JP7459226B2 - 生物活性植物化学物質 - Google Patents

Description

本発明は、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）－３，４，５－トリヒドロキシピペリジン－２－カルボン酸（ｉｄｏＢＲ１）を含む組成物の生成のためのプロセス、さらにそれに基づく様々な生成物、化合物、組成物、医学的使用及び方法及び炎症、感染症、皮膚障害の処置、シアリダーゼ活性のｉｎ ｖｉｖｏ阻害を含む、医学における使用のための様々な組成物の調製におけるそれらの使用、ならびに様々な植物源から前記組成物を単離及び精製するためのプロセスに関する。

本発明はまた、Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｅ抽出物（例えば、Ｃｕｃｕｍｉｓ抽出物）の品質をモニタリングするための方法、Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｅ抽出物を生成するためのプロセス及びそのようなプロセスによって得ることができるＣｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｅ抽出物（及び特にＣｕｃｕｍｉｓ抽出物）に関する。

キュウリ（Ｃｕｃｕｍｉｓ ｓａｔｉｖｕｓ）は、カボチャを含むウリ科Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｅの広く栽培されている植物である。キュウリは、インドを発祥とし、西アジアで少なくとも３０００年間栽培されており、ヨーロッパの他の地域にはローマ人によって導入されたと考えられている。キュウリ栽培の記録は、９世紀にフランスで、１４世紀にイングランドで、１６世紀半ばに北米で現れている。

キュウリ及びキュウリ抽出物は、抗炎症特性を有するものとして長く認識されており、目の下の腫れ及び日焼けを含む様々なタイプの皮膚問題に局所的に使用されてきた。キュウリは、エジプト、ギリシャ及びローマの古代文明で非常に人気があり、それは食品としてだけでなく、その皮膚を癒す特性のために使用された。

イミノ糖酸（ＩＳＡ）は、イミノ糖として知られている植物化学物質のより広く分布しているクラスのサブクラスを構成する。多くの既知のＩＳＡは、植物化学物質であり、二次代謝産物として植物組織に存在する（それらは防御において役割を果たし得る）。イミノ糖は植物に広く分布しているが（Ｗａｔｓｏｎ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ５６，２６５）、イミノ糖酸ははるかに少なく分布しており、単離及び同定がより困難である。（Ｍａｒｔｉｎｅｚ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，２０１９，Ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ５１，９９１）。

イミノ糖酸ｉｄｏＢＲ１は、より古いキュウリの品種には存在するが、所定の現代の商業品種には存在しない。それは、所定のキュウリ果実の主要成分であることが示されており、キュウリにおいて唯一のイミノ糖酸である。それは、所定のカボチャ及びヒョウタンではマイナー成分である。

ＷＯ２０１３／０５４０７０は、Ｃｕｃｕｍｉｓ抽出物をベースとした抗炎症ハーブ薬における重要な生物活性要素としてｉｄｏＢＲ１を同定している。

ハーブ食品添加剤及び治療剤
ハーブ治療剤及び補填剤の使用について現在大きな関心があり、食品製造者、ヘルスケア企業及び医療専門職から、ハーブ製品は価値があり、確立された製剤及び処置を補完し得るという承認が増えている。ハーブ食品添加剤及び補填剤は、現在広く使用されている。

しかしながら、ハーブ食品添加剤の品質管理は、植物材料の複雑な特質及び固有の不均一性のため困難である。ハーブ及び植物ベースの食品添加剤に使用される材料は通常、植物全体またはその一部もしくは抽出物である。植物材料は多くの異なる化学成分を含有するので、材料は複雑な混合物である。これにより、材料の品質を標準化及び制御することが非常に困難となる。その上、多くのハーブ食品添加剤は、２種以上の植物ベースの成分の混合物であり、そのため、混合物の混合物であるので、さらなるレベルの複雑性をもたらす。さらに、使用される製造のレシピ及び方法はしばしば均一ではなく、未公開のままであり得る。これらの要因により、異なる供給源から得られ、表面上は同一である所与の生成物の２つのサンプルが実際に同じ成分の混合物を含有することを確保することが極めて困難となる。そのような材料の品質の制御の困難性をもたらすこの問題は、ハーブ熟練者の中でさえも所定のハーブ抽出物の使用を制限している。

また、ハーブ薬の実務においてまたは食品補填剤／栄養補助剤として使用される植物は、現地では頻繁に入手できず、そのため、エンドユーザから離れた供給源から入手する必要があるという事実から別の問題が生じる。しかしながら、遠隔地からのそのような植物の供給は、不安定で不正確である場合があり、その理由は特にそのような多くの植物には同一性及び品質基準を含む詳細なモノグラフが存在しないからである。薬用植物に見られる成分の複雑な混合物は、植物源、植物が生育されている場所、その近くでどのような他の植物または微生物が生育しているか、植物が収穫される時期、材料が保管及び処理される条件ならびに使用される抽出手順を含む多くの要因に応じて種類及び濃度が大幅に異なる。

そのため、ｉｄｏＢＲ１を含有するハーブ生成物をプロファイル化し、それにより活性に関連し得る植物由来生成物のための標準仕様を確立し、それによりハーブ薬、食品添加剤、化粧品、栄養補助剤の生成における品質制御を可能にし、生物活性要素を理想的に（構造的に及び／または機能的に）定量することができる繊細なプロセスが必要とされている。

本発明者は今回、ｉｄｏＢＲ１がシアリダーゼ及びＴＮＦ－アルファに対する阻害活性を示す一方で、ＩＬ－１０刺激活性を示すことを発見した。この知見により、関連生物活性要素であるｉｄｏＢＲ１が今では植物材料の分画後に迅速に及び容易に機能的にアッセイされ得るので、Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｅ科の植物を含む植物源からの植物材料からの抽出物に基づいて化粧用、栄養補助用または薬学的組成物を製剤化するための改善されたプロセスの開発が可能となる。

よって、標準仕様に従う化粧用、栄養補助用または薬学的組成物の提供が大幅に容易化される：本発明により、抽出物の機能品質の迅速アッセイが可能となる。また、時間がかかり高価な物理的特性化（例えば、ＧＣ－ＭＳ及び／またはＨＰＬＣによる）が任意となる。さらに、抽出物の機能性がアッセイされるため、共抽出された部分による干渉／阻害の可能性の影響をモニタリングすることができる。これは、抽出物が局所適用のために製剤化された化粧品用途の場合に特に重要であり得る。

よって、本発明によれば、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）－３，４，５－トリヒドロキシピペリジン－２－カルボン酸（ｉｄｏＢＲ１）を含む組成物の生成のためのプロセスであって、前記プロセスは、
（ａ）Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｅ科の植物を含む植物源からの植物材料を提供する工程、
（ｂ）前記植物材料を分画してｉｄｏＢＲ１が濃縮された抽出物を生成する工程、
（ｃ）前記抽出物を（ｉ）シアリダーゼまたはＴＮＦ－アルファに対する阻害活性；または（ｉｉ）ＩＬ－１０刺激活性についてアッセイする工程、及び
（ｄ）前記アッセイされた抽出物を化粧的に、栄養補助的にまたは薬学的に許容可能な賦形剤または担体を用いて製剤化して化粧用、栄養補助用または薬学的組成物を生成する工程
を含む、方法が提供される。

植物源は、ＣｕｃｕｍｉｓまたはＣｕｃｕｒｂｉｔａ属の植物を含み得る。Ｃｕｃｕｍｉｓ属の好ましい種は、Ｃｕｃｕｍｉｓ ｓａｔｉｖｕｓ種（キュウリ）の植物である。Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ属の好ましい種は、Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ ｍｅｌｏｓまたはＣｕｃｕｒｂｉｔａ ｍｏｓｃｈａｔａ種である。
本開示は、以下の［１］から［５３］を含む。
［１］（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）－３，４，５－トリヒドロキシピペリジン－２－カルボン酸（ｉｄｏＢＲ１）を含む組成物の生成のためのプロセスであって、上記プロセスは、
（ｅ）Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｅ科の植物を含む植物源からの植物材料を提供する工程、
（ｆ）上記植物材料を分画してｉｄｏＢＲ１が濃縮された抽出物を生成する工程、
（ｇ）上記抽出物を（ｉ）シアリダーゼに対する阻害活性、（ｉｉ）ＴＮＦ－アルファに対する阻害活性、または（ｉｉｉ）ＩＬ－１０刺激活性についてアッセイする工程、及び
（ｈ）上記アッセイされた抽出物を化粧的に、栄養補助的にまたは薬学的に許容可能な賦形剤または担体を用いて製剤化して化粧用、栄養補助用または薬学的組成物を生成する工程
を含む、上記プロセス。
［２］上記植物源は、Ｃｕｃｕｍｉｓ属の、例えば、Ｃｕｃｕｍｉｓ ｓａｔｉｖｕｓ種の植物を含む、上記［１］に記載のプロセス。
［３］上記植物源は、Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ属の、例えば、Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ ｍｅｌｏｓまたはＣｕｃｕｒｂｉｔａ ｍｏｓｃｈａｔａ種の植物を含む、上記［１］に記載のプロセス。
［４］上記植物材料は、果物、果物部分、果物抽出物、果物ジュース、種子及び／または葉を含む、先行上記のいずれか１項に記載のプロセス。
［５］上記植物材料は、Ｃｕｃｕｍｉｓ ｓａｔｉｖｕｓ種の植物からのキュウリを任意に含む、キュウリを含む、先行上記のいずれか１項に記載のプロセス。
［６］ｉｄｏＢＲ１は単離され、例えば、少なくとも１％ｗ／ｗ、５％ｗ／ｗ、１０％ｗ／ｗ；１５％ｗ／ｗ；２０％ｗ／ｗ；２５％ｗ／ｗ；３０％ｗ／ｗ；３５％ｗ／ｗ；４０％ｗ／ｗ；４５％ｗ／ｗ；５０％ｗ／ｗ、６０％ｗ／ｗ、７０％ｗ／ｗ、８０％ｗ／ｗ、９０％ｗ／ｗ、９９％ｗ／ｗ（乾燥重量ベース）のレベルで上記組成物に存在する、先行上記のいずれか１項に記載のプロセス。
［７］ｉｄｏＢＲ１は、最大で５％ｗ／ｗ（乾燥重量ベース）のレベルで上記組成物に存在する、先行上記［１］～［５］のいずれか１項に記載のプロセス。
［８］ｉｄｏＢＲ１は、最大で１％ｗ／ｗ（乾燥重量ベース）のレベルで上記組成物に存在する、上記［７］に記載のプロセス。
［９］工程（ｄ）の組成物は、化粧用組成物である、先行上記のいずれか１項に記載のプロセス。
［１０］工程（ｄ）の組成物は、栄養補助用組成物である、上記［１］～［８］のいずれか１項に記載のプロセス。
［１１］工程（ｄ）の組成物は、薬学的組成物である、上記［１］～［８］のいずれか１項に記載のプロセス。
［１２］工程（ｄ）の組成物は、（ｉ）薬学的パック、キットもしくは患者パックの形態、または（ｉｉ）単位投薬形態である、上記［１１］に記載のプロセス。
［１３］上記製剤化工程は、上記アッセイされた抽出物を薬学的に許容可能な賦形剤と混合することを含む、上記［１１］または［１２］に記載のプロセス。
［１４］工程（ｃ）において、上記抽出物は、シアリダーゼに対する阻害活性についてアッセイされる、先行上記のいずれか１項に記載のプロセス。
［１５］工程（ｃ）において、上記抽出物は、ＴＮＦ－アルファに対する阻害活性についてアッセイされる、先行上記のいずれか１項に記載のプロセス。
［１６］工程（ｃ）において、上記抽出物は、ＩＬ－１０刺激活性についてアッセイされる、先行上記のいずれか１項に記載のプロセス。
［１７］療法または予防において使用するための、先行上記のいずれか１項に記載のプロセスによって得ることができる、または生成される組成物。
［１８］炎症性障害を処置する方法において使用するための上記［１７］に記載の使用のための組成物。
［１９］上記炎症性障害は、（ａ）非局在化炎症性障害（例えば、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、強皮症及び過敏症）；（ｂ）慢性前立腺炎；（ｃ）糸球体腎炎；（ｄ）炎症性腸疾患；（ｅ）骨盤内炎症性疾患；（ｆ）再かん流傷害；（ｇ）関節リウマチ；（ｈ）移植拒絶反応；（ｉ）血管炎；（ｊ）喘息；（ｋ）座瘡；（ｌ）変形性関節症；（ｍ）口腔、粘膜、または胃腸炎症；（ｎ）眼炎症；（ｏ）鼻炎症；（ｐ）耳炎症；（ｑ）ステロイド反応性炎症性障害；（ｒ）皮膚炎症性疾患（例えば、光線性角化症、尋常性座瘡、面皰性座瘡、酒さ性座瘡、嚢腫結節型座瘡、アレルギー性接触皮膚炎、血管性浮腫、水疱性類天疱瘡、皮膚薬物反応、多形性紅斑、エリテマトーデス、光線皮膚炎、乾癬性関節炎、強皮症及びじんましん、乾癬、皮膚炎、アトピー性皮膚炎、強皮症、ステロイド反応性皮膚炎症性障害、尿毒症性掻痒症ならびに放射線、化学療法及び環境刺激物に対する曝露に関連する皮膚状態）；（ｓ）炎症性自己免疫疾患（例えば、強直性脊椎炎、クローン病、潰瘍性結腸炎、アルツハイマー病、多発性硬化症、運動ニューロン疾患、パーキンソン病、慢性疲労症候群、インスリン依存性糖尿病、アジソン病、グッドパスチャー症候群、ＩｇＡ腎症、間質腎炎、シェーグレン症候群及び自己免疫性膵炎）；（ｔ）変形性関節症；（ｕ）歯周病；（ｖ）糖尿病性腎症；（ｗ）慢性閉塞性肺疾患；（ｘ）アテローム性動脈硬化症；（ｙ）移植片対宿主病；（ｚ）慢性骨盤内炎症性疾患；（ａ’）子宮内膜症；（ｂ’）慢性肝炎；（ｃ’）結核及び（ｄ’）皮膚炎症、例えば、日光、アレルゲン、刺激物または熱傷に対する曝露によって引き起こされる皮膚炎症から選択される、上記［１８］に記載の使用のための組成物。
［２０］上記炎症性障害は、自己免疫疾患、喘息またはアレルギーである、上記［１８］に記載の使用のための組成物。
［２１］上記炎症性障害は、グレーブス病；関節リウマチ；橋本甲状腺炎；白斑；糖尿病（例えば、Ｉ型糖尿病またはＩＩ型糖尿病）；悪性貧血；多発性硬化症；糸球体腎炎；全身性ループスＥ（ＳＬＥ、ループス）；シェーグレン症候群；強皮症；乾癬；強直性脊椎炎；重症筋無力症；天疱瘡；多発性筋炎；皮膚筋炎；ブドウ膜炎；ギラン・バレー症候群；クローン病；潰瘍性結腸炎及び炎症性腸疾患（ＩＢＤ）から選択される自己免疫疾患である、上記［２０］に記載の使用のための組成物。
［２２］上記炎症性障害は、アトピー性アレルギー、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎、過好酸球増加症、過敏性腸症候群、アレルゲン誘導片頭痛、細菌アレルギー、気管支アレルギー（喘息）、接触アレルギー（皮膚炎）、遅延型アレルギー、花粉症（枯草熱）、薬物アレルギー、刺し傷アレルギー、噛み傷アレルギー、胃腸アレルギー；食品アレルギー；及び物理的アレルギー、例えば、寒冷じんましん、血管性浮腫、コリン性じんましん及び光線過敏症から選択されるアレルギーである、上記［２０］に記載の使用のための組成物。
［２３］上記炎症性障害は、移植片対宿主病；サルコイドーシス；散在性血管内凝固、アテローム性動脈硬化症、川崎病を含む血管炎症性疾患；血管炎；シェーグレン症候群；乾癬性関節炎；腸疾患性関節炎；反応性関節炎及び炎症性腸疾患に関連する関節炎から選択される、上記［１８］に記載の使用のための組成物。
［２４］新生物を処置する方法において使用するための上記［１７］に記載の使用のための組成物。
［２５］上記新生物は、良性、前がん性及び悪性新生物、過形成、化生ならびに異形成から選択される、上記［２４］に記載の使用のための組成物。
［２６］上記新生物は、悪性新生物（がん）である、上記［２５］に記載の使用のための組成物。
［２７］上記悪性新生物は、（ａ）がん；（ｂ）芽細胞腫；（ｃ）白血病；（ｄ）リンパ腫；（ｅ）骨髄腫；（ｆ）肉腫及び（ｇ）混合型のがんから選択される、上記［２６］に記載の使用のための組成物。
［２８］上記悪性新生物は、膀胱、乳房（例えば、原発性乳房腫瘍、リンパ節転移のない乳癌、乳房の侵襲性導管腺癌及び非類内膜乳癌）、結腸（例えば、結腸腺癌及び結腸腺腫などの大腸癌）、腎臓、表皮（例えば、悪性黒色腫）、肝臓、肺（例えば、腺癌、副腎皮質、鼻咽頭、小細胞肺癌及び非小細胞肺癌）、食道、胆嚢、卵巣、膵臓（例えば、膵外分泌腺癌）、胃、子宮頸部、甲状腺、前立腺、胃腸系（例えば、胃腸間質腫瘍）または皮膚（例えば、扁平上皮癌）のがんから選択されるがんである、上記［２６］に記載の使用のための組成物。
［２９］上記悪性新生物は、リンパ性白血病、例えば、前駆細胞白血病、成熟Ｂ細胞白血病、成熟Ｔ細胞白血病及びＮＫ細胞白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄増殖性疾患及び骨髄異形成症候群から選択される白血病である、上記［２６］に記載の使用のための組成物。
［３０］上記悪性新生物は、（ａ）ホジキンリンパ腫；（ｂ）非ホジキンリンパ腫、例えば、前駆細胞リンパ腫、成熟Ｂ細胞リンパ腫、成熟Ｔ細胞リンパ腫及びＮＫ細胞リンパ腫；（ｃ）バーキットリンパ腫及び（ｄ）リンパ網内系新生物、例えば、マントル細胞リンパ腫から選択されるリンパ腫である、上記［２６］に記載の使用のための組成物。
［３１］上記悪性新生物は、骨肉腫；軟骨肉腫；平滑筋肉腫；横紋筋肉腫；中皮腫；線維肉腫；血管肉腫または血管内皮腫；脂肪肉腫；神経膠腫；星状細胞腫；粘液肉腫及び間葉系及び混合性中胚葉腫瘍から選択される肉腫である、上記［２６］に記載の使用のための組成物。
［３２］ウイルス感染症を処置する方法において使用するための上記［１７］に記載の使用のための組成物。
［３３］細菌感染症を処置する方法において使用するための上記［１７］に記載の使用のための組成物。
［３４］上記方法は、ｉｎ ｖｉｖｏで片利共生及び／または病原性細菌増殖を阻害することを含む、上記［３３］に記載の使用のための組成物。
［３５］上記方法は、宿主－細菌細胞相互作用を阻害すること、及び／または哺乳動物（例えば、ヒト）宿主において細菌バイオフィルム形成を阻害または排除することを含む、上記［３４］に記載の使用のための組成物。
［３６］上記方法は、細菌バイオフィルム（例えば、歯肉縁下プラークバイオフィルム及び粘膜バイオフィルム）の存在によって媒介または特性化される疾患及び障害の処置または予防を含む、上記［３４］または［３５］に記載の使用のための組成物。
［３７］Ｔａｎｎｅｒｅｌｌａ ｆｏｒｓｙｔｈｉａ、Ｔａｎｎｅｒｅｌｌａ ｄｅｎｔｉｃｏｌａ、Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓまたはＧａｒｄｎｅｒｅｌｌａ ｖａｇｉｎａｌｉｓの感染によって引き起こされる歯周病、細菌性膣症及び／または疾患を処置する方法において使用するための上記［１７］に記載の使用のための組成物。
［３８］アテローム形成、例えば、アテローム性動脈硬化症を処置する方法において使用するための上記［１７］に記載の使用のための組成物。
［３９］哺乳動物宿主における片利共生細菌増殖を調節する方法において使用するための上記［１７］に記載の使用のための組成物。
［４０］上記方法は、哺乳動物、例えば、ヒト宿主における片利共生細菌の組成の調節を含む、上記［３９］に記載の使用のための組成物。
［４１］疾患の処置のためのまたは上記［１８］～［４０］のいずれか１項で定義される方法において使用するための薬品の製造のための上記［１７］で定義される組成物の使用。
［４２］化粧用、栄養補助用、ハーブ薬用または薬学的組成物であって、上記［１］～［１６］のいずれか１項に記載のプロセスによって得ることができるまたは生成される組成物を含み、任意に化粧的に、栄養補助的にまたは薬学的に許容可能な賦形剤または担体をさらに含む、上記組成物。
［４３］皮膚の腫れまたは紅斑の減少のための化粧方法であって、例えば、上記皮膚への局所適用による、上記［４２］で定義される組成物の対象への投与を含む、上記方法。
［４４］補填された食料または飲料を生成するためのプロセスであって、（ａ）上記［４２］で定義される組成物を提供する工程；及び（ｂ）上記工程（ａ）の組成物を食料または飲料に添加して、補填された食料または飲料を生成する工程を含む、上記プロセス。
［４５］化粧用、栄養補助用または薬学的組成物の品質をモニタリングするための方法であって、（ａ）上記組成物のサンプルを提供する工程；及び（ｂ）上記サンプルを（ｉ）シアリダーゼに対する阻害活性；（ｉｉ）ＴＮＦ－アルファに対する阻害活性；または（ｉｉｉ）ＩＬ－１０刺激活性についてアッセイする工程を含む、上記方法。
［４６］上記化粧用、栄養補助用または薬学的組成物は、ｉｄｏＢＲ１を含む、上記［４５］に記載の方法。
［４７］上記化粧用、栄養補助用または薬学的組成物は、Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｅ科の植物を含む植物源からの植物材料を含む、上記［４５］または［４６］に記載の方法。
［４８］上記植物源は、Ｃｕｃｕｍｉｓ属の、例えば、Ｃｕｃｕｍｉｓ ｓａｔｉｖｕｓ種の植物を含む、上記［４７］に記載の方法。
［４９］上記植物材料は、果物、果物部分、果物抽出物、果物ジュース、種子及び／または葉を含む、上記［４７］または上記［４８］に記載の方法。
［５０］上記植物材料は、キュウリを含む、上記［４９］に記載の方法。
［５１］上記植物材料は、Ｃｕｃｕｍｉｓ ｓａｔｉｖｕｓ種の植物からのキュウリを含む、上記［５０］に記載の方法。
［５２］上記［２４］～［４０］のいずれか１項で定義される方法において使用するためのｉｄｏＢＲ１。
［５３］上記［２４］～［４０］のいずれか１項で定義される処置方法であって、有効量のｉｄｏＢＲ１をそれを必要とする対象に投与することを含む、上記方法。

