JP7467543B2 - ＰＧＣ－１αの発現を増加させる組成物 - Google Patents

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Description

本特許出願は２０１６年１月１３日に大韓民国特許庁に提出された大韓民国特許出願第１０－２０１６－０００４３８３号に対して優先権を主張し、前記特許出願の開示事項は本明細書に参照として挿入される。
本発明は、ＰＧＣ－１α発現減少に従うミトコンドリア機能低下による多様な疾患の予防または治療用組成物を提供することにある。
細胞の運命は細胞生存を維持しようとする要素と死滅させようとする要素との均衡と組合せにより調節される。細胞死滅を促進する要素の信号が伝達されれば、いろいろな定まったルートを通じて細胞死滅の過程が始まるが、その代表的な過程がアポトーシス（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）である。クロマチンの凝縮と核分裂の明確な形態の変化過程が特徴であるアポトーシスの死滅過程は、ミトコンドリア内膜で分泌される死滅促進要素の分泌によるカスパーゼ（ｃａｓｐａｓｅ）酵素の活性を通じてなされるが、この過程はミトコンドリア外膜が透過され始めてなされる（Ｇａｌｌｕｚｚｉ ｅｔ ａｌ．， ２００７； Ｋｒｏｅｍｅｒ ｅｔ ａｌ．， ２００９）［１］ （Ｃｈｉｐｕｋ ｅｔ ａｌ．， ２０１０； Ｙｏｕｌｅ ａｎｄ Ｓｔｒａｓｓｅｒ， ２００８）［２］。このようなミトコンドリアを通じての細胞死滅は発生学的プログラム、ＤＮＡ損傷、成長要素と営養分の不足、ウイルス感染、酸化ストレスなど、多様な刺激によって始まる（Ｙｏｕｌｅ ａｎｄ Ｓｔｒａｓｓｅｒ， ２００８）［３］。しかしながら、異常な細胞死滅を誘導する過程は明らかな疾病の根源となる。例えば、異常な細胞死滅を誘導するようになれば、神経退化、虚血性再灌流傷害（ｉｓｃｈｅｍｉａ ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｎｊｕｒｙ）、自家免疫疾病などを誘発するようになる（Ｆａｄｅｅｌ ａｎｄ Ｏｒｒｅｎｉｕｓ、２００５）［４］。これに関して最近の研究結果は細胞の死滅と生存においてＰＧＣ－１ａの機能とＰＧＣ－１αの調節障害がもたらすことができる各種疾病に関して確認するようになった。
１．神経退行性疾病
アルツハイマー（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、ハンチントン病（ＨＤ）、ルーゲーリック病（ａｍｙｎｏｔｏｐｈｉｃ ｌａｔｅｒａｌ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ；ＡＬＳ）のような神経退行性疾患は神経細胞の漸進的な機能喪失と細胞死滅によるものである（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．， ２０１２）［５］。これら疾病の全体的な徴候は特定部分の神経細胞の損失に起因する。ＰＧＣ－１α ｋｎｏｃｋ－ｏｕｔマウスから見ることができる神経退化による多過ぎな活動亢進（ｈｙｐｅｒａｃｔｉｖｉｔｙ）と大脳皮質部位に少なく表れた損傷部位とは異なり、脳線条体に目立って表れた損傷部位であって、このような神経退行性疾病にＰＧＣ－１αが直接的に関連があるという事実が分かる（Ｌｉｎ ｅｔ ａｌ．， ２００４）［６］。また、このような発見と共にＰＧＣ－１α ｋｎｏｃｋ－ｏｕｔマウスの中枢神経系に表れた液胞損傷（ｖａｃｕｏｌａｒ ｌｅｓｉｏｎ）を確認することによって、ＰＧＣ－１αが神経細胞機能を維持することに重要な役割をすることが分かる（Ｌｅｏｎｅ ｅｔ ａｌ．， ２００５）［７］。
ＡＤ患者の脳のミトコンドリアの酸化機能障害、生成低下、脳機能低下など、ＡＤの病理生理学現象はミトコンドリア機能損傷から起因する（Ｃｈａｔｕｒｖｅｄｉ ＆ Ｆｌｉｎｔ， ２０１３）［８］。特に、ＡＤ患者の脳のＰＧＣ－１α発現量が減っており、これは減少したミトコンドリアの生成と機能、そして増加した酸化的ストレスによる神経細胞死滅の結果を誘発する（Ｋａｔｓｏｕｒｉ ｅｙ ａｌ．， ２０１１； Ｑｉｎ ｅｔ ａｌ．， ２００９）［９、１０］。ＰＧＣ－１αの発現減少はＡＤを誘発するアミロイドの前駆タンパク質を分解切断してベータアミロイドを生成するＢＡＣＥ１の発現を増加させ、したがって、ベータアミロイドの量を増加させてミトコンドリアの機能低下と細胞死滅を誘発する（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．， ２０１３）［１１］。
ＰＧＣ－１αの遺伝子（ＰＰＡＲＧＣ１Ａ）の単一塩基変移はＰＤとＨＤにかかる危険要素の増加と相当な関連関係がある（Ｃｌａｒｋ ｅｔ ａｌ．， ２０１１； Ｗｅｙｄｔ ｅｔ ａｌ．， ２００９）［１２、１３］。マウスＨＤモデルだけでなく、ＡＤ、ＰＤ、ＨＤ患者のＰＧＣ－１α遺伝子発現が減少する（Ｃｕｉ ｅｔ ａｌ．， ２００６； Ｑｉｎ ｅｔ ａｌ．， ２００９； Ｒａｎｇａｎａｔｈａｎ ｅｔ ａｌ．， ２００９； Ｗｅｙｄｔ ｅｔ ａｌ．， ２００６； Ｘｉａｎｇ ｅｔ ａｌ．， ２０１１； Ｚｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．， ２０１０［１４－１９］。したがって、ＨＤモデル細胞培養で人為的なＰＧＣ－１αの発現は神経細胞の死滅を相当に減少させる（Ｃｈａｔｕｒｖｅｄｉ ｅｔ ａｌ．， ２００９）［２０］。また、ＰＧＣ－１αの過剰発現はＡＬＳモデルマウスの運動ニューロンを通じての運動機能を向上させる（Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．， ２０１１）［２１］。このような神経退行性疾病と密接な関連を有するＰＧＣ－１αの機能によってＰＧＣ－１αを薬理的に活性化させる機作を多様な神経退行性疾病を治癒する新たな方法として台頭している。
２．活性酸素群（ＲＯＳ）による老化現象
ＰＧＣ１－酸化的ストレス状況で防御機作を始めることに重要な役割をする（Ｃｈａｔｕｒｖｅｄｉ ＆ Ｆｌｉｎｔ， ２０１３）［２２］。これは、神経退行性疾病での機能と噛み合うものであって、ミトコンドリアの呼吸機作関連複合体と脱共役（ｕｎｃｏｕｐｌｉｎｇ）タンパク質（ＵＣＰ）の量がＰＧＣ１－α過剰発現により増加する（Ｓｔ－Ｐｉｅｒｒｅ ｅｔ ａｌ．， ２００３）［２３］。このような増加はミトコンドリアと細胞質内の活性酸素群（ＲＯＳ）を解毒させるタンパク質群の発現の増加のようになされる（Ｃｏｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．， ２００９）［２４］。ＲＯＳ代謝でＰＧＣ－１αの役割を明らかにした最初の研究はＰＧＣ－１αを筋肉細胞で他の位置（ｅｃｔｏｐｉｃ）発現させればスーパーオキシド（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ）を除去するスーパーオキシドジスムターゼ（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕｔａｓｅ）２（ＳＯＤ２）と過酸化水素（ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｐｅｒｏｘｉｄｅ）を除去するグルタチオンペルオキシダーゼ（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）１（ＧＰＸ１）の発現が増加することを報告した論文である（Ｓｔ－Ｐｉｅｒｒｅ ｅｔ ａｌ．， ２００３）［２３］。その以後、進展した研究を通じてミトコンドリア、細胞質、ペルオキシソームなど、多様な細胞内器官に存在する全ての種類のＲＯＸ解毒酵素がＰＧＣ－１αにより調節されるかが 調査された（Ｓｔ－Ｐｉｅｒｒｅ ｅｔ ａｌ．， ２００６； Ｖａｌｌｅ ｅｔ ａｌ．， ２００５）［２５、２６］。これら研究またＰＧＣ－１αが調節するＲＯＳ代謝プログラムの生理学的重要性を明らかにした。一方、ＰＧＣ－１αの発現を防ぐ場合、ＲＯＳ解毒タンパク質群の増加を防ぐため、酸化的ストレス状況ではＰＧＣ－１αが細胞保護機能を遂行することが分かる（Ｓｔ－Ｐｉｅｒｒｅ ｅｔ ａｌ．， ２００６）［２５］。
また、細胞の老化または生命体の老化現象は、老化関連慢性疾病、例えば、退行性脳疾患、代謝関連疾患、心血管疾患が先行するようになる。これら疾病は、活性酸素群によるストレス、非細菌性炎症（ｓｔｅｒｉｌｅ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）、ミトコンドリア機能不全、ＤＮＡ損傷、そしてテロメア（ｔｅｌｏｍｅｒｅ）機能不全と長さが短くなる現象が増加するようになる。今までは、このような現象の共通的メカニズムに対する理解が不完全であったが、最近ＰＧＣ－１αを除去すればテロメアの長さが短くなり、ＤＮＡの損傷が生じて血管の老化及びアテローム性動脈硬化症を起こすことを見せた論文が発表されたことがある（Ｘｉｏｎｇ， Ｓ ２０１５）［２７］。この論文によれば、ＰＧＣ－１αを除去すれば、テロメアの長さを維持するテロメアリバーストランスクリプターゼ（ｔｅｌｏｍｅｒｅ ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ）（ＴＥＲＴ）の活性及び発現量が減少し、ｐ５３の発現量及び活性は増加した。この研究はＰＧＣ－１αが老化及びそれに伴う慢性疾患を改善することに重要な役割をすることを見せている。
３．心血管疾患または心臓筋肉関連
ＰＧＣ－１αの抗酸化機能は血管内皮細胞の保護とも連結される。神経モデルと同様に、人間血管内皮細胞内のＰＧＣ－１α発現を増加させる場合、ミトコンドリアの生成と活性酸素群解毒酵素群の増加がなされる（Ｖａｌｌｅ ｅｔ ａｌ．， ２００５）［２６］。ＲＯＳを牛の内皮細胞に加える場合、ＰＧＣ－１αの増加と細胞内抗酸化機能の増加がなされる（Ｂｏｒｎｉｑｕｅｌ ｅｔ ａｌ．， ２００６）［２８］。人間血管内皮細胞でＰＧＣ－１αを過発現させた後、人為的な酸化的ストレスを加える場合、細胞内ＲＯＳの増加が減少し、ｃａｓｐａｓｅ ３の活性が妨害される（Ｖａｌｌｅ ｅｔ ａｌ．， ２００５）［２６］。マウスＰＧＣ－１αとＰＧＣ－１β ｄｏｕｂｌｅ ｋｎｏｃｋ－ｏｕｔモデルでは、生後主要死亡原因が心不全と表れて（Ｌａｉ ｅｔ ａｌ．， ２００８）［２９］、充血性心不全（ｃｏｎｇｅｓｔｉｖｅ ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ）マウスモデルではＰＧＣ－１αの減少がストレス性心不全と心筋細胞死滅と連結される（Ｇａｒｎｉｅｒ ｅｔ ａｌ．， ２００３）［３０］。このように、ＰＧＣ－１αは心筋細胞の代謝と成長において重要な役割をする。
４．筋肉損失及び関連疾患
ＰＧＣ－１αの抗酸化機能は筋肉の維持強化機能とも連結される。筋肉の量が減って、機能が落ちると（老人性筋肉損失症、サルコペニア（Ｓａｒｃｏｐｅｎｉａ）、または筋肉機能不全症）、ホルモン関連疾病から細胞内の恒常性維持に至るまで非常に広い範囲に悪影響を及ぼす。神経モデルと同様に、筋肉細胞でＰＧＣ－１ααの発現が増加すれば（運動または遺伝子発現）、筋肉損失の原因となるミトコンドリア機能不全が解消されて筋肉を維持することができることがいろいろな研究により明るみになったことがある［３１－３８］。
５．脂肪除去及び体温維持
ＰＧＣ－１αが欠失されたマウスではミトコンドリア遺伝子の発現が減少したが、これらの中には電子伝達系（ＥＴＣ）の部品役割をする多様な遺伝子が含まれていて、呼吸を低めた（Ｌｉｎ ｅｔ ａｌ．， ２００４； Ｌｅｏｎｅ ｅｔ ａｌ．， ２００５）［６、７］。この減少したミトコンドリア機能はミトコンドリアの代謝過程に依存する生理学的過程に損傷を与えた。実際に、このＰＧＣ－１αが欠失されたマウスは寒さに露出した時に発現が増加するＵＣＰ１の発現を増加させることができなくて、寒さに敏感な反応を見せた（Ｌｉｎ ｅｔ ａｌ．， ２００４； Ｌｅｏｎｅ ｅｔ ａｌ．， ２００５）［６、７］。これらマウスは正常ネズミと比較して見る時、運動能力も減少した（Ｌｅｏｎｅ ｅｔ ａｌ．， ２００５）［７］。このＰＧＣ－１αが欠失されたマウスとは対照的に、心臓と筋肉でＰＧＣ－１αが過発現されるトランスジェニックマウスの場合、ミトコンドリア生成が増加しており、ミトコンドリア遺伝子の発現も増加した（Ｌｅｈｍａｎ ｅｔ ａｌ．， ２０００； Ｌｉｎ ｅｔ ａｌ．， ２００２ｂ； Ｗｅｎｄｅ ｅｔ ａｌ．， ２００７）。これら研究は生体内でＰＧＣ－１αが有り無しによってミトコンドリアの生理に重要な影響を及ぼすことを見せている。また、類似褐色脂肪前駆細胞（Ｂｅｉｇｅまたはｂｒｉｔｅ ｐｒｅａｄｉｐｏｃｙｔｅｓ）でＰＧＣ－１αが増加すれば、類似褐色脂肪細胞は褐色脂肪細胞に分化されて脂肪酸を酸化させてＡＴＰを生成するものでなく、体で熱として発散する機能を増加させる。また、脂肪も除去する機能をするようになる［３９－４２］。
周知のように、皮下脂肪はセルライト（ｃｅｌｌｕｌｉｔｅ）で囲まれた顆粒層で構成されている。このような皮下脂肪は運動を通じてよく分解されない特性がある。これは、体内の脂肪分解酵素が前記のセルライトにより遮断されるためである。したがって、従来には鍼、針と呼ばれるカテーテルを挿入して物理的に脂肪細胞を吸入する手術が盛んに行われたが、このような施術法は被施術者に苦痛を伴うため、大概全身麻酔を先行する。しかしながら、全身麻酔は被施術者に危険要素として作用することがあることを排除することができず、カテーテルが挿入される場合、内部出血及びそれに伴う組織の回復期間が長くなることは不回避である。
注射を用いた脂肪分解（Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｌｉｐｏｌｙｓｉｓ）は脂肪を分解することができる薬物を脂肪部位に直接皮下注射して脂肪を溶かして排出するようにする方法であって、代表的な製品には、ＰＰＣ注射と知られたＬｉｐｏｓｔａｂｉｌ（登録商標）、Ｌｉｐｏｄｉｓｓｏｌｖｅ、Ｌｉｐｏ－ｚａｐ、Ｆｌａｂ－Ｊａｂがある。これらＰＰＣ注射剤は、ホスファチジルコリン（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ）とこれを液状に維持させるデオキシコール酸（ｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ ａｃｉｄ）で構成されており、肝硬変により昏睡状態に陥った患者のために肝性昏睡治療補助剤として最初許可を受けた専門医薬品である。しかしながら、ＰＰＣ注射が肉の多い部位に注射すれば、脂肪細胞を分解して肉が落ちると知られるにつれて、許可されない脂肪除去剤に誤用されている。ホスファチジルコリンは細胞膜を構成する主要物質であり、血液で脂肪成分がよく溶解されているようにする効果があり、脂肪組織の脂肪細胞を溶かして、この中に入っている脂肪を細胞の外に排出させる効果があると考えられて使われた。理論的に考えると、ＰＰＣ注射は局所的に限定された少ない量の皮下脂肪除去、セルライト除去に使用できるが、ＰＰＣ注射自体が脂肪を除去するものではない。また、ＰＰＣ注射の作用機転は明るみにならなかった。ＰＰＣ注射に対する研究結果の多くは患者の主観的な評価に依存しており、皮下脂肪量の変化を客観的に示す研究結果はない。米国ＦＤＡはＰＰＣ注射の効能と安全性に対する資料が足りないため、ホスファチジルコリンを皮下脂肪減少に使用することに対して許可しておらず、その無分別な使用を警告している。また、脂肪肝炎、皮膚、及び呼吸器系に対する副作用を報告する文献がある。
ここに、本発明者らはこのように医薬品の副作用と慢性疾患の問題点を克服するために、安全に体脂肪を分解することができる物質を開発しようと努力した。
６．老化関連
老化は、時間が経るにつれて生じる幾つかの変化を包含する、複雑で、互いに異なる種類からなる（ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓ）状態である。実際に、旺盛な要求（ｅｎｅｒｇｅｔｉｃｄｅｍａｎｄｓ）に応じない場合、幾つかの生理的過程での機能不全、そして増加したストレスが老化という状態に寄与する。ミトコンドリアは、長い間、老化説の中心にあったが、ミトコンドリアの機能が老化によって一般的に減るためである（Ｑｕｉｎｌａｎ ｅｔ ａｌ．， ２０１１）［４３］。例えば、ミトコンドリア機能はＰＧＣ－１αとＰＧＣ１ｂと共に、ｔｅｌｏｍｅｒｅの機能不全の間減少するが、この状況は老化と関連している（Ｓａｈｉｎ ｅｔ ａｌ．， ２０１１）［４４］。
老化研究で最も目に付く仮説は“老化のフリーラジカル仮説”（‘ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌ ｔｈｅｏｒｙ ｏｆ ａｇｅｉｎｇ’）であるが、ミトコンドリアによるＲＯＳの生成増加とこれによる酸化的損傷が老化を決定する因子という説である（Ｑｕｉｎｌａｎ ｅｔ ａｌ．， ２０１１）［４３］。特に、ミトコンドリアＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）の突然変異は老化と連係されたミトコンドリア機能の低下で中心的な役割をするものとして考えられる。ミトコンドリアポリメラーゼ（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ） ｃ（ＰＯＬＧ）マウスモデル（Ｋｕｊｏｔｈ ｅｔ ａｌ．， ２００５； Ｔｒｉｆｕｎｏｖｉｃ ｅｔ ａｌ．， ２００４）［４５、４６］は、老化においてミトコンドリアの重要性を浮上させることに助けを与えた。ＰＯＬＧはミトコンドリアに位置しているＤＮＡポリメラーゼであるが、ミトコンドリアＤＮＡの複製（ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ）及びＤＮＡ修復（ｒｅｐａｉｒ）に関与する。ＰＯＬＧに突然変異を有するマウスはミトコンドリアＤＮＡに突然変異が増加し、脱毛現象を見せて（ａｌｏｐｅｃｉａ（ｈａｉｒ ｌｏｓｓ）、骨多孔症及び心筋症（ｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ）を起こすが、このような症状は老化と連係されたものである（Ｋｕｊｏｔｈ ｅｔ ａｌ．， ２００５； Ｔｒｉｆｕｎｏｖｉｃ ｅｔ ａｌ．， ２００４）［４５、４６］。ＰＧＣ－１α発現を通じてのミトコンドリアの増加がＰＯＬＧマウスの外的形質（ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）を改善することができるかを試験するために、このマウスをＭＣＫ－ＰＧＣ－１α Ｔｇマウスと交配した（Ｌｉｎ ｅｔ ａｌ．， ２００２ｂ）［４７］。突然変異ＰＯＬＧとＰＧＣ－１αを共に発現するマウスは心臓と骨格筋でミトコンドリア活性が増加したが、このような作用は突然変異ＣＯＬＧのみを発現しているネズミと比較して、これら組織機能の改善をもたらした（Ｄｉｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．， ２０１２）［４８］。これらデータは上昇したミトコンドリア機能がミトコンドリアＤＮＡの突然変異とは関わらず有益な影響を有している点を浮き彫りしている。重要にもＰＧＣ－１αの発現が一生をかけて上昇していれば、筋肉量減少（ｓａｒｃｏｐｅｎｉａ（ｌｏｓｓ ｏｆ ｍｕｓｃｌｅ ｍａｓｓ））のような老化と関連した症状の開始が遅れる（Ｗｅｎｚ ｅｔ ａｌ．， ２００９）［４９］。これら改善された機能は年齢に従う酸化的損傷の蓄積とミトコンドリア機能低下を低めたことに起因する（Ｗｅｎｚ ｅｔ ａｌ．， ２００９）［４９］。総合的に、これら研究はＰＧＣ－１αが老化と関連した症状の開始を遅延させ、生じた酸化的損傷の影響を和らげるということを見せている。
本発明者は、以下の一般式Ｉで表示される有効成分を含有するＰＧＣ－１α発現減少に従うミトコンドリア機能低下による多様な疾患の予防または治療用組成物を提供することにある。
一般式Ｉ：Ｓ－（ＭＳ）ｐ－（ＭＳ）ｑ
前記一般式で、Ｓはシアル酸であり、（ＭＳ）ｐ及び（ＭＳ）ｑは互いに独立的に単糖類残基である。
本発明の実施形態に係る目的は、ＰＧＣ－１αなどのようなミトコンドリア関連酵素の活性及び生成を増加させ、結果的にミトコンドリアの活性及び生成を増加させることによって、予防または改善、治療される退行性神経疾患、代謝性疾患、局所脂肪除去、及び脂質代謝関連疾患、老化及び老化に起因した疾病、筋肉減少（サルコペニア、悪液質）及び筋肉減少に起因した疾病を含む病態、障害及び／又は疾患の治療及び／又は管理のための組成物を提供するものである。
本明細書の全体に亘って多数の特許文献が参照され、その引用が表示されている。引用された特許文献の開示内容はその全体として本明細書に参照として挿入されて本発明が属する技術分野の水準及び本発明の内容がより明確に説明される。
本発明の一態様によれば、本発明は有効成分として次の一般式Ｉで表示される化合物、その塩、水和物（ｈｙｄｒａｔｅ）、または溶媒和物（ｓｏｌｖａｔｅ）を含む、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体コアクチベータ１－アルファ（ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ １－ａｌｐｈａ：ＰＧＣ－１α）の発現減少と関連した疾病または症状を予防または治療するための組成物を提供する：
一般式Ｉ：Ｓ－（ＭＳ）ｐ－（ＭＳ）ｑ
前記一般式で、Ｓはシアル酸であり、（ＭＳ）ｐ及び（ＭＳ）ｑは互いに独立的に単糖類残基である。
本発明の一態様によれば、本発明は有効成分として一般式Ｉで表示される化合物を含むＰＧＣ－１α発現減少に従うミトコンドリア機能低下に従う、転写コアクチベーターであるペルオキシソーム増殖因子活性化受容体コアクチベータ１－アルファ（ＰＧＣ－１α）の発現を増加させることにより予防または改善、治療される退行性神経疾患、代謝性疾患、局所脂肪除去及び脂質代謝関連疾患、老化及び老化に起因した疾病、筋肉減少（サルコペニア（Ｓａｒｃｏｐｅｎｉａ）、悪液質（ｃａｃｈｅｘｉａ））及び筋肉減少に起因した疾病を含む病態、障害、及び／又は疾患の予防または治療用組成物を提供する。
このような目的を達成するための本発明に従うミトコンドリア機能低下による多様な疾患の予防または治療のための組成物は、次の一般式Ｉで表示される化合物を有効成分に含有する。
一般式Ｉ：Ｓ－（ＭＳ）ｐ－（ＭＳ）ｑ
前記一般式で、Ｓはシアル酸であり、（ＭＳ）ｐ及び（ＭＳ）ｑは互いに独立的に単糖類残基である。
本発明者は多様な疾病の根本であるＰＧＣ－１α発現減少と、これに従うミトコンドリアの機能低下を防ぐ物質を開発しようと努力した。その結果、シアリルオリゴ糖が退行性神経疾患モデルマウスでＰＧＣ－１α発現とミトコンドリアの機能を増加を誘発して退行性神経疾患に従う行動の向上を誘発し、ＰＧＣ－１α発現減少とミトコンドリア機能低下による退行性神経疾患、筋肉損失及びこれに従う疾患、心血管疾患、老化及び老化に起因した疾病の予防または治療できることを確認した。
本発明に従う組成物は、各疾病モデルに使われた動物で毒性を表さないだけでなく、多様な脳疾患（ＡＤ、ＰＤ、ＨＤなど）、脳卒中、老化促進、皮膚実験動物モデル試験群、及び正常動物試験群に注入させた場合、脳と海馬を含んだ多様な臓器でミトコンドリアの機能と関連したＰＧＣ－１αと、その他の関連遺伝子（Ｆｎｄｃ５（Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ ｔｙｐｅ ＩＩＩ ｄｏｍａｉｎ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ５）、Ｅｒｒａ（ｅｓｔｒｏｇｅｎ－ｒｅｌａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｌｐｈａ，ＵＣＰ－１（ｕｎｃｏｕｐｌｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ １）、ＢＤＮＦ（ｂｒａｉｎ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ），ＳＯＤ２（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕｔａｓｅ ２）、ＧＰＸ１（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ １））の発現を対照群と比較して、より顕著に増加させると共に、各種の脳疾患（ＡＤ、ＰＤ、ＨＤなど）の基本行動テストでも向上した行動を見せて、ＰＧＣ－１α関連退行性神経疾患、代謝性疾患、局所脂肪除去及び脂質代謝関連疾患、老化及び老化に起因した疾病、筋肉減少（サルコペニア、悪液質）及び筋肉減少に起因した疾病を含む病態、障害、及び／又は疾患の予防または治療用薬学的組成物に有用に使用できる。
