JP7451229B2 - 皮脂腺細胞における皮脂分泌の観察方法、ならびに皮脂分泌制御物質のスクリーニング方法およびその用に供するキット - Google Patents
皮脂腺細胞における皮脂分泌の観察方法、ならびに皮脂分泌制御物質のスクリーニング方法およびその用に供するキット Download PDFInfo
- Publication number
- JP7451229B2 JP7451229B2 JP2020034034A JP2020034034A JP7451229B2 JP 7451229 B2 JP7451229 B2 JP 7451229B2 JP 2020034034 A JP2020034034 A JP 2020034034A JP 2020034034 A JP2020034034 A JP 2020034034A JP 7451229 B2 JP7451229 B2 JP 7451229B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- sebaceous gland
- sebum secretion
- substance
- cells
- sebum
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000000126 substance Substances 0.000 title claims description 233
- 210000001732 sebaceous gland Anatomy 0.000 title claims description 224
- 210000002374 sebum Anatomy 0.000 title claims description 190
- 230000028327 secretion Effects 0.000 title claims description 155
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 67
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 title claims description 62
- 238000012216 screening Methods 0.000 title claims description 39
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 98
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 77
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 55
- 102100027470 Axonemal dynein light chain domain-containing protein 1 Human genes 0.000 claims description 29
- 102100036357 Carnitine O-acetyltransferase Human genes 0.000 claims description 29
- 102100032777 Cysteine-rich C-terminal protein 1 Human genes 0.000 claims description 29
- 101000936503 Homo sapiens Axonemal dynein light chain domain-containing protein 1 Proteins 0.000 claims description 29
- 101000942007 Homo sapiens Cysteine-rich C-terminal protein 1 Proteins 0.000 claims description 29
- 101001106082 Homo sapiens Receptor expression-enhancing protein 6 Proteins 0.000 claims description 29
- 102100021075 Receptor expression-enhancing protein 6 Human genes 0.000 claims description 29
- 101150110330 CRAT gene Proteins 0.000 claims description 28
- 101000733752 Homo sapiens Retroviral-like aspartic protease 1 Proteins 0.000 claims description 28
- 102100033717 Retroviral-like aspartic protease 1 Human genes 0.000 claims description 28
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 27
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 12
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 claims description 6
- 230000007423 decrease Effects 0.000 claims description 4
- 230000001629 suppression Effects 0.000 claims 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 183
- 239000012128 staining reagent Substances 0.000 description 39
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 26
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 16
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 15
- 210000000270 basal cell Anatomy 0.000 description 14
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 14
- 210000001339 epidermal cell Anatomy 0.000 description 12
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 12
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 210000003780 hair follicle Anatomy 0.000 description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 9
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 8
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 8
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 8
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 8
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 8
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 7
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 7
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 description 5
- 238000012758 nuclear staining Methods 0.000 description 5
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 4
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 4
- 239000002771 cell marker Substances 0.000 description 4
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- PRDFBSVERLRRMY-UHFFFAOYSA-N 2'-(4-ethoxyphenyl)-5-(4-methylpiperazin-1-yl)-2,5'-bibenzimidazole Chemical compound C1=CC(OCC)=CC=C1C1=NC2=CC=C(C=3NC4=CC(=CC=C4N=3)N3CCN(C)CC3)C=C2N1 PRDFBSVERLRRMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N Linoleic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 description 3
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N linoleic acid Natural products CCCCC\C=C/C\C=C\CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N 0.000 description 3