本明細書で言及されたすべての刊行物、特許、特許出願及び他の参考文献は、各々の個々の刊行物、特許または特許出願が参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示され、その内容が完全に記載されているかのように、すべての目的のために参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。

定義
本明細書で使用される場合、また、別段具体的に示されない限り、以下の用語は、用語が当該技術分野において享受し得る任意のより広い（またはより狭い）意味に加えて以下の意味を有することが意図される。

文脈によって別段必要とされない限り、本明細書での単数形の使用は、複数形を含むものと解釈され、その逆も同じである。ある実体に関連して使用される用語「ａ」または「ａｎ」は、その実体の１つ以上を指すために解釈される。このように、用語「ａ」（または「ａｎ」）、「１つ以上」、及び「少なくとも１つ」は、本明細書で互換的に使用される。

本明細書で使用される場合、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などのその変形型は、任意の記述された完全体（例えば、特徴、要素、特質、特性、方法／プロセス工程または限定）または完全体の群（例えば、特徴、要素、特質、特性、方法／プロセス工程または限定）の包含を示すが、任意の他の完全体または完全体の群の除外は示さないことが解釈されるべきである。よって、本明細書で使用される場合、用語「含む」は、包括的またはオープンエンドであり、追加の未記載の完全体または方法／プロセス工程を除外しない。

語句「から本質的になる」は、特定の完全体（複数可）または工程及び請求された発明の特性または機能に実質的な影響を与えないものを必要とするために使用される。

本明細書で使用される場合、用語「からなる」は、記述された完全体（例えば、特徴、要素、特質、特性、方法／プロセス工程または限定）または完全体の群（例えば、特徴、要素、特質、特性、方法／プロセス工程または限定）の単独の存在を示すために使用される。

本明細書で使用される場合、用語「疾患」は、生理的機能を損ない、特定の症状に関連する任意の異常な状態を定義するために使用される。その用語は、病因の性質にかかわらず（または疾患の病因的根拠が確立されているかどうかにかかわらず）、生理的機能が損なわれている任意の障害、病気、異常、病理、疾患、状態または症候群を包含するように広く使用されている。そのため、感染症、外傷、傷害、手術、放射線アブレーション、中毒または栄養不足に起因する状態を包含する。

本明細書で使用される場合、用語「処置」または「処置すること」は、疾患の症状を治癒、改善または軽減するまたはその原因（複数可）（例えば、病理学的多様化状態）を除去する（またはその影響を軽減する）介入（例えば、対象への薬剤の投与）を指す。この場合、その用語は、用語「療法」と同義的に使用される。

また、用語「処置」または「処置すること」は、疾患の発症または進行を予防または遅延させるまたは処置された集団内のその発生率を低下（または根絶）させる介入（例えば、対象への薬剤の投与）を指す。この場合、処置という用語は、用語「予防」と同義的に使用される。

用語「対象」（文脈が許容する場合、「個体」、「動物」、「患者」または「哺乳動物」を含むと解釈される）は、処置が示唆される任意の対象、特に哺乳動物対象を定義する。哺乳動物対象には、ヒト、家畜、牧場動物、動物園の動物、スポーツ動物及びペット動物が含まれるがこれらに限定されない。好ましい実施形態では、対象は、ヒトである。

糖尿病の処置に対する本明細書における言及は、１型及び２型糖尿病自体ならびに前糖尿病（初期糖尿病）及びインスリン抵抗性の処置を含むと解釈されるべきである。用語「前糖尿病」または「初期糖尿病」は、糖尿病の非存在下でグルコースまたはグリコシル化ヘモグロビンのレベルの上昇が存在する状態を定義する。

本明細書で使用される場合、化合物または組成物の有効量は、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を伴わずに、合理的な利益／リスク比に見合った、対象に投与され得る量であるが、所望の効果、例えば、対象の状態の恒久的または一時的な改善によって示される処置または予防を提供するのに十分なものを定義する。量は、個体の年齢及び全身状態、投与様式及び他の要因に応じて対象ごとに変わる。よって、正確な有効量を特定することはできないが、当業者は、慣例的な実験及び背景の一般的知識を使用して任意の個々の症例において適切な「有効」量を決定することができる。この文脈での処置結果には、症状の根絶または軽減、疼痛または不快感の減少、生存期間の延長、可動性の改善及び他の臨床的改善のマーカーが含まれる。処置結果は、完全な治癒である必要はない。

植物化学物質という用語は、巨大分子及び小分子を含む、植物の任意の化学的成分を包含するために広い意味で本明細書で使用される。重要な例には、アルカロイド（例えば、イミノ糖及びイミノ糖酸、例えば、構造クラスのピロリジン、ピペリジン、ピロリジジン、インドリジジン、トロパン及びノルトパンから選択される）、炭水化物アナログ、フェノール化合物、テルペノイド、酵素阻害剤、グリコシド、ヌクレオチド、アミノ酸、脂質及び糖が含まれる。

「単離された」という用語は、本発明の化合物に適用される場合、その化合物が、天然に存在するものとは異なる物理的環境に存在することを示すために本明細書で使用される。例えば、単離された化合物は、それが自然に存在する複雑な細胞環境に関して実質的に単離され得る（例えば、濃縮または精製され得る）。そのため、単離された化合物は、本明細書に記載の植物源のいずれかの濃縮された画分または抽出物の形態をとり得る。

単離された材料が濃縮または精製される場合、濃縮または純度の絶対レベルは重要ではなく、当業者は、材料が置かれる用途に応じて適切なレベルを容易に決定し得る。少なくとも０．１％ｗ／ｗ、０．２％ｗ／ｗ、０．３％ｗ／ｗ、０．４％ｗ／ｗ、０．５％ｗ／ｗ、０．６％ｗ／ｗ、０．７％ｗ／ｗ、０．８％ｗ／ｗ、０．９％ｗ／ｗ、１．０％ｗ／ｗ、１．１％ｗ／ｗ、１．２％ｗ／ｗ、１．３％ｗ／ｗ、１．４％ｗ／ｗ、１．５％ｗ／ｗ、１．６％ｗ／ｗ、１．７％ｗ／ｗ、１．８％ｗ／ｗ、１．９％ｗ／ｗまたは２．０％ｗ／ｗの純度レベルが好ましい。

少なくとも０．５～２．０％ｗ／ｗ、例えば、少なくとも０．８～１．５％ｗ／ｗ、例えば、少なくとも約１．０％ｗ／ｗの純度レベルが特に好ましい。必要に応じて、イオン交換クロマトグラフィーなどの好適な濃縮技術を用いることによって、材料が天然源から単離される場合は５～１０％ｗ／ｗのレベルが容易に得られ得る。

いくつかの状況では、単離された化合物は、例えば、他の成分を含有し得る組成物（例えば、多くの他の物質を含有する多かれ少なかれ粗製の抽出物）または緩衝液系の一部を形成する。他の状況では、単離された化合物は、例えば、分光光度法で、ＮＭＲによってまたはクロマトグラフィー（例えば、トリメチルシリル－誘導体のＧＣ－ＭＳ）によって決定された場合に本質的に均質となるまで精製され得る。

ハーブ薬という用語は、少なくとも１つの活性要素（例えば、化合物）が化学的に合成されず、植物の植物化学成分である薬学的組成物を定義するために本明細書で使用される。ほとんどの場合では、この非合成活性要素は、（本明細書で定義されるように）単離されないが、植物源と関連する他の植物化学物質と一緒に存在する。しかしながら、いくつかの場合では、植物由来生物活性要素（複数可）は、濃縮された画分中にあり、または単離され得る（時に高い程度の精製を含む）。しかしながら、多くの場合、ハーブ薬は、植物の多かれ少なかれ粗製の抽出物、浸出液もしくは画分または未処理の植物全体（またはその一部）でさえ含むが、そのような場合では、植物（または植物の一部）は通常、少なくとも乾燥及び／または粉砕される。ハーブ薬は、食品補填剤、食品添加剤、栄養補助剤、飲料の形態であり得、ハーブ薬学的キットまたはパックとして単位用量で提供され得る。