図１ａは、正常ネズミモデルでの６’－ＳＬ（ｓｉａｌｙｌｌａｃｔｏａｓｅ）組成物処理による臓器の遺伝子発現変化を示す図である。 図１ｂは、正常ネズミモデルでの６’－ＳＬ（ｓｉａｌｙｌｌａｃｔｏａｓｅ）組成物処理による骨格筋の遺伝子発現変化を示す図である。 図１ｃは、正常ネズミモデルでの６’－ＳＬ（ｓｉａｌｙｌｌａｃｔｏａｓｅ）組成物処理による腹部脂肪の遺伝子発現変化を示す図である。 図１ｄは、正常ネズミモデルでの３’－ＳＬ組成物処理による臓器の遺伝子発現変化を示す図である。 図１ｅは、正常ネズミモデルでの３’－ＳＬ組成物処理による骨格筋の遺伝子発現変化を示す図である。 図１ｆは、正常ネズミモデルでの３’－ＳＬ組成物処理による腹部脂肪の遺伝子発現変化を示す図である。 図２ａは、脳と海馬でのＰＧＣ－１α’タンパク質発現変化を数値で示す図である。 図２ｂは、脳と海馬でのＰＧＣ－１α’タンパク質発現変化をウェスタンブロットで示す図である。 図３は、神経細胞でのＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による遺伝子発現変化を示す図である。 図４は、Ｃ２Ｃ１２未成熟筋肉細胞でのＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による遺伝子発現変化を示す図である。 図５ａは、各臓器での対照群対比脳あるいは海馬の相対的な遺伝子発現変化（（アルツハイマー疾患モデル）群遺伝子発現量）／（対照群遺伝子発現量）、（（アルツハイマー疾患モデル＋３’－ＳＬ）群遺伝子発現量）／（対照群遺伝子発現量）と（（アルツハイマー疾患モデル＋６’－ＳＬ）群遺伝子発現量）／（対照群遺伝子発現量）を数値で示すものである。 図５ｂは、各臓器での対照群対比脳あるいは海馬の相対的な遺伝子発現変化（（アルツハイマー疾患モデル）群遺伝子発現量）／（対照群遺伝子発現量）、（（アルツハイマー疾患モデル＋３’－ＳＬ）群遺伝子発現量）／（対照群遺伝子発現量）と（（アルツハイマー疾患モデル＋６’－ＳＬ）群遺伝子発現量）／（対照群遺伝子発現量）を数値で示すものである。 図６は、対照群、（アルツハイマー疾患モデル）群、（アルツハイマー疾患モデル＋３’－ＳＬ）、そして（アルツハイマー疾患モデル＋６’－ＳＬ）群に対して認知能力テスト（Ｍｏｒｒｉｓ ｗａｔｅｒ ｍａｚｅ）実験を７日間して認知能力テストでの脱出時間を数値で示すものである。 図７ａは、パーキンソンモデルでのＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による遺伝子発現変化を示す図である。 図７ｂは、パーキンソンモデルでのＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による遺伝子発現変化を示す図である。 図８は、パーキンソン病動物モデルに対する行動実験結果を示す図である。 図９ａは、癲癇／痙攣脳疾患モデルでのＳＬ組成物処理による遺伝子発現変化を示す図である。 図９ｂは、癲癇／痙攣脳疾患モデルでのＳＬ組成物処理による遺伝子発現変化を示す図である。 図１０ａは、ハンチントンモデルでのＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による遺伝子発現変化を示す図である。 図１０ｂは、ハンチントンモデルでのＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による遺伝子発現変化を示す図である。 図１１は、ハンチントン疾患モデルに対するロータロッド走行実験の結果を示す図である。 図１２は、虚血モデルでの虚血体積を観察した結果を示す図である。 図１３は、ＩＣＨ誘導後、ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）処理によるＭＬＰＴ試験点数変化を示す図である。 図１４は、ネズミモデルでのＳＬ組成物処理による遺伝子発現変化を示す図である。 図１５は、ネズミモデルでのＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物を局所投与した場合、皮下脂肪減少効果を示す図である。 図１６ａは、老化促進モデルでのＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による遺伝子発現変化を示す図である。 図１６ｂは、老化促進モデルでのＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による遺伝子発現変化を示す図である。 図１７ａは、細胞内Ｈ２Ｏ２測定（ＲＯＳ数値）の結果を示す図である。 図１７ｂは、ミトコンドリアの超酸化物（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ）生産測定を示す図である。 図１８ａは、ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物投与によるテロメラーゼ活動性を測定した結果を示す。 図１８ｂは、ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物投与によるテロメラーゼ活動性を測定した結果を示す。 図１９ａは、細胞内Ｈ２Ｏ２測定（ＲＯＳ数値）の結果を示す図である。 図１９ｂは、ミトコンドリアの超酸化物（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ）生産測定の結果を示す図である。 図２０ａは、ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）を動脈硬化症モデル（ＡｐｏＥ－／－）に処理してテロメラーゼ活動性を分析した結果を示す図である。 図２０ｂは、ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）をＭＡＳＭｓに処理してテロメラーゼ活動性を分析した結果を示す図である。 図２１ａは、皮膚実験モデルでのＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による遺伝子発現変化を示す図である。 図２１ｂは、皮膚実験モデルでのＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による遺伝子発現変化を示す図である。 図２２ａは、分化された脂肪細胞で６’－シアリルラクトースが投与された場合、細胞内脂肪の変化を示す図である。 図２２ｂは、分化された脂肪細胞で３’－シアリルラクトースが投与された場合、細胞内脂肪の変化を示す図である。 図２３ａは、分化された脂肪細胞で６’－シアリルラクトースが投与された場合、細胞内脂肪の変化を示す細胞の光学顕微鏡写真である。 図２３ｂは、分化された脂肪細胞で３’－シアリルラクトースが投与された場合、細胞内脂肪の変化を示す細胞の光学顕微鏡写真である。 図２４は、分化された脂肪細胞で細胞の生存率に及ぼす６’－シアリルラクトースの影響を示す図である。 図２５は、分化された脂肪細胞でシアリルラクトースによるグリセロール（ｇｌｙｃｅｒｏｌ）分泌の変化を示す図である。 図２６ａは、シアリルラクトース皮下注射による高脂肪食餌マウスの皮膚変化を示す図である。 図２６ｂは、シアリルラクトース皮下注射による高脂肪食餌マウスの皮膚変化を示す図である。
本発明の組成物において、有効成分は一般式Ｉの化合物、その塩、水和物、または溶媒和物である。一般式Ｉで、Ｓはシアル酸を示す。シアル酸は多様な方式により（ＭＳ）ｐに結合されていることができるが、α２、３結合またはα２、６結合により単糖類化合物（ＭＳ）ｐに結合される。Ｓにはシアル酸の以外に、変形された（ｍｏｄｉｆｉｅｄ）シアル酸が位置することができる。例えば、シアル酸の４番炭素にある－ＯＨ基のうち、ＨＨが異なる置換基またはＯＨが異なる置換基に置換されたものがＳに位置することができる。前記置換は（例えば、ＨがＣ１－Ｃ４アルキル基）に置換されたものでありうる。前記Ｃ１－Ｃ４アルキル基はメチル、エチル、プロピル、またはブチルでありうる。最も好ましくは、変形されないシアル酸がＳに位置する。
（ＭＳ）ｐ及び（ＭＳ）ｑに該当する単糖類化合物は当業界に公知された如何なる単糖類化合物も該当することができ、例えば、四炭糖（例えば、エリトロース及びトレオース）、五炭糖（例えば、リボース、アラビノース、キシロース、及びリソース）及び六炭糖（アロース、アルトロース、グルコース、マンノース、グロース、イドース、ガラクトース及びタロース）を含む。好ましくは、（ＭＳ）ｐ及び（ＭＳ）ｑに位置する単糖類化合物は五炭糖または六炭糖であり、より好ましくは六炭糖であり、より好ましくはグルコース、マンノース、またはガラクトースであり、最も好ましくはグルコースまたはガラクトースである。（ＭＳ）ｐ及び（ＭＳ）ｑに該当する単糖類化合物はＤ－またはＬ－形態の立体異性質体になることができ、最も好ましくはＤ－形態の立体異性質体である。
（ＭＳ）ｐ及び（ＭＳ）ｑには同一または互いに異なる単糖類化合物が結合されることができ、好ましくは互いに異なる単糖類化合物が結合される。
本発明の好ましい具現例によれば、（ＭＳ）ｐはガラクトースまたはグルコースであり、（ＭＳ）ｑはグルコースまたはガラクトースであり、最も好ましくは（ＭＳ）ｐはガラクトース、（ＭＳ）ｑはグルコースである。（ＭＳ）ｐがガラクトース、（ＭＳ）ｑがグルコースの場合、二糖類化合物、ラクトースが形成される。
（ＭＳ）ｐ及び（ＭＳ）ｑに位置する単糖類化合物は変形されるか、または変形されないものである。例えば、変形された単糖類化合物の場合、－ＯＨ基のうち、Ｈがアセチル基、または－ＯＨがＮ－アセチル基に置換できる。好ましくは、（ＭＳ）ｐ及び（ＭＳ）ｑに位置する単糖類化合物は変形されない単糖類化合物である。
本発明の好ましい具現例によれば、有効成分に用いられる一般式Ｉの化合物はシアリルラクトースである。本発明で有効成分に用いられるシアリルラクトースは、シアル酸にガラクトースとグルコースが順次に結合されてなされた化合物である。
シアル酸は多様な方式によりガラクトースに結合されていることができ、例えばα２、３またはα２、６結合により結合される。シアル酸は変形されることができ、例えば、シアル酸の４番炭素にある－ＯＨ基のうち、Ｈが異なる置換基またはＯＨが異なる置換基に置換されたものがＳに位置することができる。前記置換は（例えば、ＨがＣ１－Ｃ４アルキル基に置換）されたものでありうる。前記Ｃ１－Ｃ４アルキル基はメチル、エチル、プロピル、またはブチルでありうる。
シアリルラクトースにあるガラクトースとグルコースはＤ－またはＬ－形態の立体異性質体を有することができ、最も好ましくはＤ－形態の立体異性質体である。シアリルラクトースにあるガラクトースとグルコースは変形されるか、または変形されないものである。例えば、変形された単糖類化合物の場合、－ＯＨ基のうち、Ｈがアセチル基またはＯＨがＮ－アセチル基に置換できる。好ましくは、シアリルラクトースにあるガラクトースとグルコースは変形されない単糖類化合物である。
本発明の好ましい具現例によれば、本発明で有効成分に用いられるシアリルラクトースは、α－ＮｅｕＮＡｃ－（２→３）－β－Ｄ－Ｇａｌ－（１→４）－Ｄ－Ｇｌｃまたはα－ＮｅｕＮＡｃ－（２→６）－β－Ｄ－Ｇａｌ－（１→４）－Ｄ－Ｇｌｃである［ＮｅｕＮＡｃ： Ｎ－Ａｃｅｔｙｌｎｅｕｒａｍｉｎｙｌ， Ｇａｌ：Ｇａｌａｃｔｏｓｅ， Ｇｌｃ： Ｇｌｕｃｏｓｅ］。α－ＮｅｕＮＡｃ－（２→３）－β－Ｄ－Ｇａｌ－（１→４）－Ｄ－ＧｌｃはＧＭ３ガングリオシドで発見される物質であり、α－ＮｅｕＮＡｃ－（２→６）－β－Ｄ－Ｇａｌ－（１→４）－Ｄ－Ｇｌｃは前記物質の異性質体である。
より好ましくは、本発明で有効成分に用いられるシアリルラクトースは、α－ＮｅｕＮＡｃ－（２→６）－β－Ｄ－Ｇａｌ－（１→４）－Ｄ－Ｇｌｃである。下記の実施形態で立証したように、α－ＮｅｕＮＡｃ－（２→６）－β－Ｄ－Ｇａｌ－（１→４）－Ｄ－Ｇｌｃはα－ＮｅｕＮＡｃ－（２→３）－β－Ｄ－Ｇａｌ－（１→４）－Ｄ－Ｇｌｃより効能が優れる。
本発明の組成物で有効成分に用いられるものは前記化合物自体だけでなく、その薬剤学的に許容可能な塩、水和物、または溶媒和物である。
用語、“薬剤学的に許容可能な塩”は所望の薬理学的効果、即ちＰＧＣ－１αの発現とミトコンドリアの機能を増加させる前記化合物の塩を示す。このような塩はハイドロクロライド、ハイドロブロマイド、及びハイドロヨウダイドのような無機酸、アセテート、アジペート、アルギネート、ベンゾエート、ベンゼンスルホネート、ｐ－トルエンスルホネート、ビスルフェート、スルファメート、サルフェート、ナフチレート、ブチレート、シトレート、カンホレート、カンホスルホネート、シクロペンタンプロピオネート、ジグルコンート、ドデシルサルフェート、エタンスルホネート、フマレート、グルコヘプタノエート、グリセロホスフェート、ヘミサルフェート、ヘプタノエート、ヘキサノエート、２－ヒドロキシエタンサルフェート、ラクテート、マレエート、メタンスルホネート、２－ナフタレンスルホネート、ニコチエート、オキサレート、トシレート、及びウンデカノエートのような有機酸を用いて形成される。
用語、“薬剤学的に許容可能な水和物”は所望の薬理学的効果を有する前記化合物の水和物を示す。用語、“薬剤学的に許容可能な溶媒和物”は所望の薬理学的効果を有する前記化合物の溶媒和物を示す。前記水和物及び溶媒和物も前記した酸を用いて製造できる。
前述した一般式Ｉの化合物、その薬剤学的に許容可能な塩、水和物、または溶媒和物を有効成分に含む本発明の組成物はＰＧＣ－１αの発現とミトコンドリアの機能増加をもたらし、究極的に退行性神経疾患、心血管疾患、老化の予防、または治療活性を示す。
本明細書で使われる用語“退行性神経疾患（ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ Ｄｉｓｅａｓｅ）”は脳と脊髄の特定脳細胞群が徐々にその機能を失って脳細胞の数が減少する疾患を総称する。脳と脊髄の神経細胞はその位置によって非常に多様な機能をしているので、どの部位の神経細胞が先に損傷され機能を失せていくのかによって、またこのような機能障害がどんな形態に進行されるかによって非常に多様な臨床様相を見せるようになる。
本発明の一実施形態において、本発明の退行性神経疾患はアルツハイマー疾病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ（ＡＤ））、筋萎縮性側索硬化症（ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ ｌａｔｅｒａｌ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ（ＡＬＳ）、ルーゲーリック病（Ｌｏｕ Ｇｅｈｒｉｇ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ））、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（Ｄｕｃｈｅｎｎｅ ｍｕｓｃｕｌａｒ ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）、パーキンソン病（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ（ＰＤ））、ハンチントン病（Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ（ＨＤ））、ピック病（Ｐｉｃｋ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、クーフス病（Ｋｕｆ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、モール－トラネブヤルグ症候群（Ｍｏｈｒ－Ｔｒａｎｅｂｊａｅｒｇ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ウィルソン病（Ｗｉｌｓｏｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、散発性アルツハイマー病（ｓｐｏｒａｄｉｃ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、散発性筋萎縮性側状硬化症（ｓｐｏｒａｄｉｃ ａｔｒｏｐｈｉｃ ｌａｔｅｒａｌ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、散発性パーキンソン病（ｓｐｏｒａｄｉｃ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、自律機能変化（ａｕｔｏｎｏｍｉｃ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｃｈａｎｇｅ）、睡眠障害（ｓｌｅｅｐ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、神経精神病学的障害（ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、憂欝（ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ）、精神分裂症（ｓｃｈｉｚｏｐｈｒｅｎｉａ）、分裂情動障害（ｓｃｈｉｚｏａｆｆｅｃｔｉｖｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、コルサコフ精神症（Ｋｏｒｓａｋｏｖ’ｓ ｐｓｙｃｈｏｓｉｓ）、躁症（ｍａｎｉａ）、不安障害（ａｎｘｉｅｔｙ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、恐怖障害（ｐｈｏｂｉｃ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、学習または記憶障害（ｌｅａｒｎｉｎｇ ｏｒ ｍｅｍｏｒｙ ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ）、記憶喪失症または年齢関連記憶損失（ａｍｎｅｓｉａ ｏｒ ａｇｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ｍｅｍｏｒｙ ｌｏｓｓ）、注意力欠乏障害（ａｔｔｅｎｔｉｏｎ ｄｅｆｉｃｉｔ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、気分低下障害（ｍｏｏｄ ｄｅｐｒｅｓｓｉｖｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、主要憂欝障害（ｍａｊｏｒ ｄｅｐｒｅｓｓｉｖｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、強迫人格障害（ａｎａｎｋａｓｔｉｃ ｐｅｒｓｏｎａｌｉｔｙ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、精神活性物質使用による障害（ｐｓｙｃｈｏａｃｔｉｖｅ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ ｕｓｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、恐慌障害（ｐａｎｉｃ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、両極性情動障害（ｂｉｐｏｌａｒ ａｆｆｅｃｔｉｖｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、偏頭痛（ｍｉｇｒａｉｎｅ）、過剰行動障害（ｈｙｐｅｒａｃｔｉｖｉｔｙ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、及び運動障害（ｄｙｓｋｉｎｅｓｉａ）で構成された群から選択されるいずれか１つである。
より具体的に例を挙げると、本発明の退行性神経疾患は急性（ａｃｕｔｅ）、亜急性（ｓｕｂａｃｕｔｅ）、または慢性（ｃｈｒｏｎｉｃ）神経変性疾患（ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅｓ）を含む。
本発明の急性神経変性疾患は、脳卒中（ｓｔｒｏｋｅ）、脳硬塞（ｃｅｒｅｂｒａｌ ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ）、脳出血（ｃｅｒｅｂｒａｌ ｈｅｍｏｒｒｈａｇｅ）、頭部損傷（ｈｅａｄ ｉｎｊｕｒｙ）、または脊髄損傷（ｓｐｉｎａｌ ｃｏｒｄ ｉｎｊｕｒｙ）を含み、前記亜急性神経変性疾患は脱髓鞘性疾患（ｄｅｍｙｅｌｉｎａｔｉｎｇ ｄｉｓｅａｓｅｓ）、神経系副腫瘍症候群（ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃ ｐａｒａｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、亜急性連合変性（ｓｕｂａｃｕｔｅ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）、亜急性怪死性脳炎（ｓｕｂａｃｕｔｅ ｎｅｃｒｏｔｉｚｉｎｇ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ）、または亜急性硬化性汎脳炎（ｓｕｂａｃｕｔｅ ｓｃｌｅｒｏｓｉｎｇ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ）を含む。本発明の慢性神経変性疾患は、老人性痴呆（ｓｅｎｉｌｅ ｄｅｍｅｎｔｉａ）、血管痴呆（ｖａｓｃｕｌａｒ ｄｅｍｅｎｔｉａ）、びまん性白質疾患（ｄｉｆｆｕｓｉｖｅ ｗｈｉｔｅ ｍａｔｔｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ）（ビンスワンガー疾患（Ｂｉｎｓｗａｎｇｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ））、内分泌または代謝起源痴呆（ｄｅｍｅｎｔｉａ ｏｆ ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ ｏｒ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｏｒｉｇｉｎ）、頭部外傷及びびまん性脳損傷による痴呆（ｄｅｍｅｎｔｉａ ｏｆ ｈｅａｄ ｔｒａｕｍａ ａｎｄ ｄｉｆｆｕｓｅ ｂｒａｉｎ ｄａｍａｇｅ）、拳闘家痴呆（ｄｅｍｅｎｔｉａ ｐｕｇｉｌｉｓｔｉｃａ）、及び前頭葉痴呆（ｆｒｏｎｔａｌ ｌｏｂｅ ｄｅｍｅｎｔｉａ）を含む記憶喪失症（ｍｅｍｏｒｙ ｌｏｓｓ）、アルツハイマー疾患（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、ピック疾患（Ｐｉｃｋ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、びまん性レビー小体疾患（ｄｉｆｆｕｓｅ Ｌｅｗｙ Ｂｏｄｙ ｄｉｓｅａｓｅ）、進行性核上性麻痺（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ ｓｕｐｒａｎｕｃｌｅａｒ ｐａｌｓｙ）（スティール－リチャードソン症候群（Ｓｔｅｅｌ－Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅ））、多系統萎縮症（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｙｓｔｅｍ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）、神経変性と関連した慢性癲癇状態（ｃｈｒｏｎｉｃ ｅｐｉｌｅｐｔｉｃ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）、筋萎縮性側索硬化症（ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ ｌａｔｅｒａｌ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、調和運動不能（ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ ａｔａｘｉａｓ）、皮質基底変性（ｃｏｒｔｉｃａｌ ｂａｓａｌ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）、ＡＬＳ－パーキンソン－痴呆複合症（ＡＬＳ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ－Ｄｅｍｅｎｔｉａ ｃｏｍｐｌｅｘ ｏｆ Ｇｕａｍ）、亜急性硬化汎脳炎（ｓｕｂａｃｕｔｅ ｓｃｌｅｒｏｓｉｎｇ ｐａｎｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ）、ハンチントン疾患（Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、パーキンソン疾患（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、シヌクレイノパチー（ｓｙｎｕｃｌｅｉｎｏｐａｔｈｉｅｓ）、一次進行性失語症（ｐｒｉｍａｒｙ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ ａｐｈａｓｉａ）、線条体黒質変性（ｓｔｒｉａｔｏｎｉｇｒａｌ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）、マチャド－ジョセフ疾患／脊髄小脳性失調症（Ｍａｃｈａｄｏ－Ｊｏｓｅｐｈ ｄｉｓｅａｓｅ／ｓｐｉｎｏｃｅｒｅｂｅｌｌａｒ ａｔａｘｉａ）、オリーブ橋変性（ｏｌｉｖｏｐｏｎｔｏｃｅｒｅｂｅｌｌａｒ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｓ）を含む運動神経細胞疾患（ｍｏｔｏｒ ｎｅｕｒｏｎ ｄｉｓｅａｓｅｓ）、ジル・ドゥ・ラ・トゥレット疾患（Ｇｉｌｌｅｓ Ｄｅ Ｌａ Ｔｏｕｒｅｔｔｅ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、延髓及び偽性延髓麻痺（ｂｕｌｂａｒ ａｎｄ ｐｓｅｕｄｏｂｕｌｂａｒ ｐａｌｓｙ）、脊髄及び脊髄延髓筋肉萎縮（ｓｐｉｎａｌ ａｎｄ ｓｐｉｎｏｂｕｌｂａｒ ｍｕｓｃｕｌａｒ ａｔｒｏｐｈｙ）（ケネディ疾患（Ｋｅｎｎｅｄｙ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ））、多発硬化症（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、原発性側索硬化症（ｐｒｉｍａｒｙ ｌａｔｅｒａｌ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、遺伝性攣縮性大麻痺（ｆａｍｉｌｉａｌ ｓｐａｓｔｉｃ ｐａｒａｐｌｅｇｉａ）、ウェルドニッヒ・ホフマン疾患（Ｗｅｒｄｎｉｇ－Ｈｏｆｆｍａｎｎ ｄｉｓｅａｓｅ）、クーゲルベルグ・ウェランダ疾患（Ｋｕｇｅｌｂｅｒｇ－Ｗｅｌａｎｄｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ）、テイ－サックス疾患（Ｔａｙ－Ｓａｃｈ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、サンドホッフ疾患（Ｓａｎｄｈｏｆｆ ｄｉｓｅａｓｅ）、遺伝性強直性疾患（ｆａｍｉｌｉａｌ ｓｐａｓｔｉｃ ｄｉｓｅａｓｅ）、ヴォールファルト・クーゲルベルク・ヴェランデル疾患（Ｗｏｈｌｆａｒｔ－Ｋｕｇｅｌｂｅｒｇ－Ｗｅｌａｎｄｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ）、強直性下半身麻痺（ｓｐａｓｔｉｃ ｐａｒａｐａｒｅｓｉｓ）、進行性多焦点白質脳症（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ ｍｕｌｔｉ－ｆｏｃａｌ ｌｅｕｋｏｅｎｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｙ）、遺伝性自律神経失調症（ｆａｍｉｌｉａｌ ｄｙｓａｕｔｏｎｏｍｉａ）（ライリー－デイ症候群（Ｒｉｌｅｙ－Ｄａｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ））、クロイツフェルト・ヤコブ（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ－Ｊａｋｏｂ）、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー疾患（Ｇｅｒｓｔｍａｎｎ－Ｓｔｒａｕｓｓｌｅｒ－Ｓｃｈｅｉｎｋｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ）、クールー病（Ｋｕｒｕ）、及び致命的遺伝性不眠症（ｆａｔａｌ ｆａｍｉｌｉａｌ ｉｎｓｏｍｎｉａ）を含むプリオン疾患（ｐｒｉｏｎ ｄｉｓｅａｓｅｓ）、または脳性麻痺を含む。
