JP7431999B2 - フッ素含有キラルアミン系化合物の合成方法 - Google Patents

フッ素含有キラルアミン系化合物の合成方法 Download PDF

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Description

本発明は、フッ素含有化合物の合成分野に関し、具体的にはフッ素含有キラルアミン系化合物の合成方法に関する。
フッ素含有化合物は、医薬及び農業化学において非常に重要な化合物の一つである。ここ１０年間、フッ素含有薬物は以前になかった速度で増加した。そのため、グリーンであるとともに効率が高い合成方法を開発することは重要な役割を果たしている。フッ素含有ジヒドロキシケタール系化合物も、そのうちの１つの化合物
Figure 0007431999000001
 である。このような基質を用いて重要なフッ素含有キラルアミン系化合物
Figure 0007431999000002
 と
Figure 0007431999000003
 を合成することができる。現在、フッ素含有ジヒドロキシケタールによるフッ素含有キラルアミンの合成方法は、主に以下のものがある。
１．式１に示す反応経路による：アルカリ条件下で、フッ素含有ジヒドロキシケタール化合物１のＣ－Ｃ結合が容易に開裂し、トリフルオロ酢酸及び対応するフッ素含有エノール系化合物２を形成する。化合物３をマンニッヒ反応受容体として用い、マンニッヒ反応を経て化合物４を得て、さらにスルフィニル基保護を除去して目的生成物であるフッ素含有キラルアミン系化合物を得る。
Figure 0007431999000004
 ２．式２に示す反応経路による：フッ素含有ジヒドロキシケタール化合物６とベンジルアミン系化合物を反応させ、キラルアミノ基を導入し、さらにベンジル基保護を除去して目的化合物８を得る。
Figure 0007431999000005
 式２
上記式１に示す経路の基質には限界があり、三段階反応を経てからこそ目的生成物を得ることができ、収率がやや低い。反応経路は長く、反応には化学試薬を用いて廃ガス、廃液、廃棄物の発生量が多い。式２に示す経路のステップは、二段階反応であるが、反応は、高価な金属リガンド又は触媒の使用を必要とする場合があり、高毒性化合物を使用する可能性もある。同様に、反応には化学試薬を用いて廃ガス、廃液、廃棄物の発生量が大きい。
したがって、このようなフッ素含有ジヒドロキシケタール化合物に新たな合成方法を提供する必要性が依然として存在する。
本発明の主な目的は、従来技術におけるフッ素含有キラルアミン系化合物の合成経路が長いという問題を解決するためのフッ素含有キラルアミン系化合物の合成方法を提供することである。
上記目的を達成するため、本発明は、フッ素含有キラルアミン系化合物の合成方法を提供し、該合成方法は、アミノドナーとフッ素含有ジヒドロキシケタール系化合物がトランスアミナーゼの触媒下で反応してフッ素含有キラルアミン系化合物を生成することを含み、ここで、トランスアミナーゼは、Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｏｌａｃｅｕｍ ＤＳＭ３０１９１（ＣＶＴＡ）（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＷＰ＿０１１１３５５７３．１）、Ｆｏｎｓｅｃａｅａ ｐｅｄｒｏｓｏｉ ＣＢＳ ２７１．３７（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＸＰ＿０１３２８６２８１．１）、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ｓｕｂｓｐ． ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ Ｅｃｌ８（ＧｅｎＢａｎｋ：ＣＣＮ２９５４１．１）、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｏｏｄｉｉ（ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＫＳ３６０００．１）、Ｐａｒａｃｏｃｃｕｓｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＷＰ＿０１１７４６９７５．１）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｂｒａｓｉｌｉａｎｕｍ（ＧｅｎＢａｎｋ：ＣＥＪ５５３３４．１）、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．ＴＬ３（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＷＰ＿０１４８８５６７７．１）、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｔｅｒｒｅｕｓＮＩＨ２６２４（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＸＰ＿００１２０９３２５．１）、Ｅｘｏｐｈｉａｌａ ｓｐｉｎｉｆｅｒａ（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＸＰ＿０１６２３３８２１．１）、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓ（ｓｔｒａｉｎ ＤＳＭ １１３００）（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＷＰ＿０１１５３０５４５．１）、Ｇｅｏｍｙｃｅｓ ｄｅｓｔｒｕｃｔａｎｓ ２０６３１－２１（ＧｄＴＡ）ｉｎ Ｅ．ｃｏｌｉ（ＧｅｎＢａｎｋ：ＥＬＲ０５５７３．１）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ ＫＴ２４４０（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＷＰ＿０１０９５４５５４．１）、Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｈａｅｒｉｃｕｓ（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＷＰ＿０２４３６３７４１．１）、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ ＤＳＭ ３１９（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＷＰ＿０１３０８２２１９．１）、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｈａｒｚｉａｎｕｍ（ＧｅｎＢａｎｋ：ＫＫＰ０７０３０．１）、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｕｓ Ｒ－ＡＴＡｓ（ＡｓｐＦｕｍ）（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＸＰ＿７４８８２１．１）、Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｅｒｍｏｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ ｓｕｂｓｐ． ｔｈｅｒｍｏｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ ＤＳＭ ４６５（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＷＰ＿００８８７９４３６．１）、Ｃｌａｄｏｐｈｉａｌｏｐｈｏｒａ ｂａｎｔｉａｎａ ＣＢＳ １７３．５２（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＸＰ＿０１６６１７９４８．１）、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＷＰ＿０１６７６３０２６．