JP7446364B2 - タンパク質抽出方法およびシステム - Google Patents
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Description
ンA(S-IgA)組成物をS-IgA含有乳汁から生産するための方法を開示している。該方法は、いくつかの透析濾過サイクルを通じた脱脂、精密濾過および限外濾過の工程を含み、精密濾過された保持液が透析濾過液体と混ぜ合わされる。精密濾過された保持液と透析濾過液体との組合せは、次いでその後の精密濾過および濃縮工程に供される。使用される方法は連続透析濾過である。開示された方法は、本質的な特徴が、液体供給流に懸濁される粒子がそのサイズに基づいて分離されることである膜濾過法に基づく。
できる解決策を提供する。
a.第1の槽で沈殿物と液体を混合して第1の希釈係数を有する懸濁液を形成する工程と;
b.第1の保持液および目的とするタンパク質に富む第1の透過液を生成するのに適合されている動的フィルターエレメントを含む第1の濾過ユニットへ懸濁液を送液する工程と;
c.場合により第1の保持液を第1の槽へ流すことによって、液体を添加することにより第2の希釈係数まで第1の槽の懸濁液を希釈する工程と;
d.目的とするタンパク質に富む第1の透過液を第2の槽で回収する工程と、
を含む、前記方法が提供される。
II)、Cohn画分III(Fr III)、Cohn画分IV(Fr IV)、Cohn画分V(Fr V)、Kistler/Nitschmann沈殿物A(KN A)、Kistler/Nitschmann沈殿物B(KN B)、Kistler/Nitschmann沈殿物C(KN C)からなる群から選択される。特に好ましい実施形態において血漿画分は、Cohn画分I(Fr I)、Cohn画分II+III(Fr II+III)、Cohn画分I+II+III(Fr I+II+III)、またはKistler/Nitschmann沈殿物A(KN A)からなる群から選択される。血漿画分は、異なる画分の組合せであってもよい。例えば、血漿画分は、KN Aならびに1つまたはそれ以上のFr I、Fr II+IIIおよびFr I+II+IIIの組合せであってもよい。別の実施形態において沈殿物は、オクタン酸沈殿物である。
precipitate)は、培養上清または発酵出発材料から得られる。いくつかの実施形態において出発材料は、目的とするタンパク質を含む乳汁である。他の実施形態において出発材料は、乳汁ではない。
、または少なくとも5.5、または少なくとも5、または少なくとも4.5、または少なくとも4、または少なくとも3.5、または少なくとも3、または少なくとも2.5、または少なくとも2、または少なくとも1.5、または少なくとも1.25である。好ましくは、第1の槽における第1の希釈係数(含タンパク質沈殿物:全体)は、少なくとも4である。
30、約40、好ましくは約20~50である。他の実施形態において第2の希釈係数は、約60、または約70(1:70;含タンパク質沈殿物部分:全体)である。特定の実施形態において第2の希釈係数は、少なくとも20、または少なくとも30、または少なくとも40、または少なくとも50、または少なくとも60、または少なくとも70である。本発明の発明者らは、そのような高い希釈係数が抽出効率を高め、故に収量の向上をもたらし得ることを見出した。
ross flow velocity)は、従来のクロスフロー法と比べて極めて低量のエネルギーを消費する一方、フィルター表面の高効率洗浄を確実にする。
物からの目的とするタンパク質の少なくとも95%、または少なくとも96%、または少なくとも97%、または少なくとも98%または少なくとも99%の回収率を提供する。好ましい実施形態において回収率は、沈殿物からの目的とするタンパク質の少なくとも97%である。
a.第1の槽で沈殿物と液体を混合して第1の希釈係数を有する懸濁液を形成する工程と;
