JP7403861B2 - グリセリルトリス（β－ヒドロキシ酪酸）及びニューロン一過性虚血性発作 - Google Patents

Description

関連出願の相互参照
該当せず。

連邦政府による資金提供を受けた研究又は開発に関する声明
該当せず

本発明は、医療食品、栄養補助食品、及び医薬品の分野に関する。本発明はまた、グリセリルトリスブチリンとしても知られているが、以降ＧＴβＨＢと呼ばれるグリセリルトリス（β－ヒドロキシ酪酸）の使用に関する。本発明はまた、ニューロン一過性虚血性発作（以下、ＮＴＩＡ）の続発症への対処を援助するモダリティ、ＮＴＩＡの続発症に予防的に対処するための栄養補助食品、医療食品及び医薬品、又はＮＴＩＡの食事管理における前述のいずれかのものに関する。本発明はさらに、ＮＴＩＡに関連する神経障害（neurological deficit）の低減もしくは排除、及び／又はＮＴＩＡに起因する細胞死の低減もしくは排除、特にさらなるＮＴＩＡに先立つＧＴβＨＢの予防的な経腸投与を援助するためのモダリティに関する。本発明は、以前にＮＴＩＡを有していた者の症候を有していたことが知られているか又は有している対象集団における上記のすべてに関し、そのような対象の後に発生したＮＴＩＡの影響を相殺又は回避又は最小化又は低減することに関する。

背景技術
脳内のＮＴＩＡは、とりわけ高齢集団において、最もとりわけ神経学的機能に影響を及ぼす他の状態を有する集団において、重大な健康問題である。罹患者は、多くの場合、ＮＴＩＡが発生したことさえも認識せず、その事実は、その者の１つ以上の神経障害症状を観察する他人によって認識されるだけである。さらに、最初のＮＴＩＡを有すると、その者は、特にその後数ヶ月以内、より具体的には１ヶ月又は２ヶ月以内に別のＮＴＩＡを有する可能性が高く、そのような後に発生したＮＴＩＡは、先のＮＴＩＡ後に次ぐ２～３日以内に高い割合で発生することが観察された。反復ＮＴＩＡは、より重い脳卒中のマーカーであることも知られている。ＮＴＩＡは、ＮＴＩＡが一般に持続時間が約１時間未満であると定義されること、及び典型的には虚血を引き起こす閉塞の自発的溶解によって、又は血流を制限している動脈の弛緩によって（制限は典型的には、何らかの他の特発性プロセスによって引き起こされ得る、又は対象が曝露されるか、もしくは対象が摂取している何らかの医薬品／栄養補助食品及び／もしくは食品又は心理的ストレスによって生じる何らかの環境因子によってもたらされ得る動脈攣縮及び／もしくは狭窄による）、又はそれらの組み合わせによってその後患部が再灌流されるという点で、より重い虚血性脳卒中に関連する。したがって、以前にＮＴＩＡを有したことがある者の症候を有したことが知られている対象、又はその症候を示す対象において、後に発生したＮＴＩＡの緩和又は予防を援助することができる栄養／食事サプリメントでの医療食品、又は治療レジメンが必要とされている。

脳卒中と同様に、ＮＴＩＡは、虚血事象によって直接影響を受ける「コア」領域、及び二次的に影響を受けるペナンブラ領域を有する。各領域における影響の重症度は、部分的には、虚血事象がどのくらい長く続くか、患部に対する十分な二次灌流があるかどうか、及び問題の特定の細胞が複数の虚血事象にさらされたかどうか、及びどれくらい時間が経っているかによって決まる。著しく時間が空いた独立した別々のＮＴＩＡは、特に罹患細胞が治癒することができた場合、累積的な影響をもたらさない可能性があるが、比較的短期間（数日～数ヶ月）の複数のＮＴＩＡは、累積的な影響をもたらす場合が多い。したがって、脳細胞における神経障害及び他の虚血影響の蓄積の防止に役立つ方法が必要とされている。

発明の目的
本発明のいくつかの実施形態の目的は、先に生じたＮＴＩＡを有していた者の症候を有したことが知られている対象、又はその症候を示している対象における反復ニューロン一過性虚血性発作（ＮＴＩＡ）の神経障害影響を、別のＮＴＩＡ事象が起こることを見越して、グリセリルトリス（β－ヒドロキシ酪酸）（以下、「ＧＴβＨＢ」）を経腸投与することよって低減又は予防する方法を提供することである。

本発明のいくつかの実施形態の別の目的は、先に生じたＮＴＩＡを有していた者の症候を有したことが知られている対象、又はその症候を示している対象における反復ＮＴＩＡによる虚血事象ニューロン細胞死を、別のＮＴＩＡ事象が起こることを見越して、ＧＴβＨＢを前記対象へ経腸投与することによって低減又は予防する方法を提供することである。