本発明の代謝性疾患（ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｄｉｓｅａｓｅｓ）、脂質代謝関連疾患（ｌｉｐｉｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ－ｒｅｌａｔｅｄ ｄｉｓｅａｓｅｓ）、老化及び老化に起因した疾病（ａｇｉｎｇ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅｓ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ ａｇｉｎｇ）、筋肉減少（ｍｕｓｃｌｅ ｌｏｓｓ）（サルコペニア（Ｓａｒｃｏｐｅｎｉａ）、悪液質（ｃａｃｈｅｘｉａ））及び筋肉減少に起因した疾病（ｄｉｓｅａｓｅｓ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ ｍｕｓｃｌｅ ｌｏｓｓ）には、グルコース新生に対する変化（ｃｈａｎｇｅｓ ｔｏ ｇｌｕｃｏｎｅｏｇｅｎｅｓｉｓ）、軟組織炎（ｃｅｌｌｕｌｉｔｉｓ）、女性乳房症（ｇｙｎｅｃｏｍａｓｔｉａ）、仮性女性乳房症（ｐｓｅｕｄｏｇｙｎｅｃｏｍａｓｔｉａ）、脂肪異栄養症（ｌｉｐｏａｔｒｏｐｈｙ）、老化（ａｇｉｎｇ）、光老化（ｐｈｏｔｏａｇｉｎｇ）、皮膚外傷（ｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｔｒａｕｍａｓ）、傷害の再上皮化（ｒｅｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｊｕｒｉｅｓ）、皮膚の脱水（ｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｋｉｎ）、乾躁症（ｘｅｒｏｓｉｓ）、角質化障害（ｋｅｒａｔｉｎｉｚａｔｉｏｎ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）、たこ（ｃａｌｌｏｕｓ）、硬い皮膚（ｈａｒｄ ｓｋｉｎ）、扁平苔癬（ｐｓｏｒｉａｓｉｓ）、ループスと関連した皮膚病変（ｓｋｉｎ ｌｅｓｉｏｎｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｌｕｐｕｓ）、脂漏性皮膚炎（ｓｅｂｏｒｒｈｅｉｃ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ）、老人性皮膚炎（ｓｅｎｉｌｅ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ）、ふけ（ｄａｎｄｒｕｆｆ）、乳児脂肪冠（ｃｒａｄｌｅ ｃａｐ）、脂漏（ｓｅｂｏｒｒｈｅａ）、にきびの過剰脂漏（ｈｙｐｅｒｓｅｂｏｒｒｈｅａ ｏｆ ａｃｎｅ）、日光性皮膚炎（ｓｏｌａｒ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ）、脂漏性角化症（ｓｅｂｏｒｒｈｅｉｃ ｋｅｒａｔｏｓｉｓ）、老人性角化症（ｓｅｎｉｌｅ ｋｅｒａｔｏｓｉｓ）、光線角化症（ａｃｔｉｎｉｃ ｋｅｒａｔｏｓｉｓ）、光誘導角化症（ｐｈｏｔｏｉｎｄｕｃｅｄ ｋｅｒａｔｏｓｉｓ）、毛嚢角化症（ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ ｋｅｒａｔｏｓｉｓ）、普通にきび（ａｃｎｅ）、母斑（ｎｅｖｕｓ）、繊維芽細胞の機能変化（ｃｈａｎｇｅ ｉｎ ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ）、結節筋膜炎（ｎｏｄｕｌａｒ ｆａｓｃｉｉｔｉｓ）、硬皮症（ｓｃｌｅｒｏｄｅｒｍａ）、デュピュイトラン拘縮（Ｄｕｐｕｙｔｒｅｎ’ｓ ｃｏｎｔｒａｃｔｕｒｅ）、皮脂腺の障害（Ｓｅｂａｃｅｏｕｓ ｇｌａｎｄ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、にきび薔薇症（ａｃｎｅ ｒｏｓａｃｅａ）、多形性にきび（ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ａｃｎｅ）、面疱（ｃｏｍｅｄｏｎｅｓ）、多形症（ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｏｕｓ）、薔薇症（ｒｏｓａｃｅａ）、結晶嚢性にきび（ｎｏｄｕｌｏｃｙｓｔｉｃ ａｃｎｅ）、凝塊性にきび（ｃｏｎｇｌｏｂａｔｅ ａｃｎｅ）、老人性にきび（ｓｅｎｉｌｅ ａｃｎｅ）、魚鱗癬（ｉｃｈｔｈｙｏｓｉｓ）、ダリエー病（Ｄａｒｉｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、手掌足蹠角皮症（ｋｅｒａｔｏｄｅｒｍａ ｐａｌｍｏｐｌａｎｔａｒｉｓ）、白斑病（ｌｅｕｋｏｐｌａｋｉａ）、粘膜苔癬（ｍｕｃｏｓａｌ ｌｉｃｈｅｎ）、皮膚苔癬（ｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｌｉｃｈｅｎ）、湿疹（ｅｃｚｅｍａ）、尋常性疣贅（ｃｏｍｍｏｎ ｗａｒｔｓ）、扁平疣贅（ｆｌａｔ ｗａｒｔｓ）、疣贅状表皮異型性症（ｅｐｉｄｅｒｍｏｄｙｓｐｌａｓｉａ ｖｅｒｒｕｃｉｆｏｒｍｉｓ）、口腔乳頭腫症（ｏｒａｌ ｐａｐｉｌｌｏｍａｔｏｓｉｓ）、紅斑性ループス（ｌｕｐｕｓ ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ）、水疱性疾患（ｂｕｌｌｏｕｓ ｄｉｓｅａｓｅｓ）、水疱性類天疱瘡（ｂｕｌｌｏｕｓ ｐｅｍｐｈｉｇｏｉｄ）、硬皮症（ｓｃｌｅｒｏｄｅｒｍａ）、光線角化症、色素沈着障害（ｐｉｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）、白斑症（ｖｉｔｉｌｉｇｏ）、円形脱毛症（ａｌｏｐｅｃｉａ ａｒｅａｔａ）、レビー小体疾患（Ｌｅｗｙ Ｂｏｄｙ ｄｉｓｅａｓｅ）、神経繊維濃縮体（ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｒｙ ｔａｎｇｌｅｓ）、ローゼンタール線維（Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ ｆｉｂｅｒ）、マロリー硝子体（Ｍａｌｌｏｒｙ’ｓ ｈｙａｌｉｎｅ）、重症筋肉無力症（ｍｙａｓｔｈｅｎｉａ ｇｒａｖｉｓ）、ジル・ドゥ・ラ・トゥレット症候群（Ｇｉｌｌｅｓ ｄｅ ｌａ Ｔｏｕｒｅｔｔｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、多発性硬化症（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、筋萎縮性側索硬化症（ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ ｌａｔｅｒａｌ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、進行性核上性麻痺（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ ｓｕｐｒａｎｕｃｌｅａｒ ｐａｌｓｙ）、癲癇（ｅｐｉｌｅｐｓｙ）、クロイツフェルト・ヤコブ病（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ－Ｊａｋｏｂ ｄｉｓｅａｓｅ）、難聴－筋肉緊張異常症候群（ｄｅａｆｎｅｓｓ－ｄｙｓｔｏｎｉａ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ライ病（Ｌｅｉｇｈ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、レバー遺伝性視神経病症（Ｌｅｂｅｒ’ｓ ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ ｏｐｔｉｃ ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ）、筋肉緊張異常（ｄｙｓｔｏｎｉａ）、運動ニューロン疾患（ｍｏｔｏｒ ｎｅｕｒｏｎ ｄｉｓｅａｓｅ）、神経病症症候群（ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、運動失調症及び網膜色素変性症（ａｔａｘｉａ ａｎｄ ｒｅｔｉｎｉｔｉｓ ｐｉｇｍｅｎｔｏｓａ）、母系遺伝ライ病（ｍａｔｅｒｎａｌｌｙ ｉｎｈｅｒｉｔｅｄ Ｌｅｉｇｈ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、フリードリヒ運動失調症（Ｆｒｉｅｄｒｅｉｃｈ’ｓ ａｔａｘｉａ）、遺伝性強直性大麻痺（ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ ｓｐａｓｔｉｃ ｐａｒａｐｌｅｇｉａ）により形成された群から選択される。
本発明の一具現例において、本発明の組成物は溶液、懸濁液、シロップ剤、エマルジョン、リポソーム、エキス剤、散剤、粉末剤、顆粒剤、錠剤、徐放型製剤、及びカプセル剤で構成された群から選択される。
本発明の一具現例において、本発明の組成物は経口投与用組成物であり、リポソームを含んだ薬物伝達体または徐放型製剤の剤型である。
本発明の一具現例において、本発明の組成物が非経口投与用組成物である場合、リポソーム及び超音波造影剤（ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ ｃｏｎｔａｓｔ ａｇｅｎｔ）を含んだ薬物伝達体または徐放型製剤の剤型でありうる。
本発明の組成物は薬剤学的組成物、化粧品、及び機能性食品（ｎｕｔｒａｃｅｕｔｉｃａｌ）組成物、または食品組成物に製造できる。
本発明の好ましい具現例によれば、本発明の組成物は（ａ）前述した本発明の一般式Ｉの化合物の薬剤学的有効量；及び（ｂ）薬剤学的に許容される担体を含む薬剤学的組成物である。
本明細書で、用語“薬剤学的有効量”は前述した一般式Ｉの化合物の効能または活性を達成することに十分な量を意味する。
本発明の組成物が薬剤学的組成物に製造される場合、本発明の薬剤学的組成物は薬剤学的に許容される担体を含む。本発明の薬剤学的組成物に含まれる薬剤学的に許容される担体は製剤時に通常的に用いられるものであって、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、澱粉、アカシアゴム、リン酸カルシウム、アルギネート、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、メチルセルロース、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、滑石、ステアル酸マグネシウム、及びミネラルオイルなどを含むが、これに限定されるものではない。本発明の薬剤学的組成物は前記成分の以外に、潤滑剤、湿潤剤、甘味剤、香味剤、乳化剤、懸濁剤、保存剤などを追加で含むことができる。適合した薬剤学的に許容される担体及び製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９ｔｈ ｅｄ．， １９９５）に詳細に記載されている。
本発明の薬剤学的組成物は経口または非経口投与することができ、非経口投与の場合には静脈内注入、皮下注入、筋肉注入、腹腔注入、経皮投与、粘膜投与、及び点眼投与などにより投与することができる。
本発明の薬剤学的組成物の適合した投与量は、製剤化方法、投与方式、患者の年齢、体重、性、病的状態、食べ物、投与時間、投与経路、排泄速度、及び反応感応性のような要因によって多様に処方できる。好ましくは、本発明の薬剤学的組成物の投与量は成人基準に１日当たり０．０００１－１０００ｍｇ／ｋｇ（体重）であり、例えば、０．００１－８００ｍｇ／ｋｇ（体重）、または０．００１－６００ｍｇ／ｋｇ（体重）である。また、医師または薬剤師の判断によって一定時間間隔で１日１回乃至数回に分割投与することもできる。
本発明の薬剤学的組成物は当該発明が属する技術分野で通常の知識を有する者が容易に実施することができる方法によって、薬剤学的に許容される担体及び／又は賦形剤を用いて製剤化することによって、単位容量形態に製造されるか、または多容量容器内に内入させて製造できる。
本発明の好ましい具現例によれば、本発明の組成物の剤型は、溶液、懸濁液、シロップ剤、エマルジョン、リポソーム、エキス剤、散剤、粉末剤、顆粒剤、錠剤、徐放型製剤、及びカプセル剤であり、分散剤または安定化剤を追加的に含むことができる。
具体的に投与経路によって、経口投与用固体剤型には、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤、及び顆粒剤が含まれる。このような固体剤型で、活性化合物は１つ以上の不活性薬剤学的に許容される賦形剤または担体（例、ナトリウムシトレートまたはリン酸二カルシウム）及び／又はａ）充填剤または増量剤（例、澱粉、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、及びケイ酸）、ｂ）結合剤（例、カルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、及びアラビアゴム）、ｃ）保湿剤（例、グリセロール）、ｄ）崩解剤（例、寒天－寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモまたはタピオカ澱粉、アルギン酸、特定ケイ酸塩及び炭酸ナトリウム）、ｅ）液状遅延剤（例、パラフィン）、ｆ）吸収促進剤（例、四級アンモニウム化合物）、ｇ）湿潤剤（例、セチルアルコール及びグリセロールモノステアレート）、ｈ）吸収剤（例、カオリン及びベントナイト粘土）、及びｉ）潤滑剤（例、タルク、カルシウムステアレート、マグネシウムステアレート、固体ポリエチレングリコール、ナトリウムラウリルサルフェート、及びこれらの混合物）と混合できる。カプセル剤、錠剤、及び丸剤の場合に、剤型はまた緩衝剤を含むことができる。
また、ラクトースまたはミルクシュガーのような賦形剤だけでなく、高分子量のポリエチレングリコールなどを使用した軟質及び硬質ゼラチンカプセルに充填剤として使用できる。
錠剤、糖衣錠、カプセル剤、丸剤、及び顆粒剤の固体投与型は、腸溶皮及びその他の薬剤分野によく知られた被覆のような被覆物及びシェルで製造できる。これらは、任意に混濁化剤を含有することができ、またこれらが腸管の特定部位で任意に遅延された方式により活性成分のみを放出するか、または活性成分を優先的に放出するように組成できる。また、必要の場合、活性化合物は１つ以上の前記の賦形剤と微細カプセル形態に存在することができる。
経口投与用液体剤型には、薬剤学的に許容されるエマルジョン、溶剤、懸濁剤、シロップ剤、及びエリクサー剤が含まれる。活性化合物の以外に、液体剤型は水または他の溶媒、可溶化剤及び乳化剤（例、エチルアルコール、イソプロフィルアルコール、エチルカーボネート、エチルアセテート、ベンジルアルコール、ベンジルベンゾエート、プロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、オイル（特に、綿実油、ピーナッツ、とうもろこし油、胚芽油、オリーブ油、ひまし油、及び胡麻油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコール及びソルビタンの脂肪酸エステル及びこれらの混合物のように本分野によく使われる不活性希釈剤を含有することができる。不活性希釈剤の以外に、経口組成物はまた湿潤剤、乳化剤、懸濁化剤、甘味剤、風味剤、及び芳香剤のような補助剤を含有することができる。
直腸または膣内投与用剤型は、好ましくは本発明の化合物を、室温で固体であるが、体温では液体であるので、直腸または膣で溶けて活性化合物を放出する適合した非刺激性補助剤または担体（例、ココアバター、ポリエチレングリコール、または坐剤用ワックス）と混合して製造することができる坐剤である。
非経口注射のために適合した剤型は、生理学的に許容される滅菌水性または非水性溶液、分散液、懸濁液、またはエマルジョン、及び滅菌注射溶液または分散液に再構成するための滅菌粉末を含むことができる。適合した水性及び非水性担体、希釈剤、溶媒またはビヒクルの例には、水、エタノール、ポリオル（プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセロールなど）、植物性油（オリーブ油）、注射用有機エステル（例、エチルオレエート）及びこれらの適合した混合物が含まれる。
また、本発明の組成物は、保存剤、湿潤剤、乳化剤、及び分散剤のような補助剤を含有することができる。各種の抗菌剤及び抗真菌剤（例、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルブ酸など）により微生物の作用を抑制することができる。また、糖、塩化ナトリウムなどのような浸透圧調節剤を含むことが好ましいことがある。吸収遅延剤（例、アルミニウムモノステアレート及びゼラチン）を使用して注射用薬剤の吸収を遅延させることができる。
懸濁剤は活性化合物の以外に懸濁化剤（例、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール及びソルビタンエステル、微細結晶セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天－寒天及びトラガカントまたはこれらの混合物など）を含有することができる。
一部の場合に薬物の効果を持続させるために、皮下または筋肉内注射から薬物の吸収を徐々にすることが好ましいことがある。これは、水溶性の低い結晶型または非結晶型物質の液体懸濁液を使用することによって達成できる。この際、薬物の吸収速度は溶解速度に左右され、溶解速度は結晶サイズ及び結晶形態に左右される。一方、非経口投与された薬物形態の遅延された吸収は薬物をオイルビヒクル内に溶解させるか、または懸濁させることによって達成される。
注射用デポー形態は薬物の微細カプセルマトリックスをポリラクチド－ポリグリコールライドのような生体分解性重合体で形成することによって製造される。薬物対重合体の割合及び使われた特定重合体の性質によって、薬物の放出速度を調節することができる。
他の生体分解性重合体の例には、ポリ（オルトエステル）及びポリ（無水物）が含まれる。また、デポー注射用剤型は薬物を体組織適合性であるリポソームまたはマイクロエマルジョン内に捕獲させることによって製造される。
注射用剤型は、例えば、細菌－保有フィルタを通じて濾過するか、滅菌化剤を使用直前に滅菌数または他の滅菌注射用媒質中に溶解させるか、または分散できる滅菌固体組成物の形態に混入させることによって滅菌させることができる。
本発明の好ましい具現例によれば、本発明の組成物は経口投与用組成物であり、リポソームまたは徐放型製剤の剤型である。
本発明の他の好ましい具現例よれば、本発明の組成物は非経口投与用組成物であり、リポソームまたは徐放型製剤の剤型である。
本発明の薬剤学的組成物が経口投与剤型だけでなく、非経口投与（好ましくは、静脈投与）剤型に製造される場合、その剤型はリポソームまたは徐放型製剤である。
本発明の薬剤学的組成物をリポソームに内包（ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ）させて薬物伝達のための剤型の安定性を提供することができる。本発明に用いられるリポソームは、ポリオル、界面活性剤、燐脂質、脂肪酸、及び水を含む混合物により製造できる（Ｐｒｅｓｃｏｔｔ， Ｅｄ．， Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ， （ＸＩＶ），ｐ．３３ｅｔ ｓｅｑ．（１９７６））。
リポソームに用いられるポリオルは特に制限されるものではなく、好ましくはプロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール、グリセリン、メチルプロパンジオール、イソプレングリコール、ペンチレングリコール、エリスリトール、キシリトール、及びソルビトールを含み、最も好ましくはプロピレングリコールである。
リポソームの製造に用いられる界面活性剤は当業界に公知されているどのようなものも使用することができ、例えば、陰イオン性界面活性剤、陽イオン性界面活性剤、陽性界面活性剤、及び非イオン性界面活性剤が使われることができ、好ましくは陰イオン性界面活性剤及び非イオン性界面活性剤が使われる。陰イオン性界面活性剤の具体的な例は、アルキルアシルグルタメート、アルキルホスフェート、アルキルラクチレート、ジアルキルホスフェート、及びトリアルキルホスフェートを含む。非イオン性界面活性剤の具体的な例は、アルコキシレイティドアルキルエーテル、アルコキシレイチドアルキルエステル、アルキルポリグリコシド、ポリグリセリルエステル、及びシュガーエステルを含む。最も好ましくは、非イオン性界面活性剤に属するポリソルベート類が用いられる。
リポソームの製造に用いられる更に他の成分である燐脂質は両側親和性脂質に用いられたものであって、天然燐脂質（例：卵黄レシチンまたは大豆レシチン、スフィンゴミエリン）及び合成燐脂質（例：ジパルミトイルホスファチジルコリンまたは水添レシチン）を含み、好ましくはレシチンである。より好ましくは、前記レシチンは大豆または卵黄から抽出した天然由来の不飽和レシチンまたは飽和レシチンである。通常的に天然由来のレシチンはホスファチジルコリンの量が２３－９５％、そしてホスファチジルエタノールアミンの量が２０％以下である。
リポソーム製造に用いられる脂肪酸は高級脂肪酸であって、好ましくはＣ１２－２２アルキルチェーンの飽和または不飽和脂肪酸であって、例えば、ラウリン酸、ミリスト酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、及びリノレン酸を含む。リポソームの製造に用いられる水は一般的に脱イオン化された蒸溜水である。
リポソームの製造は当業界に公知されている多様な方法によりなされることができるが、最も好ましくは前記成分を含む混合物を高圧ホモゲナイザーに適用して製造される。
このように製造されたリポソームシステムはいろいろな種類の難溶性物質を溶かすと共に、不安定な物質を安定化させて薬物伝達を極大化する長所を有している。
本発明の薬剤学的組成物は持続的に有効成分の有効血中濃度を維持することによって薬剤の服用回数を減らして服薬順応度を高めることができるように徐放型製剤で製造できる。
徐放型製剤は本発明の有効成分の以外に徐放化担体及びその他の補助剤を含んで製剤化される。本発明で使われる徐放化担体は当業界に公知された多様な徐放化担体を用いることができるが、好ましくは、ポリエチレンオキシドである。
また、その他の補助剤として薬剤学的分野で通常的に使われる希釈担体が含まれることができる。このような目的に使われる希釈担体の例には、ラクトース、デキストリン、澱粉、微細結晶性セルロース、リン酸一水素カルシウム、炭酸カルシウム、糖類、及び二酸化硅素などがあり、その他に流動性を増加させるためにステアリン酸亜鉛またはマグネシウムのような滑澤剤な製薬分野で使用可能な他の補助剤を含めることもできる。
本発明の薬剤学的組成物は単独に利用できるが、本技術で言及した神経疾患、心血管疾患、老化、筋肉損失に使われる通常的な有効成分を追加で含むことができ、このような場合、シナジー効果によって、より効果的な組成物に利用できる。
本発明の組成物は化粧品学的組成物の形態に製造できる。本発明の化粧品学的組成物は当業界で通常的に製造される如何なる剤型にも製造されることができ、例えば、溶液、懸濁液、乳濁液、ペースト、ゲル、クリーム、ローション、パウダー、石鹸、界面活性剤－含有クレンジング、オイル、粉末ファンデーション、乳濁液ファンデーション、ワックスファンデーション、及びスプレーなどに剤型化できるが、これに限定されるものではない。より詳しくは、柔軟化粧水、栄養化粧水、ローション、栄養クリーム、マッサージクリーム、エッセンス、アイクリーム、クレンジングクリーム、クレンジングフォーム、クレンジングウォーター、パック、スプレー、またはパウダーの剤型に製造できる。
本発明の剤型がペースト、クリーム、ローション、またはゲルの場合には、担体成分として、動物性油、植物性油、ワックス、パラフィン、澱粉、トラカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコン、ベントナイト、シリカ、タルク、または酸化亜鉛などが利用できる。
本発明の剤型がパウダーまたはスプレーの場合には、担体成分としてラクトース、タルク、シリカ、アルミニウムヒドロキシド、カルシウムシリケート、またはポリアミドパウダーが用いられることができ、特にスプレーの場合には、追加的にクロロフルオロハイドロカーボン、プロパン／ブタン、またはジメチルエーテルのような推進体を含むことができる。
本発明の剤型が溶液または乳濁液の場合には、担体成分として溶媒、溶解化剤、または乳濁化剤が用いられ、例えば水、エタノール、イソプロパノール、エチルカーボネート、エチルアセテート、ベンジルアルコール、ベンジルベンゾエート、プロピレングリコール、１，３－ブチルグリコールオイル、グリセロール脂肪族エステル、ポリエチレングリコール、またはソルビタンの脂肪酸エステルがある。
本発明の剤型が懸濁液の場合には、担体成分として、水、エタノール、またはプロピレングリコールのような液状の希釈剤、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールエステル、及びポリオキシエチレンソルビタンエステルのような懸濁剤、微結晶性セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、アガーまたはトラカントなどが利用できる。
本発明の剤型が界面－活性剤含有クレンジングの場合には、担体成分として、脂肪族アルコールサルフェート、脂肪族アルコールエーテルサルフェート、スルホスクシン酸モノエステル、イセチオネート、イミダソリニウム誘導体、メチルタウレート、サルコシネート、脂肪酸アミドエーテルサルフェート、アルキルアミドベタイン、脂肪族アルコール、脂肪酸グリセリド、脂肪酸ジエタノールアミド、植物性油、ラノリン誘導体、またはエトキシル化グリセロール脂肪酸エステルなどが利用できる。
本発明の化粧品学的組成物に含まれる成分は有効成分と担体成分の以外に、化粧品学的組成物に通常的に用いられる成分を含み、例えば抗酸化剤、安定化剤、溶解化剤、ビタミン、顔料、及び香料のような通常的な補助剤を含むことができる。
本発明の組成物が食品組成物（または、機能性食品組成物）で製造される場合、有効成分として一般式Ｉの化合物だけでなく、食品製造時に通常的に添加される成分を含み、例えば、タンパク質、炭水化物、脂肪、営養素、調味剤、及び香味剤を含む。前述した炭水化物の例は、モノサッカリド、例えば、葡萄糖、果糖など；ジサッカリド、例えばマルトース、スクロース、オリゴ糖など；及びポリサッカリド、例えばデキストリン、サイクロデキストリンなどのような通常的な糖及びキシリトール、ソルビトール、エリスリトールなどの糖アルコールである。香味剤として、天然香味剤［タウマチン、ステビア抽出物（例えば、レバウジオシドＡ、グリシルリジンなど］）及び合成香味剤（サッカリン、アスパルテームなど）を使用することができる。
例えば、本発明の食品組成物がドリンク剤に製造される場合には、本発明の一般式Ｉの化合物の以外にクエン酸、液状果糖、砂糖、葡萄糖、酢酸、リンゴ酸、果汁、杜沖抽出液、ナツメ抽出液、甘草抽出液などを追加で含めることができる。
本発明の一具現例において、本発明の組成物はリポソーム、混合リポソーム、オレオソーム、ニオソーム、エトソーム、ミリカプセル、マイクロカプセル、ナノカプセル、ナノ構造化された脂質担体、スポンジ、サイクロデキストリン、小胞（ｖｅｓｉｃｌｅ）、ミセル（ｍｉｃｅｌｌｅ）、界面活性剤の混合ミセル、界面活性剤－燐脂質混合ミセル、ミリスフェア、マイクロスフェア、ナノスフェア、リポスフェア、マイクロエマルジョン、ナノエマルジョン、ミニ粒子、ミリ粒子、マイクロ粒子、ナノ粒子、及び固体脂質ナノ粒子からなる群から選択される食品学的、化粧品学的、または薬剤学的伝達システムまたは持続放出システム内に組み込まれているものである。
本発明の一具現例において、本発明のナノカプセルはマイクロエマルジョンを含有する。
本発明の一具現例において、本発明の組成物は局所、経口、または非経口の適用により使用するためのものである。本発明の局所投与は具体的に例を挙げると、経皮投与を含む。
本発明の局所適用、具体的に例を挙げると、経皮投与はイオン泳動法、超音波泳動法、電気穿孔法、機械的圧力、浸透圧勾配、閉塞管理（ｏｃｃｌｕｓｉｖｅ ｃｕｒｅ）、微細注射法、圧力による無針注射、微細電気パッチ利用、顔面マスク利用、またはこれらの任意の組合せにより遂行されることができ、これに特別に制限されない。
本発明の一具現例において、本発明の組成物はＰＧＣ－１αの発現を増加させる。これによって、ＰＧＣ－１α減少と関連した症状または疾病を予防、改善、または治療することに用いることができる。