b.平均孔径が5nm~5000nmの間のセラミック膜を有するフィルターディスクを含む回転式クロスフローフィルターエレメントを含む第1の濾過ユニットへ懸濁液を送液する工程であって、フィルターエレメントは、第1の保持液、および目的とするタンパク質に富む第1の透過液を生成するのに適合されている、工程と;
c.部分的に第1の保持液を第1の槽へ流すことによって、液体を添加することにより第2の希釈係数まで第1の槽の懸濁液を希釈する工程と;
d.目的とするタンパク質に富む第1の透過液を第2の槽で回収する工程と;
e.第2の槽の第1の透過液を、クロスフローフィルターエレメントを含む第2の濾過ユニットで連続濃縮プロセスに供し、それによって目的とするタンパク質に富む第2の保持液、および目的とするタンパク質が枯渇した第2の透過液を生成する工程と;
f.場合により第2の透過液を第1の槽に連続的に流すことによって、第1の槽の懸濁液を希釈し、それによって第2の希釈係数まで懸濁液を希釈する、工程と;
g.目的とするタンパク質に富む第2の保持液を第2の槽に戻す、および/または目的とするタンパク質に富む第2の保持液を収集する工程と、
を含む、前記方法が提供される。
程b)の前に除去される。
a.第1の希釈係数を有する懸濁液の形態で沈殿物を含有するのに適合されている第1の槽と;
b.目的とするタンパク質に富む第1の透過液および目的とするタンパク質が枯渇した第1の保持液を生成するのに適合されている動的フィルターエレメントを含み、懸濁液を受け取るために第1の槽と接続している、第1の濾過ユニットであって、第1の保持液を第1の槽に戻すのに適合されている、第1の濾過ユニットと;
c.目的とするタンパク質に富む第1の透過液を回収するために、第1の濾過ユニットと接続している第2の槽と;
d.目的とするタンパク質に富む第2の保持液および目的とするタンパク質が枯渇した第2の透過液を生成するのに適合されている、第1の透過液を第2の槽で濃縮するための第2の濾過ユニットであって、第2の保持液を第2の槽におよび/または第2の透過液を第1の槽に戻すのに適合されている、第2の濾過ユニットと、
を含む、前記クローズドシステムが提供される。
収収率が達成されるようにバッフルによって生成される。
変化の影響を(部分的に)打ち消すようにシステムが再調整し、新たな平衡が確立される)によって達成される。これは、再懸濁部位で体積を連続的に増加させ、動的フィルターを通じて溶解タンパク質を連続的に除去することによって、沈殿物から液相への最大タンパク質移動を確実にするためにル・シャトリエの原理が利用できることを意味する。いくつかの例において体積の増加は、タンパク質の連続濃縮工程中に透過液をリサイクルし、それによって緩衝液の消費を低減することによって実現される。
Soc.、71、541~550頁(1946)などのCohnの方法によるII+III沈殿物、またはI+II+III沈殿物、方法10、Cohnら J. Am;Chem. Soc.、72、465~474頁(1950);ならびにDeutschら J. Biol. Chem. 164、109~118頁(1946)の方法、またはNitschmannおよびKistler Vox Sang. 7、414~424頁(1962);Helv. Chim. Acta 37、866~873頁(1954)の沈殿物Aであってもよい。目的とするタンパク質を含む代替の沈殿物には、他の免疫グロブリンG含有Oncley画分、Cohn画分、米国特許第3,301,842号にSchulzeらによって記載された血漿由来の硫酸アンモニウム沈殿物が含まれるが、これらに限定されない。目的とするタンパク質を含むさらなる代替の沈殿物には、例えば、EP893450に記載されるオクタン酸沈殿物が含まれるが、これらに限定されない。
