JP7401938B2 - 植物の環境ストレス耐性を向上する方法 - Google Patents
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Description
(1) エタノール又はその溶媒和物を有効成分として含有する、植物の環境ストレス耐性向上剤。
(2) 環境ストレスが、塩ストレス、乾燥ストレス及び高温ストレスからなる群より選択される少なくとも1種である、前記実施形態(1)に記載の植物の環境ストレス耐性向上剤。
(3) エタノール又はその溶媒和物を有効成分として含有する、植物の環境ストレス耐性を向上させるための農業化学製剤。
(4) 環境ストレスが、塩ストレス、乾燥ストレス及び高温ストレスからなる群より選択される少なくとも1種である、前記実施形態(3)に記載の農業化学製剤。
(5) エタノール又はその溶媒和物と、1種以上の農業上許容される成分とを含有する、植物の環境ストレス耐性を向上させるための農業化学組成物。
(6) 環境ストレスが、塩ストレス、乾燥ストレス及び高温ストレスからなる群より選択される少なくとも1種である、前記実施形態(5)に記載の農業化学組成物。
(7) 農業上有効な量のエタノール又はその溶媒和物を、植物又はそこから該植物が生育する土壌、培地若しくは培養液に施用することを含む、該植物の環境ストレス耐性を向上する方法。
(8) 環境ストレスが、塩ストレス、乾燥ストレス及び高温ストレスからなる群より選択される少なくとも1種である、前記実施形態(7)に記載の方法。
(9) 植物の環境ストレス耐性を向上させるための、エタノール又はその溶媒和物の使用。
(10) 植物の環境ストレス耐性を向上させるための、エタノール又はその溶媒和物を有効成分として含有する農業化学製剤の使用。
(11) 植物の環境ストレス耐性を向上させるための、エタノール又はその溶媒和物と、1種以上の農業上許容される成分とを含有する農業化学組成物の使用。
前記以外の、課題、構成及び効果は、以下の実施形態の説明により明らかにされる。
本発明において、「環境ストレス」は、対象となる植物の外部環境に起因して、植物が被るストレスを意味する。本発明の対象となる環境ストレスとしては、限定するものではないが、例えば、塩ストレス、乾燥ストレス及び温度(例えば高温、低温若しくは凍結)ストレスを挙げることができる。環境ストレスは、対象となる植物の好適な生育条件に依存して、様々な外部環境がその要因となる。当業者であれば、対象となる植物に基づき、環境ストレスの要因となる外部環境の具体的な条件を容易に決定することができる。
[I-1:エタノールによるシロイヌナズナの耐塩性向上試験]
野生型のシロイヌナズナ(Col-0)の種子を滅菌した。滅菌処理された24穴マイクロプレートの各ウェルに、1 mlの1/2 Murashige Skoog(MS)培地(1%スクロース、0.1%寒天)を添加した。滅菌処理されたシロイヌナズナ種子を、1ウェルあたり5粒ずつ、ウェル中の1/2 MS寒天培地に播種した。マイクロプレートを、少なくとも2日間、4℃、暗所にて積層した。その後、マイクロプレートを、22℃に設定されたインキュベーター内(16時間明期/8時間暗期)に移動し、シロイヌナズナを22℃で4日間生育させた。処理のため、所定のウェルに、試験区として0.3%エタノール(和光純薬工業)又は対照区として同量の滅菌脱イオン水(SDW)を添加して、シロイヌナズナをさらに22℃で24時間生育させた。その後、所定のウェルに、100 mM NaClを添加して、シロイヌナズナを22℃で4日間生育させた。肉眼又は実体顕微鏡で、生育させたシロイヌナズナの表現型を観察した。NaCl非添加区のシロイヌナズナ植物体と比較して、子葉若しくは本葉の黄化又は白化が観察された植物体を、塩ストレスによる影響を受けた植物体と判定した。