本発明の一具現例において、本発明の組成物は皮膚の治療及び／又は管理に使用するためのものである。より具体的に、前記皮膚の治療及び／又は管理は老化及び／又は光老化の徴候を減少、遅延、及び／又は予防するものである。
本発明の一具現例において、本発明の組成物は脂肪組織の体積を減少させることに使用するためのものである。
本発明の他の一具現例において、本発明の組成物は脂肪組織のトリグリセライド含有量を減少させることに使用するためのものである。
より具体的に例を挙げると、本発明の脂肪組織は皮下脂肪組織である。
本発明の一具現例において、本発明の皮下脂肪組織は、大腿部、胸、首の下部、首線（ｎｅｃｋｌｉｎｅ）、臀部、顔、唇、頬、まぶた、及び／又は手の皮下脂肪組織である。
本発明の更に他の具現例において、本発明の脂肪組織は脂肪塞栓症（ｆａｔ ｅｍｂｏｌｉｓｍ）により形成された脂肪組織を含んだ身体内に発生できる全ての脂肪組織である。
本発明の一具現例において、本発明の組成物は皮膚の温度を増加させることに使用するためのものである。
本発明の他の一態様によれば、本発明は本発明の他の態様に従う少なくとも１つの一般式Ｉ、許容される塩の食品、化粧品学的または薬剤学的有効量、及び少なくとも１つの食品、化粧品学的に、または薬剤学的に許容される賦形剤または補助剤を含む食品、化粧品学的または薬剤学的組成物を提供する。
本発明の一具現例によれば、本発明の一般式Ｉ、これらの混合物及び／又はその食品、化粧品学的に、または薬剤学的に許容される塩は滑石、ベントナイト、シリカ、澱粉、及びマルトデキストリンにより形成された食品学的に、化粧品学的に、または薬剤学的に許容される固体有機重合体または固体鉱物支持体上に吸着された状態で確認されるものである組成物である。
本発明の一具現例において、本発明の組成物は、クリーム、多重エマルジョン、無水組成物、水性分散液、オイル、ミルク、バルサム、フォーム、ローション、ジェル、クリームジェル、含水アルコール（ｈｙｄｒｏａｌｃｏｈｏｌｉｃ）溶液、ハイドログリコール溶液、ハイドロジェル、塗擦剤（ｌｉｎｉｍｅｎｔ）、セラ、石鹸、シャンプー、コンディショナー、セラム、軟膏、ムース、ポマード、パウダー、バー、ペンシル、スプレー、エアロゾール、カプセル、ゼラチンカプセル、軟質カプセル、硬質カプセル、錠剤、糖衣錠、顆粒、チューインガム、溶液、懸濁液、エマルジョン、シロップ、エリクサー剤、多糖類フィルム、ジェリー、及びゼラチンにより形成された群から選択される剤型に提供される。
本発明の一具現例において、本発明の組成物はアンダーアイコンシーラー、メーキャップファンデーション、メーキャップ除去ローション、メーキャップ除去ミルク、アイシャドウ、リップスティック、リップグロス、唇保護剤、及びパウダーからなる群から選択される製品内に組み込また状態で確認されるものである。
本発明の一具現例において、一般式Ｉ、これらの混合物及び／又はその食品、化粧品学的に、または薬剤学的に許容される塩は、織物、不織布、または医療装置内に組み込まれているものである。
本発明の一具現例において、本発明の織物、不織布、または医療装置は、包帯、ガーゼ、Ｔシャツ、タイツ、靴下、アンダーウェア、ガードル、手袋、おむつ、生理用ナプキン、ドレッシング、ベッドスプレッド、おしぼり（ｗｉｐｅ）、接着パッチ、非接着パッチ、閉塞パッチ、微細電気パッチ、及び顔面マスクからなる群から選択されるものである。
本発明の一具現例において、本発明の組成物はその他のＰＧＣ－１α調節剤、その他のＰＰＡＲγ調節剤、脂肪細胞のトリグリセライド含有量を減少させる製剤、脂肪細胞分化を遅延させる製剤、脂肪分解剤または脂肪分解刺激剤、抗セルライト剤、脂肪生成剤、アセチルコリン－受容体凝集抑制剤、筋肉収縮抑制剤、抗コリン性製剤、エラスターゼ阻害剤、マトリクスメタロプロテアーゼ阻害剤、メラニン合成刺激剤または抑制剤または脱色剤（ｄｅｐｉｇｍｅｎｔｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、前駆色素沈着剤（ｐｒｏｐｉｇｍｅｎｔｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、セルフ・タンニング剤、老化防止剤、ＮＯ－合成酵素阻害剤、５α－還元酵素阻害剤、リシル－ヒドロキシラーゼ及び／又はプロリル－ヒドロキシラーゼ抑制剤、抗酸化剤、フリーラジカル捕捉剤、及び／又は大気汚染に対する製剤、反応性カルボニル種捕捉剤、抗糖化剤（ａｎｔｉ－ｇｌｙｃａｔｉｏｎ ａｇｅｎｔ）、抗ヒスタミン剤、抗ウイルス剤、抗寄生虫剤、乳化剤、軟化剤（ｅｍｏｌｌｉｅｎｔ）、有機溶媒、液体推進剤、皮膚コンディショナー、湿潤剤、水分保有物質、アルファヒドロキシ酸、ベータヒドロキシ酸、保湿剤、表皮加水分解酵素、ビタミン、アミノ酸、タンパク質、色素または着色剤、染料、生体高分子、ジェル化ポリマー、増粘剤、界面活性剤、柔軟剤、乳化剤、結合剤、防腐剤、シワ防止剤、目の下の弛んだ肉を減少または治療することができる製剤、皮膚剥離剤（ｅｘｆｏｌｉａｔｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、角質剥離剤（ｄｅｓｑｕａｍａｔｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、角質溶解剤（ｋｅｒａｔｏｌｙｔｉｃ ａｇｅｎｔ）、抗菌剤、抗真菌剤、静真菌剤（ｆｕｎｇｉｓｔａｔｉｃ ａｇｅｎｔ）、殺菌剤、静菌剤（ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃ ａｇｅｎｔ）、真皮または刺激剤、エラスチン合成刺激剤、デコリン合成刺激剤、ラミニン合成刺激剤、デフェンシン合成刺激剤、シャペロン合成刺激剤、ｃＡＭＰ合成刺激剤、熱衝撃タンパク質、ＨＳＰ７０合成刺激剤、熱衝撃タンパク質合成刺激剤、アクアポリン合成刺激剤、ヒアルロン酸合成刺激剤、フィブロネクチン合成刺激剤、サーチュイン（ｓｉｒｔｕｉｎ）合成刺激剤、角質層の成分及び脂質の合成刺激剤、セラミド、脂肪酸、コラーゲン分解抑制剤、エラスチン分解抑制剤、セリンプロテアーゼ阻害剤、繊維芽細胞増殖刺激剤、角質細胞増殖刺激剤、メラニン細胞増殖刺激剤、角質細胞分化刺激剤、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤、皮膚弛緩剤、グリコサミノグリカン合成刺激剤、過剰角化症防止剤、面皰溶解剤（ｃｏｍｅｄｏｌｙｔｉｃ ａｇｅｎｔ）、ＤＮＡ修復剤、ＤＮＡ保護剤、安定化剤、抗掻痒剤、敏感性皮膚の治療及び／又は管理のための製剤、ファーミング剤（ｆｉｒｍｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、再緻密化剤（ｒｅｄｅｎｓｉｆｙｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、再構造化剤、妊娠線防止剤、結合剤、皮脂生成調節剤、抗発汗剤、治癒刺激剤、治癒共補助剤（ｃｏａｄｊｕｖａｎｔ ｈｅａｌｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、再上皮化刺激剤、再上皮化共補助剤（ｃｏａｄｊｕｖａｎｔ ｒｅ－ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎ ａｇｅｎｔ）、サイトカイン成長因子、鎮静剤、抗炎症剤、痲酔剤、毛細血管循環及び／又は微細循環に作用する製剤、血管透過性抑制剤、静脈緊張剤（ｖｅｎｏｔｏｎｉｃ ａｇｅｎｔ）、細胞代謝に作用する製剤、真皮－表皮結合を改善するための製剤、毛髪成長誘導剤、または遅延剤、芳香剤、キレート化剤、植物抽出物、エッセンシャルオイル、海洋性抽出物、生物発酵工程から収得される製剤、鉱物塩（ｍｉｎｅｒａｌ ｓａｌｔ）、細胞抽出物、サンスクリーン及び紫外線Ａ及び／又はＢに対して活性を有する有機または鉱物光保護剤、またはこれらの混合物により形成された群から選択される少なくとも１つの補助剤の食品、化粧品学的または薬剤学的有効量を追加で含むものである。
本発明の一具現例において、本発明の補助剤は合成起源であるか、植物抽出物であるか、生物発酵工程から、または合成及びバイオ技術工程の組合せから由来するものである。
本発明の一具現例において、本発明の組成物は少なくとも１つの抗糖尿病剤の薬剤学的有効量を追加的にさらに含む。
本発明の一具現例において、本発明の補助剤は脂肪組織のトリグリセライド含有量を増加または減少させる製剤、脂肪細胞分化を増加または遅延させる製剤、脂肪分解剤及び／又は静脈緊張剤からなる群から選択される。
本発明の一具現例において、本発明の脂肪組織のトリグリセライド含有量を増加または減少させる製剤、脂肪細胞分化を遅延させる製剤、抗セルライト剤、脂肪分解剤、及び／又は静脈緊張剤は、ホルスコリン、カフェイン、エスシン（ｅｓｃｉｎ）、カルニチン、コエンザイムＡ、リパーゼ、グラウシン、エスクリン、ビスナジン、サルササポゲニン、コフィアアラビカ（Ｃｏｆｆｅａ ａｒａｂｉｃａ）の抽出物、コレウスフォルスコリ（Ｃｏｌｅｕｓ ｆｏｒｓｋｏｈｌｉｉ）の抽出物、アネマルヘナアスフォデロイデス（Ａｎｅｍａｒｒｈｅｎａ ａｐｓｈｏｄｅｌｏｉｄｅｓ）の抽出物、及び水、グリセリン、レシチン、カフェイン、ナド竹柏（Ｂｕｔｃｈｅｒ’ｓ ｂｒｏｏｍ；ルスクスアクレアトゥス（Ｒｕｓｃｕｓ Ａｃｕｌｅａｔｕｓ））の抽出物、マルトデキストリン、シリカ、トリエタノールアミンヨウ化水素（ｔｒｉｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ ｈｙｄｒｏｉｏｄｉｄｅ）、プロピレングリコール、アイビー（ヘデラヘリックス（Ｈｅｄｅｒａ Ｈｅｌｉｘ））の抽出物、カルニチン、エスシン、トリペプチド－１、キサンタンガム、カラギーナン（コンドルスクリスプス（Ｃｈｏｎｄｒｕｓ ｃｒｉｓｐｕｓ））及びＥＤＴＡ二ナトリウムの混合物で構成された群から選択される。
本発明の一具現例において、本発明の補助剤はファーミング剤、再緻密化剤，及び再構造化剤からなる群から選択されるものである。
本発明の一具現例において、本発明のファーミング剤、再緻密化剤、及び再構造化剤は、シュードアルテロモナス（Ｐｓｅｕｄｏａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ）発酵抽出物、トリペプチド－１０シトルリン、アセチルアルギニルトリプトフィルジフェニルグリシン、ヘキサペプチド－１０、及びシュードアルテロモナス発酵抽出物、加水分解された小麦タンパク質、加水分解された大豆タンパク質、トリペプチド－１０シトルリン、及びトリペプチド－１の混合物からなる群から選択される。
本発明の一具現例において、本発明の補助剤は妊娠線防止剤から選択される。より具体的に例を挙げると、本発明の妊娠線防止剤はセンテラアジアチカ（Ｃｅｎｔｅｌｌａ Ａｓｉａｔｉｃａ）の抽出物、ロサカニナ（Ｒｏｓａ ｃａｎｉｎａ）の抽出物、ロサモスカータ（Ｒｏｓａ ｍｏｓｃｈａｔａ）の抽出物、ロサルビギノサ（Ｒｏｓａ ｒｕｂｉｇｉｎｏｓａ）の抽出物、及び水、カプリリル／カフリルグルコシド、レシチン、グリセリン、シュードアルテロモナス発酵抽出物、アセチルトリペプチド－３０シトルリン、ペンタペプチド－１８、キサンタンガム、及びカプリリルグリコールの混合物からなる群から選択される。
本発明の一具現例において、本発明の補助剤はシワ防止剤及び老化防止剤からなる群から選択される。
本発明の一具現例において、本発明のシワ防止剤または老化防止剤は、アセチルヘキサペプチド－８、アセチルヘプタペプチド－４、アセチルオクタペプチド－３、ペンタペプチド－１８、アセチルヘキサペプチド－３０、加水分解された小麦タンパク質と加水分解された大豆タンパク質とトリペプチド－１の混合物、ジアミノプロピオノイルトリペプチド－３３、トリペプチド－１０シトルリン、シュードアルテロモナス発酵抽出物と加水分解された小麦タンパク質と加水分解された大豆タンパク質とトリペプチド－１０シトルリンとトリペプチド－１の混合物、アセチルテトラペプチド－５、アセチルトリペプチド－３０シトルリン、アセチルアルギニルトリプトフィルジフェニルグリシン、アセチルテトラペプチド－２２、ジメチルメトキシクロマノール、ジメチルメトキシクロマニルパルミテート、シュードアルテロモナス発酵抽出物、リシンＨＣｌとレシチンとトリペプチド－９シトルリンの混合物及びリシンＨＣｌとレシチンとトリペプチド１０シトルリンの混合物からなる群から選択される。
本発明の他の一態様によれば、本発明は固体相（ｓｏｌｉｄ ｐｈａｓｅ）または溶液の中で反応させるステップを含む、次の一般式Ｉで示した化合物、その食品学的に、化粧品学的に、または薬剤学的に許容される塩、またはこれらの混合物の製造方法を提供する：
一般式Ｉ：Ｓ－（ＭＳ）ｐ－（ＭＳ）ｑ
前記一般式で、Ｓはシアル酸であり、（ＭＳ）ｐ及び（ＭＳ）ｑは互いに独立的に単糖類残基である。
本発明の他の一態様によれば、本発明は有効成分として次の一般式Ｉで表示される化合物を含む体脂肪分解用組成物を提供する：
一般式Ｉ：Ｓ－（ＭＳ）ｐ－（ＭＳ）ｑ
前記一般式で、Ｓはシアル酸であり、（ＭＳ）ｐ及び（ＭＳ）ｑは互いに独立的に単糖類残基である。
本発明の一具現例において、本発明の一般式Ｉで、（ＭＳ）ｐはガラクトースであり、（ＭＳ）ｑはグルコースである。
本発明の一具現例において、本発明の一般式Ｉの化合物はシアリルラクトースである。
本発明の一具現例において、本発明のシアリルラクトースは、α－ＮｅｕＮＡｃ－（２→３）－β－Ｄ－Ｇａｌ－（１→４）－Ｄ－Ｇｌｃまたはα－ＮｅｕＮＡｃ－（２→６）－β－Ｄ－Ｇａｌ－（１→４）－Ｄ－Ｇｌｃである。
本発明の一具現例において、本発明のシアリルラクトースは、α－ＮｅｕＮＡｃ－（２→６）－β－Ｄ－Ｇａｌ－（１→４）－Ｄ－Ｇｌｃである。
本発明の一具現例において、本発明の組成物は薬剤学的組成物である。
本発明の一具現例において、本発明の組成物は溶液、懸濁液、シロップ剤、エマルジョン、リポソーム、散剤、粉末剤、顆粒剤、錠剤、徐放型製剤、及びカプセルで構成された群から選択された剤型である。
本発明の一具現例において、本発明の組成物は非経口投与用組成物であり、リポソームまたは徐放型製剤の剤型である。
本発明の一具現例において、本発明の組成物は経口投与用組成物であり、リポソームまたは徐放型製剤の剤型である。
本発明の一具現例において、本発明の組成物は機能性食品（ｎｕｔｒａｃｅｕｔｉｃａｌ）組成物または食品組成物である。
本発明の他の一態様によれば、本発明は本発明の他の一態様のうち、いずれか１つに従う組成物をこれを必要とする客体（ａｉｂｊｅｃｔ）に投与するステップ；を含む、客体でＰＧＣ－１αの発現減少と関連した疾病または症状の予防または治療方法を提供する。ＰＧＣ－１αの発現減少と関連した疾病または症状は本発明の他の一態様で説明した通りである。
本発明の一具現例において、本発明の治療方法は前記投与するステップの前に客体から分離された試料からの細胞におけるＰＧＣ－１αの発現水準を測定するステップを追加的にさらに含む。本発明のＰＧＣ－１αの発現水準測定は従来知られている方法を制限無しで用いて測定可能である。本発明の客体から分離された試料はＰＧＣ－１αを発現する細胞を含む客体から分離された試料を意味し、特別な制限はない。
本発明の一具現例において、本発明のＰＧＣ－１αの発現水準が正常対照群と比較して減少しているか否かを観察し、減少した場合、前記客体に対して前記投与するステップを遂行する。
本発明の一具現例において、本発明の正常対照群は正常な、またはＰＧＣ－１αの発現水準の減少と関連した疾患または症状を見せない客体から得られた細胞である。
本発明の一具現例において、本発明の試料は特定組織または器官から得られたものである。本発明の特定組織または器官はＰＧＣ－１αの発現水準の減少と関連した疾患または症状と関連した組織または器官を意味し、前記疾患または症状によって適切に選択できる。
本発明の一具現例において、本発明の投与は前記測定されたＰＧＣ－１αの発現水準が対照群と比較して減少した特定組織に局所的に投与することを意味する。
本発明の他の一態様によれば、本発明は本発明の他の一態様のうち、いずれか１つに従う組成物をこれを必要とする客体（ａｉｂｊｅｃｔ）に投与するステップ；を含む、客体で体脂肪を分解させる方法を提供する。
本発明の一具現例において、本発明の方法は前記投与するステップの前に客体から分離された試料からの細胞におけるＰＧＣ－１αの発現水準を測定するステップを追加的にさらに含む。本発明のＰＧＣ－１αの発現水準測定は従来知られている方法を制限無しで用いて測定可能である。本発明の客体から分離された試料はＰＧＣ－１αを発現する細胞を含む客体から分離された試料を意味し、特別な制限はない。
本発明の一具現例において、本発明のＰＧＣ－１αの発現水準が平均体重群の平均ＰＧＣ－１α発現量と比較して減少しているか否かを観察し、減少した場合、前記客体に対して前記投与するステップを遂行する。
本発明の一具現例において、本発明の平均体重群は対象客体と同一身長を有する人口の平均体重と同一な体重を有する人口の集合を意味し、平均体重群の体重を測定するための標本集団は、好ましくは客体と同一な人種、民族に属した人口でランダムに選択されることができ、少なくとも１０人以上、好ましくは５０人以上、より好ましくは１００人以上であって、これらの平均体重を測定して平均体重群の選定のための平均体重に用いることができる。また、代案に従来知られている統計数値を用いることが可能である。
本発明の一具現例において、本発明の細胞は前述した平均体重群に属した客体から得られた細胞である。
本発明の一具現例において、本発明の試料は特定組織または器官から得られたものである。本発明の特定組織または器官は平均体重群の平均体型と比較して、脂肪含有量の高い部位から適切に選択可能である。
本発明の一具現例において、本発明の投与は前記測定されたＰＧＣ－１αの発現水準が対照群と比較して減少した特定組織に局所的に投与することを意味する。
以下、実施形態を通じて本発明をより詳細に説明しようとする。これら実施形態は本発明をより具体的に説明するためのものであって、本発明の要旨に従って本発明の範囲がこれら実施形態により制限されないということは当業界で通常の知識を有する者において自明である。
実施形態１．正常ネズミモデルでのＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による遺伝子発現促進評価
ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）投与前対比臓器別の相対的な遺伝子発現変化を見るために、４週齢のＣ５７ＢＬ／６マウスをＤｏｏｙｅｕｌ ｂｉｏｔｅｃｈ（大韓民国）から購入した。水は自由に供給してくれて、市販中のペレット餌（Ｄｏｏｙｅｕｌ ｂｉｏｔｅｃｈ、大韓民国）を２週間の間供給した。６週齢でマウス（初期体重平均２１．４±１．１ｇ）を次の通り３個の群（各群は８匹のマウスで構成される）にランダムに分けて、１０週の間これら食餌を維持した（全体２４匹動物）：
－対照群：正常食餌マウス群
－３’－ＳＬ投与群：正常食餌群に加えて３’－シアリルラクトース（３’－ＳＬ、Ｓｉｇｍａ）を別途に投与（マウス重さｋｇ当たり１日当たり０．１ｍｇ経口投与）
－６’－ＳＬ投与群：正常食餌群に加えて６’－シアリルラクトース（６’－ＳＬ、Ｓｉｇｍａ）を別途に投与（マウス重さｋｇ当たり１日当たり０．１ｍｇ経口投与）。
シアリルラクトースまたは蒸溜水（Ｄｅｉｏｎｉｚｅｄ Ｗａｔｅｒ）を毎日経口投与方式により投与した。マウスを１０週の間動物室に保管し、１２時間絶食した後、犠牲させた。食餌摂取量及び体重変化量は各々５日毎に測定した。３’－シアリルラクトース（３’－Ｎ－Ａｃｅｔｙｌｎｅｕｒａｍｉｎｙｌ－Ｄ－ｌａｃｔｏｓｅ， ３’－Ｓｉａｌｙｌ－Ｄ－ｌａｃｔｏｓｅまたはα－ＮｅｕＮＡｃ－（２→３）－β－Ｄ－Ｇａｌ－（１→４）－ＤＧｌｃ）または６’－シアリルラクトース（６’－Ｎ－Ａｃｅｔｙｌｎｅｕｒａｍｉｎｙｌ－ｌａｃｔｏｓｅ， ６’－Ｓｉａｌｙｌ－Ｄ－ｌａｃｔｏｓｅまたはα－ＮｅｕＮＡｃ－（２→６）－β－Ｄ－Ｇａｌ－（１→４）－Ｄ－Ｇｌｃ）はＳｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈから購入した。
前記のようなＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物投与による遺伝子発現変化を、８種類の主要臓器（心臓、海馬、脳、脊髄、肺、肝、脾臓、及び腎臓）と３種類の骨格筋、そして腹部脂肪などで定量比較した。トリゾール試薬（ＴＲＩｚｏｌ ａｇｅｎｔ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）でＲＮＡを抽出した。前記で抽出して定量したＲＮＡと逆転写システム（Ｐｒｏｍｅｇａ、米国）を用いてｃＤＮＡを合成した。合成されたｃＤＮＡ及び分析対象（Ｆｎｄｃ５、ＰＧＣ－１α、Ｅｒｒａ、ＵＣＰ１、ＳＯＤ２、及びＧＰＸ１）に対し、予めデザインされたプライマーとプローブ（Ａｐｐｌｉｅｄ ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ； ＰＧＣ－１α、 Ｍｍ００４４７１８１＿ｍ１、ＧＡＰＤＨ、及びＭｍ９９９９９９１５＿ｑ１）を用いてＰＧＣ－１αの発現様相を測定した。ＰＣＲ反応と分析はローター－遺伝子３０００システム（Ｒｏｔｏｒ－Ｇｅｎｅ ３０００ ｓｙｓｔｅｍ）（Ｃｏｒｂｅｔｔ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、シドニー、オーストラリア）を用い、その結果を図１に示した。
図１で、ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）投与前対比臓器別の相対的な遺伝子発現変化は各臓器で（ＳＬ投与群遺伝子発現量）／（対照群遺伝子発現量）を数値で示したものである。６’－ＳＬの場合、大部分の臓器（図１ａ）、骨格筋（図１ｂ）、そして腹部脂肪（図１ｃ）から分かるように、いろいろな身体部位で６’－ＳＬ投与群は陰性対照群に比べてＰＧＣ－１αを含んだいろいろな分析対象（Ｆｎｄｃ５、ＰＧＣ－１α、Ｅｒｒａ、及びＵＣＰ１）の発現程度が非常に高かった。即ち、６’－ＳＬが正常ネズミのいろいろな臓器、筋肉と脂肪でＰＧＣ－１αと関連した遺伝子の発現を促進させることを確認することができた。３’－ＳＬの場合、大部分の臓器（図１ｄ）、骨格筋（図１ｅ）、そして腹部脂肪（図１ｆ）から分かるように、いろいろな身体部位で３’－ＳＬ投与群は陰性対照群に比べていろいろな分析対象の発現程度が若干増加することはしたが、６’－ＳＬに比べてその効果が少なかった。
図１ａ、図１ｂ、及び図１ｃは、正常ネズミモデルでの６’－ＳＬ組成物処理による臓器（図１ａ）、骨格筋（図１ｂ）、及び腹部脂肪（図１ｃ）の遺伝子発現変化を示す図である。図１ｄ、図１ｅ、及び図１ｆは、正常ネズミモデルでの３’－ＳＬ組成物処理による臓器（図１ｄ）、骨格筋（図１ｅ）、及び腹部脂肪（図１ｆ）の遺伝子発現変化を示す図である。図１ａ乃至図１ｆで、縦軸は対照群対比相対的な遺伝子発現比を示す。
実施形態２．老齢ネズミモデルの脳と海馬でのＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理によるＰＧＣ－１αタンパク質発現促進評価
ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）投与前対比脳での相対的なタンパク質発現を見るために、４週齢のＩＣＲマウスを中央実験動物（大韓民国）から購入した。水は自由に供給してくれて、市販中のペレット餌（Ｄｏｏｙｅｕｌ ｂｉｏｔｅｃｈ、大韓民国）を２週間の間供給した。６週齢でマウス（初期体重平均２０．３±１．５ｇ）を次の通り３個の群（各群は８匹のマウスで構成される）にランダムに分けて、４２週の間これら食餌を維持した（全体２４匹動物）：
－対照群：正常食餌マウス群
－３’－ＳＬ投与群：正常食餌群に３’－シアリルラクトース（３’－ＳＬ、Ｓｉｇｍａ）処理（ネズミ重さｋｇ当たり１日当たり０．１ｍｇ経口投与）
－６’－ＳＬ投与群：正常食餌群に６’－シアリルラクトース（６’－ＳＬ、Ｓｉｇｍａ）処理（ネズミ重さｋｇ当たり１日当たり０．１ｍｇ経口投与）
シアリルラクトースまたはＤＷを毎日経口投与方式により投与した。マウスを４２週の間動物室に保管し、１２時間絶食した後、犠牲させた。食餌摂取量及び体重変化量は各々５日毎測定した。３’－シアリルラクトース（３’－Ｎ－Ａｃｅｔｙｌｎｅｕｒａｍｉｎｙｌ－Ｄ－ｌａｃｔｏｓｅ， ３’－Ｓｉａｌｙｌ－Ｄ－ｌａｃｔｏｓｅまたはα－ＮｅｕＮＡｃ－（２→３）－β－Ｄ－Ｇａｌ－（１→４）－ＤＧｌｃ）または６’－シアリルラクトース（６’－Ｎ－Ａｃｅｔｙｌｎｅｕｒａｍｉｎｙｌ－ｌａｃｔｏｓｅ， ６’－Ｓｉａｌｙｌ－Ｄ－ｌａｃｔｏｓｅまたはα－ＮｅｕＮＡｃ－（２→６）－β－Ｄ－Ｇａｌ－（１→４）－Ｄ－Ｇｌｃ）は、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈから購入した。
図２は、脳と海馬でのＰＧＣ－１αタンパク質発現変化を数値（図２ａ）とウェスタンブロット（図２ｂ）で示す図である。図２ｂで、ＢＢ１ ６’は６’－ＳＬである。各部位で，‘ＰＧＣ－１αタンパク質発現量’と‘ＧＡＰＤＨタンパク質発現量’を定量して、その値の相対的な比（ＰＧＣ－１αタンパク質発現量）／（ＧＡＰＤＨタンパク質発現量）を対照群、３’－ＳＬ投与群、６’－ＳＬ投与群に対して数値で示した。脳と海馬両方ともで６’－ＳＬ投与群は陰性対照群に比べてＰＧＣ－１α発現程度が非常に高かった。即ち、６’－ＳＬが正常ネズミの脳のいろいろな部分でＰＧＣ－１αタンパク質の発現を促進させることを確認することができた。
図２は、老化ネズミモデルでのＳＬ組成物投与による脳と海馬部分のＰＧＣ－１αタンパク質発現変化を示す。生後６週の雄ＩＣＲマウスに群当たり８匹にして対照群と６’－ＳＬ投与群を作って、４２週間食餌調節実験をし、マウスを犠牲にさせて脳と海馬を摘出した。脳は大脳皮質を摘出した。摘出した脳と海馬でのＰＧＣ－１αタンパク質発現変化を数値（図２ａ）とウェスタンブロット（図２ｂ）で示した。
実施形態３．神経細胞実験でのＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による遺伝子発現促進評価
ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）が神経細胞でもＰＧＣ－１α遺伝子と関連遺伝子の発現を促進する効果があるかを調べるために、次のような試験を遂行した。