１）、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｔｈａｉｌａｎｄｅｎｓｉｓ ＭＳＭＢ１２１（ＢｔＳ－ＴＡ）（ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＧＫ４９３９９．１）、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ｓｕｂｓｐ． ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ＭＧＨ ７８５７８（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＷＰ＿００２９２０２２６．１）、Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｏｅｂｉｉ（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＷＰ＿０６２７５３８９４．１）及びＴａｌａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｌｌｕｌｏｌｙｔｉｃｕｓ（ＧｅｎＢａｎｋ：ＧＡＭ３７５３３．１）に由来する。
さらに、トランスアミナーゼは、配列番号１、配列番号２、配列番号３又はＳＥＱＩＤＮＯ：４に示すアミノ酸配列を有する。
さらに、フッ素含有ジヒドロキシケタール系化合物は、以下の構造式Ｉを有する：
Figure 0007431999000006
 構造式Ｉ、
ここで、Ｒは、アルキル基、シクロアルキル基、アリール基、ヘテロ原子含有アルキル基、ヘテロ原子含有シクロアルキル基、ヘテロ原子含有アリール基、アミド系化合物残基又はエーテル系化合物残基から選択され、Ｒ１とＲ２は、同一又は異なるＨ原子又はハロゲン原子であり、
より好ましくは、フッ素含有ジヒドロキシケタール系化合物は、構造式ＩＩで表される構造を有する：
Figure 0007431999000007
 構造式ＩＩ。
さらに、フッ素含有ジヒドロキシケタール系化合物は、以下から選択されるいずれか１つである：
Figure 0007431999000008
 さらに、合成方法は、リン酸緩衝液とアミノドナーを混合し、第１混合液を得て、第１混合液にフッ素含有ジヒドロキシケタール系化合物を添加し、第２混合液を得ることと、第２混合液にトランスアミナーゼを添加して、反応混合液を得ることと、反応混合液からフッ素含有キラルアミン系化合物を分離して得ることとを含む。
さらに、第１混合液にフッ素含有ジヒドロキシケタール系化合物を添加する前に、合成方法は、第１混合液のｐＨ値を７．０～９．０に調整することをさらに含み、好ましくは、第２混合液にトランスアミナーゼを添加し、かつトランスアミナーゼを添加した第２混合液のｐＨを７．０～９．０に調整して、反応混合液を得る。
さらに、反応混合液からフッ素含有キラルアミン系化合物を分離して得ることは、反応混合液の酸性度を調整してトランスアミナーゼを変性させ、好ましくは、反応混合液のｐＨ値を１～２に調整し、変性後のトランスアミナーゼを濾過除去して濾液を得ることと、濾液を抽出して、フッ素含有キラルアミン系化合物を得ることとを含み、好ましくは、ジクロロメタンを用いて濾過を行い、好ましくは、ジクロロメタンを用いて抽出を行う。
さらに、抽出は２～５回であり、抽出後に、抽出した有機相を乾燥するステップをさらに含み、好ましくは、毎回の抽出で得られた有機相を合わせて抽出物を得て、抽出物を乾燥して、乾燥した有機相生成物を得て、乾燥した有機相生成物を、温度＜３５℃、圧力≦－０．０６Ｍｐａの条件で留分なしまでに濃縮して、フッ素含有キラルアミン系化合物を得る。
さらに、トランスアミナーゼとフッ素含有ジヒドロキシケタール系化合物の質量比は０．４：１～１．０：１である。
さらに、フッ素含有ジヒドロキシケタール系化合物の濃度は６０ｇ／Ｌ～１００ｇ／Ｌである。
さらに、アミノドナーは、イソプロピルアミン、イソプロピルアミンの塩酸塩、アラニン、アニリン又はｎ－ブチルアミンから選択される。
本発明の技術案を応用し、本出願のトランスアミナーゼは、フッ素含有ジヒドロキシケタール系化合物に対して基質特異性を有し、このような基質のフッ素含有キラルアミン系化合物への変換を効果的に触媒することができ、かつ、該トランスアミナーゼは、複数種のフッ素含有ジヒドロキシケタール系化合物に対して触媒活性を有し、反応選択性と活性はいずれも高い。該生物酵素触媒合成方法は、経路が短く、製品収率が高いだけでなく、生産コストを大幅に低下させ、有機溶剤と廃水、排気、固体廃棄物の発生を減少させる。
本出願の一部を構成する図面は、本発明のより深い理解を提供するために用いられ、本発明の概略的な実施例及びその説明は、本発明を解釈するために用いられ、本発明の不当な限定を構成するものではない。
本発明の実施例１３における異なる酵素量の同じ量の基質の変換率に対する影響を示す図である。 本発明の実施例１４における同じ酵素量の異なる濃度の基質の変換率に対する影響を示す図である。 本発明の実施例１５における異なるアミノドナーの同じ反応における基質の変換率に対する影響を示す図である。 本発明の実施例１６における異なる由来のトランスアミナーゼが同じ基質に対していずれも変換活性を有することを示す。
なお、本出願における実施例及び実施例における特徴は、矛盾することなく相互に組み合わせてもよい。以下、実施例を挙げて本発明を詳細に説明する。
背景技術で述べたように、従来技術では、フッ素含有ジヒドロキシケタール系化合物を出発原料として使用してフッ素含有キラルアミン系化合物を合成するとき、反応経路が長くなるという欠点があるだけでなく、工業上の廃ガス、廃液、廃棄物が発生するという問題も存在する。この状況を改善するために、本出願の発明者らは、効率的で環境に優しいという観点から、従来の合成経路を改善しようと試みた。研究過程において、本発明者らは、出願者によって自ら開発されたトランスアミナーゼが、ＰＬＰを補酵素とするトランスアミナーゼの有する、ケトン系化合物を触媒する汎用触媒活性に加えて、フッ素含有ジヒドロキシケタール系化合物を触媒する活性も有することを見出した。そして、さらなる研究により、該トランスアミナーゼを用いてフッ素含有ジヒドロキシケタール系化合物基質を触媒すると、一段階反応で目的生成物が得られるだけでなく、基質の種類も広いことがわかった。該トランスアミナーゼを用いた生物学的変換反応の選択性が非常に高いため、目的生成物のｅｅ値が大幅に向上した。また、生物酵素触媒反応を採用して生産効率を大幅に向上させ、有機溶剤と廃ガス、廃液、廃棄物の発生を減少させる。
上記の研究結果に基づいて、出願人は本出願の技術案を提出した。本出願の典型的な実施形態では、フッ素含有キラルアミン系化合物の合成方法を提供し、該合成方法は、アミノドナーとフッ素含有ジヒドロキシケタール系化合物がトランスアミナーゼの触媒下で反応してフッ素含有キラルアミン系化合物を生成することを含み、ここで、トランスアミナーゼは、Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｏｌａｃｅｕｍ ＤＳＭ３０１９１（ＣＶＴＡ）（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＷＰ＿０１１１３５５７３．１）、Ｆｏｎｓｅｃａｅａ ｐｅｄｒｏｓｏｉ ＣＢＳ ２７１．３７（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＸＰ＿０１３２８６２８１．１）、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ｓｕｂｓｐ． ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ Ｅｃｌ８（ＧｅｎＢａｎｋ：ＣＣＮ２９５４１．１）、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｏｏｄｉｉ（ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＫＳ３６０００．