方法によって測定することができる。Kistler & Nitschmann法において、画分Iは、Cohn法の画分Iと同等である。次の沈殿物/画分は、沈殿物A(画分A)と呼ばれる。この沈殿物は、Cohn画分II+IIIと同一ではないが、広義には同等である。沈殿物は、次いで再溶解され、Cohn画分IIIと同等である沈殿物B(分画B)を沈殿させるために条件が調整される。この場合もやはり、これは廃棄画分とみなされ、通常は廃棄される。沈殿物B上清は、次いで、Cohn画分IIに相当する沈殿物IIを生成するためにさらに処理される。
の緩衝液などの導電率が低い緩衝液が使用される。
緩衝液(例えば、10mMリン酸塩、10mM酢酸塩および2mMクエン酸)に30分間溶解して、第1の希釈比5(1:6重量;または第1の希釈係数6(1:6)に等しい)を有する出発懸濁液を得る。懸濁液のpHは4.6である。連続抽出および分離プロセスのために、懸濁液を第1の槽から第1の濾過プロセスユニットへ移す。濾液(第1の透過液)を第2の槽に収集する。濾過した懸濁液の体積が第1の槽で一定のままであるように、100~200ml収集濾液ごとに、新鮮な緩衝液(または、UF工程後の再循環緩衝液(すなわち第2の透過液))100~200mlを第1の槽に添加する。4時間後、濾過を終了する。これにより、懸濁液中の総タンパク質濃度は0.1g/Lより下と予想され、および/またはIgG濃度は50mg/Lより下である。以下の表2は、IgGの回収率を示す。
総IgG量(最終希釈係数達成後)=78.9g/kg
平均全IgG抽出(表1)=(76.5+85.3)/2=80.9g/kg
IgGの収率(回収率)=78.9/80.9×100%=97.53%
よって、少なくとも95%または約98%の本発明によるIgG回収率が達成されることがこれにより示される。
バルク段階でより高収量を達成する前提条件となる。本発明は、含タンパク質沈殿物(例えばペースト)が高い希釈係数(例えば、40~70;1:40~1:70の間)で実際に懸濁される抽出プロセスを利用する。例として、含タンパク質沈殿物(例えばペースト)1kgが液体(例えば緩衝液)3kgに再懸濁され、結果として第1の希釈係数が4(1:4)の出発懸濁液になる。緩衝液の供給流66kgの再循環は、結果として最終希釈係数70(1:70)になる。本発明で使用される抽出プロセスは、より高量の免疫グロブリンGを懸濁液/溶液中に放出できるようにし、故に平衡を移動させ(以下に論じられるように)、懸濁液からの免疫グロブリンGのより効率的な分離を可能にする。
テムは、適用された変化の影響を打ち消す(部分的に)ように自らを再調整し、新たな平衡が確立される。言い換えれば、平衡にあるシステムが乱されるときは常に、変化の影響が無効にされるようにシステムは自らを調整する。例えば、平衡状態では、どちらの側の懸濁液中の免疫グロブリンの濃度も一定である。平衡状態では、少量の免疫グロブリンが反応から取り出される場合、免疫グロブリン濃度の変化のために、これが、濃度のその変化を低減する側に平衡を移動させる。ル・シャトリエの原理によればシステムは、元の平衡状態まで、影響を受けた変化に部分的に反対しようとするであろう。今度は、生成物の反応速度、程度および収率が、システムに対する影響に対応して変化することになる。
される。ディスクの回転は、膜表面で剪断力を発生させる。この手法により、濾過ケーキの増加が回避され、高い濾過流束をもたらす。回転濾過の主なパラメータのいくつかは、セラミックフィルターディスクを回転させるための回転速度および固形分(濾液の除去による液体の濃縮)である。
本発明により、免疫グロブリンGを第1のプロセスユニットで連続抽出および分離プロセスにより抽出した。
この例では、実施例1に記載されたのと同様の方法および設備を使用して、異なる緩衝液組成および異なる最終希釈係数の使用から生じるIgG収量を比較した。
本発明の連続抽出システムを使用した免疫グロブリンG、MおよびAならびに他の不純物の収量に与える種々のpHの影響を、この例で実証する。クエン酸緩衝液およびリン酸緩衝液を使用してIgG回収率を比較する2つの実験を行った。この例で使用した含タンパク質沈殿物は、Cohn法10またはKistlerおよびNitschmann法(1962、Vox Sang. 7、414頁)に従ってエタノールで処置した血漿から得られた1kg沈殿物I+II+IIIであった。