ニューロブラスト（Ｎｅｕｒｏ－２ａ， Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ， ＵＳＡ）は６－ウェルプレートのウェルのうち、１０％牛胎兒血清、１００Ｕペニシリン及び０．１ｍｇ／ｍＬのストレプトミシンを含むＤＭＥＭ培地で３７℃、５％のＣＯ２／９５％大気条件で培養した。Ｎｅｕｒｏ－２ａ細胞は速く育つハツカネズミの神経芽細胞腫細胞株（ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ）である。ウェル当たり６０００個の密度でシーディング後に、Ｎｅｕｒｏ－２ａ細胞が５×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍｌ程度のコンフルエンシーを見えるウェルのうちにＳＬを０．１ｍｇ／ｍｌの濃度で添加し、同一な条件で２４時間培養した。ＳＬ（３’－ＳＬまたは６’－ＳＬ）は実施形態１に記載されたものと同一なものを使用した。以下、異に言及がなければ、ＳＬ（３’－ＳＬまたは６’－ＳＬ）及びその使用濃度は実施形態１に記載されたものと同一なものとして理解される。陰性対照群は生理食塩水を培地体積の１／１０００に処理した。各サンプルを処理した細胞を３７℃で２４時間培養した後、冷たい食塩水で２回洗浄し、トリゾール試薬（ＴＲＩｚｏｌ ａｇｅｎｔ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）でＲＮＡを抽出した。合成されたｃＤＮＡ及び分析対象（Ｆｎｄｃ５、ＰＧＣ－１α、Ｅｒｒａ、ＵＣＰ１、ＢＤＮＦ、ＳＯＤ２、及びＧＰＸ１）に対して予めデザインされたプライマー（Ｐｒｉｍｅｒ）とプローブ（ｐｒｏｂｅ）（Ａｐｐｌｉｅｄ ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ； ＰＧＣ－１α， Ｍｍ００４４７１８１＿ｍ１， ＧＡＰＤＨ及びＭｍ９９９９９９１５＿ｑ１）を用いてＰＧＣ－１αの発現様相を測定した。ＰＣＲ反応と分析はローター－遺伝子３０００システム（Ｒｏｔｏｒ－Ｇｅｎｅ ３０００ ｓｙｓｔｅｍ）（Ｃｏｒｂｅｔｔ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、シドニー、オーストラリア）を用い、その結果を図３に示した。
図３は、神経細胞でのＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による遺伝子発現変化を示す図である。図３に示すように、Ｎｅｕｒｏ－２ａ細胞にＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）を２４時間処理した投与群と処理しない対照群と比較した結果、ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）投与群は陰性対照群に比べてＰＧＣ－１αを含んだいろいろな分析対象（Ｆｎｄｃ５、ＰＧＣ－１α、Ｅｒｒａ、ＵＣＰ１、ＢＤＮＦ、ＳＯＤ２、及びＧＰＸ１）に対して留意性ある発現量増加を見せた。６’－ＳＬが神経細胞でＰＧＣ－１αと関連した遺伝子の発現を非常に促進させたものであり、３’－ＳＬは促進効果が６’－ＳＬより劣ることを確認することができた。
実施形態４．筋肉細胞実験でのＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による遺伝子発現促進評価
ＳＬが実際筋肉細胞でＰＧＣ－１α遺伝子の発現を促進する効果があるかを調べるために、次のような試験を遂行した。
Ｃ２Ｃ１２未成熟筋肉細胞をＡＴＣＣ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、米国）から購入して準備し、１０％のＦＢＳ（Ｆｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ、Ｇｉｂｃｏ、米国）が含まれたＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ、ジブコ、米国）培地で２日に１回ずつ培地を交換しながら７０％融合（ｃｏｎｆｌｕｅｎｔ）するまで３７℃、５％のＣＯ２培養器で培養した。筋肉細胞への分化は２％のＨＳ（Ｈｏｒｓｅ Ｓｅｒｕｍ、ジブコ、米国）を含んだ培地で培養して誘導した。２％のＨＳを含んだ培地で４日間培養した筋肉細胞に多様な濃度のＳＬを処理した。陰性対照群は生理食塩水を培地体積の１／１０００に処理した。各サンプルを処理した細胞を３７℃で２４時間培養した後、冷たい食塩水で２回洗浄し、トリゾール試薬（ＴＲＩｚｏｌ ａｇｅｎｔ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）でＲＮＡを抽出した。前記で抽出して定量な１μｇ／μｌのＲＮＡと逆転写システム（Ｐｒｏｍｅｇａ、米国）を用いてｃＤＮＡを合成した。
合成されたｃＤＮＡ及び分析対象（Ｆｎｄｃ５、ＰＧＣ－１α、Ｅｒｒａ、ＵＣＰ１、ＳＯＤ２、及びＧＰＸ１）に対して予めデザインされたプライマーとプローブ（Ａｐｐｌｉｅｄ ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ；ＰＧＣ－１α、Ｍｍ００４４７１８１＿ｍ１、ＧＡＰＤＨ、及びＭｍ９９９９９９１５＿ｑ１）を用いてＰＧＣ－１αの発現様相を測定した。ＰＣＲ反応と分析はローター－遺伝子３０００システム（Ｒｏｔｏｒ－Ｇｅｎｅ ３０００ ｓｙｓｔｅｍ）（Ｃｏｒｂｅｔｔ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、シドニー、オーストラリア）を用い、その結果を図４に示した。
図４は、Ｃ２Ｃ１２未成熟筋肉細胞でのＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による遺伝子発現変化を示す図である。Ｃ２Ｃ１２未成熟筋肉細胞にＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）を２４時間処理した投与群と処理しない対照群と比較した結果、図４に示すように、ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）投与群は陰性対照群に比べてＰＧＣ－１αを含んだいろいろな分析対象（Ｆｎｄｃ５、ＰＧＣ－１α、Ｅｒｒａ、ＵＣＰ１、ＢＤＮＦ、ＳＯＤ２、及びＧＰＸ１）に対して留意性ある発現量増加を見せた。６’－ＳＬがＣ２Ｃ１２未成熟筋肉細胞でＰＧＣ－１αと関連した遺伝子の発現を非常に促進させたものであり、３’－ＳＬは促進効果が６’－ＳＬより劣ることを確認することができた。
実施形態５．アルツハイマー脳疾患モデルでのＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による遺伝子発現促進評価及び認知能力テスト改善評価
アルツハイマー脳疾患モデルでのＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による遺伝子発現及び認知能力テスト変化を見るために、６週齢のマウスを中央実験動物（大韓民国）から購入した。水は自由に供給してくれて、市販中のペレット餌（Ｄｏｏｙｅｕｌ ｂｉｏｔｅｃｈ、大韓民国）を２週間の間供給した。８週齢でマウスを次の通り３個の群（各群は８匹のマウスで構成される）に分類した：生後８週雄ｃ５７／ＢＬ６マウス（正常ネズミ；初期体重平均３５．６±３．３ｇ）に正常食餌処理した群８匹を対照群にし、生後８週の雄アルツハイマー疾患モデルマウス（３ｘＴｇ；初期体重平均３３．９±２．８ｇ）に群当たり８匹で下記３個の相異する食餌処理群にランダムに分けて１０週の間これら食餌を維持した（全体３２匹動物）：
－対照群：ＳＬが投与されない正常食餌を食べた正常ネズミ（８匹）
－（アルツハイマー疾患モデル）群：ＳＬが投与されない正常食餌を食べたアルツハイマーモデル（８匹）
－（アルツハイマー疾患モデル＋３’－ＳＬ）群：正常食餌群に加えて３’－シアリルラクトース（３’－ＳＬ、Ｓｉｇｍａ）を別途に投与した（ネズミ重さｋｇ当たり１日当たり０．１ｍｇ経口投与）アルツハイマーモデル（８匹）
－（アルツハイマー疾患モデル＋６’－ＳＬ）群：正常食餌群に加えて６’－シアリルラクトース（６’－ＳＬ、Ｓｉｇｍａ）を別途に投与した（ネズミ重さｋｇ当たり１日当たり０．１ｍｇ経口投与）アルツハイマーモデル（８匹）
シアリルラクトースまたはＤＷを毎日経口投与方式により投与した。マウスを１０週の間動物室に保管し、１２時間絶食した後、犠牲させた。食餌摂取量及び体重変化量は各々５日毎測定した。３’－シアリルラクトース（３’－Ｎ－Ａｃｅｔｙｌｎｅｕｒａｍｉｎｙｌ－Ｄ－ｌａｃｔｏｓｅ， ３’－Ｓｉａｌｙｌ－Ｄ－ｌａｃｔｏｓｅまたはα－ＮｅｕＮＡｃ－（２→３）－β－Ｄ－Ｇａｌ－（１→４）－ＤＧｌｃ）または６’－シアリルラクトース（６’－Ｎ－Ａｃｅｔｙｌｎｅｕｒａｍｉｎｙｌ－ｌａｃｔｏｓｅ， ６’－Ｓｉａｌｙｌ－Ｄ－ｌａｃｔｏｓｅまたはα－ＮｅｕＮＡｃ－（２→６）－β－Ｄ－Ｇａｌ－（１→４）－Ｄ－Ｇｌｃ）はＳｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈから購入した。
ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による遺伝子発現変化を、脳疾患関連２つの主要臓器（海馬及び脳）で定量比較した。脳は大脳皮質である。トリゾール試薬（ＴＲＩｚｏｌ ａｇｅｎｔ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）でＲＮＡを抽出した。前記で抽出して定量したＲＮＡと逆転写システム（Ｐｒｏｍｅｇａ、米国）を用いてｃＤＮＡを合成した。合成されたｃＤＮＡ及び分析対象（Ｆｎｄｃ５、ＰＧＣ－１α、Ｅｒｒａ、ＵＣＰ１、ＢＤＮＦ、ＳＯＤ２、及びＧＰＸ１）に対し、予めデザインされたプライマーとプローブ（Ａｐｐｌｉｅｄ ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ；ＰＧＣ－１α、Ｍｍ００４４７１８１＿ｍ１、ＧＡＰＤＨ、及びＭｍ９９９９９９１５＿ｑ１）を用いてＰＧＣ－１αの発現様相を測定した。ＰＣＲ反応と分析はローター－遺伝子３０００システム（Ｒｏｔｏｒ－Ｇｅｎｅ ３０００ ｓｙｓｔｅｍ）（Ｃｏｒｂｅｔｔ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、シドニー、オーストラリア）を用い、その結果を図５に示した。
図５は、アルツハイマーモデルでのＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による遺伝子発現変化を示す図である。図５で、対照群対比脳あるいは海馬の相対的な遺伝子発現変化は各臓器で（（アルツハイマー疾患モデル）群遺伝子発現量）／（対照群遺伝子発現量）、（（アルツハイマー疾患モデル＋３’－ＳＬ）群遺伝子発現量）／（対照群遺伝子発現量）と（（アルツハイマー疾患モデル＋６’－ＳＬ）群遺伝子発現量）／（対照群遺伝子発現量）の数値で示したものである。生後８週の雄アルツハイマーモデル（３ｘＴｇ）マウスに群当たり８匹にしてＳＬ投与した群と投与しない群を作って、１０週間食餌調節実験して正常食餌正常ネズミ（ｃ５７／ＢＬ６）の遺伝子発現量と比較した。図５に示すように、正常食餌の正常ネズミ対照群を基準とした時、６’－ＳＬが投与された（アルツハイマー疾患モデル＋６’－ＳＬ）群は正常対照群に比べては脳（図５ａ）と海馬（図５ｂ）でＰＧＣ－１αを含んだいろいろな分析対象（Ｆｎｄｃ５、Ｅｒｒａ、ＵＣＰ１、ＢＤＮＦ、ＳＯＤ２、及びＧＰＸ１）の発現程度が若干劣るが、ＳＬが投与されない（アルツハイマー疾患モデル）群に比べて発現程度が非常に高かった。３’－ＳＬは関連遺伝子発現促進効果が６’－ＳＬに比べて相対的に劣ることが分かった。即ち、６’－ＳＬがアルツハイマー疾患モデルネズミの脳と海馬でＰＧＣ－１αと関連した遺伝子（Ｆｎｄｃ５、ＰＧＣ－１α、Ｅｒｒａ、ＵＣＰ１、ＢＤＮＦ、ＳＯＤ２、及びＧＰＸ１）に対して最も留意性ある発現量増加を見せた。
図６は、対照群、（アルツハイマー疾患モデル）群、（アルツハイマー疾患モデル＋３’－ＳＬ）、そして（アルツハイマー疾患モデル＋６’－ＳＬ）群に対して認知能力テスト（Ｍｏｒｒｉｓ ｗａｔｅｒ ｍａｚｅ）実験を７日間して認知能力テストでの脱出時間を数値で示したものである。ＳＬが投与されない（アルツハイマー疾患モデル）群は実験時間が過ぎても認知能力テスト脱出時間がほとんど改善されず、一定であることに反して、６’－ＳＬが投与された（アルツハイマー疾患モデル＋６’－ＳＬ）群はテスト脱出時間が確実に速くなり、正常食餌の正常ネズミ対照群より若干劣ることが分かる。３’－ＳＬは認知能力改善効果が６’－ＳＬに比べて相対的に劣ることが分かった。即ち、６’－ＳＬがアルツハイマー疾患モデルネズミで最もよく認知能力を改善させることを確認することができた。
実施形態６．パーキンソン脳疾患モデルでのＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による遺伝子発現促進評価及び行動実験改善評価
パーキンソン脳疾患モデルでのＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による遺伝子発現及び行動実験改善変化を見るために、１３週齢の正常ＳＤ ｒａｔ及びパーキンソン脳疾患モデルを中央実験動物（大韓民国）から購入した。水は自由に供給してくれて、市販中のペレット餌（Ｄｏｏｙｅｕｌ ｂｉｏｔｅｃｈ、大韓民国）を一週間の間供給した。１４週齢でＳＤ ｒａｔを次のように４個の群（各群は８匹で構成される）に分類した：生後１４週の雄ＳＤ ｒａｔ（正常ネズミ；初期体重平均３５５．６±３２．３ｇ）に正常食餌処理した群８匹を対照群にし、生後８週齢に６－ｈｙｄｒｏｘｙｄｏｐａｍｉｎｅ（６－ＯＨＤＡ）投与して１３週齢に供給された６－ＯＨＤＡ ｉｎｄｕｃｅｄ ＳＤ ｒａｔパーキンソン疾患モデルに群当たり８匹で下記３個の相異する食餌処理群にランダムに分けて、１４週齢（初期体重平均３６３．６±２９．８ｇ）から１０週の間、これら食餌を維持した（全体３２匹動物）：
－対照群：ＳＬが投与されない正常食餌を食べた正常ネズミ（８匹）
－（パーキンソン疾患モデル）群：ＳＬが投与されない正常食餌を食べたパーキンソンモデル（８匹）
－（パーキンソン疾患モデル＋３’－ＳＬ）群：正常食餌群に３’－シアリルラクトース（３’－ＳＬ、Ｓｉｇｍａ）処理された（ネズミ重さｋｇ当たり１日当たり０．１ｍｇ経口投与）パーキンソンモデル（８匹）
－（パーキンソン疾患モデル＋６’－ＳＬ）群：正常食餌群に６’－シアリルラクトース（６’－ＳＬ、Ｓｉｇｍａ）処理された（ネズミ重さｋｇ当たり１日当たり０．１ｍｇ経口投与）パーキンソンモデル（８匹）
シアリルラクトースまたはＤＷを毎日経口投与方式により投与した。Ｒａｔを１０週の間動物室に保管し、１２時間絶食した後、犠牲させた。食餌摂取量及び体重変化量は各々５日毎測定した。３’－シアリルラクトース（３’－Ｎ－Ａｃｅｔｙｌｎｅｕｒａｍｉｎｙｌ－Ｄ－ｌａｃｔｏｓｅ， ３’－Ｓｉａｌｙｌ－Ｄ－ｌａｃｔｏｓｅまたはα－ＮｅｕＮＡｃ－（２→３）－β－Ｄ－Ｇａｌ－（１→４）－ＤＧｌｃ）または６’－シアリルラクトース（６’－Ｎ－Ａｃｅｔｙｌｎｅｕｒａｍｉｎｙｌ－ｌａｃｔｏｓｅ， ６’－Ｓｉａｌｙｌ－Ｄ－ｌａｃｔｏｓｅまたはα－ＮｅｕＮＡｃ－（２→６）－β－Ｄ－Ｇａｌ－（１→４）－Ｄ－Ｇｌｃ）は、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈから購入した。
ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による遺伝子発現変化を、脳疾患関連の２つ主要臓器（海馬、脳）で定量比較した。トリゾール試薬（ＴＲＩｚｏｌ ａｇｅｎｔ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）でＲＮＡを抽出した。前記で抽出して定量したＲＮＡと逆転写システム（Ｐｒｏｍｅｇａ、米国）を用いてｃＤＮＡを合成した。合成されたｃＤＮＡ及び分析対象（Ｆｎｄｃ５、ＰＧＣ－１α、Ｅｒｒａ、ＵＣＰ１、ＢＤＮＦ、ＳＯＤ２、及びＧＰＸ１）に対し、予めデザインされたプライマーとプローブ（Ａｐｐｌｉｅｄ ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ；ＰＧＣ－１α、 Ｍｍ００４４７１８１＿ｍ１、ＧＡＰＤＨ、及びＭｍ９９９９９９１５＿ｑ１）を用いてＰＧＣ－１αの発現様相を測定した。ＰＣＲ反応と分析はローター－遺伝子３０００システム（Ｒｏｔｏｒ－Ｇｅｎｅ ３０００ ｓｙｓｔｅｍ）（Ｃｏｒｂｅｔｔ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、シドニー、オーストラリア）を用い、その結果を図７ａ及び図７ｂに示した。
図７ａ及び図７ｂは、パーキンソンモデルでのＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による遺伝子発現変化を示す図である。生後８週齢に６－ＯＨＤＡ投与して１３週齢に供給された６－ＯＨＤＡ ｉｎｄｕｃｅｄ ＳＤ ｒａｔパーキンソン疾患モデルに群当たり８匹にしてＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）を投与した群と投与しない群を作って８週間食餌調節実験して、生後１３週の雄ＳＤ ｒａｔ（正常ネズミ）に正常食餌処理した対照群の遺伝子発現量と比較した。図７ａ及び図７ｂで、脳あるいは海馬の正常ネズミ対比遺伝子発現変化は、各臓器で（（パーキンソン疾患モデル）群遺伝子発現量）／（対照群遺伝子発現量）、（（パーキンソン疾患モデル＋３’－ＳＬ）群遺伝子発現量）／（対照群遺伝子発現量）、そして（（パーキンソン疾患モデル＋６’－ＳＬ）群遺伝子発現量）／（対照群遺伝子発現量）の数値で示した。その結果、図７ａ及び図７ｂに示すように、正常食餌の正常ネズミ対照群を基準とした時、６’－ＳＬが投与された（パーキンソン疾患モデル＋６’－ＳＬ）群は正常対照群に比べて脳（図７ａ）と海馬（図７ｂ）でＰＧＣ－１αを含んだいろいろな分析対象（Ｆｎｄｃ５、Ｅｒｒａ、ＵＣＰ１、ＢＤＮＦ、ＳＯＤ２、及びＧＰＸ１）の発現程度が若干劣るが、ＳＬが投与されない（パーキンソンモデル）群に比べて発現程度が非常に優れた。３’－ＳＬは遺伝子発現促進効果が６’－ＳＬに比べて相対的に劣ることが分かった。即ち、６’－ＳＬがパーキンソン疾患モデルネズミの脳と海馬でＰＧＣ－１αと関連した遺伝子に対して留意性ある発現量増加を見せた。
図８は、パーキンソン病動物モデルに対する行動実験結果を示す図である。図８で、縦軸は対照群、（パーキンソン疾患モデル）群、（パーキンソン疾患モデル＋３’－ＳＬ）群、そして（パーキンソン疾患モデル＋６’－ＳＬ）群に対して垂直の鉄格子器具を用いて行動能力実験（コーナー回り＆下り）をした結果、コーナー回り時間と下り時間の数値である。垂直の鉄格子器具は５ｃｍ×５５ｃｍ×８ｃｍの開いた箱形態であり、前面は０．８ｃｍ×０．８ｃｍのワイヤーであり、残りの面は黒色のプレキシガラスであり、安全性のために底は５ｃｍ長く製作された。実験時、マウスは機器頂点から３ｃｍ離れた位置に上方に向かう方向に置かれており、試験する前に２日間３回機器に順応させた。ネズミが６０秒以内に下ることができなければ、また繰り返した。コーナー回り時間は上方に向かったネズミが下方に向かうように後ろ向きになることにかかる時間であり、下り時間はネズミがコーナーを回って底に下った全体実験時間からコーナー回り時間を引いた時間であった。
図８に示すように、正常食餌の正常ネズミ対照群に比べて、ＳＬが投与されない（パーキンソン疾患モデル）群はコーナー回り時間と下り時間が２～３倍以上長くかかったことに比べて、６’－ＳＬが投与された（パーキンソン疾患モデル＋ＳＬ）群はコーナー回り時間と下り時間が対照群にほとんど近かった。即ち、６’－ＳＬがパーキンソン疾患モデルネズミで行動能力（コーナー回りあるいは下り）を改善させることを確認することができた。３’－ＳＬは行動能力改善効果が６’－ＳＬに比べて相対的に劣ることが分かった。
実施形態７．癲癇／痙攣脳疾患モデルでのＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による遺伝子発現促進評価
癲癇／痙攣脳疾患モデルでのＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による遺伝子発現変化を見るために、生後４週齢の正常ＳＤ ｒａｔ及び癲癇／痙攣脳疾患モデル（ＮＥＲ（Ｎｏｄａ Ｅｐｉｌｅｐｔｉｃ Ｒａｔ）を中央実験動物（大韓民国）から購入した。水は自由に供給してくれて、市販中のペレット餌（Ｄｏｏｙｅｕｌ ｂｉｏｔｅｃｈ、大韓民国）を２週間の間供給した。６週齢でＳＤ ｒａｔを次の通り４個の群（各群は８匹で構成される）に分類した：生後６週の雄ＳＤ ｒａｔ（正常ネズミ；初期体重平均１７６．３±１３．３ｇ）に正常食餌処理した群８匹を対照群にし、生後６週齢の癲癇／痙攣脳疾患モデル（初期体重平均１８１．８±１１．３ｇ）に群当たり８匹で下記３個の相異する食餌処理群にランダムに分けて、６週齢から１０週の間これら食餌を維持した（全体３２匹動物）：
－対照群：ＳＬが投与されない正常食餌を食べた正常ネズミ（８匹）
－（癲癇／痙攣脳疾患モデル）群：ＳＬが投与されない正常食餌を食べた癲癇／痙攣脳疾患モデル（８匹）
－（癲癇／痙攣脳疾患モデル＋３’－ＳＬ）群：正常食餌群に３’－シアリルラクトース（３’－ＳＬ、Ｓｉｇｍａ）処理された（ネズミ重さｋｇ当たり１日当たり０．１ｍｇ経口投与）癲癇／痙攣脳疾患モデル（８匹）
－（癲癇／痙攣脳疾患モデル＋６’－ＳＬ）群：正常食餌群に６’－シアリルラクトース（６’－ＳＬ、Ｓｉｇｍａ）処理された（ネズミ重さｋｇ当たり１日当たり０．１ｍｇ経口投与）癲癇／痙攣脳疾患モデル（８匹）
シアリルラクトースまたはＤＷを毎日経口投与方式により投与した。Ｒａｔを１０週の間動物室に保管し、１２時間絶食した後、犠牲させた。食餌摂取量及び体重変化量は各々５日毎測定した。３’－シアリルラクトース（３’－Ｎ－Ａｃｅｔｙｌｎｅｕｒａｍｉｎｙｌ－Ｄ－ｌａｃｔｏｓｅ， ３’－Ｓｉａｌｙｌ－Ｄ－ｌａｃｔｏｓｅまたはα－ＮｅｕＮＡｃ－（２→３）－β－Ｄ－Ｇａｌ－（１→４）－ＤＧｌｃ）または６’－シアリルラクトース（６’－Ｎ－Ａｃｅｔｙｌｎｅｕｒａｍｉｎｙｌ－ｌａｃｔｏｓｅ， ６’－Ｓｉａｌｙｌ－Ｄ－ｌａｃｔｏｓｅまたはα－ＮｅｕＮＡｃ－（２→６）－β－Ｄ－Ｇａｌ－（１→４）－Ｄ－Ｇｌｃ）は、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈから購入した。
ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による遺伝子発現変化を、脳疾患関連２つの主要臓器（海馬、脳）で定量比較した。トリゾール試薬（ＴＲＩｚｏｌ ａｇｅｎｔ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）でＲＮＡを抽出した。前記で抽出して定量したＲＮＡと逆転写システム（Ｐｒｏｍｅｇａ、米国）を用いてｃＤＮＡを合成した。合成されたｃＤＮＡ及び分析対象（Ｆｎｄｃ５、ＰＧＣ－１α、Ｅｒｒａ、ＵＣＰ１、ＢＤＮＦ、ＳＯＤ２、及びＧＰＸ１）に対し、予めデザインされたプライマーとプローブ（Ａｐｐｌｉｅｄ ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ；ＰＧＣ－１α、Ｍｍ００４４７１８１＿ｍ１、９９９９１５＿ｑ１）を用いてＰＧＣ－１αの発現様相を測定した。ＰＣＲ反応と分析はローター－遺伝子３０００システム（Ｒｏｔｏｒ－Ｇｅｎｅ ３０００ ｓｙｓｔｅｍ）（Ｃｏｒｂｅｔｔ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、シドニー、オーストラリア）を用い、その結果を図９に示す。
図９ａ及び図９ｂは、癲癇／痙攣脳疾患モデルでのＳＬ組成物処理による遺伝子発現変化を示す図である。図９ａ及び図９ｂで、縦軸は対照群対比脳あるいは海馬の相対的な遺伝子発現変化は各臓器で（（癲癇／痙攣脳疾患モデル）群遺伝子発現量）／（対照群遺伝子発現量）、（（癲癇／痙攣脳疾患モデル＋３’－ＳＬ）と（（癲癇／痙攣脳疾患モデル＋６’－ＳＬ）群遺伝子発現量）／（対照群遺伝子発現量）の数値である。生後６週齢の癲癇／痙攣疾患モデルに群当たり８匹にしてＳＬ投与した群と投与しない群を作って１０週間食餌調節実験して、生後６週の雄ＳＤ ｒａｔ（正常ネズミ）に正常食餌処理した対照群の遺伝子発現量と比較した。その結果、図９ａ及び図９ｂに示すように、正常食餌の正常ネズミ対照群を基準とした時、ＳＬが投与された（癲癇／痙攣疾患モデル＋ＳＬ）群は正常対照群に比べては脳（図９ａ）と海馬（図９ｂ）でＰＧＣ－１αを含んだいろいろな分析対象（Ｆｎｄｃ５、Ｅｒｒａ、ＵＣＰ１、ＢＤＮＦ、ＳＯＤ２、及びＧＰＸ１）の発現程度が若干劣るが、ＳＬが投与されない（癲癇／痙攣モデル）群に比べて発現程度が非常に優れた。即ち、６’－ＳＬが癲癇／痙攣疾患モデルネズミの脳と海馬でＰＧＣ－１αと関連した遺伝子に対して留意性ある発現量増加を見せた。３’－ＳＬは、遺伝子発現促進効果が６’－ＳＬに比べて相対的に劣ることが分かった。
実施形態８．ハンチントン脳疾患モデルでのＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による遺伝子発現促進評価及びロータロッド走行時間改善評価
ハンチントン脳疾患モデルでのＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による遺伝子発現及び認知能力テスト変化を見るために、４週齢のマウスを中央実験動物（大韓民国）から購入した。水は自由に供給してくれて、市販中のペレット餌（Ｄｏｏｙｅｕｌ ｂｉｏｔｅｃｈ、大韓民国）を一週間の間供給した。５週齢でマウスを次の通り３個の群（各群は８匹のマウスで構成される）に分類した：生後５週の雄ｃ５７／ＢＬ６マウス（正常ネズミ；初期体重平均２５．３±４．３ｇ）に正常食餌処理した群８匹を対照群とし、生後５週の雄ハンチントン疾患モデルマウス（Ｒ６／２系列（Ｂ６ＣＢＡＴｇ（ＨＤｅｘｏｎ１）６２Ｇｐｐ／３Ｊ、１１１ＣＡＧｓ）のトランスジェニックＨＤマウス；初期体重平均２６．９±４．８ｇ）に群当たり８匹で、下記３個の相異する食餌処理群にランダムに分けて、１０週の間これら食餌を維持した（全体３２匹動物）：
－対照群：ＳＬが投与されない正常食餌を食べた正常ネズミ（８匹）
－（ハンチントン疾患モデル）群：ＳＬが投与されない正常食餌を食べたハンチントンモデル（８匹）
－（ハンチントン疾患モデル＋３’－ＳＬ）群：正常食餌群に３’－シアリルラクトース（３’－ＳＬ、Ｓｉｇｍａ）処理された（ネズミ重さｋｇ当たり１日当たり０．１ｍｇ経口投与）ハンチントンモデル（８匹）
－（ハンチントン疾患モデル＋６’－ＳＬ）群：正常食餌群に６’－シアリルラクトース（６’－ＳＬ、Ｓｉｇｍａ）処理された（ネズミ重さｋｇ当たり１日当たり０．１ｍｇ経口投与）ハンチントンモデル（８匹）
シアリルラクトースまたはＤＷを毎日経口投与方式により投与した。マウスを１０週の間動物室に保管し、１２時間絶食した後、犠牲させた。食餌摂取量及び体重変化量は各々５日毎測定した。３’－シアリルラクトース（３’－Ｎ－Ａｃｅｔｙｌｎｅｕｒａｍｉｎｙｌ－Ｄ－ｌａｃｔｏｓｅ， ３’－Ｓｉａｌｙｌ－Ｄ－ｌａｃｔｏｓｅまたはα－ＮｅｕＮＡｃ－（２→３）－β－Ｄ－Ｇａｌ－（１→４）－ＤＧｌｃ）または６’－シアリルラクトース（６’－Ｎ－Ａｃｅｔｙｌｎｅｕｒａｍｉｎｙｌ－ｌａｃｔｏｓｅ， ６’－Ｓｉａｌｙｌ－Ｄ－ｌａｃｔｏｓｅまたはα－ＮｅｕＮＡｃ－（２→６）－β－Ｄ－Ｇａｌ－（１→４）－Ｄ－Ｇｌｃ）は、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈから購入した。
ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による遺伝子発現変化を、脳疾患関連２つの主要臓器（海馬、脳）で定量比較した。トリゾール試薬（ＴＲＩｚｏｌ ａｇｅｎｔ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）でＲＮＡを抽出した。前記で抽出して定量したＲＮＡと逆転写システム（Ｐｒｏｍｅｇａ、米国）を用いてｃＤＮＡを合成した。合成されたｃＤＮＡ及び分析対象（Ｆｎｄｃ５、ＰＧＣ－１α、Ｅｒｒａ、ＵＣＰ１、ＢＤＮＦ、ＳＯＤ２、及びＧＰＸ１）に対し、予めデザインされたプライマーとプローブ（Ａｐｐｌｉｅｄ ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ；ＰＧＣ－１α、 Ｍｍ００４４７１８１＿ｍ１、ＧＡＰＤＨ、及びＭｍ９９９９９９１５＿ｑ１）を用いてＰＧＣ－１αの発現様相を測定した。ＰＣＲ反応と分析はローター－遺伝子３０００システム（Ｒｏｔｏｒ－Ｇｅｎｅ ３０００ ｓｙｓｔｅｍ）（Ｃｏｒｂｅｔｔ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、シドニー、オーストラリア）を用い、その結果を図１０に示す。