１）、Ｐａｒａｃｏｃｃｕｓ ｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＷＰ＿０１１７４６９７５．１）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｂｒａｓｉｌｉａｎｕｍ（ＧｅｎＢａｎｋ：ＣＥＪ５５３３４．１）、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．ＴＬ３（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＷＰ＿０１４８８５６７７．１）、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｔｅｒｒｅｕｓＮＩＨ２６２４（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＸＰ＿００１２０９３２５．１）、Ｅｘｏｐｈｉａｌａ ｓｐｉｎｉｆｅｒａ（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＸＰ＿０１６２３３８２１．１）、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓ（ｓｔｒａｉｎ ＤＳＭ １１３００）（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＷＰ＿０１１５３０５４５．１）、Ｇｅｏｍｙｃｅｓ ｄｅｓｔｒｕｃｔａｎｓ ２０６３１－２１（ＧｄＴＡ）ｉｎ Ｅ．ｃｏｌｉ（ＧｅｎＢａｎｋ：ＥＬＲ０５５７３．１）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ ＫＴ２４４０（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＷＰ＿０１０９５４５５４．１）、Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｈａｅｒｉｃｕｓ（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＷＰ＿０２４３６３７４１．１）、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ ＤＳＭ ３１９（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＷＰ＿０１３０８２２１９．１）、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｈａｒｚｉａｎｕｍ（ＧｅｎＢａｎｋ：ＫＫＰ０７０３０．１）、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｕｓ Ｒ－ＡＴＡｓ（ＡｓｐＦｕｍ）（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＸＰ＿７４８８２１．１）、Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｅｒｍｏｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ ｓｕｂｓｐ． ｔｈｅｒｍｏｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ ＤＳＭ ４６５（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＷＰ＿００８８７９４３６．１）、Ｃｌａｄｏｐｈｉａｌｏｐｈｏｒａ ｂａｎｔｉａｎａ ＣＢＳ １７３．５２（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＸＰ＿０１６６１７９４８．１）、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＷＰ＿０１６７６３０２６．１）、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｔｈａｉｌａｎｄｅｎｓｉｓ ＭＳＭＢ１２１（ＢｔＳ－ＴＡ）（ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＧＫ４９３９９．１）、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ｓｕｂｓｐ． ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ＭＧＨ ７８５７８（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＷＰ＿００２９２０２２６．１）、Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｏｅｂｉｉ（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＷＰ＿０６２７５３８９４．１）及びＴａｌａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｌｌｕｌｏｌｙｔｉｃｕｓ（ＧｅｎＢａｎｋ：ＧＡＭ３７５３３．１）に由来する。
より好ましくは、該トランスアミナーゼは、以下の配列番号１、配列番号２、配列番号３又は配列番号４に示されるアミノ酸配列を有する：
ＭＱＫＱＲＴＣＳＱＷＲＥＬＤＡＡＨＨＬＨＰＦＴＤＴＡＳＬＮＱＡＧＡＲＶＭＴＲＧＥＧＶＹＬＷＤＣＥＧＮＫＩＩＤＧＭＡＧＬＷＣＶＮＶＧＹＧＲＫＤＦＡＥＡＡＲＲＱＭＥＥＬＰＦＹＮＴＦＹＫＴＴＨＰＡＶＶＥＬＳＳＬＬＡＥＶＴＰＡＧＦＤＲＶＦＹＴＮＳＧＳＥＳＶＤＴＭＩＲＭＶＲＲＹＷＤＶＱＧＫＰＥＫＫＴＬＩＧＲＷＷＧＹＨＧＳＴＩＧＧＡＳＬＧＧＦＫＹＭＨＥＱＧＤＬＰＩＰＧＭＡＨＩＥＱＰＷＷＹＫＨＧＫＤＭＴＰＤＥＦＧＶＶＡＡＲＷＬＥＥＫＩＬＥＩＧＡＤＫＶＡＡＦＶＧＥＰＩＱＧＡＧＧＶＩＶＰＰＡＴＹＷＰＥＩＥＲＩＣＲＫＹＤＶＬＬＶＡＤＥＶＩＣＧＦＧＲＴＧＥＷＦＧＨＱＨＦＧＦＱＰＤＬＦＴＡＡＫＧＬＳＳＧＹＬＰＩＧＡＶＦＶＧＫＲＶＡＥＧＬＩＡＧＧＤＦＮＨＧＦＴＹＳＧＨＰＶＣＡＡＶＡＨＡＮＶＡＡＬＲＤＥＧＩＶＱＲＶＫＤＤＩＧＰＹＭＱＫＲＷＲＥＴＦＳＲＦＥＨＶＤＤＶＲＧＶＧＭＬＬＡＦＴＬＶＫＮＫＡＫＲＥＬＦＰＤＦＧＥＩＧＴＬＣＲＤＩＦＦＲＮＮＬＩＭＤＳＣＧＤＨＩＶＣＡＰＰＬＶＭＴＲＡＥＶＤＥＭＬＡＶＡＥＲＣＬＥＥＦＥＱＴＬＫＡＲＧＬＡ（配列番号１）
ＭＱＫＱＲＴＣＳＱＷＲＥＬＤＡＡＨＨＬＨＰＦＴＤＴＡＳＬＮＱＡＧＡＲＶＭＴＲＧＥＧＶＹＬＷＤＣＥＧＮＫＩＩＤＧＭＡＧＬＷＣＶＮＶＧＹＧＲＫＤＦＡＥＡＡＲＲＱＭＥＥＬＰＦＹＮＴＦＹＫＴＴＨＰＡＶＶＥＬＳＳＬＬＡＥＶＴＰＡＧＦＤＲＶＦＹＴＮＳＧＳＥＳＶＤＴＭＩＲＭＶＲＲＹＷＤＶＱＧＫＰＥＫＫＴＬＩＧＲＷＷＧＹＨＧＳＴＩＧＧＡＳＬＧＧＦＫＹＭＨＥＱＧＤＬＰＩＰＧＭＡＨＩＥＱＰＷＷＹＫＨＧＫＤＭＴＰＤＥＦＧＶＶＡＡＲＷＬＥＥＫＩＬＥＩＧＡＤＫＶＡＡＦＶＧＥＰＩＱＧＡＧＧＶＩＶＰＰＡＴＹＷＰＥＩＥＲＩＣＲＫＹＤＶＬＬＶＡＤＥＶＩＣＧＦＧＲＴＧＥＷＦＧＨＱＨＦＧＦＱＰＤＬＦＴＡＡＫＧＬＳＳＧＹＬＰＩＧＡＶＦＶＧＫＲＶＡＥＧＬＩＡＧＧＤＦＮＨＧＦＴＹＳＧＨＰＶＣＡＡＶＡＨＡＮＶＡＡＬＲＤＥＧＩＶＱＲＶＫＤＤＩＧＰＹＭＱＫＲＷＲＥＴＦＳＲＦＥＨＶＤＤＶＲＧＶＧＭＬＬＡＦＴＬＶＫＮＫＡＫＲＥＬＦＰＤＦＧＥＩＧＴＬＣＲＤＩＦＦＲＮＮＬＩＭＤＳＣＧＤＨＩＶＡＡＰＰＬＶＭＴＲＡＥＶＤＥＭＬＡＶＡＥＲＣＬＥＥＦＥＱＴＬＫＡＲＧＬＡ（配列番号２）
ＭＱＫＱＲＴＣＳＱＷＲＥＬＤＡＡＨＨＬＨＰＦＴＤＴＡＳＬＮＱＡＧＡＲＶＭＴＲＧＥＧＶＹＬＷＤＣＥＧＮＫＩＩＤＧＭＡＧＬＷＣＶＮＶＧＹＧＲＫＤＦＡＥＡＡＲＲＱＭＥＥＬＰＦＹＮＴＦＹＫＴＴＨＰＡＶＶＥＬＳＳＬＬＡＥＶＴＰＡＧＦＤＲＶＦＹＴＮＳＧＳＥＳＶＤＴＭＩＲＭＶＲＲＹＷＤＶＱＧＫＰＥＫＫＴＬＩＧＲＷＷＧＹＨＧＳＴＩＧＧＡＳＬＧＧＦＫＹＭＨＥＱＧＤＬＰＩＰＧＭＡＨＩＥＱＰＷＷＹＫＨＧＫＤＭＴＰＤＥＦＧＶＶＡＡＲＷＬＥＥＫＩＬＥＩＧＡＤＫＶＡＡＦＶＧＥＰＩＱＧＡＧＧＶＩＶＰＰＡＴＹＷＰＥＩＥＲＩＣＲＫＹＤＶＬＬＶＡＤＥＶＩＣＧＦＧＲＴＧＥＷＦＧＨＱＨＦＧＦＱＰＤＬＦＴＡＡＫＧＬＳＳＧＹＬＰＩＧＡＶＦＶＧＫＲＶＡＥＧＬＩＡＧＧＤＦＮＨＧＦＴＹＳＧＨＰＶＣＡＡＶＡＨＡＮＶＡＡＬＲＤＥＧＩＶＱＲＶＫＤＤＩＧＰＹＭＱＫＲＷＲＥＴＦＳＲＦＥＨＶＤＤＶＲＧＶＧＭＬＬＡＦＴＬＶＫＮＫＡＫＲＥＬＦＰＤＦＧＥＩＧＴＬＣＲＤＩＦＱＲＮＮＬＩＭＤＳＣＧＤＨＩＶＳＡＰＰＬＶＭＴＲＡＥＶＤＥＭＬＡＶＡＥＲＣＬＥＥＦＥＱＴＬＫＡＲＧＬＡ（配列番号３）