ハーブ食品という用語は、少なくとも１つの成分が化学的に合成されないが、植物の植物化学成分である組成物を定義するために本明細書で使用される。ほとんどの場合では、この非合成成分は、精製されないが、植物源と関連する他の植物化学物質と一緒に存在する。しかしながら、いくつかの場合では、植物由来成分（複数可）は、濃縮された画分中にあり、または単離され得る（時に高い程度の純度まで）。しかしながら、多くの場合、ハーブ食品添加剤は、植物の多かれ少なかれ粗製の抽出物、浸出液もしくは画分または未処理の植物全体（またはその一部）でさえ含むが、そのような場合では、植物（または植物の一部）は通常、少なくとも乾燥及び／または粉砕される。そのため、その用語には、食品及び飲料と共に使用するための添加剤及び補填剤の形態のハーブ食品が含まれる。

生物活性要素という用語は、それが含まれるハーブ薬品の薬学的有効性に必要または十分な植物化学成分を定義するために本明細書で使用される。本発明の場合、生物活性要素は、ｉｄｏＢＲ１を含む。

栄養補助剤という用語は、疾患に対して生理的利益または保護を提供する食品生成物（またはその単離物）を定義するために本明細書で使用される。本発明の好ましい栄養補助剤は、抗炎症性である。

標準仕様という用語は、ハーブ薬、化粧品または栄養補助剤の許容可能な品質と相関する特性、または植物化学的プロファイルを定義するために本明細書で使用される。この文脈において、品質という用語は、その意図された使用にとっての生成物の全体的適合性を定義するために使用され、適切な濃度でのｉｄｏＢＲ１の活性を含む。

植物化学的プロファイルという用語は、異なる植物化学成分に関する一連の特性を定義するために本明細書で使用される。

機能アッセイ
本発明の抽出物は、（ｉ）シアリダーゼまたはＴＮＦ－アルファに対する阻害活性；または（ｉｉ）ＩＬ－１０刺激活性についてアッセイされる。機能アッセイは、生物学的アッセイを含み得る。生物学的アッセイは、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで行われ得、酵素阻害アッセイ（例えば、シアリダーゼ阻害）を含み得る。他の生物学的アッセイには、受容体結合アッセイ、細胞アッセイ（細胞複製、細胞－病原体及び細胞－細胞相互作用ならびに細胞分泌アッセイを含む）、イムノアッセイ、抗微生物活性（例えば、細菌及びウイルス細胞結合及び／または複製）アッセイならびに毒性アッセイ（例えば、ＬＤ_５０アッセイ）が含まれる。

機能的特性化はまた、生物学的活性の１つ以上のインデックスの同定を可能にする特性化の形態によって間接的に行われ得る。

例示的な技術は、以下により詳細に記載されている。

シアリダーゼ
ｉｄｏＢＲ１またはそれを含有する抽出物によるシアリダーゼ（ノイラミニダーゼ）活性の阻害は、例えば、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓからの酵素（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用してノイラミニダーゼ活性が測定される酵素アッセイによって決定され得る。アッセイは、２’－（４－メチルウンベリフェリル）－α－Ｄ－Ｎ－アセチルノイラミン酸（ＭＵＮＡＮＡ）基質を切断して蛍光生成物４－メチルウンベリフェロン（４－ＭＵ）を放出する酵素に基づく。そのため、阻害効果は、（ＩＣ_５０値を得るために）酵素活性の５０％を減少させるのに必要とされるｉｄｏＢＲ１または抽出物の濃度に基づいて決定される。

好適な方法は、以下の通りであり得る：
１．反応混合物を調製する。リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．５）、１０ｍｍｏｌのＭＵＮＡＮＡ４ＭＵ－ＮｅｕＡｃ（緩衝液中に１００μｌ）、１００μｌ中に０．１ｍｇの酵素、１００μｌの植物抽出物または化合物
２．３７Ｃで１０～３０分間インキュベーションする。
３．１．２５ｍｌの０．２５Ｍグリシン－ＮａＯＨ（ｐＨ１０．４）の添加によって反応を停止させる。
４．放出された４－メチルウンベリフェロン（４－ＭＵ）（発光４４８ｎｍ、励起３６５ｎｍ）を蛍光分析的に測定する。

ＴＮＦ－α及びＩＬ－１０
抽出物によって低下したＴＮＦ－α及び増加したＩＬ－１０は、ＥＬＩＳＡ法を使用して細胞培養物（例えば、ＴＨＰ－１単球細胞）または全血サンプルのいずれかで測定され得る。

ＴＨＰ－１細胞は市販されている。培養細胞をマイクロタイタープレートにおいてＲＰＭＩ完全培地に入れ（例えば、９６ウェルプレートにおけるウェル当たり５細胞）、２４時間インキュベーションした後、ＰＭＡ（１０ｎｇ／ｍｌ）を９６ウェルプレートに添加してＴＨＰ－１細胞を分化させ、ＴＮＦ－α及びＩＬ－１０生成に対する影響を決定し得る。細胞は、キュウリ抽出物で、例えば、２００μｇ／ｍｌ～２５μｇ／ｍｌで前処置され、続いて２時間ＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）刺激されるべきである。インキュベーション後、細胞上清をウェルの各々から滅菌マイクロ遠心チューブ内に吸引し、１０００ｒｐｍで２～３分間遠心分離して、存在する場合の任意の細胞を沈降させる。次いで細胞上清を、ＥＬＩＳＡを使用してＴＮＦ－αまたはＩＬ－１０の存在の評価のために使用する。好適な抗体でコーティングされたサンドイッチＥＬＩＳＡプレートは、広く利用可能である（例えば、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＵＳＡ）。

全血測定のため、全血のアリコート（８００μｌ）をＲＰＭＩ１６４０に溶解した抽出物と共に４８時間のプレインキュベーション期間インキュベーションすることができ、その後ＬＰＳ（１０μｇ／ｍｌ）を添加し、空気中５％ＣＯ_２の加湿（１００％）雰囲気内で３７℃でさらに２０時間インキュベーションを継続する。インキュベーション期間の最後に、血漿からなる上清を室温での１０，０００ｇでの３０秒間の遠心分離によって収集し、ヒトＴＮＦ－α及びＩＬ－１０ＥＬＩＳＡアッセイ（例えば、ＢｉｏＳｏｕｒｃｅ Ｅｕｒｏｐｅ Ｓ．Ａ．，Ｂｅｌｇｉｕｍから利用可能なキット）を使用してＴＮＦ－α及びＩＬ－１０レベルを測定する。

物理的特性化
本発明の抽出物はまた、物理的に特性化され得る（しかしこれは必須ではない）。これは、任意の所与の画分にまたはプロセスにおける他の段階で存在する植物化学成分（複数可）の定量、成分の純度の測定、分子量の決定（または複数の異なる植物化学成分を含む画分の場合は分子量分布またはその様々な統計関数）、分子式（ｅ）の決定（例えば、核磁気共鳴による）及び様々なスペクトル分析の形態をとることができる。

特に有用なスペクトル特性には、
・質量スペクトル（例えば、質量対電荷（ｍ／ｚ）値対存在量）、及び／または
・クロマトグラフィーデータ（例えば、スペクトル、カラム保持時間、溶出プロファイルなど）、及び／または
・フォトダイオードアレイ（ＰＤＡ）スペクトル（例えば、ＵＶ及び可視範囲の両方におけるもの）、及び／または
・電気化学検出（ＥＤ）または蒸発光散乱（ＥＬＳＤ）検出；及び／または
・核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル（^１Ｈ及び／または^１３ＣＮＭＲを介して得られたスペクトルデータを含む）
が含まれる。

スペクトル特性化は、分画工程と組み合わせられ得る。例えば、ＧＣ－ＭＳ及びＨＰＬＣ－ＰＤＡ－ＭＳ－ＥＤ－ＥＬＳＤを（本明細書に記載されるように）を使用して、分画と質量スペクトル、ＵＶ－可視スペクトル、電気化学反応または質量分率データ及びクロマトグラフィースペクトルデータの取得とを組み合わせることができる。

上記の特性のいずれかまたはすべては、任意の所与のサンプル（またはその任意の画分もしくは植物化学成分）についての「化学的フィンガープリント」を定義するために使用され得る。

化学的特性化
本発明の抽出物はまた、化学的に特性化され得る（しかしこれは必須ではない）。これは、とりわけ、植物化学的成分（複数可）の化学的反応性、それらの溶解性、安定性及び融点の測定の形態をとり得る。

本発明の化合物の医学的使用
新生物
本発明の化合物は、シアリダーゼ阻害剤であり、よって、シアリダーゼ活性及び／またはシアル酸によって媒介される疾患及び障害の処置または予防に適用される。

シアリダーゼは、細菌及びウイルス感染症ならびに新生物を含む多様な病理学的プロセスに関与するので、これらの酵素は魅力的な治療標的となる。シアリダーゼＮｅｕ１及びＮｅｕ３の発現は、糖尿病において変化するようである（例えば、Ｎｅｕ１ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｄｉｓｃｕｓｓｅｄ ｂｙ Ｎａｔｏｒｉ，Ｙ．，ｅｔ ａｌ，２０１３，Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．，Ｂｕｌｌ．，３６，１０２７）。シアリダーゼはまた、アテローム形成（Ｓｕｋｈｏｒｕｋｏｖ，Ｖ．Ｎ．，ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｄｅｓ．，２３，４６９６）及び変形性関節症（Ｋａｔｏｈ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６２，５０５８）に関与する。

そのため、本発明の化合物は、以下においてより詳細に記載するように、新生物／増殖性障害の処置または予防に適用される。

本明細書で使用される場合、用語「新生物」は、新生物細胞の異常な増殖を含む疾患を定義するために厳密な意味で使用される。その用語は、良性、前がん性及び悪性新生物（上で定義されている）を含み、用語「増殖性障害」と同義的に使用される。

新生物は、正常な生理的制御から開放する遺伝子的またはエピジェネティック的変化を取得した（すなわち、細胞が形質転換した）新生物細胞における不適切に高いレベルの細胞分裂及び／または低いレベルのアポトーシスまたは老化から生じる。新生物は典型的には、新生物（成長が正常な組織のものを上回り、正常な組織とは協調せず、変化を引き起こした刺激が停止した後も同じ過剰な様式で持続する組織の異常腫瘤）として知られている構造物を生成する。ほとんどの新生物は組織（固体腫瘍）の大きな腫瘤を形成するのに対し、一部の新生物はそのような個別の組織塊を形成しない。これらには、子宮頸部上皮内新生物、肛門上皮内新生物及び白血病が含まれる。

新生物は、良性、潜在的悪性または悪性であり得る。良性新生物には、侵襲性ではなく、悪性新生物に進行しない子宮筋腫及びメラノサイト母斑（皮膚ほくろ）が含まれる。潜在的悪性（前がん性）新生物には、侵襲性ではないがそのうち悪性新生物に変わる上皮内癌が含まれる。

悪性新生物は、周囲組織に侵入し、破壊する新生物（腫瘍）を引き起こし、転移を形成し、最終的に宿主を死滅させ得る。用語「悪性新生物」及び「がん」は、本明細書では同義語として使用される。

用語「増殖性障害」及び「新生物」は、ｉｎ ｖｉｖｏでの細胞の病理学的成長を含む疾患のクラスを定義するために本明細書で使用され得る。

そのため、増殖性障害には、がん、がん転移、平滑筋細胞増殖、全身性硬化症、肝臓の肝硬変、成人呼吸窮迫症候群、特発性心筋症、エリテマトーデス、網膜症（例えば、糖尿病性網膜症）、心臓肥大、良性前立腺肥大、卵巣嚢胞、肺線維症、子宮内膜症、線維腫症、過誤腫、リンパ管腫症、サルコイドーシス及びデスモイド腫瘍が含まれる。平滑筋細胞増殖を含む新生物には、血管系における細胞の過剰増殖（例えば、血管内膜平滑筋細胞過形成、再狭窄及び血管閉塞（特に生物学的にまたは機械的に媒介した血管傷害、例えば、血管形成術の後の狭窄を含む））が含まれる。その上、血管内膜平滑筋細胞過形成は、血管系以外の平滑筋における過形成（例えば、胆管、気管支気道及び腎間質性線維症を有する患者の腎臓における閉塞）を含み得る。非がん性増殖性障害にはまた、皮膚における細胞の過剰増殖、例えば、乾癬及びその変化した臨床形態、ライター症候群、毛孔性紅色粃糠疹ならびに角化の障害の過剰増殖性変種（光線性角化症、老人性角化症及び強皮症を含む）が含まれる。

用語「新生物」はまた、ｉｎ ｖｉｖｏでの細胞の異常な成長及び／または分化を含む疾患を定義するために本明細書で広義に使用され、そのため、過形成、化生及び異形成を包含する。

過形成は、器官または組織内の正常な（変化していない）細胞が異常な程度まで増殖する状態を定義する。そのため、それは、器官の全体的拡大、良性腫瘍の形成をもたらし得、または顕微鏡下でのみ視認可能であり得る。過形成は特定の刺激物に対する生理的反応であり、過形成細胞は正常な調節制御メカニズムを保持する（正常な生理的制御に対して非反応性の異常な様式で細胞が増殖する新生物成長とは異なる）。例には、先天性副腎過形成、子宮内膜過形成、良性前立腺肥大（前立腺拡大）、乳房の過形成（乳管過形成を含む）、巣状上皮過形成（ヘック病）、脂腺過形成及び肝臓過形成が含まれる。

化成は、ある成熟分化型の細胞が、別の成熟分化型の細胞に置き換えられた状態を指す。例には、唾液腺管の円柱上皮細胞の扁平化生（結石が存在する場合）、膀胱の移行上皮の扁平化生（この場合もまた、結石が存在する場合または感染症に関連する場合）、胃酸逆流を有する患者における食道の腺化生（バレット食道）及び結合組織における骨化生が含まれる。

異形成は、組織内の細胞の異常な成熟によって特性化された状態を定義する。これは通常、未熟細胞の増殖からなり、成熟細胞の数及び位置の対応する減少を伴う。例えば、子宮頸部の上皮異形成は、粘膜表面に限定された未熟細胞の集団の増加によって特性化される。骨髄異形成症候群、または造血細胞の異形成は、骨髄における未熟細胞の数の増加及び血液における成熟機能性細胞の減少を示す。他の例には、神経線維腫症が含まれる。

過形成、化生、及び異形成は通常、刺激物（例えば、怪我または傷害）の結果である可逆的状態である。対照的に、新生物は通常、不可逆であり、細胞形質転換に関連する。

本発明の化合物は、増殖性障害、良性、前がん性及び悪性新生物、過形成、化生及び異形成を含む任意の新生物の処置に一般的に適用される。

そのため、本発明は、がん、がん転移、平滑筋細胞増殖、全身性硬化症、肝臓の肝硬変、成人呼吸窮迫症候群、特発性心筋症、エリテマトーデス、網膜症（例えば、糖尿病性網膜症）、心臓肥大、良性前立腺肥大、卵巣嚢胞、肺線維症、子宮内膜症、線維腫症、過誤腫、リンパ管腫症、サルコイドーシス及びデスモイド腫瘍を含むがこれらに限定されない増殖性障害の処置に適用される。平滑筋細胞増殖を含む新生物には、血管系における細胞の過剰増殖（例えば、血管内膜平滑筋細胞過形成、再狭窄及び血管閉塞（特に生物学的にまたは機械的に媒介した血管傷害、例えば、血管形成術の後の狭窄を含む））が含まれる。その上、血管内膜平滑筋細胞過形成は、血管系以外の平滑筋における過形成（例えば、胆管、気管支気道及び腎間質性線維症を有する患者の腎臓における閉塞）を含み得る。非がん性増殖性障害にはまた、皮膚における細胞の過剰増殖、例えば、乾癬及びその変化した臨床形態、ライター症候群、毛孔性紅色粃糠疹ならびに角化の障害の過剰増殖性変種（光線性角化症、老人性角化症及び強皮症を含む）が含まれる。