- 235000020778 linoleic acid Nutrition 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- -1 DNA Chemical class 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 101001133056 Homo sapiens Mucin-1 Proteins 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 101150037996 KRT5 gene Proteins 0.000 description 2
- 102100034256 Mucin-1 Human genes 0.000 description 2
- 108020004711 Nucleic Acid Probes Proteins 0.000 description 2
- 102000000536 PPAR gamma Human genes 0.000 description 2
- 108010016731 PPAR gamma Proteins 0.000 description 2
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 2
- 239000002853 nucleic acid probe Substances 0.000 description 2
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 210000000106 sweat gland Anatomy 0.000 description 2
- OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N (9Z,12Z)-9,10,12,13-tetratritiooctadeca-9,12-dienoic acid Chemical compound C(CCCCCCC\C(=C(/C\C(=C(/CCCCC)\[3H])\[3H])\[3H])\[3H])(=O)O OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 101710159293 Acyl-CoA desaturase 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 239000012114 Alexa Fluor 647 Substances 0.000 description 1
- 239000012099 Alexa Fluor family Substances 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 108010066477 Carnitine O-acetyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 238000000018 DNA microarray Methods 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- IMQLKJBTEOYOSI-GPIVLXJGSA-N Inositol-hexakisphosphate Chemical compound OP(O)(=O)O[C@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H]1OP(O)(O)=O IMQLKJBTEOYOSI-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 101150040052 KRT14 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100040445 Keratin, type I cytoskeletal 14 Human genes 0.000 description 1
- 102100025756 Keratin, type II cytoskeletal 5 Human genes 0.000 description 1
- 102100023974 Keratin, type II cytoskeletal 7 Human genes 0.000 description 1
- 108010066321 Keratin-14 Proteins 0.000 description 1
- 108010070553 Keratin-5 Proteins 0.000 description 1
- 108010070507 Keratin-7 Proteins 0.000 description 1
- 108010006444 Leucine-Rich Repeat Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 101000687343 Mus musculus PR domain zinc finger protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- NPGIHFRTRXVWOY-UHFFFAOYSA-N Oil red O Chemical compound Cc1ccc(C)c(c1)N=Nc1cc(C)c(cc1C)N=Nc1c(O)ccc2ccccc12 NPGIHFRTRXVWOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- IMQLKJBTEOYOSI-UHFFFAOYSA-N Phytic acid Natural products OP(O)(=O)OC1C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C1OP(O)(O)=O IMQLKJBTEOYOSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- FHNINJWBTRXEBC-UHFFFAOYSA-N Sudan III Chemical compound OC1=CC=C2C=CC=CC2=C1N=NC(C=C1)=CC=C1N=NC1=CC=CC=C1 FHNINJWBTRXEBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N all-trans-retinoic acid Chemical compound OC(=O)\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000001001 laser micro-dissection Methods 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- XJCPMUIIBDVFDM-UHFFFAOYSA-M nile blue A Chemical compound [Cl-].C1=CC=C2C3=NC4=CC=C(N(CC)CC)C=C4[O+]=C3C=C(N)C2=C1 XJCPMUIIBDVFDM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- VOFUROIFQGPCGE-UHFFFAOYSA-N nile red Chemical compound C1=CC=C2C3=NC4=CC=C(N(CC)CC)C=C4OC3=CC(=O)C2=C1 VOFUROIFQGPCGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 description 1
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000000467 phytic acid Substances 0.000 description 1
- 229940068041 phytic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000002949 phytic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 230000008844 regulatory mechanism Effects 0.000 description 1
- 229930002330 retinoic acid Natural products 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 210000004378 sebocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 210000004304 subcutaneous tissue Anatomy 0.000 description 1
- YCUVUDODLRLVIC-VPHDGDOJSA-N sudan black b Chemical compound C1=CC(=C23)NC(C)(C)NC2=CC=CC3=C1\N=N\C(C1=CC=CC=C11)=CC=C1\N=N\C1=CC=CC=C1 YCUVUDODLRLVIC-VPHDGDOJSA-N 0.000 description 1
- 229940099373 sudan iii Drugs 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 229960001727 tretinoin Drugs 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
本発明は、皮脂腺細胞における皮脂分泌の観察方法に関する。本発明はまた、皮脂分泌制御物質のスクリーニング方法に関する。さらに、本発明は、皮脂分泌制御物質のスクリーニング用キットに関する。
皮脂は、皮脂腺から皮膚の表面に分泌され、体外の刺激から皮膚を保護する機能を有する。皮膚の健康を保つためには、過不足のない適度な皮脂の分泌が重要であることから、皮脂の産生を適度に調節する化粧料等の外用剤が望まれている。