ＭＱＫＱＲＴＣＳＱＷＲＥＬＤＡＡＨＨＬＨＰＦＴＤＴＡＳＬＮＱＡＧＡＲＶＭＴＲＧＥＧＶＹＬＷＤＣＥＧＮＫＩＩＤＧＭＡＧＬＷＣＶＮＶＧＹＧＲＫＤＦＡＥＡＡＲＲＱＭＥＥＬＰＦＹＮＴＦＹＫＴＴＨＰＡＶＶＥＬＳＳＬＬＡＥＶＴＰＡＧＦＤＲＶＦＹＴＮＳＧＳＥＳＶＤＴＭＩＲＭＶＲＲＹＷＤＶＱＧＫＰＥＫＫＴＬＩＧＲＷＷＧＹＨＧＳＴＩＧＧＡＳＬＧＧＦＫＹＭＨＥＱＧＤＬＰＩＰＧＭＡＨＩＥＱＰＷＷＹＫＨＧＫＤＭＴＰＤＥＦＧＶＶＡＡＲＷＬＥＥＫＩＬＥＩＧＡＤＫＶＡＡＦＶＧＥＰＩＱＧＡＧＧＶＩＶＰＰＡＴＹＷＰＥＩＥＲＩＣＲＫＹＤＶＬＬＶＡＤＥＶＩＣＧＦＧＲＴＧＥＷＦＧＨＱＨＦＧＦＱＰＤＬＦＴＡＡＫＧＬＳＳＧＹＬＰＩＧＡＶＦＶＧＫＲＶＡＥＧＬＩＡＧＧＤＦＮＨＧＦＴＹＳＧＨＰＶＣＡＡＶＡＨＡＮＶＡＡＬＲＤＥＧＩＶＱＲＶＫＤＤＩＧＰＹＭＱＫＲＷＲＥＴＦＳＲＦＥＨＶＤＤＶＲＧＶＧＭＬＬＡＦＴＬＶＫＮＫＡＫＲＥＬＦＰＤＦＧＥＩＧＴＬＣＲＤＩＦＨＲＮＮＬＩＭＤＳＣＧＤＨＩＶＳＡＰＰＬＶＭＴＲＡＥＶＤＥＭＬＡＶＡＥＲＣＬＥＥＦＥＱＴＬＫＡＲＧＬＡ（配列番号４）
前記のように、本出願の上記トランスアミナーゼは、フッ素含有ジヒドロキシケタール系化合物に対して基質特異性を有し、このような基質のフッ素含有キラルアミン系化合物への変換を効果的に触媒することができ、かつ、該トランスアミナーゼは、複数種のフッ素含有ジヒドロキシケタール系化合物に対して触媒活性を有し、反応選択性と活性はいずれも高い。該生物酵素触媒合成方法は、経路が短く、製品収率が高いだけでなく、生産コストを大幅に低下させ、有機溶剤と廃水、排気、固体廃棄物の生成を減少させる。
上記配列番号１～４のいずれか１つに示されるトランスアミナーゼは、ω－トランスアミナーゼであり、いずれもＣｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｏｌａｃｅｕｍ ＤＳＭ３０１９１（ＣＶＴＡ）に由来する。従来方法に従って、Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｏｌａｃｅｕｍ ＤＳＭ３０１９１（ＣＶＴＡ）から分離して得られる。
好ましい一実施例では、フッ素含有ジヒドロキシケタール系化合物は、以下の式Ｉで表される構造を有する：
Figure 0007431999000009
 構造式Ｉ、
ここで、Ｒは、アルキル基、シクロアルキル基、アリール基、ヘテロ原子含有アルキル基、ヘテロ原子含有シクロアルキル基、ヘテロ原子含有アリール基、アミド系化合物残基又はエーテル系化合物残基から選択され、Ｒ１とＲ２は、同一又は異なるＨ原子又はハロゲン原子である。
より好ましい一実施例では、Ｒ１及びＲ２はいずれもＦ原子であり、すなわち、フッ素含有ジヒドロキシケタール系化合物は、以下の構造式ＩＩで表される構造を有する：
Figure 0007431999000010
 構造式ＩＩ。
好ましい一実施例では、フッ素含有ジヒドロキシケタール系化合物は、以下から選択されるいずれか１つである：
Figure 0007431999000011
 本出願のトランスアミナーゼは、上記フッ素含有ジヒドロキシケタール類に対していずれも触媒活性を有する。
本出願のトランスアミナーゼを用いたフッ素含有ジヒドロキシケタール系化合物に対するアミノ基転移触媒反応の具体的なステップは、従来のアミノ基転移反応と類似している。好ましい実施例では、上記合成方法は、リン酸緩衝液とアミノドナーを混合し、第１混合液を得ることと、第１混合液にフッ素含有ジヒドロキシケタール系化合物を添加し、第２混合液を得ることと、第２混合液にトランスアミナーゼを添加して、反応混合液を得ることと、反応混合液からフッ素含有キラルアミン系化合物を分離して得ることとを含む。
該合成方法は上記段階的な反応（前の材料は順序を変えることができ、トランスアミナーゼの最終的な添加は添加後すぐに反応を行うことを確保する必要があり、他の操作時間が長くて酵素の不活性化を引き起こすことを防止するためである。）によって、反応体積を減少させ、トランスアミナーゼの基質に対する触媒活性と効率を高くし、したがって高い製品収率を得て、生産効率を向上させる。
好ましい一実施例では、第１混合液にフッ素含有ジヒドロキシケタール系化合物を添加する前に、合成方法は、第１混合液のｐＨ値を７．０～９．０に調整し、好ましくは、第２混合液にトランスアミナーゼを添加し、かつトランスアミナーゼを添加した第２混合液のｐＨを７．０～９．０に調整して、反応混合液を得ることをさらに含む。
上記好ましい実施例では、酵素の添加中に酵素が不活性化されるのを防ぐために、酵素を添加する前に酵素反応の最適ｐＨに調整することを目的として、第１混合液にフッ素含有ジヒドロキシケタール系化合物を添加する前に、第１混合液のｐＨ値を調整する。一方、第２混合液へのトランスアミナーゼの添加後もシステムのｐＨ値を調整し、その作用は反応が最適ｐＨで進行することを確保することである。上記２回のｐＨ値調整の範囲は、一致することが好ましく、例えば、前に７．８に調整され、トランスアミナーゼの添加後も同様に７．８に調整される。
上記の、反応後の混合液から目的生成物を分離して得るステップは、公知の分離、精製方法により行えばよい。好ましい一実施例では、反応混合液からフッ素含有キラルアミン系化合物を分離して得ることは、反応混合液の酸性度を調整してトランスアミナーゼを変性させ、好ましくは、反応混合液のｐＨ値を１～２に調整し、変性後のトランスアミナーゼを濾過除去して濾液を得ることと、濾液を抽出して、フッ素含有キラルアミン系化合物を得ることとを含み、好ましくは、ジクロロメタンを用いて濾過を行い、好ましくは、ジクロロメタンを用いて抽出を行う。
酸性度を調整する手段を用いて反応後の酵素タンパク質を変性させることは、他の変性手段（例えば高温、塩基調整又は塩析）と比較して、変性が徹底的であり、生成物の多くが酸性条件下で安定的であり、その後の操作が直接、酸性条件下でシステムの他の不純物を抽出することができるという利点を有する。ジクロロメタンによる抽出は、他の抽出溶媒（例えば酢酸エチル、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル、又は酢酸イソプロピル）による抽出よりも抽出効率が高いという利点がある。
純度と収率をさらに向上させるために、好ましい一実施例では、抽出は２～５回であり、抽出後に、抽出した有機相を乾燥するステップをさらに含み、好ましくは、毎回の抽出で得られた有機相を合わせて抽出物を得て、抽出物を乾燥して、乾燥した有機相生成物を得て、乾燥した有機相生成物を、温度＜３５℃、圧力≦－０．０６Ｍｐａの条件で留分なしまでに濃縮する（乾燥の目的は、製品中の水分含有量を減少させることであり、圧力の大きさは、濃縮速度に影響を与える）。
好ましい一実施例では、トランスアミナーゼとフッ素含有ジヒドロキシケタール系化合物の質量比は０．４：１～１．０：１であり、該質量比で基質に対する変換率は９５％以上に達する。
好ましい一実施例では、フッ素含有ジヒドロキシケタール系化合物の濃度は、６０ｇ／Ｌ～１００ｇ／Ｌである。この濃度範囲で、生物酵素を用いて反応を行い、基質に対する変換率が９９％に達するだけでなく、基質濃度の向上にも寄与し、それによって生産効率を向上させ、有機溶剤と廃ガス、廃液、廃棄物の発生を減少させる。
好ましい一実施例では、アミノドナーは、イソプロピルアミン、イソプロピルアミンの塩酸塩、アラニン、アニリン又はｎ－ブチルアミンから選択される。上記アミノドナーの基質の変換率はいずれも９０％以上に達することができる。
以下、具体的な実施例に関連して本出願の有益な効果をさらに説明する。なお、以下の実施例における室温とは、１０～２５℃の常温範囲内の温度をいい、以下の実施例１～１５で用いたトランスアミナーゼは、配列番号４で示したトランスアミナーゼである。