本発明のいくつかの実施形態のさらなる目的は、先に生じたＮＴＩＡを有していた者の症候を有したことが知られている対象、又はその症候を示している対象における後に発生したＮＴＩＡのコア虚血領域の虚血性ニューロン細胞死を、別のＮＴＩＡ事象が起こることを見越して、ＧＴβＨＢを経腸投与することによって予防又は低減する方法を提供することである。

本発明の実施形態のさらなる目的は、本明細書の利益を得た後に当業者に明らかになるであろう。

発明の簡単な概要
簡単に記載するに、本発明の前述の目的及び他の目的は、以前にニューロンＮＴＩＡを有していたことが知られている対象、又は以前にＮＴＩＡを有していたことがある者の症候を示す対象（したがって、以前にＮＴＩＡを有していたことが疑われる）のいずれかの集団に、後に発生したＮＴＩＡのニューロン虚血の影響を軽減又は排除又は防止するためにＧＴβＨＢを投与することによって達成され得る。後に発生したＮＴＩＡは一般に、先に生じた（previous、prior）ＮＴＩＡ後数日～数週間～２、３ヶ月～１年程度以内に発生するので、ＧＴβＨＢの経口投与は一般に、先に生じたＮＴＩＡ事象後１２ヶ月まで継続される（総ＧＴβＨＢ投与期間）。ＧＴβＨＢの典型的な経口投与は、２４時間以内に体によって除去されるので、ＧＴβＨＢの経口投与は、一般に、１日量を小分け量（投与単位サイズ）に分割する投与単位サイズ単位で毎日行われ、２４時間の期間中に複数回（投与単位サイズ×投与回数が１日量に等しくなるように）、一般に２～４回、好ましくは２～３回の投与単位（servings）で投与される。上記にもかかわらず、所望されればより多い回数で、より小さい投与単位サイズを使用することができるが、より高い頻度のスケジュールでの使用は不便であるので、２４時間当たり４回を超える投与は一般に使用されない。総ＧＴβＨＢ投与期間中に別のＮＴＩＡ事象が発生した場合、投与期間の時計は、後に発生したＮＴＩＡの認識と同時に始動するようにリセットされる。毎日経口服用されるＧＴβＨＢの量は、β－ヒドロキシ酪酸部分及び血漿アセト酢酸部分を合わせた血漿中濃度を約２ｍＭ～７ｍＭにする量であるべきである。ＧＴβＨＢによって送達されるβ－ヒドロキシ酪酸部分及びアセト酢酸部分のレベルをこれらの範囲に維持することによって、β－ヒドロキシ酪酸部分及びアセト酢酸部分を合わせた血漿レベルがそのように維持されながら発生する後に発生したＮＴＩＡに通常関連するニューロン欠損、細胞死などが、低減、排除又は防止される。

図面の簡単な説明
対象なし。

発明の詳細な説明
本発明は、前年以内に先に生じたＮＴＩＡを有していたことが知られている、又は有していたことが疑われる（以前にＮＴＩＡを有したことがある者の症候を示すことによって）対象、より具体的には、過去３ヶ月以内、過去２ヶ月以内、過去１ヶ月以内、過去３週間以内、過去２週間以内、過去１週間以内に先に生じたＮＴＩＡを有していたか又は有していたと疑われる対象、最も具体的には、過去２～３日以内に先に生じたＮＴＩＡを有していたか又は有していたと疑われる対象に関する。そのような先に生じたＮＴＩＡが発生したこと又は発生した可能性があることが認識されたら、ＧＴβＨＢは、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間１３日間、１４日間、１５日間、１６日間、１７日間１８日間、１９日間、２０日間、２１日間、２２日間、２３日間、２４日間、２５日間、２６日間、２７日間、２８日間、２９日間、３０日間、３１日間、３５日間、４２日間、４９日間、５６日間、５８日間、５９日間、６０日間、６１日間、６２日間、６３日間、７０日間、７７日間、８４日間、９０日間、９１日間、９２日間、９８日間、１０５日間、１１２日間、１１９日間、１２０日間、１２６日間、１３３日間、１４０日間、５ヶ月間、６ヶ月間、７ヶ月間、８ヶ月間、９ヶ月間、及び１年間から、最大期間が最小期間よりも長いことを条件に選択される最小期間及び最大期間を有する範囲から選択される期間、毎日、好ましくは連続して経口投与される（だが断続的な中断を含む、実質的な連続的投与も可能である）。中断期間中に対象がさらなるＮＴＩＡに罹患しない場合、毎日の投与の継続の中断は受け入れられ、依然として本発明の範囲内であり得る。中断期間中にさらなるＮＴＩＡが生じた後のＧＴβＨＢの迅速な再投与は、やはり有益であり得るが、投与の継続性が欠けると、結果として、そのような中断期間にＮＴＩＡが生じた時にβ－ヒドロキシ酪酸部分及びアセト酢酸部分の組み合わせが存在せず、したがって、そのような中断期間のＮＴＩＡに関して本発明の主要な利点は失われる。それにもかかわらず、そのような中断期間のＮＴＩＡが発生すると、ＧＴβＨＢの投与のための時計が新たに始まる。さらに、最初のＮＴＩＡが発生した直後にＧＴβＨＢレジメンを開始することが最も有益であるが、ＧＴβＨＢ投与開始の遅延の可能性もあり、上記の「中断期間」であるかのように扱われる。したがって、ＮＴＩＡが０日目に発生し、ＧＴβＨＢ投与を３日目まで開始しないが、後に発生したＮＴＩＡが１～３日目に発生していない場合、投与期間は、翌日を４日目としてカウントを続ける。しかしながら、ＮＴＩＡが２日目にも発生した場合（第２のＮＴＩＡ）、そのような２日目のＮＴＩＡについて本発明の利益は失われているが、日数カウントは、２日目のＮＴＩＡを０日目として始まるようにリセットされ、ここでの目的は、さらなるＮＴＩＡ（又は第３のＮＴＩＡ）の食事管理である。