上記のような商品を開発するに際して、皮脂の産生を調節し得る物質を探索する研究が鋭意進められている。そのような物質を探索するための技術として、本発明者は以前に、生体外から皮脂腺を観察する方法を報告している（特許文献１）。この方法によれば、生体外から皮脂分泌の動態を観察することができ、また、生体外において皮脂産生調節作用を有する物質をスクリーニングすることができる。
上記技術は優れたものであるが、なお、改善の余地がある。
そこで、本発明の一態様は、皮脂分泌の新たな指標を用いた、皮脂腺細胞における皮脂分泌の観察方法、ならびに皮脂分泌制御物質のスクリーニング方法およびその用に供するキットを提供することを目的とする。
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討を重ねた結果、皮脂腺細胞における特定の遺伝子の発現量を指標とすることにより、皮脂腺細胞における皮脂分泌が観察できることを初めて見出した。また、本発明者らは、上記特定の遺伝子の発現量を指標として、皮脂分泌制御物質のスクリーニングが可能であることを初めて見出した。そして、これの知見に基づき、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明の一実施形態は、以下の構成を包含する。
＜１＞皮脂腺細胞におけるＡＸＤＮＤ１、ＡＳＰＲＶ１、ＣＲＡＴ、ＣＲＣＴ１およびＲＥＥＰ６からなる群より選択される少なくとも１種の遺伝子の発現量を指標として皮脂分泌を観察することを特徴とする、皮脂腺細胞における皮脂分泌の観察方法。
＜２＞前記皮脂腺が、ヒト皮脂腺である、＜１＞に記載の観察方法。
＜３＞皮脂腺細胞におけるＡＸＤＮＤ１、ＡＳＰＲＶ１、ＣＲＡＴ、ＣＲＣＴ１およびＲＥＥＰ６からなる群より選択される少なくとも１種の遺伝子の発現量を指標として皮脂分泌制御物質を探索することを特徴とする、皮脂分泌制御物質のスクリーニング方法。
＜４＞皮脂腺細胞と被験物質とを接触させる前後における前記遺伝子の少なくとも１種の発現量を測定する測定工程、および
前記測定工程で得られた測定結果を比較し、当該比較結果から被験物質が皮脂分泌制御物質であるか否かを評価する評価工程
を含む、＜３＞に記載の皮脂分泌制御物質のスクリーニング方法。
＜５＞皮脂腺細胞と皮脂分泌制御物質とを接触させた後、前記遺伝子の少なくとも１種の発現量を測定する測定工程、
皮脂腺細胞と皮脂分泌制御物質と被験物質とを接触させた後、前記遺伝子の少なくとも１種の発現量を測定する測定工程、および
前記各測定工程で得られた測定結果を比較し、当該比較結果から被験物質が皮脂分泌制御物質であるか否かを評価する評価工程
を含む、＜３＞に記載の皮脂分泌制御物質のスクリーニング方法。
＜６＞ＡＸＤＮＤ１、ＡＳＰＲＶ１、ＣＲＡＴ、ＣＲＣＴ１およびＲＥＥＰ６からなる群より選択される少なくとも１種の遺伝子に対するプローブを含む、皮脂分泌制御物質のスクリーニング用キット。
＜１＞皮脂腺細胞におけるＡＸＤＮＤ１、ＡＳＰＲＶ１、ＣＲＡＴ、ＣＲＣＴ１およびＲＥＥＰ６からなる群より選択される少なくとも１種の遺伝子の発現量を指標として皮脂分泌を観察することを特徴とする、皮脂腺細胞における皮脂分泌の観察方法。
＜２＞前記皮脂腺が、ヒト皮脂腺である、＜１＞に記載の観察方法。
＜３＞皮脂腺細胞におけるＡＸＤＮＤ１、ＡＳＰＲＶ１、ＣＲＡＴ、ＣＲＣＴ１およびＲＥＥＰ６からなる群より選択される少なくとも１種の遺伝子の発現量を指標として皮脂分泌制御物質を探索することを特徴とする、皮脂分泌制御物質のスクリーニング方法。
＜４＞皮脂腺細胞と被験物質とを接触させる前後における前記遺伝子の少なくとも１種の発現量を測定する測定工程、および
前記測定工程で得られた測定結果を比較し、当該比較結果から被験物質が皮脂分泌制御物質であるか否かを評価する評価工程
を含む、＜３＞に記載の皮脂分泌制御物質のスクリーニング方法。
＜５＞皮脂腺細胞と皮脂分泌制御物質とを接触させた後、前記遺伝子の少なくとも１種の発現量を測定する測定工程、
皮脂腺細胞と皮脂分泌制御物質と被験物質とを接触させた後、前記遺伝子の少なくとも１種の発現量を測定する測定工程、および
前記各測定工程で得られた測定結果を比較し、当該比較結果から被験物質が皮脂分泌制御物質であるか否かを評価する評価工程
を含む、＜３＞に記載の皮脂分泌制御物質のスクリーニング方法。
＜６＞ＡＸＤＮＤ１、ＡＳＰＲＶ１、ＣＲＡＴ、ＣＲＣＴ１およびＲＥＥＰ６からなる群より選択される少なくとも１種の遺伝子に対するプローブを含む、皮脂分泌制御物質のスクリーニング用キット。
本発明の一態様によれば、皮脂分泌の新たな指標を用いた、皮脂腺細胞における皮脂分泌の観察方法、ならびに皮脂分泌制御物質のスクリーニング方法およびその用に供するキットを提供することができる。
本発明の一実施形態に関して以下に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。本発明は、以下に説明する各構成に限定されるものではなく、特許請求の範囲に示した範囲で種々の変更が可能であり、異なる実施形態にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態に関しても本発明の技術的範囲に含まれる。なお、本明細書において特記しない限り、数値範囲を表す「Ａ～Ｂ」は、「Ａ以上、Ｂ以下」を意味する。
〔１．概要〕
本発明の一実施形態に係る皮脂腺細胞における皮脂分泌の観察方法（以下、「本観察方法」と称する。）は、皮脂腺細胞におけるＡＸＤＮＤ１、ＡＳＰＲＶ１、ＣＲＡＴ、ＣＲＣＴ１およびＲＥＥＰ６からなる群より選択される少なくとも１種の遺伝子の発現量を指標として皮脂分泌を観察することを特徴とする、方法である。
本発明の一実施形態に係る皮脂腺細胞における皮脂分泌の観察方法（以下、「本観察方法」と称する。）は、皮脂腺細胞におけるＡＸＤＮＤ１、ＡＳＰＲＶ１、ＣＲＡＴ、ＣＲＣＴ１およびＲＥＥＰ６からなる群より選択される少なくとも１種の遺伝子の発現量を指標として皮脂分泌を観察することを特徴とする、方法である。
ヒト皮脂腺細胞を用いて皮脂制御物質のスクリーニングを行う指標としては、これまで、産生された皮脂そのものか、あるいはマウスを用いた研究等で見出された皮脂産生に関連する因子が用いられてきた。しかし、皮脂そのものを用いてスクリーニングを行った場合、その制御メカニズムを明らかにすることができない。また、マウスの研究で見出された因子は、ヒトでの皮脂制御メカニズムが反映されない可能性がある。
本発明者は、皮脂制御物質のスクリーニングを検討する中で上記の課題を見出し、上記課題を解決するために、ヒトにおいて実際に皮脂が産生される（皮脂分泌が行われる）皮脂腺内部の細胞に着目して、鋭意研究を進めた。具体的には、本発明者は、ヒト皮脂腺内部の細胞で発現している因子に着目した。その結果、以下の知見を得ることに成功した。
・皮脂腺細胞の分化の後期段階であるヒト皮脂腺内部の細胞は、皮脂腺細胞の分化の前期段階であるヒト皮脂腺最外層の細胞に比して、特定の遺伝子（ＡＸＤＮＤ１、ＡＳＰＲＶ１、ＣＲＡＴ、ＣＲＣＴ１およびＲＥＥＰ６）の発現量が増加している。
・上記遺伝子は、ヒト皮脂腺内部の細胞で特異的に発現している。
・上記遺伝子は、ヒト皮脂腺細胞の分化を誘導したときに、皮脂腺細胞の分化段階が進むにつれて発現量が増加する。
・皮脂腺細胞の分化の後期段階であるヒト皮脂腺内部の細胞は、皮脂腺細胞の分化の前期段階であるヒト皮脂腺最外層の細胞に比して、特定の遺伝子（ＡＸＤＮＤ１、ＡＳＰＲＶ１、ＣＲＡＴ、ＣＲＣＴ１およびＲＥＥＰ６）の発現量が増加している。
・上記遺伝子は、ヒト皮脂腺内部の細胞で特異的に発現している。
・上記遺伝子は、ヒト皮脂腺細胞の分化を誘導したときに、皮脂腺細胞の分化段階が進むにつれて発現量が増加する。
上記の遺伝子は、従来は、皮脂腺での機能が全く知られていなかったものであるため、これらの遺伝子を指標として、皮脂腺細胞における皮脂分泌の観察ができることや、皮脂制御物質のスクリーニングを行うことができることを見出したことは驚くべきことである。
また、上記遺伝子は、ヒト皮脂腺内部の細胞とヒト皮脂腺最外層の細胞とにおけるｍＲＮＡ発現量の相違に基づくスクリーニング（一次スクリーニング）、および皮脂腺細胞の分化段階におけるｍＲＮＡ発現量の相違に基づくスクリーニング（二次スクリーニング）の二段階のスクリーニングにより見出された遺伝子であるため、より正確にヒト生体内の動態を反映した皮脂分泌の指標として極めて有用である。
本発明者は、このような皮脂分泌の新たな指標を基に、皮脂腺細胞における皮脂分泌の観察方法、皮脂分泌制御物質のスクリーニング方法等を完成するに至った。
すなわち、上記の新たな指標を用いれば、以下の利点を有する。
・上記遺伝子は、ヒト皮脂腺細胞における皮脂分泌を反映した遺伝子であることから、それらを指標とすることにより、より正確にヒト生体内の動態を反映した皮脂分泌を観察することができる。また、ヒトにおける有効性が期待される皮脂制御物質を、より効率的にスクリーニングすることができる。
・特定の遺伝子を指標としているため、皮脂そのものを指標とする従来の技術に比べて、操作が容易である。
・特定の遺伝子を指標としているため、スクリーニングで得られた皮脂制御物質の皮脂分泌制御メカニズムが容易に理解できる。
・上記遺伝子は、ヒト皮脂腺細胞における皮脂分泌を反映した遺伝子であることから、それらを指標とすることにより、より正確にヒト生体内の動態を反映した皮脂分泌を観察することができる。また、ヒトにおける有効性が期待される皮脂制御物質を、より効率的にスクリーニングすることができる。
・特定の遺伝子を指標としているため、皮脂そのものを指標とする従来の技術に比べて、操作が容易である。
・特定の遺伝子を指標としているため、スクリーニングで得られた皮脂制御物質の皮脂分泌制御メカニズムが容易に理解できる。
〔２．観察方法〕
本観察方法は、皮脂腺細胞におけるＡＸＤＮＤ１、ＡＳＰＲＶ１、ＣＲＡＴ、ＣＲＣＴ１およびＲＥＥＰ６からなる群より選択される少なくとも１種の遺伝子の発現量を指標として皮脂分泌を観察する、方法である。
本観察方法は、皮脂腺細胞におけるＡＸＤＮＤ１、ＡＳＰＲＶ１、ＣＲＡＴ、ＣＲＣＴ１およびＲＥＥＰ６からなる群より選択される少なくとも１種の遺伝子の発現量を指標として皮脂分泌を観察する、方法である。