（実施例１）
室温で２５０ｍＬの四つ口フラスコに５０ｍＬの１００ｍｍｏｌ／Ｌリン酸塩緩衝液（５ｖｏｌ）、３２ｍＬの５ｍｏｌ／Ｌイソプロピルアミン塩酸塩溶液（３．２ｖｏｌ、３ｅｑ）を添加し、ｐＨ＝７．５～８．０に調整する。さらに０．１ｇのピリドキサールリン酸（１ｗｔ％）、１０ｇの
Figure 0007431999000012
 を添加し、均一になるまで撹拌し、続いてトランスアミナーゼ液１０ｍｌ（０．５ｗｔ、０．５ｇ／ｍｌ）を加えて、ｐＨ＝７．５～８．０に調整する。温度を２９℃に上げ、撹拌して一晩反応させる。完全に反応した後、システムの酸性度をｐＨ＝１に調整し、タンパク質を変性させる。濾過後の濾液を５０ｍＬのジクロロメタンで抽出する。水相でｐＨ＝１３に調整してから、ジクロロメタン５０ｍｌで３回抽出する。合わせた有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥させた後、有機相をＴ＜３５℃、Ｐ≦－０．０６Ｍｐａの条件で留分なしまでに濃縮する。目的生成物
Figure 0007431999000013
 を得る。
ＨＰＬＣ検査によると、純度は９８％で、ｅｅ値は１００％で、収率は８７％である。
（実施例２）
室温で２５０ｍＬの四つ口フラスコに５０ｍＬの１００ｍｍｏｌ／Ｌリン酸塩緩衝液（５ｖｏｌ）、２５ｍＬの５ｍｏｌ／Ｌイソプロピルアミン塩酸塩溶液（２．５ｖｏｌ、３ｅｑ）を添加し、ｐＨ＝８．０～８．５に調整する。さらに０．１ｇのピリドキサールリン酸（１ｗｔ％）、１０ｇの
Figure 0007431999000014
 を添加し、均一になるまで撹拌し、続いてトランスアミナーゼ液１０ｍｌ（０．５ｗｔ、０．５ｇ／ｍｌ）を加えて、ｐＨ＝８．０～８．５に調整する。温度を２０℃に調整し、撹拌して一晩反応させる。完全に反応した後、システムの酸性度をｐＨ＝２に調整し、タンパク質を変性させる。濾過後の濾液を５０ｍＬのジクロロメタンで抽出する。水相でｐＨ＝１３に調整してから、酢酸エチル５０ｍｌで３回抽出する。合わせた有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥させた後、有機相をＴ＜４５℃、Ｐ≦－０．０８Ｍｐａの条件で留分なしまでに濃縮する。目的生成物
Figure 0007431999000015
 を得る。
ＨＰＬＣ検査によると、純度は９９％で、ｅｅ値は１００％で、収率は８６％である。
（実施例３）
室温で２５０ｍＬの四つ口フラスコに５０ｍＬの１００ｍｍｏｌ／Ｌリン酸塩緩衝液（５ｖｏｌ）、３１ｍＬの５ｍｏｌ／Ｌイソプロピルアミン塩酸塩溶液（３．１ｖｏｌ、３ｅｑ）を添加し、ｐＨ＝７．０～７．５に調整する。さらに０．１ｇのピリドキサールリン酸（１ｗｔ％）、１０ｇの
Figure 0007431999000016
 を添加し、均一になるまで撹拌し、続いてトランスアミナーゼ液１０ｍｌ（０．５ｗｔ、０．５ｇ／ｍｌ）を加えて、温度を４５～５０℃に上げ、撹拌して一晩反応させる。完全に反応した後、システムの酸性度をｐＨ＝１に調整し、タンパク質を変性させる。濾過後の濾液を５０ｍＬのジクロロメタンで抽出する。水相でｐＨ＝１２に調整してから、ジクロロメタン５０ｍｌで３回抽出する。合わせた有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥させた後、有機相をＴ＜３５℃、Ｐ≦－０．０６Ｍｐａの条件で留分なしまでに濃縮する。目的生成物
Figure 0007431999000017
 を得る。
ＨＰＬＣ検査によると、純度は９７％で、ｅｅ値は１００％で、収率は８３％である。
（実施例４）
室温で２５０ｍＬの四つ口フラスコに５０ｍＬの１００ｍｍｏｌ／Ｌリン酸塩緩衝液（５ｖｏｌ）、２４ｍＬの５ｍｏｌ／Ｌイソプロピルアミン塩酸塩溶液（２．４ｖｏｌ、３ｅｑ）を添加し、ｐＨ＝８．５～９．０に調整する。さらに０．１ｇのピリドキサールリン酸（１ｗｔ％）、１０ｇの
Figure 0007431999000018
 を添加し、均一になるまで撹拌し、続いてトランスアミナーゼ液１０ｍｌ（０．５ｗｔ、０．５ｇ／ｍｌ）を加えて、ｐＨ＝８．５～９．０に調整する。温度を１０℃に調整し、撹拌して一晩反応させる。完全に反応した後、システムの酸性度をｐＨ＝１に調整し、タンパク質を変性させる。濾過後の濾液を５０ｍＬのジクロロメタンで抽出する。水相でｐＨ＝１３に調整してから、ジクロロメタン５０ｍｌで３回抽出する。合わせた有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥させた後、有機相をＴ＜３５℃、Ｐ≦－０．０６Ｍｐａの条件で留分なしまでに濃縮する。目的生成物
Figure 0007431999000019
 を得る。
ＨＰＬＣ検査によると、純度は９８％で、ｅｅ値は１００％で、収率は９０％である。
（実施例５）
室温で２５０ｍＬの四つ口フラスコに５０ｍＬの１００ｍｍｏｌ／Ｌリン酸塩緩衝液（５ｖｏｌ）、２０ｍＬの５ｍｏｌ／Ｌイソプロピルアミン塩酸塩溶液（２ｖｏｌ、３ｅｑ）を添加し、ｐＨ＝７．５～８．０に調整する。さらに０．１ｇのピリドキサールリン酸（１ｗｔ％）、１０ｇの
Figure 0007431999000020
 を添加し、均一になるまで撹拌し、続いてトランスアミナーゼ液１０ｍｌ（０．５ｗｔ、０．５ｇ／ｍｌ）を加えて、ｐＨ＝７．５～８．０に調整する。温度を３２℃に上げ、撹拌して一晩反応させる。完全に反応した後、システムの酸性度をｐＨ＝１に調整し、タンパク質を変性させる。濾過後の濾液を５０ｍＬのジクロロメタンで抽出する。水相でｐＨ＝１３に調整してから、酢酸エチル５０ｍｌで３回抽出する。合わせた有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥させた後、有機相をＴ＜４５℃、Ｐ≦－０．０８Ｍｐａの条件で留分なしまでに濃縮する。目的生成物
Figure 0007431999000021
 を得る。
ＨＰＬＣ検査によると、純度は９８％で、ｅｅ値は１００％で、収率は８７％である。
（実施例６）
室温で２５０ｍＬの四つ口フラスコに５０ｍＬの１００ｍｍｏｌ／Ｌリン酸塩緩衝液（５ｖｏｌ）、２３ｍＬの５ｍｏｌ／Ｌイソプロピルアミン塩酸塩溶液（２．３ｖｏｌ、３ｅｑ）を添加し、ｐＨ＝７．０～７．５に調整する。さらに０．１ｇのピリドキサールリン酸（１ｗｔ％）、１０ｇの
Figure 0007431999000022
 を添加し、均一になるまで撹拌し、続いてトランスアミナーゼ液１０ｍｌ（０．５ｗｔ、０．５ｇ／ｍｌ）を加えて、ｐＨ＝７．０～７．５に調整し、温度を２８℃に上げて、撹拌し、一晩反応させる。完全に反応した後、システムの酸性度をｐＨ＝１に調整し、タンパク質を変性させる。濾過後の濾液を５０ｍＬのジクロロメタンで抽出する。水相でｐＨ＝１２に調整してから、ジクロロメタン５０ｍｌで３回抽出する。合わせた有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥させた後、有機相をＴ＜３５℃、Ｐ≦－０．０６Ｍｐａの条件で留分なしまでに濃縮する。目的生成物
Figure 0007431999000023
 を得る。
ＨＰＬＣ検査によると、純度は９８％で、ｅｅ値は１００％で、収率は８０％である。
（実施例７）
室温で５００ｍＬの四つ口フラスコに２００ｍＬの１００ｍｍｏｌ／Ｌリン酸塩緩衝液（１０ｖｏｌ）、６０ｍＬの５ｍｏｌ／Ｌイソプロピルアミン塩酸塩溶液（３ｖｏｌ、３ｅｑ）を添加し、ｐＨ＝７．５～８．０に調整する。さらに０．２ｇのピリドキサールリン酸（１ｗｔ％）、２０ｇの
Figure 0007431999000024
 を添加し、均一になるまで撹拌し、続いてトランスアミナーゼ液２０ｍｌ（０．５ｗｔ、０．５ｇ／ｍｌ）を加えて、ｐＨ＝７．５～８．０に調整し、温度を３５℃に上げて、撹拌し、一晩反応させる。完全に反応した後、システムの酸性度をｐＨ＝１に調整し、タンパク質を変性させる。濾過後の濾液を１００ｍＬのジクロロメタンで抽出する。水相でｐＨ＝１２に調整してから、ジクロロメタン１００ｍｌで３回抽出する。合わせた有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥させた後、有機相をＴ＜３５℃、Ｐ≦－０．０６Ｍｐａの条件で留分なしまでに濃縮する。目的生成物