理論に束縛されるものではないが、本発明の前提は、ＧＴβＨＢの投与が、グルコースの不足時に利用することができる非常にエネルギー源が豊富な環境をもたらす、β－ヒドロキシ酪酸部分及びアセト酢酸部分の組み合わせにおいてニューロン細胞の灌流をもたらすことである。健康なニューロン細胞では、グルコース及びケトン体の両方が存在する場合、グルコースが優先的にエネルギーに使用される。ＮＴＩＡが発生すると、灌流が低下し、その結果、ニューロン細胞は、既に存在する濃度のエネルギー源のみを有する。ニューロン細胞は、最初に利用可能なグルコースを（好ましいエネルギー源として）使い果たし、短時間後に、そのグルコースは実質的に使い果たされる。罹患細胞が代替エネルギーケトン体を存在させる場合、細胞は、それらのケトン体が同様に枯渇するまで生存し続けることができる。ケトン体が存在する場合、それらの存在は、ケトン体が存在しない場合よりも長い期間にわたって生存する機会を細胞に与える。ＮＴＩＡは本質的に一時的なものにすぎないので、罹患細胞に与えられた追加の生存期間は、再灌流が起こり、罹患細胞が回復するために十分長く、細胞死を回避するのに十分であり得る。ＧＴβＨＢからのβ－ヒドロキシ酪酸及びアセト酢酸の半減期は比較的短いので（単回経腸投与後約２４時間以内に投与前レベルに戻る）、ＧＴＢＨＢの投与は、１日２～４回、好ましくは１日３～４回、最も好ましくは１日３回、１日分量（投与単位）で行われる。

ＧＴβＨＢは、グリセリンのトリエステルであり、グリセリンの各ヒドロキシ基は、β－ヒドロキシ酪酸部分によってエステル化されている。各分子中の各β－ヒドロキシ酪酸部分基は、独立してＤ又はＬ体のいずれかであり、投与されるバルク化合物は、それらのいずれかの、又はすべての混合物（すなわち、（ａ）Ｄ体のすべての基を有する、（ｂ）Ｌ体のすべての基を有する、（ｃ）Ｄ体の一部及びＬ体の一部を有する化合物の混合物、（ｄ）ならびに（１）ａ及びｂ、（２）ａ及びｃ、ならびに（３）ａ、ｂ、及びｃから選択される化合物の混合物）であり得る。３－ヒドロキシブチロイル基のＤ体及びＬ体の両方が活性であるが、Ｌ体はよりゆっくりと利用されるため、３－ヒドロキシブチロイル基は、実質的にすべて又はすべてがＤ体であることが好ましい。特に好ましい実施形態では、３－ヒドロキシブチロイル基の約９０％～９８％、より好ましくは約９６％がＤ体である。それにもかかわらず、Ｌ体に対してＤ体を他の量で利用することは本発明の範囲内であり、１００％ Ｄ～１００％ Ｌ、及び任意の割合のＤ体とＬ体との任意の混合物から選択することができる。非常に好ましい実施形態は、本発明に利用される化合物グリセリルトリス（３－ヒドロキシ酪酸）の体がグリセリルトリス（ＤＬ ３－ヒドロキシ酪酸）であるものであり、ＤＬはバルク化合物を指し、必ずしも特定の分子中の混合物ではない。これらの化合物及びその製造方法は、化合物及びその製造の説明に関係して本明細書に組み込まれる米国特許第７，８０７，７１８号により完全に記載されている。その関連部分は、本明細書中、本例の直前、段落００１９～００２５に再掲されている。

