０％であった。ベースラインから１２週目ＬＯＣＦへの、ＬＩＢ００３ １５０ｍｇ、３００ｍｇ、及び３５０ｍｇコホートの平均値変化率は、それぞれ、７５．１６５％、７８．１８８％、及び８６．８１１％であった。対照的に、プラセボは、同一時点において極めて小さな平均値変化率（３．０４４％以下）を示した。

更に、ベースラインから１０週目ＬＯＣＦと１２週目ＬＯＣＦの平均値への、１２週目ＬＯＣＦへの、非ＨＤＬ－Ｃレベルの大きく持続的な平均値低下が認められ、ＴＣレベルの中程度で持続的な平均値低下が認められた。しかし、ＬＩＢ００３コホートとプラセボ群の両方において、ベースラインから１０週目ＬＯＣＦと１２週目ＬＯＣＦの平均値への、１２週目への、ＨＤＬ－Ｃレベルの極めてわずかな平均値変化が認められたに過ぎなかった。加えて、ＡＮＯＶＡモデルを用いた、それぞれのＬＩＢ００３コホートとプラセボ群の間のＶＬＤＬ－Ｃレベル及びＴＧレベルの変化率の比較は、ベースラインから１０週目ＬＯＣＦと１２週目ＬＯＣＦの平均値への、１２週目ＬＯＣＦへの、ＶＬＤＬ－Ｃレベル及びＴＧレベルの小さな平均値低下を示した。

同様に、ＬＩＢ００３の投与後、ベースラインから１２週目ＬＯＣＦへの、ａｐｏ Ｂレベルの大きく持続的な平均値低下が認められた。ＬＩＢ００３コホートとプラセボ群の間における、ａｐｏ ＢレベルのＬＳ平均値変化率の最大差異（９５％ＣＩ）は、３００ｍｇコホートで生じ、－５８．４％（［－６８．９％、－４８．０％］、ｐ＜０．０００１）であった。

更に、全ＬＩＢ００３の投与後、ベースラインから１２週目ＬＯＣＦへの、Ｌｐ（ａ）レベルの中程度で持続的な低下が認められた。ＬＩＢ００３コホートとプラセボ群の間における、Ｌｐ（ａ）レベルのＬＳ平均値変化率の最大差異（９５％ＣＩ）は、３００ｍｇコホートで生じ、－２８．７％（［－４２．６％、－１４．８％］、ｐ＜０．０００１）であった。この低下は、用量及び投与頻度が等しいＰＣＳＫ９モノクローナル抗体（ＬＩＢ００３の３００ｍｇ、Ｑ４Ｗと同様に遊離ＰＣＳＫ９及び ＬＤＬ－Ｃを抑制した）により達成された低下と一致した。

ａｐｏ Ａ１レベルは、ＬＩＢ００３コホート及びプラセボ群において、ベースラインから１２週目ＬＯＣＦへの極めてわずかな平均値変化を示した。

上で考察した第２相試験のデータに基づいて、ＬＩＢ００３の３００ｍｇ皮下Ｑ４Ｗ用量をオープンラベル拡張試験及び第３相試験用に選択した。

Claims (34)