Figure 0007431999000025
 を得る。
ＨＰＬＣ検査によると、純度は９４％で、ｅｅ値は１００％で、収率は８２％である。
（実施例８）
室温で２５０ｍＬの四つ口フラスコに８０ｍＬの１００ｍｍｏｌ／Ｌリン酸塩緩衝液（８ｖｏｌ）、２３ｍＬの５ｍｏｌ／Ｌイソプロピルアミン塩酸塩溶液（２．３ｖｏｌ、３ｅｑ）を添加し、ｐＨ＝７．０～７．５に調整する。さらに０．１ｇのピリドキサールリン酸（１ｗｔ％）、１０ｇの
Figure 0007431999000026
 を添加し、均一になるまで撹拌し、続いてトランスアミナーゼ液２０ｍｌ（１．０ｗｔ、０．５ｇ／ｍｌ）を加えて、ｐＨ＝７．０～７．５に調整し、温度を３５℃に上げて、撹拌し、一晩反応させる。完全に反応した後、システムの酸性度をｐＨ＝１に調整し、タンパク質を変性させる。濾過後の濾液を５０ｍＬのジクロロメタンで抽出する。水相でｐＨ＝１２に調整してから、ジクロロメタン５０ｍｌで３回抽出する。合わせた有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥させた後、有機相をＴ＜３５℃、Ｐ≦－０．０６Ｍｐａの条件で留分なしまでに濃縮する。目的生成物
Figure 0007431999000027
 を得る。
ＨＰＬＣ検査によると、純度は９７％で、ｅｅ値は１００％で、収率は８６％である。
（実施例９）
室温で２５０ｍＬの四つ口フラスコに５０ｍＬの１００ｍｍｏｌ／Ｌリン酸塩緩衝液（１０ｖｏｌ）、１６ｍＬの５ｍｏｌ／Ｌイソプロピルアミン塩酸塩溶液（３．２ｖｏｌ、３ｅｑ）を添加し、ｐＨ＝７．５～８．０に調整する。さらに０．０５ｇのピリドキサールリン酸（１ｗｔ％）、５ｇの
Figure 0007431999000028
 を添加し、均一になるまで撹拌し、続いてトランスアミナーゼ液１０ｍｌ（１．０ｗｔ、０．５ｇ／ｍｌ）を加えて、ｐＨ＝７．５～８．０に調整し、温度を２０℃に上げて、撹拌し、一晩反応させる。完全に反応した後、システムの酸性度をｐＨ＝１に調整し、タンパク質を変性させる。濾過後の濾液を３０ｍＬのジクロロメタンで抽出する。水相でｐＨ＝１２に調整してから、ジクロロメタン３０ｍｌで３回抽出する。合わせた有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥させた後、有機相をＴ＜３５℃、Ｐ≦－０．０６Ｍｐａの条件で留分なしまでに濃縮する。目的生成物
Figure 0007431999000029
 を得る。
ＧＣ検査によると、純度は９５％で、ｅｅ値は１００％で、収率は７８％である。
（実施例１０）
室温で２５０ｍＬの四つ口フラスコに５０ｍＬの１００ｍｍｏｌ／Ｌリン酸塩緩衝液（１０ｖｏｌ）、１８ｍＬの５ｍｏｌ／Ｌイソプロピルアミン塩酸塩溶液（３．６ｖｏｌ、３ｅｑ）を添加し、ｐＨ＝７．５～８．０に調整する。さらに０．０５ｇのピリドキサールリン酸（１ｗｔ％）、５ｇの
Figure 0007431999000030
 を添加し、均一になるまで撹拌し、続いてトランスアミナーゼ液１０ｍｌ（１．０ｗｔ、０．５ｇ／ｍｌ）を加えて、ｐＨ＝７．５～８．０に調整し、温度を２５℃に上げて、撹拌し、一晩反応させる。完全に反応した後、システムの酸性度をｐＨ＝１に調整し、タンパク質を変性させる。濾過後の濾液を４０ｍＬのジクロロメタンで抽出する。水相でｐＨ＝１２に調整してから、ジクロロメタン４０ｍｌで３回抽出する。合わせた有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥させた後、有機相をＴ＜３５℃、Ｐ≦－０．０６Ｍｐａの条件で留分なしまでに濃縮する。目的生成物
Figure 0007431999000031
 を得る。
ＧＣ検査によると、純度は９４％で、ｅｅ値は１００％で、収率は７６％である。
（実施例１１）
室温で２５０ｍＬの四つ口フラスコに５０ｍＬの１００ｍｍｏｌ／Ｌリン酸塩緩衝液（１０ｖｏｌ）、１４ｍＬの５ｍｏｌ／Ｌイソプロピルアミン塩酸塩溶液（２．８ｖｏｌ、３ｅｑ）を添加し、ｐＨ＝７．５～８．０に調整する。さらに０．０５ｇのピリドキサールリン酸（１ｗｔ％）、５ｇの
Figure 0007431999000032
 を添加し、均一になるまで撹拌し、続いてトランスアミナーゼ液１０ｍｌ（１．０ｗｔ、０．５ｇ／ｍｌ）を加えて、ｐＨ＝７．５～８．０に調整し、温度を２５℃に上げ、撹拌して一晩反応させる。完全に反応した後、システムの酸性度をｐＨ＝１に調整し、タンパク質を変性させる。濾過後の濾液を４０ｍＬのジクロロメタンで抽出する。水相でｐＨ＝１２に調整してから、ジクロロメタン４０ｍｌで３回抽出する。合わせた有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥させた後、有機相をＴ＜３５℃、Ｐ≦－０．０６Ｍｐａの条件で留分なしまでに濃縮する。目的生成物
Figure 0007431999000033
 を得る。
ＨＰＬＣ検査によると、純度は９２％で、ｅｅ値は１００％で、収率は７９％である。
（実施例１２）
室温で２５０ｍＬの四つ口フラスコに６０ｍＬの１００ｍｍｏｌ／Ｌリン酸塩緩衝液（１２ｖｏｌ）、１３ｍＬの５ｍｏｌ／Ｌイソプロピルアミン塩酸塩溶液（２．６ｖｏｌ、３ｅｑ）を添加し、ｐＨ＝７．５～８．０に調整する。さらに０．０５ｇのピリドキサールリン酸（１ｗｔ％）、５ｇの
Figure 0007431999000034
 を添加し、均一になるまで撹拌し、続いてトランスアミナーゼ液１０ｍｌ（１．０ｗｔ、０．５ｇ／ｍｌ）を加えて、ｐＨ＝７．５～８．０に調整し、温度を３５℃に上げて、撹拌し、一晩反応させる。完全に反応した後、システムの酸性度をｐＨ＝１に調整し、タンパク質を変性させる。濾過後の濾液を４０ｍＬのジクロロメタンで抽出する。水相でｐＨ＝１２に調整してから、ジクロロメタン４０ｍｌで３回抽出する。合わせた有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥させた後、有機相をＴ＜３５℃、Ｐ≦－０．０６Ｍｐａの条件で留分なしまでに濃縮する。目的生成物
Figure 0007431999000035
 を得る。
ＨＰＬＣ検査によると、純度は９５％で、ｅｅ値は１００％で、収率は８４％である。
（実施例１３）
実施例１を例として、反応する酵素量を最適化する具体的操作は以下のとおりである：室温で１０ｍＬバイアル瓶に１ｍＬの１００ｍｍｏｌ／Ｌリン酸塩緩衝液（５ｖｏｌ）、０．６４ｍｌの５ｍｏｌ／Ｌイソプロピルアミン塩酸塩溶液（３．２ｖｏｌ、３ｅｑ）を添加し、ｐＨ＝７．５～８．０に調整する。さらに０．００２ｇのピリドキサールリン酸（１ｗｔ％）、０．２ｇの
Figure 0007431999000036
 を添加し、均一になるまで混合し、それぞれトランスアミナーゼ液０．０４ｍｌ、０．０８ｍｌ、０．１２ｍｌ、０．１６ｍｌ、０．２ｍｌ、０．２４ｍｌ、０．２８ｍｌ、０．３２ｍｌ、０．３６ｍｌ、０．４ｍｌ、０．４４ｍｌ、０．４８ｍｌ、０．５２ｍｌ、０．５６ｍｌ、０．６ｍｌ（酵素液の濃度は０．５ ｇ／ｍｌであり、対応する質量比はそれぞれ０．１ｗｔ、０．２ｗｔ、０．３ｗｔ、０．４ｗｔ、０．５ｗｔ、０．６ｗｔ、０．７ｗｔ、０．８ｗｔ、０．９ｗｔ、１．０ｗｔ、ｌ．ｌｗｔ、１．２ｗｔ、１．３ｗｔ、１．４ｗｔ、１．５ｗｔである、）を添加し、ｐＨ＝７．５～８．０に調整する。シェーカーの回転速度を１７０ｒｐｍにして、温度を２９℃に上げて一晩反応させる。
変換率の結果は図１に示すように、０．５～１．０ｗｔ基質の変換率が９９％を超え、酵素量が引き続き増大しても明らかな効果がないことを証明する。
（実施例１４）