ＧＴβＨＢは、一般に、典型的には０．５ｇ／ｋｇ／日～２．６ｇ／ｋｇ体重／日の範囲の量（より具体的には、０．５ｇ／ｋｇ、０．５５ｇ／ｋｇ、０．６ｇ／ｋｇ、０．６５ｇ／ｋｇ、０．７ｇ／ｋｇ、０．７５ｇ／ｋｇ、０．８ｇ／ｋｇ、０．８５ｇ／ｋｇ、０．９ｇ／ｋｇ、０．９５ｇ／ｋｇ、１ｇ／ｋｇ、１．１ｇ／ｋｇ、１．２ｇ／ｋｇ、１．３ｇ／ｋｇ、１．４ｇ／ｋｇ、１．５ｇ／ｋｇ、１．６ｇ／ｋｇ、１．７ｇ／ｋｇ、１．８ｇ／ｋｇ、１．９ｇ／ｋｇ、２．０ｇ／ｋｇ、２．１ｇ／ｋｇ、２．３ｇ／ｋｇ、２．４ｇ／ｋｇ、２．５ｇ／ｋｇ、又は２．６ｇ／ｋｇ、及びこれらの具体的に記載された量のいずれかの中間量）を２～３回に分けて、経口／経腸投与される。６０ｋｇの女性の場合、約１０～５２ｇ／投与単位（より具体的には、１０ｇ／投与単位、１２．５ｇ／投与単位、１５ｇ／投与単位、１７．５ｇ／投与単位、２０ｇ／投与単位、２２．５ｇ／投与単位、２５ｇ／投与単位、３０ｇ／投与単位、３５ｇ／投与単位、４０ｇ／投与単位４５ｇ／投与単位、５０ｇ／投与単位、又は５２ｇ／投与単位、及びこれらの具体的に記載された量のいずれかの中間の量）、１日３回（約８時間ごと）～約１５－７２ｇ／投与単位（より具体的には１５ｇ／投与単位、１７．５ｇ／投与単位、２０ｇ／投与単位、２２．５ｇ／投与単位、２５ｇ／投与単位、２７．５ｇ／投与単位、３０ｇ／投与単位、３５ｇ／投与単位、４０ｇ／投与単位、４５ｇ／投与単位、５０ｇ／投与単位、５５ｇ／投与単位、６０ｇ／投与単位、６５ｇ／投与単位、７０ｇ／投与単位、７５ｇ／投与単位又は７８ｇ／投与単位、及びこれらの具体的に記載された量のいずれかの中間の量）、１日２回（約１２時間ごと）である。７０ｋｇの男性の場合、約１２～６０．７ｇ／投与単位（より具体的には、１２ｇ／投与単位、１５ｇ／投与単位、１７．５ｇ／投与単位、２０ｇ／投与単位、２２．５ｇ／投与単位、２５ｇ／投与単位、３０ｇ／投与単位、３５ｇ／投与単位、４０ｇ／投与単位、４５ｇ／投与単位、５０ｇ／投与単位、５５ｇ／投与単位、６０ｇ／投与単位、５５ｇ／投与単位、６０ｇ／投与単位、又は６０．７ｇ／投与単位、及びこれらの具体的に記載された量のいずれかの中間量）、１日３回（約８時間ごと）～約１７．５～９１ｇ／投与単位（より具体的には１７．５ｇ／投与単位、２０ｇ／投与単位、２２．５ｇ／投与単位、２５ｇ／投与単位、２７．５ｇ／投与単位、３０ｇ／投与単位、３５ｇ／投与単位、４０ｇ／投与単位、４５ｇ／投与単位、５０ｇ／投与単位、５５ｇ／投与単位、６０ｇ／投与単位、６５ｇ／投与単位、７０ｇ／投与単位、７５ｇ／投与単位、８０ｇ／投与単位、８５ｇ／投与単位、９０ｇ／投与単位、又は９１ｇ／投与単位、及びこれらの具体的に記載された量のいずれかの中間量）、１日２回（約１２時間ごと）である。これらの用量及び投与単位サイズは、これらの化合物が投与される平均的な典型的な対象の総ケトン体（β－ヒドロキシ酪酸及びアセト酢酸の組み合わせ）血漿レベルを、２～１０ｍＭ（より具体的には、２ｍＭ、２．２５ｍＭ、２．５ｍＭ、２．７５ｍＭ、３ｍＭ、３．２５ｍＭ、３．５ｍＭ、４ｍＭ、４．２５ｍＭ、４．５ｍＭ、４．６ｍＭ、４．７ｍＭ、４．８ｍＭ、４．９ｍＭ、５．０ｍＭ、５．１ｍＭ、５．２ｍＭ、５．３ｍＭ、５．４ｍＭ、５．５ｍＭ、５．６ｍＭ、５．７ｍＭ、５．８ｍＭ、５．９ｍＭ、６．０ｍＭ、６．１ｍＭ、６．２ｍＭ、６．３ｍＭ、６．４ｍＭ、６．５ｍＭ、６．６ｍＭ、６．７ｍＭ、６．８ｍＭ、６．９ｍＭ、７．０ｍＭ、及びこれらの具体的に列挙されたレベルの中間レベル、それらのいずれも、範囲の上端がその範囲の下端よりも大きい場合、範囲の下端又は範囲の上端として機能し得る）にすることを意図している。（アセト酢酸は、β－ヒドロキシ基がβ－オキソ基で置換されているβ－ヒドロキシ酪酸の酸化形態である。