本観察方法によれば、ヒト皮脂腺内部の細胞で特異的に発現し、かつ、皮脂腺細胞の分化段階が進むにつれて発現量が増加する遺伝子を皮脂分泌の指標として用いている。したがって、本観察方法によれば、より正確にヒト生体内の動態を反映した皮脂分泌を観察することができる。なお、以下において、「ＡＸＤＮＤ１、ＡＳＰＲＶ１、ＣＲＡＴ、ＣＲＣＴ１およびＲＥＥＰ６」を、合わせて「皮脂分泌指標遺伝子」と称する場合がある。
まず、皮脂分泌に関連する生体内の構造を、図１に基づき説明する。
図１は、皮脂腺構造体を示す。図１に示されるように、皮脂腺構造体１は、毛２と、毛２を取り囲む毛包３と、表皮４と、皮脂腺５とを含有する。皮脂腺５は、皮脂腺５の最外層に局在する未分化の皮脂腺基底細胞（本明細書において、「皮脂腺最外層の細胞」と称することもある。）６と、皮脂腺基底細胞６および成熟皮脂腺細胞（本明細書において、「皮脂腺内部の細胞」と称することもある。）８の間に位置し、皮脂腺基底細胞６から成熟皮脂腺細胞８への分化の途中段階にある分化皮脂腺細胞７と、皮脂腺５の中心部に局在し、皮脂をため込み膨張した成熟皮脂腺細胞８と、成熟皮脂腺細胞８が死滅して崩壊することで細胞内部より流出した皮脂９と、を含有している。なお、分化皮脂腺細胞７では、脂肪滴（皮脂）の生成が行われる。皮脂腺５で生成された皮脂９は、毛包３を介して皮膚の外に放出される。前記皮脂腺構造体１における皮脂腺５と毛２と毛包３と表皮４とから構成される部分は、皮膚組織から真皮および皮下組織それぞれの全部または一部が除去されている点を除き、生体中の皮膚組織における皮脂腺と毛と毛包と表皮とから構成される部分と同じ構造を有する。
本明細書において、「皮脂腺細胞」とは、皮脂腺に関連する細胞を一般的に示した表現であり、皮脂腺基底細胞、分化皮脂腺細胞および成熟皮脂腺細胞のいずれも含む。したがって、本観察方法においては、皮脂腺基底細胞、分化皮脂腺細胞、成熟皮脂腺細胞等のいずれの皮脂腺細胞における遺伝子発現量を指標としてもよい。
本明細書において、「遺伝子の発現量」とは、当該遺伝子から転写されるｍＲＮＡの発現量、または当該遺伝子から転写・翻訳されるタンパク質の発現量を意味する。すなわち、本観察方法および後述する本スクリーニング方法において、皮脂分泌指標遺伝子のｍＲＮＡレベルの発現量およびタンパク質レベルの発現量のいずれを指標としてもよい。
本明細書において、「皮脂分泌」とは、皮脂腺で生成された皮脂が毛包を介して皮膚の外に放出されることを意味する。本明細書における皮脂分泌は、皮脂腺で皮脂が生成される段階も含む。すなわち、皮脂腺基底細胞から成熟皮脂腺細胞への分化が進み（この間に皮脂が生成され）、分化した成熟皮脂腺細胞から流出した皮脂が毛包を介して皮膚の外に放出される一連の態様、および前記の各態様（一部の態様）も、本明細書における皮脂分泌に含まれる。
本明細書において、「皮脂分泌を観察する」とは、ＡＸＤＮＤ１、ＡＳＰＲＶ１、ＣＲＡＴ、ＣＲＣＴ１およびＲＥＥＰ６の発現量を指標として、皮脂分泌の動態を観察することを意味する。すなわち、本観察方法においては、皮脂分泌の代わりに、または皮脂分泌と共に、ＡＸＤＮＤ１、ＡＳＰＲＶ１、ＣＲＡＴ、ＣＲＣＴ１およびＲＥＥＰ６の発現量を指標として、例えば、これらの遺伝子の発現量を可視化することにより、皮脂分泌の動態を観察する。
なお、皮脂分泌の動態とは、皮脂腺の動態を含み、例えば、皮脂の産生の際の少なくとも２つの時点における皮脂腺を構成する細胞の形状を対比したときの細胞の形状の変化、皮脂の産生の際の少なくとも２つの時点における皮脂腺を構成する細胞の分化状態を対比したときの細胞の分化状態の変化、皮脂の産生の際の少なくとも２つの時点における分化した細胞の形状を対比したときの分化した細胞の形状の変化、皮脂の産生の際の少なくとも２つの時点における分化した細胞の局在部位の位置を対比したときの分化した細胞の局在部位の位置の変化等が挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。
上述の通り、ＡＸＤＮＤ１、ＡＳＰＲＶ１、ＣＲＡＴ、ＣＲＣＴ１およびＲＥＥＰ６は、ヒト皮脂腺内部の細胞で特異的に発現しており、かつ、皮脂腺細胞の分化段階が進むにつれて発現量が増加する。したがって、ＡＸＤＮＤ１、ＡＳＰＲＶ１、ＣＲＡＴ、ＣＲＣＴ１およびＲＥＥＰ６は、ヒト生体内における皮脂分泌を反映した指標として利用できる。
本明細書において、「ＡＸＤＮＤ１」は、配列番号１で示される遺伝子であり、配列番号２で示されるタンパク質をコードする（ＮＣＢＩ ＧｅｎｅＩＤ：１２６８５９）。ＡＸＤＮＤ１は、axonemal dynein light chain domain containing 1とも称される。
本明細書において、「ＡＳＰＲＶ１」は、配列番号３で示される遺伝子であり、配列番号４で示されるタンパク質をコードする（ＮＣＢＩ ＧｅｎｅＩＤ：１５１５１６）。ＡＳＰＲＶ１は、aspartic peptidase, retroviral-like 1とも称される。
本明細書において、「ＣＲＡＴ」は、配列番号５で示される遺伝子であり、配列番号６で示されるタンパク質をコードする（ＮＣＢＩ ＧｅｎｅＩＤ：１３８４）。ＣＲＡＴは、carnitine O-acetyltransferaseとも称される。
本明細書において、「ＣＲＣＴ１」は、配列番号７で示される遺伝子であり、配列番号８で示されるタンパク質をコードする（ＮＣＢＩ ＧｅｎｅＩＤ：５４５４４）。ＣＲＣＴ１は、cysteine rich C-terminal 1とも称される。
本明細書において、「ＲＥＥＰ６」は、配列番号９で示される遺伝子であり、配列番号１０で示されるタンパク質をコードする（ＮＣＢＩ ＧｅｎｅＩＤ：９２８４０）。ＲＥＥＰ６は、receptor accessory protein 6とも称される。
なお、本観察方法において、皮脂分泌指標遺伝子は、１種を用いてもよい、複数種を組み合わせて用いてもよい。
本観察方法の一実施形態として、皮脂腺構造体を用いて、目的の分子を可視化することにより皮脂分泌を観察する方法について、以下に説明する。
本発明の一実施形態において、皮脂腺構造体としては、国際公開第２０１８／１９３７２２号に開示された浮遊状態の皮脂腺構造体や、ＰＣＴ／ＪＰ２０１９／０３４８９８に記載された支持体に固定された皮脂腺構造体を用いて行うことができる。これらの皮脂腺構造体を染色等により可視化することで、皮脂腺細胞における皮脂分泌を観察することができる。
前記皮脂腺構造体の染色は、例えば、前記皮脂腺構造体と前記染色試薬とを接触させること等によって行なうことができる。前記染色試薬としては、例えば、皮脂分泌指標遺伝子に結合する結合物質と検出可能な物質との複合体を含む試薬、マーカーに結合する結合物質と検出可能な物質との複合体を含む試薬、前記結合物質を含有し、前記検出可能な物質を含まない試薬等が挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。なお、本明細書において「マーカー」とは、皮脂腺構造体に含まれる組織、細胞等の存在の指標、細胞の分化度等の指標となる物質を意味する。
前記結合物質は、本観察方法の用途等によって異なる。したがって、一概には決定することができないことから、皮脂腺細胞における皮脂分泌の観察方法の用途等に応じて適宜決定することが好ましい。前記結合物質としては、例えば、前記マーカーに結合する抗体（以下、単に、「抗体」と称する。）またはその断片（以下、単に「抗体断片」と称する。）、前記マーカーに結合する化合物等が挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。前記抗体は、ポリクローナル抗体であってもよく、モノクローナル抗体であってもよい。前記抗体のなかでは、前記マーカーに対する特異性が高いことから、モノクローナル抗体が好ましい。前記抗体断片としては、例えば、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、単鎖抗体等が挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。前記ポリクローナル抗体、前記モノクローナル抗体および前記抗体断片は、前記マーカーを抗原として用い、慣用の手法によって製造することができる。また、前記ポリクローナル抗体、前記モノクローナル抗体および前記抗体断片として、商業的に容易に入手可能なポリクローナル抗体、商業的に容易に入手可能なモノクローナル抗体および商業的に容易に入手可能な抗体断片を用いることができる。前記結合物質は、検出可能なシグナルを生じる物質であってもよく、当該シグナルを生じない物質であってもよい。
前記検出可能な物質としては、例えば、蛍光物質、酵素等が挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。前記蛍光物質としては、例えば、フルオレセインイソチオシアネート、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒシリーズの蛍光物質（例えば、インビトロジェン製、商品名：Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７等）等が挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。また、前記酵素としては、例えば、ペルオキシダーゼ、アルカリホスフォターゼ等が挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。これらの検出可能な物質のなかでは、検出操作が容易であり、高い精度で検出対象物を検出することができることから、蛍光物質が好ましい。
なお、前記結合物質が抗体またはその抗体断片である場合、前記染色試薬は、必要に応じ、前記抗体またはその抗体断片に結合する標識結合物質をさらに含んでいてもよい。前記標識結合物質としては、例えば、前記結合物質に結合する第２の結合物質と標識物質との複合体等が挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。前記第２の結合物質としては、例えば、前記抗体を製造する際に免疫した動物が有する免疫グロブリンに対する抗体、当該免疫グロブリンの断片に対する抗体等が挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。前記標識物質としては、例えば、前記検出可能な物質等が挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。