特に好ましくは、悪性新生物（がん）の処置である。本発明は、以下の主要なグループ分けから選択されるものを含む任意のがんの処置に適用される：（ａ）がん；（ｂ）芽細胞腫；（ｃ）白血病；（ｄ）リンパ腫；（ｅ）骨髄腫；（ｆ）肉腫及び（ｇ）混合型のがん。

がんは、上皮起源の悪性新生物または身体の内部または外部の内膜のがんを指す。上皮組織の悪性腫瘍である癌腫は、すべてのがん症例の８０～９０パーセントを占める。上皮組織は、全身を通して見られる。それは皮膚、ならびに器官の被覆部及び内膜及び内部通路、例えば、胃腸管に存在する。好ましい実施形態では、本発明に従って処置されるがんは、唾液腺；結腸；直腸；虫垂；肺；胸腺；乳房；子宮頸；膀胱及び眼のがんから選択される。

本発明は、肝芽腫（例えば、腎芽腫、非上皮腎臓腫瘍、ラブドイド腎臓腫瘍、腎臓肉腫及び腎臓のｐＰＮＥＴを含む）、髄芽腫、膵芽腫、肺芽細胞腫、胸膜肺芽細胞腫、神経芽腫（通常の末梢神経細胞腫瘍ならびに神経節芽腫及び網膜芽腫を含む）を含むすべての芽細胞腫の処置に適用される。

本発明は、リンパ性白血病（例えば、前駆細胞白血病、成熟Ｂ細胞白血病、成熟Ｔ細胞白血病及びＮＫ細胞白血病）；急性骨髄性白血病；慢性骨髄増殖性疾患；骨髄異形成症候群及び他の骨髄増殖性疾患を含むすべての白血病、骨髄増殖性疾患及び骨髄異形成疾患の処置に適用される。そのため、本発明は、リンパ性、リンパ球性、またはリンパ芽球性白血病（リンパ性及びリンパ球性血液細胞系列の悪性腫瘍）を含む様々な白血病及び真性赤血球増加症または赤血病（様々な血液細胞生成物の悪性腫瘍であるが、赤血球優勢を伴う）の処置に適用される。

リンパ腫は、体液を精製し、感染症と闘う白血球、またはリンパ球を生成する血管、節、及び器官（特に脾臓、扁桃腺、及び胸腺）のネットワークであるリンパ系の腺または節に発生する。時に「液体がん」と呼ばれる白血病とは異なり、リンパ腫は「固体がん」である。リンパ腫はまた、胃、乳房または脳などの特定の器官で生じ得る。これらのリンパ腫は、節外性リンパ腫と称される。リンパ腫は、２つのカテゴリー：ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫に細分類される。ホジキンリンパ腫におけるリード・スタンバーグ細胞の存在は、ホジキンリンパ腫を非ホジキンリンパ腫から診断的に区別する。本発明は、（ａ）ホジキンリンパ腫；（ｂ）非ホジキンリンパ腫（例えば、前駆細胞リンパ腫、成熟Ｂ細胞リンパ腫、成熟Ｔ細胞リンパ腫及びＮＫ細胞リンパ腫；（ｃ）バーキットリンパ腫及び（ｄ）マントル細胞リンパ腫を含む他のリンパ網内系新生物を含むすべてのそのようなリンパ腫及び網内系新生物の処置に適用される。

そのため、本発明は、例えば、リンパ系（脾臓、扁桃腺、及び胸腺を含む）の腺または節の腫瘍ならびに胃、乳房及び脳の節外性リンパ腫を含む広範囲のリンパ腫の処置に適用される。

骨髄腫は、骨髄の血漿細胞を起源とするがんである。そのため、本発明は、リンパ系統のものを含む造血器腫瘍及び血液悪性腫瘍（例えば、白血病、急性リンパ球性白血病、慢性リンパ球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫など）、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、有毛細胞リンパ腫及びバーキットリンパ腫）ならびに骨髄系統の造血器腫瘍（例えば、急性骨髄白血病、慢性骨髄白血病、骨髄性白血病及びイマチニブ感受性及び難治性慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、ボルテゾミブ感受性及び難治性多発性骨髄腫、骨髄増殖性疾患または前骨髄球性白血病及び甲状腺濾胞癌）の処置に適用される。

本発明は、すべての肉腫の処置に適用される。肉腫は、支持組織及び結合組織、例えば、骨、腱、軟骨、筋肉及び脂肪を起源とするがんを指す。通常は若年成人で生じる最も一般的な肉腫はしばしば、骨上の痛みを伴う腫瘤として発症する。肉腫腫瘍は通常、それらが成長する組織に似ている。本発明による処置のための例示的な肉腫には、骨肉腫（または骨形成肉腫）；軟骨肉腫；平滑筋肉腫（平滑筋）；横紋筋肉腫（骨格筋）；中皮肉腫または中皮腫（体腔の内膜）；線維肉腫（線維組織）；血管肉腫または血管内皮腫（血管）；脂肪肉腫；神経膠腫；星状細胞腫；粘液肉腫（原始胚結合組織）及び間葉系または混合性中胚葉腫瘍（混合性結合組織型）が含まれる。線維肉腫には、末梢神経鞘腫瘍及び他の線維性新生物、例えば、線維芽及び筋線維芽腫瘍、神経鞘腫瘍及び他の線維腫新生物が含まれる。カポジ肉腫も含まれる。また、軟部組織肉腫、例えば、軟部組織のユーイング腫瘍及びアスキン腫瘍、軟部組織のｐＰＮＥＴ、腎外ラブドイド腫瘍；線維組織球腫瘍；滑膜肉腫；軟部組織の骨及び軟骨新生物ならびに胞巣状軟部肉腫が含まれる。骨肉腫（悪性骨腫瘍）には、骨の悪性線維性新生物；悪性脊索腫及び歯原性悪性腫瘍が含まれる。神経膠腫には、乏突起膠腫、混合性及び不特定神経膠腫及び神経上皮性グリア腫瘍が含まれる。

本発明は、例えば、腺扁平上皮癌、混合性中胚葉腫瘍、がん肉腫及び奇形癌を含む混合型のがん処置に適用される。そのため、本発明は、星状細胞腫、神経芽腫、神経膠腫、神経鞘腫、上衣腫及び脈絡叢腫瘍（例えば、上衣腫及び脈絡叢腫瘍）；頭蓋内及び髄腔内胎児性腫瘍（例えば、髄芽腫、未分化神経外胚葉性腫瘍（ＰＮＥＴ）、髄様上皮腫、非定型奇形腫様／ラブドイド腫瘍及び他の頭蓋内及び髄腔内新生物（例えば、下垂体腺腫及びトルコ鞍領域のがん、腫瘍（頭蓋咽頭腫）、松果体実質腫瘍、ニューロン及び混合性ニューロン－グリア腫瘍、髄膜腫ならびに通常の頭蓋内及び髄腔内新生物）を含む様々なＣＮＳ、ＰＮＳならびに混合性頭蓋内及び髄腔内新生物の処置に適用される。

よって、本発明は、頭蓋内及び髄腔内胚細胞腫瘍；頭蓋内及び髄腔内胚細胞腫；頭蓋内及び髄腔内奇形腫；頭蓋内及び髄腔内胎児性癌；頭蓋内及び髄腔内卵黄嚢腫瘍；頭蓋内及び髄腔内絨毛癌ならびに混合型の頭蓋内及び髄腔内腫瘍の処置に特に適用される。

本発明はまた、様々な胚細胞腫瘍、栄養膜腫瘍及び生殖腺の新生物の処置に適用される。よって、本発明は、例えば、頭蓋外及び生殖腺外部位の悪性胚細胞腫、頭蓋外及び生殖腺外部位の悪性奇形腫、頭蓋外及び生殖腺外部位の胎児性癌、頭蓋外及び生殖腺外部位の卵黄嚢腫瘍；頭蓋外及び生殖腺外部位の絨毛癌及び通常の頭蓋外及び生殖腺外部位の悪性混合性胚細胞腫瘍を含む悪性頭蓋外及び生殖腺外胚細胞腫瘍の処置に適用される。本発明はまた、例えば、悪性生殖腺胚細胞腫、精上皮腫、悪性生殖腺奇形腫、生殖腺胎児性癌、生殖腺卵黄嚢腫瘍、生殖腺絨毛癌、混合型の悪性生殖腺腫瘍及び悪性生殖腺性腺芽腫を含む悪性生殖腺胚細胞腫瘍の処置に適用される。

感染性疾患
本発明の化合物は、シアリダーゼ阻害剤であり、よって、シアリダーゼ活性及び／またはシアル酸によって媒介される疾患及び障害の処置または予防に適用される。そのような疾患及び障害には、感染性疾患（細菌及びウイルス感染症を含む）が含まれる。

本発明の化合物は、任意の感染性因子に対する抗感染（例えば、静病原性（ｐａｔｈｏｓｔａｔｉｃ）または殺病原性（ｐａｔｈｏｃｉｄａｌ））活性を有し得る。そのため、本発明の化合物は、広い範囲の異なる感染性因子を標的とし得る（すなわち、それに対する活性を有する）。よって、本発明は、ウイルス、細菌、真菌、原虫、プリオンまたは後生動物体が関与する感染性疾患を含む任意の感染症または感染性疾患の処置または予防に広く適用される。

よって、本発明は、ウイルス感染症の処置または予防；細菌感染症の処置または予防；原虫感染症の処置または予防；真菌感染症の処置または予防；プリオン感染症の処置または予防；及び／または後生動物（例えば、寄生蠕虫）感染症または侵入の処置または予防に広く適用される。本発明の化合物はまた、慢性、休眠中または潜伏性ウイルス、細菌、原虫、真菌、プリオンまたは後生動物（例えば、寄生蠕虫）感染症または侵入の処置または予防に適用され得る。
・ウイルス標的には、以下のウイルス（またはウイルスクラス）が含まれるがこれらに限定されない：Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、ＨＩＶ－１を含むヒト免疫不全ウイルス）；Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ（例えば、ポリオウイルス、Ａ型肝炎ウイルス；エンテロウイルス、ヒトコクサッキーウイルス、ライノウイルス、エコーウイルス）；Ｃａｌｃｉｖｉｒｉｄａｅ（例えば、胃腸炎を引き起こす株）；Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ（例えば、ウマ脳炎ウイルス、風疹ウイルス）；Ｆｌａｖｉｒｉｄａｅ（例えば、デングウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス）；Ｃｏｒｏｎｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、コロナウイルス）；Ｒｈａｂｄｏｖｉｒａｄａｅ（例えば、水胞性口炎ウイルス、狂犬病ウイルス）；Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、エボラウイルス）；Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、パラインフルエンザウイルス、おたふく風邪ウイルス、麻疹ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス）；Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、インフルエンザウイルス）；Ｂｕｎｇａｖｉｒｉｄａｅ（例えば、ハンターンウイルス、ブンヤウイルス、フレボウイルス及びナイロウイルス）；Ａｒｅｎａ ｖｉｒｉｄａｅ（出血熱ウイルス）；Ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、レオウイルス、オルビウイルス及びロタウイルス）；Ｂｉｒｎａｖｉｒｉｄａｅ；Ｈｅｐａｄｎａｖｉｒｉｄａｅ（Ｂ型肝炎ウイルス）；Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ（パルボウイルス）；Ｐａｐｏｖａｖｉｒｉｄａｅ（パピローマウイルス、ポリオーマウイルス）；Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ（ほとんどのアデノウイルス）；Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ（単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）１及び２、水痘帯状疱疹ウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヘルペスウイルス；Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ（天然痘ウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス）；及びＩｒｉｄｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、アフリカ豚熱ウイルス）；及び未分類ウイルス（例えば、海綿状脳症の病原因子、デルタ肝炎の因子（Ｂ型肝炎ウイルスの欠陥サテライトと考えられる）、ＨＣＶウイルス（非Ａ型、非Ｂ型肝炎を引き起こす）；ノーウォーク及び関連ウイルス、及びアストロウイルス）。前述のもののうち、特に好ましいものは、ＨＩＶ、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、狂犬病ウイルス、ポリオウイルス、インフルエンザウイルス、髄膜炎ウイルス、麻疹ウイルス、おたふく風邪ウイルス、風疹、百日咳、脳炎ウイルス、パピローマウイルス、黄熱病ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、パルボウイルス、チクングンヤ熱ウイルス、出血熱ウイルス及びヘルペスウイルス、特に、水痘、サイトメガロウイルス及びエプスタイン・バーウイルスである。
・細菌標的には、グラム陰性及びグラム陽性細菌が含まれるがこれらに限定されない。本発明の化合物によって標的とされ得る細菌の例には、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ、Ｂｏｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｐ（例えば、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｍ．ｌｅｐｒａｅ、Ｍ．ａｖｉｕｍ、Ｍ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ、Ｍ．ｋａｎｓａｉｉ及びＭ．ｇｏｒｄｏｎａｅ）、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ（Ａ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ（Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｖｉｒｉｄａｎｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｂｏｖｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属の任意の嫌気性種、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｓｐｐ．、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｐ．（Ｃ．ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅを含む）、Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｓｐｐ（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅを含む）、Ｐａｓｔｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐｐ．、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｕｃｌｅａｔｕｍ、Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｏｎｉｌｉｊｏｒｍｉｓ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｉｕｍ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐｅｒｔｅｎｕｅ、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｓｐｐ．、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｓｐｐ．及びＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｓｐｐ．（Ａ．ｉｓｒａｅｌｉｉを含む）を含むがこれらに限定されない。ｉｎ ｖｉｖｏで生体膜を形成する細菌は、本発明の化合物の特定の標的であり、これらには、Ｔａｎｎｅｒｅｌｌａ ｆｏｒｓｙｔｈｉａ、Ｔａｎｎｅｒｅｌｌａ ｄｅｎｔｉｃｏｌａ、Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ及びＧａｒｄｎｅｒｅｌｌａ ｖａｇｉｎａｌｉｓが含まれる。
・真菌標的には、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ及びＣａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓが含まれるがこれらに限定されない。
・原虫標的には、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｓｐｐ．（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｍａｌａｒｉａｅ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｏｖａｌｅ及びＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｖｉｖａｘを含む）、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｓｐｐ．（Ｔ．ｇｏｎｄｉｉ及びＴ．ｃｒｕｚｉｉを含む）、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｓｐｐ．、Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｓｐｐ．（Ｃ．ｐａｒｖｕｍを含む）、Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒａ ｓｐｐ．（Ｃ．ｃａｙｅｔａｎｅｎｓｉｓを含む）、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ（Ｅ．ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａを含む）及びＧｉａｒｄｉａ ｓｐｐ．（Ｇ．ｌａｍｂｌｉａを含む）が含まれるがこれらに限定されない。
・後生動物標的には、寄生生物または病原体、例えば、寄生蠕虫（例えば、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｓｐｐ．）が含まれる。