本発明で使用されるＧＴβＨＢを経口摂取すると、エステルが膵臓リパーゼによって腸管で一次加水分解され、吸収されるβ－ヒドロキシ酪酸部分を放出し、体は、β－ヒドロキシ酪酸をアセト酢酸（次に、細胞によって実際に使用される）に変換することによって利用する。当業者は、上記の投与単位サイズが正しい範囲の血中レベルをもたらさないような、非典型的な分布及び／又は代謝を呈する対象において、これらの投与単位サイズ量を調整する方法を知っているであろう。（投与されるそのような修正量は、それらによってβ－ヒドロキシ酪酸塩及びアセト酢酸塩を組み合わせた血漿レベルが２ｍＭ～７ｍＭの範囲に上昇する場合、それらは本明細書の他の箇所に記載される「投与単位サイズ」範囲外又は投与される化合物のバルクｇの範囲外であるにもかかわらず、本発明の範囲内であると見なされる。）

ＧＴβＨＢは、任意の経腸投与可能な適切な製剤で投与することができるが、経腸投与可能な適切な担体中の溶液又は懸濁液が好ましい。含まれる投与単位サイズが比較的大きいため、従来のカプセル又は錠剤は一般に実用的ではないが、それらの送達形態の使用を所望する場合、それらを使用しない理由はない。

本明細書では、特定のパラメータの値の範囲が与えられ、そのような範囲内の値のより具体的な列挙が与えられた場合には、下限が実際に上限未満である限り、それぞれの特定の値が新たな範囲限度の基礎となり得る。例として、前の段落では、投与量範囲は、「０．５ｇ／ｋｇ～２．６ｇ／ｋｇ」として、より具体的な列挙「０．５ｇ／ｋｇ、０．５５ｇ／ｋｇ、０．６ｇ／ｋｇ、０．６５ｇ／ｋｇ、０．７ｇ／ｋｇ、０．７５ｇ／ｋｇ、０．８ｇ／ｋｇ、０．８５ｇ／ｋｇ、０．９ｇ／ｋｇ、０．９５ｇ／ｋｇ、１ｇ／ｋｇ、１．１ｇ／ｋｇ、１．２ｇ／ｋｇ、１．３ｇ／ｋｇ、１．４ｇ／ｋｇ、１．５ｇ／ｋｇ、１．６ｇ／ｋｇ、１．７ｇ／ｋｇ、１．８ｇ／ｋｇ、１．９ｇ／ｋｇ、２．０ｇ／ｋｇ、２．１ｇ／ｋｇ、２．２ｇ／ｋｇ、２．３ｇ／ｋｇ、２．３ｇ／ｋｇ、２．４ｇ／ｋｇ、２．５ｇ／ｋｇ、又は２．６ｇ／ｋｇ」と共に与えられる。それに基づいて、より具体的に列挙された量のいずれかが、新たな範囲の下限であり得、より大きな具体的に列挙された量のいずれかが、その新たな範囲の上限であり得、そのような構築された範囲の各々が、本明細書に具体的に列挙されていると見なされるものとする。したがって、限定ではなく例として、０．５～０．６；０．５５～１．９、０．７５～１．７、１．８～１．９などの範囲は、すべて本明細書に列挙されていると見なされる。体重、投与単位サイズなどに基づく投与量に関する他のパラメータにも同様に適用可能である。

「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語へのすべての言及において、「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」及び「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」という用語が等しく開示されることが意図される。本明細書における任意の特許又は特許出願へのすべての言及は、そのような特許及びそのような特許出願を、それらが本明細書における特定の記述を補足はするが矛盾しない程度に限り、その全体が参照により組み込まれるものとして含むと解釈されるものとする。本明細書のいずれかの部分と矛盾する、本明細書における参照による任意の組み込みにおける記述は、その矛盾する記述の参照による組み込みとして無効であると見なされるものとする。「約」という用語のあらゆる使用は、以下の非限定例、（ａ）「約０．５４」は、少なくとも０．５３５～０．５４５未満の範囲を包含すると見なされるものとする、及び（ｂ）「約２４」は、少なくとも２３．５～２４．５未満の範囲を意味すると解釈されるものとする、のように、最後の桁の直後に数が続くことを意味すると解釈されるものとする。「約」が先行するいずれの数についても、「約０．５４」が「０．５４」ならびに前文の範囲の特定の開示であると見なされるように、絶対数が開示されていると見なされるものとする。

化合物及びそれらの製造のいくつかのプロセスの説明は、実質的に、例示的であるが限定する開示ではない、米国特許第７，８０７，７１８号に記載されているとおりであり、以下の６つの段落に記載されている。

本明細書に記載の技術のエステルは、栄養補助食品及び／又は栄養組成物の形態で提供することができる。本技術のそのような栄養補助食品又は栄養組成物が従来の手段を利用して製剤化され得ることは、当業者によって理解されるべきである。栄養補助食品又は栄養組成物は、ヒトの体又は動物への投与に適した任意の形態にすることができる。例えば、本技術のグリセリドエステルの経口投与は、限定されないが、カプセル、丸剤、液剤、錠剤、棒状食用品、飲料、ゲル、薄膜、ガムなどの形態であり得るが、溶液又は懸濁液などの液剤が好ましい。