各試験区において、植物体の総数(5×3ウェル=15植物体、又は5×6ウェル=30植物体)に対する塩ストレスによる影響を受けていない植物体の数の百分率を、塩ストレス条件下における生存率(%)として算出した。各試験区について、それぞれ2回又は3回反復試験を行い、その平均値及び標準誤差を算出した。野生型のシロイヌナズナ(Col-0)にエタノールを添加した場合のエタノールの濃度と塩ストレス条件下における生存率との関係(15植物体、2回反復)を図1に示す。また、野生型のシロイヌナズナ(Col-0)にNaCl存在下又は非存在下でエタノールを添加した場合の生存率(30植物体、3回反復)を図2に示す。図1及び2中、誤差線は、標準誤差を示す。また、エタノール処理後、NaCl存在下又は非存在下で4日間生育後のシロイヌナズナ植物体の表現型を図3に示す。
前記Iの手順で調製したエタノール処理した5日目野生型シロイヌナズナ(Col-0)植物を、100 mM NaCl又はSDW存在下で6時間生育させた。過酸化水素(H2O2)を検出する3,3’-ジアミノベンジジン(DAB)染色のために、植物を、0.1%DAB、及び10 mMリン酸カリウム、pH 7.0を含む染色液で、室温で5時間染色した。染色した試料を、エタノール:酢酸(96:4)溶液で洗浄し、デジタル顕微鏡(VHX-5000、キーエンス)で撮影した。DAB染色後のシロイヌナズナ植物体の写真を図4に示す。図中、「対照」は、エタノール及びNaCl非処理の植物体を、「EtOH」は、エタノール処理した後、NaCl非存在下で生育させた植物体を、「NaCl」は、エタノール非処理で、NaCl存在下で生育させた植物体を、「EtOH+NaCl」は、エタノール処理した後、NaCl存在下で生育させた植物体を、それぞれ示す。
[II-1:エタノールによるシロイヌナズナの高温ストレス耐性向上試験]
滅菌処理されたペトリ皿に、MS(日本製薬)、0.1%(v/v)B5 ビタミン、1.0%(w/v)スクロース、0.05%(w/v)MES、0.1%(v/v)1M水酸化カリウム、及び0.85%(w/v)アガロース(寒天精製粉末、ナカライテスク)を含むMS固形培地、又はMS固形培地の成分に加えて0.01%(v/v)エタノールを含むMS+EtOH固形培地を調製した。野生型のシロイヌナズナ(Col-0)の種子を滅菌した。滅菌処理されたシロイヌナズナ種子を、4℃で4日間静置した後、MS固形培地又はMS+EtOH固体培地のペトリ皿1枚あたり32粒ずつ、各培地に播種した。ペトリ皿を、22℃に設定されたインキュベーター内(TOMYグロスチャンバー CF-405、トミー)(16時間明期/8時間暗期)に移動し、シロイヌナズナを22℃で14日間生育させた。高温ストレス処理のため、ペトリ皿を、43.5℃に設定された高温インキュベーター内(SANYOインキュベーター MIR-153、三洋電機)に移動し、シロイヌナズナを、暗条件下、43.5℃で4.0時間処理した。処理後、ペトリ皿を、22℃に設定されたインキュベーター内(16時間明期/8時間暗期)に移動し、シロイヌナズナを22℃で7日間生育させた。肉眼又は実体顕微鏡で、生育させたシロイヌナズナの表現型を観察した。非処理区のシロイヌナズナ植物体と比較して、子葉若しくは本葉の黄化又は白化が観察された植物体を、高温ストレスによる影響を受けた植物体と判定した。各試験区において、植物体の総数(N=8植物体)に対する高温ストレスによる影響を受けていない植物体の数の百分率を、高温ストレス条件下における生存率(%)として算出した。各試験区について、それぞれ3回反復試験を行い、その平均値及び標準偏差を算出した。野生型のシロイヌナズナ(Col-0)にエタノールを添加した場合の高温ストレス処理後の生存率を図5に示す。図中、誤差線は、標準偏差を示す(*P < 0.05)。また、4時間の高温ストレス処理後、非ストレス条件下でさらに1週間生育させたシロイヌナズナ植物体の表現型を図6に示す。図中、Aは、MS固形培地で生育させたシロイヌナズナ植物体を、Bは、MS+EtOH固体培地で生育させたシロイヌナズナ植物体を、それぞれ示す。