ｉｎ ｖｉｖｏでの細菌増殖の阻害
シアリダーゼ活性は、シアロコンジュゲート糖の利用の鍵であり、細菌との宿主－病原体相互作用に関与する。糖タンパク質関連シアル酸は、バイオフィルム中で成長する場合のＴａｎｎｅｒｅｌｌａ ｆｏｒｓｙｔｈｉａのための肝要なｉｎ ｖｉｖｏ栄養素源として提案されている（Ｒｏｙ，Ｓ．，２０１１，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１５７，３１９５）。本発明の化合物のシアリダーゼ阻害特性はまた、ｉｎ ｖｉｖｏでの片利共生及び／または病原性細菌増殖の阻害、特に、哺乳動物（例えば、ヒト）宿主における細菌バイオフィルムの阻害または排除を含む宿主－細菌細胞相互作用の妨害に適用される。

そのため、化合物は、細菌バイオフィルム（例えば、歯肉縁下プラークバイオフィルム及び粘膜バイオフィルム）の存在によって媒介または特性化される疾患及び障害の処置または予防に適用される。

そのような疾患には、Ｔａｎｎｅｒｅｌｌａ ｆｏｒｓｙｔｈｉａ、Ｔａｎｎｅｒｅｌｌａ ｄｅｎｔｉｃｏｌａ、Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ及びＧａｒｄｎｅｒｅｌｌａ ｖａｇｉｎａｌｉｓ（後者の種は細菌性膣症及び早産に関連する）によって引き起こされる歯周病、細菌性膣症及び疾患が含まれる。

片利共生細菌増殖の調節
本発明の化合物のシアリダーゼ阻害性特性はまた、宿主における微生物叢（及び特に片利共生細菌）の組成物の調節において、例えば、哺乳動物（例えば、ヒト）宿主における片利共生細菌の組成の調節に適用される。腸内微生物叢の調節が特に好ましい。

アテローム形成
本発明の化合物は、シアリダーゼ阻害剤であり、そのため、アテローム形成の処置または予防に適用されるが、その理由はシアリダーゼがこのプロセスに関与するからである（Ｓｕｋｈｏｒｕｋｏｖ，Ｖ．Ｎ．，ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｄｅｓ．，２３，４６９６）ａｎｄ ｏｓｔｅｏ－ａｒｔｈｒｉｔｉｓ（Ｋａｔｏｈ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６２，５０５８）。よって、本発明の化合物は、アテローム性動脈硬化症の処置及び予防に適用される。

炎症
本発明の化合物は、変形性関節症におけるＴＮＦ－α誘導炎症プロセスに関与すると考えられるシアリダーゼを阻害する（Ｇｅｅ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７８，３７２７５）。さらに、本発明の化合物は、ＴＮＦ－α活性を抑制または阻害し得る。このように、それらは、炎症が生理的機能の障害及び／または症状及び／または疼痛において役割を果たす任意の障害に適用される。例えば、本発明の化合物は、例えば、急性、慢性、局所または全身性炎症を減少または排除するために抗炎症剤として使用され得る。

炎症は、微生物、外傷、化学物質、熱、寒さ、日焼けまたは任意の他の有害事象によって組織が損傷した場合に生じる。内因性化学物質（例えば、ブラジキニン、ヒスタミン及びセロトニン）は、傷害または怪我時に放出され、そのような化学物質は、組織マクロファージ及び他の白血球を活性化し、引き寄せる。このプロセスの間、ＴＮＦ－αなどの化学的メディエーターが放出され、炎症を引き起こす。

炎症性障害は、炎症が持続的または慢性であるものである。そのような状況では、長引く炎症が組織破壊を引き起こし、罹患した組織及び／または器官の広範囲損傷及び終局的不調をもたらす。

よって、本発明の化合物は、非局在化炎症性障害、例えば、複数の器官に影響を及ぼすものの処置に適用される。そのような障害には、免疫機能障害から生じる（よって、自己免疫性成分を有し得る）ものが含まれる。そのような状態には、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、強皮症及び過敏症が含まれる。

炎症が２型糖尿病の発症に関係するという証拠が増えてきている。

本発明の化合物はまた、皮膚炎症及び慢性前立腺炎、糸球体腎炎、炎症性腸疾患、骨盤内炎症性疾患、再かん流傷害、関節リウマチ、移植拒絶反応、血管炎、喘息、座瘡、変形性関節症、口腔粘膜、胃腸炎、眼、鼻及び耳炎症ならびに他のステロイド反応性炎症性障害を含む局在化炎症性障害の処置に適用される。

特に、本発明の化合物は、皮膚炎症性疾患の処置に適用される。これらには、例えば、光線性角化症、座瘡（尋常性座瘡、面皰性、酒さ性座瘡、及び嚢腫結節型座瘡を含む）、アレルギー性接触皮膚炎、血管性浮腫、水疱性類天疱瘡、皮膚薬物反応、多形性紅斑、エリテマトーデス、光線皮膚炎、乾癬性関節炎、強皮症及びじんましん、乾癬、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎）、強皮症、ステロイド反応性皮膚炎症性障害（例えば、尿毒症性掻痒症）ならびに日光、放射線、化学療法及び環境刺激物に対する曝露に関連する皮膚状態が含まれる。

本発明の化合物はまた、炎症性自己免疫疾患の処置に適用される。そのような疾患は、特定の組織または器官（関節リウマチ及び強直性脊椎炎におけるものののような筋骨格組織など）、ＧＩ管（例えば、クローン病及び潰瘍性結腸炎におけるもの）、ＣＮＳ（例えば、アルツハイマー病、多発性硬化症、運動ニューロン疾患、パーキンソン病及び慢性疲労症候群におけるもの）、膵臓ベータ細胞（例えば、インスリン依存性糖尿病）、副腎（例えば、アジソン病）、腎臓（例えば、グッドパスチャー症候群、ＩｇＡ腎症及び間質腎炎）、外分泌腺（例えば、シェーグレン症候群及び自己免疫性膵炎）及び皮膚（例えば、乾癬及びアトピー性皮膚炎）を含み得る。

本発明に従って処置可能な他の炎症性障害には、変形性関節症、歯周病、糖尿病（２型糖尿病及び糖尿病性腎症を含む）、慢性閉塞性肺疾患、アテローム性動脈硬化症、移植片対宿主病、慢性骨盤内炎症性疾患、子宮内膜症、慢性Ａ型肝炎及び結核などの状態が含まれる。

薬量学
本発明の組成物及び化合物は、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下、経皮、気道（エアロゾル）、直腸、膣及び局所（口腔内及び舌下を含む）投与を含む、局所的にまたは経口もしくは非経口経路によって投与され得る。

投与される量は、採用される特定の投与単位、処置の期間、処置される患者の年齢及び性別、処置される障害の特質及び程度、ならびに選択された特定の化合物に応じて大きく変わり得る。

通常、投与される化合物の有効量は通常、１日当たり約０．０１ｍｇ／ｋｇ～５００ｍｇ／ｋｇの範囲である。単位投薬量は、０．０５～５００ｍｇの化合物を含有し得、１日当たり１回以上服用され得る。化合物は、以下に記載されるように、経口、非経口、または局所のいずれかの従来の投薬単位形態を使用して薬学的担体と共に投与され得る。

好ましい投与経路は、経口投与である。通常、好適な用量は、１日当たりレシピエントの体重１キログラム当たり０．０１～５００ｍｇの範囲、好ましくは１日当たり体重１キログラム当たり０．１～５０ｍｇの範囲、最も好ましくは１日当たり体重１キログラム当たり１～５ｍｇの範囲である。

所望の用量は、好ましくは、毎日の投与のために単回用量として提供される。しかしながら、１日を通して適切な間隔で投与される２、３、４、５もしくは６またはそれ以上の副次的用量が用いられ得る。これらの副次的用量は、例えば、単位投薬形態当たり０．００１～１００ｍｇ、好ましくは０．０１～１０ｍｇ、最も好ましくは０．５～１．０ｍｇの活性成分を含有する単位投薬形態で投与され得る。

製剤
天然源から単離される場合、ｉｄｏＢＲ１は精製され得る。しかしながら、本発明の組成物は、ハーブ薬、食品補填剤、食品添加剤、栄養補助剤、飲料または上記で定義されたハーブ薬学的キットもしくはパックとしての単位用量の形態をとり得る。そのようなハーブ薬は好ましくは、使用前に標準仕様を満たしているかどうかを決定するために分析される。

本発明による使用のためのハーブ薬は、乾燥した植物材料であり得る。代替的には、ハーブ薬は、処理された植物材料であり得、処理は、物理的または化学的前処理、例えば、粉末化、粉砕、凍結、蒸発、濾過、プレス、噴霧乾燥、押し出し、超臨界溶媒抽出及びチンキ生成を含む。ハーブ薬が植物全体（またはその一部）の形態で投与または販売される場合、植物材料は、使用前に乾燥させられ得る。凍結乾燥、噴霧乾燥または空気乾燥を含む任意の好都合な乾燥形態が使用され得る。

本発明の化合物は、極性溶媒（エタノール／水混合物、例えば、≧５０％ｖ／ｖ（例えば、最大で約７０％ｖ／ｖ）エタノール／水混合物など）中での抽出によってタンパク質及び多糖類などの高分子量成分から分離され得る。他の好適な技術には、様々な膜技術が含まれる。これらには、精密濾過、限外濾過及びナノ濾過が含まれる。代替的に、または追加で、荷電化合物を濃縮するために電気透析も使用され得る。これらの方法は、所定サイズ未満の分子のみを通過させる孔サイズの膜を使用し、または膜を通過させるまたは通過させないようにする分子上の電荷に依存する。陰イオン及び陽イオン交換樹脂も化合物を濃縮するために使用され得る。

天然源から単離される場合、本発明による使用のための化合物は精製され得る。化合物が薬学的に許容可能な賦形剤と一緒に製剤化される実施形態では、例えば、不活性希釈剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、甘味剤、香味剤、着色剤及び防腐剤を含む任意の好適な賦形剤が使用され得る。好適な不活性希釈剤には、炭酸ナトリウム及びカルシウム、リン酸ナトリウム及びカルシウム、及びラクトースが含まれるが、トウモロコシデンプン及びアルギン酸は、好適な崩壊剤である。結合剤には、デンプン及びゼラチンが含まれ得るが、滑沢剤は、存在する場合、通常はステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクである。

薬学的組成物は、任意の好適な形態をとってもよく、例えば、錠剤、エリキシル、カプセル、溶液、懸濁液、粉末、顆粒及びエアロゾルを含み得る。

薬学的組成物は、部材のキットの形態をとってもよく、そのキットは、使用のための指示書及び／または単位投薬形態の複数の異なる成分と共に本発明の組成物を含み得る。

経口用途のための錠剤は、不活性希釈剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、甘味剤、香味剤、着色剤及び防腐剤などの薬学的に許容可能な賦形剤と混合された、本発明による使用のための化合物を含み得る。好適な不活性希釈剤には、炭酸ナトリウム及びカルシウム、リン酸ナトリウム及びカルシウム、及びラクトースが含まれるが、トウモロコシデンプン及びアルギン酸は、好適な崩壊剤である。結合剤には、デンプン及びゼラチンが含まれ得るが、滑沢剤は、存在する場合、通常はステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクである。所望の場合、錠剤は、胃腸管における吸収を遅らせるためにグリセリルモノステアレートまたはグリセリルジステアレートなどの物質でコーティングされ得る。経口用途のためのカプセルには、本発明による使用のための化合物が固体希釈剤と混合された硬ゼラチンカプセル、及び活性成分が水またはピーナッツ油、液体パラフィンもしくはオリーブ油などの油と混合された軟ゼラチンカプセルが含まれる。

直腸投与のための製剤は、例えば、ココアバターまたはサリチル酸塩を含む好適な基材を有する座剤として提供され得る。膣投与に好適な製剤は、活性成分に加えて適切な当該技術分野で知られているそのような担体を含有するペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォームまたはスプレー製剤として提供され得る。

筋肉内、腹腔内、皮下及び静脈内用途の場合、本発明の化合物は通常、適切なｐＨ及び等張性に緩衝された滅菌水溶液または懸濁液で提供される。好適な水性ビヒクルには、リンゲル液及び等張性塩化ナトリウムが含まれる。本発明による水性懸濁液は、懸濁剤、例えば、セルロース誘導体、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン及びトラガカントガム、ならびに湿潤剤、例えば、レシチンを含み得る。水性懸濁液に好適な防腐剤には、エチル及びｎ－プロピルｐ－ヒドロキシベンゾエートが含まれる。

本発明の化合物はまた、リポソーム製剤として提供され得る。

経口投与の場合、１つの化合物または複数の化合物は、カプセル、丸剤、錠剤、トローチ、ロゼンジ、溶融物、粉末、顆粒、溶液、懸濁液、分散液またはエマルション（溶液、懸濁液、分散液またはエマルションは、水性または非水性であり得る）などの固体または液体調製物に製剤化され得る。固体単位投薬形態は、例えば、界面活性剤、滑沢剤、及び不活性充填剤、例えば、ラクトース、スクロース、リン酸カルシウム、及びコーンデンプンを含有する、通常の硬質または軟質シェルゼラチンタイプのものであり得るカプセルであり得る。

別の実施形態では、本発明の化合物は、結合剤、例えば、アカシア、コーンデンプン、またはゼラチン、投与後の錠剤の分解及び溶解を補助することが意図された崩壊剤、例えば、ジャガイモデンプン、アルギン酸、トウモロコシデンプン、及びグアーガム、錠剤造粒のフローを改善すること及び錠剤ダイ及びパンチの表面への錠剤物質の接着を防止することが意図された滑沢剤、例えば、タルク、ステアリン酸、またはステアリン酸マグネシウム、カルシウム、もしくは亜鉛、色素、着色剤、ならびに錠剤の美的資質を改善し、患者により受け入れられるようにすることが意図された香味剤と組み合わされた従来の錠剤基材、例えば、ラクトース、スクロース、及びコーンデンプンを用いて錠剤化される。

経口液体投薬形態において使用するための好適な賦形剤には、薬学的に許容可能な界面活性剤、懸濁剤または乳化剤を添加したまたは添加していない希釈剤、例えば、水及びアルコール、例えば、エタノール、ベンジルアルコール、及びポリエチレンアルコールが含まれる。

本発明の化合物はまた、非経口で、すなわち、皮下、静脈内、筋肉内、または腹腔内に投与され得る。

そのような実施形態では、化合物は、薬学的担体（滅菌液体または液体の混合物であり得る）と一緒に生理的に許容可能な希釈剤中の注射可能な用量として提供され得る。好適な液体には、薬学的に許容可能な界面活性剤（例えば、石鹸または洗浄剤）、懸濁剤（例えば、ペクチン、カルホマー、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、またはカルボキシメチルセルロース）、または乳化剤及び他の薬学的アジュバントを添加したまたは添加していない水、生理食塩水、水性デキストロース及び関連する糖溶液、アルコール（例えば、エタノール、イソプロパノール、またはヘキサデシルアルコール）、グリコール（例えば、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコール）、グリセロールケタール（例えば、２，２－ジメチル－１，３－ジオキソラン－４－メタノール）、エーテル（例えば、ポリ（エチレン－グリコール）４００）、油、脂肪酸、脂肪酸エステルまたはグリセリド、またはアセチル化脂肪酸グリセリドが含まれる。本発明の非経口製剤において使用され得る好適な油は、石油、動物、植物、または合成起源のもの、例えば、ピーナッツ油、大豆油、ゴマ油、綿実油、コーン油、オリーブ油、ペトロラタム、及び鉱油である。好適な脂肪酸には、オレイン酸、ステアリン酸、及びイソステアリン酸が含まれる。好適な脂肪酸エステルは、例えば、オレイン酸エチル及びミリスチン酸イソプロピルである。