実施例１を例として、基質濃度を最適化する具体的操作は以下のとおりである：室温で１０～５０ｍＬのバイアル瓶（反応体積に応じて適切な振盪瓶を選択する。）にそれぞれ０．３ｍＬ、０．３８ｍＬ、０．５０ｍＬ、０．６２ｍＬ、０．７８ｍＬ、０．９６ｍＬ、１．１６ｍＬ、１．４６ｍｌ、１．８２ｍｌ、２．２８ｍｌ、２．９６ｍｌ、３．９６ｍｌ、５．５６ｍｌ、８．９６ｍｌの１００ｍｍｏｌ／Ｌリン酸塩緩衝液（それぞれ１．５ｖｏｌ、１．９ｖｏｌ、２．５ｖｏｌ、３．１ｖｏｌ、３．９ｖｏｌ、４．８ｖｏｌ、５．８ｖｏｌ、７．３ｖｏｌ、９．１ｖｏｌ、１１．４ｖｏｌ、１４．８ｖｏｌ、１９．８ｖｏｌ、２７．８ｖｏｌ、４４．８ｖｏｌである。）、０．６４ｍｌの５ｍｏｌ／Ｌのイソプロピルアミン塩酸塩溶液（３．２ｖｏｌ，３ｅｑ）を添加し、ｐＨ＝７．５～８．０に調整する。さらに０．００２ｇのピリドキサールリン酸（１ｗｔ％）、０．２ｇの
Figure 0007431999000037
 を添加し、均一になるまで混合し、トランスアミナーゼ酵素液０．２ｍｌ（０．５ｗｔ、酵素液濃度０．５ｇ／ｍｌ）を添加してｐＨ＝７．５～８．０を調整する。シェーカーの回転速度を１７０ｒｐｍにして、温度を２９℃までに上げて一晩反応させる。
変換率の結果を図２に示し、６０～１００ｇ／Ｌの濃度で、基質の変換率は９９％より大きいことを証明する。基質濃度を引き続き低下させると、反応容積が増加し、廃ガス、廃液、廃棄物量が増加する。明らかな効果がない。
（実施例１５）
実施例１を例として、アミノドナーに対する最適化の具体的操作は以下のとおりである：室温で１０～５０ｍＬバイアル瓶（反応体積に応じて適当な振盪瓶を選択する。）にｌｍｌの１００ｍｍｏｌ／Ｌリン酸塩緩衝液（５ｖｏｌ）を添加し、それぞれ３ｅｑのアミノドナーのシステム（アミノドナーは、それぞれイソプロピルアミン、イソプロピルアミン塩酸塩、アラニン、アニリン、ｎ－ブチルアミン）を使用し、ＰＨ＝７．５～８．０に調整する。さらに０．００２ｇのピリドキサールリン酸（１ｗｔ％）、０．２ｇの
Figure 0007431999000038
 を添加し、均一になるまで撹拌し、続いてトランスアミナーゼ液０．２ｍｌ（０．５ｗｔ、酵素液濃度０．５ｇ／ｍｌ）を加えて、ｐＨ＝７．５～８．０に調整する。シェーカーの回転速度を１７０ｒｐｍにして、温度を２９℃に上げて一晩反応させる。
変換率の結果を図３に示し、イソプロピルアミン、イソプロピルアミン塩酸塩、アラニン、ｎ－ブチルアミンをアミノドナーとし、基質の変換率が９９％より大きいことを証明した。アミノドナーとしてのアニリンの変換率は、この反応条件下で９３％であった。
（実施例１６）
実施例１の基質を例として、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｏｏｄｉｉ（ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＫＳ３６０００．１）に由来するトランスアミナーゼ番号ＴＡ１、Ｆｏｎｓｅｃａｅａ ｐｅｄｒｏｓｏｉ ＣＢＳ ２７１．３７（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＸＰ＿０１３２８６２８１．１）に由来するトランスアミナーゼ番号ＴＡ２、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ｓｕｂｓｐ． ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ Ｅｃｌ８（ＧｅｎＢａｎｋ：ＣＣＮ２９５４１．１）に由来するトランスアミナーゼ番号ＴＡ３、Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｏｌａｃｅｕｍ ＤＳＭ３０１９１（ＣＶＴＡ）（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＷＰ＿０１１１３５５７３．１）に由来するトランスアミナーゼ番号ＴＡ４、Ｐａｒａｃｏｃｃｕｓ ｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＷＰ＿０１１７４６９７５．１）に由来するトランスアミナーゼ番号ＴＡ５、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｂｒａｓｉｌｉａｎｕｍ（ＧｅｎＢａｎｋ：ＣＥＪ５５３３４．１）に由来するトランスアミナーゼ番号ＴＡ６、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．ＴＬ３（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＷＰ＿０１４８８５６７７．１）に由来するトランスアミナーゼ番号ＴＡ７、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｔｅｒｒｅｕｓ ＮＩＨ２６２４（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＸＰ＿００１２０９３２５．１）に由来するトランスアミナーゼ番号ＴＡ８、Ｅｘｏｐｈｉａｌａ ｓｐｉｎｉｆｅｒａ（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＸＰ＿０１６２３３８２１．１）に由来するトランスアミナーゼ番号ＴＡ９、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓ（ｓｔｒａｉｎ ＤＳＭ １１３００）（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＷＰ＿０１１５３０５４５．１）に由来するトランスアミナーゼ番号ＴＡ１０、Ｇｅｏｍｙｃｅｓ ｄｅｓｔｒｕｃｔａｎｓ ２０６３１－２１（ＧｄＴＡ）ｉｎ Ｅ．ｃｏｌｉ（ＧｅｎＢａｎｋ：ＥＬＲ０５５７３．１）に由来するトランスアミナーゼ番号ＴＡ １１、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ ＫＴ２４４０（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＷＰ＿０１０９５４５５４．１）に由来するトランスアミナーゼ番号ＴＡ１２、Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｈａｅｒｉｃｕｓ（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＷＰ＿０２４３６３７４１．１）に由来するトランスアミナーゼ番号ＴＡ１３、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ ＤＳＭ ３１９（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＷＰ＿０１３０８２２１９．１）に由来するトランスアミナーゼ番号ＴＡ１４、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｈａｒｚｉａｎｕｍ（ＧｅｎＢａｎｋ：ＫＫＰ０７０３０．１）に由来するトランスアミナーゼ番号ＴＡ１５、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｕｓ Ｒ－ＡＴＡｓ（ＡｓｐＦｕｍ）（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＸＰ＿７４８８２１．１）に由来するトランスアミナーゼ番号ＴＡ１６、Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｅｒｍｏｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ ｓｕｂｓｐ． ｔｈｅｒｍｏｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ ＤＳＭ ４６５（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＷＰ＿００８８７９４３６．１）に由来するトランスアミナーゼ番号ＴＡ１７、Ｃｌａｄｏｐｈｉａｌｏｐｈｏｒａ ｂａｎｔｉａｎａ ＣＢＳ １７３．５２（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＸＰ＿０１６６１７９４８．