1. 血中ＬＤＬ粒子濃度を低下させるための組成物であって、１もしくはそれ以上のＰＣＳＫ９結合融合タンパク質の単位用量ならびに薬学的に許容される担体を含み、前記ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質は配列番号３のアミノ酸配列を有し、前記単位用量は、約２５０ｍｇ～約３５０ｍｇの前記ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質を含み、ここで、前記組成物中における前記ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質の濃度は、少なくとも２００ｍｇ／ｍＬである、前記組成物。
2. 少なくとも約２５０ｍｇ／ｍＬの前記ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質を含む、請求項１に記載の組成物。
3. 少なくとも約３００ｍｇ／ｍＬの前記ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質を含む、請求項１に記載の組成物。
4. 約２７５ｍｇ～約３２５ｍｇの前記ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質の単位用量を含む、請求項１に記載の組成物。
5. 約３００ｍｇの前記ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質の単位用量を含む、請求項４に記載の組成物。
6. 前記薬学的に許容される担体は、緩衝剤、等張化剤、任意選択的に界面活性剤、及び溶媒を含む、請求項１から請求項５のいずれか１項に記載の組成物。
7. 前記緩衝剤は、アミノ酸緩衝剤、クエン酸塩緩衝剤、リン酸塩緩衝剤、酢酸塩緩衝剤、コハク酸塩緩衝剤、及び／または重炭酸塩緩衝剤を含む、請求項６に記載の組成物。
8. 前記緩衝剤は、Ｌ－ヒスチジン／Ｌ－ヒスチジン一塩酸塩を含む、請求項６または請求項７に記載の組成物。
9. 前記Ｌ－ヒスチジン／Ｌ－ヒスチジン一塩酸塩は１ｍｇ／ｍＬ～１０ｍｇ／ｍＬで存在し、ｐＨ６．８に組成物のｐＨを維持する、請求項８に記載の組成物。
10. 前記等張化剤は、塩化ナトリウム、ブドウ糖、ショ糖、グリセリン、マンニトール、ソルビトール、アルギニン、または塩化カリウム、のうちの１種または複数種を含む、請求項６から請求項９のいずれか１項に記載の組成物。
11. 前記等張化剤は塩化ナトリウムを含む、請求項１０に記載の組成物。
12. 前記塩化ナトリウムは２ｍｇ／ｍＬ～２０ｍｇ／ｍＬで存在する、請求項１１に記載の組成物。
13. 前記界面活性剤はポリソルベート界面活性剤を含む、請求項６から請求項１２のいずれか１項に記載の組成物。
14. 前記界面活性剤はポリソルベート８０である、請求項１３に記載の組成物。
15. ２０ｍＭのヒスチジン緩衝材、１５０ｍＭの塩化ナトリウム及び０．０２％（重量／体積）のポリソルベート８０を含み、ｐＨ６．８である、請求項６から請求項１４のいずれか１項に記載の組成物。
16. 界面活性剤を含まない、請求項６から請求項１２のいずれか１項に記載の組成物。
17. 前記溶媒は水である、請求項６から請求項１６のいずれか１項に記載の組成物。
18. フェノール、メタ－クレゾール、及び安息香酸ナトリウムから選択される防腐剤、を更に含む、請求項１から請求項１７のいずれか１項に記載の組成物。
19. 注射ペン内に含有される、請求項１から請求項１８のいずれか１項に記載の組成物。
20. 前記注射ペンは、約２７５ｍｇ～約３００ｍｇの前記ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質の単位用量を含有及び送達する、請求項１９に記載の組成物。
21. 前記注射ペンは、約３００ｍｇの前記ＰＣＳＫ９結合融合タンパク質の単位用量を含有及び送達する、請求項２０に記載の組成物。
22. 前記単位用量の容量は、約１．５ｍＬ以下、約１ｍＬ以下、０．８ｍＬ以下、または０．２５ｍＬ以下である、請求項１９から請求項２１のいずれか１項に記載の組成物。
23. ＰＣＳＫ９関連疾患を患う対象を治療するための、請求項１から請求項２２のいずれか１項に記載の組成物。
24. 前記対象は、脂質異常症、高コレステロール血症、異常脂血症、冠状動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化症、高血圧、２型糖尿病、及び胆汁うっ滞性肝疾患から選択される症状を有するヒトである、請求項２３に記載の組成物。
25. 前記対象は高コレステロール血症又は家族性高コレステロール血症を有する、請求項２４に記載の組成物。
26. 前記対象は、アテローム動脈硬化性心血管疾患（ＡＳＣＶＤ）を有する、または、（ＡＳＣＶＤ）のリスクが高い、請求項２４に記載の組成物。
27. 前記対象は、スタチンを用いた治療を受けていない、または、脂質低下経口治療薬を用いた治療を受けていない、請求項２３から請求項２６のいずれか１項に記載の組成物。
28. 前記対象は、スタチンまたは別の脂質低下経口治療薬を用いた治療を受けている、請求項２３から請求項２６のいずれか１項に記載の組成物。
29. 前記対象はスタチン不耐性を示す、請求項２７に記載の組成物。
30. 前記組成物は、皮下投与、筋肉内投与、皮膚内投与、または静脈内投与で投与される、請求項２３から請求項２９のいずれか１項に記載の組成物。
31. 前記対象は、週に１回から２か月間に１回、前記組成物の単位用量を投与される、請求項２３から請求項２９のいずれか１項に記載の組成物。
32. 前記対象は、月に約１回または４週間に約１回、前記組成物の単位用量を投与される、請求項３１に記載の組成物。
33. 前記単位用量は０．７～１．５ｍＬの容量を有する、請求項３２に記載の組成物。
34. 前記対象は、週に約１回、前記組成物の単位用量を投与される、請求項３１に記載の組成物。

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