好適な石鹸には、脂肪アルカリ金属、アンモニウム、及びトリエタノールアミン塩が含まれ、好適な洗浄剤には、カチオン性洗浄剤、例えば、ジメチルジアルキルアンモニウムハライド、アルキルピリジニウムハライド、及び酢酸アルキルアミン；アニオン性洗浄剤、例えば、アルキル、アリール、及びオレフィンスルホネート、アルキル、オレフィン、エーテル、及びモノグリセリドスルフェート、及びスルホスクシネート；非イオン性洗浄剤、例えば、脂肪アミンオキシド、脂肪酸アルカノールアミド、及びポリオキシエチレンポリプロピレンコポリマー；及び両性洗浄剤、例えば、アルキル－ベータ－アミノプロピオネート、及び２－アルキルイミダゾリン第４級アンモニウム塩、ならびに混合物が含まれる。

本発明の非経口組成物は典型的には、溶液中に本発明による使用のための化合物を約０．５～約２５重量％含有する。防腐剤及び緩衝液も使用され得る。注射部位での刺激を最小化または排除するために、そのような組成物は、約１２～約１７の親水性－親油性バランス（ＨＬＢ）を有する非イオン性界面活性剤を含有し得る。そのような製剤における界面活性剤の量は、約５～約１５重量％の範囲である。界面活性剤は、上記ＨＬＢを有する単一成分であり得、所望のＨＬＢを有する２つ以上の成分の混合物であり得る。非経口製剤において使用される界面活性剤の例は、ポリエチレンソルビタン脂肪酸エステルのクラス、例えば、モノオレイン酸ソルビタン及びプロピレンオキシドとプロピレングリコールとの縮合によって形成される、疎水性ベースとエチレンオキシドとの高分子量付加物である。

本明細書による使用のための１つの化合物または複数の化合物はまた、局所投与され得、それが行われる場合、担体は、溶液、軟膏またはゲル基材を好適に含み得る。基材は、例えば、以下のうちの１つ以上を含み得る：ペトロラタム、ラノリン、ポリエチレングリコール、蜜ろう、鉱油、希釈剤、例えば、水及びアルコール、ならびに乳化剤及び安定化剤。局所製剤は、約０．１～約１０％ｗ／ｖ（単位体積当たりの重量）の化合物の濃度を含有し得る。

補助的に使用される場合、本明細書による使用のための１つの化合物または複数の化合物は、１つ以上の他の薬物（複数可）と共に使用するために製剤化され得る。よって、補助的使用は、他の薬物（複数可）と適合する（または相乗効果をもたらす）ように設計された特定の単位投薬量に、または１つの化合物もしくは複数の化合物が１つ以上の酵素と混合された製剤に反映され得る。補助的使用はまた、本発明の薬学的キットの組成物に反映され得、その場合、本発明の化合物は、酵素と共に共パッケージングされる（例えば、単位用量のアレイの一部として）。補助的使用はまた、１つの化合物または複数の化合物及び／または酵素の共投与に関する情報及び／または指示書に反映され得る。

化粧用製剤
本発明の化粧用組成物は、例えば、保湿組成物、クレンジング組成物、または皮膚に利益を提供し得る任意の組成物から選択され得る。本発明の化粧用組成物は、例えば、以下に記載されるものから選択される化粧的に許容可能な賦形剤または担体を含み得る。

一実施形態では、化粧用組成物は、クレンジング組成物である。好適なクレンジング組成物は、室温で固体または半固体である。有用なクレンジング組成物の例には、グリセリン石鹸を含む脂肪酸石鹸、合成洗浄剤及びそれらの混合物が含まれるがこれらに限定されない。固体クレンジング組成物は、Ｓｏａｐ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｆｏｒ ｔｈｅ １９９０’ｓに広範に教示されており、その内容は参照により本明細書に組み込まれる。クレンジング組成物は流動可能であることが望ましい。

本発明の一実施形態では、クレンジング組成物は、グリセリン石鹸を含む。本発明に有用なグリセリン石鹸の例には、米国特許番号４，４０５，４９２及び４，８７９，０６３（その開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているものが含まれるがこれらに限定されない。

好適な脂肪酸石鹸の例は、およそ１０～２２の炭化水素鎖長（カルボキシル炭素を含む）に由来する石鹸を含み、飽和または不飽和であり得る。石鹸は、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、トリエタノールアンモニウム塩及びそれらの混合物であり得る。

好適な合成洗浄剤には、所望の目的のために当該技術分野で知られているものが含まれる。パーソナルクレンジングに有用な洗浄剤の例には、イセチオネート、サルコシネート、及び純粋鎖長バリアントであり得るグリセリルエーテルスルホネートまたはココナッツ油などの市販の油に由来するものが含まれる。他の好適な洗浄剤には、アニオン性アシルサルコシネート、メチルアシルタウレート、Ｎ－アシルグルタメート、アルキルスルホスクシネート、アルキルホスフェートエステル、エトキシル化アルキルホスフェートエステル、トリデセススルフェート、タンパク質縮合物、エトキシル化アルキルスルフェートとアルキルアミンオキシドとの混合物、ベタイン、スルタイン及びそれらの混合物が含まれる。１～１２個のエトキシ基を有するアルキルエーテルスルフェート、特にアンモニウム及びナトリウムラウリルエーテルスルフェートが含まれる。

化粧用組成物は、保湿組成物であり得る。

本発明の化粧用組成物の他の任意の成分には、香料、芳香剤、防腐剤、着色剤、色素、抗凝固剤、及びパーソナルケア成分（皮膚及びヘアケア成分を含むがこれらに限定されない）が含まれるがこれらに限定されない。

本発明において有用な好適なパーソナルケア成分の例には、安全かつ有効量の保湿剤、日焼け止め剤、皮膚緩和剤、抗刺激剤、抗炎症剤、皮膚軟化剤、コンディショニング剤、湿潤剤、デオドラント、制汗剤、人工日焼け剤、抗菌剤、抗座瘡剤、抗しわ剤、抗皮膚萎縮剤、皮膚引き締め剤、抗掻痒剤、抗真菌剤、局所麻酔剤、皮膚の色合いの平滑化剤、活性天然成分、不要な毛の出現を最小化するためのまたは不要な毛の再生を遅らせるための薬剤、皮膚質感改変剤、及びさらなるクレンジング剤が含まれるがこれらに限定されない。

一実施形態では、化合物は、例えば、乾燥皮膚の処置及び軟化剤用途において用いられているような油中水（ｗ／ｏ）エマルションを使用することによって水またはアルコール性水抽出物から使用され得る。

軟化剤は、皮膚表面上または角質層内に留まって潤滑油として作用し、皮膚剥離を減少させ、皮膚外観を改善するそれらの能力によって機能する。典型的な皮膚軟化剤には、脂肪エステル、脂肪アルコール、鉱油、ポリエーテルシロキサンコポリマーなどが含まれる。好適な皮膚軟化剤の例には、ポリプロピレングリコール（「ＰＰＧ」）－１５ステアリルエーテル、ＰＰＧ－１０セチルエーテル、ステアレス－１０、オレス－８、ＰＰＧ－４ラウリルエーテル、ビタミンＥアセテート、ＰＥＧ－７グリセリルココエート、ラノリン、及びそれらの組み合わせが含まれるがこれらに限定されない。ビタミンＥアセテート、ＰＥＧ－７グリセリルココエート及びそれらの組み合わせが好ましい。

好適な保湿剤の例には、多価アルコールが含まれる。好適な多価アルコールには、グリセロール（グリセリンとしても知られている）、ポリアルキレングリコール、アルキレンポリオール及びそれらの誘導体（プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリエチレングリコール及びそれらの誘導体を含む）、ソルビトール、ヒドロキシプロピルソルビトール、ヘキシレングリコール、１，３－ジブチレングリコール、１，２，６，－ヘキサントリオール、エトキシル化グリセロール、プロポキシル化グリセロール及びそれらの混合物が含まれるがこれらに限定されない。

好適な皮膚緩和剤には、パンテノール、ビサボロール、アラントイン、アロエ、及びそれらの組み合わせが含まれるがこれらに限定されない。

好適なコンディショニング剤には、ジメチコーンプロピルＰＧ－ベタイン、ジメチコーンコポリオール、ポリクオタニウム－１０、グアー、グアー誘導体、及びそれらの組み合わせが含まれるがこれらに限定されない。好適な抗座瘡活性成分には、サリチル酸、硫黄、乳酸、グリコール酸、ピルビン酸、尿素、レゾルシノール、Ｎ－アセチルシステイン、レチノイン酸、過酸化ベンゾイル、オクトピロックス、トリクロサン、アゼライン酸、フェノキシエタノール、フェノキシプロパノール、フラボノイド、それらの誘導体、及びそれらの組み合わせが含まれるがこれらに限定されない。サリチル酸及び過酸化ベンゾイルが好ましい。

これより、本発明を具体的な実施例を参照して説明する。これらは単なる例示であり、説明を目的とするものにすぎない：それらは、請求された独占権の範囲または記載された発明にいかなる形でも制限することを意図していない。これらの例は、本発明を実施するために現在企図される最良の態様を構成する。

実施例１：ｉｄｏＢＲ１によるシアリダーゼ阻害
序論
シアリダーゼまたはノイラミニダーゼは、オリゴ糖及び複合糖質からの末端シアル酸の切断を触媒する酵素である。それらは、生物学的システムにおけるシアル酸含有分子の代謝を調節する上で重要な役割を果たしている。それらは、多くのウイルス及び病原性細菌、例えば、Ｔａｎｎｅｒｅｌｌａ ｆｏｒｓｙｔｈｉａにとって病原因子でもある。ヒト好中球のシアリダーゼ活性は、宿主炎症反応において重要な役割を果たすことが報告されている（Ｇｌａｎｚ，Ｖ．Ｙ．，２０１９，Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．８４２，３４５）。

方法。シアリダーゼアッセイは、２０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液中の０．１ｍＭのメチルウンベリフェリル－Ｎ－アセチルノイラミン酸、ｐＨ７．２の存在下でインキュベーションされた２．８ｍＭ及び０．２８ｍＭの阻害剤（または阻害剤を含まない水）及び２．５ｎＭのシアリダーゼ（Ｔ．ｆｏｒｓｙｔｈｉａからのＮａｎＨを含む）を使用した。反応を、ｐＨ１０．５の６０ｍＭの炭酸ナトリウム緩衝液の添加により３０秒及び６０秒の時点で停止させた。蛍光性メチルウンベリフェロン（ＭＵ）の放出を、４５０ｎｍの蛍光発光、３５０ｎｍの励起を測定することによって定量した。シアリダーゼ活性パーセンテージは、阻害剤を用いない反応のものと比較した３０秒～６０秒の間の蛍光の変化として表した。反応を三重に行った。

結果
ｉｄｏＢＲ１は、シアリダーゼの阻害をもたらしが、これは使用された両方の濃度（２．８ｍＭ［３６％］及び０．２８ｍＭ［４２％］）で３０％を超える阻害を伴い、明確には用量依存的ではなかった。両方の濃度で確認された同様の阻害は、阻害が競合的ではないことを示唆している。

実施例２：ＴＨＰ－１細胞における内因性シアリダーゼ活性の阻害アッセイ
序論
この研究の目的は、ｉｄｏＢＲ１または１％を超えるｉｄｏＢＲ１を有するキュウリ抽出物（Ｑ－アクチンバッチＢ１７ＣＦ００１）が、ヒトＴＨＰ－１（単球様）細胞培養物においてシアリダーゼの活性に影響を及ぼし得るかどうかを決定することであった。この研究の結果は、ｉｄｏＢＲ１によるシアリダーゼの発現の減少または酵素の阻害の組み合わせであり得る。

方法
シアリダーゼ活性試験のためのＴＨＰ－１細胞株処置
ＴＨＰ－１細胞を、培養フラスコにおいて８０％コンフルエントとなるまでメルカプトエタノール及びグルタミンが補填されたＲＰＭＩ培地において培養し、次いで吸引し、１５００ｒｐｍで５分間遠心分離した。次いで細胞ペレットを１ｍｌのＲＰＭＩ完全培地に再懸濁し、血球計を使用して慣例的にカウントした。細胞（５×１０６）を別のディッシュにおいてＰＭＡ（１０ｎｇ／ｍｌ）と共にインキュベーションしてＴＨＰ－１細胞を分化させた。シアリダーゼ活性を決定するために、ＴＨＰ－１細胞を、ｉｄｏＢＲ１及びキュウリ抽出物－Ｑ－アクチン（バッチ番号Ｂ１７ＣＦ００１）でそれぞれ１００μｇ／ｍｌ～１２．５μｇ／ｍｌ及び２００μｇ／ｍｌ～２５μｇ／ｍｌの濃度で１時間前処置し、続いてＬＰＳ（１μｇ／ｍｌ）で２４時間刺激した。インキュベーション後、細胞を使用してシアリダーゼ活性を決定した。

ＴＨＰ－１細胞をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、０．２５Ｍスクロース、１ｍＭのＥＤＴＡ、及び０．２ｍＭのフッ化フェニルメチルスルホニルを含有する氷冷緩衝液に再懸濁した。細胞懸濁液を低設定（６％の振幅）（ＶｉｂｒａｃｅｌｌＴＭ；Ｓｏｎｉｃｓ ａｎｄ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｉｎｃ．，Ｎｅｗｔｏｗｎ，ＣＴ）で氷上で１５秒間超音波処理し、続いて２５，０００ｇで１５分間４℃で遠心分離した。得られた上清を使用してリソソームシアリダーゼ活性を決定した。上清のタンパク質定量を、上述したようにＢｉｏ－Ｒａｄタンパク質決定キットを使用して実施した。リソソームシアリダーゼ活性の決定のため、２００μｇの総タンパク質を、４０ｎｍｏｌの４－メチルウンベリフェリル－α－Ｎ－アセチル－Ｄ－ノイラミン酸（Ｓｉｇｍａ）、リソソームシアリダーゼ特異的基質、１０μｍｏｌの酢酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ４．６、及び２００μｇのウシ血清アルブミン（合計体積２００μｌ）と混合した。シアリダーゼ反応を３７℃で１時間進行させ、０．２５ＭグリシンＮａＯＨ、ｐＨ１０．４の添加によって停止させた。放出された４－メチルウンベリフェロンを、３６５ｎｍの励起波長及び４４８ｎｍの発光波長で蛍光測定（Ｓｙｎｅｒｇｙ２マルチモードプレートリーダー）で測定した。シアリダーゼ活性は、１６時間の細胞インキュベーションの時点で最大であることが判明した。

結果

シアリダーゼ活性は、ＬＰＳ（１μｇ／ｍＬ）処置後の１６時間の時点で最高であることが判明し、そのため、このインキュベーション時間を、ＴＨＰ－１細胞におけるシアリダーゼ活性に対するｉｄｏＢＲ１及びキュウリ抽出物の効果のさらなる評価のために使用した。

５０μｇ／ｍｌ及び１００μｇ／ｍｌで試験された標準ｉｄｏＢＲ１は、ＬＰＳ対照と比較してそれぞれ０．６３及び０．５５の相対的シアリダーゼ活性の最大減少を示した。１００μｇ／ｍｌ及び２００μｇ／ｍｌでのＱ－アクチンは、対照（ＬＰＳ）と比較してそれぞれ０．７及び０．６２の相対的シアリダーゼ活性の最大減少を示した。