本技術のグリセリドエステルは、任意の利用可能な技術によって生成することができる。例えば、１つの非限定的な方法では、（ａ）グリセロール及び／又はグリセリルエステルと（ｂ）β－ヒドロキシ酪酸とのエステル化、エステル転移反応、又はエステル交換によって生成することができる。エステル化、エステル転移反応、又はエステル交換は、化学触媒又は酵素触媒のいずれかを用いて行うことができる。

上記エステル化反応（エステル化／エステル転移反応／エステル交換）における好適な化学触媒としては、例えば、限定されないが、アルカリ、アルカリ土類及び遷移金属の水酸化物、カルボナート、重炭酸塩及びアルコキシド塩が挙げられる。アルカリ又はアルカリ土類金属の例には、ナトリウム、リチウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、バリウム、鉄、亜鉛及び銅が含まれるが、これらに限定されない。化学触媒が使用される場合、反応は、好ましくは約９０℃～約２００℃、あるいは約１２０℃～約１９０℃、あるいは約１４０℃～約１８０℃の温度で行われる。

上記エステル化反応（エステル化／エステル転移反応／エステル交換）における好適な例示的な酵素触媒としては、例えば、限定されないが、カンジダ・アンタークティカ（Ｃａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａ）、カンジダ・ルゴーサ（Ｃａｎｄｉｄａ ｒｕｇｏｓａ）、アスペルギルス・オリゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）、リゾムコール・ミエヘイ（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ ｍｉｅｈｅｉ）、サーモミセス・ラヌギノーサ（Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ）、シュードモナス・セパシア（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｃｅｐａｃｉａ）、シュードモナス・フルオレッセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）、リゾプス・デレマー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｄｅｌｅｍａｒ）及びシュードモナス種リパーゼ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐ ｌｉｐａｓｅｓ）が挙げられる。酵素触媒が使用される場合、反応は、溶媒の有無にかかわらず、約３０℃～約７５℃、あるいは約３５℃～約５５℃の温度で行うことができる。溶媒は、例えば、ヘキサン、ヘプタン、アセトン、アセト酢酸エチル、β－ヒドロキシ酪酸エチルなどであり得る。

本技術の少なくとも１つの実施形態に従ってβ－ヒドロキシ酪酸のトリグリセリドを製造するために、グリセロールを、約１１０℃～約１２０℃、あるいは約６０℃～約１８０℃の温度で、約１４～２１時間、あるいは３～２１時間、β－ヒドロキシ酪酸ｔｅｒｔ－ブチルで処理することができる。反応は、好ましくは不活性（例えば、窒素）雰囲気下で行われる。反応中、ｔｅｒｔ－ブチルアルコール副生成物は、例えば蒸留によって除去することができる。反応の終わりに、残りのβ－ヒドロキシ酪酸ｔｅｒｔ－ブチルを蒸留により除去することができる（例えば、約５９～約７５℃、１ｍｍＨｇで）。得られた生成物は、例えば、約５０℃～約８０℃の温度範囲で真空下（例えば、１ｍｍＨｇ）で水を添加することによって脱臭することができる。構造は、例えば、核磁気共鳴（ＮＭＲ）、元素分析（Ｃ、Ｈ、Ｎ）、及び／又はガスクロマトグラフィー（ＧＣ）によって確認することができる。

本技術の少なくとも１つの他の実施形態に従って、グリセロールを約５５℃～約７０℃、あるいは約２０℃～約７５℃の温度で、約１４～４８時間、あるいは２０～３６時間、リパーゼの存在下、β－ヒドロキシ酪酸エチルで処理することができる。リパーゼは、例えば、限定されないが、Ｎｏｖｏｚｙｍｅ（登録商標）４３５、Ｌｉｐｏｚｙｍｅ（登録商標）ＲＭ ＩＭ、又はＬｉｐｏｚｙｍｅ（登録商標）ＴＬ ＩＭであり得、これらはすべてＮｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓ，Ｆｒａｎｋｌｉｎｔｏｎ，Ｎ．Ｃ．から入手可能である。反応は、不活性（例えば、窒素）雰囲気中で行うことができる。反応中、エチルアルコール副生成物は、例えば蒸留によって除去することができる。反応の終わりに、残りのβ－ヒドロキシ酪酸エチルを蒸留により除去することができる（例えば、６０℃、１ｍｍＨｇで）。生成されたグリセリルトリス（β－ヒドロキシ酪酸）の構造は、例えば、限定されないが、ＮＭＲ分析、元素分析（Ｃ、Ｈ、Ｎ）及び／又はＧＣにより確認することができる。

例
以下の例は、本発明を限定するものではなく、例示するものである。

例１ 発明の実施形態

最初の６０ｋｇの女性対象は、（０日目）ＮＴＩＡを有していたことを発見され、翌日（１日目）から１日３回、ＧＴβＨＢ ４０ｇ／投与の経口レジメンを開始される。２日後（３日目）、対象は、さらなるＮＴＩＡを有し、ＧＴβＨＢの服用を次の５５日間継続する。