この例では、i)沈殿物を固定体積の220mM酢酸ナトリウム(pH4.8±0.2)にし最終希釈係数6をもたらし、深層濾過を使用して溶解タンパク質を回収すること;ii)沈殿物を220mM酢酸ナトリウム(pH4.8±0.2)に溶解し、本発明の連続抽出プロセスを使用して溶解タンパク質を回収して、最終希釈係数31を達成すること;およびiii)第1の槽の懸濁液が新鮮な緩衝液で連続的に補充される本発明の連続抽
出プロセスを使用して、第2の希釈係数31を達成することによって、沈殿物からのIgG回収率を比較した。
これらの例では、第2の槽におけるタンパク質収量に対する第1のプロセスユニットの回転フィルターディスクの回転速度および全再循環体積(最終希釈係数)の影響を調査した。表8は、使用した条件の概要を示す。
実験のためにCohn I+II+IIIペースト(Celpure C100120グラムを含有する1kg)を、第1の槽の10mM酢酸ナトリウムおよび10mMリン酸二水素ナトリウム二水和物、pH4.3~4.4緩衝液に4℃、第1の希釈比1:6で懸濁した。第1の槽の懸濁液を、パドルスターラーを用いて4℃で約15~20時間撹拌した。実験を開始する前、第1の濾過ユニット(0.2μm膜;フィルター面積=0.1m2を有する3つのセラミックフィルターを含有するNovoflow動的濾過装置)を冷水(1℃)で一晩保管した。実験の開始時にユニットから水を抜き、懸濁液を該ユニットへ送液した。濾過プロセスを始める前に、懸濁液を次いで第1の槽と第1のプロセスユニットの間で数分間再循環させた。濾過プロセス中、残りの懸濁液を第1のプロセスユニットに徐々に添加した。第1のプロセスユニットのセラミックフィルターを、1200rpmの回転速度および1.2バールのTMPで作動させた。第1のプロセスユニットからの
透過液を第2の槽に収集し、次いでUF/DFユニットと呼ばれる第2のユニットに送液した。UF/DFユニットは、7.0nm膜;フィルター面積0.2m2を有する、6つのセラミックディスクを含有するNovoflow動的濾過装置であった。UF/DFシステムの透過液流量は、50~70mL/分であった。第1の濾液が第2の槽に収集されたら、UF/DFシステムを開始した。UF/DFシステムの保持液を第2の槽へ逆流させ、一方、透過液は第1の槽へ逆流させた。第1の槽へフィードバックされた透過液の体積は、ペーストと混合される全液体体積(すなわち最終希釈係数)に寄与した。この実験では、全再循環体積はペースト1kgあたり107Lであった(すなわち1:107最終希釈係数)。
この実施例では、全再循環体積が16L/kgペーストであったことを除いて、実施例5Aに記載されているのと同じ手順を使用した。
この実施例では、第1のプロセスユニットのセラミックフィルターの回転速度を1000rpmで作動させ、全再循環体積が102L/kgペーストであったことを除いて、実施例5Aに記載されているのと同じ手順を使用した。
この実施例では、全再循環体積が16L/kgペーストであったことを除いて、実施例6Aに記載されているのと同じ手順を使用した。
この実施例では、第1のプロセスユニットのセラミックフィルターの回転速度を800rpmで作動させ、全再循環体積が93L/kgペーストであったことを除いて、実施例6Aに記載されているのと同じ手順を使用した。
この実施例では、全再循環体積が16L/kgペーストであったことを除いて、実施例7Aに記載されているのと同じ手順を使用した。
この例では、濾過助剤の存在下(実施例8A)および非存在下(実施例8B)で動的クロスフロー濾過プロセスを比較した。使用した濾過助剤は(Celpure C300;Advanced Minerals)であった。