１）に由来するトランスアミナーゼ番号ＴＡ１８、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＷＰ＿０１６７６３０２６．１）に由来するトランスアミナーゼ番号ＴＡ１９、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｔｈａｉｌａｎｄｅｎｓｉｓ ＭＳＭＢ１２１（ＢｔＳ－ＴＡ）（ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＧＫ４９３９９．１）に由来するトランスアミナーゼ番号ＴＡ２０、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ｓｕｂｓｐ． ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ＭＧＨ ７８５７８（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ： ＷＰ＿００２９２０２２６．１）に由来するトランスアミナーゼ番号ＴＡ２１、Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｏｅｂｉｉ（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＷＰ＿０６２７５３８９４．１）に由来するトランスアミナーゼ番号ＴＡ２２、Ｔａｌａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｌｌｕｌｏｌｙｔｉｃｕｓ（ＧｅｎＢａｎｋ：ＧＡＭ３７５３３．１）に由来するトランスアミナーゼ番号ＴＡ２３、Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｏｌａｃｅｕｍ ＤＳＭ３０１９１（ＣＶＴＡ）（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＷＰ＿０１１１３５５７３．１）に由来するトランスアミナーゼで進化して得られた突然変異体ＴＡ４－Ｖ１（対応配列配列番号１）、ＴＡ４－Ｖ２（対応配列配列番号２）、ＴＡ４－Ｖ３（対応配列配列番号３）、ＴＡ４－Ｖ４（対応配列配列番号４）に対して、１０ｍｇレベルのスクリーニング反応を実行し、操作は以下のとおりである：
１００ｍｍｏｌ／Ｌのリン酸塩緩衝液、５ｍｏｌ／Ｌイソプロピルアミン塩酸塩溶液を体積比５：２になるように５０ｍｌ溶液を配合し、さらに０．００５ｇのピリドキサールリン酸を加え、撹拌して均一に混合する。上記の溶液０．３ｍｌを取って、それぞれ９６ウェルプレートに追加し、１０ｍｇ
Figure 0007431999000039
 を添加し、続いて上記の酵素液０．２ｍｌ（１０ｗｔ、酵素液濃度０．５ｇ／ｍｌ）をそれぞれ添加し、シェーカーの回転速度を１７０ｒｐｍにし、３０℃の条件で一晩反応させる。
スクリーニング結果は図４に示すとおりである：すべての由来の酵素が該基質に対していずれも触媒活性があることを証明し、Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｏｌａｃｅｕｍ ＤＳＭ３０１９１（ＣＶＴＡ）由来のトランスアミナーゼは一番優れており、また、Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｏｌａｃｅｕｍ ＤＳＭ３０１９１（ＣＶＴＡ）由来のトランスアミナーゼで突然変異して得られた、より良い変換率を有する４つの変異体は、変換率がいずれも９９％を超えた。
以上の説明から明らかなように、本発明の上述した実施例は、以下のような技術的効果を奏する。
１．現在、変換酵素が類似化合物を変換する特許はまだ発見されていない。
２．トランスアミナーゼを用いてこの生物変換反応を行うと、一段階の反応で直接所望の目的化合物を得ることができ、基質の種類が広く適用される。
３．トランスアミナーゼを用いてこの生物変換反応を行うのは、選択性が高く、製品ｅｅ値を大幅に向上させる。
４．自己抽出したトランスアミナーゼを使用し、基質濃度は１００ｇ／Ｌに達することができ、生産効率を大幅に向上させ、有機溶剤と廃ガス、廃液、廃棄物の発生を減少させる。
５．該トランスアミナーゼは、触媒効率が高く、反応体積が少なく、合成経路が短く、製品収率が高く、生産コストを大幅に低下させる。
以上説明したのは、本発明の好ましい実施例に過ぎず、本発明を限定するためのものではなく、当業者にとって種々の変更及び変更が可能である。本発明の精神及び原理の範囲内で行われたいかなる修正、均等物の置換、改良なども本発明の範囲内に含まれるべきである。

Claims (13)

  1. フッ素含有キラルアミン系化合物の合成方法であって、前記合成方法は、
    アミノドナーとフッ素含有ジヒドロキシケタール系化合物がトランスアミナーゼの触媒下で反応して前記フッ素含有キラルアミン系化合物を生成することを含み、
    前記トランスアミナーゼは、ＣｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｖｉｏｌａｃｅｕｍＤＳＭ３０１９１（ＣＶＴＡ）の突然変異体に由来し、前記突然変異体は、配列番号１、配列番号２、配列番号３又は配列番号４に示すアミノ酸配列を有し、
    前記フッ素含有ジヒドロキシケタール系化合物は、以下の：
    Figure 0007431999000040
     から選択されるいずれか１つである、フッ素含有キラルアミン系化合物の合成方法。
  2. リン酸緩衝液と前記アミノドナーを混合し、第１混合液を得て、
    前記第１混合液に前記フッ素含有ジヒドロキシケタール系化合物を添加し、第２混合液を得ることと、
    前記第２混合液に前記トランスアミナーゼを添加して、反応混合液を得ることと、
    前記反応混合液から前記フッ素含有キラルアミン系化合物を分離して得ることとを含む、請求項１に記載の合成方法。
  3. 前記第１混合液に前記フッ素含有ジヒドロキシケタール系化合物を添加する前に、前記合成方法は、前記第１混合液のｐＨ値を７．０～９．０に調整することをさらに含む、請求項２に記載の合成方法。
  4. 前記第２混合液に前記トランスアミナーゼを添加し、かつ前記トランスアミナーゼを添加した前記第２混合液のｐＨを７．０～９．０に調整して、前記反応混合液を得ることをさらに含む、請求項３に記載の合成方法。
  5. 前記反応混合液から前記フッ素含有キラルアミン系化合物を分離して得ることは、
    前記反応混合液の酸性度を調整して前記トランスアミナーゼを変性させることと、
    変性後の前記トランスアミナーゼを濾過除去して濾液を得ることと、
    前記濾液を抽出して、前記フッ素含有キラルアミン系化合物を得ることとを含む、請求項２に記載の合成方法。
  6. 前記反応混合液のｐＨ値を１～２に調整する、請求項５に記載の合成方法。
  7. ジクロロメタンを用いて前記濾過を行う、請求項５に記載の合成方法。
  8. ジクロロメタンを用いて前記抽出を行う、請求項５に記載の合成方法。
  9. 前記抽出は２～５回であり、前記抽出の後に、抽出した有機相を乾燥するステップをさらに含む、請求項５に記載の合成方法。
  10. 毎回の抽出で得られた有機相を合わせて抽出物を得て、
    前記抽出物を乾燥して、乾燥した有機相生成物を得て、
    前記乾燥した有機相生成物を、温度＜３５℃、圧力≦－０．０６Ｍｐａの条件で留分なしまでに濃縮して、前記フッ素含有キラルアミン系化合物を得る、請求項５に記載の合成方法。
  11. 前記トランスアミナーゼと前記フッ素含有ジヒドロキシケタール系化合物の質量比は０．４：１～１．０：１である、請求項１～１０のいずれか一項に記載の合成方法。
  12. 前記フッ素含有ジヒドロキシケタール系化合物の濃度は６０ｇ／Ｌ～１００ｇ／Ｌである、請求項１～１０のいずれか一項に記載の合成方法。
  13. 前記アミノドナーは、イソプロピルアミン、イソプロピルアミンの塩酸塩、アラニン、アニリン又はｎ－ブチルアミンから選択される、請求項１～１０のいずれか一項に記載の合成方法。
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