前記染色試薬の種類は、本観察方法の用途等によって異なるので一概には決定することができない。従い、本観察方法の用途等に応じて適宜決定することが好ましい。前記染色試薬としては、例えば、（１）表皮、汗腺、毛包、皮脂腺等の表皮細胞に対する染色試薬（以下、「表皮細胞染色試薬」とも称する。）、（２）皮脂腺内部の細胞に対する染色試薬（以下、「成熟皮脂腺細胞染色試薬」とも称する。）、（３）前記未分化の皮脂腺基底細胞に対する染色試薬（以下、「未分化細胞染色試薬」とも称する。）、（４）皮脂に対する染色試薬（以下、「皮脂染色試薬」とも称する。）、（５）細胞核に対する染色試薬（以下、「核染色試薬」とも称する。）、（６）分化細胞染色試薬等が挙げられるが、かかる例示のみに限定されるものではない。
前記表皮細胞染色試薬は、表皮細胞に特異的なマーカー（以下、「表皮細胞マーカー」とも称する。）に結合する物質（以下、「表皮細胞結合物質」とも称する。）を含む。前記表皮細胞染色試薬は、表皮細胞結合物質と検出可能な物質との複合体を含む試薬であってもよく、前記表皮細胞結合物質自体が検出可能なシグナルを生じる物質である場合には、前記表皮細胞結合物質を含有し、前記検出可能な物質を含まない試薬であってもよい。前記表皮細胞マーカーとしては、例えば、Ｋｒｔ５、Ｋｒｔ１４等が挙げられるが、特に限定されるものではない。
前記成熟皮脂腺細胞染色試薬は、皮脂腺内部の細胞（成熟皮脂腺細胞）に特異的なマーカー（以下、「成熟分化マーカー」とも称する。）に結合する物質（以下、「成熟皮脂腺細胞結合物質」とも称する。）を含む。前記成熟皮脂腺細胞染色試薬は、成熟皮脂腺細胞結合物質と検出可能な物質との複合体を含む試薬であってもよく、前記成熟皮脂腺細胞結合物質自体が検出可能なシグナルを生じる物質である場合には、前記成熟皮脂腺細胞結合物質を含有し、前記検出可能な物質を含まない試薬であってもよい。前記成熟分化マーカーとしては、例えば、ＭＵＣ１、ＦＡＤＳ２等が挙げられるが、特に限定されるものではない。
前記未分化細胞染色試薬は、未分化の皮脂腺基底細胞に特異的なマーカー（以下、「未分化マーカー」とも称する。）に結合する物質（以下、「未分化細胞結合物質」とも称する。）を含む。前記未分化細胞染色試薬は、未分化細胞結合物質と検出可能な物質との複合体を含む試薬であってもよく、前記未分化細胞結合物質自体が検出可能なシグナルを生じる物質である場合には、前記未分化細胞結合物質を含有し、前記検出可能な物質を含まない試薬であってもよい。前記未分化細胞マーカーとしては、例えば、ケラチン－５、ケラチン－７、ケラチン－１４、Ｂリンパ球誘導成熟タンパク質１（Ｂｌｉｍｐ１）、ロイシン－リッチリピート・イムノグロブリン様ドメインタンパク質１（Ｌｒｉｇ１）等が挙げられるが、特に限定されるものではない。
前記核染色試薬は、核を構成する物質に結合する結合物質（以下、「核結合物質」とも称する。）を含む。前記核染色試薬は、核結合物質と検出可能な物質との複合体を含む試薬であってもよく、前記核結合物質自体が検出可能なシグナルを生じる物質である場合には、前記核結合物質を含有し、前記検出可能な物質を含まない試薬であってもよい。前記核を構成する物質としては、例えば、ＤＮＡ等の核酸等が挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。前記核結合物質は、細胞膜を透過する物質であればよい。前記核結合物質としては、例えば、Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３３４２等が挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。なお、Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３３４２は、検出可能な蛍光を生じる物質であることから、前記核染色試薬は、前記検出可能な物質を含有しない試薬であってもよい。
前記皮脂染色試薬としては、例えば、皮脂に溶解する脂溶性色素等が挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。前記脂溶性色素としては、例えば、ナイルレッド、ナイルブルー、オイルレッドＯ、ズダンＩＩＩ、ズダンＩＶ、ズダンブラックＢ等が挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。なお、前記脂溶性色素は、皮脂に溶解して皮脂を染色することから、前記脂溶性色素を含む皮脂染色試薬は、前記検出可能な物質を含有しない試薬であってもよい。
前記分化細胞染色試薬としては、例えば、未分化の皮脂腺基底細胞から分化した皮脂腺細胞に特異的なマーカー（以下、「分化マーカー」とも称する。）に結合する物質（以下、「分化細胞結合物質」とも称する。）を含む。前記分化細胞染色試薬は、分化細胞結合物質と検出可能な物質との複合体を含む試薬であってもよく、前記分化細胞結合物質自体が検出可能なシグナルを生じる物質である場合には、前記分化細胞結合物質を含有し、前記検出可能な物質を含まない試薬であってもよい。前記分化細胞マーカーとしては、例えば、ステアロイル－ＣｏＡ不飽和化酵素１（Ｓｃｄ－１）、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）等が挙げられるが、特に限定されるものではない。なお、分化細胞染色試薬と成熟皮脂腺細胞染色試薬とは、重複することもある。
前記染色試薬中における前記結合物質の含有率は、前記結合物質の種類、本観察方法の用途等によって異なるので一概に決定されるものではない。従い、前記結合物質の種類、本観察方法の用途等に応じて適宜決定することが好ましい。
前記各染色試薬に含まれる検出可能な物質は、互いに識別可能な物質であることが好ましい。
前記皮脂腺構造体と前記染色試薬との混合比および接触時間は、前記染色試薬の種類等によって異なるので一概に決定されるものではない。従い、前記染色試薬の種類等に応じて適宜設定することが好ましい。
前記皮脂腺構造体と前記染色試薬との接触後、皮脂腺細胞における皮脂分泌の動態をより的確に観察する観点から、染色された皮脂腺構造体を適切な洗浄液で洗浄することが好ましい。前記洗浄液としては、例えば、リン酸緩衝生理的食塩水、リン酸緩衝液等が挙げられるが、かかる例示のみに限定されるものではない。
なお、前記染色試薬が抗体またはその抗体断片を含む場合、皮脂腺細胞における皮脂分泌の動態をより的確に観察する観点から、前記染色された皮脂腺構造体に対し、ブロッキング剤を用いてブロッキング処理を施すことが好ましい。前記ブロッキング剤としては、例えば、アルブミンを含有するリン酸緩衝生理的食塩水溶液等が挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。
前記染色された皮脂腺構造体を用いて皮脂腺細胞における皮脂分泌の動態を観察する。皮脂分泌の観察は、例えば、蛍光顕微鏡、共焦点レーザー顕微鏡等の光学顕微鏡等を用いて行なうことができる。具体的には、皮脂分泌の観察は、例えば、染色された皮脂腺構造体をそのまま観察すること、染色された皮脂腺構造体における染色試薬に由来するシグナルを検出することによって行なうことができる。
本発明の一実施形態において、皮脂腺構造体の観察は、皮脂腺構造体の毛穴／表皮側および皮脂腺側のいずれから行ってもよい。
また、本発明の別の一実施形態において、皮脂腺構造体の代わりに皮脂腺細胞を用いて、皮脂腺細胞における皮脂分泌を観察することもできる。皮脂腺細胞を用いる場合も、上記と同様に、適宜、皮脂分泌指標遺伝子等を染色等により可視化して、観察することができる。
以上で説明したように、本観察方法によれば、皮脂分泌指標遺伝子を用いることにより、より正確にヒト生体内の動態を反映した皮脂分泌を観察することができる。
〔３．皮脂分泌制御物質のスクリーニング方法〕
本発明の一実施形態に係る皮脂分泌制御物質のスクリーニング方法（以下、「本スクリーニング方法」と称する。）は、皮脂腺細胞におけるＡＸＤＮＤ１、ＡＳＰＲＶ１、ＣＲＡＴ、ＣＲＣＴ１およびＲＥＥＰ６からなる群より選択される少なくとも１種の遺伝子の発現量を指標として皮脂分泌制御物質を探索することを特徴とする、方法である。
本発明の一実施形態に係る皮脂分泌制御物質のスクリーニング方法（以下、「本スクリーニング方法」と称する。）は、皮脂腺細胞におけるＡＸＤＮＤ１、ＡＳＰＲＶ１、ＣＲＡＴ、ＣＲＣＴ１およびＲＥＥＰ６からなる群より選択される少なくとも１種の遺伝子の発現量を指標として皮脂分泌制御物質を探索することを特徴とする、方法である。
本明細書において、「皮脂分泌制御物質」とは、皮脂腺における皮脂分泌に影響を与える物質を意味する。皮脂分泌制御物質には、皮脂腺における皮脂分泌を増加させる物質（以下、「皮脂分泌促進物質」と称することもある。）、および皮脂腺における皮脂分泌を減少させる物質（以下、「皮脂分泌抑制物質」と称することもある。）のいずれも含まれる。すなわち、皮脂腺における皮脂分泌を増加させるイベントに関与する物質、および皮脂腺における皮脂分泌を減少させるイベントに関与する物質のいずれも含まれる。皮脂腺における皮脂分泌を増加させる物質としては、例えば、成熟皮脂腺細胞に作用して皮脂分泌を促進する物質の他に、皮脂腺細胞の分化を促進する物質（例えば、皮脂腺基底細胞から分化皮脂腺細胞への分化を促進する物質、分化皮脂腺細胞から成熟皮脂腺細胞への分化を促進する物質、皮脂腺基底細胞から成熟皮脂腺細胞への分化を促進する物質等）等も含まれる。また、皮脂腺における皮脂分泌を減少させる物質としては、例えば、成熟皮脂腺細胞に作用して皮脂分泌を抑制する物質の他に、皮脂腺細胞の分化を抑制する物質（例えば、皮脂腺基底細胞から分化皮脂腺細胞への分化を抑制する物質、分化皮脂腺細胞から成熟皮脂腺細胞への分化を抑制する物質、皮脂腺基底細胞から成熟皮脂腺細胞への分化を抑制する物質等）等も含まれる。これまでに知られている皮脂分泌制御物質としては、例えば、リノール酸、テストステロン（以上、皮脂分泌を増加させる物質）、レチノイン酸、フィチン酸（以上、皮脂分泌を減少させる物質）等が挙げられる。
以下、本スクリーニング方法の代表的な実施形態について、具体的に説明する。なお、本スクリーニング方法がこれらに限定されないことは、言うまでもない。