験の開始時に水を抜き、懸濁液を動的フィルター装置へ送液した。濾過プロセスを始める前に、懸濁液を次いで第1の槽と該装置の間で数分間再循環させた。濾過プロセス中、残りの懸濁液を徐々に添加した(セラミックフィルターを、1.2~1.6バールのTMPにより1200rpmで作動させた)。各実験で、緩衝液約600mlを16~18回交換した。これは約9.6~10.8Lの緩衝液量に相当し、オンライン処理中の限外濾過/透析濾過ユニットの緩衝液回収率をシミュレートするのに役立つ。濾液を撹拌下(パドルスターラー)で氷冷容器に収集し、濾過を完了させた後、濾液をさらに1時間撹拌した。その後、Akta Crossflow装置を使用して20g/L(±5g/L)まで濾液を濃縮した。
Claims (61)
- 目的とするタンパク質を沈殿物から抽出するための方法であって、
a.第1の槽(1)で沈殿物と液体を混合して第1の希釈係数を有する懸濁液を形成する工程と;
b.第1の保持液および目的とするタンパク質に富む第1の透過液を生成するのに適合されている動的フィルターエレメントを含む第1の濾過ユニット(5)へ懸濁液を送液する工程と;
c.第1の保持液(13)を第1の槽へ流すことによって、液体を添加することにより第2の希釈係数まで第1の槽(1)の懸濁液を希釈する工程と;
d.目的とするタンパク質に富む第1の透過液を第2の槽(7)で回収する工程と、
を含み、
ここで、工程bおよび工程cは、(i)第1の槽において最終的な希釈係数が達成されるまで、および/または(ii)第1の槽において懸濁液の0.001g/L~0.1g/Lのタンパク質濃度が達成されるまで、繰り返される、前記方法。 - e.第2の槽(7)の第1の透過液を、クロスフローフィルターエレメントを含む第2の濾過ユニットで連続濃縮プロセスに供し、それによって目的とするタンパク質に富む第2の保持液、および目的とするタンパク質が枯渇した第2の透過液を生成する工程と;
f.第2の透過液を第1の槽(1)に流すことによって、第1の槽(1)の懸濁液を希釈し、それによって第2の希釈係数まで懸濁液を希釈する、工程と;
g.目的とするタンパク質に富む第2の保持液を第2の槽(7)に戻す、および/または目的とするタンパク質に富む第2の保持液を収集する工程と、
をさらに含み、
ここで、工程bおよび工程c、または、工程b~工程fは、(i)第1の槽において最終的な希釈係数が達成されるまで、および/または(ii)第1の槽において懸濁液の0.001g/L~0.1g/Lのタンパク質濃度が達成されるまで、繰り返される、請求項1に記載の方法。 - 目的とするタンパク質を沈殿物から高収率で抽出するための工業規模の方法であって、a.第1の槽で沈殿物と液体を混合して第1の希釈係数を有する懸濁液を形成する工程と;
b.平均孔径が5nm~5000nmの間のセラミック膜を有するフィルターディスクを含む回転式クロスフローフィルターエレメントを含む第1の濾過ユニットへ懸濁液を連続的に送液する工程であって、フィルターエレメントは、第1の保持液、および目的とするタンパク質に富む第1の透過液を生成するのに適合されている、工程と;
c.部分的に第1の保持液を第1の槽へ流すことによって、液体を添加することにより第2の希釈係数まで第1の槽の懸濁液を希釈する工程と;
d.目的とするタンパク質に富む第1の透過液を第2の槽で回収する工程と;
e.第2の槽の第1の透過液を、クロスフローフィルターエレメントを含む第2の濾過ユニットで連続濃縮プロセスに供し、それによって目的とするタンパク質に富む第2の保持液、および目的とするタンパク質が枯渇した第2の透過液を生成する工程と;
f.第2の透過液を第1の槽に連続的に流すことによって、第1の槽の懸濁液を希釈し、それによって第2の希釈係数まで懸濁液を希釈する、工程と;
g.目的とするタンパク質に富む第2の保持液を第2の槽に戻す、および/または目的とするタンパク質に富む第2の保持液を収集する工程と、
を含み、