図１０ａ及び図１０ｂは、ハンチントンモデルでのＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による遺伝子発現変化を示す図である。図１０ａ及び図１０ｂで、縦軸は正常ネズミ対照群対比脳あるいは海馬の遺伝子発現変化は、各臓器で（（ハンチントン疾患モデル）群遺伝子発現量）／（対照群遺伝子発現量）、（（ハンチントン疾患モデル＋３’－ＳＬ）群遺伝子発現量）／（対照群遺伝子発現量）、そして（（ハンチントン疾患モデル＋６’－ＳＬ）群遺伝子発現量）／（対照群遺伝子発現量）の数値である。生後５週の雄ハンチントンモデルマウスに群当たり８匹にしてＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）を投与した群と投与しない群を作って１０週間食餌調節実験して正常食餌正常ネズミ（ｃ５７／ＢＬ６）の遺伝子発現量と比較した。その結果、図１０ａ及び図１０ｂに示すように、正常食餌の正常ネズミ対照群を基準とした時、６’－ＳＬが投与された（ハンチントン疾患モデル＋６’－ＳＬ）群は正常対照群に比べては脳（図１０ａ）と海馬（図１０ｂ）でＰＧＣ－１αを含んだいろいろな分析対象（Ｆｎｄｃ５、Ｅｒｒａ、ＵＣＰ１、ＢＮＤＦ、ＳＯＤ２、及びＧＰＸ１）の発現程度が若干劣るが、ＳＬが投与されない（ハンチントン疾患モデル）群に比べて発現程度が非常に高かった。即ち、ＳＬがハンチントン疾患モデルネズミの脳と海馬でＰＧＣ－１αと関連した遺伝子に対して留意性ある発現量増加を見せた。３’－ＳＬは遺伝子発現促進効果が６’－ＳＬに比べて相対的に劣ることが分かった。
また、正常食餌の正常ネズミ対照群対比（ハンチントン疾患モデル）群、（ハンチントン疾患モデル＋３’－ＳＬ）群、そして（ハンチントン疾患モデル＋６’－ＳＬ）群のロータロッド走行時間変化を通じて行動改善を評価した。ロータロッド走行実験は（（ハンチントン疾患モデル）群のロータロッド走行時間）／（対照群ロータロッド走行時間）と（（ハンチントン疾患モデル＋３’－ＳＬ）群のロータロッド走行時間）／（対照群ロータロッド走行時間）、そして（（ハンチントン疾患モデル＋６’－ＳＬ）群のロータロッド走行時間）／（対照群ロータロッド走行時間）の数値の変化を確認する実験である。ロータロッド走行時間はロータロッド装置（３分の時間に亘って４～４０ｒｐｍの回転スピードで加速するロッド；Ｊｕｎｇｄｏ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｋｏｒｅａ）を用いて測定した。４週齢のネズミにロータロッド試験練習をした後、５週齢からロータロッド試験を遂行して、落ちるまで平均時間を測定した。
図１１は、ハンチントン疾患モデルに対するロータロッド走行実験の結果を示す図である。図１１で、縦軸は（（ハンチントン疾患モデル）群のロータロッド走行時間）／（対照群ロータロッド走行時間）と（（ハンチントン疾患モデル＋３’－ＳＬ）群のロータロッド走行時間）／（対照群ロータロッド走行時間）、そして（（ハンチントン疾患モデル＋６’－ＳＬ）群のロータロッド走行時間）／（対照群ロータロッド走行時間）の数値を示す。その結果、図１１に示すように、正常食餌の正常ネズミ対照群と比較して、（ハンチントン疾患モデル）群、（ハンチントン疾患モデル＋３’－ＳＬ）群、そして（ハンチントン疾患モデル＋６’－ＳＬ）群に対してロータロッド走行実験を比較した時、６’－ＳＬが投与された（ハンチントン疾患モデル＋６’－ＳＬ）群はＳＬが投与されない（ハンチントン疾患モデル）群に比べてロータロッド走行時間が増加したことと表れて、３’－ＳＬの走行時間増加効果は６’－ＳＬに比べて少なかった。即ち、６’－ＳＬがハンチントン疾患モデルで行動改善を最もよく促進させることを確認することができた。
実施形態９．脳卒中モデルでのＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による虚血体積及びＭＬＰＴ点数変化
脳卒中モデルでＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による虚血体積及びＭＬＰＴ（Ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｌｉｍｂ ｐｌａｃｉｎｇ ｔｅｓｔ）点数変化を見るために、４週齢のマウスを中央実験動物（大韓民国）から購入した。水は自由に供給してくれて、市販中のペレット餌（Ｄｏｏｙｅｕｌ ｂｉｏｔｅｃｈ、大韓民国）を一週間の間供給した。臨時及び永久ＭＣＡ（ｍｉｄｄｌｅ ｃｅｒｅｂｒａｌ ａｒｔｅｒｙ）閉塞及び脳内出血（ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒａｌ ｈｅｍｏｒｒｈａｇｅ：ＩＣＨ）を含む脳卒中モデルは６週齢の雄Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ ｒａｔ（体重平均１８５．３±１５．８ｇ）及び雄ＢＡＬＢ／ｃマウス（体重平均２４．６±３．８ｇ）を使用して製造された。ＳＬ投与効果を比較するために、脳卒中誘発後、１時間に群当たり８匹で下記３個の相異する腹腔投与群にランダムに分けて（全体２４匹の動物）腹腔投与した：
－対照群：溶解緩衝液対照群媒体腹腔投与群（８匹）
－３’－ＳＬ処理：３’－ＳＬ溶解緩衝液媒体腹腔投与群（８匹）
－６’－ＳＬ処理：６’－ＳＬ溶解緩衝液媒体腹腔投与群（８匹）
局所大脳硬塞マウスモデルは追加的な脳硬塞モデルに活用されたものであり、このモデルでは脳硬塞誘発後、３時間にＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）を腹腔投与した。
－対照群：溶解緩衝液対照群媒体腹腔投与群（８匹）
－３’－ＳＬ処理：３’－ＳＬ溶解緩衝液媒体腹腔投与群（８匹）
－６’－ＳＬ処理：６’－ＳＬ溶解緩衝液媒体腹腔投与群（８匹）
虚血体積測定は虚血誘導２４時間経過後に虚血体積（硬塞及び境界領域）の体積をＴＴＣ（２，３，７－ｔｒｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）を用いて以下のように遂行した。脳を摘出した後、前頭チップを１ｍｍ厚さに切って、２％のＴＣＣ溶液に浸漬した。次に、染色された切片をＰＢＳ－４％のパラホルムアルデヒドで固定した後、各切片の虚血発生部位及び半球領域をイメージ分析システムで測定した。脳浮腫による値を以下のように補正した：校正された虚血体積値：測定された虚血面積×１－｛［（ｉｐｓｉｌａｔｅｒａｌ ｈｅｍｉｓｐｈｅｒｅ ａｒｅａ－ｃｏｎｔｒａｌａｔｅｒａｌ ｈｅｍｉｓｐｈｅｒｅ ａｒｅａ）／ｃｏｎｔｒａｌａｔｅｒａｌ ｈｅｍｉｓｐｈｅｒｅ］｝。虚血体積は、総半球体積に対する百分率で示した。
図１２は、虚血モデルでの虚血体積を観察した結果を示す図である。図１２の結果は３’または６’－ＳＬを臨時または永久のＭＣＡ（ｍｉｄｄｌｅ ｃｅｒｅｂｒａｌ ａｒｔｅｒｙ）閉塞が加えられたマウスモデルに処理した時、インビボでＳＬによる許血性神経損傷に保護効果を観察した結果である。図１２に示すように、６’－ＳＬ処理による虚血体積減少が局所小脳永久虚血モデル（５０％）、局所小脳臨時虚血モデル（６０％）、及び局所大脳永久閉塞モデル（４０％）全てで半分程度になった。３’－ＳＬの虚血性神経損傷に保護効果は６’－ＳＬに比べて相対的に劣ることが分かった。
また、ＩＣＨモデルでＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）による神経退行抑制を見るために、ＭＬＰＴテストを遂行した。ＭＬＰＴテストはＩＣＨ誘導一日前、一日後、及び３日後に次の通り遂行された。モデルをテーブルから１０ｃｍ離れた個所に吊るした後、テーブルへの前肢のストレッチ程度を評価した（正常０点、非正常的な曲げ１点）。次に、モデルの前足が縁を経て動くようにし、各前脚をやんわりと下へ引っ張って、回数程度を評価した（２度目の実験：前脚；３番目の実験：後脚）。最後に、ラットをテーブルの縁に置いて前肢を横に位置することに対して評価した。３回の評価結果に対して次の通り点数を付けた：正常、０点；遅延（少なくとも２秒）、及び／又は不完全遂行、１点；遂行できない、２点。総７点が最大の神経性欠乏を示し、０点は正常を示す。
図１３は、ＩＣＨ誘導後、ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）処理によるＭＬＰＴ試験点数変化を示す図である。図１３に示すように、ＩＣＨモデルで６’－ＳＬ処理をした時、ＩＣＨモデル誘導後、１日目と３日目の結果から見るように、対照群よりＭＬＰＴテスト点数が低くなった。即ち、６’－ＳＬ処理による神経退行抑制効果があるものである。３’－ＳＬの神経退行抑制効果は６’－ＳＬに比べて相対的に劣ることが分かった。
実施形態１０．ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による腹部脂肪遺伝子発現変化及び局所脂肪除去評価
ネズミモデルで、ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による遺伝子発現変化及び局所脂肪除去効果を見るために、４週齢の雄ｏｂマウス（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ－ｏｂ／ｏｂ）モデルを中央実験動物（大韓民国）から購入した。水は自由に供給してくれて、高脂肪飼料（Ｒｏｄｅｎｔ Ｄｉｅｔ ｗｉｔｈ ６０ｋｃａｌ％ ｆａｔ）を２週間の間供給した。生後６週の雄ｏｂマウス（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ－ｏｂ／ｏｂ）モデル（初期体重平均３４．２±３．７ｇ）に群当たり８匹で下記３個の相異する食餌処理群にランダムに分けて、１０週の間これら食餌を維持した（全体２４頭動物）：
－対照群：ＳＬが処理されない高脂肪飼料（Ｒｏｄｅｎｔ Ｄｉｅｔ ｗｉｔｈ ６０ｋｃａｌ％ ｆａｔ）食餌を食べたモデル（８匹）
－３’－ＳＬ投与群：高脂肪食餌群に３’－シアリルラクトース（３’－ＳＬ、Ｓｉｇｍａ）処理された（ネズミ重さｋｇ当たり１日当たり０．１ｍｇ経口投与）モデル（８匹）
－６’－ＳＬ投与群：高脂肪食餌群に６’－シアリルラクトース（６’－ＳＬ、Ｓｉｇｍａ）処理された（ネズミ重さｋｇ当たり１日当たり０．１ｍｇ経口投与）モデル（８匹）
シアリルラクトースまたはＤＷを毎日経口投与方式により投与した。マウスを１０週の間動物室に保管し、１２時間絶食した後、犠牲させた。食餌摂取量及び体重変化量は各々５日毎測定した。３’－シアリルラクトース（３’－Ｎ－Ａｃｅｔｙｌｎｅｕｒａｍｉｎｙｌ－Ｄ－ｌａｃｔｏｓｅ， ３’－Ｓｉａｌｙｌ－Ｄ－ｌａｃｔｏｓｅまたはα－ＮｅｕＮＡｃ－（２→３）－β－Ｄ－Ｇａｌ－（１→４）－ＤＧｌｃ）または６’－シアリルラクトース（６’－Ｎ－Ａｃｅｔｙｌｎｅｕｒａｍｉｎｙｌ－ｌａｃｔｏｓｅ， ６’－Ｓｉａｌｙｌ－Ｄ－ｌａｃｔｏｓｅまたはα－ＮｅｕＮＡｃ－（２→６）－β－Ｄ－Ｇａｌ－（１→４）－Ｄ－Ｇｌｃ）は、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈから購入した。
ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による遺伝子発現変化を、腹部で定量比較した。トリゾール試薬（ＴＲＩｚｏｌ ａｇｅｎｔ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）でＲＮＡを抽出した。前記で抽出して定量したＲＮＡと逆転写システム（Ｐｒｏｍｅｇａ、米国）を用いてｃＤＮＡを合成した。合成されたｃＤＮＡ及び分析対象（Ｆｎｄｃ５、ＰＧＣ－１α、Ｅｒｒａ、ＵＣＰ１、ＳＯＤ２、及びＧＰＸ１）に対し、予めデザインされたプライマーとプローブ（Ａｐｐｌｉｅｄ ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ；ＰＧＣ－１α、Ｍｍ００４４７１８１＿ｍ１、ＧＡＰＤＨ、及びＭｍ９９９９９９１５＿ｑ１）を用いてＰＧＣ－１αの発現様相を測定した。ＰＣＲ反応と分析はローター－遺伝子３０００システム（Ｒｏｔｏｒ－Ｇｅｎｅ ３０００ ｓｙｓｔｅｍ）（Ｃｏｒｂｅｔｔ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、シドニー、オーストラリア）を用い、その結果を図１４に示す。
図１４は、ネズミモデルでのＳＬ組成物処理による遺伝子発現変化を示す図である。図１４で、縦軸は高脂肪飼料食餌を食べるモデルでＳＬ投与前対比腹部脂肪遺伝子発現比であって、腹部脂肪で（３’－ＳＬ投与群の遺伝子発現量）／（対照群遺伝子発現量）と（６’－ＳＬ投与群の遺伝子発現量）／（対照群遺伝子発現量）の数値である。生後６週の雄マウスに群当たり８匹にして対照群とＳＬ投与群を作って１０週間高脂肪食餌調節実験をした。その結果、図１４に示すように、６’－ＳＬ投与された実験群は陰性対照群に比べていろいろな分析対象（Ｆｎｄｃ５、ＰＧＣ－１α、Ｅｒｒａ、ＵＣＰ１、ＳＯＤ２、及びＧＰＸ１）に対して２倍程度の留意性ある発現量増加を見せた。３’－ＳＬはＰＧＣ－１αと関連した遺伝子の発現促進効果が６’－ＳＬに比べて相対的に若干劣ることが分かった。
また、ＳＬを処理されない高脂肪飼料食餌を食べる前記ｏｂマウス（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ－ｏｂ／ｏｂ）モデルネズミで、メソローラー（０．５ｍｍ、イントゥＭＲ、（株）イントゥメディ）を用い、ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）投与による局所脂肪除去効果を確認した。具体的に、ネズミの背中にある毛を切り出して、露出皮膚に対して食塩水バッファのうち、０．１Ｍ濃度のＳＬを皮膚に塗布した後、前記メソローラーを摩擦させて皮膚を通じて吸収するようにした。対照群はＳＬのない前記バッファを使用したことを除いては同一であった。その結果を図１５に示す。図１５は、ネズミモデルでのＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物を局所投与した場合、遺伝子発現変化を示す図である。図１５で、３’－ＳＬ、６’－ＳＬ、及びＣＴＬは各々３’－ＳＬ投与群、６’－ＳＬ投与群、及び対照群であって、１０週間高脂肪食餌を食べさせた後、メソローラーを使用してＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物を０日と４日に局所投与した後、７日にダーモスコピー（Ｄｅｒｍｏｓｃｏｐｙ）で観察した結果である。
その結果、図１５に示すように、メソローラーにより６’－ＳＬが投与された部分は投与されない陰性対照部分に比べて局所脂肪が除去されることを確認することができた。３’－Ｓは局所脂肪除去効果が６’－ＳＬに比べて相対的に若干劣ることが分かった。
実施形態１１．老化促進モデルでのＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による身体部位別遺伝子発現変化とｔｅｌｏｍｅｒｅ機能とＲＯＳ調節による老化関連慢性疾患防止効果
老化促進モデルでＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による身体部位別遺伝子発現変化を見るために、生後４週の雄老化促進モデルマウス（ＳＡＭＰ１／Ｓｋｕ Ｓｌｃ）を中央実験動物（大韓民国）から購入した。水は自由に供給してくれて、市販中のペレット餌（Ｄｏｏｙｅｕｌ ｂｉｏｔｅｃｈ、大韓民国）を一週間の間供給した。生後６週の雄老化促進モデルマウス（初期体重平均２８．８±２．３ｇ）に群当たり８匹で下記３個の相異する食餌処理群にランダムに分けて、１２週の間これら食餌を維持した（全体２４匹動物）：
－対照群：ＳＬが投与されない正常食餌を食べた正常ネズミ（８匹）
－３’－ＳＬ投与群：正常食餌群に３’－シアリルラクトース（３’－ＳＬ、Ｓｉｇｍａ）処理された（ネズミ重さｋｇ当たり１日当たり０．１ｍｇ経口投与）老化促進モデル（８匹）
－６’－ＳＬ投与群：正常食餌群に６’－シアリルラクトース（６’－ＳＬ、Ｓｉｇｍａ）処理された（ネズミ重さｋｇ当たり１日当たり０．１ｍｇ経口投与）老化促進モデル（８匹）
シアリルラクトースまたはＤＷを毎日経口投与方式により投与した。マウスを１４週の間動物室に保管し、１２時間絶食した後、犠牲させた。食餌摂取量及び体重変化量は各々５日毎測定した。３’－シアリルラクトース（３’－Ｎ－Ａｃｅｔｙｌｎｅｕｒａｍｉｎｙｌ－Ｄ－ｌａｃｔｏｓｅ， ３’－Ｓｉａｌｙｌ－Ｄ－ｌａｃｔｏｓｅまたはα－ＮｅｕＮＡｃ－（２→３）－β－Ｄ－Ｇａｌ－（１→４）－ＤＧｌｃ）または６’－シアリルラクトース（６’－Ｎ－Ａｃｅｔｙｌｎｅｕｒａｍｉｎｙｌ－ｌａｃｔｏｓｅ， ６’－Ｓｉａｌｙｌ－Ｄ－ｌａｃｔｏｓｅまたはα－ＮｅｕＮＡｃ－（２→６）－β－Ｄ－Ｇａｌ－（１→４）－Ｄ－Ｇｌｃ）は、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈから購入した。
ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による遺伝子発現変化を、８種類の主要臓器（心臓、海馬、脳、脊髄、肺、肝、脾臓、腎臓）と３種類の骨力筋（ヒラメ筋、大腿四頭筋、腓腹筋）などで定量比較した。トリゾール試薬（ＴＲＩｚｏｌ ａｇｅｎｔ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）でＲＮＡを抽出した。前記で抽出して定量したＲＮＡと逆転写システム（Ｐｒｏｍｅｇａ、米国）を用いてｃＤＮＡを合成した。合成されたｃＤＮＡ及び分析対象（Ｆｎｄｃ５、ＰＧＣ－１α、Ｅｒｒａ、ＵＣＰ１、ＳＯＤ２、及びＧＰＸ１）に対し、予めデザインされたプライマーとプローブ（Ａｐｐｌｉｅｄ ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ；ＰＧＣ－１α、 Ｍｍ００４４７１８１＿ｍ１、ＧＡＰＤＨ、及びＭｍ９９９９９９１５＿ｑ１）を用いてＰＧＣ－１αの発現様相を測定した。ＰＣＲ反応と分析はローター－遺伝子３０００システム（Ｒｏｔｏｒ－Ｇｅｎｅ ３０００ ｓｙｓｔｅｍ）（Ｃｏｒｂｅｔｔ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、シドニー、オーストラリア）を用い、その結果を図１６に示す。
図１６ａ及び１６ｂは、老化促進モデルでのＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による遺伝子発現変化を示す図である。生後６週の雄老化促進モデルマウス（ＳＡＭＰ１／Ｓｋｕ Ｓｌｃ）に群当たり８匹にして対照群、３’－ＳＬ投与群、そして６’－ＳＬ投与群を作って１２週間食餌調節実験した。図１６ａ及び１６ｂで、縦軸はＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）投与前対比身体部位別の相対的な遺伝子発現変化であって、各身体部位で（３’－ＳＬ投与群遺伝子発現量）／（対照群遺伝子発現量）と（６’－ＳＬ投与群遺伝子発現量）／（対照群遺伝子発現量）の数値である。その結果、図１６ａ及び１６ｂに示すように、３’－ＳＬ（図１６ａ）と６’－ＳＬ（図１６ｂ）全て大部分の臓器と骨格筋でいろいろな分析対象（Ｆｎｄｃ５、ＰＧＣ－１α、Ｅｒｒａ、ＵＣＰ１、ＳＯＤ２、及びＧＰＸ１）に対して留意性ある発現量増加を見せて、但し３’－ＳＬは分析対象の遺伝子発現促進効果が６’－ＳＬに比べて相対的に若干劣ることが分かった。
また、細胞レベルの実験のために、ＳＬが投与されない高脂肪飼料（Ｒｏｄｅｎｔ Ｄｉｅｔ ｗｉｔｈ ６０ｋｃａｌ％ ｆａｔ）食餌を食べた対照群で、ＭＡＳＭｓ（ｍｏｕｓｅ大動脈平滑筋細胞）を分離し（Ｇｒｉｅｎｄｌｉｎｇ ｅｔ ａｌ．， １９９１）、ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物を培養液に添加して培養し、細胞内Ｈ２Ｏ２測定（ＲＯＳ数値）のために、０．１％子牛血清に浸った１２－ｗｅｌｌ培養プレートで１日培養した。細胞内ＲＯＳ数値はＨ２ＤＣＦＤＡを用いて測定された。アッセイのために、細胞はＨＢＳＳバッファの中でＨ２ＤＣＦＤＡと共に３０分間培養された。細胞をトリプシン処理し洗浄してＨＢＳＳに溶かした。蛍光値がＣｙｔｏＦｌｕｏｒプレートリーダーにより直ちに測定された（図１７ａ）。
ミトコンドリアの超酸化物（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ）生産測定のために、ミトコンドリアのＲＯＳはＭｉｔｏＳＯＸ Ｒｅｄ（ミトコンドリア超酸化物蛍光標識子）を用いて測定された。ＭＡＳＭｓを抽出してＭｉｔｏＳＯＸ（４μＭ）と共に暗室で３７℃で２０分間培養した。ＭｉｔｏＳＯＸ蛍光は蛍光プレートリーダーを用いて出た細胞の蛍光強さにより定量された（４８０ｎｍ励起／５８０ｎｍ放出）（図１７ｂ）。
図１７ａ及び１７ｂで、ＭＡＳＭｓを老化促進モデルマウス対照群で抽出して、ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物を培養液に入れて比較した。細胞内Ｈ２Ｏ２（ＲＯＳ数値）を測定するためにＨ２ＤＣＦＤＡと共に培養し（図１７ａ）、ミトコンドリアのＲＯＳを測定するためにＭｉｔｏＳＯＸ Ｒｅｄ（ミトコンドリア超酸化物蛍光標識子）（図１７ａ）を共に培養した。細胞内Ｈ２Ｏ２とミトコンドリア超酸化物（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ）生産は蛍光プレートリーダーで定量された。組成物がＲＯＳ数値を落として、ミトコンドリアの超酸化物（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ）生産を抑制することが分かった。
図１７ａ及び１７ｂは、細胞内Ｈ２Ｏ２測定（ＲＯＳ数値）（図１７ａ）及びミトコンドリアの超酸化物（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ）生産測定（図１７ｂ）を示す図である。ＭＡＳＭｓを老化促進モデルマウス（ＳＡＭ Ｐ１／Ｓｋｕ Ｓｌｃ）から抽出して、ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物を培養液に入れて比較した。細胞内Ｈ２Ｏ２を測定するためにＨ２ＤＣＦＤＡと共に培養し（図１７ａ）、ミトコンドリアのＲＯＳを測定するためにＭｉｔｏＳＯＸ Ｒｅｄ（ミトコンドリア超酸化物蛍光標識子）（図１７ａ）と培養した。細胞内Ｈ２Ｏ２とミトコンドリア超酸化物（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ）生産は蛍光プレートリーダーで定量された。ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物がＲＯＳ数値を落とし、ミトコンドリアの超酸化物（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ）生産を抑制することが分かった。
図１８ａ及び１８ｂで、テロメラーゼ活動性の測定はＴＲＡＰプロトコル（Ｗｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．， １９９５）で測定される。要約すると、細胞ペレットをＣＨＡＰＳ分解溶媒（ｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅ抑制剤含み）に溶かした後、４℃で３０分間培養する。細胞抽出物（１ｍｇ）をＴＲＡＰｅｚｅ反応ミックス（テロメラーゼ基質（ＴＳ）プライマー、蛍光－ラベルのＲＰ（ｒｅｖｅｒｓｅ）プライマー、対照標準原型、そしてスルホローダミン（ｓｕｌｆｏｒｈｏｄａｍｉｎｅ）－ラベルの対照標準Ｋ２プライマー）と混合する。ＴＳプライマーは３０℃で３０分間延長された後、ＰＣＲを実行する。このように出たＴＲＡＰ生成物は蛍光プレートリーダーで蛍光を測定してテロメラーゼ活動性を定量する。相対的なテロメラーゼ活動性はスルホローダミン（内部対照標準）対比純フルオレセイン割合により正規化させ、パーセンテージで表現される。Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ（Ｍ０２５０）はＭａｒｋｅｒ Ｇｅｎｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ， Ｉｎｃから購入した。Ｈ２－ｄｉｃｈｌｏｒｏｆｌｕｏｒｅｓｃｉｎ ｄｉａｃｅｔａｔｅ（ＤＣＦＤＡ）はｆｒｏｍ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓから購入した。ＭｉｔｏＳＯＸＴＭ Ｒｅｄ， ＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ Ｇｒｅｅｎ ＦＭ、そして、ＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ（登録商標） Ｏｒａｎｇｅ ＣＭＴＭＲｏｓ （ＭＴＯ）はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎから購入した。１０，０００ｘ ＳＹＢＲ（登録商標） Ｇｏｌｄ ｄｙｅはＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ， Ｉｎｃ．から購入した。Ｎｕｃｌｅａｒ／Ｃｙｔｏｓｏｌ ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ ｋｉｔ （Ｋ２６６－１００）はＢｉｏＶｉｓｉｏｎから購入した。ＴＲＡＰｅｚｅ（登録商標） ＸＬ ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｋｉｔ （Ｓ７７０７）はＭＩＬＬＩＰＯＲＥから購入した。Ｔｅｌｏｍｅｒｅ ＰＮＡ ＦＩＳＨ Ｋｉｔ／Ｃｙ３ （Ｋ５３２６）はＤａｋｏから購入した。
図１８ａ及び１８ｂは、ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物投与によるテロメラーゼ活動性を測定した結果を示す。この数値を通じてＴＥＲＴとＡＲＥ／ＥＲＥ（ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ／ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｉｌｅ－ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｅｌｅｍｅｎｔ）信号経路活性化を推論することができた（Ｘｉｏｎｇ ｅｔ ａｌ．， ２０１５， Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ １２， １３９１－１３９９）。ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）を老化促進モデル（図１８ａ）とＭＡＳＭｓ（図１８ｂ）に処理してテロメラーゼ活動性を分析した。図１８ａは対照群、３’－ＳＬ投与群、そして６’－ＳＬ投与群から抽出された大動脈サンプルでテロメラーゼ活動性をｉｎ ｖｉｖｏで分析したデータである。図１８ｂは対照群の平滑筋細胞を分離して（Ｇｒｉｅｎｄｌｉｎｇ ｅｔ ａｌ．， １９９１）、ＭＡＳＭｓをＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）が処理された１２－ｗｅｌｌ培養プレートで１日培養してテロメラーゼ活動性をｉｎ ｖｉｔｒｏで分析した。実験結果ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物の投与がテロメラーゼ活動性増加を見せた。このような結果はＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物がＰＧＣ－１α増加によってＴＥＲＴ機能異常及びＤＮＡ損傷修復（テロメラーゼ活動性増加－ＴＥＲＴ発現）と関連できることを推論することができる根拠を与えた。