（実施形態１）
本発明の一実施形態において、本スクリーニング方法は、皮脂腺細胞と被験物質とを接触させる前後における、ＡＸＤＮＤ１、ＡＳＰＲＶ１、ＣＲＡＴ、ＣＲＣＴ１およびＲＥＥＰ６からなる群より選択される遺伝子の少なくとも１種の発現量を測定する測定工程（以下、説明の便宜上、「工程（Ａ）」とも称する。）、および前記測定工程で得られた測定結果を比較し、当該比較結果から被験物質が皮脂分泌制御物質であるか否かを評価する評価工程（以下、説明の便宜上、「工程（Ｂ）」とも称する。）を含み得る。なお、「被験物質と接触」とは、皮脂腺細胞と被験物質とが接触する態様であればよく、例えば、被験物質の存在下で皮脂腺細胞を培養する態様、被験物質を皮脂腺細胞に直接振りかける態様等、種々の方法を適用できる。以下では、被験物質を含む培養液中で皮脂腺細胞を培養する場合を例に挙げて説明する。
本発明の一実施形態において、本スクリーニング方法は、皮脂腺細胞と被験物質とを接触させる前後における、ＡＸＤＮＤ１、ＡＳＰＲＶ１、ＣＲＡＴ、ＣＲＣＴ１およびＲＥＥＰ６からなる群より選択される遺伝子の少なくとも１種の発現量を測定する測定工程（以下、説明の便宜上、「工程（Ａ）」とも称する。）、および前記測定工程で得られた測定結果を比較し、当該比較結果から被験物質が皮脂分泌制御物質であるか否かを評価する評価工程（以下、説明の便宜上、「工程（Ｂ）」とも称する。）を含み得る。なお、「被験物質と接触」とは、皮脂腺細胞と被験物質とが接触する態様であればよく、例えば、被験物質の存在下で皮脂腺細胞を培養する態様、被験物質を皮脂腺細胞に直接振りかける態様等、種々の方法を適用できる。以下では、被験物質を含む培養液中で皮脂腺細胞を培養する場合を例に挙げて説明する。
＜工程（Ａ）＞
工程（Ａ）は、皮脂腺細胞と被験物質とを接触させる前後における、ＡＸＤＮＤ１、ＡＳＰＲＶ１、ＣＲＡＴ、ＣＲＣＴ１およびＲＥＥＰ６からなる群より選択される遺伝子の少なくとも１種の発現量を測定する工程である。すなわち、工程（Ａ）では、培養液中に被験物質を添加する前と、培養液中に被験物質を添加した後とで、皮脂腺細胞における上記皮脂分泌指標遺伝子の発現量を測定する。
工程（Ａ）は、皮脂腺細胞と被験物質とを接触させる前後における、ＡＸＤＮＤ１、ＡＳＰＲＶ１、ＣＲＡＴ、ＣＲＣＴ１およびＲＥＥＰ６からなる群より選択される遺伝子の少なくとも１種の発現量を測定する工程である。すなわち、工程（Ａ）では、培養液中に被験物質を添加する前と、培養液中に被験物質を添加した後とで、皮脂腺細胞における上記皮脂分泌指標遺伝子の発現量を測定する。
工程（Ａ）における「皮脂腺細胞」は、〔２．観察方法〕の項で記載した通りである。
工程（Ａ）における「被験物質」としては、任意の物質が使用され得る。被験物質の種類は特に限定されず、例えば、天然物の抽出物中に存在する化合物、低分子合成化合物、合成ペプチド等が用いられる。本発明の一実施形態において、スクリーニングに使用される被験物質は、化合物ライブラリー、ファージディスプレーライブラリー、コンビナトリアルライブラリー等に含まれる化合物であってよい。本発明の一実施形態において、スクリーニングに使用される被験物質は、好ましくは、低分子化合物であり、より好ましくは、低分子化合物の化合物ライブラリーであり得る。化合物ライブラリーは、市販の化合物ライブラリーを用いてもよく、当該技術分野における通常の方法により構築された化合物ライブラリーを用いてもよい。
工程（Ａ）において、「皮脂腺細胞と被験物質との接触」は、皮脂腺細胞が培養されている培養液中に被験物質を添加することにより行われ得る。添加される被験物質の濃度、添加後の培養時間等については、本スクリーニングの目的に基づき、当業者により適宜設定可能である。
工程（Ａ）において、遺伝子の発現量の測定は、ｍＲＮＡの量を測定してもよいし、タンパク質の量を測定してもよい。低コストおよび簡便さの観点から、遺伝子の発現量の測定は、好ましくは、ｍＲＮＡの量を測定することにより行われる。
本発明の一実施形態において、遺伝子の発現量の測定方法としては、当該技術分野で使用される任意の方法が使用され得る。遺伝子の発現量の測定方法としては、例えば、イムノブロット、ＲＴ－ＰＣＲ、フローサイトメトリー、ＥＬＩＳＡ等が挙げられる。
＜工程（Ｂ）＞
工程（Ｂ）は、前記工程（Ａ）で得られた測定結果を比較し、当該比較結果から被験物質が皮脂分泌制御物質であるか否かを評価する工程である。すなわち、工程（Ｂ）では、工程（Ａ）で得られた測定結果に基づき、それらを比較することで、被験物質が皮脂分泌制御物質であるか否かを評価する。
工程（Ｂ）は、前記工程（Ａ）で得られた測定結果を比較し、当該比較結果から被験物質が皮脂分泌制御物質であるか否かを評価する工程である。すなわち、工程（Ｂ）では、工程（Ａ）で得られた測定結果に基づき、それらを比較することで、被験物質が皮脂分泌制御物質であるか否かを評価する。
本発明の一実施形態において、工程（Ａ）で得られた測定結果間に有意な差がある場合に、被験物質は皮脂分泌制御物質であると評価することができる。
本発明の一実施形態において、培養液中に被験物質を添加した後の皮脂腺細胞における上記皮脂分泌指標遺伝子の発現量が、培養液中に被験物質を添加する前の皮脂腺細胞における上記皮脂分泌指標遺伝子の発現量よりも多い場合、被験物質は皮脂分泌促進物質であると評価することができる。
また、本発明の一実施形態において、培養液中に被験物質を添加した後の皮脂腺細胞における上記皮脂分泌指標遺伝子の発現量が、培養液中に被験物質を添加する前の皮脂腺細胞における上記皮脂分泌指標遺伝子の発現量よりも少ないか、または同等である場合、被験物質は皮脂分泌抑制物質であると評価することができる。
本実施形態において、皮脂分泌指標遺伝子は、１種を用いてもよい、複数種を組み合わせて用いてもよい。
（実施形態２）
本発明の一実施形態において、本スクリーニング方法は、皮脂腺細胞と皮脂分泌制御物質とを接触させた後、前記遺伝子の少なくとも１種の発現量を測定する測定工程（以下、説明の便宜上、「工程（Ｃ）」とも称する。）、皮脂腺細胞と皮脂分泌制御物質と被験物質とを接触させた後、前記遺伝子の少なくとも１種の発現量を測定する測定工程（以下、説明の便宜上、「工程（Ｄ）」とも称する。）、および前記各測定工程で得られた測定結果を比較し、当該比較結果から被験物質が皮脂分泌制御物質であるか否かを評価する評価工程（以下、説明の便宜上、「工程（Ｅ）」とも称する。）を含み得る。なお、「被験物質（および／または皮脂分泌制御物質）と接触」とは、皮脂腺細胞と被験物質（および／または皮脂分泌制御物質）とが接触する態様であればよく、例えば、被験物質（および／または皮脂分泌制御物質）の存在下で皮脂腺細胞を培養する態様、被験物質（および／または皮脂分泌制御物質）を皮脂腺細胞に直接振りかける態様等、種々の方法を適用できる。以下では、被験物質（および／または皮脂分泌制御物質）を含む培養液中で皮脂腺細胞を培養する場合を例に挙げて説明する。
本発明の一実施形態において、本スクリーニング方法は、皮脂腺細胞と皮脂分泌制御物質とを接触させた後、前記遺伝子の少なくとも１種の発現量を測定する測定工程（以下、説明の便宜上、「工程（Ｃ）」とも称する。）、皮脂腺細胞と皮脂分泌制御物質と被験物質とを接触させた後、前記遺伝子の少なくとも１種の発現量を測定する測定工程（以下、説明の便宜上、「工程（Ｄ）」とも称する。）、および前記各測定工程で得られた測定結果を比較し、当該比較結果から被験物質が皮脂分泌制御物質であるか否かを評価する評価工程（以下、説明の便宜上、「工程（Ｅ）」とも称する。）を含み得る。なお、「被験物質（および／または皮脂分泌制御物質）と接触」とは、皮脂腺細胞と被験物質（および／または皮脂分泌制御物質）とが接触する態様であればよく、例えば、被験物質（および／または皮脂分泌制御物質）の存在下で皮脂腺細胞を培養する態様、被験物質（および／または皮脂分泌制御物質）を皮脂腺細胞に直接振りかける態様等、種々の方法を適用できる。以下では、被験物質（および／または皮脂分泌制御物質）を含む培養液中で皮脂腺細胞を培養する場合を例に挙げて説明する。
＜工程（Ｃ）＞
工程（Ｃ）は、皮脂腺細胞と皮脂分泌制御物質とを接触させた後、前記遺伝子の少なくとも１種の発現量を測定する工程である。すなわち、工程（Ｃ）では、培養液中に皮脂分泌制御物質を添加した後で、皮脂腺細胞における上記皮脂分泌指標遺伝子の発現量を測定する。
工程（Ｃ）は、皮脂腺細胞と皮脂分泌制御物質とを接触させた後、前記遺伝子の少なくとも１種の発現量を測定する工程である。すなわち、工程（Ｃ）では、培養液中に皮脂分泌制御物質を添加した後で、皮脂腺細胞における上記皮脂分泌指標遺伝子の発現量を測定する。
工程（Ｃ）における「皮脂腺細胞」は、〔２．観察方法〕の項で記載した通りである。
また、工程（Ｃ）における「皮脂分泌制御物質」は、上述した通りである。本実施形態では、皮脂分泌に影響を与えることが既知の皮脂分泌制御物質を皮脂腺細胞に接触させてそれを対照として用いるため、（実施形態１）に比して、より効果が高い被験物質の探索が可能となり得る。
工程（Ｃ）において、「皮脂腺細胞と皮脂分泌制御物質との接触」は、皮脂腺細胞が培養されている培養液中に皮脂分泌制御物質を添加することにより行われ得る。添加される皮脂分泌制御物質の濃度、添加後の培養時間等については、本スクリーニングの目的に基づき、当業者により適宜設定可能である。
工程（Ｃ）において、遺伝子の発現量の測定は、ｍＲＮＡの量を測定してもよいし、タンパク質の量を測定してもよい。簡便さの観点から、遺伝子の発現量の測定は、好ましくは、ｍＲＮＡの量を測定することにより行われる。
工程（Ｃ）において、遺伝子の発現量の測定は、例えば、＜工程（Ａ）＞に記載したものと同じ方法で行われ得る。
＜工程（Ｄ）＞
工程（Ｄ）は、皮脂腺細胞と皮脂分泌制御物質と被験物質とを接触させた後、前記遺伝子の少なくとも１種の発現量を測定する工程である。すなわち、工程（Ｄ）では、培養液中に皮脂分泌制御物質および被験物質を添加した後で、皮脂腺細胞における上記皮脂分泌指標遺伝子の発現量を測定する。
工程（Ｄ）は、皮脂腺細胞と皮脂分泌制御物質と被験物質とを接触させた後、前記遺伝子の少なくとも１種の発現量を測定する工程である。すなわち、工程（Ｄ）では、培養液中に皮脂分泌制御物質および被験物質を添加した後で、皮脂腺細胞における上記皮脂分泌指標遺伝子の発現量を測定する。