ここで、工程bおよび工程c、または、工程b~工程fは、(i)第1の槽において最終的な希釈係数が達成されるまで、および/または(ii)第1の槽において懸濁液の0.001g/L~0.1g/Lのタンパク質濃度が達成されるまで、繰り返される、前記方法。 - 第1の透過液は濃縮プロセスへ連続的に送液される、請求項2または請求項3に記載の方法。
- 濃縮プロセスは、第2の濾過ユニットで行われる限外濾過である、請求項2または請求項3に記載の方法。
- 第1の透過液は第2の槽に収集され、第1の槽の懸濁液が完全に濾過されると、第2の槽からの第1の透過液は連続濃縮プロセスに供される、請求項1~5のいずれか1項に記載の方法。
- 第1の希釈係数は、少なくとも3(1:3;タンパク質を含む組成物の部分:全体)である、請求項1~6のいずれか1項に記載の方法。
- 第1の希釈係数は、1~10の間である、請求項7に記載の方法。
- 第1の希釈係数は、3~9の間である、請求項7または8に記載の方法。
- 第1の希釈係数は、3~5の間である、請求項7~9のいずれか1項に記載の方法。
- 達成される最終的な希釈係数(全希釈液の重量に対する含タンパク質沈殿物の重量)は、6~70の間、10~70の間、または20~50の間である、請求項1~10のいずれか1項に記載の方法。
- 達成される最終的な希釈係数(全希釈液の重量に対する含タンパク質沈殿物の重量)は、30~40の間、または70である、請求項1~11のいずれか1項に記載の方法。
- 達成されるタンパク質濃度は、0.1g/L未満である、請求項1~12のいずれか1
項に記載の方法。 - 達成されるタンパク質濃度は、0.001~0.1g/Lの間である、請求項1~12のいずれか1項に記載の方法。
- 沈殿物は、アルコール分画プロセスの中間生成物である、請求項1~14のいずれか1項に記載の方法。
- アルコール分画プロセスは、血漿のアルコール分画プロセスである、請求項15に記載の方法。
- 血漿は、ヒト血漿である、請求項16に記載の方法。
- 中間生成物は、Cohn画分I(Fr I)、Cohn画分II+III(Fr II+III)、Cohn画分I+II+III(Fr I+II+III)、またはKistler/Nitschmann沈殿物A(KN A)、またはKN Aならびに1つもしくはそれ以上のFr I、Fr II+IIIおよびFr I+II+IIIの組合せからなる群から選択される、請求項15~17のいずれか1項に記載の方法。
- 沈殿物は培養上清または発酵生成物である、請求項1~14のいずれか1項に記載の方法。
- 第1の濾過ユニットは圧力容器を含む、請求項1~19のいずれか1項に記載の方法。
- 動的フィルターエレメントは、動的クロスフローフィルターエレメントである、請求項1~20のいずれか1項に記載の方法。
- 動的クロスフローフィルターエレメントは、回転式クロスフローフィルターエレメントである、請求項21に記載の方法。
- 回転式クロスフィルターエレメントの回転速度は、600rpm~1200rpmの間である、請求項22に記載の方法。
- 回転式クロスフィルターエレメントの回転速度は、800rpm~1200rpmの間である、請求項23に記載の方法。
- 回転式クロスフィルターエレメントの回転速度は、800rpm、1000rpmまたは1200rpmである、請求項24に記載の方法。
- 第1の濾過ユニットは、セラミック膜を含む回転フィルターディスクを備える、請求項20~25のいずれか1項に記載の方法。
- 第1の濾過ユニットは、第1の濾過ユニットの内容物の乱流混合のためのバッフルをさらにを備える、請求項26に記載の方法。
- ディスクの接線速度は1~7m/秒の間である、請求項26または27に記載の方法。
- 第1の濾過ユニットの温度は、制御される、請求項1~28のいずれか1項に記載の方法。
- 第1の濾過ユニットの温度は、2℃~25℃の間に制御される、請求項29に記載の方法。
- 第1の濾過ユニットの温度は、2℃~10℃に制御される、請求項30に記載の方法。