実施例３：ＥＬＩＳＡを使用したｉｄｏＢＲ１の存在下でのＣＤ４４－ＨＡ（ヒアルロン酸）結合活性のためのＴＨＰ－１細胞株処置
序論
ＣＤ４４は、造血、粘膜リンパ組織へのホーミング、及び炎症性組織へのリンパ球浸潤に関与することが示されている。ＣＤ４４及びＣＤ１６８（ＲＨＡＭＭ）とのヒアルロン酸（ＨＡ）相互作用は、チロシンキナーゼ、プロテインキナーゼＣ、ＦＡＫ、及びＰＩ３Ｋ、ＭＡＰＫ、ＮＦκＢ、及びＲＡＳ、ならびに炎症及びがんに必要とされる細胞骨格成分の活性化を含む多数の細胞挙動を誘導し得る。ほとんどの細胞は、ＣＤ４４のいくつかの形態を発現するが、すべての細胞がＨＡに構成的に結合するわけではない（Ｋｒｙｗｏｒｕｃｈｋｏ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９４，５４；Ｎａｎｄｉ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７５，１４９３９）。機能的に活性なＨＡ接着ＣＤ４４は、ＭＡＰＫ活性化を介してシアリダーゼの誘導により生成される。ＬＰＳで誘導される炎症反応におけるＭＡＰＫの役割を理解するために行われた研究は、ＭＡＰＫｐ４２／４４媒介ＴＮＦ－α生成及びその後のＴＮＦ－α媒介ｐ３８活性化が、シアリダーゼ活性によるＨＡ接着ＣＤ４４の生成をもたらすことを示している（Ｇｅｅ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７８，３７２７５）。

方法
ＴＨＰ－１細胞を、培養フラスコにおいて８０％コンフルエントとなるまでメルカプトエタノール及びグルタミンが補填されたＲＰＭＩ培地において培養し、次いで吸引し、１５００ｒｐｍで５分間遠心分離した。次いで細胞ペレットを１ｍｌのＲＰＭＩ完全培地に再懸濁し、血球計を使用して慣例的にカウントした。細胞（５ｘ１０６）を別のディッシュにおいてホルボール１２－ミリステート１３－アセテートＰＭＡ）（１０ｎｇ／ｍｌ）と共にインキュベーションしてＴＨＰ－１細胞の分化を引き起こした。ＣＤ４４－ＨＡ結合活性を決定するために、ＴＨＰ－１細胞を、ｉｄｏＢＲ１またはキュウリ抽出物－Ｑ－アクチン（バッチ番号Ｂ１７ＣＦ００１）でそれぞれ１００μｇ／ｍｌ～１２．５μｇ／ｍｌ及び２００μｇ／ｍｌ～２５μｇ／ｍｌの濃度で１時間前処置し、続いてＬＰＳ（１μｇ／ｍｌ）で２４時間刺激した。インキュベーション後、細胞ライセートをさらなる分析のために得た。

抗ＣＤ４４モノクローナル抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、２μｇ）を５０ｍＭの炭酸塩／重炭酸塩緩衝液（ｐＨ９．６）中で９６ウェルプレートにおける各ウェルにコーティングし、４℃で一晩インキュベーションした。未結合抗体を０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を有するＰＢＳ（ＰＢＳ－Ｔ洗浄溶液）を使用して除去した。ウェルを１％ＢＳＡを使用してブロッキングし、３７℃で１時間インキュベーションした。ウェルを、ＰＢＳ－Ｔ洗浄溶液を使用して２００μｌをウェルに添加することによって３回十分に洗浄した。５０μｌの細胞ライセートをウェルに添加し、３７℃で１時間インキュベーションした。次いでウェルを、各洗浄前にウェルを３０秒間浸漬することによって２００μｌのＰＢＳ－Ｔを添加することによって３回洗浄した。ビオチン化ヒアルロン酸（ＨＡ）抗体と、それに続いてストレプトアビジン－ＨＲＰを添加して免疫複合体を形成し、３７℃で６０分間インキュベーションした。溶液を吸引し、ウェルを２００μｌの洗浄溶液を用いてウェルを３０秒間浸漬することによって３回洗浄した。５０μｌのクロモゲンＡ及びクロモゲンＢの両方を各ウェルに添加した。プレートを光を避けて３７℃で１５分間インキュベーションした。反応を５０μｌの停止溶液を添加することによって停止させ、吸光度を４５０ｎｍで読み取った。

結果

ＣＤ４４結合ＨＡは、ＬＰＳ刺激（１μｇ／ｍｌ）ＴＨＰ－１細胞で１１０．４５ｎｇ／ｍｌであることが判明した。１００μｇ／ｍｌでのｉｄｏ－ＢＲ１は、ＬＰＳ対照と比較してＴＨＰ－１細胞においてＬＰＳ誘導炎症反応でＣＤ４４－ＨＡレベルの最高減少（２６．６２％）を示した。２００μｇ／ｍｌでのキュウリ抽出物－Ｑ－アクチンは、ＬＰＳ対照と比較してＴＨＰ－１細胞においてＬＰＳ誘導炎症反応でＣＤ４４－ＨＡレベルの最高減少（３０．６０％）を示した。

実施例４：ヒト血液におけるｉｄｏＢＲ１及びＱ－アクチンキュウリ抽出物によるＴＮＦ－アルファ生成の減少
序論
単球（マクロファージ）及びＴリンパ球によって生成されるサイトカインであるＴＮＦ－αは、炎症反応をもたらす因子のカスケードにおいて重要な要素であり、疾患状態の主要なオーケストレータとして多くの多面的な効果を有する（Ｂｅｕｔｌｅｒ，Ｂ．ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，７，６２５）。ＴＮＦ－αの生物学的効果は、その濃度及び生成部位に依存する：低濃度では、ＴＮＦ－αは、所望の恒常性及び防御機能をもたらし得るが、高濃度では、全身的にまたは所定の組織で、ＴＮＦ－αは、他のサイトカイン、特にインターロイキン－１（ＩＬ－１）と相乗作用して多くの炎症反応を悪化させ得る。この研究の目的は、ヒト全血におけるＴＮＦ－レベルを調節する能力に関してｉｄｏＢＲ１またはｉｄｏＢＲ１を有するキュウリ抽出物の抗炎症活性を評価することであった。

方法
Ｓｃｏｔｔｉｓｈ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｂｌｏｏｄ Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ Ｓｅｒｖｉｃｅ（ＳＮＢＴＳ），Ｇｌａｓｇｏｗ，ＵＫによって血液及びバフィーコート画分が供給された。Ｆｉｃｏｌｌ Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ（１．０７７ｇ／ｌ）、リポ多糖（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ａｂｏｒｔｕｓ ｅｑｕｉ由来）をＳｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．Ｌｔｄ．（ＵＫ）から購入した。ＰＧＥは、Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．（Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ，ＭＩ）からのものである。ＴＮＦ－αＥＬＩＳＡアッセイのためのヒトＴＮＦ－α抗体対をＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ／Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｅｕｒｏｐｅから購入した。すべての薬物をＧｉｂｃｏ ＢＲＬ，ＵＫ製のＲＰＭＩ１６４０に溶解した。

血液は、献血後にいかなるさらなる処置もせずに使用した。それは親切にも、Ｓｃｏｔｔｉｓｈ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｂｌｏｏｄ Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ Ｓｅｒｖｉｃｅによって、すべてがＨＩＶ、Ｂ型及びＣ型肝炎、ＣＭＶ及び寄生虫疾患、例えば、マラリアについて陰性であることを確保することによって（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｂｌｏｏｄ Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ ｓｅｒｖｉｃｅによって試験された）定義される正常な健康ドナーから供給された。それらはまた、常に＜５０ｐｇ／ｍｌであったＴＮＦ－αの基礎レベルを測定することによって血液が採取された時に急性炎症性疾患がないことが我々の実験室によって確認された。

細胞の刺激及びＴＮＦ－αの測定
全血のアリコート（８００μｌ）を、結果に示されているように、ＲＰＭＩ１６４０に溶解した化合物と共に適切なプレインキュベーション期間でインキュベーションし、この後にＬＰＳを添加し、空気中５％ＣＯ_２の加湿（１００％）雰囲気内で３７℃でさらに２０時間インキュベーションを継続した。インキュベーション期間の最後に、血漿または培地のいずれかからの上清を１０，０００ｇで３０秒間室温で遠心分離によって収集し、ＴＮＦ－αレベルをヒトＴＮＦ－αＥＬＩＳＡシステム（ＢｉｏＳｏｕｒｃｅ Ｅｕｒｏｐｅ Ｓ．Ａ．，Ｂｅｌｇｉｕｍ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎによって供給された）を使用して測定した。

結果
ヒト血液中のＬＰＳ誘導ＴＮＦ－αに対するキュウリ抽出物及びｉｄｏＢＲ１の強力な活性が以下の２つの表に示されている。０．０９％でｉｄｏＢＲ１を含有するキュウリ抽出物（試作Ｑ－アクチン）はＴＮＦ－αを減少させたのに対し、ｉｄｏＢＲ１は、１０μＭよりもはるかに低くても有効であることが示され、ｉｄｏＢＲ１が単独でキュウリ抽出物の抗炎症効果の原因であり得ることを確認した。Ｑ－アクチンは、ここで使用された試作抽出物よりも１０～１００倍多いｉｄｏＢＲ１を含有する。１０分の１のｉｄｏＢＲ１を有するＱ－アクチン抽出物は、ＴＮＦ－αに対して１０分の１の効果を有していた（データは示されていない）。

第２の研究は、プレインキュベーションを用いたヒト血液におけるｉｄｏＢＲ１（０．０１μＭで有意）についてさらに高い活性を示した。４８時間のプレインキュベーションでのｉｄｏＢＲ１のＩＣ_５０を、血液の場合は１８２ｎＭとして及びヒト単球細胞株ＴＨＰ－１細胞によるＴＮＦ－αの生成の阻害の場合は２７ｎＭとして算出した。ｉｄｏＢＲ１は、トリパンブルー取り込みまたはＭＴＴ色素変換によって測定された場合、ＴＨＰ－１細胞の生存性を有意に変化させなかった。ｉｄｏＢＲ１（１０μＭ）の阻害性作用は、デキサメタゾン（５０μＭ）を用いた同じ前処置のものと同等であり、それぞれ＞５０％及び＞６５％阻害した。ＬＰＳを伴うミフェプリストン（グルココルチコイド受容体アンタゴニスト）単独では、ＴＨＰ－１細胞からのＴＮＦ－α生成を大幅に増幅させたが、デキサメタゾンの存在下では、それはデキサメタゾンの抑制作用を逆行させたが、ｉｄｏＢＲ１のそれは逆行させなかった。データは、ｉｄｏＢＲ１がヒト血液におけるＴＮＦ－αの生成を阻害することができることを明確に示している。よって、それは強力な抗炎症剤であり得るようである。また、それは、ステロイド受容体経路とは異なる新規メカニズムを介して作用している可能性があるようである。

ヒト血液においてＬＰＳで刺激されたＴＮＦ－α生成に対する様々なｉｄｏＢＲ１濃度の効果を示す表。全血を様々な濃度のｉｄｏＢＲ１と共に４８時間プレインキュベーションし、その後にＬＰＳ（１０μｇ／ｍｌ）を添加し、インキュベーションをさらに２０時間継続した。３７℃（５％ＣＯ_２、１００％湿度）でのインキュベーション後、血液から血漿を遠心分離によって収集し、血漿サンプルにおけるＴＮＦ－αのレベルをＥＬＩＳＡによって測定した。

実施例５：ＬＰＳで刺激されたＴＨＰ－１細胞におけるサイトカインＩＬ－１０、ＩＬ－１２及びＩＬ－１βに対するｉｄｏＢＲ１及びキュウリ抽出物の効果
序論
ＩＬ－１０は、抗炎症サイトカイン及び炎症性サイトカインの重要な負の調節因子である。Ｔ細胞、Ｂ細胞、及び単球／マクロファージを含む多様な細胞タイプは、免疫活性化の異なる条件下でＩＬ－１０を分泌する（Ｍｏｏｒｅ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１１，１６５）。ｉｎ ｖｉｔｒｏ研究は、ＩＬ－１０がＩＬ－１β、ＩＬ－６、ＴＮＦ－α、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、及びＩＬ－１２の放出及び機能を抑制することを示し（Ｃａｓａｔｅｌｌａ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１７８，２２０７；ｄｅ Ｗａａｌ Ｍａｌｅｆｙｔ，Ｒ．ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１７４，１２０９；Ｆｉｏｒｅｎｔｉｎｏ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７，３８１５）、これにより免疫反応及び炎症の制御のための正常な内因性フィードバックメカニズムを示唆している（Ａｓａｄｕｌｌａｈ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０１，７８３；，Ｊｏｏｓｔｅｎ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．，４０，２４９）。研究は、ＩＬ－１０がＩＬ－１２ ｐ４０及びｐ３５ならびに主に転写レベルでのＴＮＦ－ａ遺伝子発現に対するその抑制的効果を発揮することを実証した（Ａｓｔｅ－Ａｍｅｚａｇａ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６０，５９３６）。いくつかの自己免疫疾患の発病に関与する炎症性サイトカインの中で、ＩＬ－１２は、ＩＦＮ－γ生成及びＴヘルパー（Ｔｈ）１自己免疫反応の発生の主要な刺激剤である（Ｐａｕｎｏｖｉｃ，Ｖ．ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ，４７，７７１）。ＩＬ－１２は、多様なサイトカインと相乗作用し、ＩＦＮ－γ及び炎症性サイトカインの生成を誘導することが実証されている。単球／マクロファージは、感染時にまたはＬＰＳの刺激によって炎症を媒介するＴＮＦ－αと共にＩＬ－１βを生成する。それは、独立して及び他のメディエーターと組み合わさって炎症反応及び異化作用を誘導する。ＩＬ－１βによる細胞の生物学的活性化は、別のＩＬ－１群であるＩＬ－１αとも結合し得る膜受容体、すなわち、ＩＬ－１Ｒ１（ＩＬ－１ＲＩ、ＣＤ１２１ａ）との相互作用によって媒介される。

方法
ＴＨＰ－１単球に対するＥＬＩＳＡアッセイ
ＥＬＩＳＡアッセイのためのサンプル調製
８０％コンフルエントの培養フラスコ内の細胞を吸引し、１５００ｒｐｍで５分間遠心分離した。次いで細胞ペレットを１ｍｌのＲＰＭＩ完全培地に再懸濁し、９６ウェルマイクロタイタープレートの各ウェルに１×１０５細胞／ウェルで播種した。２４時間のインキュベーション後、ＰＭＡ（１０ｎｇ／ｍｌ）を９６ウェルプレートに添加してＴＨＰ－１細胞を分化させてＴＮＦ－α生成を決定し、ＴＨＰ－１細胞を、ｉｄｏＢＲ１またはキュウリ抽出物－Ｑ－アクチン（バッチ番号Ｂ１７ＣＦ００１）で２００μｇ／ｍｌ～２５μｇ／ｍｌを２倍に順次希釈した濃度で１時間前処置し、続いてＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）で２時間刺激した。インキュベーション後、ウェルの各々からの細胞上清を滅菌マイクロ遠心チューブ内に吸引し、１０００ｒｐｍで２～３分間遠心分離した。次いで細胞上清を、ＥＬＩＳＡを使用してサイトカインの存在の評価のために使用した。