例２ 本発明ではない比較例

２番目の６０ｋｇの女性対象も、ＮＴＩＡを有していたことを発見されるが（０日目）、ＧＴβＨＢ投与を開始しない。さらなるＮＴＩＡが３日目（２日後）に起こる。対象はＧＴβＨＢ投与を開始しない。

例３ 発明の実施形態

３番目の６０ｋｇの女性対象も、（０日目に）ＮＴＩＡを有していたことが発見されるが、ＧＴβＨＢ投与を開始しない。さらなるＮＴＩＡが３日目（２日後）に起こる。対象は次に、翌日（４日目）から始まるＧＴβＨＢ ４０ｇ／投与、１日３回の経口レジメンを開始し、このレジメンを次の５４日間（６０日目まで）継続する。

例４ 発明の実施形態

４番目の６０ｋｇの女性対象は、（０日目）ＮＴＩＡを有していたことを発見され、翌日（１日目）から１日３回、ＧＴβＨＢ ４０ｇ／投与の経口レジメンを開始される。２日後（３日目）、対象は、さらなるＮＴＩＡを有し、ＧＴβＨＢの服用を次の２８日間継続する。その後、対象は、２９日目にＧＴβＨＢの服用を中止し、３５日目にＧＴβＨＢの服用を再開し、６０日目にＧＴβＨＢの服用を中止する。

例５ 発明の実施形態

５番目の６０ｋｇの女性対象は、（０日目）ＮＴＩＡを有していたことを発見され、翌日（１日目）から１日３回、ＧＴβＨＢ ４０ｇ／投与の経口レジメンを開始される。２日後（３日目）、対象は、さらなるＮＴＩＡを有し、ＧＴβＨＢの服用を次の２８日間継続する。次に対象は、２９日目にＧＴβＨＢの服用を中止し、３３日目にＮＴＩＡが発生し、対象は、１回目のＮＴＩＡから３５日目（２回目のＴＩＡから２日目）にＧＴβＨＢの服用を再開し、１回目のＮＴＩＡから６０日目（２回目のＴＩＡから２７日目）にＧＴβＨＢの服用を中止する。

例６

対象にＧＴβＨＢを投与する場合、対象は３０ｇ／投与単位、４投与単位／日のＧＴβＨＢを投与され、それ以外は例１及び３～５を繰り返す。

例７

問題の対象は７０ｋｇの男性であり、対象がＧＴβＨＢを投与される場合、対象は、約４７ｇ／投与単位を１日３回投与され、それ以外は例１～５を繰り返す。

例８

対象にＧＴβＨＢを投与する場合、対象は７０ｇ／投与単位を１日２回投与され、それ以外は例７を繰り返す。

例９

本例では、例１及び３～７に記述された投与単位サイズが半分に削減されるように、対象が投与されるＧＴβＨＢの１日の総量を例１及び３～７の２ｇ／ｋｇ／日ではなく１ｇ／ｋｇ／日にして、それ以外は例１及び３～７を繰り返す。

例１０－本発明を裏付けるインビトロ例

げっ歯動物脳細胞を栄養培地に浸し、複数のサブパートに分離する。第１のサブセットは、以前のように栄養培地を与えられ続け、対照として機能する。第２のサブセットは、栄養培地の補充を停止し、補充を停止した１時間後にサンプル採取される。第３のサブセットは、３０分の期間にわたってゆっくりと濾別される栄養培地を有し、このサブセットは、３０分間の終わり、及び濾過開始の１時間に再びサンプル採取される。第２及び第３のサブセットは、ＮＴＩＡ事象において生じるものと類似の最初の虚血状態をシミュレートする。次いで、第２及び第３のサブセットは、最初に提供されたように回復及び補充される栄養培地を２日間有する。第２及び第３のサブグループの各々は、３つのさらなる各サブグループ、２ａ、２ｂ、２ｃ、３ａ、３ｂ、及び３ｃにさらに分割される。２ａサブグループ及び３ａサブグループの各々を、上記のそれぞれの模擬虚血事象プロトコルに供する。サブグループ２ｂ及び３ｂの各々は、２回目の模擬虚血事象後の栄養培地の回復時にＧＴβＨＢを栄養培地に含めること以外、サブグループ２ａ及び３ａについて記載されるとおりにそれぞれの模擬虚血事象に供される。サブグループ３ａ及び３ｂは、ＧＴβＨＢが１回目の模擬虚血事象の１日後に栄養培地に添加され、２回目の虚血事象を開始するまで栄養培地中で維持されること以外、サブグループ２ａ及び２ｂと一致する。様々な群の各々をサンプル採取して、細胞の死及び生存の相対量を決定する。特に関連するのは、２ｂと３ｂ及び２ｃと３ｃの群間の差であり、これは、単に後に発生した虚血事象の後にＧＴβＨＢを有することと、虚血事象の前及び時点でＧＴβＨＢが細胞環境に存在することとの比較である。これらの比較は、虚血事象の発生時にＧＴβＨＢを細胞環境中に存在させるように、虚血事象前にＧＴβＨＢを投与することが、問題の虚血事象後のＧＴβＨＢの投与のみよりも有益であることを示すであろう。