- 動的フィルターエレメントまたはクロスフローフィルターエレメントは、5nm~5000nmの間の平均孔径を有する濾過膜を含む、請求項1~31のいずれか1項に記載の方法。
- 濾過膜は、5nm~2000nmの間の平均孔径を有する、請求項32に記載の方法。
- 濾過膜は、5nm~500nmの間の平均孔径を有する、請求項32または33に記載の方法。
- 濾過膜は、5nm~200nmの間の平均孔径を有する、請求項32~34のいずれか1項に記載の方法。
- 濾過膜は、7nm~100nmの間の平均孔径を有する、請求項32~35のいずれか1項に記載の方法。
- 濾過膜は、7nm~80nmの間の平均孔径を有する、請求項32~36のいずれか1項に記載の方法。
- 沈殿物は濾過助剤を含む、請求項1~37のいずれか1項に記載の方法。
- 濾過助剤は第1の濾過の前に除去される、請求項38に記載の方法。
- 第2の槽(7)は、第1の透過液(14)および/または第2の保持液(16)を受け取るために提供され、第1の透過液および第2の透過液の流速は、実質的に一定の生成物体積が第2の槽(7)で維持されるように制御される、請求項1~39のいずれか1項に記載の方法。
- 膜透過圧力は、0.1バール~2.5バールである、請求項1~40のいずれか1項に記載の方法。
- 膜透過圧力は、0.2バール~2.4バールである、請求項41に記載の方法。
- 膜透過圧力は、0.4バール~2.0バールである、請求項41または42に記載の方法。
- 膜透過圧力は、0.4バール~1.5バールである、請求項41~43のいずれか1項に記載の方法。
- 抽出プロセスは、第1の濾過ユニットの懸濁液の流量および/もしくは滞留時間、ならびに/または第1の保持液の流量、および/もしくは第1の透過液の流量を調節することによってさらに促進される、請求項1~44のいずれか1項に記載の方法。
- 懸濁液は、3.0~9.0の間のpHを有する、請求項1~45のいずれか1項に記載の方法。
- 懸濁液は、4.0~7.0の間のpHを有する、請求項46に記載の方法。
- 懸濁液は、4.0~6.0の間のpHを有する、請求項46または47に記載の方法。
- 懸濁液は、4.0~5.0の間のpHを有する、請求項46~48のいずれか1項に記載の方法。
- 懸濁液は、4.3~4.9の間のpHを有する、請求項46~49のいずれか1項に記載の方法。
- 懸濁液は、4.4~4.8の間のpHを有する、請求項46~50のいずれか1項に記載の方法。
- 懸濁液は、5.0のpHを有する、請求項46~51のいずれか1項に記載の方法。
- 沈殿物は、0.5~6.5%w/vの総タンパク質濃度を有する、請求項1~52のいずれか1項に記載の方法。
- 沈殿物は、1.0~4.0%w/vの総タンパク質濃度を有する、請求項53に記載の方法。
- 沈殿物は、1.5~3.0%w/vの総タンパク質濃度を有する、請求項53または54に記載の方法。
- 沈殿物は、1.8~2.5%w/vの総タンパク質濃度を有する、請求項53~55のいずれか1項に記載の方法。
- 沈殿物は、2.0%w/vの総タンパク質濃度を有する、請求項56に記載の方法。
- 液体は、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、およびクエン酸の1つまたはそれ以上を含む緩衝液を含む、請求項1~57のいずれか1項に記載の方法。
- 沈殿物は、懸濁液、ペレットまたはペーストの形態で第1の槽に添加される、請求項1~58のいずれか1項に記載の方法。
- 沈殿物は、ペーストの形態で第1の槽に添加される、請求項59に記載の方法。
- 方法の生成物は、最終生成物が対象への投与に適するように、クロマトグラフィー工程、ウイルス不活性化工程、濃縮および製剤化の1つまたはそれ以上を含むさらなる処理に供される、請求項1~60のいずれか1項に記載の方法。
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