実施形態１２．動脈硬化症モデルでのＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理によるテロメア（ｔｅｌｏｍｅｒｅ）機能とＲＯＳ調節による老化関連慢性疾患防止効果
最近にＰＧＣ－１α遺伝子が除去されれば、血管老化、アテローム性動脈硬化症、テロメア機能障害と長さ減少、ＤＮＡ損傷、ＴＥＲＴ（ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ）の発現及び活動性減少、そしてｐ５３増加により発生するという論文が発表された（Ｘｉｏｎｇ ｅｔ ａｌ．， ２０１５， Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ １２， １３９１－１３９９）。
一般に、ＡｐｏＥ－／－ネズミが酸化性ストレスと炎症に対する敏感性を増加させ、人々で観察される粥状硬化症の傷を速く発達させるため、動脈硬化症の代表的なモデルに使われるので（Ｗｅｉｓｓ ｅｔ ａｌ．， ２００１）、ＡｐｏＥ－／－ネズミ（Ｃ５７ＢＬ／６基盤）をＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから購買した。遺伝子型はテイル（ｔａｉｌ）ＤＮＡを用いたＰＣＲで確認された。
動脈硬化症老化モデルで、ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理によるテロメア機能とＤＮＡ損傷調節による老化関連慢性疾患防止効果を見るために、２つの生後２４週の雄モデルマウス（ＰＧＣ－１α＋／＋ＡｐｏＥ－／－）に群当たり８匹で下記３個の相異する食餌処理群にランダムに分けて、６週の間これら食餌を維持した（全体２４匹の動物）：
－対照群：高脂肪飼料（Ｒｏｄｅｎｔ Ｄｉｅｔ ｗｉｔｈ ６０ｋｃａｌ％ ｆａｔ）食餌を食べた動脈硬化症モデル（８匹）
－３’－ＳＬ投与群：高脂肪飼料食餌群に３’－シアリルラクトース（３’－ＳＬ、Ｓｉｇｍａ）処理された（ネズミ重さｋｇ当たり１日当たり０．１ｍｇ経口投与）動脈硬化症モデル（８匹）
－６’－ＳＬ投与群：高脂肪飼料食餌群に６’－シアリルラクトース（６’－ＳＬ、Ｓｉｇｍａ）処理された（ネズミ重さｋｇ当たり１日当たり０．１ｍｇ経口投与）動脈硬化症モデル（８匹）
細胞レベルの実験のために、ＳＬが投与されない高脂肪飼料（Ｒｏｄｅｎｔ Ｄｉｅｔ ｗｉｔｈ ６０ｋｃａｌ％ ｆａｔ）食餌を食べた対照群で、ＭＡＳＭｓ（ｍｏｕｓｅ大動脈平滑筋細胞）を分離し（Ｇｒｉｅｎｄｌｉｎｇ ｅｔ ａｌ．， １９９１）、ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物を培養液に処理して比較した。細胞内Ｈ２Ｏ２測定（ＲＯＳ数値）のために、０．１％子牛血清に浸った１２－ｗｅｌｌ培養プレートで１日培養した。細胞内ＲＯＳ数値はＨ２ＤＣＦＤＡを用いて測定された。アッセイのために、細胞はＨＢＳＳバッファの中でＨ２ＤＣＦＤＡと共に３０分間培養された。細胞をトリプシン処理し洗浄してＨＢＳＳに溶かした。蛍光値がＣｙｔｏＦｌｕｏｒプレートリーダーにより直ちに測定された（図１９ａ）。
ミトコンドリアの超酸化物（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ）生産の測定のために、ミトコンドリアのＲＯＳはＭｉｔｏＳＯＸ Ｒｅｄ（ミトコンドリア超酸化物蛍光標識子）を用いて測定された。ＭＡＳＭｓを抽出してＭｉｔｏＳＯＸ（４μＭ）と共に暗室で３７℃で２０分間培養した。ＭｉｔｏＳＯＸ蛍光は蛍光プレートリーダーを用いて出た細胞の蛍光強さにより定量された（４８０ｎｍ励起／５８０ｎｍ放出）（図１９ｂ）。
図１９ａ及び１９ｂで、ＭＡＳＭｓをモデルマウス（ＰＧＣ－１α＋／＋ＡｐｏＥ－／－）対照群から抽出して、ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物を培養液に入れて比較した。細胞内Ｈ２Ｏ２（ＲＯＳ数値）を測定するためにＨ２ＤＣＦＤＡと共に培養し（図１９ａ）、ミトコンドリアのＲＯＳを測定するためにＭｉｔｏＳＯＸ Ｒｅｄ（ミトコンドリア超酸化物蛍光標識子）（図１９ａ）を共に培養した。細胞内Ｈ２Ｏ２とミトコンドリア超酸化物（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ）生産は蛍光プレートリーダーで定量された。組成物がＲＯＳ数値を落として、ミトコンドリアの超酸化物（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ）生産を抑制することが分かった。
図１９ａ及び１９ｂは、細胞内Ｈ２Ｏ２測定（ＲＯＳ数値）（図１９ａ）及びミトコンドリアの超酸化物（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ）生産測定（図１９ｂ）の結果を示す図である。ＭＡＳＭｓをモデルマウス（ＰＧＣ－１α＋／＋ＡｐｏＥ－／－）から抽出して、ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物を培養液に入れて比較した。細胞内Ｈ２Ｏ２を測定するためにＨ２ＤＣＦＤＡと共に培養し（図１９ａ）、ミトコンドリアのＲＯＳを測定するためにＭｉｔｏＳＯＸ Ｒｅｄ（ミトコンドリア超酸化物蛍光標識子）（図１９ａ）と培養した。細胞内Ｈ２Ｏ２とミトコンドリア超酸化物（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ）生産は蛍光プレートリーダーで定量された。ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物がＲＯＳ数値を落とし、ミトコンドリアの超酸化物（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ）生産を抑制することが分かった。
図２０で、テロメラーゼ活動性の測定はＴＲＡＰプロトコル（Ｗｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．， １９９５）で測定される。要約すると、細胞ペレットをＣＨＡＰＳ分解溶媒（ｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅ抑制剤含み）に溶かした後、４℃で３０分間培養する。細胞抽出物（１ｍｇ）をＴＲＡＰｅｚｅ反応ミックス（テロメラーゼ基質（ＴＳ）プライマー、蛍光－ラベルのＲＰ（ｒｅｖｅｒｓｅ）プライマー、対照標準原型、そしてスルホローダミン－ラベルの対照標準Ｋ２プライマー）と混合する。ＴＳプライマーは３０℃で３０分間延長された後、ＰＣＲを実行する。このように出たＴＲＡＰ生成物は蛍光プレートリーダーで蛍光を測定してテロメラーゼ活動性を定量する。相対的なテロメラーゼ活動性はスルホローダミン（内部対照標準）対比純フルオレセイン割合により正規化させ、パーセンテージで表現される。Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ （Ｍ０２５０）はＭａｒｋｅｒ Ｇｅｎｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ， Ｉｎｃから購入した。Ｈ２－ｄｉｃｈｌｏｒｏｆｌｕｏｒｅｓｃｉｎ ｄｉａｃｅｔａｔｅ （ＤＣＦＤＡ）はｆｒｏｍ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ．から購入した。ＭｉｔｏＳＯＸＴＭ Ｒｅｄ， ＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ Ｇｒｅｅｎ ＦＭ、そしてＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ（登録商標） Ｏｒａｎｇｅ ＣＭＴＭＲｏｓ （ＭＴＯ）はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎから購入した。１０，０００ｘ ＳＹＢＲ（登録商標） Ｇｏｌｄ ｄｙｅはＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ， Ｉｎｃ． から購入した。Ｎｕｃｌｅａｒ／Ｃｙｔｏｓｏｌ ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ ｋｉｔ（Ｋ２６６－１００）はＢｉｏＶｉｓｉｏｎから購入した。ＴＲＡＰｅｚｅ（登録商標） ＸＬ ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｋｉｔ（Ｓ７７０７）はＭＩＬＬＩＰＯＲＥから購入した。Ｔｅｌｏｍｅｒｅ ＰＮＡ ＦＩＳＨ Ｋｉｔ／Ｃｙ３（Ｋ５３２６）はＤａｋｏから購入した。
図２０ａ及び２０ｂで、ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物投与によるテロメラーゼ活動性を測定した。この数値を通じてＴＥＲＴとＡＲＥ／ＥＲＥ（ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ／ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｉｌｅ－ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｅｌｅｍｅｎｔ）信号経路活性化を推論することができた（Ｘｉｏｎｇ ｅｔ ａｌ．， ２０１５， Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ １２， １３９１－１３９９）。
図２０ａ及び２０ｂは、ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）を動脈硬化症モデル（ＡｐｏＥ－／－；図２０ａ）とＭＡＳＭｓ（図２０ｂ）に処理してテロメラーゼ活動性を分析した結果を示す図である。図２０ａで、対照群、３’－ＳＬ投与群、そして６’－ＳＬ投与群から抽出された大動脈サンプルでテロメラーゼ活動性をｉｎ ｖｉｖｏで分析した。図２０ｂで、対照群の平滑筋細胞を分離して（Ｇｒｉｅｎｄｌｉｎｇ ｅｔ ａｌ．， １９９１）、ＭＡＳＭｓをＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）が処理された１２－ｗｅｌｌ培養プレートで１日培養してテロメラーゼ活動性をｉｎ ｖｉｔｒｏで分析した。実験結果、ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物の投与がテロメラーゼ活動性増加を見せた。このような結果はＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物がＰＧＣ－１α増加によってＴＥＲＴ機能異常及びＤＮＡ損傷復帰（テロメラーゼ活動性増加－ＴＥＲＴ発現）と関連できることを推論することができる根拠を与えた。
実施形態１３．皮膚実験でのＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による身体部位別遺伝子発現変化
皮膚実験モデルで、ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による身体部位別遺伝子発現変化を見るために、生後６週の雄皮膚実験モデル（ＨＲＭ２）マウス（メラニンを含んだＨａｉｒｌｅｓｓの外観）に群当たり８匹で下記３個の相異する食餌処理群にランダムに分けて（全体２４匹の動物）、１０週の間これら食餌（ＡＩＮ－７６Ａ米国Ｄｙｅｔｓ社）を維持し、携帯用色差計（ＣＲ－１０日本Ｍｉｎｏｌｔａ社）などを用いて紫外線照射（老人性染み、シワ実験）、皮膚感受性実験、皮膚刺激性実験、皮下吸収実験などをした：
－対照群：正常食餌を食べた群（８匹）
－３’－ＳＬ投与群：正常食餌群に３’－シアリルラクトース（３’－ＳＬ、Ｓｉｇｍａ）処理された（ネズミ重さｋｇ当たり１日当たり０．１ｍｇ経口投与）モデル（８匹）
－６’－ＳＬ投与群：正常食餌群に６’－シアリルラクトース（６’－ＳＬ、Ｓｉｇｍａ）処理された（ネズミ重さｋｇ当たり１日当たり０．１ｍｇ経口投与）モデル（８匹）
ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）投与群が対照群に比べて紫外線照射（老人性染み、シワ実験）、皮膚感受性実験、皮膚刺激性実験、皮下吸収実験などで皮膚が格段に改善されていることが分かった。また、ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による遺伝子発現変化を、８種類の主要臓器（心臓、海馬、脳、脊髄、肺、肝、脾臓、腎臓）と３種類の骨格筋（ヒラメ筋、大腿四頭筋、腓腹筋）などで定量比較した。トリゾール試薬（ＴＲＩｚｏｌ ａｇｅｎｔ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）でＲＮＡを抽出した。前記で抽出して定量したＲＮＡと逆転写システム（Ｐｒｏｍｅｇａ、米国）を用いてｃＤＮＡを合成した。合成されたｃＤＮＡ及び分析対象（Ｆｎｄｃ５、ＰＧＣ－１α、Ｅｒｒａ、ＵＣＰ１、ＳＯＤ２、及びＧＰＸ１）に対し、予めデザインされたプライマーとプローブ（Ａｐｐｌｉｅｄ ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ；ＰＧＣ－１α、 Ｍｍ００４４７１８１＿ｍ１、ＧＡＰＤＨ、及びＭｍ９９９９９９１５＿ｑ１）を用いてＰＧＣ－１αの発現様相を測定した。ＰＣＲ反応と分析はローター－遺伝子３０００システム（Ｒｏｔｏｒ－Ｇｅｎｅ ３０００ ｓｙｓｔｅｍ）（Ｃｏｒｂｅｔｔ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、シドニー、オーストラリア）を用い、その結果を図２１ａ及び２１ｂに示した。
図２１ａ及び２１ｂで、ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）投与前対比身体部位別の相対的な遺伝子発現変化は、各身体部位で（３’－ＳＬ投与群遺伝子発現量）／（対照群遺伝子発現量）と（６’－ＳＬ投与群遺伝子発現量）／（対照群遺伝子発現量）を数値で示したものである。いろいろな身体部位で６’－ＳＬ投与群は陰性対照群に比べてＰＧＣ－１αを含んだいろいろな分析対象（Ｆｎｄｃ５、ＰＧＣ－１α、Ｅｒｒａ、ＵＣＰ１、ＳＯＤ２、及びＧＰＸ１）の発現程度が非常に優れた。即ち、６’－ＳＬが正常ネズミのいろいろな臓器と筋肉でＰＧＣ－１αと関連した遺伝子の発現を促進させることを確認することができた。３’－ＳＬは分析対象の遺伝子発現促進効果が６’－ＳＬに比べて相対的に若干劣ることが分かった。
図２１ａ及び２１ｂは、皮膚実験モデルでのＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物処理による遺伝子発現変化を示す図である。生後６週の雄皮膚実験モデル（ＨＲＭ２）マウスに群当たり８匹にして対照群とＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）投与群を作って１０週間食餌調節実験した。ＳＬ（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）投与前対比相対的な遺伝子発現変化は、各身体部位で‘ＳＬ投与群遺伝子発現量’と‘対照群遺伝子発現量’を定量して、その値の相対的な比（３’－ＳＬ投与群遺伝子発現量）／（対照群遺伝子発現量）と（６’－ＳＬ投与群遺伝子発現量）／（対照群遺伝子発現量）を数値で示したものである。大部分の臓器と骨格筋でいろいろな分析対象（Ｆｎｄｃ５、ＰＧＣ－１α、Ｅｒｒａ、ＵＣＰ１、ＳＯＤ２、及びＧＰＸ１）に対して留意性ある発現量増加を見せた。３’－ＳＬ（図２１ａ）は分析対象の遺伝子発現促進効果が６’－ＳＬ（図２１ｂ）に比べて相対的に若干劣ることが分かった。
実施形態１４．シアリルラクトース（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物が分化された脂肪細胞（ａｄｉｐｏｃｙｔｅ）に及ぼす影響
（１）３Ｔ３－Ｌ１細胞培養及び分化
３Ｔ３－Ｌ１脂肪細胞を韓国細胞株銀行から購入して使用した。３Ｔ３－Ｌ１脂肪細胞の培養と維持は１０％のｂｏｖｉｎｅ ｃａｌｆ ｓｅｒｕｍ（ＦＣＳ、ウェルジン、韓国）を入れたＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ、ウェルジン、韓国）培地で５％のＣＯ２、３７℃で継代培養した。３Ｔ３－Ｌ１脂肪細胞を次の通り６個の群に分類した：ＮＴ；正常分化細胞群（対照群）、シアリルラクトース実験群；シアリルラクトース（ＳＬ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、米国）が処理された実験群であって、１、１０、１００、１０００、及び１００００μＭ実験群。細胞分化は６－ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅにウェル当たり２×１０５ｃｅｌｌｓを株分けして細胞が１００％密集するように培養した。２日後、１０％のｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ（ＦＢＳ、ウェルジン、韓国）とＭＤＩ ｓｏｌｕｔｉｏｎ（０．５ ｍＭ ｉｓｏｂｕｔｙｌｍｅｔｈｙｌｘａｎｔｈｉｎｅ（ＩＢＭＸ， Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、米国）、１μＭ ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ （Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、米国）、１μｇ／ｍＬ ｉｎｓｕｌｉｎ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、米国））を含んだＤＭＥＭ培地を実験群に２日間処理し、また１０％のＦＢＳと１μｇ／ｍＬ インスリン（ｉｎｓｕｌｉｎ）を含んだＤＭＥＭで２日間処理した。その後、１０％のＦＢＳを含むＤＭＥＭ培地に２日毎培地を取替えて、脂肪細胞に分化させた。分化が終わった時点に１０％のＦＢＳが添加されたＤＭＥＭ培地に３’－シアリルラクトースまたは６’－シアリルラクトースを０、０．０１、０．１、１、及び１０ｍＭ濃度で１０日間処理した
（２）Ｏｉｌ－Ｒｅｄ Ｏ染色
６－ｗｅｌｌプレートで分化された後、３’－シアリルラクトースまたは６’－シアリルラクトースが処理された３Ｔ３－Ｌ１脂肪細胞をＰＢＳで２回洗浄後、２ｍｌの１０％のホルマリン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、米国）を入れて１０分間常温で固定させる。固定された細胞を乾燥させた後、１ｍｌのＯｉｌ Ｒｅｄ Ｏ染色試薬（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、米国）を細胞に２０分間処理した後、蒸留水でＯｉｌ Ｒｅｄ Ｏ染色試薬を４回に亘って十分に洗浄した後、１ｍｌの１００％ ｉｓｏｐｒｏｐａｎｏｌ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、米国）を入れて染色された脂肪球を流出させた後、５００ｎｍでの吸光度を用いて蓄積された脂肪の量を測定した。
（３）遊離グリセロール（Ｆｒｅｅ ｇｌｙｃｅｒｏｌ）の測定
６－ｗｅｌｌプレートで分化された３Ｔ３－Ｌ１脂肪細胞に６’－シアリルラクトースを０、０．０１、０．１、１、及び１０ｍＭ濃度で処理して１０日の間培養した培地をエッペンドルフチューブにサンプリングした後、ｇｌｙｃｅｒｏｌ ｃｅｌｌ－ｂａｓｅｄ ａｓｓａｙ ｋｉｔ（ｃａｙｍａｎ、１００１１７２５、米国）を使用して遊離グリセロールを分析した。２５ｕｌ培地にｆｒｅｅ ｇｌｙｃｅｒｏｌ ｒｅａｇｅｎｔ １００ｕＬを添加して常温で１５分間反応させた後、５４０ｎｍで吸光度を測定した。
（４）細胞生存率（ｃｅｌｌ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ）測定
分化された後、６’－シアリルラクトースが処理された３Ｔ３－Ｌ１脂肪細胞をｃｅｌｌ ｃｏｕｎｔｉｎｇ ｋｉｔ－８（Ｄｏｊｉｎｄｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ， Ｉｎｃ． 米国）を用いて細胞生存率を測定した。薬物処理後、ＣＣＫ－８ ｒｅａｇｅｎｔ １０ｕＬを添加して２時間の間培養した後、４５０ｎｍで吸光度を測定した。
図２２及び図２３から確認できるように、分化された脂肪細胞でシアリルラクトースの添加により細胞内脂肪が減少し、特に６’－シアリルラクトースを添加した実験群で細胞内脂肪が格段に減少した。
図２２ａ及び図２２ｂは、分化された脂肪細胞で６’－シアリルラクトース（図２２ａ）と３’－シアリルラクトース（図２２ｂ）が投与された場合、細胞内脂肪の変化を示す図である。ＮＴは対照群であり、０．０１、０．１、１、及び１０ｍＭは６’－シアリルラクトース（図２２ａ）と３’－シアリルラクトース（図２２ｂ）を各々０．０１、０．１、１、１０ｍＭ実験群を示す。
図２３ａ及び図２３ｂは、分化された脂肪細胞で６’－シアリルラクトース（図２３ａ）と３’－シアリルラクトース（図２３ｂ）が投与された場合、細胞内脂肪の変化を示す細胞の光学顕微鏡写真（Ｏｉｌ ｒｅｄ Ｏ実験）である。図面で、ＮＴは対照群であり、０．０１、０．１、１、及び１０ｍＭは６’－シアリルラクトース（図２３ａ）と３’－シアリルラクトース（図２３ｂ）は０．０１、０．１、１、及び１０ｍＭ実験群を示す。
一方、図２４から確認できるように、シアリルラクトースは分化された脂肪細胞に１０ｍＭまで細胞生存率（ｃｅｌｌ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ）に影響を与えなかった。
図２４は、分化された脂肪細胞で細胞の生存率に及ぼす６’－シアリルラクトースの影響を示す図である。ＮＴは対照群であり、０．０１、０．１、１、１０、及び１００ｍＭは６’－シアリルラクトースは各々０．０１、０．１、１、１０、及び１００ｍＭ実験群を示す。
また、図２５から確認できるように、シアリルラクトースは脂肪細胞のグリセロール分泌を濃度依存的に増加させて細胞内脂肪を減少させた。
シアリルラクトースは分化された脂肪細胞（ａｄｉｐｏｃｙｔｅ）で細胞生存率に影響無しでグリセロール分泌を促進して細胞内脂肪を減少させ、特に６’－シアリルラクトースが格段に細胞内脂肪を減少させた。
図２５は、分化された脂肪細胞でシアリルラクトースによるグリセロール分泌の変化を示す図である。図面で、ＮＴは対照群であり、０．０１、０．１、１、及び１０ｍＭは３’－シアリルラクトースは各々０．０１、０．１、１、及び１０ｍＭ実験群を示す。
実施形態１５．シアリルラクトース（３’－ＳＬ ＆ ６’－ＳＬ）組成物皮下注射による高脂肪食餌マウスの皮下脂肪変化
（１）高脂肪食餌マウス
４週齢のＣ５６ＢＬ／６マウスをＤｏｏｙｅｕｌ ｂｉｏｔｅｃｈ（大韓民国）から購入した。水は自由に供給してくれて、市販中のペレット餌（Ｄｏｏｙｅｕｌ ｂｉｏｔｅｃｈ、大韓民国）を一週間の間供給した。２８日間Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉｅｔｓ社（Ｎｅｗ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ、Ｕ． Ｓ． Ａ）から購入した高脂肪（６０％脂肪）食餌を供給して脂肪が蓄積されたマウスを構築した。
（２）シアリルラクトース皮下注射
リン酸緩衝溶液に溶かした１００ｍＭ ３’－シアリルラクトースまたは６’－シアリルラクトース０．５ｍｌを高脂肪食餌で脂肪蓄積を誘導したマウスの背の４～５個所に２回（０、４日）皮下注射して４日、及び７日に皮膚を肉眼とダーモスコピー（ｄｅｒｍｏｓｃｏｐｙ）で観察した。対照群（ＣＴＬ）にリン酸緩衝溶液を使用した。
図２６ａ及び２６ｂから確認できるように、シアリルラクトース皮下注射は高脂肪食餌マウスの皮下脂肪を減少させて皮膚表面のシワを誘導した。特に、６’－シアリルラクトースが格段に皮下脂肪を減少させた。
図２６ａ及び２６ｂは、シアリルラクトース皮下注射による高脂肪食餌マウスの皮膚変化を示す図である。皮膚変化を肉眼及びダーモスコピー（図２６ａ及び２６ｂ）で確認した写真である。ＣＴＬは対照群であり、３’－シアリルラクトース（３’－ＳＬ）、６’－シアリルラクトース（６’－ＳＬ）は実験群を示す。
参考文献
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１２． Ｃｌａｒｋ， Ｊ．， Ｒｅｄｄｙ， Ｓ．， Ｚｈｅｎｇ， Ｋ．， Ｂｅｔｅｎｓｋｙ， Ｒ．， Ｓｉｍｏｎ， Ｄ．， ２０１１． Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ ＰＧＣ－１ａｌｐｈａ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ ｗｉｔｈ ａｇｅ ｏｆ ｏｎｓｅｔ ａｎｄ ｒｉｓｋ ｏｆ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ． ＢＭＣ Ｍｅｄ． Ｇｅｎｅｔ． １２， ６９．
１３． Ｗｅｙｄｔ， Ｐ．， Ｓｏｙａｌ， Ｓ．， Ｇｅｌｌｅｒａ， Ｃ．， ＤｉＤｏｎａｔｏ， Ｓ．， Ｗｅｉｄｉｎｇｅｒ， Ｃ．， Ｏｂｅｒｋｏｆｌｅｒ， Ｈ．， Ｌａｎｄｗｅｈｒｍｅｙｅｒ， Ｇ．Ｂ．， Ｐａｔｓｃｈ， Ｗ．， ２００９． Ｔｈｅ ｇｅｎｅ ｃｏｄｉｎｇ ｆｏｒ ＰＧＣ－１ａｌｐｈａ ｍｏｄｉｆｉｅｓ ａｇｅ ａｔ ｏｎｓｅｔ ｉｎ Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ． Ｍｏｌ． Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒ． ４， ３．
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１８． Ｘｉａｎｇ， Ｚ．， Ｖａｌｅｎｚａ， Ｍ．， Ｃｕｉ， Ｌ．， Ｌｅｏｎｉ， Ｖ．， Ｊｅｏｎｇ， Ｈ．－Ｋ．， Ｂｒｉｌｌｉ， Ｅ．， Ｚｈａｎｇ， Ｊ．， Ｐｅｎｇ， Ｑ．， Ｄｕａｎ， Ｗ．， Ｒｅｅｖｅｓ， Ｓ．Ａ．， Ｃａｔｔａｎｅｏ， Ｅ．， Ｋｒａｉｎｃ， Ｄ．， ２０１１． Ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ－ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｇａｍｍａ ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ １α ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ ｔｏ ｄｙｓｍｙｅｌｉｎａｔｉｏｎ ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ． Ｊ． Ｎｅｕｒｏｓｃｉ． ３１， ９５４４－９５５３．