[III-1:エタノールによるシロイヌナズナの乾燥ストレス耐性向上試験]
野生型のシロイヌナズナ(Col-0)の種子を、ポット中のプロフェッショナル用培土No. 2(ダイオ化成)に播種し、4℃で5日間生育させた。ポットを、温室(22℃、16時間明期/8時間暗期、60 μmol m-2 s-1 光量子束密度)内に移動し、シロイヌナズナを22℃で15日間生育させた。この時点において、植物を無作為に4群に分け、温室内で、0、5、10又は20 mMエタノールで3日間処理した。処理から72時間後、トレイから過剰量の水を除去し、給水を停止することにより、植物を乾燥ストレス処理した。ポットは毎日回転させた。乾燥処理開始から12日後、植物に給水して、乾燥ストレス処理前と同じ条件で生育させた。肉眼で、生育させたシロイヌナズナの表現型を観察した。非処理区のシロイヌナズナ植物体と比較して、子葉若しくは本葉の黄化又は白化が観察された植物体を、乾燥ストレスによる影響を受けた植物体と判定した。各試験区において、植物体の総数(N=24植物体)に対する乾燥ストレスによる影響を受けていない植物体の数の百分率を、乾燥ストレス条件下における生存率(%)として算出した。各試験区について、それぞれ3回反復試験を行い、その平均値及び標準誤差を算出した。野生型のシロイヌナズナ(Col-0)にエタノールを添加した場合のエタノールの濃度と乾燥ストレス条件下における生存率との関係(24植物体、3回反復)を図7に示す。図中、誤差線は、標準誤差を示す。また、エタノール処理後、乾燥ストレス条件下で12日間生育後のシロイヌナズナ植物体の表現型を図8に、乾燥ストレス処理後、給水してさらに48時間生育後のシロイヌナズナ植物体の表現型を図9に、それぞれ示す。
トウモロコシ(キャンベラ 90EX、タキイ種苗)の種子を、ポット中のプロフェッショナル用培土No. 2(ダイオ化成)に2粒ずつ播種し、温室内(30℃)で4週間生育させた。2植物ずつ生育したポットを、無作為に7ポットずつ2群に分けて、トレイ内に配置した。各群を、温室内(30℃)で、水(すなわち0 mMエタノール)又は50 mMエタノールで2日間処理した。処理後、トレイから過剰量の水を除去し、給水を停止することにより、植物を乾燥ストレス処理した。ポットは毎日回転させた。乾燥処理開始から15日後、植物に給水して、乾燥ストレス処理前と同じ条件で5日間生育させた。肉眼で、生育させたトウモロコシの表現型を観察した。非処理区のトウモロコシ植物体と比較して、本葉の黄化又は白化が観察された植物体を、乾燥ストレスによる影響を受けた植物体と判定した。エタノール処理後、15日間の乾燥ストレス処理を行い、給水してさらに5日間生育後のトウモロコシ植物体の表現型を図10に示す。
Claims (2)
- 施用時の総質量に対して、0.04~1質量%の範囲である農業上有効な量のエタノール又はその溶媒和物を、有効成分として単独で、植物又はそこから該植物が生育する土壌、培地若しくは培養液に施用することを含む、該植物の環境ストレス耐性を向上する方法であって、
環境ストレスが、塩ストレス、乾燥ストレス及び高温ストレスからなる群より選択される少なくとも1種である、前記方法。 - 植物の環境ストレス耐性向上が、該植物において環境ストレスの曝露に起因する活性酸素の産生を抑制することに起因する、請求項1に記載の方法。
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