工程（Ｄ）では、皮脂腺細胞と皮脂分泌制御物質と被験物質とを接触させる以外は、工程（Ｃ）と同様の操作を行う。
工程（Ｄ）において、「皮脂腺細胞と皮脂分泌制御物質と被験物質との接触」は、皮脂腺細胞が培養されている培養液中に皮脂分泌制御物質と被験物質とを同時に添加して行われてもよいし、皮脂分泌制御物質と被験物質とを別々に添加して行われてもよい。添加される皮脂分泌制御物質および被験物質の濃度、添加後の培養時間等については、本スクリーニングの目的に基づき、当業者により適宜設定可能である。
工程（Ｄ）において、遺伝子の発現量の測定は、工程（Ｅ）における測定結果の比較が可能となるように工程（Ｃ）と同じ対象について測定される。例えば、工程（Ｃ）でｍＲＮＡの量が測定された場合には、工程（Ｄ）でもｍＲＮＡの量が測定され、工程（Ｃ）でタンパク質の量が測定された場合には、工程（Ｄ）でもタンパク質の量が測定される。
＜工程（Ｅ）＞
工程（Ｅ）は、前記各測定工程で得られた測定結果を比較し、当該比較結果から被験物質が皮脂分泌制御物質であるか否かを評価する工程である。すなわち、工程（Ｅ）では、工程（Ｃ）および（Ｄ）で得られた測定結果に基づき、それらを比較することで、被験物質が皮脂分泌制御物質であるか否かを評価する。
工程（Ｅ）は、前記各測定工程で得られた測定結果を比較し、当該比較結果から被験物質が皮脂分泌制御物質であるか否かを評価する工程である。すなわち、工程（Ｅ）では、工程（Ｃ）および（Ｄ）で得られた測定結果に基づき、それらを比較することで、被験物質が皮脂分泌制御物質であるか否かを評価する。
本発明の一実施形態において、工程（Ｃ）および（Ｄ）で得られた測定結果に有意な差がある場合に、被験物質は皮脂分泌制御物質であると評価することができる。
本発明の一実施形態において、工程（Ｄ）の皮脂腺細胞における上記皮脂分泌指標遺伝子の発現量が、工程（Ｃ）の皮脂腺細胞における上記皮脂分泌指標遺伝子の発現量よりも多い場合、被験物質は皮脂分泌促進物質であると評価することができる。
また、本発明の一実施形態において、工程（Ｄ）の皮脂腺細胞における上記皮脂分泌指標遺伝子の発現量が、工程（Ｃ）の皮脂腺細胞における上記皮脂分泌指標遺伝子の発現量よりも少ないか、または同等である場合、被験物質は皮脂分泌抑制物質であると評価することができる。
なお、本実施形態において、皮脂分泌指標遺伝子は、１種を用いてもよい、複数種を組み合わせて用いてもよい。
〔４．皮脂分泌制御物質のスクリーニング用キット〕
本発明の一実施形態に係る皮脂分泌制御物質のスクリーニング用キット（以下、「本キット」と称する。）は、ＡＸＤＮＤ１、ＡＳＰＲＶ１、ＣＲＡＴ、ＣＲＣＴ１およびＲＥＥＰ６からなる群より選択される少なくとも１種の遺伝子に対するプローブを含む、キットである。本キットは、ＡＸＤＮＤ１、ＡＳＰＲＶ１、ＣＲＡＴ、ＣＲＣＴ１およびＲＥＥＰ６からなる群より選択される少なくとも１種の遺伝子に対するプローブを含むため、皮脂分泌制御物質のスクリーニングを簡易かつ効率的に行うことができる。
本発明の一実施形態に係る皮脂分泌制御物質のスクリーニング用キット（以下、「本キット」と称する。）は、ＡＸＤＮＤ１、ＡＳＰＲＶ１、ＣＲＡＴ、ＣＲＣＴ１およびＲＥＥＰ６からなる群より選択される少なくとも１種の遺伝子に対するプローブを含む、キットである。本キットは、ＡＸＤＮＤ１、ＡＳＰＲＶ１、ＣＲＡＴ、ＣＲＣＴ１およびＲＥＥＰ６からなる群より選択される少なくとも１種の遺伝子に対するプローブを含むため、皮脂分泌制御物質のスクリーニングを簡易かつ効率的に行うことができる。
本キットに含まれるプローブは、上記皮脂分泌指標遺伝子に結合し、その発現量を測定できるものであれば特に限定されない。本キットに含まれるプローブとしては、例えば、核酸プローブ、ペプチドプローブ、抗体等が挙げられる。これらのプローブは、目的に応じて（例えば、皮脂分泌指標遺伝子のｍＲＮＡの発現量を測定する、タンパク質の発現量を測定する等）、適宜選択することができる。
本キットに含まれる核酸プローブは、天然の核酸の他に、非天然型の核酸（ＰＮＡ等）を含んで構成されていてもよい。また、本キットに含まれるペプチドプローブおよび抗体も同様に、天然アミノ酸の他に、非天然型のアミノ酸を含んで構成されていてもよい。
本発明の一実施形態において、本キットに含まれるプローブは、基板上に備えられたチップ（マイクロアレイ）の形態であることが好ましい。プローブが基板上に備えられていることにより、そこに試料を添加することで容易に上記皮脂分泌指標遺伝子の発現量を測定することができる。そのようなチップとしては、例えば、ＤＮＡチップ、プロテインチップ、抗体チップ等が挙げられる。
本発明の一実施形態について、本キットは、上記の本スクリーニング方法を行うために使用される。さらに、本キットは、上記の皮脂腺細胞における皮脂分泌の観察方法にも使用される。
本発明は上述した各実施形態に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能であり、異なる実施形態にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。
以下に実施例により本発明をさらに詳しく説明するが、本発明は、かかる実施例のみに限定されるものではない。
〔１．ヒト皮脂腺細胞における皮脂分泌に関与する遺伝子の同定〕
ヒト皮脂腺細胞における皮脂分泌に関与する遺伝子を同定するために、以下の実験を行った。
ヒト皮脂腺細胞における皮脂分泌に関与する遺伝子を同定するために、以下の実験を行った。
すなわち、皮脂腺を含むヒト組織から、レーザーマイクロダイセクションＬＭＤ（Ｌｅｉｃａ社製）を用いて、特定の領域（皮脂腺内部細胞を含む領域および皮脂腺最外層細胞を含む領域）のみを切り出して、回収した。次いで、皮脂腺内部細胞および皮脂腺最外層細胞の各々からＲＮＡを抽出し、網羅的に遺伝子発現量の解析および比較を行った。
ＲＮＡの抽出は、Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｋｉｔ－Ｑｕｉｃｋ－ＲＮＡＴＭ ＭｉｃｒｏＰｒｅｐ（ＱＩＡＧＥＮ社製）を用いて、製品のプロトコールに準じて行った。遺伝子発現量の解析は、Ａｎａｌｙｓｉｓ ｍｅｔｈｏｄ－ｑＲＴ－ＰＣＲ－ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ（ＧｅｎｅＣｈｉｐＴＭ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｏｍｅ Ｕ１３３ Ｐｌｕｓ ２．０ Ａｒｒａｙ）を用いて、製品のプロトコールに準じて行った。結果を表１に示す。
表１に示されている通り、ヒト皮脂腺細胞における皮脂分泌に関与する遺伝子として、ＡＸＤＮＤ１、ＡＳＰＲＶ１、ＣＲＡＴ、ＣＲＣＴ１およびＲＥＥＰ６の５つの遺伝子が同定された。また、上記５つの遺伝子はいずれも、皮脂腺内部細胞において、皮脂腺最外層細胞よりも５倍以上の高い発現量を示した。
〔２．皮脂腺内部の細胞における免疫組織化学染色〕
上記で同定された遺伝子（ＡＸＤＮＤ１、ＡＳＰＲＶ１、ＣＲＡＴ、ＣＲＣＴ１およびＲＥＥＰ６）が、皮脂腺構造体のいずれの領域で発現しているについて、免疫組織化学染色により調べた。
上記で同定された遺伝子（ＡＸＤＮＤ１、ＡＳＰＲＶ１、ＣＲＡＴ、ＣＲＣＴ１およびＲＥＥＰ６）が、皮脂腺構造体のいずれの領域で発現しているについて、免疫組織化学染色により調べた。
具体的には、冷却したアセトンまたは４％ ＰＦＡで２０分間浸漬固定し、１×ＰＢＳで５分間、２回洗浄した。固定後の切片は、１×ＰＢＳで５分間、３回洗浄した。その後、３％ ＢＳＡ／ＰＢＳで３０分間ブロッキングした。ブロッキング剤を除去後、０．１％ ＢＳＡ／ＰＢＳで規定の濃度に調整した１次抗体を加え、４℃で一晩抗体反応を行った。翌日、１×ＰＢＳで５分間、３回洗浄した後、０．１％ ＢＳＡ／ＰＢＳで規定の濃度に調整した２次抗体を加え、暗所で１時間抗体反応を行った。１×ＰＢＳで５分間、３回洗浄し、蛍光顕微鏡で免疫染色像を観察した。
なお、免疫組織化学染色における抗体としては、以下の表２に記載のものを用いた。また、核の染色には、Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３３４２を用いた。表中、Ｋｒｔ５は、表皮、汗腺、毛包および皮脂腺が染まる表皮細胞マーカーであり、ＭＵＣ１は、皮脂腺内部の細胞が染まる皮脂腺分化マーカーである。いずれも、皮脂腺を可視化する目的で使用している。結果を図２～６に示す。
図２～６より、ＡＸＤＮＤ１、ＡＳＰＲＶ１、ＣＲＡＴ、ＣＲＣＴ１およびＲＥＥＰ６が、ヒト皮脂腺内部の細胞に特異的に発現していることが分かった。
〔３．皮脂腺細胞の分化誘導後の遺伝子発現〕
皮脂腺細胞の分化誘導により、上記で同定された遺伝子（ＡＸＤＮＤ１、ＡＳＰＲＶ１、ＣＲＡＴ、ＣＲＣＴ１およびＲＥＥＰ６）の発現量が増加するか否かについて調べた。
皮脂腺細胞の分化誘導により、上記で同定された遺伝子（ＡＸＤＮＤ１、ＡＳＰＲＶ１、ＣＲＡＴ、ＣＲＣＴ１およびＲＥＥＰ６）の発現量が増加するか否かについて調べた。
具体的には、ヒトｉＰＳ細胞から誘導した皮脂細胞（Ｐｃｉ－ＳＥＢ）を、フィブロネクチンで被覆したプレート上に、１．０×１０５細胞／ウェルで播種した。細胞を、サプリメントＡ（ＰＨＥ社製）を含む基本培地（ＰＨＥ社製）で５日間培養した。６日目に１００μＭのリノール酸（ＬＮ、ＳＩＧＭＡ社製）を添加し、２４時間培養したものを試験細胞とした。一方、６日目にリノール酸を添加せずに、２４時間培養したものを対照細胞とした。その後、両細胞を回収し、ＲＮＡの抽出後、ｑＲＴ－ＰＣＲにより各遺伝子の発現量を測定した。
ＲＮＡの抽出は、Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｋｉｔ－Ｑｕｉｃｋ－ＲＮＡＴＭ ＭｉｃｒｏＰｒｅｐ（ＱＩＡＧＥＮ社製）を用いて、製品のプロトコールに準じて行った。また、ｑＲＴ－ＰＣＲは、以下の通り行った。すなわち、抽出したＲＮＡは、Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社製）を用いてｃＤＮＡを作製し、ＰｏｗｅｒＵｐ ＳＹＢＲＧｒｅｅｎ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用いて、ＰＣＲ反応液を調製した。遺伝子発現量の解析はリアルタイムＰＣＲ装置（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）を用いて、両細胞における各遺伝子の発現量を定量した。また、ｑＲＴ－ＰＣＲにおけるプライマーとしては、以下の表３に記載のものを用いた。結果は、対照細胞における各遺伝子の発現量に対する試験細胞における各遺伝子の発現量の比率（ＬＮ／Ｃｏｎｔｒｏｌ）として図７に示す。