サンドイッチＥＬＩＳＡアッセイ
ＩＬ－１２、ＩＬ－１β、またはＩＬ－１０に対する抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＵＳＡ）でコーティングされたＥＬＩＳＡプレートを以下の研究のために使用した。各ウェルに５０μＬのアッセイ希釈剤ＲＤ１Ｆを十分に混合した後に添加した。ウェル当たり２００μＬのサンプル（ｉｄｏＢＲ１または抽出物）、または対照を添加し、接着ストリップで覆った。２時間室温でインキュベーションした後、各ウェルを吸引し、洗浄緩衝液（４００μｌ）で４回洗浄した。最後の洗浄の後、残存する洗浄緩衝液を吸引またはデカンテーションによって除去した。プレートを反転させ、清潔なペーパータオルで拭き取った。各ウェルに２００μｌの適切なヒトコンジュゲートを添加し、次いでこれらを新たな接着ストリップで覆い、室温で１時間インキュベーションした。次いで吸引／洗浄を繰り返した。次いで２００μＬの基質溶液を各ウェルに添加し、遮光して室温で２０分間さらにインキュベーションした。５０μＬの停止溶液を各ウェルに添加した。ウェルの色は青色から黄色に変化した。３０分以内に４５０ｎｍでＯＤを測定した。

結果

ｉｄｏＢＲ１及びキュウリ抽出物の両方で抗炎症マーカーＩＬ－１０がそれぞれ３．０４及び３．６５倍増加した。ＩＬ－１０の結果は、抗炎症効果を示す。１００μｇ／ｍＬでのｉｄｏＢＲ１は、ＬＰＳ対照と比較してＴＨＰ－１細胞においてＬＰＳ誘導炎症反応でＩＬ－１２レベルの２４．５３％の減少を示した。２００μｇ／ｍＬでのキュウリ抽出物Ｑ－アクチンは、ＬＰＳ対照と比較してＴＨＰ－１細胞においてＬＰＳ誘導炎症反応でＩＬ－１２レベルの２５．８８％の減少を示した。１００μｇ／ｍＬでのｉｄｏＢＲ１は、ＬＰＳ対照と比較してＴＨＰ－１細胞においてＬＰＳ誘導炎症反応でＩＬ－１βレベルの２４．０７％の減少を与えた。２００μｇ／ｍＬでのキュウリ抽出物Ｑ－アクチンは、ＴＨＰ－１細胞においてＬＰＳ誘導炎症反応でＩＬ－１βレベルの最も高い減少（２２．５３％）を示した。

実施例６：Ｑ－アクチンを用いたジムワークアウトは、ヒト血液中で測定されるＩＬ－１０を増加させる
序論
我々は、ｉｄｏＢＲ１及びキュウリ抽出物（Ｑ－アクチン）によるＴＨＰ－１細胞における抗炎症サイトカインＩＬ－１０の調節を示した。筋肉炎症反応を自然に引き起こす所与の激しい運動レジームが与えられたＱ－アクチンを摂取している人々におけるサイトカインの調節をここで試験する。

方法
運動回復実験において、７人のプラセボ対象及び１０人のＱ－アクチン対象を使用して、血液サンプル中のＩＬ－１０を測定した。対象に１日２回１０ｍｇのＱ－アクチンまたはプラセボ（いずれもカプセル）を、激しい運動をした４日間の０日目から１、２、３日目及び４日目（回復日である）に与えた。血液サンプルを１、２、３日目の運動の前及び後ならびに回復の４日目の最後に採取した。ＩＬ－１０をＥＬＩＳＡアッセイによって測定した。

結果
Ｑ－アクチンが与えられた対象は、運動を開始するとＩＬ－１０が有意に大幅に増加する傾向を示し、ＬＰＳで刺激されたＴＨＰ－１細胞において得られた結果を裏付けた。

実施例７：ｉｄｏＢＲ１及びｉｄｏＢＲ１を含有するキュウリ抽出物のＭＡＰＫシグナル伝達効果
序論
ＭＡＰＫシグナル伝達カスケードは、炎症反応の開始において役割を果たす。炎症性サイトカイン遺伝子の誘導は、ＭＡＰＫの活性化を必要とし、細胞外調節プロテインキナーゼ／マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＥＲＫ／ＭＡＰＫ）経路の刺激は、下流炎症反応に不可欠である（Ｋａｍｉｎｓｋａ，Ｂ．，２００５，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１７５４，２５３；Ｂｕｃｈｈｏｌｚ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，７５，５９２４）。ＭＡＰＫ経路はまた、ＣＯＸ－２、ｉＮＯＳ、ＩＬ－１β、及びＴＮＦ－αを含む炎症性メディエーター遺伝子の発現に必要とされる。ＥＲＫ及び／またはｐ３８ ＭＡＰＫは、ＩＬ－１βの上方制御に関与することが報告された（Ｂａｌｄａｓｓａｒｅ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６２，５３６７）。

方法
ＴＨＰ－１細胞を、培養フラスコにおいて８０％コンフルエントとなるまでメルカプトエタノール及びグルタミンが補填されたＲＰＭＩ培地において培養し、次いでそれらを吸引し、１５００ｒｐｍで５分間遠心分離した。次いで細胞ペレットを１ｍｌのＲＰＭＩ完全培地に再懸濁し、血球計を使用して慣例的にカウントした。細胞（５×１０６）を別のディッシュにおいてＰＭＡ（１０ｎｇ／ｍｌ）と共にインキュベーションしてＴＨＰ－１細胞を分化させた。タンパク質発現ｐ３８及びｐ４２／４４を決定するために、ＴＨＰ－１細胞をｉｄｏＢＲ１－１００μｇ／ｍｌ及び５０μｇ／ｍｌならびにキュウリ抽出物（Ｑ－アクチンバッチ番号Ｂ１７ＣＦ００１）－２００μｇ／ｍｌ及び１００μｇ／ｍｌで１時間前処置し、続いてＬＰＳ（１μｇ／ｍｌ）で２時間刺激した。インキュベーション後、細胞を回収し、タンパク質全体を単離した。

ウェスタンブロット手順
細胞ペレットを溶解し、タンパク質濃度をＢｉｏ－Ｒａｄタンパク質決定アッセイ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用して決定した。全細胞タンパク質を８％ポリアクリルアミドＳＤＳゲル電気泳動に供し、続いてポリビニリデンジフルオライド膜（Ｔｈｅｒｍｏｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）上に移した。膜をマウス抗ホスホｐ３８ｍＡｂ（Ｔｈｅｒｍｏｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）またはマウス抗ホスホｐ４２／４４ｍＡｂ（Ｔｈｅｒｍｏｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）のいずれかで、続いて西洋ワサビペルオキシダーゼがコンジュゲートされたヤギ抗マウスポリクローナル抗体（Ｔｈｅｒｍｏｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）でプローブした。すべてのイムノブロットをＥＣＬ（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）によって可視化した。１００μｇ／ｍｌ及び２００μｇ／ｍｌで試験された試験サンプルＱ－アクチンは、ＬＰＳ対照と比較してそれぞれ０．９２及び０．８３のリン酸化ｐ３８発現の相対的減少を示した。５０μｇ／ｍｌ及び１００μｇ／ｍｌのｉｄｏＢＲ１の場合、ＬＰＳ対照と比較してそれぞれ０．８８及び０．８０のリン酸化ｐ３８発現の減少を示した。１００μｇ／ｍｌ及び２００μｇ／ｍｌで試験されたＱ－アクチンは、ＬＰＳ対照と比較してそれぞれ０．８１及び０．７８のリン酸化ＥＲＫ４２／４４発現の相対的減少を示した。５０μｇ／ｍｌ及び１００μｇ／ｍｌでのｉｄｏＢＲ１は、ＬＰＳ対照と比較してそれぞれ０．８０及び０．７６のリン酸化ＥＲＫ４２／４４発現の減少を示した。

そのため、ｉｄｏＢＲ１及びｉｄｏＢＲ１を含有するキュウリ抽出物（Ｑ－アクチン）はいずれとも、炎症反応において不可欠な役割を果たすＭＡＰＫシグナル伝達カスケードを低減することができることが示された。

実施例８：ｉｄｏＢＲ１の経口利用可能性及びｉｎ ｖｉｖｏ安定性
序論
この研究の目的は、摂取されたキュウリ／ガーキンからのｉｄｏＢＲ１の経口利用可能性を尿中のそれを測定することによって調べることであった。この研究は、ｉｄｏＢＲ１の経口利用可能性及び全身的活性の可能性を示唆しただけでなく、化合物が未変化のまま膜を通過する能力を裏付けており、よって、局所利用可能性も裏付けている。

方法
Ｐａｒｉｓｉｅｎ ｐｉｃｋｌｉｎｇキュウリ（Ｌｉｄｌ ２０１３から購入した種子）を有機栽培し、１人の男性ボランティア及び１人の女性ボランティアの各々が正午に３つ摂取した。消費された生重量は、消費されたキュウリのすべてから除去された３０ｇの比較用重量を加えて各場合で２６０ｇであり、これを分析のために維持した。ボランティアは、実験前の１５時間、Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｅ食品を摂取しなかった。消費前の尿サンプルをｔ＝０として３時間にわたって収集し、次いでサンプルを女性の場合は９時間及び男性の場合は１５時間収集した。３０ｇのキュウリサンプルを５０％エタノール（ａｑ）中でホモジナイズし、１５時間の抽出後にそれを濾過し、ｉｄｏＢＲ１画分をＨ＋型のカチオン交換樹脂ＩＲ１２０に結合させた。カラムを水で洗浄した後、２Ｍアンモニア溶液で置換した物質を乾燥させ（５２．３ｍｇ）、Ｐｉｅｒｃｅ ＴｒｉＳｉｌを使用したトリメチルシリル化後にＧＣ－ＭＳによって分析した。次いで残りの５１ｍｇの物質には、比較定量の目的のために０．２ｍｇのカスタノスペルミンを添加した。アンモニア溶液で置換された物質を同じ陽イオン交換樹脂（この場合はアンモニウム型）で２回目を実行して強塩基（アンモニウム型のＩＲ１２０に結合する）を減少させ、保持されなかった物質のみが維持されたことを除き、陽イオン交換樹脂を使用して尿サンプル全体を同様に処置した。尿ｉｄｏＢＲ１画分を乾燥させ、水で２０ｍｌとした。各々の５００ｕｌをサンプリングし、０．０２５ｍｇのカスタノスペルミンを添加した。

結果
キュウリのＧＣＭＳ分析
これは、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｔｕｒｂｏｍａｓｓ Ｇｏｌｄ ＧＣＭＳで行った。１０．３３分での主要ピークのスペクトルは、真正のｉｄｏＢＲ１，９００２８８ ＰｈｙｔｏＱｕｅｓｔ Ｌｔｄ，ＵＫ）のＧＣＭＳスペクトルと一致した。真正のＢＲ１（９００１２５，ＰｈｙｔｏＱｕｅｓｔ Ｌｔｄ）とカスタノスペルミンとの間の相対反応因子は１：２であると計算された。同じ反応因子を想定して、ｉｄｏＢＲ１の量を３０ｇのサンプル中で１．５ｍｇと推定し、これは、ボランティアがおおよそ２６０／３０×１．５ｍｇ＝１３ｍｇのｉｄｏＢＲ１を消費したことを意味する。

尿の結果
キュウリの消費前に収集した尿サンプルは、ｉｄｏＢＲ１の保持時間（１０．３３分）で有意なピークを示さなかった。１５時間後、男性は、カスタノスペルミン参照ピーク面積と比較しておよそ２．４ｍｇのｉｄｏＢＲ１の排出を示したが、摂取及び排泄のより正確な測定が、決定的なマスバランスに必要とされるであろう。女性は、およそ２．１ｍｇのｉｄｏＢＲ１を排泄した。この研究では、ｉｄｏＢＲ１が経口で利用可能であり、尿中で測定できることが確認され、このことは、それが経口摂取から血流に入ることができ、少なくとも有意な割合が未変化のまま尿中に排泄されることを意味している。これは、化合物が消化管において膜を通過でき、尿中に有意に存在することを示している。尿分析では明らかなコンジュゲーションは観察されなかった。

残存するｉｄｏＢＲ１がより長い間体内に残存していた可能性がある。よって、それは強力な抗炎症剤であり得、長期持続性であり得るようである。

実施例９：ミクログリア細胞に対するｉｄｏＢＲ１の効果
序論
ミクログリア細胞は、中枢神経系（ＣＮＳ）の常在マクロファージである。これらの細胞は、ＣＮＳにおける活性免疫防御の主要な形態である。アルツハイマー病及びパーキンソン病などの神経変性障害では、ミクログリアは、慢性的に活性化され、正常なＣＮＳ活性をさらに妨害する炎症性サイトカインの放出を促進する。生物活性食品成分が、酸化ストレスを減少させることによって及び／または炎症性遺伝子発現を減少させることによって炎症の作用を軽減し得る程度を試験することについて大きな関心が存在する。

方法
ネズミ科動物ミクログリア細胞株ＢＶ－２の細胞培養物において準最適ＬＰＳを用いて及び用いずに０、２０、４０及び８０μｇ／ｍｌでｉｄｏＢＲ１を使用した。２４時間後にＴＮＦ－α及び亜硝酸塩の生成を測定した。興味深いことに、Ｑ－アクチンからのｉｄｏＢＲ１は、刺激されたミクログリア細胞によるＴＮＦ－α及び亜硝酸塩生成を減少させるのに有効であることが判明した。

均等物
前述の説明は、本発明の現在の好ましい実施形態を詳述している。その実施における多数の改変及び類型が生じることがこれらの説明を考慮して当業者に予想される。それらの改変及び類型は、本明細書に添付された特許請求の範囲に包含されることが意図される。

Claims (12)

1. ウイルスまたは細菌感染症を処置する方法において使用するためのｉｄｏＢＲ１および薬学的に許容可能な賦形剤または担体を含む薬学的組成物。
2. 細菌感染症を処置する方法において使用するための請求項１に記載の薬学的組成物。
3. 前記方法は、ｉｎ ｖｉｖｏで片利共生及び／または病原性細菌増殖を阻害することを含む、請求項２に記載の薬学的組成物。
4. 前記方法は、宿主－細菌細胞相互作用を阻害すること、及び／または哺乳動物（例えば、ヒト）宿主において細菌バイオフィルム形成を阻害または排除することを含む、請求項２または請求項３に記載の薬学的組成物。
5. 前記方法は、細菌バイオフィルムの存在によって媒介または特性化される疾患及び障害の処置または予防を含む、請求項２～４のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
6. 前記バイオフィルムは、歯肉縁下プラークバイオフィルム及び粘膜バイオフィルムから選択される、請求項５に記載の薬学的組成物。
7. Ｔａｎｎｅｒｅｌｌａ ｆｏｒｓｙｔｈｉａ、Ｔａｎｎｅｒｅｌｌａ ｄｅｎｔｉｃｏｌａ、Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓまたはＧａｒｄｎｅｒｅｌｌａ ｖａｇｉｎａｌｉｓの感染によって引き起こされる歯周病、細菌性膣症及び／または疾患を処置する方法において使用するための、請求項６に記載の薬学的組成物。
8. 哺乳動物宿主における片利共生細菌増殖を調節する方法において使用するためのｉｄｏＢＲ１を含む組成物。
9. 前記方法は、哺乳動物宿主における片利共生細菌の組成の調節を含む、請求項８に記載の組成物。
10. 哺乳動物宿主は、ヒト宿主である、請求項９に記載の組成物。
11. アテローム形成を処置する方法において使用するためのｉｄｏＢＲ１および薬学的に許容可能な賦形剤または担体を含む薬学的組成物。
12. 前記アテローム形成は、アテローム性動脈硬化症である、請求項１１に記載の薬学的組成物。