Claims (10)

1. グリセリルトリス（β－ヒドロキシ酪酸）（ＧＴβＨＢ）化合物を含む、以下を特徴とする組成物：
   経口用組成物であり、ヒト対象における、該ヒト対象が第一のＮＴＩＡを生じたか又は生じたことが疑われた後の、第二のニューロン一過性虚血性発作（ＮＴＩＡ）による神経障害及び／又はニューロン細胞死の低減又は予防に、ＧＴβＨＢを該ヒト対象に毎日経口投与する使用のための組成物であり、
   β－ヒドロキシ酪酸部分及びアセト酢酸を合わせた血漿濃度が２ｍＭ～７ｍＭになるように計算された１日量を、１日当たり１～４回の分量に分けて、下記からなる群から独立して選択される最小値及び最大値を有する範囲の群から選択される範囲を有する投与期間の間投与され、
   ２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日１３日、１４日、１５、１６日、１７日１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日、３０日、３１日、３５日、４２日、４９日、５６日、５８日、５９日、６０日、６１日、６２日、６３日、７０日、７７日、８４日、９０日、９１日、９２日、９８日、１０５日、１１２日、１１９日、１２０日、１２６日、１３３日、１４０日、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、及び１年、
   ただし、
   前記最小値は前記最大値より小さく、
   前記投与期間は、第一のＮＴＩＡからの日数をカウントするものであり、該第一のＮＴＩＡの日が０日としてカウントされ、任意に１日又は２日以上中断され、
   前記第二のＮＴＩＡが前記選択された投与期間に発生した場合には、前記日数カウントは、前記第二のＮＴＩＡの発生により、該第二のＮＴＩＡが発生した日を０日目としてリセットされる、
   組成物。
2. ニューロン細胞死の低減又は防止が、再灌流が再確立され得るまでのニューロン細胞虚血性コア細胞死の低減又は防止であることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
3. ニューロン細胞死の低減又は防止が、ニューロン細胞虚血性ペナンブラ細胞死の低減又は防止であることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
4. 神経障害の低減又は防止が、ニューロン虚血性コア細胞損傷に関連することを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
5. 神経障害の低減又は予防が、ニューロン細胞虚血性ペナンブラ細胞死の低減又は防止に関連する、請求項１に記載の組成物。
6. ＧＴβＨＢの１日量が１日当たり２～３回に分けた分量で投与され、前記分量で投与される回数×分量のサイズから得られる前記１日の総量が０．５ｇ／ｋｇ体重／日～２．６ｇ／ｋｇ体重／日から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
7. 前記化合物が４５ｇ～７５ｇの分量のサイズにより１日当たり３回投与され、１日の総量が１３５ｇ／日～２２５ｇ／日とされることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
8. 前記化合物が５５ｇ～６５ｇの分量のサイズにより１日当たり３回投与され、１日の総量が１６５ｇ／日～１９５ｇ／日とされることを特徴とする、請求項７に記載の組成物。
9. 前記化合物が６０ｇの分量のサイズにより１日当たり３回投与され、１日の総量が１８０ｇ／日とされることを特徴とする、請求項７に記載の組成物。
10. グリセリルトリス（β－ヒドロキシ酪酸）（ＧＴβＨＢ）化合物及び経腸に適した担体を含む製剤であって、
    ヒト対象における、該ヒト対象が第一のＮＴＩＡを生じたか又は生じたことが疑われた後の、第二のニューロン一過性虚血性発作（ＮＴＩＡ）による神経障害及び／又はニューロン細胞死の低減又は予防における使用のための製剤、ただし、該使用は以下を含む：
    毎日の経口投与により、β－ヒドロキシ酪酸部分及びアセト酢酸を合わせた血漿濃度が２ｍＭ～７ｍＭになるように計算された１日量を、１日当たり１～４回の分量に分けて、下記からなる群から独立して選択される最小値及び最大値を有する範囲の群から選択される範囲を有する投与期間の間投与すること、
    ２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日１３日、１４日、１５、１６日、１７日１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日、３０日、３１日、３５日、４２日、４９日、５６日、５８日、５９日、６０日、６１日、６２日、６３日、７０日、７７日、８４日、９０日、９１日、９２日、９８日、１０５日、１１２日、１１９日、１２０日、１２６日、１３３日、１４０日、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、及び１年、
    ただし、
    前記最小値は前記最大値よりも小さく、前記投与期間は、第一のＮＴＩＡからの日数をカウントするものであり、該第一のＮＴＩＡの日が０日としてカウントされ、任意に１日又は２日以上中断され、
    前記第二のＮＴＩＡが前記選択された投与期間に発生した場合には、前記第二のＮＴＩＡの発生により前記日数カウントは、該第二のＮＴＩＡが発生した日を０日目としてリセットされる。