１９． Ｚｈｅｎｇ， Ｂ．， Ｌｉａｏ， Ｚ．， Ｌｏｃａｓｃｉｏ， Ｊ． Ｊ．， Ｌｅｓｎｉａｋ， Ｋ． Ａ．， Ｒｏｄｅｒｉｃｋ， Ｓ． Ｓ．， Ｗａｔｔ， Ｍ． Ｌ．， Ｅｋｌｕｎｄ， Ａ． Ｃ．， Ｚｈａｎｇ－Ｊａｍｅｓ， Ｙ．， Ｋｉｍ， Ｐ． Ｄ．， Ｈａｕｓｅｒ， Ｍ． Ａ． ｅｔ ａｌ． （２０１０）． ＰＧＣ－１ａ， ａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ｅａｒｌｙ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｉｎ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ． Ｓｃｉ． Ｔｒａｎｓｌ． Ｍｅｄ． ２， ５２ｒａ７３．
２０． Ｃｈａｔｕｒｖｅｄｉ， Ｒ．Ｋ．， Ａｄｈｉｈｅｔｔｙ， Ｐ．， Ｓｈｕｋｌａ， Ｓ．， Ｈｅｎｎｅｓｓｙ， Ｔ．， Ｃａｌｉｎｇａｓａｎ， Ｎ．， Ｙａｎｇ， Ｌ．， Ｓｔａｒｋｏｖ， Ａ．， Ｋｉａｅｉ， Ｍ．， Ｃａｎｎｅｌｌａ， Ｍ．， Ｓａｓｓｏｎｅ， Ｊ．， Ｃｉａｍｍｏｌａ， Ａ．， Ｓｑｕｉｔｉｅｒｉ， Ｆ．， Ｂｅａｌ， Ｍ．Ｆ．， ２００９． Ｉｍｐａｉｒｅｄ ＰＧＣ－１ａｌｐｈａ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ｍｕｓｃｌｅ ｉｎ Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ． Ｈｕｍ． Ｍｏｌ． Ｇｅｎｅｔ． １８， ３０４８－３０６５．
２１． Ｚｈａｏ， Ｗ．， Ｖａｒｇｈｅｓｅ， Ｍ．， Ｙｅｍｕｌ， Ｓ．， Ｐａｎ， Ｙ．， Ｃｈｅｎｇ， Ａ．， Ｍａｒａｎｏ， Ｐ．， Ｈａｓｓａｎ， Ｓ．， Ｖｅｍｐａｔｉ， Ｐ．， Ｃｈｅｎ， Ｆ．， Ｑｉａｎ， Ｘ．， Ｐａｓｉｎｅｔｔｉ， Ｇ．， ２０１１． Ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｇａｍｍａ ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ－１ａｌｐｈａ （ＰＧＣ－１ａｌｐｈａ） ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｍｏｔｏｒ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ａｎｄ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｉｎ ａ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ ｌａｔｅｒａｌ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ． Ｍｏｌ． Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒ． ６， ５１．
２２． Ｃｈａｔｕｒｖｅｄｉ ＲＫ ＆ Ｆｌｉｎｔ Ｂｅａｌ Ｍ （２０１３） Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｄｉｓｅａｓｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｂｒａｉｎ． Ｆｒｅｅ Ｒａｄｉｃ Ｂｉｏｌ Ｍｅｄ ６３， １－２９．
２３． Ｓｔ－Ｐｉｅｒｒｅ， Ｊ．， Ｌｉｎ， Ｊ．， Ｋｒａｕｓｓ， Ｓ．， Ｔａｒｒ， Ｐ．Ｔ．， Ｙａｎｇ， Ｒ．， Ｎｅｗｇａｒｄ， Ｃ．Ｂ．， Ｓｐｉｅｇｅｌｍａｎ， Ｂ．Ｍ．， ２００３． Ｂｉｏｅｎｅｒｇｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｇａｍｍａ ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒｓ １ａｌｐｈａ ａｎｄ １ｂｅｔａ （ＰＧＣ－１ａｌｐｈａ ａｎｄ ＰＧＣ－１ｂｅｔａ） ｉｎ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ． Ｊ． Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ． ２７８， ２６５９７－２６６０３．
２４． Ｃｏｗｅｌｌ， Ｒ．Ｍ．， Ｔａｌａｔｉ， Ｐ．， Ｂｌａｋｅ， Ｋ．Ｒ．， Ｍｅａｄｏｒ－Ｗｏｏｄｒｕｆｆ， Ｊ．Ｈ．， Ｒｕｓｓｅｌｌ， Ｊ．Ｗ．， ２００９． Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｏｖｅｌ ｔａｒｇｅｔｓ ｆｏｒ ＰＧＣ－１ａｌｐｈａ ａｎｄ ｈｉｓｔｏｎｅ ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ ｃｅｌｌｓ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍｕｎ． ３７９， ５７８－５８２．
２５． Ｓｔ－Ｐｉｅｒｒｅ， Ｊ．， Ｄｒｏｒｉ， Ｓ．， Ｕｌｄｒｙ， Ｍ．， Ｓｉｌｖａｇｇｉ， Ｊ．Ｍ．， Ｒｈｅｅ， Ｊ．， Ｊａｇｅｒ， Ｓ．， Ｈａｎｄｓｃｈｉｎ， Ｃ．， Ｚｈｅｎｇ， Ｋ．， Ｌｉｎ， Ｊ．， Ｙａｎｇ， Ｗ．， Ｓｉｍｏｎ， Ｄ．Ｋ．， Ｂａｃｈｏｏ， Ｒ．， Ｓｐｉｅｇｅｌｍａｎ， Ｂ．Ｍ．， ２００６． Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｒｅａｃｔｉｖｅ ｏｘｙｇｅｎ ｓｐｅｃｉｅｓ ａｎｄ ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｂｙ ｔｈｅ ＰＧＣ－１ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒｓ． Ｃｅｌｌ １２７， ３９７－４０８．
２６． Ｖａｌｌｅ， Ｉ．， Ａｌｖａｒｅｚ－Ｂａｒｒｉｅｎｔｏｓ， Ａ．， Ａｒｚａ， Ｅ．， Ｌａｍａｓ， Ｓ．， Ｍｏｎｓａｌｖｅ， Ｍ．， ２００５． ＰＧＣ－１ａｌｐｈａ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｔｈｅ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｄｅｆｅｎｓｅ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ． Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ． Ｒｅｓ． ６６， ５６２－５７３．
２７． Ｘｉｏｎｇ， Ｓ．， Ｐａｔｒｕｓｈｅｖ Ｎ．， Ｆｏｒｏｕｕｚａｎｄｅｈ， Ｆ．， Ｈｉｌｅｎｓｋｉ， Ｌ．， Ａｌｅｘａｎｄｅｒ， Ｒ．Ｗ．， ２０１５． ＰＧＣ－１ａ ｍｏｄｕｌａｔｅｓ ｔｅｌｏｍｅｒｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ＤＮＡ ｄａｍａｇｅ ｉｎｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ ａｇａｉｎｓｔ ａｇｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ｃｈｒｏｎｉｃ ｄｉｓｅａｓｅｓ． Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔ １２， １３９１－１３９９．
２８． Ｂｏｒｎｉｑｕｅｌ， Ｓ．， Ｖａｌｌｅ， Ｉ．， Ｃａｄｅｎａｓ， Ｓ．， Ｌａｍａｓ， Ｓ．， Ｍｏｎｓａｌｖｅ， Ｍ．， ２００６． Ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｖｉａ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ ＰＧＣ－１ａｌｐｈａ． Ｔｈｅ ＦＡＳＥＢ ｊｏｕｒｎａｌ： Ｏｆｆｉｃｉａｌ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｉｅｓ ｆｏｒ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ， ２０， ｐｐ． １８８９－１８９１．
２９． Ｌａｉ， Ｌ．， Ｌｅｏｎｅ， Ｔ．Ｃ．， Ｚｅｃｈｎｅｒ， Ｃ．， Ｓｃｈａｅｆｆｅｒ， Ｐ．Ｊ．， Ｋｅｌｌｙ， Ｓ．Ｍ．， Ｆｌａｎａｇａｎ， Ｄ．Ｐ．， Ｍｅｄｅｉｒｏｓ， Ｄ．Ｍ．， Ｋｏｖａｃｓ， Ａ．， Ｋｅｌｌｙ， Ｄ．Ｐ．， ２００８． Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒｓ ＰＧＣ－１ａｌｐｈａ ａｎｄ ＰＧＣ－ｌｂｅｔａ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ ｐｒｏｇｒａｍｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｐｅｒｉｎａｔａｌ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｈｅａｒｔ． Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ． ２２， １９４８－１９６１．
３０． Ｇａｒｎｉｅｒ， Ａ．， Ｆｏｒｔｉｎ， Ｄ．， Ｄｅｌｏｍｅｎｉｅ， Ｃ．， Ｍｏｍｋｅｎ， Ｉ．， Ｖｅｋｓｌｅｒ， Ｖ．， Ｖｅｎｔｕｒａ－Ｃｌａｐｉｅｒ， Ｒ．， ２００３． Ｄｅｐｒｅｓｓｅｄ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｃａｐａｃｉｔｙ ｉｎ ｒａｔ ｆａｉｌｉｎｇ ｃａｒｄｉａｃ ａｎｄ ｓｋｅｌｅｔａｌ ｍｕｓｃｌｅｓ． Ｊ． Ｐｈｙｓｉｏｌ． ５５１， ４９１－５０１．
３１． Ｌｊｕｂｉｃｉｃ Ｖ， Ｊｏｓｅｐｈ Ａ， Ｓａｌｅｅｍ Ａ， ｅｔ ａｌ： Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ａｎｄ ｐｏｓｔ－ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ｓｋｅｌｅｔａｌ ｍｕｓｃｌｅ： ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｅｘｅｒｃｉｓｅ ａｎｄ ａｇｉｎｇ． Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ ２０１０；１８００：２２３－２３４．
３２． Ｇｏｕｓｐｉｌｌｏｕ Ｇ， Ｐｉｃａｒｄ Ｍ， Ｇｏｄｉｎ Ｒ， Ｂｕｒｅｌｌｅ Ｙ， Ｈｅｐｐｌｅ Ｒ： Ｒｏｌｅ ｏｆ ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｇａｍｍａ ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ １－ａｌｐｈａ （ＰＧＣ－１α） ｉｎ ｄｅｎｅｒｖａｔｉｏｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ ａｔｒｏｐｈｙ ｉｎ ａｇｅｄ ｍｕｓｃｌｅ： ｆａｃｔｓ ａｎｄ ｈｙｐｏｔｈｅｓｅｓ． Ｌｏｎｇｅｖ Ｈｅａｌｔｈｓｐａｎ ２０１３；２：１３．
３３． Ｊｏｈｎｓｏｎ ＭＬ， Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ＭＭ， Ｎａｉｒ ＫＳ： Ｓｋｅｌｅｔａｌ ｍｕｓｃｌｅ ａｇｉｎｇ ａｎｄ ｔｈｅ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉｏｎ． Ｔｒｅｎｄｓ Ｅｎｄｏｃｒｉｎ Ｍｅｔ ２０１３；２４：２４７－２５６．
３４． Ｍａｒｚｅｔｔｉ Ｅ， Ｃａｌｖａｎｉ Ｒ， Ｃｅｓａｒｉ Ｍ， ｅｔ ａｌ： Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｓａｒｃｏｐｅｎｉａ ｏｆ ａｇｉｎｇ： ｆｒｏｍ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙｓ ｔｏ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌｓ． Ｉｎｔ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ２０１３；４５：２２８８－２３０１．
３５． Ｃａｌｖａｎｉ Ｒ， Ｊｏｓｅｐｈ Ａ， Ａｄｈｉｈｅｔｔｙ ＰＪ， ｅｔ ａｌ： Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｐａｔｈｗａｙｓ ｉｎ ｓａｒｃｏｐｅｎｉａ ｏｆ ａｇｉｎｇ ａｎｄ ｄｉｓｕｓｅ ｍｕｓｃｌｅ ａｔｒｏｐｈｙ． Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２０１３； ３９４：３９３－４１４．
３６． Ｗａｌｌａｃｅ ＤＣ： Ａ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｐａｒａｄｉｇｍ ｏｆ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ａｎｄ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅｓ， ａｇｉｎｇ， ａｎｄ ｃａｎｃｅｒ： ａ ｄａｗｎ ｆｏｒ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ｍｅｄｉｃｉｎｅ． Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｇｅｎｅｔ ２００５；３９：３５９．
３７． Ｆｉｎｃｋ ＢＮ， Ｋｅｌｌｙ ＤＰ： ＰＧＣ－１ ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒｓ： ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ ｏｆ ｅｎｅｒｇｙ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｉｎ ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ ２００６；１１６： ６１５－６２２
３８． Ｔｉｎａ Ｗｅｎｚ， Ｓｕｓａｎａ Ｇ． Ｒｏｓｓｉ， Ｒｉｃｈａｒｄ Ｌ． Ｒｏｔｕｎｄｏ， Ｂｒｕｃｅ Ｍ． Ｓｐｉｅｇｅｌｍａｎ， ａｎｄ Ｃａｒｌｏｓ Ｔ． Ｍｏｒａｅｓ． ２００９， Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｍｕｓｃｌｅ ＰＧＣ－１ａ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｃｔｓ ｆｒｏｍ ｓａｒｃｏｐｅｎｉａ ａｎｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｄｉｓｅａｓｅ ｄｕｒｉｎｇ ａｇｉｎｇ， ＰＮＡＳ１０６， ２０４０５－２０４１０．
３９． Ｒｏｌｆｅ， Ｄ． Ｆ． ａｎｄ Ｂｒｏｗｎ， Ｇ． Ｃ． （１９９７）． Ｃｅｌｌｕｌａｒ ｅｎｅｒｇｙ ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｏｒｉｇｉｎ ｏｆ ｓｔａｎｄａｒｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｒａｔｅ ｉｎ ｍａｍｍａｌｓ． Ｐｈｙｓｉｏｌ． Ｒｅｖ． ７７， ７３１－７５８．
４０． Ｊａｓｔｒｏｃｈ， Ｍ．， Ｄｉｖａｋａｒｕｎｉ， Ａ． Ｓ．， Ｍｏｏｋｅｒｊｅｅ， Ｓ．， Ｔｒｅｂｅｒｇ， Ｊ． Ｒ． ａｎｄ Ｂｒａｎｄ， Ｍ． Ｄ． （２０１０）． Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｐｒｏｔｏｎ ａｎｄ ｅｌｅｃｔｒｏｎ ｌｅａｋｓ． Ｅｓｓａｙｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ． ４７， ５３－６７．
４１． Ｆｕｋｕｉ Ｙ， Ｍａｓｕｉ Ｓ， Ｏｓａｄａ Ｓ， Ｕｍｅｓｏｎｏ Ｋ， Ｍｏｔｏｊｉｍａ Ｋ． ２０００． Ａ ｎｅｗ ｔｈｉａｚｏｌｉｄｉｎｅｄｉｏｎｅ， ＮＣ－２１００， ｗｈｉｃｈ ｉｓ ａ ｗｅａｋ ＰＰＡＲ－ｇ ａｃｔｉｖａｔｏｒ， ｅｘｈｉｂｉｔｓ ｐｏｔｅｎｔ ａｎｔｉｄｉａｂｅｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔｓ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｅｓ ｕｎｃｏｕｐｌｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ １ ｉｎ ｗｈｉｔｅ ａｄｉｐｏｓｅ ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ ＫＫＡｙ ｏｂｅｓｅ ｍｉｃｅ． Ｄｉａｂｅｔｅｓ ４９： ７５９－７６７
４２． Ｗｉｌｓｏｎ－Ｆｒｉｔｃｈ Ｌ， Ｎｉｃｏｌｏｒｏ Ｓ， Ｃｈｏｕｉｎａｒｄ Ｍ， Ｌａｚａｒ ＭＡ， Ｃｈｕｉ ＰＣ， Ｌｅｓｚｙｋ Ｊ， Ｓｔｒａｕｂｈａａｒ Ｊ， Ｃｚｅｃｈ ＭＰ， Ｃｏｒｖｅｒａ Ｓ． ２００４． Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ ｉｎ ａｄｉｐｏｓｅ ｔｉｓｓｕｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｏｂｅｓｉｔｙ ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １１４： １２８１－１２８９．
４３． Ｑｕｉｎｌａｎ， Ｃ． Ｌ．， Ｔｒｅｂｅｒｇ， Ｊ． Ｒ． ａｎｄ Ｂｒａｎｄ， Ｍ． Ｄ． （２０１１）． Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｔｏ ｔｈｅ ａｇｉｎｇ ｐｒｏｃｅｓｓ． Ｉｎ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ ｔｈｅ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ａｇｉｎｇ （Ｓｅｖｅｎｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ） （ｅｄ． Ｊ． Ｍ． Ｅｄｗａｒｄ ａｎｄ Ｎ． Ａ． Ｓｔｅｖｅｎ）， ｐｐ． ４７－６１． Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， ＣＡ： Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ．
４４． Ｓａｈｉｎ， Ｅ．， Ｃｏｌｌａ， Ｓ．， Ｌｉｅｓａ， Ｍ．， Ｍｏｓｌｅｈｉ， Ｊ．， Ｍｕ¨ｌｌｅｒ， Ｆ． Ｌ．， Ｇｕｏ， Ｍ．， Ｃｏｏｐｅｒ， Ｍ．， Ｋｏｔｔｏｎ， Ｄ．， Ｆａｂｉａｎ， Ａ． Ｊ．， Ｗａｌｋｅｙ， Ｃ． ｅｔ ａｌ． （２０１１）． Ｔｅｌｏｍｅｒｅ ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｓ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ａｎｄ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｃｏｍｐｒｏｍｉｓｅ． Ｎａｔｕｒｅ ４７０， ３５９－３６５．
４５． Ｋｕｊｏｔｈ， Ｇ． Ｃ．， Ｈｉｏｎａ， Ａ．， Ｐｕｇｈ， Ｔ． Ｄ．， Ｓｏｍｅｙａ， Ｓ．， Ｐａｎｚｅｒ， Ｋ．， Ｗｏｈｌｇｅｍｕｔｈ， Ｓ． Ｅ．， Ｈｏｆｅｒ， Ｔ．， Ｓｅｏ， Ａ． Ｙ．， Ｓｕｌｌｉｖａｎ， Ｒ．， Ｊｏｂｌｉｎｇ， Ｗ． Ａ． ｅｔ ａｌ． （２００５）． Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ＤＮＡ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ， ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ， ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｍａｍｍａｌｉａｎ ａｇｉｎｇ． Ｓｃｉｅｎｃｅ ３０９， ４８１－４８４．
４６． Ｔｒｉｆｕｎｏｖｉｃ， Ａ．， Ｗｒｅｄｅｎｂｅｒｇ， Ａ．， Ｆａｌｋｅｎｂｅｒｇ， Ｍ．， Ｓｐｅｌｂｒｉｎｋ， Ｊ． Ｎ．， Ｒｏｖｉｏ， Ａ． Ｔ．， Ｂｒｕｄｅｒ， Ｃ． Ｅ．， Ｂｏｈｌｏｏｌｙ－Ｙ， Ｍ．， Ｇｉｄｌｏ¨ｆ， Ｓ．， Ｏｌｄｆｏｒｓ， Ａ．， Ｗｉｂｏｍ， Ｒ． ｅｔ ａｌ． （２００４）． Ｐｒｅｍａｔｕｒｅ ａｇｅｉｎｇ ｉｎ ｍｉｃｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ＤＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ． Ｎａｔｕｒｅ ４２９， ４１７－４２３．
４７． Ｌｉｎ， Ｊ．， Ｗｕ， Ｈ．， Ｔａｒｒ， Ｐ． Ｔ．， Ｚｈａｎｇ， Ｃ． Ｙ．， Ｗｕ， Ｚ．， Ｂｏｓｓ， Ｏ．， Ｍｉｃｈａｅｌ， Ｌ． Ｆ．， Ｐｕｉｇｓｅｒｖｅｒ， Ｐ．， Ｉｓｏｔａｎｉ， Ｅ．， Ｏｌｓｏｎ， Ｅ． Ｎ． ｅｔ ａｌ． （２００２ｂ）． Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｃｏ－ａｃｔｉｖａｔｏｒ ＰＧＣ－１ ａｌｐｈａ ｄｒｉｖｅｓ ｔｈｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｌｏｗ－ｔｗｉｔｃｈ ｍｕｓｃｌｅ ｆｉｂｒｅｓ． Ｎａｔｕｒｅ ４１８， ７９７－８０１．
４８． Ｄｉｌｌｏｎ， Ｌ． Ｍ．， Ｗｉｌｌｉａｍｓ， Ｓ． Ｌ．， Ｈｉｄａ， Ａ．， Ｐｅａｃｏｃｋ， Ｊ． Ｄ．， Ｐｒｏｌｌａ， Ｔ． Ａ．， Ｌｉｎｃｏｌｎ， Ｊ． ａｎｄ Ｍｏｒａｅｓ， Ｃ． Ｔ． （２０１２）． Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ｍｕｓｃｌｅ ｉｍｐｒｏｖｅｓ ａｇｉｎｇ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｍｔＤＮＡ ｍｕｔａｔｏｒ ｍｏｕｓｅ． Ｈｕｍ． Ｍｏｌ． Ｇｅｎｅｔ． ２１， ２２８８－２２９７．
４９． Ｗｅｎｚ， Ｔ．， Ｒｏｓｓｉ， Ｓ． Ｇ．， Ｒｏｔｕｎｄｏ， Ｒ． Ｌ．， Ｓｐｉｅｇｅｌｍａｎ， Ｂ． Ｍ． ａｎｄ Ｍｏｒａｅｓ， Ｃ． Ｔ． （２００９）． Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｍｕｓｃｌｅ ＰＧＣ－１ａｌｐｈａ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｃｔｓ ｆｒｏｍ ｓａｒｃｏｐｅｎｉａ ａｎｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｄｉｓｅａｓｅ ｄｕｒｉｎｇ ａｇｉｎｇ． Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ １０６， ２０４０５－２０４１０．

Claims (10)

  1. 有効成分として、α－ＮｅｕＮＡｃ－（２→３）－β－Ｄ－Ｇａｌ－（１→４）－Ｄ－Ｇｌｃまたはα－ＮｅｕＮＡｃ－（２→６）－β－Ｄ－Ｇａｌ－（１→４）－Ｄ－Ｇｌｃである化合物、その塩、水和物、または溶媒和物を含む、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体コアクチベータ１－アルファ（ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ １－ａｌｐｈａ： ＰＧＣ－１α）の発現減少と関連した疾病または症状を予防または治療するための組成物であって、
    前記疾病または症状が、癲癇である組成物。
  2. 前記組成物は、溶液、懸濁液、シロップ剤、エマルジョン、リポソーム、散剤、粉末剤、顆粒剤、錠剤、徐放型製剤、及びカプセル剤で構成された群から選択された剤型であることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
  3. 前記組成物は経口投与用組成物であり、リポソームを含んだ薬物伝達体または徐放型製剤の剤型であることを特徴とする、請求項２に記載の組成物。
  4. 前記組成物は非経口投与用組成物であり、リポソーム及び超音波造影剤（ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ ｃｏｎｔｒａｓｔ ａｇｅｎｔ）を含んだ薬物伝達体または徐放型製剤の剤型であることを特徴とする、請求項２に記載の組成物。
  5. 薬剤学的組成物、機能性食品（ｎｕｔｒａｃｅｕｔｉｃａｌ）組成物、または食品組成物であることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
  6. 前記塩は薬学的に許容可能な、または食品学的に許容可能な塩であることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
  7. 前記組成物は、リポソーム、混合リポソーム、オレオソーム、ニオソーム、エトソーム、ミリカプセル、マイクロカプセル、ナノカプセル、ナノ構造化された脂質担体、スポンジ、サイクロデキストリン、小胞（ｖｅｓｉｃｌｅ）、ミセル（ｍｉｃｅｌｌｅ）、界面活性剤の混合ミセル、界面活性剤－燐脂質混合ミセル、ミリスフェア、マイクロスフェア、ナノスフェア、リポスフェア、マイクロエマルジョン、ナノエマルジョン、ミニ粒子、ミリ粒子、マイクロ粒子、ナノ粒子、または固体脂質ナノ粒子を含む食品学的、または薬剤学的伝達システムまたは持続放出システム内に組み込まれていることを特徴とする、請求項５に記載の組成物。
  8. 前記ナノカプセルは、マイクロエマルジョンを含有することを特徴とする、請求項７に記載の組成物。
  9. 前記組成物は、ＰＧＣ－１αの発現を増加させることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
  10. 前記化合物は、α－ＮｅｕＮＡｃ－（２→６）－β－Ｄ－Ｇａｌ－（１→４）－Ｄ－Ｇｌｃであることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
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