リノール酸は、皮脂腺最外層の細胞を皮脂腺内部の細胞へと分化させる機能を有することが知られている。したがい、図７より、皮脂腺細胞の分化を誘導することにより、ＡＸＤＮＤ１、ＡＳＰＲＶ１、ＣＲＡＴ、ＣＲＣＴ１およびＲＥＥＰ６の発現量が増加することが分かった。これは、上記５つの遺伝子が、ヒト生体内の皮脂腺細胞における皮脂分泌を反映していることを示唆する。
本発明は、化粧品分野、医療分野等に、広く利用することができる。
１ 皮脂腺構造体
２ 毛
３ 毛包
４ 表皮
５ 皮脂腺
６ 皮脂腺基底細胞（皮脂腺最外層の細胞）
７ 分化皮脂腺細胞
８ 成熟皮脂腺細胞（皮脂腺内部の細胞）
９ 皮脂
２ 毛
３ 毛包
４ 表皮
５ 皮脂腺
６ 皮脂腺基底細胞（皮脂腺最外層の細胞）
７ 分化皮脂腺細胞
８ 成熟皮脂腺細胞（皮脂腺内部の細胞）
９ 皮脂
Claims (6)
- 皮脂腺細胞におけるＡＸＤＮＤ１、ＡＳＰＲＶ１、ＣＲＡＴ、ＣＲＣＴ１およびＲＥＥＰ６からなる群より選択される少なくとも１種の遺伝子の発現量の増加、減少を、それぞれ皮脂分泌の促進、抑制の指標として皮脂分泌を観察することを特徴とする、皮脂腺細胞における皮脂分泌の観察方法。
- 前記皮脂腺が、ヒト皮脂腺である、請求項１に記載の観察方法。
- 皮脂腺細胞におけるＡＸＤＮＤ１、ＡＳＰＲＶ１、ＣＲＡＴ、ＣＲＣＴ１およびＲＥＥＰ６からなる群より選択される少なくとも１種の遺伝子の発現量の増加、減少を、それぞれ皮脂分泌の促進、抑制の指標として皮脂分泌制御物質を探索することを特徴とする、皮脂分泌制御物質のスクリーニング方法。
- 皮脂腺細胞と被験物質とを接触させる前後における前記遺伝子の少なくとも１種の発現量を測定する測定工程、および
前記測定工程で得られた測定結果を比較し、当該比較結果から被験物質が皮脂分泌制御物質であるか否かを評価する評価工程
を含む、請求項３に記載の皮脂分泌制御物質のスクリーニング方法。 - 皮脂腺細胞と皮脂分泌制御物質とを接触させた後、前記遺伝子の少なくとも１種の発現量を測定する測定工程、
皮脂腺細胞と皮脂分泌制御物質と被験物質とを接触させた後、前記遺伝子の少なくとも１種の発現量を測定する測定工程、および
前記各測定工程で得られた測定結果を比較し、当該比較結果から被験物質が皮脂分泌制御物質であるか否かを評価する評価工程
を含む、請求項３に記載の皮脂分泌制御物質のスクリーニング方法。 - ＡＸＤＮＤ１、ＡＳＰＲＶ１、ＣＲＡＴ、ＣＲＣＴ１およびＲＥＥＰ６からなる群より選択される少なくとも１種の遺伝子に対するプローブを含む、皮脂分泌制御物質のスクリーニング用キット。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2020034034A JP7451229B2 (ja) | 2020-02-28 | 2020-02-28 | 皮脂腺細胞における皮脂分泌の観察方法、ならびに皮脂分泌制御物質のスクリーニング方法およびその用に供するキット |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2020034034A JP7451229B2 (ja) | 2020-02-28 | 2020-02-28 | 皮脂腺細胞における皮脂分泌の観察方法、ならびに皮脂分泌制御物質のスクリーニング方法およびその用に供するキット |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2021132624A JP2021132624A (ja) | 2021-09-13 |
| JP7451229B2 true JP7451229B2 (ja) | 2024-03-18 |
Family
ID=77659994
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2020034034A Active JP7451229B2 (ja) | 2020-02-28 | 2020-02-28 | 皮脂腺細胞における皮脂分泌の観察方法、ならびに皮脂分泌制御物質のスクリーニング方法およびその用に供するキット |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP7451229B2 (ja) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008178390A (ja) | 2006-12-27 | 2008-08-07 | Nippon Menaade Keshohin Kk | 皮膚の状態を評価する方法及びその用途 |
-
2020
- 2020-02-28 JP JP2020034034A patent/JP7451229B2/ja active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008178390A (ja) | 2006-12-27 | 2008-08-07 | Nippon Menaade Keshohin Kk | 皮膚の状態を評価する方法及びその用途 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2021132624A (ja) | 2021-09-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2021502069A5 (ja) | ||
| JP7451229B2 (ja) | 皮脂腺細胞における皮脂分泌の観察方法、ならびに皮脂分泌制御物質のスクリーニング方法およびその用に供するキット | |
| CN109097462A (zh) | Ap1m2基因作为诊断青光眼的分子标志物的应用 | |
| US20150132744A1 (en) | Methods of detecting cells latently infected with hiv | |
| CN108034707B (zh) | Spag7基因在制备老年痴呆诊断制剂中的应用 | |
| JP2019007759A (ja) | 老化度を評価する方法及び老化度の評価用キット | |
| CN107779503A (zh) | 阿尔茨海默相关的差异表达基因及其应用 | |
| US20230375551A1 (en) | Methods for confirming detection and evaluating the progression of a prostate cancer and related therapies | |
| KR101365206B1 (ko) | 심장근육병 진단용 마커 Ｏｒａｉ１ | |
| CN107937515A (zh) | 一种阿尔茨海默的诊疗基因靶点及其应用 | |
| JP6100993B2 (ja) | 慢性創傷の分類および予後のための方法およびキット | |
| CN107881240B (zh) | 骨肉瘤的诊治标志物 | |
| KR101727750B1 (ko) | 단맛 수용체 유전자를 함유하는 허혈질환 진단용 조성물 | |
| CN108728523A (zh) | Bcl-3作为诊断早期肾纤维化的标志物的应用 | |
| WO2009081854A1 (ja) | アレルギー性疾患のバイオマーカーおよびその利用 | |
| KR102685696B1 (ko) | 암 전이 및 재발 진단용 조성물 | |
| KR102260756B1 (ko) | 반전성 유두종 예측 또는 진단용 조성물 및 이를 이용한 반전성 유두종 예측 또는 진단방법 | |
| JP7295683B2 (ja) | 皮膚疾患の指標の検出方法、物質の評価方法、並びに、ロリクリン量及び／又はフィラグリン量の増加剤 | |
| CN107385099A (zh) | 用于诊治胃腺癌转移的生物标志物 | |
| Nobrega et al. | Placentas from SARS-CoV-2 infection during pregnancy exhibit foci of oxidative stress and DNA damage | |
| Mielinis et al. | Single-Section Multiomics Mapped Across FFPE Tissue | |
| CN107385100A (zh) | Mcm8作为胃腺癌转移标志物的用途 | |
| JP2004313133A (ja) | ケロイドの診断方法 | |
| KR20230140746A (ko) | 암전이의 검출용 신규 바이오마커 | |
| JP2014222185A (ja) | 免疫蛍光染色を用いた効率的なスクリーニング法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20220908 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20230725 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20231128 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20240118 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20240305 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20240306 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7451229 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |