JP7387743B2 - 抗ｔｎｆｒｓｆ９抗体及びその使用 - Google Patents

抗ｔｎｆｒｓｆ９抗体及びその使用 Download PDF

Info

Publication number
JP7387743B2
JP7387743B2 JP2021538883A JP2021538883A JP7387743B2 JP 7387743 B2 JP7387743 B2 JP 7387743B2 JP 2021538883 A JP2021538883 A JP 2021538883A JP 2021538883 A JP2021538883 A JP 2021538883A JP 7387743 B2 JP7387743 B2 JP 7387743B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
seq
antibody
sequence
antibodies
selection
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
JP2021538883A
Other languages
English (en)
Other versions
JP2022516916A (ja
Inventor
ヤン，イー
シィエ，ジュンシュ
ドン，チュヤン
ヤン，ファン
ル，チェンギュアン
シェン，ユエレイ
ニ，ジアン
グオ，ヤナン
チェン，ユンユン
Original Assignee
ユーカー（ベンジン） バイオファーマ カンパニー，リミテッド
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ユーカー（ベンジン） バイオファーマ カンパニー，リミテッド filed Critical ユーカー（ベンジン） バイオファーマ カンパニー，リミテッド
Publication of JP2022516916A publication Critical patent/JP2022516916A/ja
Priority to JP2023118891A priority Critical patent/JP2023138538A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP7387743B2 publication Critical patent/JP7387743B2/ja
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/80—Vaccine for a specifically defined cancer
    • A61K2039/804—Blood cells [leukemia, lymphoma]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/80—Vaccine for a specifically defined cancer
    • A61K2039/82—Colon
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/80—Vaccine for a specifically defined cancer
    • A61K2039/876—Skin, melanoma
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Description

優先権主張
本願は、２０１８年９月１２日に出願されたＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＣＮ２０１８／１０５１６２号明細書の利益を主張する。前述の出願の内容全体が、参照により本明細書に援用される。
本開示は、抗ＴＮＦＲＳＦ９（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー９）抗体、抗原結合断片、及びその使用に関する。
癌は、現在のところヒト死亡率が最も高い疾患の一つである。世界保健機関（Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ）の統計データによれば、２０１２年、全世界の癌発生及び死亡症例数は、それぞれ１４００万例及び８２０万例に達した。中国では、新たに診断された癌症例は３０７万例であり、死亡者数は２２０万例である。
近年の抗癌抗体の臨床的及び商業的成功により、抗体ベースの治療薬に多大な関心が寄せられている。癌の治療に様々な抗体ベースの治療薬で使用するための抗癌抗体の開発が必要とされている。
本開示は、抗ＴＮＦＲＳＦ９（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー９；別名「４－１ＢＢ」又は「ＣＤ１３７」）抗体、その抗原結合断片、及びその使用に関する。
一態様において、本開示は、相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２、及び３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）であって、ＶＨ ＣＤＲ１領域が選択のＶＨ ＣＤＲ１アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％，９０％，９５％，又は１００％同一のアミノ酸配列を含み、ＶＨ ＣＤＲ２領域が選択のＶＨ ＣＤＲ２アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％，９０％，９５％，又は１００％同一のアミノ酸配列を含み、及びＶＨ ＣＤＲ３領域が選択のＶＨ ＣＤＲ３アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％，９０％，９５％，又は１００％同一のアミノ酸配列を含むＶＨと；ＣＤＲ１、２、及び３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、ＶＬ ＣＤＲ１領域が選択のＶＬ ＣＤＲ１アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％，９０％，９５％，又は１００％同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬ ＣＤＲ２領域が選択のＶＬ ＣＤＲ２アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％，９０％，９５％，又は１００％同一のアミノ酸配列を含み、及びＶＬ ＣＤＲ３領域が選択のＶＬ ＣＤＲ３アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％，９０％，９５％，又は１００％同一のアミノ酸配列を含むＶＬとを含み、選択のＶＨ ＣＤＲ１、２、及び３アミノ酸配列及び選択のＶＬ ＣＤＲ１、２、及び３アミノ酸配列が、以下：
（１）選択のＶＨ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号１、２、３に示され、選択のＶＬ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号４、５、６に示される；
（２）選択のＶＨ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号７、８、９に示され、選択のＶＬ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号１０、１１、１２に示される；
（３）選択のＶＨ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号１３、１４、１５に示され、選択のＶＬ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号１６、１７、１８に示される；
（４）選択のＶＨ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号１９、２０、２１に示され、選択のＶＬ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号２２、２３、２４に示される；
（５）選択のＶＨ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号２５、２６、２７に示され、選択のＶＬ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号２８、２９、３０に示される；
（６）選択のＶＨ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号３１、３２、３３に示され、選択のＶＬ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号３４、３５、３６に示される；
（７）選択のＶＨ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号３７、３８、３９に示され、選択のＶＬ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号４０、４１、４２に示される；
（８）選択のＶＨ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号４３、４４、４５に示され、選択のＶＬ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号４６、４７、４８に示される；
（９）選択のＶＨ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号４９、５０、５１に示され、選択のＶＬ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号５２、５３、５４に示される；
（１０）選択のＶＨ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号５５、５６、５７に示され、選択のＶＬ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号５８、５９、６０に示される；
（１１）選択のＶＨ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号６１、６２、６３に示され、選択のＶＬ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号６４、６５、６６に示される；
（１２）選択のＶＨ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号６７、６８、６９に示され、選択のＶＬ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号７０、７１、７２に示される；
（１３）選択のＶＨ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号７３、７４、７５に示され、選択のＶＬ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号７６、７７、７８に示される；
（１４）選択のＶＨ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号７９、８０、８１に示され、選択のＶＬ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号８２、８３、８４に示される；
（１５）選択のＶＨ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号８５、８６、８７に示され、選択のＶＬ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号８８、８９、９０に示される；
（１６）選択のＶＨ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号９１、９２、９３に示され、選択のＶＬ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号９４、９５、９６に示される；
（１７）選択のＶＨ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号９７、９８、９９に示され、選択のＶＬ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号１００、１０１、１０２に示される；
（１８）選択のＶＨ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号１０３、１０４、１０５に示され、選択のＶＬ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号１０６、１０７、１０８に示される
のうちの１つである、４－１ＢＢ（ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー９）に結合する抗体又はその抗原結合断片に関する。
一部の実施形態において、ＶＨは、配列番号１、２、及び３にそれぞれ示されるアミノ酸配列のＣＤＲ１、２、３を含み、ＶＬは、配列番号４、５、及び６にそれぞれ示されるアミノ酸配列のＣＤＲ１、２、３を含む。
一部の実施形態において、ＶＨは、配列番号７、８、及び９にそれぞれ示されるアミノ酸配列のＣＤＲ１、２、３を含み、ＶＬは、配列番号１０、１１、及び１２にそれぞれ示されるアミノ酸配列のＣＤＲ１、２、３を含む。
一部の実施形態において、ＶＨは、配列番号１３、１４、及び１５にそれぞれ示されるアミノ酸配列のＣＤＲ１、２、３を含み、ＶＬは、配列番号１６、１７、及び１８にそれぞれ示されるアミノ酸配列のＣＤＲ１、２、３を含む。
一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はヒト４－１ＢＢに特異的に結合する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はヒト化抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は単鎖可変断片（ｓｃＦＶ）である。
一態様において、本開示はまた、
（１）配列番号１、２、及び３にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２、及び３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）であって、配列番号２２５、２２６、２２７、２２８、又は２４４に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と対になると４－１ＢＢに結合するＶＨを含む免疫グロブリン重鎖又はその断片；
（２）配列番号４、５、及び６にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＬであって、配列番号２２１、２２２、２２３、２２４、又は２４３に示されるアミノ酸配列を含むＶＨと対になると４－１ＢＢに結合するＶＬを含む免疫グロブリン軽鎖又はその断片；
（３）配列番号７、８、及び９にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）であって、配列番号２３２、２３３、２３４、２３５又は２４６に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と対になると４－１ＢＢに結合するＶＨを含む免疫グロブリン重鎖又はその断片；
（４）配列番号１０、１１、及び１２にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＬであって、配列番号２２９、２３０、２３１又は２４５に示されるアミノ酸配列を含むＶＨと対になると４－１ＢＢに結合するＶＬを含む免疫グロブリン軽鎖又はその断片；
（５）配列番号１３、１４、及び１５にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）であって、配列番号２３９、２４０、２４１、２４２又は２４８に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と対になると４－１ＢＢに結合するＶＨを含む免疫グロブリン重鎖又はその断片；
（６）配列番号１６、１７、及び１８にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＬであって、配列番号２３６、２３７、２３８、又は２４７に示されるアミノ酸配列を含むＶＨと対になると４－１ＢＢに結合するＶＬを含む免疫グロブリン軽鎖又はその断片
（７）配列番号１９、２０、２１にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＨであって、配列番号２５０に示されるアミノ酸配列を含むＶＬと対になると４－１ＢＢに結合するＶＨを含む免疫グロブリン重鎖又はその断片；
（８）配列番号２２、２３、２４にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＬであって、配列番号２４９に示されるアミノ酸配列を含むＶＨと対になると４－１ＢＢに結合するＶＬを含む免疫グロブリン軽鎖又はその断片；
（９）配列番号２５、２６、２７にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＨであって、配列番号２５２に示されるアミノ酸配列を含むＶＬと対になると４－１ＢＢに結合するＶＨを含む免疫グロブリン重鎖又はその断片；
（１０）配列番号２８、２９、３０にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＬであって、配列番号２５１に示されるアミノ酸配列を含むＶＨと対になると４－１ＢＢに結合するＶＬを含む免疫グロブリン軽鎖又はその断片；
（１１）配列番号３１、３２、３３にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＨであって、配列番号２５４に示されるアミノ酸配列を含むＶＬと対になると４－１ＢＢに結合するＶＨを含む免疫グロブリン重鎖又はその断片；
（１２）配列番号３４、３５、３６にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＬであって、配列番号２５３に示されるアミノ酸配列を含むＶＨと対になると４－１ＢＢに結合するＶＬを含む免疫グロブリン軽鎖又はその断片；
（１３）配列番号３７、３８、３９にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＨであって、配列番号２５６に示されるアミノ酸配列を含むＶＬと対になると４－１ＢＢに結合するＶＨを含む免疫グロブリン重鎖又はその断片；
（１４）配列番号４０、４１、４２にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＬであって、配列番号２５５に示されるアミノ酸配列を含むＶＨと対になると４－１ＢＢに結合するＶＬを含む免疫グロブリン軽鎖又はその断片；
（１５）配列番号４３、４４、４５にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＨであって、配列番号２５８に示されるアミノ酸配列を含むＶＬと対になると４－１ＢＢに結合するＶＨを含む免疫グロブリン重鎖又はその断片；
（１６）配列番号４６、４７、４８にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＬであって、配列番号２５７に示されるアミノ酸配列を含むＶＨと対になると４－１ＢＢに結合するＶＬを含む免疫グロブリン軽鎖又はその断片；
（１７）配列番号４９、５０、５１にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＨであって、配列番号２６０に示されるアミノ酸配列を含むＶＬと対になると４－１ＢＢに結合するＶＨを含む免疫グロブリン重鎖又はその断片；
（１８）配列番号５２、５３、５４にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＬであって、配列番号２５９に示されるアミノ酸配列を含むＶＨと対になると４－１ＢＢに結合するＶＬを含む免疫グロブリン軽鎖又はその断片；
（１９）配列番号５５、５６、５７にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＨであって、配列番号２６２に示されるアミノ酸配列を含むＶＬと対になると４－１ＢＢに結合するＶＨを含む免疫グロブリン重鎖又はその断片；
（２０）配列番号５８、５９、６０にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＬであって、配列番号２６１に示されるアミノ酸配列を含むＶＨと対になると４－１ＢＢに結合するＶＬを含む免疫グロブリン軽鎖又はその断片；
（２１）配列番号６１、６２、６３にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＨであって、配列番号２６４に示されるアミノ酸配列を含むＶＬと対になると４－１ＢＢに結合するＶＨを含む免疫グロブリン重鎖又はその断片；
（２２）配列番号６４、６５、６６にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＬであって、配列番号２６３に示されるアミノ酸配列を含むＶＨと対になると４－１ＢＢに結合するＶＬを含む免疫グロブリン軽鎖又はその断片；
（２３）配列番号６７、６８、６９にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＨであって、配列番号２６６に示されるアミノ酸配列を含むＶＬと対になると４－１ＢＢに結合するＶＨを含む免疫グロブリン重鎖又はその断片；
（２４）配列番号７０、７１、７２にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＬであって、配列番号２６５に示されるアミノ酸配列を含むＶＨと対になると４－１ＢＢに結合するＶＬを含む免疫グロブリン軽鎖又はその断片；
（２５）配列番号７３、７４、７５にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＨであって、配列番号２６８に示されるアミノ酸配列を含むＶＬと対になると４－１ＢＢに結合するＶＨを含む免疫グロブリン重鎖又はその断片；
（２６）配列番号７６、７７、７８にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＬであって、配列番号２６７に示されるアミノ酸配列を含むＶＨと対になると４－１ＢＢに結合するＶＬを含む免疫グロブリン軽鎖又はその断片；
（２７）配列番号７９、８０、８１にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＨであって、配列番号２７０に示されるアミノ酸配列を含むＶＬと対になると４－１ＢＢに結合するＶＨを含む免疫グロブリン重鎖又はその断片；
（２８）配列番号８２、８３、８４にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＬであって、配列番号２６９に示されるアミノ酸配列を含むＶＨと対になると４－１ＢＢに結合するＶＬを含む免疫グロブリン軽鎖又はその断片；
（２９）配列番号８５、８６、８７にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＨであって、配列番号２７２に示されるアミノ酸配列を含むＶＬと対になると４－１ＢＢに結合するＶＨを含む免疫グロブリン重鎖又はその断片；
（３０）配列番号８８、８９、９０にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＬであって、配列番号２７１に示されるアミノ酸配列を含むＶＨと対になると４－１ＢＢに結合するＶＬを含む免疫グロブリン軽鎖又はその断片；
（３１）配列番号９１、９２、９３にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＨであって、配列番号２７４に示されるアミノ酸配列を含むＶＬと対になると４－１ＢＢに結合するＶＨを含む免疫グロブリン重鎖又はその断片；
（３２）配列番号９４、９５、９６にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＬであって、配列番号２７３に示されるアミノ酸配列を含むＶＨと対になると４－１ＢＢに結合するＶＬを含む免疫グロブリン軽鎖又はその断片；
（３３）配列番号９７、９８、９９にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＨであって、配列番号２７６に示されるアミノ酸配列を含むＶＬと対になると４－１ＢＢに結合するＶＨを含む免疫グロブリン重鎖又はその断片；
（３４）配列番号１００、１０１、１０２にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＬであって、配列番号２７５に示されるアミノ酸配列を含むＶＨと対になると４－１ＢＢに結合するＶＬを含む免疫グロブリン軽鎖又はその断片；
（３５）配列番号１０３、１０４、１０５にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＨであって、配列番号２７８に示されるアミノ酸配列を含むＶＬと対になると４－１ＢＢに結合するＶＨを含む免疫グロブリン重鎖又はその断片；
（３６）配列番号１０６、１０７、１０８にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＬであって、配列番号２７７に示されるアミノ酸配列を含むＶＨと対になると４－１ＢＢに結合するＶＬを含む免疫グロブリン軽鎖又はその断片
を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む核酸に関する。
一部の実施形態において、核酸は、配列番号１、２、３にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＨを含む免疫グロブリン重鎖又はその断片を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
一部の実施形態において、核酸は、配列番号４、５、６にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＬを含む免疫グロブリン軽鎖又はその断片を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
一部の実施形態において、核酸は、配列番号７、８、９にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＨを含む免疫グロブリン重鎖又はその断片を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
一部の実施形態において、核酸は、配列番号１０、１１、１２にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＬを含む免疫グロブリン軽鎖又はその断片を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
一部の実施形態において、核酸は、配列番号１３、１４、１５にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＨを含む免疫グロブリン重鎖又はその断片を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
一部の実施形態において、核酸は、配列番号１６、１７、１８にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＬを含む免疫グロブリン軽鎖又はその断片を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
一部の実施形態において、ＶＨは、ＶＬと対になるとヒト４－１ＢＢに特異的に結合し、又はＶＬは、ＶＨと対になるとヒト４－１ＢＢに特異的に結合する。
一部の実施形態において、免疫グロブリン重鎖又はその断片はヒト化免疫グロブリン重鎖又はその断片であり、免疫グロブリン軽鎖又はその断片はヒト化免疫グロブリン軽鎖又はその断片である。
一部の実施形態において、核酸は単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）をコードする。一部の実施形態において、核酸はｃＤＮＡである。
一態様において、本開示は、本明細書に記載されるとおりの核酸のうちの１つ以上を含むベクターに関する。一態様において、本開示はまた、本明細書に記載されるとおりの核酸のうちの２つを含むベクターにも関する。一部の実施形態において、ベクターは、４－１ＢＢに一緒になって結合するＶＬ領域及びＶＨ領域をコードする。
一態様において、本開示は、各ベクターが本明細書に記載されるとおりの核酸のうちの１つを含む一対のベクターに関し、ここで一緒になって一対のベクターは、４－１ＢＢに一緒になって結合するＶＬ領域及びＶＨ領域をコードする。
一態様において、本開示は、本明細書に記載されるとおりのベクター、又は本明細書に記載されるとおりの一対のベクターを含む細胞に関する。一部の実施形態において、細胞はＣＨＯ細胞である。
一態様において、本開示はまた、本明細書に記載されるとおりの核酸のうちの１つ以上を含む細胞に関する。一態様において、本開示は、本明細書に記載されるとおりの核酸のうちの２つを含む細胞に関する。一部の実施形態において、２つの核酸は一緒になって、４－１ＢＢに一緒になって結合するＶＬ領域及びＶＨ領域をコードする。
一態様において、本開示は、抗体又はその抗原結合断片の作製方法に関する。本方法は、
（ａ）細胞が抗体又は抗原結合断片を産生するのに十分な条件下で本明細書に記載されるとおりの細胞を培養すること；及び
（ｂ）細胞によって産生された抗体又は抗原結合断片を収集すること
を含む。
一態様において、本開示は、選択のＶＨ配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、選択のＶＬ配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、選択のＶＨ配列及び選択のＶＬ配列が、以下：
（１）選択のＶＨ配列が配列番号２２１、２２２、２２３、２２４、又は２４３であり、選択のＶＬ配列が配列番号２２５、２２６、２２７、２２８、又は２４４である；
（２）選択のＶＨ配列が配列番号２２９、２３０、２３１、又は２４５であり、選択のＶＬ配列が配列番号２３２、２３３、２３４、２３５、又は２４６である；
（３）選択のＶＨ配列が配列番号２３６、２３７、２３８、又は２４７であり、選択のＶＬ配列が配列番号２３９、２４０、２４１、２４２、又は２４８である；
（４）選択のＶＨ配列が配列番号２４９であり、選択のＶＬ配列が配列番号２５０である；
（５）選択のＶＨ配列が配列番号２５１であり、選択のＶＬ配列が配列番号２５２である；
（６）選択のＶＨ配列が配列番号２５３であり、選択のＶＬ配列が配列番号２５４である；
（７）選択のＶＨ配列が配列番号２５５であり、選択のＶＬ配列が配列番号２５６である；
（８）選択のＶＨ配列が配列番号２５７であり、選択のＶＬ配列が配列番号２５８である；
（９）選択のＶＨ配列が配列番号２５９であり、選択のＶＬ配列が配列番号２６０である；
（１０）選択のＶＨ配列が配列番号２６１であり、選択のＶＬ配列が配列番号２６２である；
（１１）選択のＶＨ配列が配列番号２６３であり、選択のＶＬ配列が配列番号２６４である；
（１２）選択のＶＨ配列が配列番号２６５であり、選択のＶＬ配列が配列番号２６６である；
（１３）選択のＶＨ配列が配列番号２６７であり、選択のＶＬ配列が配列番号２６８である；
（１４）選択のＶＨ配列が配列番号２６９であり、選択のＶＬ配列が配列番号２７０である；
（１５）選択のＶＨ配列が配列番号２７１であり、選択のＶＬ配列が配列番号２７２である；
（１６）選択のＶＨ配列が配列番号２７３であり、選択のＶＬ配列が配列番号２７４である；
（１７）選択のＶＨ配列が配列番号２７５であり、選択のＶＬ配列が配列番号２７６である；
（１８）選択のＶＨ配列が配列番号２７７であり、選択のＶＬ配列が配列番号２７８である
のうちの１つである、４－１ＢＢに結合する抗体又はその抗原結合断片に関する。
一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はヒト４－１ＢＢに特異的に結合する。
一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はヒト化抗体又はその抗原結合断片である。
一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は単鎖可変断片（ｓｃＦＶ）である。
一態様において、本開示は、治療剤に共有結合的に結合した本明細書に記載されるとおりの抗体又はその抗原結合断片を含む抗体－薬物コンジュゲートに関する。一部の実施形態において、治療剤は細胞傷害剤又は細胞増殖抑制剤である。
一態様において、本開示は、癌を有する対象を治療する方法に関し、本方法は、本明細書に記載されるとおりの抗体又はその抗原結合断片、又は本明細書に記載されるとおりの抗体－薬物コンジュゲートを含む組成物の治療有効量を対象に投与することを含む。
一部の実施形態において、対象は固形腫瘍を有する。一部の実施形態において、癌は、乳癌、中咽頭癌、卵巣癌、Ｂ細胞リンパ腫、又は非ホジキンリンパ腫である。一部の実施形態において、癌は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、黒色腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、結腸直腸癌、又は多発性骨髄腫である。
一態様において、本開示は、腫瘍成長速度を低下させる方法に関し、この方法は、本明細書に記載されるとおりの抗体又はその抗原結合断片、又は本明細書に記載されるとおりの抗体－薬物コンジュゲートを含む組成物の有効量を、それを必要としている対象に投与することを含む。
一態様において、本開示は、腫瘍細胞を死滅させる方法に関し、この方法は、本明細書に記載されるとおりの抗体又はその抗原結合断片、又は本明細書に記載されるとおりの抗体－薬物コンジュゲートを含む組成物の有効量を、それを必要としている対象に投与することを含む。
一態様において、本開示は、本明細書に記載されるとおりの抗体又はその抗原結合断片と、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物に関する。
一態様において、本開示は、本明細書に記載されるとおりの抗体薬物コンジュゲートと、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物に関する。
一部の実施形態において、抗体はＩｇＧ１抗体である。一部の実施形態において、抗体はヒトＩｇＧ１抗体である。
一態様において、本開示は、相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２、及び３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）であって、ＶＨ ＣＤＲ１領域が選択のＶＨ ＣＤＲ１アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含み、ＶＨ ＣＤＲ２領域が選択のＶＨ ＣＤＲ２アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含み、及びＶＨ ＣＤＲ３領域が選択のＶＨ ＣＤＲ３アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含むＶＨと；ＣＤＲ１、２、及び３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、ＶＬ ＣＤＲ１領域が選択のＶＬ ＣＤＲ１アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬ ＣＤＲ２領域が選択のＶＬ ＣＤＲ２アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含み、及びＶＬ ＣＤＲ３領域が選択のＶＬ ＣＤＲ３アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含むＶＬとを含み、選択のＶＨ ＣＤＲ１、２、及び３アミノ酸配列及び選択のＶＬ ＣＤＲ１、２、及び３アミノ酸配列が、表３に示されるとおりの抗体のうちの１つから選択される、４－１ＢＢに結合するＩｇＧ１抗体又はその抗原結合断片に関する。一部の実施形態において、抗体はヒトＩｇＧ１抗体である。
一態様において、本開示は、選択のＶＨ配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、選択のＶＬ配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、選択のＶＨ配列及び選択のＶＬ配列が、表３に示されるとおりの抗体のうちの１つから選択される、４－１ＢＢに結合するＩｇＧ１抗体又はその抗原結合断片に関する。一部の実施形態において、抗体はヒトＩｇＧ１抗体である。
一態様において、本開示は、癌を有する対象を治療する方法に関し、この方法は、治療有効量の抗４－１ＢＢ ＩｇＧ１抗体又はその抗原結合断片と、治療有効量の抗ＰＤ－１抗体又はその抗原結合断片とを対象に投与することを含む。
一部の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は抗ＰＤ－１ ＩｇＧ４抗体である。一部の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体はペンブロリズマブである。
一態様において、本開示は、癌を有する対象を治療する方法に関し、この方法は、治療有効量の抗４－１ＢＢ ＩｇＧ１抗体又はその抗原結合断片と、治療有効量の抗ＣＴＬＡ４抗体又はその抗原結合断片とを対象に投与することを含む。
一部の実施形態において、抗ＣＴＬＡ４抗体は抗ＣＴＬＡ４ ＩｇＧ１抗体又は抗ＣＴＬＡ４ ＩｇＧ２抗体である。一部の実施形態において、抗ＣＴＬＡ４抗体はイピリムマブ又はトレメリムマブである。
本明細書で使用されるとき、用語「癌」は、自律的増殖能を有する細胞を指す。かかる細胞の例としては、急速に増殖する細胞成長によって特徴付けられる異常な状態又は条件を有する細胞が挙げられる。この用語には、病理組織型又は侵襲性のステージに関わらず、癌性成長、例えば、腫瘍；発癌過程、転移性組織、及び悪性形質転換細胞、組織、又は器官が含まれることが意図される。また、呼吸器系、心血管系、腎臓系、生殖器系、血液系、神経系、肝臓系、胃腸系、及び内分泌系などの様々な器官系の悪性腫瘍；並びに多くの結腸癌、腎細胞癌、前立腺癌及び／又は精巣腫瘍、非肺小細胞癌、及び小腸癌などの悪性腫瘍を含む腺癌も含まれる。「自然発生する」癌には、対象に癌細胞を移植することによって実験的に誘発されたのでない任意の癌が含まれ、例えば、自発的に発生する癌、患者が１つ又は複数の発癌物質に曝露することによって引き起こされる癌、トランスジェニック癌遺伝子の挿入又は腫瘍抑制遺伝子のノックアウトによって生じる癌、及び感染、例えばウイルス感染によって引き起こされる癌が挙げられる。用語「癌腫」は当該技術分野で認められており、上皮又は内分泌組織の悪性腫瘍を指す。この用語にはまた癌肉腫も含まれ、これは、癌腫性及び肉腫性組織で構成される悪性腫瘍を含む。「腺癌」は、腺組織に由来する癌腫、又は腫瘍細胞が認識可能な腺状構造を形成する癌腫を指す。用語「肉腫」は当該技術分野で認められており、間葉性由来の悪性腫瘍を指す。用語「造血新生物障害」は、造血起源の過形成性／新生物性細胞が関わる疾患を含む。造血新生物障害は、骨髄、リンパ球又は赤血球系統、又はその前駆細胞から生じ得る。
本明細書で使用されるとき、用語「抗体」は、少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４、５、又は６つ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）（例えば、免疫グロブリン軽鎖からの３つのＣＤＲのいずれか又は免疫グロブリン重鎖からの３つのＣＤＲのいずれか）を含み、且つエピトープへの特異的結合能を有する任意の抗原結合分子を指す。抗体の非限定的な例としては、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、単鎖抗体、キメラ抗体、ヒト抗体、及びヒト化抗体が挙げられる。一部の実施形態において、抗体は、ヒト抗体のＦｃ領域を含むことができる。用語の抗体にはまた、誘導体、例えば、抗体断片で形成される二重特異性抗体、単鎖抗体、ダイアボディ、線状抗体、及び多重特異性抗体も含まれる。
本明細書で使用されるとき、用語「抗原結合断片」は完全長抗体の一部分を指し、ここで抗体のこの一部分は、抗原への特異的結合能を有する。一部の実施形態において、抗原結合断片は少なくとも１つの可変ドメイン（例えば、重鎖の可変ドメイン又は軽鎖の可変ドメイン）を含む。抗体断片の非限定的な例としては、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片が挙げられる。
本明細書で使用されるとき、用語「ヒト抗体」は、ヒトに存在する内因性核酸（例えば、再配列されたヒト免疫グロブリン重鎖又は軽鎖遺伝子座）によってコードされる抗体を指す。一部の実施形態において、ヒト抗体はヒトから採取されるか、又はヒト細胞培養物（例えば、ヒトハイブリドーマ細胞）中で産生される。一部の実施形態において、ヒト抗体は非ヒト細胞（例えば、マウス又はハムスター細胞株）で産生される。一部の実施形態において、ヒト抗体は細菌又は酵母細胞で産生される。一部の実施形態において、ヒト抗体は、再配列されていない又は再配列されたヒト免疫グロブリン遺伝子座（例えば、重鎖又は軽鎖ヒト免疫グロブリン遺伝子座）を含むトランスジェニック非ヒト動物（例えば、ウシ）で産生される。
本明細書で使用されるとき、用語「キメラ抗体」は、少なくとも２つの異なる抗体（例えば、ヒト及びマウス抗体など、２つの異なる哺乳類種由来の抗体）に存在する配列を含む抗体を指す。キメラ抗体の非限定的な例は、非ヒト（例えば、マウス）抗体の可変ドメイン配列（例えば、軽鎖及び／又は重鎖可変ドメイン配列の全て又は一部）と、ヒト抗体の定常ドメインとを含む抗体である。キメラ抗体の更なる例は本明細書に記載され、当該技術分野において公知である。
本明細書で使用されるとき、用語「ヒト化抗体」は、非ヒト（例えば、マウス）免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含み、且つヒト免疫グロブリンに由来する配列を含む非ヒト抗体を指す。非限定的な例において、ヒト化抗体は、受容抗体の超可変（例えば、ＣＤＲ）領域残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有する非ヒト抗体（例えば、供与抗体）、例えば、マウス、ラット、又はウサギ抗体由来の超可変（例えば、ＣＤＲ）領域残基に置き換えられているヒト抗体（受容抗体）である。一部の実施形態では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基が、対応する非ヒト（例えば、マウス）免疫グロブリン残基によって置き換えられる。一部の実施形態において、ヒト化抗体は、受容抗体に見られない又は供与抗体に見られない残基を含み得る。こうした修飾は、抗体性能を更に精緻化するために行われ得る。一部の実施形態において、ヒト化抗体は、超可変ループ（ＣＤＲ）の全て又は実質的に全てが非ヒト（例えば、マウス）免疫グロブリンのものに対応し、且つフレームワーク領域の全て又は実質的に全てがヒト免疫グロブリンのものである少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含む。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンのＦｃの少なくとも一部分も含み得る。ヒト化抗体は、当該技術分野において公知の分子生物学方法を用いて作製することができる。ヒト化抗体の作成方法の非限定的な例は、本明細書に記載される。
本明細書で使用されるとき、用語「単鎖抗体」は、抗原への特異的結合能を有する少なくとも２つの免疫グロブリン可変ドメイン（例えば、哺乳類免疫グロブリン重鎖又は軽鎖の可変ドメイン）を含む単一のポリペプチドを指す。単鎖抗体の非限定的な例は、本明細書に記載される。
本明細書で使用されるとき、用語「多量体抗体」は、４つ以上の（例えば、６、８、又は１０個の）免疫グロブリン可変ドメインを含む抗体を指す。一部の実施形態において、多量体抗体は、１つの標的分子（例えば、４－１ＢＢ）を哺乳類細胞（例えば、ヒトＴ細胞、ヒト腫瘍細胞）の表面上にある少なくとも１つの第２の標的分子（例えば、ＨＥＲ２）に架橋することが可能である。
本明細書で使用されるとき、用語「対象」及び「患者」は、本明細書全体を通じて同義的に使用され、本発明の方法による治療が提供される動物、ヒト又は非ヒトを言い表す。本発明によれば、獣医学的及び非獣医学的適用が企図される。ヒト患者は、成人しているヒト又は若年のヒト（例えば、１８歳未満のヒト）であり得る。ヒトに加えて、患者には、限定はされないが、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ウサギ、フェレット、ネコ、イヌ、及び霊長類が含まれる。例えば、非ヒト霊長類（例えば、サル、チンパンジー、ゴリラなど）、げっ歯類（例えば、ラット、マウス、スナネズミ、ハムスター、フェレット、ウサギ）、ウサギ類、ブタ類（例えば、ブタ、ミニブタ）、ウマ類、イヌ類、ネコ類、ウシ類、及び他の家庭内、畜産、及び動物園動物が挙げられる。
本明細書で使用されるとき、抗体に言及する場合に、語句「特異的に結合している」及び「～に特異的に結合する」は、その相互作用が標的分子上の特定の構造（即ち、抗原決定基又はエピトープ）の存在に依存するため、他の分子と比べてその標的分子（例えば、４－１ＢＢ）と好んで相互作用する抗体を意味する；換言すれば、この試薬は、全般的にあらゆる分子というよりむしろ、特異的な構造を含む分子を認識してそれに結合するものである。標的分子に特異的に結合する抗体は、標的特異抗体と称されてもよい。例えば、４－１ＢＢ分子に特異的に結合する抗体は、４－１ＢＢ特異抗体又は抗４－１ＢＢ抗体と称されてもよい。
本明細書で使用されるとき、用語「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」は、少なくとも２アミノ酸の任意の長さのアミノ酸のポリマーを指して同義的に使用される。
本明細書で使用されるとき、用語「ポリヌクレオチド」、「核酸分子」、及び「核酸配列」は、本明細書では、少なくとも２ヌクレオチドの任意の長さのヌクレオチドのポリマーを指して同義的に使用され、限定なしに、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッド、及びその修飾体が挙げられる。
特に定義しない限り、本明細書で使用される全ての科学技術用語は、本発明が属する技術分野の当業者が一般的に理解するのと同じ意味を有する。本発明における使用のため、方法及び材料が本明細書に記載される；その他の、当該技術分野において公知の好適な方法及び材料もまた用いることができる。材料、方法、及び例は例示に過ぎず、限定することを意図するものではない。本明細書において言及される全ての刊行物、特許出願、特許、配列、データベースエントリ、及び他の参考文献は、全体として参照により援用される。矛盾が生じる場合、定義を含め、本明細書が優先するものとする。
本発明の他の特徴及び利点が以下の詳細な説明及び図から、並びに特許請求の範囲から明らかとなるであろう。
抗ｈ４－１ＢＢ抗体の例示的作製プロトコルの第１部を示すフローチャートである。 抗ｈ４－１ＢＢ抗体の例示的作製プロトコルの第２部を示すフローチャートである。 ヒト４－１ＢＢとの抗ｈ４－１ＢＢ抗体の結合活性を示す一組のフローサイトメトリー結果である。 サル４－１ＢＢ（ＣＨＯ－ｒ４－１ＢＢ）、マウス４－１ＢＢ（ＣＨＯ－ｍ４－１ＢＢ）、及びヒト－マウスキメラ４－１ＢＢ（ＣＨＯ－ｃ４－１ＢＢ）との抗ｈ４－１ＢＢ抗体の交差反応性を分析したフローサイトメトリー結果を示す一組のグラフである。ＮＣは陰性対照を意味する。 キメラ抗ｈ４－１ＢＢ抗体１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ４及びヒト４－１ＢＢを使用した表面プラズマ共鳴（ＳＰＲ）の結果を示すグラフである。 キメラ抗ｈ４－１ＢＢ抗体２９－６Ａ５－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２及びヒト４－１ＢＢを使用した表面プラズマ共鳴（ＳＰＲ）の結果を示すグラフである。 マウス抗ｈ４－１ＢＢ抗体１Ｃ４及び５Ｆ９、並びにウレルマブで治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）の時間の経過に伴う体重を示すグラフである。 マウス抗ｈ４－１ＢＢ抗体１Ｃ４及び５Ｆ９、並びにウレルマブで治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）の時間の経過に伴う体重変化率を示すグラフである。 マウス抗ｈ４－１ＢＢ抗体１Ｃ４及び５Ｆ９、並びにウレルマブで治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）における時間の経過に伴う腫瘍サイズを示すグラフである。 マウス抗ｈ４－１ＢＢ抗体２９－６Ａ５、２９－４Ａ１０、２９－５Ｆ１０、４５－８Ｆ１、４５－４Ｂ９、及びウレルマブで治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）の時間の経過に伴う体重を示すグラフである。 マウス抗ｈ４－１ＢＢ抗体２９－６Ａ５、２９－４Ａ１０、２９－５Ｆ１０、４５－８Ｆ１、４５－４Ｂ９、及びウレルマブで治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）の時間の経過に伴う体重変化率を示すグラフである。 マウス抗ｈ４－１ＢＢ抗体２９－６Ａ５、２９－４Ａ１０、２９－５Ｆ１０、４５－８Ｆ１、４５－４Ｂ９、及びウレルマブで治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）における時間の経過に伴う腫瘍サイズを示すグラフである。 ウレルマブ並びにマウス抗ｈ４－１ＢＢ抗体４５－８Ｅ２、４５－７Ｅ９、４５－７Ｇ９、４５－２Ｂ３、及び４５－２Ｃ１１で治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）の時間の経過に伴う体重を示すグラフである。 ウレルマブ並びにマウス抗ｈ４－１ＢＢ抗体４５－８Ｅ２、４５－７Ｅ９、４５－７Ｇ９、４５－２Ｂ３、及び４５－２Ｃ１１で治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）の時間の経過に伴う体重変化率を示すグラフである。 ウレルマブ並びにマウス抗ｈ４－１ＢＢ抗体４５－８Ｅ２、４５－７Ｅ９、４５－７Ｇ９、４５－２Ｂ３、及び４５－２Ｃ１１で治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）における時間の経過に伴う腫瘍サイズを示すグラフである。 ウレルマブ並びにマウス抗ｈ４－１ＢＢ抗体１６－１Ｃ４、５５－８Ｆ６、及び５４－８Ｂ１１で治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）の時間の経過に伴う体重を示すグラフである。 ウレルマブ並びにマウス抗ｈ４－１ＢＢ抗体１６－１Ｃ４、５５－８Ｆ６、及び５４－８Ｂ１１で治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）の時間の経過に伴う体重変化率を示すグラフである。 ウレルマブ並びにマウス抗ｈ４－１ＢＢ抗体１６－１Ｃ４、５５－８Ｆ６、及び５４－８Ｂ１１で治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）における時間の経過に伴う腫瘍サイズを示すグラフである。 ウレルマブ並びにマウス抗ｈ４－１ＢＢ抗体５４－１Ａ１１、５５－１Ｅ３、５５－８Ｈ５、及び５６－２Ａ６で治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）の時間の経過に伴う体重を示すグラフである。 ウレルマブ並びにマウス抗ｈ４－１ＢＢ抗体５４－１Ａ１１、５５－１Ｅ３、５５－８Ｈ５、及び５６－２Ａ６で治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）の時間の経過に伴う体重変化率を示すグラフである。 ウレルマブ並びにマウス抗ｈ４－１ＢＢ抗体５４－１Ａ１１、５５－１Ｅ３、５５－８Ｈ５、及び５６－２Ａ６で治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）における時間の経過に伴う腫瘍サイズを示すグラフである。 ウレルマブ並びにマウス抗ｈ４－１ＢＢ抗体５８－４Ｂ８、６９－３Ｃ２、及び６９－４Ｂ１１で治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）の時間の経過に伴う体重を示すグラフである。 ウレルマブ並びにマウス抗ｈ４－１ＢＢ抗体５８－４Ｂ８、６９－３Ｃ２、及び６９－４Ｂ１１で治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）の時間の経過に伴う体重変化率を示すグラフである。 ウレルマブ並びにマウス抗ｈ４－１ＢＢ抗体５８－４Ｂ８、６９－３Ｃ２、及び６９－４Ｂ１１で治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）における時間の経過に伴う腫瘍サイズを示すグラフである。 抗ｈ４－１ＢＢ抗体３０－５Ｆ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、３０－５Ｆ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ４、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ４、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１、３０－５Ｆ９、１６－１Ｃ４、ウトミルマブ、及びウレルマブで治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）の時間の経過に伴う体重を示すグラフである。 抗ｈ４－１ＢＢ抗体３０－５Ｆ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、３０－５Ｆ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ４、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ４、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１、３０－５Ｆ９、１６－１Ｃ４、ウトミルマブ、及びウレルマブで治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）の時間の経過に伴う体重変化率を示すグラフである。 抗ｈ４－１ＢＢ抗体３０－５Ｆ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、３０－５Ｆ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ４、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ４、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１、３０－５Ｆ９、１６－１Ｃ４、ウトミルマブ、及びウレルマブで治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）における時間の経過に伴う腫瘍サイズを示すグラフである。 抗ｈ４－１ＢＢ抗体１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、２９－６Ａ５－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、３０－５Ｆ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、４５－２Ｂ３－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、４５－７Ｅ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、４５－７Ｇ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、４５－８Ｅ２－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、４５－８Ｆ１－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、及びウレルマブで治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）の時間の経過に伴う体重を示すグラフである。 抗ｈ４－１ＢＢ抗体１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、２９－６Ａ５－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、３０－５Ｆ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、４５－２Ｂ３－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、４５－７Ｅ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、４５－７Ｇ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、４５－８Ｅ２－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、４５－８Ｆ１－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、及びウレルマブで治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）の時間の経過に伴う体重変化率を示すグラフである。 抗ｈ４－１ＢＢ抗体１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、２９－６Ａ５－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、３０－５Ｆ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、４５－２Ｂ３－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、４５－７Ｅ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、４５－７Ｇ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、４５－８Ｅ２－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、４５－８Ｆ１－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、及びウレルマブで治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）における時間の経過に伴う腫瘍サイズを示すグラフである。 抗ｈ４－１ＢＢ抗体６Ａ５－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ２、６Ａ５－Ｈ１Ｋ３－ＩｇＧ２、６Ａ５－Ｈ２Ｋ２－ＩｇＧ２、６Ａ５、及びウレルマブで治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）の時間の経過に伴う体重を示すグラフである。 抗ｈ４－１ＢＢ抗体６Ａ５－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ２、６Ａ５－Ｈ１Ｋ３－ＩｇＧ２、６Ａ５－Ｈ２Ｋ２－ＩｇＧ２、６Ａ５、及びウレルマブで治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）の時間の経過に伴う体重変化率を示すグラフである。 抗ｈ４－１ＢＢ抗体６Ａ５－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ２、６Ａ５－Ｈ１Ｋ３－ＩｇＧ２、６Ａ５－Ｈ２Ｋ２－ＩｇＧ２、６Ａ５、及びウレルマブで治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）における時間の経過に伴う腫瘍サイズを示すグラフである。 抗ｈ４－１ＢＢ抗体１Ｃ４－Ｈ１Ｋ１－ＩｇＧ４、１Ｃ４－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ４、５Ｆ９－Ｈ１Ｋ１－ＩｇＧ４、５Ｆ９－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ４、１６－１Ｃ４、３０－５Ｆ９、及びウレルマブで治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）の時間の経過に伴う体重を示すグラフである。 抗ｈ４－１ＢＢ抗体１Ｃ４－Ｈ１Ｋ１－ＩｇＧ４、１Ｃ４－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ４、５Ｆ９－Ｈ１Ｋ１－ＩｇＧ４、５Ｆ９－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ４、１６－１Ｃ４、３０－５Ｆ９、及びウレルマブで治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）の時間の経過に伴う体重変化率を示すグラフである。 抗ｈ４－１ＢＢ抗体１Ｃ４－Ｈ１Ｋ１－ＩｇＧ４、１Ｃ４－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ４、５Ｆ９－Ｈ１Ｋ１－ＩｇＧ４、５Ｆ９－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ４、１６－１Ｃ４、３０－５Ｆ９、及びウレルマブで治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）における時間の経過に伴う腫瘍サイズを示すグラフである。 抗ｈ４－１ＢＢ抗体１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１（Ｇ２）、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ３）、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ４（Ｇ４）、１６－１Ｃ４（Ｇ５）、及びウレルマブ（Ｇ６）で治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）の時間の経過に伴う体重を示すグラフである。 抗ｈ４－１ＢＢ抗体１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１（Ｇ２）、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ３）、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ４（Ｇ４）、１６－１Ｃ４（Ｇ５）、及びウレルマブ（Ｇ６）で治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）の時間の経過に伴う体重変化率を示すグラフである。 抗ｈ４－１ＢＢ抗体１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１（Ｇ２）、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ３）、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ４（Ｇ４）、１６－１Ｃ４（Ｇ５）、及びウレルマブ（Ｇ６）で治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）における時間の経過に伴う腫瘍サイズを示すグラフである。 抗ｈ４－１ＢＢ抗体５４－８Ｂ１１－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ２）、５５－８Ｆ６－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ３）、５６－２Ａ６－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ４）、６９－３Ｃ２－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ５）、６１－６Ａ７－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ６）、７０－６Ｆ１０－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ７）、７０－３Ｆ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ８）、４５－４Ｂ９－ｍＨｖｋｖ－ＩｇＧ２（Ｇ９）、及びまたウレルマブ（Ｇ１０）で治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）の時間の経過に伴う体重を示すグラフである。 抗ｈ４－１ＢＢ抗体５４－８Ｂ１１－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ２）、５５－８Ｆ６－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ３）、５６－２Ａ６－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ４）、６９－３Ｃ２－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ５）、６１－６Ａ７－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ６）、７０－６Ｆ１０－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ７）、７０－３Ｆ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ８）、４５－４Ｂ９－ｍＨｖｋｖ－ＩｇＧ２（Ｇ９）、及びまたウレルマブ（Ｇ１０）で治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）の時間の経過に伴う体重変化率を示すグラフである。 抗ｈ４－１ＢＢ抗体５４－８Ｂ１１－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ２）、５５－８Ｆ６－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ３）、５６－２Ａ６－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ４）、６９－３Ｃ２－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ５）、６１－６Ａ７－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ６）、７０－６Ｆ１０－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ７）、７０－３Ｆ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ８）、４５－４Ｂ９－ｍＨｖｋｖ－ＩｇＧ２（Ｇ９）、及びまたウレルマブ（Ｇ１０）で治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）における時間の経過に伴う腫瘍サイズを示すグラフである。 抗ｈ４－１ＢＢ抗体６Ａ５－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ２、６Ａ５－Ｈ１Ｋ３－ＩｇＧ２、１Ｃ４－Ｈ１Ｋ１－ＩｇＧ２、１Ｃ４－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ２、５Ｆ９－Ｈ１Ｋ１－ＩｇＧ２、５Ｆ９－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ２、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、２９－６Ａ５－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、３０－５Ｆ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、及びウレルマブで治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）の時間の経過に伴う体重を示すグラフである。 抗ｈ４－１ＢＢ抗体６Ａ５－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ２、６Ａ５－Ｈ１Ｋ３－ＩｇＧ２、１Ｃ４－Ｈ１Ｋ１－ＩｇＧ２、１Ｃ４－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ２、５Ｆ９－Ｈ１Ｋ１－ＩｇＧ２、５Ｆ９－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ２、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、２９－６Ａ５－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、３０－５Ｆ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、及びウレルマブで治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）の時間の経過に伴う体重変化率を示すグラフである。 抗ｈ４－１ＢＢ抗体６Ａ５－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ２、６Ａ５－Ｈ１Ｋ３－ＩｇＧ２、１Ｃ４－Ｈ１Ｋ１－ＩｇＧ２、１Ｃ４－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ２、５Ｆ９－Ｈ１Ｋ１－ＩｇＧ２、５Ｆ９－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ２、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、２９－６Ａ５－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、３０－５Ｆ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、及びウレルマブで治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）における時間の経過に伴う腫瘍サイズを示すグラフである。 抗ｈ４－１ＢＢ抗体ウレルマブ－ＩｇＧ１、ウレルマブ－ＩｇＧ２、ウレルマブ－ＩｇＧ４、ウレルマブ－ＩｇＧ１－Ｎ２９７Ａ、ウレルマブ－ＩｇＧ１－ＦＣ－ＳＩ、及びウレルマブ－ＩｇＧ１－ＦＣ－Ｖ１１で治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）の時間の経過に伴う体重を示すグラフである。 抗ｈ４－１ＢＢ抗体ウレルマブ－ＩｇＧ１、ウレルマブ－ＩｇＧ２、ウレルマブ－ＩｇＧ４、ウレルマブ－ＩｇＧ１－Ｎ２９７Ａ、ウレルマブ－ＩｇＧ１－ＦＣ－ＳＩ、及びウレルマブ－ＩｇＧ１－ＦＣ－Ｖ１１で治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）の時間の経過に伴う体重変化率を示すグラフである。 抗ｈ４－１ＢＢ抗体ウレルマブ－ＩｇＧ１、ウレルマブ－ＩｇＧ２、ウレルマブ－ＩｇＧ４、ウレルマブ－ＩｇＧ１－Ｎ２９７Ａ、ウレルマブ－ＩｇＧ１－ＦＣ－ＳＩ、及びウレルマブ－ＩｇＧ１－ＦＣ－Ｖ１１で治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）における時間の経過に伴う腫瘍サイズを示すグラフである。 抗ｈ４－１ＢＢ抗体１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ４、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１－ＦＣ－Ｖ１１、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１－ＦＣ－ＳＩ、１６－１Ｃ４、及びウレルマブで治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）の時間の経過に伴う体重を示すグラフである。 抗ｈ４－１ＢＢ抗体１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ４、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１－ＦＣ－Ｖ１１、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１－ＦＣ－ＳＩ、１６－１Ｃ４、及びウレルマブで治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）の時間の経過に伴う体重変化率を示すグラフである。 抗ｈ４－１ＢＢ抗体１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ４、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１－ＦＣ－Ｖ１１、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１－ＦＣ－ＳＩ、１６－１Ｃ４、及びウレルマブで治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）における時間の経過に伴う腫瘍サイズを示すグラフである。 Ｋａｂａｔの付番により定義されるとおりの幾つかの抗ｈ４－１ＢＢ抗体のＣＤＲ配列及びそのヒト化抗ｈ４－１ＢＢ抗体のＣＤＲ配列を一覧にする。 Ｋａｂａｔの付番により定義されるとおりの幾つかの抗ｈ４－１ＢＢ抗体のＣＤＲ配列及びそのヒト化抗ｈ４－１ＢＢ抗体のＣＤＲ配列を一覧にする。 Ｃｈｏｔｈｉａの付番により定義されるとおりの幾つかの抗ｈ４－１ＢＢ抗体のＣＤＲ配列及びそのヒト化抗ｈ４－１ＢＢ抗体のＣＤＲ配列を一覧にする。 Ｃｈｏｔｈｉａの付番により定義されるとおりの幾つかの抗ｈ４－１ＢＢ抗体のＣＤＲ配列及びそのヒト化抗ｈ４－１ＢＢ抗体のＣＤＲ配列を一覧にする。 ヒト４－１ＢＢ（「ｈ４－１ＢＢ」）、マウス４－１ＢＢ（「ｍ４－１ＢＢ」）、サル４－１ＢＢ（「ｒｍ４－１ＢＢ」又は「ｒ４－１ＢＢ」）、及びキメラ４－１ＢＢ（「ｃｈｉ４－１ＢＢ」又は「ｃ４－１ＢＢ」）のアミノ酸配列を一覧にする。 ＩＣ４をベースとするヒト化抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列を一覧にする。 ６Ａ５をベースとするヒト化抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列を一覧にする。 ５Ｆ９をベースとするヒト化抗抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列を一覧にする。 幾つかのマウス抗ｈ４－１ＢＢ抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列を一覧にする。 幾つかのマウス抗ｈ４－１ＢＢ抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列を一覧にする。 幾つかのマウス抗ｈ４－１ＢＢ抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列を一覧にする。 幾つかのマウス抗ｈ４－１ＢＢ抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列を一覧にする。 幾つかのマウス抗ｈ４－１ＢＢ抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列を一覧にする。 抗ｈ４－１ＢＢ抗体ウレルマブ－ｍＩｇＧ１（Ｇ２）、ウレルマブ－ｍＩｇＧ２Ａ（Ｇ３）、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ｍＩｇＧ１（Ｇ４）、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ｍＩｇＧ２Ａ（Ｇ５）、ウレルマブ（Ｇ６）、ウレルマブ－ＩｇＧ１（Ｇ７）、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１（Ｇ８）及び１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ４（Ｇ９）で治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）の時間の経過に伴う体重を示すグラフである。 抗ｈ４－１ＢＢ抗体ウレルマブ－ｍＩｇＧ１（Ｇ２）、ウレルマブ－ｍＩｇＧ２Ａ（Ｇ３）、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ｍＩｇＧ１（Ｇ４）、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ｍＩｇＧ２Ａ（Ｇ５）、ウレルマブ（Ｇ６）、ウレルマブ－ＩｇＧ１（Ｇ７）、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１（Ｇ８）及び１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ４（Ｇ９）で治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）の時間の経過に伴う体重変化率を示すグラフである。 抗ｈ４－１ＢＢ抗体ウレルマブ－ｍＩｇＧ１（Ｇ２）、ウレルマブ－ｍＩｇＧ２Ａ（Ｇ３）、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ｍＩｇＧ１（Ｇ４）、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ｍＩｇＧ２Ａ（Ｇ５）、ウレルマブ（Ｇ６）、ウレルマブ－ＩｇＧ１（Ｇ７）、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１（Ｇ８）及び１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ４（Ｇ９）で治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）における時間の経過に伴う腫瘍サイズを示すグラフである。 抗ｈ４－１ＢＢ抗体ウレルマブ、ウレルマブ－ＩｇＧ１、１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１、１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ４、１Ｃ４－Ｈ１Ｋ１－ＩｇＧ１、１Ｃ４－Ｈ１Ｋ１－ＩｇＧ４、１Ｃ４－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ１、１Ｃ４－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ４、６Ａ５－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ１、５Ｆ９－Ｈ１Ｋ１－ＩｇＧ１及び１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１－ＦＣ－Ｖ１１で治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）の時間の経過に伴う体重を示すグラフである。 抗ｈ４－１ＢＢ抗体ウレルマブ、ウレルマブ－ＩｇＧ１、１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１、１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ４、１Ｃ４－Ｈ１Ｋ１－ＩｇＧ１、１Ｃ４－Ｈ１Ｋ１－ＩｇＧ４、１Ｃ４－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ１、１Ｃ４－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ４、６Ａ５－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ１、５Ｆ９－Ｈ１Ｋ１－ＩｇＧ１及び１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１－ＦＣ－Ｖ１１で治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）の時間の経過に伴う体重変化率を示すグラフである。 抗ｈ４－１ＢＢ抗体ウレルマブ、ウレルマブ－ＩｇＧ１、１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１、１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ４、１Ｃ４－Ｈ１Ｋ１－ＩｇＧ１、１Ｃ４－Ｈ１Ｋ１－ＩｇＧ４、１Ｃ４－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ１、１Ｃ４－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ４、６Ａ５－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ１、５Ｆ９－Ｈ１Ｋ１－ＩｇＧ１及び１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１－ＦＣ－Ｖ１１で治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）における時間の経過に伴う腫瘍サイズを示すグラフである。 抗ｈ４－１ＢＢ抗体１Ｃ４－ＩｇＧ１－Ｈ１Ｋ１、１Ｃ４－ＩｇＧ４－Ｈ１Ｋ１、ウレルマブ－ＩｇＧ１、ウレルマブ－ＩｇＧ４、キイトルーダ－ＩｇＧ４、１Ｃ４－ＩｇＧ１－Ｈ１Ｋ１＋キイトルーダ－ＩｇＧ４、１Ｃ４－ＩｇＧ４－Ｈ１Ｋ１＋キイトルーダ－ＩｇＧ４、ウレルマブ－ＩｇＧ１＋キイトルーダ－ＩｇＧ４及びウレルマブ－ＩｇＧ４＋キイトルーダ－ＩｇＧ４で治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）の時間の経過に伴う体重を示すグラフである。 抗ｈ４－１ＢＢ抗体１Ｃ４－ＩｇＧ１－Ｈ１Ｋ１、１Ｃ４－ＩｇＧ４－Ｈ１Ｋ１、ウレルマブ－ＩｇＧ１、ウレルマブ－ＩｇＧ４、キイトルーダ－ＩｇＧ４、１Ｃ４－ＩｇＧ１－Ｈ１Ｋ１＋キイトルーダ－ＩｇＧ４、１Ｃ４－ＩｇＧ４－Ｈ１Ｋ１＋キイトルーダ－ＩｇＧ４、ウレルマブ－ＩｇＧ１＋キイトルーダ－ＩｇＧ４及びウレルマブ－ＩｇＧ４＋キイトルーダ－ＩｇＧ４で治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）の時間の経過に伴う体重変化率を示すグラフである。 抗ｈ４－１ＢＢ抗体１Ｃ４－ＩｇＧ１－Ｈ１Ｋ１、１Ｃ４－ＩｇＧ４－Ｈ１Ｋ１、ウレルマブ－ＩｇＧ１、ウレルマブ－ＩｇＧ４、キイトルーダ－ＩｇＧ４、１Ｃ４－ＩｇＧ１－Ｈ１Ｋ１＋キイトルーダ－ＩｇＧ４、１Ｃ４－ＩｇＧ４－Ｈ１Ｋ１＋キイトルーダ－ＩｇＧ４、ウレルマブ－ＩｇＧ１＋キイトルーダ－ＩｇＧ４及びウレルマブ－ＩｇＧ４＋キイトルーダ－ＩｇＧ４で治療したＭＣ－３８腫瘍細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）における時間の経過に伴う腫瘍サイズを示すグラフである。 種々の抗ｈ４－１ＢＢ抗体で治療したＢ１６－Ｆ１０癌細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）の時間の経過に伴う体重を示すグラフである。 種々の抗ｈ４－１ＢＢ抗体で治療したＢ１６－Ｆ１０癌細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）の時間の経過に伴う体重変化率を示すグラフである。 種々の抗ｈ４－１ＢＢ抗体で治療したＢ１６－Ｆ１０癌細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）における時間の経過に伴う腫瘍サイズを示すグラフである。 種々の抗ｈ４－１ＢＢ抗体で治療したＥＬ４癌細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）の時間の経過に伴う体重を示すグラフである。 種々の抗ｈ４－１ＢＢ抗体で治療したＥＬ４癌細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）の時間の経過に伴う体重変化率を示すグラフである。 種々の抗ｈ４－１ＢＢ抗体で治療したＥＬ４癌細胞を有するヒト化４－１ＢＢマウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）における時間の経過に伴う腫瘍サイズを示すグラフである。 脾臓試料を分析する２つの蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）手順を示す図である。 脾臓試料を分析する２つの蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）手順を示す図である。 腫瘍試料を分析する２つのＦＡＣＳ手順を示す図である。 腫瘍試料を分析する２つのＦＡＣＳ手順を示す図である。 腫瘍細胞中のＣＤ４５＋細胞の割合を示すグラフである。 腫瘍細胞中のＣＤ４５＋細胞数を示すグラフである。 腫瘍細胞中のＣＤ１１ｂ＋細胞の割合を示すグラフである。 腫瘍試料におけるＣＤ４５＋細胞中のＮＫ細胞の割合を示すグラフである。 腫瘍試料におけるＣＤ４５＋細胞中のＣＤ３＋細胞の割合を示すグラフである。 腫瘍試料におけるＣＤ３＋細胞中のＣＤ８＋細胞の割合を示すグラフである。 腫瘍試料におけるＣＤ３＋細胞中のＣＤ４＋ＦｏｘＰ３－細胞の割合を示すグラフである。 腫瘍試料におけるＣＤ３＋細胞中のＴｒｅｇ細胞の割合を示すグラフである。 腫瘍試料におけるＮＫ細胞中のｈＣＤ１３７＋細胞の割合を示すグラフである。 腫瘍試料におけるＣＤ３＋細胞中のｈＣＤ１３７＋細胞の割合を示すグラフである。 腫瘍試料におけるＣＤ８＋細胞中のｈＣＤ１３７＋細胞の割合を示すグラフである。 腫瘍試料におけるＣＤ４＋ＦｏｘＰ３－細胞中のｈＣＤ１３７＋細胞の割合を示すグラフである。 腫瘍試料におけるＴｒｅｇ細胞中のｈＣＤ１３７＋細胞の割合を示すグラフである。 腫瘍試料におけるＮＫ細胞中のｈＣＤ１３７＋細胞数を示すグラフである。 腫瘍試料におけるＣＤ３＋細胞中のｈＣＤ１３７＋細胞数を示すグラフである。 腫瘍試料におけるＣＤ８＋細胞中のｈＣＤ１３７＋細胞数を示すグラフである。 腫瘍試料におけるＣＤ４＋ＦｏｘＰ３－細胞中のｈＣＤ１３７＋細胞数を示すグラフである。 腫瘍試料におけるＴｒｅｇ細胞中のｈＣＤ１３７＋細胞数を示すグラフである。 腫瘍試料におけるＣＤ３＋細胞中のＣＤ８＋／Ｔｒｅｇ細胞の割合を示すグラフである。 腫瘍試料におけるＣＤ８＋細胞中のＫｉ６７＋細胞の割合を示すグラフである。 腫瘍試料におけるＣＤ４＋ＦｏｘＰ３－細胞中のＫｉ６７＋細胞の割合を示すグラフである。 腫瘍試料におけるＴｒｅｇ細胞中のＫｉ６７＋細胞の割合を示すグラフである。 腫瘍試料におけるＣＤ８＋細胞中のＥｏｍｅｓ＋細胞数を示すグラフである。 腫瘍試料におけるＣＤ４＋ＦｏｘＰ３＋細胞中のＥｏｍｅｓ＋細胞数を示すグラフである。 腫瘍試料におけるＣＤ８＋細胞中のＴ－ｂｅｔ＋細胞数を示すグラフである。 腫瘍試料におけるＣＤ４＋ＦｏｘＰ３－細胞中のＴ－ｂｅｔ＋細胞数を示すグラフである。
本開示は、ＴＮＦＲＳＦ９（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー９；別名「４－１ＢＢ」又は「ＣＤ１３７」）に結合する抗体、その抗原結合断片の例を提供する。
４－１ＢＢ及び癌
免疫系は、体内の正常細胞と、生体が「外来性」と見る細胞との間を区別することができ、これにより免疫系は、正常細胞をそのままにしておきつつ外来細胞を攻撃することが可能になる。この機構には時に、免疫チェックポイントと呼ばれるタンパク質が関わる。免疫チェックポイントは、シグナルを強めることも（共刺激分子）、シグナルを弱めることもある免疫系内の分子である。
チェックポイント阻害因子は、免疫系が正常組織を攻撃するのを防ぎ、それにより自己免疫疾患を防ぐことができる。多くの腫瘍細胞もまた、チェックポイント阻害因子を発現する。これらの腫瘍細胞は、特に腫瘍抗原に特異的なＴ細胞における特定の免疫チェックポイント経路を利用することにより免疫監視機構を逃れる（Ｃｒｅｅｌａｎ，Ｂｅｎｊａｍｉｎ Ｃ．「肺癌における免疫チェックポイント阻害薬の最新情報（Ｕｐｄａｔｅ ｏｎ ｉｍｍｕｎｅ ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）」．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｏｎｔｒｏｌ ２１．１（２０１４）：８０－８９）。多くの免疫チェックポイントはリガンド－受容体相互作用によって惹起されるため、リガンド及び／又はその受容体に対する抗体によって容易に遮断することができる。
４－１ＢＢ（「ＴＮＦＲＳＦ９」又は「ＣＤ１３７」）は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体ファミリーのメンバーである。これは３つのＮ－グリコシル化部位と１つの潜在的なＯ－グリコシル化部位とを有する。これはＩ型膜貫通タンパク質であり、主に、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、及び樹状細胞（ＤＣ）細胞の表面に発現する。ヒトＣＤ１３７遺伝子は１Ｐ３６領域（１番染色体）にあって、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤが３６０４であり、２５５アミノ酸をコードする。ヒトＣＤ１３７タンパク質分子には２つの形態：膜結合型及び可溶性型があり、これらはそれぞれ２．８ｋｂ及び１．４ｋｂ ｍＲＮＡによってコードされる。可溶性形態には膜貫通ドメインがない。ＣＤ１３７のリガンドはＣＤ１３７Ｌ（４－１ＢＢＬ）である。ＣＤ１３７ＬはＴＮＦスーパーファミリーに属し、例えば、樹状細胞、Ｂ細胞、及びマクロファージを含めた抗原提示細胞の表面に発現する。ＣＤ１３７とその受容体ＣＤ１３７Ｌとの相互作用によって生じる相乗的刺激性シグナルが、Ｔ細胞及びＮＫ細胞の活性化及び増殖、並びにサイトカインの産生を誘導する。
マウスＣＤ１３７遺伝子は４Ｅ２領域（４番染色体）にあって、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤが２１９４２である。ヒトＣＤ１３７タンパク質はマウスＣＤ１３７タンパク質と約５８％同一である。ヒトＣＤ１３７は、その細胞質テールにマウスＣＤ１３７との著しい違いを含む。詳細には、ＣＤ１３７の細胞質ドメインにおける単一のチロシン残基がヒトＣＤ１３７の２２０位及びマウスＣＤ１３７の２５４位に見られる。ヒトＣＤ１３７はまた、仮想Ｌｃｋ結合部位がマウスＣＤ１３７と異なり、マウスＣＤ１３７はＣＸＣＰ Ｌｃｋ結合モチーフを発現するが、ヒトＣＤ１３７では、この配列がＣＸＦＰに変化する。ヒト及びマウスのいずれのＣＤ１３７も、共通して、ＣＤ１３７Ｌシグナル伝達に応答したサイトカイン（例えば、ＩＬ－２）産生につながる下流シグナル伝達イベントの媒介に不可欠なアダプタータンパク質であるＴＮＦＲ関連因子２の結合部位を２つ有する。
腫瘍組織におけるＣＤ１３７及びそのリガンドの発現異常は、腫瘍発生の間にＣＤ１３７及びそのリガンドに共刺激シグナルの破損又は不活性化があり得ることを示している。特に、腫瘍血管壁のＣＤ１３７発現は腫瘍悪性度と相関し、エビデンスが示すところによれば、アゴニスト抗ＣＤ１３７抗体は腫瘍内皮細胞に作用して活性化Ｔリンパ球の動員を亢進させることができ、これは、アゴニストＣＤ１３７抗体の免疫療法効果を説明し得る更なる作用機序を示唆するものである。
多数の研究により、ＣＤ１３７が抗腫瘍生物療法の潜在的な標的の一つであることが示されている。抗ＣＤ１３７抗体は、恐らくは、Ｔ細胞及びＮＫ細胞の活性化及び増殖を誘導し、サイトカインの産生を増加させ、免疫応答を上方制御し、及び／又は腫瘍に活性化Ｔリンパ球を動員することにより、腫瘍細胞を死滅させ、又は腫瘍成長を阻害することができる。現在までのところ、ＣＤ１３７経路に対する２つの抗体（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂからのウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３）及びＰｆｉｚｅｒからのウトミルマブ（ＰＦ－０５０８２５６６））が、黒色腫、リンパ腫、非ホジキンリンパ腫及び幾つかの進行性固形腫瘍の治療について臨床試験で試験されている。幾つかの臨床試験では、既に有望な予備的臨床結果が得られている。例えば、ＰＦ－０５０８２５６６は、ＰＤ－１阻害薬と同様の最小限の副作用で濾胞性リンパ腫（ＦＬ）の４０％を減少させることができる；これは、例えば、抗ＰＤ－１抗体、又は抗ＯＸ４０抗体を含めた他の薬物との併用で使用されている。予備的実験エビデンスはまた、癌標的薬によりＮＫ細胞の表面のＣＤ１３７発現が増加し得ることも示している。従って、抗ＣＤ１３７抗体を癌標的薬と併用して投与すれば、それによりＮＫ細胞の殺傷効果を亢進させ、治療効果を改善することができる。
ＣＤ１３７及びその機能についての詳細な説明は、例えば、Ｗｅｎ ｅｔ ａｌ．，“４－１ＢＢ ｌｉｇａｎｄ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎｄｕｃｅｓ ＣＤ４ ａｎｄ ＣＤ８ Ｔ ｃｅｌｌ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ，ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，ａｎｄ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｃｙｔｏｌｙｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎ，”Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １６８．１０（２００２）：４８９７－４９０６；Ｂｒｏｌｌ ｅｔ ａｌ．，“ＣＤ１３７ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｔｕｍｏｒ ｖｅｓｓｅｌ ｗａｌｌｓ：ｈｉｇｈ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｔｕｍｏｒｓ，”Ａｍｅｒｉｃａｎ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｐａｔｈｏｌｏｇｙ １１５．４（２００１）：５４３－５４９；及びＰａｌａｚｏｎ ｅｔ ａｌ．，“Ａｇｏｎｉｓｔ ａｎｔｉ－ＣＤ１３７ ｍＡｂ ａｃｔ ｏｎ ｔｕｍｏｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ｅｎｈａｎｃｅ ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ ｏｆ ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ，”Ｃａｎｃｅｒ ｒｅｓｅａｒｃｈ ７１．３（２０１１）：８０１－８１１；Ｋａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，“Ａｎｔｉ－ＣＤ１３７ ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｂｙ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｒｅｖｅｒｓｅ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｂｙ ＣＤ１３７ ｌｉｇａｎｄ．”Ｃａｎｃｅｒ ｒｅｓｅａｒｃｈ（２０１７）：ｃａｎｒｅｓ－０６１０（これらの各々は、全体として参照により援用される）を参照することができる。
本開示は、抗４－１ＢＢ抗体、その抗原結合断片、並びにこれらの抗４－１ＢＢ抗体及び抗原結合断片を使用して腫瘍成長を阻害し、癌を治療する方法を提供する。
抗体及び抗原結合断片
本開示は、本明細書に記載される相補性決定領域（ＣＤＲ）、重鎖可変領域、軽鎖可変領域、重鎖、又は軽鎖を含む抗４－１ＢＢ抗体及びその抗原結合断片を提供する。
一般に、抗体（免疫グロブリンとも称される）は、２つのクラスのポリペプチド鎖、軽鎖と重鎖とで構成される。本開示の非限定的な抗体は、２つの重鎖と２つの軽鎖とを含むインタクトな４本免疫グロブリン鎖抗体であってもよい。抗体の重鎖は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、若しくはＩｇＤを含む任意のアイソタイプ、又はＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＥ１、ＩｇＥ２等を含むサブクラスであってもよい。軽鎖は、κ軽鎖又はλ軽鎖であってもよい。抗体は、軽鎖の２つの同一のコピー及び重鎖の２つの同一のコピーを含んでもよい。重鎖は、各々が１つの可変ドメイン（又は可変領域、ＶＨ）と複数の定常ドメイン（又は定常領域）とを含むものであり、その定常ドメイン内でジスルフィド結合によって互いに結合して抗体の「ステム」を形成する。軽鎖は、各々が１つの可変ドメイン（又は可変領域、ＶＬ）と１つの定常ドメイン（又は定常領域）とを含むものであり、各々がジスルフィド結合によって１つの重鎖に結合する。各軽鎖の可変領域は、それが結合する重鎖の可変領域と整列する。軽鎖及び重鎖のいずれの可変領域も、保存性がより高いフレームワーク領域（ＦＲ）の間に挟まれた３つの超可変領域を含む。
これらの超可変領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）として知られ、抗体の主要な（ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ）抗原結合表面を含むループを形成する。４つのフレームワーク領域は主にβシートのコンホメーションをとり、ＣＤＲが、それらのβシート構造をつなぐ、及び場合によってはその一部を形成するループを形成する。各鎖のＣＤＲはフレームワーク領域によってごく近接して保持され、他の鎖のＣＤＲと共に抗原結合領域の形成に寄与する。
抗体のアミノ酸配列を分析することによる抗体のＣＤＲ領域の同定方法は周知であり、ＣＤＲの幾つもの定義が一般に用いられている。Ｋａｂａｔの定義は配列の可変性に基づき、Ｃｈｏｔｈｉａの定義は構造上のループ領域の位置に基づく。ＣＤＲの更に最近の定義は、ＩＭＧＴ定義である。ＩＭＧＴ定義は、免疫グロブリン（ＩＧ）、Ｔ細胞受容体（ＴｃＲ）及び主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子のヌクレオチド配列情報をキュレートするＩＭＧＴデータベースに基づく。これは、ＩＧ及びＴｃＲ配列については、ＦＲ及びＣＤＲのＫａｂａｔ定義、構造データ及びＣｈｏｔｈｉａによる超可変ループの特徴付けを考慮に入れて組み合わせた、５０００を超えるＩＧ及びＴｃＲ可変領域配列のアラインメントに基づく一様な付番方式を提案する。ＩＭＧＴ付番スキームは、様々な免疫グロブリン（即ち、ＩＧ又はＴｃＲ）、鎖のタイプ（即ち、重鎖又は軽鎖）又は種を区別しない。こうしたＣＤＲ領域の同定方法及び様々な定義については、例えば、Ｍａｒｔｉｎ，“Ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎｓ，”Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｂｅｒｌｉｎ Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，２００１．４２２－４３９；Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ，ｅｔ ａｌ．“Ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｓ ｔｏ Ｋａｂａｔ ａｎｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｌｙ ｃｏｒｒｅｃｔ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎｓ，”Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ４５．１４（２００８）：３８３２－３８３９；Ｗｕ，Ｔ．Ｔ．ａｎｄ Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．（１９７０）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１３２：２１１－２５０；Ｍａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．２０３：１２１－５３（１９９１）；Ｍｏｒｅａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｃｈｅｍ．６８（１－３）：９－１６（Ｏｃｔ．１９９７）；Ｍｏｒｅａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２７５（２）：２６９－９４（Ｊａｎ．１９９８）；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４２（６２５２）：８７７－８３（Ｄｅｃ．１９８９）；Ｐｏｎｏｍａｒｅｎｋｏ ａｎｄ Ｂｏｕｒｎｅ，ＢＭＣ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ７：６４（２００７）；Ｌｅｆｒａｎｃ，ｅｔ ａｌ．，“ＩＭＧＴ ｕｎｉｑｕｅ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ ｆｏｒ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ａｎｄ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎｓ ａｎｄ Ｉｇ ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ Ｖ－ｌｉｋｅ ｄｏｍａｉｎｓ．”Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ＆ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２７．１（２００３）：５５－７７；Ｋｕｎｉｋ，ｅｔ ａｌ．，“Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ ａｍｏｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｄｅｆｉｎｅｓ ｔｈｅ ａｎｔｉｇｅｎ ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅ．”ＰＬｏＳ ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ ｂｉｏｌｏｇｙ ８．２（２０１２）：ｅ１００２３８８（これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されている。
ＣＤＲは抗原のエピトープの認識に重要である。本明細書で使用されるとき、「エピトープ」は、抗体の抗原結合ドメインによって特異的に結合される能力を有する標的分子中の最も小さい部分である。エピトープの最小限の大きさは約３、４、５、６、又は７アミノ酸であり得るが、エピトープは抗原の二次及び三次構造に基づく抗原の三次元配置に依存し得るため、これらのアミノ酸が連続的な線状配列の抗原一次構造である必要はない。
一部の実施形態において、抗体は、インタクトな免疫グロブリン分子（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＡ）である。ＩｇＧサブクラス（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４）は高度に保存されており、その定常領域、特にそのヒンジ及び上側のＣＨ２ドメインが異なる。ＩｇＧサブクラスの配列及び差異は当該技術分野において公知であり、例えば、Ｖｉｄａｒｓｓｏｎ，ｅｔ ａｌ，“ＩｇＧ ｓｕｂｃｌａｓｓｅｓ ａｎｄ ａｌｌｏｔｙｐｅｓ：ｆｒｏｍ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｔｏ ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ．”Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５（２０１４）；Ｉｒａｎｉ，ｅｔ ａｌ．“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ＩｇＧ ｓｕｂｃｌａｓｓｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｄｅｓｉｇｎｉｎｇ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｄｉｓｅａｓｅｓ．”Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６７．２（２０１５）：１７１－１８２；Ｓｈａｋｉｂ，Ｆａｒｏｕｋ，ｅｄ．“Ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ＩｇＧ ｓｕｂｃｌａｓｓｅｓ：ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ．”Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，２０１６（これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されている。
抗体はまた、任意の種（例えば、ヒト、げっ歯類、マウス、ラット、ラクダ科動物）に由来する免疫グロブリン分子であってもよい。本明細書に開示される抗体としてはまた、限定はされないが、ポリクローナル、モノクローナル、単一特異性、多特異性抗体、及び別のポリペプチドに融合した免疫グロブリン結合ドメインを含むキメラ抗体も挙げられる。用語「抗原結合ドメイン」又は「抗原結合断片」は、インタクトな抗体の特異的結合活性を保持している抗体の一部分、即ち、インタクトな抗体の標的分子上のエピトープへの特異的結合能を有する抗体の任意の一部分である。これには、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びこれらの断片の変異体が含まれる。従って、一部の実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、例えば、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆｄ、ｄＡｂ、二重特異性抗体、二重特異性ｓｃＦｖ、ダイアボディ、線状抗体、単鎖抗体分子、抗体断片で形成される多重特異性抗体、及び抗体結合ドメインであるか、又はそれと相同である結合ドメインを含む任意のポリペプチドであってもよい。抗原結合ドメインの非限定的な例としては、例えば、インタクトな抗体の重鎖及び／又は軽鎖ＣＤＲ、インタクトな抗体の重鎖及び／又は軽鎖可変領域、インタクトな抗体の完全長重鎖又は軽鎖、又はインタクトな抗体の重鎖又は軽鎖のいずれかの個々のＣＤＲが挙げられる。
一部の実施形態において、抗原結合断片は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の一部を形成することができる。一部の実施形態において、キメラ抗原受容体は、本明細書に記載されるとおりの単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）がＣＤ３－ζ膜貫通ドメイン及びエンドドメインに融合した融合体である。一部の実施形態において、キメラ抗原受容体はまた、様々な共刺激タンパク質受容体（例えば、ＣＤ２８、４１ＢＢ、ＩＣＯＳ）由来の細胞内シグナル伝達ドメインも含む。一部の実施形態において、キメラ抗原受容体は、効力を増加させるため複数のシグナル伝達ドメインを含む（例えば、ＣＤ３ｚ－ＣＤ２８－４１ＢＢ又はＣＤ３ｚ－ＣＤ２８－ＯＸ４０）。従って、一態様において、本開示は、本明細書に記載されるとおりのキメラ抗原受容体を発現する細胞（例えば、Ｔ細胞）を更に提供する。
一部の実施形態において、ｓｃＦＶは、１つの重鎖可変ドメインと、１つの軽鎖可変ドメインとを有する。一部の実施形態において、ｓｃＦＶは、２つの重鎖可変ドメインと、２つの軽鎖可変ドメインとを有する。一部の実施形態において、ｓｃＦＶは２つの抗原結合領域を有し、これらの２つの抗原結合領域は、それぞれの標的抗原に結合することができる。
抗４－１ＢＢ抗体及び抗原結合断片
本開示は、４－１ＢＢに特異的に結合する抗体及びその抗原結合断片を提供する。本明細書に記載される抗体及び抗原結合断片は４－１ＢＢへの結合能を有し、４－１ＢＢシグナル伝達経路を促進して、ひいては免疫応答を増加させることができる。
本開示は、幾つかの抗４－１ＢＢ抗体、例えば、１６－１Ｃ４（「１Ｃ４」）、２９－６Ａ５（「６Ａ５」）、３０－５Ｆ９（「５Ｆ９」）、４５－２Ｂ３（「２Ｂ３」）、４５－４Ｂ９（「４Ｂ９」）、４５－７Ｅ９（「７Ｅ９」）、４５－７Ｇ９（「７Ｇ９」）、４５－８Ｅ１１（「８Ｅ１１」）、４５－８Ｅ２（「８Ｅ２」）、４５－８Ｆ１（「８Ｆ１」）、５４－８Ｂ１１（「８Ｂ１１」）、５５－８Ｆ６（「８Ｆ６」）、５６－２Ａ６（「２Ａ６」）、５９－５Ｅ４（「５Ｅ４」）、６１－６Ａ７（「６Ａ７」、６９－３Ｃ２（「３Ｃ２」）、７０－３Ｆ９（「３Ｆ９」）、及び７０－６Ｆ１０（「６Ｆ１０」）を、例えば、マウス抗体、そのキメラ抗体、及びそのヒト化抗体を含めて提供する。開示される抗体の一部のＣＤＲ配列（Ｋａｂａｔ定義）並びに重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の配列を以下の表に示す。ＣＤＲ配列（Ｃｈｏｔｈｉａ定義）は図５３に提供する。
Figure 0007387743000001
例えば、上記の表、図５２、及び図５３に示されるとおり、１Ｃ４、及び１Ｃ４由来抗体（例えば、キメラ抗体又はヒト化抗体）のＣＤＲ配列は、Ｋａｂａｔの付番により定義されるとき、重鎖可変ドメインのＣＤＲ、配列番号１～３、及び軽鎖可変ドメインのＣＤＲ、配列番号４～６を含む。ＣＤＲはまた、Ｃｈｏｔｈｉａ方式で定義されてもよい。Ｃｈｏｔｈｉａの付番に基づけば、重鎖可変ドメインのＣＤＲ配列は配列番号１０９～１１１に示され、軽鎖可変ドメインのＣＤＲ配列は配列番号１１２～１１４に示される。
同様に、６Ａ５、及び６Ａ５由来抗体のＣＤＲ配列は、Ｋａｂａｔの付番により定義されるとき、重鎖可変ドメインのＣＤＲ、配列番号７～９、及び軽鎖可変ドメインのＣＤＲ、配列番号１０～１２を含む。Ｃｈｏｔｈｉａの付番に基づけば、重鎖可変ドメインのＣＤＲ配列は配列番号１１５～１１７に示され、軽鎖可変ドメインのＣＤＲは配列番号１１８～１２０に示される。
５Ｆ９、及び５Ｆ９由来抗体のＣＤＲ配列は、Ｋａｂａｔの付番により定義されるとき、重鎖可変ドメインのＣＤＲ、配列番号１３～１５、及び軽鎖可変ドメインのＣＤＲ、配列番号１６～１８を含む。Ｃｈｏｔｈｉａの付番に基づけば、重鎖可変ドメインのＣＤＲ配列は配列番号１２１～１２３に示され、軽鎖可変ドメインのＣＤＲは配列番号１２４～１２６に示される。
同様に、２Ｂ３、４Ｂ９、７Ｅ９、７Ｇ９、８Ｅ１１、８Ｅ２、８Ｆ１、８Ｂ１１、８Ｆ６、２Ａ６、５Ｅ４、６Ａ７、３Ｃ２、３Ｆ９、６Ｆ１０、及びこれらの抗体に由来する抗体のＣＤＲ配列（Ｋａｂａｔ）並びにＶＨ及びＶＬ配列が、表１に提供される。２Ｂ３、４Ｂ９、７Ｅ９、７Ｇ９、８Ｅ１１、８Ｅ２、８Ｆ１、８Ｂ１１、８Ｆ６、２Ａ６、５Ｅ４、６Ａ７、３Ｃ２、３Ｆ９、６Ｆ１０、及びこれらの抗体に由来する抗体のＣＤＲ配列（Ｃｈｏｔｈｉａ）は、図５３を参照することができる。
ヒト化抗体の重鎖可変領域及び軽鎖（ｌｉｇｈｔ）可変領域のアミノ酸配列もまた提供される。マウス抗体をヒト化する方法は種々存在するため（例えば、種々のアミノ酸置換で配列を修飾することができる）、抗体の重鎖及び軽鎖には２種類以上のバージョンのヒト化配列があり得る。ヒト化ＩＣ４抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号２２１～２２４に示される。ヒト化ＩＣ４抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号２２５～２２８に示される。これらの重鎖可変領域配列（配列番号２２１～２２４）のいずれかが、これらの軽鎖可変領域配列（配列番号２２５～２２８）のいずれかと対になることができる。
同様に、ヒト化６Ａ５抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号２２９～２３１に示される。ヒト化６Ａ５抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号２３２～２３５に示される。これらの重鎖可変領域配列（配列番号２２９～２３１）のいずれかが、これらの軽鎖可変領域配列（配列番号２３２～２３５）のいずれかと対になることができる。
ヒト化５Ｆ９抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号２３６～２３８に示される。ヒト化６Ａ５抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号２３９～２４２に示される。これらの重鎖可変領域配列（配列番号２３６～２３８）のいずれかが、これらの軽鎖可変領域配列（配列番号２３９～２４２）のいずれかと対になることができる。
図５５～５７に示すように、ヒト化率とは、国際免疫遺伝学情報システム（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ：ＩＭＧＴ）データベースにあるヒト抗体配列と比較したときの重鎖又は軽鎖可変領域配列の同一率を意味する。トップヒットとは、重鎖又は軽鎖可変領域配列が他の種と比べて特定の種に一層近いことを意味する。例えば、ヒトとのトップヒットとは、配列が他の種と比べてヒトに一層近いことを意味する。ヒト及びカニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）とのトップヒットとは、配列がヒト配列及びカニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）配列に対して同じ同一率であり、他の種の配列と比較したときこれらの同一率が最も高いことを意味する。一部の実施形態において、ヒト化率は、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、又は９５％より高い。ヒト化率の決定方法及びトップヒットの決定方法に関する詳細な説明は当該技術分野において公知であり、例えば、Ｊｏｎｅｓ，Ｔｉｍ Ｄ．，ｅｔ ａｌ．“Ｔｈｅ ＩＮＮｓ ａｎｄ ｏｕｔｓ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｎｏｎｐｒｏｐｒｉｅｔａｒｙ ｎａｍｅｓ．”ＭＡｂｓ．Ｖｏｌ．８．Ｎｏ．１．Ｔａｙｌｏｒ ＆ Ｆｒａｎｃｉｓ，２０１６（これは全体として参照により本明細書に援用される）に記載されている。高いヒト化率には様々な利点があることが多く、例えば、ヒトにおける安全性がより高いとともに有効性がより高く、ヒト対象に忍容される可能性がより高く、及び／又は副作用を生じる可能性がより低い。
本開示はまた、キメラ抗体も提供する。こうしたキメラ抗体は、マウス抗体からのＶＨ及びＶＬを有する。しかしながら、こうしたキメラ抗体の定常ドメインは、ヒト抗体（例えば、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ３、又はヒトＩｇＧ４）からのものである。こうしたキメラ抗体はｍＨｖＫｖ－ＩｇＧと表記される。
本開示に記載されるキメラ抗体及びヒト化抗体の一部を以下の表に示す。
Figure 0007387743000002
Figure 0007387743000003
更に、一部の実施形態において、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片はまた、配列番号１～３、配列番号７～９、配列番号１３～１５、配列番号１９～２１、配列番号２５～２７、配列番号３１～３３、配列番号３７～３９、配列番号４３～４５、配列番号４９～５１、配列番号５５～５７、配列番号６１～６３、配列番号６７～６９、配列番号７３～７５、配列番号７９～８１、配列番号８５～８７、配列番号９１～９３、配列番号９７～９９、又は配列番号１０３～１０５の群から選択される１、２、又は３つの重鎖可変領域ＣＤＲ；及び／又は配列番号４～６、配列番号１０～１２、配列番号１６～１８、配列番号２２～２４、配列番号２８～３０、配列番号３４～３６、配列番号４０～４２、配列番号４６～４８、配列番号５２～５４、配列番号５８～６０、配列番号６４～６６、配列番号７０～７２、配列番号７６～７８、配列番号８２～８４、配列番号８８～９０、配列番号９４～９６、配列番号１００～１０２、又は配列番号１０６～１０８の群から選択される１、２、又は３つの軽鎖可変領域ＣＤＲを含み得る。
一部の実施形態において、抗体は、相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２、３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）であって、ＣＤＲ１領域が選択のＶＨ ＣＤＲ１アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＣＤＲ２領域が選択のＶＨ ＣＤＲ２アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、及びＣＤＲ３領域が選択のＶＨ ＣＤＲ３アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなるＶＨと、ＣＤＲ１、２、３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、ＣＤＲ１領域が選択のＶＬ ＣＤＲ１アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＣＤＲ２領域が選択のＶＬ ＣＤＲ２アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、及びＣＤＲ３領域が選択のＶＬ ＣＤＲ３アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなるＶＬとを有し得る。選択のＶＨ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列及び選択のＶＬ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列は図５２（Ｋａｂａｔ ＣＤＲ）及び図５３（Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ）に示す。
一部の実施形態において、本明細書に記載される抗体又は抗原結合断片は、選択のＣＤＲのうちの１、２、又は３つに０、１又は２個のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を有する配列番号１～３、配列番号７～９、配列番号１３～１５、配列番号１９～２１、配列番号２５～２７、配列番号３１～３３、配列番号３７～３９、配列番号４３～４５、配列番号４９～５１、配列番号５５～５７、配列番号６１～６３、配列番号６７～６９、配列番号７３～７５、配列番号７９～８１、配列番号８５～８７、配列番号９１～９３、配列番号９７～９９、又は配列番号１０３～１０５から選択されるＣＤＲのうちの１、２、又は３つを含む重鎖可変ドメインを含み得る。例えば、本明細書に記載される抗体又は抗原結合断片は、０、１又は２個のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を有する配列番号１；０、１又は２個のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を有する配列番号２；０、１又は２個のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を有する配列番号３のＣＤＲのうちの１、２、又は３つを含む重鎖可変ドメインを含み得る。
一部の実施形態において、本明細書に記載される抗体又は抗原結合断片は、選択のＣＤＲのうちの１、２、又は３つに０、１又は２個のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を有する配列番号４～６、配列番号１０～１２、配列番号１６～１８、配列番号２２～２４、配列番号２８～３０、配列番号３４～３６、配列番号４０～４２、配列番号４６～４８、配列番号５２～５４、配列番号５８～６０、配列番号６４～６６、配列番号７０～７２、配列番号７６～７８、配列番号８２～８４、配列番号８８～９０、配列番号９４～９６、配列番号１００～１０２、又は配列番号１０６～１０８から選択されるＣＤＲのうちの１、２、又は３つを含む軽鎖可変ドメインを含み得る。例えば、本明細書に記載される抗体又は抗原結合断片は、０、１又は２個のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を有する配列番号４；０、１又は２個のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を有する配列番号５；０、１又は２個のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を有する配列番号６のＣＤＲのうちの１、２、又は３つを含む軽鎖可変ドメインを含み得る。
一部の実施形態において、０、１又は２個のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を有するＣＤＲは、表１、表３、図５２、及び図５３に示される。
挿入、欠失、及び置換はＣＤＲ配列の範囲内にあってもよく、又はＣＤＲ配列の終端側末端の一方又は両方にあってもよい。
本開示はまた、４－１ＢＢに結合する抗体又はその抗原結合断片も提供し、ここで抗体又は抗原結合断片は、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を有する。一部の実施形態において、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３の配列は、当該技術分野において公知の様々なＣＤＲ定義、例えば、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、又はＩＭＧＴ定義に基づき決定される。ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３の配列は、表１、表３、図５２、及び図５３に示される。
本開示はまた、４－１ＢＢに結合する抗体又はその抗原結合断片も提供する。抗体又はその抗原結合断片は、選択のＶＨ配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一のアミノ酸配列を含む又はそれからなる重鎖可変領域（ＶＨ）、及び選択のＶＬ配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一のアミノ酸配列を含む又はそれからなる軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。一部の実施形態において、選択のＶＨ配列及び選択のＶＬ配列は表１及び表３にある。一部の実施形態において、選択のＶＨ配列は配列番号２２１、２２２、２２３、２２４、又は２４３であり、選択のＶＬ配列は配列番号２２５、２２６、２２７、２２８、又は２４４である。一部の実施形態において、選択のＶＨ配列は配列番号２２９、２３０、２３１、又は２４５であり、選択のＶＬ配列は配列番号２３２、２３３、２３４、２３５、又は２４６である。一部の実施形態において、選択のＶＨ配列は配列番号２３６、２３７、２３８、又は２４７であり、選択のＶＬ配列は配列番号２３９、２４０、２４１、２４２、又は２４８である。
本開示はまた、免疫グロブリン重鎖又は免疫グロブリン軽鎖を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む核酸も提供する。免疫グロブリン重鎖又は免疫グロブリン軽鎖は、表１、表３、図５２又は図５３に示されるとおりのＣＤＲを含むか、又は表１、表３、及び図５５～図５８に示されるとおりの配列を有する。このポリペプチドが対応するポリペプチド（例えば、対応する重鎖可変領域又は対応する軽鎖可変領域）と対になると、対になったポリペプチドは４－１ＢＢ（例えば、ヒト４－１ＢＢ）に結合する。
一部の態様において、本開示はまた、４－１ＢＢ（例えば、ヒト４－１ＢＢ）への結合に関して参照抗体又はその抗原結合断片（例えば、本明細書に記載されるとおりの任意の抗４－１ＢＢ抗体又は抗原結合断片）と交差競合する抗体又はその抗原結合断片も提供する。
抗４－１ＢＢ抗体及び抗原結合断片はまた、抗体又は抗体断片の抗体変異体（誘導体及びコンジュゲートを含む）及び多重特異性（例えば、二重特異性）抗体又は抗体断片であってもよい。本明細書に提供される更なる抗体は、ポリクローナル、モノクローナル、多重特異性（多量体、例えば二重特異性）、ヒト抗体、キメラ抗体（例えば、ヒト－マウスキメラ）、単鎖抗体、細胞内で作られる抗体（即ち、イントラボディ）、及びこれらの抗原結合断片である。抗体又はその抗原結合断片は、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＹ）、又は任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）であってもよい。一部の実施形態において、抗体又はその抗原結合断片はＩｇＧ抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施形態において、抗体又はその抗原結合断片はＩｇＧ１抗体又はその抗原結合断片である。
抗体の断片は、それが完全長抗体の所望の親和性及び特異性を保持している限り、提供される方法における使用に好適である。従って、４－１ＢＢに結合する抗体の断片は、４－１ＢＢに結合する能力を保持していることになる。Ｆｖ断片は、完全な抗原認識及び結合部位を含む抗体断片である。この領域は、例えばｓｃＦｖにおける共有結合的性質であってもよい緊密な会合状態にある１つの重鎖及び１つの軽鎖可変ドメインの二量体からなる。この配置にあることで、各可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用してＶＨ－ＶＬ二量体の表面上に抗原結合部位を定義する。まとめると、６つのＣＤＲ又はその一部が抗体に抗原結合特異性を付与する。しかしながら、単一の可変ドメイン（又は抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）であっても、抗原を認識してそれと結合する能力を有することができ、但し、通常は結合部位全体と比べると親和性は低い。
単鎖Ｆｖ又は（ｓｃＦｖ）抗体断片は抗体のＶＨ及びＶＬドメイン（又は領域）を含み、ここでこれらのドメインは単一のポリペプチド鎖に存在する。概して、ｓｃＦｖポリペプチドはＶＨ及びＶＬドメイン間にポリペプチドリンカーを更に含み、それによりｓｃＦｖは抗原結合に望ましい構造を形成することが可能になる。
Ｆａｂ断片は、軽鎖の可変及び定常ドメインと重鎖の可変ドメイン及び第１定常ドメイン（ＣＨ１）とを含む。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、概してそのカルボキシ末端の近傍でそれらの間のヒンジシステインによって共有結合的に連結された一対のＦａｂ断片を含む。抗体断片の他の化学的カップリングもまた当該技術分野において公知である。
ダイアボディは、２つの抗原結合部位を有する小型抗体断片であり、この断片は、同じポリペプチド鎖中のＶＬにつながったＶＨ（ＶＨ及びＶＬ）を含む。同じ鎖上のこれらの２つのドメイン間で対を成すことができないほど短いリンカーを使用することにより、これらのドメインは強制的に別の鎖の相補的ドメインと対になり、２つの抗原結合部位を作り出す。
線状抗体は、相補的な軽鎖ポリペプチドと一緒になって一対の抗原結合領域を形成する一対のタンデムＦｄセグメント（ＶＨ－ＣＨ１－ＶＨ－ＣＨ１）を含む。線状抗体は二重特異性又は単一特異性であってもよい。
本開示の抗体及び抗体断片は、所望のエフェクター機能又は血清半減期がもたらされるようにＦｃ領域で修飾することができる。
抗体の多量体化は、抗体の自然の凝集によるか、又は当該技術分野において公知の化学的若しくは組換え連結技法によって達成し得る。例えば、一部の精製抗体製剤（例えば、精製ＩｇＧ１分子）は、抗体ホモ二量体及び他の高次抗体多量体を含有するタンパク質凝集体を自発的に形成する。
或いは、抗体ホモ二量体は、当該技術分野において公知の化学的連結技法によって形成することができる。例えば、限定はされないが、ＳＭＣＣ（４－（マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボン酸スクシンイミジル）及びＳＡＴＡ（Ｓ－アセチルチオ酢酸Ｎ－スクシンイミジル）を含めたヘテロ二官能性架橋剤を使用して抗体多量体を形成することができる。抗体ホモ二量体の形成についての例示的プロトコルは、Ｇｈｅｔｉｅ ｅｔ ａｌ．（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９４：７５０９－７５１４，１９９７）に記載されている。抗体ホモ二量体は、ペプシンによる消化によってＦａｂ’２ホモ二量体に変換することができる。抗体ホモ二量体を形成する別の方法は、Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：３９６－４０４，２００２）に記載される自己親和性（ａｕｔｏｐｈｉｌｉｃ）Ｔ１５ペプチドを用いるものである。
一部の実施形態において、多重特異性抗体は二重特異性抗体である。二重特異性抗体は、組換え細胞培養物から回収されるヘテロ二量体の割合が最大となるように一対の抗体分子の間の接合部分をエンジニアリングすることにより作製されてもよい。例えば、接合部分は、抗体定常ドメインのＣＨ３ドメインの少なくとも一部を含み得る。この方法では、第１の抗体分子の接合部分にある１つ以上の小さいアミノ酸側鎖が、より大きい側鎖（例えば、チロシン又はトリプトファン）に置き換えられる。第２の抗体分子の接合部分には、より大きいアミノ酸側鎖をより小さいもの（例えば、アラニン又はスレオニン）に置き換えることにより、より大きい１つ又は複数の側鎖と同一又は同様のサイズの代償的な「空洞」が作り出される。これは、ホモ二量体などの他の望ましくない最終産物と比べてヘテロ二量体の収率を増加させる機構を提供する。この方法については、例えば、国際公開第９６／２７０１１号パンフレット（これはその全体が参照により援用される）に記載されている。
二重特異性抗体には、架橋された抗体又は「ヘテロコンジュゲート」抗体が含まれる。例えば、ヘテロコンジュゲート中の抗体のうちの一方がアビジンに、他方がビオチンにカップリングすることができる。ヘテロコンジュゲート抗体はまた、任意の好都合な架橋結合方法を用いて作製することもできる。好適な架橋剤及び架橋結合技法は当該技術分野において周知であり、米国特許第４，６７６，９８０号明細書（これは全体として参照により本明細書に援用される）に開示されている。
抗体断片からの二重特異性抗体の作成方法もまた、当該技術分野において公知である。例えば、二重特異性抗体は、化学的連結を用いて調製することができる。Ｂｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：８１，１９８５）は、インタクトな抗体をタンパク質分解によって切断してＦ（ａｂ’）２断片を作成する手順を記載している。このような断片は、ジチオール錯化剤である亜ヒ酸ナトリウムの存在下で還元されると、隣接ジチオールが安定化し、分子間ジスルフィド形成が防止される。作成されたＦａｂ’断片は、次にチオニトロ安息香酸（ＴＮＢ）誘導体に変換される。次にＦａｂ’ＴＮＢ誘導体のうちの１つがメルカプトエチルアミンによる還元によってＦａｂ’チオールに再び変換され、等モル量の別のＦａｂ’ＴＮＢ誘導体と混合することにより二重特異性抗体が形成される。
本明細書に記載される抗体又は抗原結合断片はいずれも、安定化分子（例えば、対象体内又は溶液中での抗体又はその抗原結合断片の半減期を増加させる分子）にコンジュゲートし得る。安定化分子の非限定的な例としては、ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール）又はタンパク質（例えば、ヒト血清アルブミンなどの血清アルブミン）が挙げられる。安定化分子をコンジュゲートすると、インビトロ（例えば、組織培養下、又は医薬組成物としての保存時）又はインビボ（例えば、ヒト体内）での抗体又は抗原結合断片の半減期が増加し、又は生物学的活性が延長し得る。
一部の実施形態において、本明細書に記載される抗体又は抗原結合断片は治療剤にコンジュゲートすることができる。抗体又はその抗原結合断片を含む抗体－薬物コンジュゲートは、治療剤に共有結合的又は非共有結合的に結合させることができる。一部の実施形態において、治療剤は細胞傷害剤又は細胞増殖抑制剤（例えば、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テニポシド（ｔｅｎｏｐｏｓｉｄｅ）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシン（ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ ａｎｔｈｒａｃｉｎ）、ＤＭ－１及びＤＭ－４などのメイタンシノイド類、ジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１－デヒドロテストステロン、グルココルチコイド類、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン、エピルビシン、及びシクロホスファミド及び類似体）である。
抗体特性
一部の実施形態において、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、４－１ＢＢと４－１ＢＢリガンド（４－１ＢＢＬ）との間の結合を遮断することができる。
一部の実施形態において、４－１ＢＢに結合することにより、抗体は免疫応答を上方制御させることができる。従って、一部の実施形態において、本明細書に記載されるとおりの抗体又はその抗原結合断片は４－１ＢＢアゴニストである。一部の実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は４－１ＢＢアンタゴニストである。
一部の実施形態において、本明細書に記載されるとおりの抗体又はその抗原結合断片は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、樹状細胞（ＤＣ）細胞、マクロファージ、抗原提示細胞、ＣＤ８＋及び／又はＣＤ４＋Ｔ細胞）の免疫応答、活性又は数を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、又は２０倍増加させることができる。一部の実施形態において、本明細書に記載されるとおりの抗体又はその抗原結合断片は、免疫細胞の活性又は数を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、又は２０倍減少させることができる。
一部の実施態様では、抗体（又はその抗原結合断片）は、４－１ＢＢ（例えば、ヒト４－１ＢＢ、サル４－１ＢＢ、マウス４－１ＢＢ、及び／又はキメラ４－１ＢＢ）に０．１ｓ－１未満、０．０１ｓ－１未満、０．００１ｓ－１未満、０．０００１ｓ－１未満、又は０．００００１ｓ－１未満の解離速度（ｋｏｆｆ）で特異的に結合する。一部の実施形態において、解離速度（ｋｏｆｆ）は、０．０１ｓ－１超、０．００１ｓ－１超、０．０００１ｓ－１超、０．００００１ｓ－１超、又は０．０００００１ｓ－１超である。
一部の実施形態において、動的会合速度（ｋｏｎ）は、１×１０２／Ｍｓ超、１×１０３／Ｍｓ超、１×１０４／Ｍｓ超、１×１０５／Ｍｓ超、又は１×１０６／Ｍｓ超である。一部の実施形態において、動的会合速度（ｋｏｎ）は、１×１０５／Ｍｓ未満、１×１０６／Ｍｓ未満、又は１×１０７／Ｍｓ未満である。
親和性は、動的速度定数の商（ＫＤ＝ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）から推定することができる。一部の実施形態において、ＫＤは、１×１０－６Ｍ未満、１×１０－７Ｍ未満、１×１０－８Ｍ未満、１×１０－９Ｍ未満、又は１×１０－１０Ｍ未満である。一部の実施形態において、ＫＤは、５０ｎＭ、４０ｎＭ、３０ｎＭ、２０ｎＭ、１５ｎＭ、１０ｎＭ、９ｎＭ、８ｎＭ、７ｎＭ、６ｎＭ、５ｎＭ、４ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭ、又は１ｎＭ未満である。一部の実施形態において、ＫＤは、１×１０－７Ｍ超、１×１０－８Ｍ超、１×１０－９Ｍ超、１×１０－１０Ｍ超、１×１０－１１Ｍ超、１×１０－１２Ｍ超である。一部の実施形態において、抗体はヒト４－１ＢＢに約０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、又は０．１ｎＭ以下のＫＤで結合する。一部の実施形態において、抗体はヒト４－１ＢＢに約０．５ｎＭ又は０．４ｎＭ以下のＫＤで結合する。
抗原に対する抗体の親和性を測定する一般的な技法としては、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、及び表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）が挙げられる。一部の実施形態において、抗体は、ヒト４－１ＢＢ（配列番号２１７）、サル４－１ＢＢ（例えば、アカゲザル４－１ＢＢ、配列番号２１９）、キメラ４－１ＢＢ（配列番号２２０）、及び／又はマウス４－１ＢＢ（配列番号２１８）に結合する。一部の実施形態において、抗体は、ヒト４－１ＢＢ（配列番号２１７）、サル４－１ＢＢ（例えば、アカゲザル４－１ＢＢ、配列番号２１９；又はカニクイザル４－１ＢＢ）、キメラ４－１ＢＢ（配列番号２２０）、及び／又はマウス４－１ＢＢ（配列番号２１８）に結合しない。
一部の実施形態において、熱安定性が決定される。本明細書に記載されるとおりの抗体又は抗原結合断片は、Ｔｍが６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、又は９５℃より高くてもよい。
ＩｇＧを多ドメインタンパク質として記載し得ることに伴い、融解曲線は時に、第１の変性温度Ｔｍ Ｄ１、及び第２の変性温度Ｔｍ Ｄ２、及び任意選択で第３の変性温度Ｔｍ Ｄ３の２つの移行部、又は３つの移行部を示す。２つのピークがあるとき、一方のピークがＦｃドメインの変性（Ｔｍ Ｄ１）を示し、他方のピークがＦａｂドメインの変性（Ｔｍ Ｄ２）を示す。
一部の実施形態において、本明細書に記載されるとおりの抗体又は抗原結合断片は、Ｔｍ Ｄ１が６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、又は９５℃より高い。一部の実施形態において、本明細書に記載されるとおりの抗体又は抗原結合断片は、Ｔｍ Ｄ２が６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、又は９５℃より高い。一部の実施形態において、本明細書に記載されるとおりの抗体又は抗原結合断片は、Ｔｍ Ｄ３が６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、又は９５℃より高い。
一部の実施形態において、Ｔｍ、Ｔｍ Ｄ１、Ｔｍ Ｄ２、Ｔｍ Ｄ３は、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、又は９５℃未満である。
一部の実施形態において、本明細書に記載されるとおりの抗体又は抗原結合断片は、温度が６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、又は９５℃未満のとき凝集を形成しない。
一部の実施形態において、抗体は腫瘍成長阻害率（ＴＧＩ％）が１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１１０％、１２０％、１３０％、１４０％、１５０％、１６０％、１７０％、１８０％、１９０％、又は２００％より高い。一部の実施形態において、抗体は腫瘍成長阻害率が６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１１０％、１２０％、１３０％、１４０％、１５０％、１６０％、１７０％、１８０％、１９０％、又は２００％より低い。ＴＧＩ％は、例えば、治療開始から３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、又は３０日後、又は治療開始から１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２ヵ月後に決定することができる。本明細書で使用されるとき、腫瘍成長阻害率（ＴＧＩ％）は以下の式を用いて計算される：
ＴＧＩ（％）＝［１－（Ｔｉ－Ｔ０）／（Ｖｉ－Ｖ０）］×１００
Ｔｉは、ｉ日目における治療群の平均腫瘍容積である。Ｔ０は、０日目における治療群の平均腫瘍容積である。Ｖｉは、ｉ日目における対照群の平均腫瘍容積である。Ｖ０は、０日目における対照群の平均腫瘍容積である。
一部の実施形態において、本明細書に記載されるとおりの抗体又はその抗原結合断片は４－１ＢＢアゴニストである。一部の実施形態において、本明細書に記載されるとおりの抗体又はその抗原結合断片は４－１ＢＢアンタゴニストである。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、４－１ＢＢを発現する標的細胞の４－１ＢＢシグナル伝達を増加又は減少させることができる。
一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、例えば、免疫細胞増殖を増加させること、及び／又は免疫細胞によるサイトカイン産生を増加させること（例えば、抗体又は抗原結合断片による治療前の増殖及び／又はサイトカイン産生と比較したとき）により、免疫細胞機能（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、好中球、単球、マクロファージ、及び／又は樹状細胞）を亢進させることができる。一部の実施形態において、サイトカインはγインターフェロンである。
一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、例えば、治療前の腫瘍内（浸潤）ＣＤ８＋Ｔエフェクター細胞の数と比較したとき、腫瘍内（浸潤）ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞の数（例えば、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞の総数、又は例えば、ＣＤ４５＋細胞中のＣＤ８＋の割合）を増加させる。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、例えば、抗ヒト４－１ＢＢ抗体による治療前のγインターフェロンを発現する腫瘍内（浸潤）ＣＤ８＋Ｔ細胞の数と比較して、γインターフェロンを発現する腫瘍内（浸潤）ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞の数（例えば、全ＣＤ８＋細胞中のγインターフェロンを発現するＣＤ８＋細胞の割合）を増加させる。
一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、例えば、抗体又は抗原結合断片による治療前の腫瘍内（浸潤）ＣＤ４＋Ｔ細胞の数と比較したとき、腫瘍内（浸潤）ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞の数（例えば、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞の総数、又は例えば、ＣＤ４５＋細胞中のＣＤ４＋細胞の割合）を増加させる。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、例えば、治療前のγインターフェロンを発現する腫瘍内（浸潤）ＣＤ４＋Ｔ細胞の数と比較したとき、γインターフェロンを発現する腫瘍内（浸潤）ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞の数（例えば、全γインターフェロン発現ＣＤ４＋細胞、又は例えば、全ＣＤ４＋細胞中のγインターフェロン発現ＣＤ４＋細胞の割合）を増加させる。
一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、例えば、メモリーＴ細胞増殖を増加させること、及び／又はメモリーＴ細胞によるサイトカイン（例えば、γインターフェロン）産生を増加させることにより、メモリーＴ細胞機能を亢進させる。
一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は機能性Ｆｃ領域を有する。一部の実施形態において、機能性Ｆｃ領域のエフェクター機能は抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）である。一部の実施形態において、機能性Ｆｃ領域のエフェクター機能は食作用である。一部の実施形態において、機能性Ｆｃ領域のエフェクター機能はＡＤＣＣ及び食作用である。一部の実施形態において、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ３、又はヒトＩｇＧ４である。
一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は機能性Ｆｃ領域を有しない。例えば、抗体又は抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片である。
抗ｈ４－１ＢＢ ＩｇＧ１抗体
本開示はまた、ＩｇＧ１サブクラス抗体が予想外にも他のサブクラスよりはるかに良好な腫瘍阻害効果を有することも示す。結果に基づけば、及び理論によって拘束されることを望むものではないが、抗ｈ４－１ＢＢ抗体は主に抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を通じて腫瘍成長を阻害すると仮定されている。ＦｃγＲＩＩＩａは、ＡＤＣＣの活性化に関与する主要な受容体である。ＩｇＧサブクラスは、ＦｃγＲＩＩＩａへのその結合能力の点で様々であり、この結合性の違いによって、ある範囲の機能的応答（例えば、ＡＤＣＣ）を誘発するその能力が決まる。従ってこれは、ＩｇＧ１サブクラスがＦｃγＲＩＩＩａとのより強力な結合親和性を有し得るという事実に起因してもよく、ＩｇＧ１抗体は他のサブクラスと比べてより良好な腫瘍阻害効果を有する。従って、一部の実施形態において、本開示は、本明細書に記載されるとおりのＣＤＲ、ＶＨ、及びＶＬを有するＩｇＧ１抗体（例えば、ヒトＩｇＧ１抗体）を提供する。
一部の実施形態において、ＩｇＧ１抗体又はその抗原結合断片は、以下の表に示すとおりのＣＤＲ（例えば、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、又はＩＭＧＴ定義）、ＶＨ及びＶＬを有する。従って、本開示は、相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２、及び３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）であって、ＶＨ ＣＤＲ１領域が選択のＶＨ ＣＤＲ１アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含み、ＶＨ ＣＤＲ２領域が選択のＶＨ ＣＤＲ２アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含み、及びＶＨ ＣＤＲ３領域が選択のＶＨ ＣＤＲ３アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含むＶＨ；及びＣＤＲ１、２、及び３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、ＶＬ ＣＤＲ１領域が選択のＶＬ ＣＤＲ１アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬ ＣＤＲ２領域が選択のＶＬ ＣＤＲ２アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含み、及びＶＬ ＣＤＲ３領域が選択のＶＬ ＣＤＲ３アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含み、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、ＶＬ ＣＤＲ３が表３に示される、ＩｇＧ１抗体（例えば、ヒトＩｇＧ１抗体又はヒト化ＩｇＧ１抗体）を提供する。一部の実施形態において、ＩｇＧ１抗体又はその抗原結合断片のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、又はＩＭＧＴ定義により定義される。一部の実施形態において、ＩｇＧ１抗体又はその抗原結合断片のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、ＶＬ ＣＤＲ３（Ｋａｂａｔ定義により定義されるとおりのＣＤＲ）は、表３に示される配列を有する。一部の実施形態において、ＩｇＧ１抗体又はその抗原結合断片のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、ＶＬ ＣＤＲ３（ＩＭＧＴ定義により定義されるとおりのＣＤＲ）は、表３に示される配列を有する。
一部の実施形態において、本開示は、選択のＶＨ配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、選択のＶＬ配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む４－１ＢＢに結合する抗体又はその抗原結合断片を提供し、ここで選択のＶＨ配列及び選択のＶＬ配列は以下の表に示される。
Figure 0007387743000004
更に、本明細書に記載されるとおりの抗体は、様々な突然変異を有することができる。一部の実施形態において、抗体（例えば、ＩｇＧ１抗体）は、Ｎ２９７Ａ（ＥＵ付番）突然変異、ＦＣ－ＳＩ突然変異（ＥＵ付番：Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｖ３０５Ｉ／Ｐ３９６Ｌ）、又はＦＣ－Ｖ１１突然変異（ＥＵ付番：（Ｇ２３７Ｄ／Ｐ２３８Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ）を有することができる。一部の実施形態において、本明細書に記載されるとおりの抗体のＦｃ領域は、以下の突然変異：Ｎ２９７Ａ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、Ｐ３９６Ｌ、Ｇ２３７Ｄ、Ｐ２３８Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、及びＡ３３０Ｒのうちの１つ以上を有することができる。
抗４－１ＢＢ抗体の作製方法
ヒト４－１ＢＢの単離された断片を免疫原として使用して、標準的なポリクローナル及びモノクローナル抗体調製技法を用いて抗体を作成することができる。ポリクローナル抗体は、動物において抗原ペプチド又はタンパク質を複数回注射（例えば、皮下又は腹腔内注射）することにより産生され得る。一部の実施形態において、抗原ペプチド又はタンパク質は少なくとも１つのアジュバントと共に注射される。一部の実施形態において、抗原ペプチド又はタンパク質は、免疫しようとする種において免疫原性の薬剤にコンジュゲートすることができる。動物には抗原ペプチド又はタンパク質を２回以上（例えば、２回、３回、又は４回）注射することができる。
免疫原としては、完全長ポリペプチド又はタンパク質が使用されてもよく、或いは、その抗原ペプチド断片が使用されてもよい。タンパク質の抗原ペプチドは、４－１ＢＢのアミノ酸配列の少なくとも８（例えば、少なくとも１０、１５、２０、又は３０）アミノ酸残基を含み、ペプチドに対して産生される抗体がタンパク質と特異的免疫複合体を形成するようにタンパク質のエピトープを包含する。上記に記載したとおり、ヒト４－１ＢＢの完全長配列は当該技術分野において公知である（配列番号２１７）。
好適な対象（例えば、少なくとも１つのヒト免疫グロブリン遺伝子座を発現するヒト又はトランスジェニック動物）を免疫することによる抗体の調製には、典型的には免疫原が使用される。適切な免疫原性製剤は、例えば、組換え発現させた又は化学合成したポリペプチド（例えば、ヒト４－１ＢＢの断片）を含有し得る。この製剤は、フロイント完全又は不完全アジュバントなどのアジュバント、又は同様の免疫賦活剤を更に含むことができる。
ポリクローナル抗体は、上記に記載したとおり、好適な対象を免疫原としての４－１ＢＢポリペプチド、又はその抗原ペプチド（例えば、４－１ＢＢの一部）で免疫することにより調製し得る。固定化した４－１ＢＢポリペプチド又はペプチドを用いる酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によるなど、標準的な技法により、免疫した対象の時間の経過に伴う抗体力価をモニタすることができる。必要であれば、抗体分子を哺乳類から（例えば、血液から）単離し、プロテインＡ又はプロテインＧクロマトグラフィーによってＩｇＧ画分を入手するなど、周知の技法によって更に精製することができる。免疫化後の適切な時点で、例えば、特異抗体価が最も高くなったとき、対象から抗体産生細胞を入手して、当初はＫｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５－４９７，１９７５）によって記載されたハイブリドーマ技法、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技法（Ｋｏｚｂｏｒ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ ４：７２，１９８３）、ＥＢＶ－ハイブリドーマ技法（Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．７７－９６，１９８５）、又はトリオーマ技法など、標準的な技法によるモノクローナル抗体の調製に使用することができる。ハイブリドーマの作製技術は周知である（概して、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９４，Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．（Ｅｄｓ．），Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照のこと）。モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞は、目的のポリペプチド又はエピトープに結合する抗体に関してハイブリドーマ培養上清を例えば標準的なＥＬＩＳＡアッセイを用いてスクリーニングすることにより検出される。
本明細書に記載されるヒト、ヒト化、又はキメラ抗体、又はその抗原結合断片をコードするＤＮＡに適切なヌクレオチド変化を導入することによるか、又はペプチド合成により、本明細書に記載される抗体又は抗原結合断片の変異体が調製されてもよい。かかる変異体は、例えば、抗体又は抗原結合ドメインの抗原結合部位を構成するアミノ酸配列内の残基の欠失、挿入、又は置換を含む。かかる変異体の集団では、一部の抗体又は抗原結合断片が、標的タンパク質、例えば４－１ＢＢに対する親和性の増加を示すことになる。欠失、挿入、及び／又は組み合わせの任意の組み合わせを作製して、標的に対する結合親和性が増加した抗体又はその抗原結合断片に至らせることができる。抗体又は抗原結合断片に導入されるアミノ酸変化はまた、グリコシル化部位の数を変化させる（例えば、増加又は減少させる）、グリコシル化部位のタイプを変化させる（例えば、細胞に存在する酵素が異なる糖を結び付けるようにアミノ酸配列を変化させる）、又は新規グリコシル化部位を導入するなど、抗体又は抗原結合断片に新規翻訳後修飾も改変及び導入することができる。
本明細書に開示される抗体は、哺乳類を含めた任意の動物種に由来することができる。天然抗体の非限定的な例には、ヒト、霊長類、例えば、サル及び類人猿、雌ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ラクダ科動物（例えば、ラクダ及びラマ）、ニワトリ、ヤギ、及びヒト抗体を産生するように遺伝子操作されたトランスジェニックげっ歯類を含むげっ歯類（例えば、ラット、マウス、ハムスター及びウサギ）に由来する抗体が含まれる。
ヒト及びヒト化抗体には、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する（又はそれに由来するものと同じアミノ酸配列を有する）可変領域及び定常領域を有する抗体が含まれる。ヒト抗体は、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでランダム又は部位特異的突然変異誘発によって導入された突然変異、又はインビボでの体細胞突然変異）を例えばＣＤＲに含み得る。
ヒト化抗体は、典型的には、非ヒトＣＤＲがグラフトされたヒトフレームワーク（ＦＲ）を有する。従って、ヒト化抗体は、ヒト以外の供給源からそれに導入された１つ以上のアミノ酸配列を有する。このような非ヒトアミノ酸残基は、多くの場合に「移入」残基と称され、これは典型的には「移入」可変ドメインから取られている。ヒト化は本質的には、例えば、げっ歯類ＣＤＲ又はＣＤＲ配列をヒト抗体の対応する配列の代わりに置換することによって実施し得る。これらの方法は、例えば、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２－５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３－３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４－１５３６（１９８８）（これらの各々は、参照により全体として本明細書に援用される）に記載される。従って、「ヒト化」抗体は、実質的にインタクトに満たないヒトＶドメインが非ヒト種からの対応する配列によって置換されているキメラ抗体である。実際には、ヒト化抗体は、典型的には、一部のＣＤＲ残基及び一部のＦＲ残基がヒト抗体における類似部位の残基によって置換されているマウス抗体である。
ヒト化抗体の作製に使用するヒトＶＨ及びＶＬドメインの選択は、免疫原性を低下させるために極めて重要である。いわゆる「最良適合」法によれば、マウス抗体のＶドメインの配列が既知のヒトドメイン配列のライブラリ全体に対してスクリーニングされる。次にマウスの配列に最も近いヒト配列が、ヒト化抗体用のヒトＦＲとして受け入れられる（Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２２９６（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１（１９８７））。
抗体が抗原に対する高い特異性及び親和性並びに他の有利な生物学的特性を保持しながらヒト化されることが更に重要である。この目標を実現するため、親配列及び様々な概念上のヒト化産物を親配列及びヒト化配列の三次元モデルを用いて分析するプロセスによってヒト化抗体を調製することができる。三次元免疫グロブリンモデルは一般に入手可能であり、当業者は精通している。コンピュータプログラムが利用可能であり、これは、選択された候補免疫グロブリン配列の確率の高い三次元コンホメーション構造を図解及び表示する。これらの表示を調べることにより、候補免疫グロブリン配列が機能する上でのその残基の可能性のある役割の分析、即ち、候補免疫グロブリンがその抗原に結合する能力に影響を及ぼす残基の分析が可能になる。このようにして、１つ又は複数の標的抗原に対する親和性の増加など、所望の抗体特性が実現するようにＦＲ残基を選択し、受容配列及び移入配列から組み合わせることができる。
通常、ヒト、ヒト化、又はキメラ抗４－１ＢＢ抗体のアミノ酸配列変異体は、元の抗体の軽鎖又は重鎖に存在する配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一率を有するアミノ酸配列を含むことになる。
元の配列を基準とした同一性とは、通常は、それらの配列をアラインメントし、及び必要であればギャップを導入して最大限の配列同一率を実現した後に、及びいかなる保存的置換も配列同一性の一部として考慮することなく、ヒト、ヒト化、又はキメラ抗４－１ＢＢ抗体又は断片内に存在する配列と同一である候補配列内に存在するアミノ酸残基の割合である。
抗４－１ＢＢ抗体又は抗原結合断片に対する更なる修飾を作ることができる。例えば、１つ又は複数のシステイン残基をＦｃ領域に導入し、それによりこの領域における鎖間ジスルフィド結合の形成を可能にすることができる。このように作成されたホモ二量体抗体は、インビトロ及び／又はインビボ半減期がいくらか増加していてもよい。インビトロ及び／又はインビボ半減期が増加したホモ二量体抗体はまた、例えば、Ｗｏｌｆｆ ｅｔ ａｌ．（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５３：２５６０－２５６５，１９９３）に記載されるとおり、ヘテロ二官能性架橋剤を使用して調製することもできる。或いは、二重Ｆｃ領域を有する抗体をエンジニアリングすることができる（例えば、Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉ－Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ ３：２１９－２３０，１９８９を参照のこと）。
一部の実施形態において、抗４－１ＢＢ抗体又はその抗原結合断片に共有結合修飾を作ることができる。こうした共有結合修飾は、化学的若しくは酵素的合成によるか、又は酵素的若しくは化学的切断によって作ることができる。抗体又は断片の標的化したアミノ酸残基と、選択の側鎖又はＮ末端若しくはＣ末端残基に反応能を有する有機誘導体化剤とを反応させることにより、抗体又は抗体断片の他の種類の共有結合修飾が分子に導入される。
一部の実施形態において、Ｆｃ領域に（直接又は間接的に）結び付いたフコースを欠いている炭水化物構造を有する抗体変異体が提供される。例えば、かかる抗体中のフコースの量は、１％～８０％、１％～６５％、５％～６５％又は２０％～４０％であってもよい。フコースの量は、例えば国際公開第２００８／０７７５４６号パンフレットに記載されるとおり、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析法によって測定したときのＡｓｎ２９７に結び付いた全ての糖鎖構造（例えば複合体、ハイブリッド及び高マンノース構造）の合計に対するＡｓｎ２９７の糖鎖内の平均フコース量を計算することにより決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域の約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥｕ付番；又はＫａｂａｔ付番における３１４位）に位置するアスパラギン残基を指す；しかしながら、Ａｓｎ２９７はまた、抗体のマイナーな配列変異に起因して、２９７位の約±３アミノ酸上流又は下流、即ち２９４位～３００位の間にも位置し得る。かかるフコシル化変異体は、ＡＤＣＣ機能が向上したものであり得る。一部の実施形態において、グリカン不均一性を低減するため、抗体のＦｃ領域は、２９７位のアスパラギンがアラニンに置き換わる（Ｎ２９７Ａ）ように更にエンジニアリングすることができる。
一部の実施形態では、Ｆａｂアーム交換を回避することにより作製効率を促進するため、ＩｇＧ４の２２８位（ＥＵ付番）のセリンがプロリンに置き換わる（Ｓ２２８Ｐ）ように抗体のＦｃ領域を更にエンジニアリングした。Ｓ２２８突然変異に関する詳細な説明は、例えば、Ｓｉｌｖａ ｅｔ ａｌ．「新規定量的イムノアッセイと生理学的マトリックス調製との組み合わせを用いて実証されるとおり、Ｓ２２８Ｐ突然変異はインビボ及びインビトロＩｇＧ４ Ｆａｂアーム交換を防止する（Ｔｈｅ Ｓ２２８Ｐ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｐｒｅｖｅｎｔｓ ｉｎ ｖｉｖｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＩｇＧ４ Ｆａｂ－ａｒｍ ｅｘｃｈａｎｇｅ ａｓ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ ｕｓｉｎｇ ａ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｏｖｅｌ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ ａｎｄ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｍａｔｒｉｘ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）」．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２９０．９（２０１５）：５４６２－５４６９（これはその全体が参照により援用される）に記載されている。
一部の態様において、本開示はまた、癌治療用の医薬を製造するための本明細書に記載される抗体又はその抗原断片の使用も提供する。
組換えベクター
本開示はまた、本明細書に開示される単離ポリヌクレオチド（例えば、本明細書に開示されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド）を含む組換えベクター（例えば、発現ベクター）、組換えベクターが導入される宿主細胞（即ち、宿主細胞がポリヌクレオチド及び／又はポリヌクレオチドを含むベクターを含有することになる）、及び組換え技術による組換え抗体ポリペプチド又はその断片の作製も提供する。
本明細書で使用されるとき、「ベクター」は、宿主細胞へのベクターの導入時に１つ以上の目的のポリヌクレオチドを宿主細胞に送達する能力を有する任意の構築物である。「発現ベクター」は、発現ベクターが導入されている宿主細胞において１つ以上の目的のポリヌクレオチドをコードされたポリペプチドとして送達し及び発現させる能力を有する。従って、発現ベクター中では、目的のポリヌクレオチドは、その発現ベクターを導入された宿主細胞中で目的のポリヌクレオチドが翻訳されることになるように、ベクターの範囲内又は宿主細胞のゲノム内のいずれかにおいて目的のポリヌクレオチドの組込み部位で、又はその近傍で、又はそれに隣接してプロモーター、エンハンサー、及び／又はポリＡテールなどの調節エレメントと作動可能に連結されているという点で、ベクターにおいて発現のための位置にある。
ベクターは、当該技術分野において公知の方法、例えば、電気穿孔、化学的トランスフェクション（例えば、ＤＥＡＥ－デキストラン）、形質転換、トランスフェクション、及び感染及び／又は形質導入（例えば、組換えウイルスによる）によって宿主細胞に導入することができる。従って、ベクターの非限定的な例には、ウイルスベクター（これは組換えウイルスの作成に使用することができる）、ネイキッドＤＮＡ又はＲＮＡ、プラスミド、コスミド、ファージベクター、及びカチオン性縮合剤に関連するＤＮＡ又はＲＮＡ発現ベクターが含まれる。
一部の実施態様では、本明細書に開示されるポリヌクレオチド（例えば、本明細書に開示されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド）は、ウイルス発現システム（例えば、ワクシニア又は他のポックスウイルス、レトロウイルス、又はアデノウイルス）を使用して導入され、これは、非病原性（欠損）の複製コンピテントウイルスの使用を伴い得るか、又は複製欠損ウイルスを使用し得る。後者の場合、概してウイルスの伝播は、補完的なウイルスパッケージング細胞においてのみ起こることになる。好適なシステムは、例えば、Ｆｉｓｈｅｒ－Ｈｏｃｈ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：３１７－３２１；Ｆｌｅｘｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ Ｓｃｉ．５６９：８６－１０３；Ｆｌｅｘｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｖａｃｃｉｎｅ，８：１７－２１；米国特許第４，６０３，１１２号明細書、同第４，７６９，３３０号明細書、及び同第５，０１７，４８７号明細書；国際公開第８９／０１９７３号パンフレット；米国特許第４，７７７，１２７号明細書；英国特許第２，２００，６５１号明細書；欧州特許第０，３４５，２４２号明細書；国際公開第９１／０２８０５号パンフレット；Ｂｅｒｋｎｅｒ－Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，６：６１６－６２７，１９８８；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５２：４３１－４３４；Ｋｏｌｌｓ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９１：２１５－２１９；Ｋａｓｓ－Ｅｉｓｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：１１４９８－１１５０２；Ｇｕｚｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，８８：２８３８－２８４８；及びＧｕｚｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｃｉｒ．Ｒｅｓ．，７３：１２０２－１２０７に開示されている。ＤＮＡをかかる発現システムに取り入れる技法は当業者に周知である。ＤＮＡはまた、例えば、Ｕｌｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５９：１７４５－１７４９、及びＣｏｈｅｎ，１９９３，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５９：１６９１－１６９２に記載されるとおり、「ネイキッド」であってもよい。ネイキッドＤＮＡの取込みは、細胞内へと効率的に輸送される生分解性ビーズにＤＮＡをコーティングすることにより増加し得る。
発現のため、本明細書に開示される抗体コード又はポリペプチドコードポリヌクレオチドを含むＤＮＡインサートは、いくつか例を挙げれば、λファージＰＬプロモーター、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ｌａｃ、ｔｒｐ及びｔａｃプロモーター、ＳＶ４０初期及び後期プロモーター並びにレトロウイルスＬＴＲのプロモーターなど、適切なプロモーター（例えば、異種プロモーター）に作動可能に連結することができる。他の好適なプロモーターが当業者に公知である。発現構築物は、転写開始、終結部位、及び転写領域における翻訳のためのリボソーム結合部位を更に含むことができる。構築物によって発現される成熟転写物のコード部分は、翻訳されるポリペプチドの始まりに翻訳開始コドン及びその終わりに適切な位置にある終止コドン（ＵＡＡ、ＵＧＡ、又はＵＡＧ）を含み得る。
指示されるとおり、発現ベクターは少なくとも１つの選択可能なマーカーを含み得る。かかるマーカーには、真核細胞培養用のジヒドロ葉酸レダクターゼ又はネオマイシン耐性並びに大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）及び他の細菌における培養用にテトラサイクリン又はアンピシリン耐性遺伝子が含まれる。適切な宿主の代表的な例としては、限定はされないが、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、ストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）、及びネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）細胞などの細菌細胞；酵母細胞などの真菌細胞；ショウジョウバエＳ２及びスポドプテラＳｆ９細胞などの昆虫細胞；ＣＨＯ、ＣＯＳ、Ｂｏｗｅｓ黒色腫、及びＨＫ２９３細胞などの動物細胞；及び植物細胞が挙げられる。本明細書に記載される宿主細胞に適切な培養培地及び条件は当該技術分野において公知である。
細菌での使用のための非限定的なベクターとしては、Ｑｉａｇｅｎから入手可能なｐＱＥ７０、ｐＱＥ６０及びｐＱＥ－９；Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅから入手可能なｐＢＳベクター、Ｐｈａｇｅｓｃｒｉｐｔベクター、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔベクター、ｐＮＨ８Ａ、ｐＮＨ１６ａ、ｐＮＨ１８Ａ、ｐＮＨ４６Ａ；及びＰｈａｒｍａｃｉａから入手可能なｐｔｒｃ９９ａ、ｐＫＫ２２３－３、ｐＫＫ２３３－３、ｐＤＲ５４０、ｐＲＩＴ５が挙げられる。非限定的な真核生物ベクターとしては、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅから入手可能なｐＷＬＮＥＯ、ｐＳＶ２ＣＡＴ、ｐＯＧ４４、ｐＸＴ１及びｐＳＧ；及びＰｈａｒｍａｃｉａから入手可能なｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳＧ及びｐＳＶＬが挙げられる。他の好適なベクターは、当業者には容易に明らかであろう。
使用に好適な非限定的な細菌プロモーターとしては、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ｌａｃＩ及びｌａｃＺプロモーター、Ｔ３及びＴ７プロモーター、ｇｐｔプロモーター、λＰＲ及びＰＬプロモーター並びにｔｒｐプロモーターが挙げられる。好適な真核生物プロモーターとしては、ＣＭＶ前初期プロモーター、ＨＳＶチミジンキナーゼプロモーター、初期及び後期ＳＶ４０プロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）のものなど、レトロウイルスＬＴＲのプロモーター、及びマウスメタロチオネイン－Ｉプロモーターなど、メタロチオネインプロモーターが挙げられる。
酵母サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）においては、α因子、アルコールオキシダーゼ、及びＰＧＨなど、構成的又は誘導性プロモーターを含む幾つものベクターが使用されてもよい。レビューについては、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ，ａｎｄ Ｇｒａｎｔ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１５３：５１６－５４４（１９９７）を参照のこと。
宿主細胞への構築物の導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ－デキストラン媒介性トランスフェクション、カチオン性脂質媒介性トランスフェクション、電気穿孔、形質導入、感染又は他の方法によって達成することができる。かかる方法は、Ｄａｖｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂａｓｉｃ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９８６）（これは全体として参照により本明細書に援用される）など、多くの標準的な実験マニュアルに記載されている。
高等真核生物による本開示の抗体をコードするＤＮＡの転写は、ベクターにエンハンサー配列を挿入することにより増加し得る。エンハンサーは、通常は約１０～３００ｂｐの、所与の宿主細胞型におけるプロモーターの転写活性を増加させるように働くＤＮＡのシス作用エレメントである。エンハンサーの例としては、塩基対１００～２７０において複製起点の後期側に位置するＳＶ４０エンハンサー、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後期側にあるポリオーマエンハンサー、及びアデノウイルスエンハンサーが挙げられる。
翻訳されたタンパク質を小胞体の管腔内、細胞膜周辺腔内又は細胞外環境内へと分泌させるため、発現させるポリペプチドに適切な分泌シグナルを取り入れてもよい。こうしたシグナルはポリペプチドにとって内因性であってもよく、又はそれは異種シグナルであってもよい。
ポリペプチド（例えば、抗体）は、融合タンパク質（例えば、ＧＳＴ融合体）又はヒスチジンタグ付加など、修飾された形態で発現させることができ、分泌シグナルのみならず、更なる異種機能性領域もまた含み得る。例えば、ポリペプチドのＮ末端に、更なるアミノ酸、特に荷電アミノ酸の領域を付加してもよく、それにより宿主細胞内での、精製中の、又は続くハンドリング及び保存中の安定性及び持続性が向上し得る。また、ポリペプチドにペプチド部分を付加して精製を促進することができる。かかる領域は、ポリペプチドの最終調製前に取り除くことができる。ポリペプチドにペプチド部分を付加して、とりわけ、分泌又は排出を生じさせ、安定性を向上させ、及び精製を促進することは、当該技術分野では熟知されているルーチンの技法である。
本開示はまた、本明細書に記載されるとおりの任意のヌクレオチド配列と少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一の核酸配列、及び本明細書に記載されるとおりの任意のアミノ酸配列と少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一のアミノ酸配列も提供する。
本開示はまた、本明細書に記載されるとおりの任意のヌクレオチド配列と少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の相同性を有する核酸配列、及び本明細書に記載されるとおりの任意のアミノ酸配列と少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の相同性を有するアミノ酸配列も提供する。
一部の実施形態において、本開示は、本明細書に記載される任意のペプチドをコードするヌクレオチド配列、又は本明細書に記載されるとおりの任意のヌクレオチド配列によってコードされる任意のアミノ酸配列に関する。一部の実施形態において、核酸配列は、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、５００、又は６００ヌクレオチド未満である。一部の実施形態において、アミノ酸配列は、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２５０、３００、３５０、又は４００アミノ酸残基未満である。
一部の実施形態において、本アミノ酸配列は（ｉ）あるアミノ酸配列を含み；又は（ｉｉ）あるアミノ酸配列からなり、ここでこのアミノ酸配列は、本明細書に記載されるとおりの配列のいずれか１つである。
一部の実施形態において、本核酸配列は（ｉ）ある核酸配列を含み；又は（ｉｉ）ある核酸配列からなり、ここでこの核酸配列は、本明細書に記載されるとおりの配列のいずれか１つである。
２つのアミノ酸配列、又は２つの核酸配列の同一率を決定するには、それらの配列を最適比較を目的としてアラインメントする（例えば、最適アラインメントのため第１及び第２のアミノ酸又は核酸配列の一方又は両方にギャップを導入することができ、比較目的で非相同配列を無視することができる）。比較目的でアラインメントされる参照配列の長さは、その参照配列の長さの少なくとも８０％であり、一部の実施形態では少なくとも９０％、９５％、又は１００％である。次に対応するアミノ酸位置又はヌクレオチド位置のアミノ酸残基又はヌクレオチドを比較する。第１の配列中のある位置が第２の配列中の対応する位置と同じアミノ酸残基又はヌクレオチドによって占められているとき、それらの分子は当該位置において同一である（本明細書で使用されるとき、アミノ酸又は核酸「同一性」はアミノ酸又は核酸「相同性」と等しい）。２つの配列間の同一率は、２つの配列の最適アラインメントのため導入する必要のあるギャップの数、及び各ギャップの長さを考慮に入れた、配列によって共有される同一位置の数の関数である。本発明の目的上、配列の比較及び２つの配列間の同一率の決定は、Ｂｌｏｓｓｕｍ ６２スコアリング行列を用いて、ギャップペナルティ１２、ギャップ伸長ペナルティ４、及びフレームシフトギャップペナルティ５として達成することができる。
例えばロイシンとイソロイシンなど、物理化学的特性が類似している保存された残基の割合（相同率）もまた、配列類似性の測定に用いることができる。類似の物理化学的特性を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該技術分野において定義されている。これらのファミリーには、例えば、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β分枝側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が含まれる。相同性パーセンテージは、多くの場合、同一性パーセンテージよりも高い。
治療方法
本開示の１つ若しくは複数の抗体又はその抗原結合断片は、様々な治療目的に使用することができる。一態様において、本開示は、対象における癌の治療方法、対象における時間の経過に伴う腫瘍容積の増加速度を低減する方法、転移の発生リスクを低減する方法、又は対象における更なる転移の発生リスクを低減する方法を提供する。一部の実施形態において、治療は、癌の進行を食い止め、減速させ、遅らせ、又は阻害することができる。一部の実施形態において、治療の結果、対象における癌の１つ以上の症状の数、重症度、及び／又は持続期間を低減することができる。
一態様において、本開示は、本明細書に開示される抗体又はその抗原結合断片の治療有効量を、それを必要としている対象（例えば、癌を有する、又は有すると同定若しくは診断された対象）（例えば、乳癌（例えば、トリプルネガティブ乳癌）、カルチノイド癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、神経膠腫、頭頸部癌、肝癌、肺癌、小細胞肺癌、リンパ腫、黒色腫、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、腎癌、結腸直腸癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、膀胱癌、尿道癌、又は血液学的悪性腫瘍）に投与することを含む方法を特徴とする。一部の実施形態において、癌は、切除不能黒色腫又は転移性黒色腫、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、膀胱癌、又は転移性ホルモン不応性前立腺癌である。一部の実施形態において、対象は固形腫瘍を有する。一部の実施形態において、癌は、頭頸部扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）、腎細胞癌（ＲＣＣ）、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）、又は結腸直腸癌である。一部の実施形態において、対象はホジキンリンパ腫を有する。一部の実施形態において、対象は、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）、胃癌、尿路上皮癌、メルケル細胞癌、又は頭頸部癌を有する。一部の実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は抗４－１ＢＢ抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施形態において、抗体はＩｇＧ１抗４－１ＢＢ抗体（例えば、ヒトＩｇＧ１抗４－１ＢＢ抗体）である。
一部の実施形態において、本明細書に開示される組成物及び方法は、癌のリスクがある患者の治療に使用することができる。癌を有する患者は、当該技術分野において公知の様々な方法で同定することができる。
更に、抗４－１ＢＢ抗体は免疫応答を促進することができるため、本開示は、対象の感染症を治療する方法を提供する。感染症の種類としては、例えば、細菌性、真菌性、ウイルス性、原虫性、及び寄生虫性疾患が挙げられる。一部の実施形態において、治療は、疾患の進行を食い止め、減速させ、遅らせ、又は阻害することができる。加えて、４－１ＢＢ抗体治療（例えば、アゴニスト抗体又はアンタゴニスト抗体）はまた、自己免疫疾患、喘息の治療にも、加えてワクチン接種を改善する手段としても使用することができる。これらの方法は、概して、本明細書に開示される抗体又はその抗原結合断片の治療有効量をそれを必要としている対象に投与することを含む。
本明細書で使用されるとき、「有効量」とは、疾患、例えば癌又は自己免疫疾患の進行を食い止め、減速させ、遅らせ、又は阻害することを含めた有益な又は所望の結果を生じさせるのに十分な量又は投薬量を意味する。有効量は、例えば、抗体、抗原結合断片、抗体コードポリヌクレオチド、ポリヌクレオチドを含むベクター、及び／又はその組成物が投与される対象の年齢及び体重、症状の重症度及び投与経路に応じて異なることになり、従って投与は個別に決定されてもよい。
有効量は、１回以上の投与で投与することができる。例として、抗体又は抗原結合断片の有効量は、患者における癌の進行を改善し、止め、安定化させ、逆転させ、阻害し、減速及び／又は遅延させるのに十分な量であるか、又はインビトロで細胞（例えば、生検細胞、本明細書に記載される癌細胞のいずれか、又は細胞株（例えば、癌細胞株））の増殖を改善し、止め、安定化させ、逆転させ、減速及び／又は遅延させるのに十分な量である。当該技術分野において理解されるとおり、抗体又は抗原結合断片の有効量は、とりわけ、患者病歴並びに使用される抗体のタイプ（及び／又は投薬量）などの他の要因に応じて異なり得る。
本明細書に開示される抗体、抗体コードポリヌクレオチド、及び／又は組成物の有効量及び投与スケジュールは実験的に決定されてもよく、かかる決定を行うことは、当該技術分野における技能の範囲内である。当業者は、投与しなければならない投薬量が、例えば、本明細書に開示される抗体、抗体コードポリヌクレオチド、及び／又は組成物の投与を受けることになる哺乳類、投与経路、使用される本明細書に開示される抗体、抗体コードポリヌクレオチド、抗原結合断片、及び／又は組成物の詳細なタイプ並びに哺乳類に投与されている他の薬物に応じて異なり得ることを理解しているであろう。抗体又は抗原結合断片に適切な用量の選択における手引きについては、抗体及び抗原結合断片の治療使用に関連する文献、例えば、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｆｅｒｒｏｎｅ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｎｏｇｅｓ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐａｒｋ Ｒｉｄｇｅ，Ｎ．Ｊ．，１９８５，ｃｈ．２２ ａｎｄ ｐｐ．３０３－３５７；Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｈａｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７７，ｐｐ．３６５－３８９を参照することができる。
有効量の抗体の典型的な１日投薬量は、０．０１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇである。一部の実施形態において、投薬量は、１００ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、又は０．１ｍｇ／ｋｇより低くてもよい。一部の実施形態において、投薬量は、１０ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、又は０．０１ｍｇ／ｋｇより高くてもよい。一部の実施形態において、投薬量は、約１０ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、又は０．１ｍｇ／ｋｇである。
本明細書に記載される方法のいずれにおいても、少なくとも１つの抗体、その抗原結合断片、又は医薬組成物（例えば、本明細書に記載される抗体、抗原結合断片、又は医薬組成物のいずれか）、及び任意選択で、少なくとも１つの追加的な治療剤は、対象に少なくとも週１回（例えば、週１回、週２回、週３回、週４回、１日１回、１日２回、又は１日３回）投与することができる。一部の実施形態において、少なくとも２つの異なる抗体及び／又は抗原結合断片が同じ組成物（例えば、液体組成物）で投与される。一部の実施形態において、少なくとも１つの抗体又は抗原結合断片と少なくとも１つの追加的な治療剤とが同じ組成物（例えば、液体組成物）で投与される。一部の実施形態において、少なくとも１つの抗体又は抗原結合断片と少なくとも１つの追加的な治療剤とは２つの異なる組成物（例えば、少なくとも１つの抗体又は抗原結合断片を含有する液体組成物と少なくとも１つの追加的な治療剤を含有する固体経口組成物）で投与される。一部の実施形態において、少なくとも１つの追加的な治療剤は、丸薬、錠剤、又はカプセルとして投与される。一部の実施形態において、少なくとも１つの追加的な治療剤は、徐放性経口製剤で投与される。
一部の実施形態において、１つ以上の追加的な治療剤は、少なくとも１つの抗体、抗原結合抗体断片、又は医薬組成物（例えば、本明細書に記載される抗体、抗原結合抗体断片、又は医薬組成物のいずれか）の投与前、又は投与後に対象に投与することができる。一部の実施形態において、１つ以上の追加的な治療剤と、少なくとも１つの抗体、抗原結合抗体断片、又は医薬組成物（例えば、本明細書に記載される抗体、抗原結合抗体断片、又は医薬組成物のいずれか）とは、対象において１つ以上の追加的な治療剤と少なくとも１つの抗体又は抗原結合断片（例えば、本明細書に記載される抗体又は抗原結合断片のいずれか）との生物活性期間に重複があるように対象に投与される。
一部の実施形態において、対象は、少なくとも１つの抗体、抗原結合抗体断片、又は医薬組成物（例えば、本明細書に記載される抗体、抗原結合抗体断片、又は医薬組成物のいずれか）を長期間にわたり（例えば、少なくとも１週間、２週間、３週間、１ヵ月、２ヵ月、３ヵ月、４ヵ月、５ヵ月、６ヵ月、７ヵ月、８ヵ月、９ヵ月、１０ヵ月、１１ヵ月、１２ヵ月、１年、２年、３年、４年、又は５年の期間にわたり）投与されてもよい。当業者である医療専門家は、本明細書に記載される方法のいずれかを診断に用いて、又は治療の有効性（例えば、癌の少なくとも１つの症状の観察）に従い、治療期間の長さを決定し得る。本明細書に記載されるとおり、当業者である医療専門家はまた、対象に投与される抗体又は抗原結合抗体断片（及び／又は１つ以上の追加的な治療剤）のアイデンティティ及び数を変更する（例えば、増加又は低下させる）こともでき、また、少なくとも１つの抗体又は抗原結合抗体断片（及び／又は１つ以上の追加的な治療剤）の対象への投与について、治療の有効性の評価に基づき（例えば、本明細書に記載される及び当該技術分野において公知の方法のいずれかを用いて）投薬量又は頻度を調整する（例えば、増加又は低下させる）こともできる。
一部の実施形態において、対象に１つ以上の追加的な治療剤を投与することができる。追加的な治療剤は、Ｂ－Ｒａｆの阻害薬、ＥＧＦＲ阻害薬、ＭＥＫの阻害薬、ＥＲＫの阻害薬、Ｋ－Ｒａｓの阻害薬、ｃ－Ｍｅｔの阻害薬、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）の阻害薬、ホスファチジルイノシトール３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）の阻害薬、Ａｋｔの阻害薬、ｍＴＯＲの阻害薬、二重ＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ阻害薬、ブルトンチロシンキナーゼ（ＢＴＫ）の阻害薬、及びイソクエン酸デヒドロゲナーゼ１（ＩＤＨ１）及び／又はイソクエン酸デヒドロゲナーゼ２（ＩＤＨ２）の阻害薬からなる群から選択される１つ以上の阻害薬を含むことができる。一部の実施形態において、追加的な治療剤は、インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ－１）（ＩＤＯ１）の阻害薬（例えば、エパカドスタット）である。
一部の実施形態において、追加的な治療剤は、ＨＥＲ３の阻害薬、ＬＳＤ１の阻害薬、ＭＤＭ２の阻害薬、ＢＣＬ２の阻害薬、ＣＨＫ１の阻害薬、活性化ヘッジホッグシグナル伝達経路の阻害薬、及びエストロゲン受容体を選択的に分解する薬剤からなる群から選択される１つ以上の阻害薬を含むことができる。
一部の実施形態において、追加的な治療剤は、トラベクテジン、ｎａｂ－パクリタキセル、トレバナニブ、パゾパニブ、セジラニブ、パルボシクリブ、エベロリムス、フルオロピリミジン、ＩＦＬ、レゴラフェニブ、レオリジン（Ｒｅｏｌｙｓｉｎ）、アリムタ（Ａｌｉｍｔａ）、ジカディア（Ｚｙｋａｄｉａ）、スーテント（Ｓｕｔｅｎｔ）、テムシロリムス、アキシチニブ、エベロリムス、ソラフェニブ、ヴォトリエント（Ｖｏｔｒｉｅｎｔ）、パゾパニブ、ＩＭＡ－９０１、ＡＧＳ－００３、カボザンチニブ、ビンフルニン、Ｈｓｐ９０阻害薬、Ａｄ－ＧＭ－ＣＳＦ、テモゾロミド（Ｔｅｍａｚｏｌｏｍｉｄｅ）、ＩＬ－２、ＩＦＮａ、ビンブラスチン、サロミド（Ｔｈａｌｏｍｉｄ）、ダカルバジン、シクロホスファミド、レナリドマイド、アザシチジン、レナリドマイド、ボルテゾミブ（ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｄ）、アムルビシン（ａｍｒｕｂｉｃｉｎｅ）、カルフィルゾミブ、プララトレキサート、及びエンザスタウリンからなる群から選択される１つ以上の治療剤を含むことができる。
一部の実施形態において、追加的な治療剤は、アジュバント、ＴＬＲアゴニスト、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）α、ＩＬ－１、ＨＭＧＢ１、ＩＬ－１０アンタゴニスト、ＩＬ－４アンタゴニスト、ＩＬ－１３アンタゴニスト、ＩＬ－１７アンタゴニスト、ＨＶＥＭアンタゴニスト、ＩＣＯＳアゴニスト、治療ターゲティングＣＸ３ＣＬ１、治療ターゲティングＣＸＣＬ９、治療ターゲティングＣＸＣＬ１０、治療ターゲティングＣＣＬ５、ＬＦＡ－１アゴニスト、ＩＣＡＭ１アゴニスト、及びセレクチンアゴニストからなる群から選択される１つ以上の治療剤を含むことができる。
一部の実施形態において、カルボプラチン、ｎａｂ－パクリタキセル、パクリタキセル、シスプラチン、ペメトレキセド、ゲムシタビン、ＦＯＬＦＯＸ、又はＦＯＬＦＩＲＩが対象に投与される。
一部の実施形態において、追加的な治療剤は、抗ＯＸ４０抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、又は抗ＧＩＴＲ抗体である。
一部の実施形態において、追加的な療法は化学療法又は化学放射線治療である。一部の実施形態において、追加的な治療剤は抗ＣＴＬＡ４抗体（例えば、イピリムマブ）、抗ＣＤ２０抗体（例えば、リツキシマブ）、抗ＥＧＦＲ抗体（例えば、セツキシマブ）、抗ＣＤ３１９抗体（例えば、エロツズマブ）、又は抗ＰＤ１抗体（例えば、ニボルマブ）である。
一部の実施形態において、追加的な治療剤は、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＢＴＬＡ、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ４７、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ－３、ＧＩＴＲ、又はＯＸ４０に特異的に結合する抗体である。
本開示はまた、抗４－１ＢＢ ＩｇＧ１サブクラス抗体と追加的な治療剤との併用が、抗４－１ＢＢ ＩｇＧ４サブクラス抗体と一部の追加的な治療剤との併用よりも良好な腫瘍阻害効果を有することも示す。従って、一態様において、本開示は、治療有効量の抗４－１ＢＢ ＩｇＧ１抗体又はその抗原結合断片と追加的な治療剤とを対象に投与することにより対象を治療する方法又は腫瘍を死滅させる方法を提供する。一部の実施形態において、追加的な治療剤は、抗ＰＤ－１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、又は抗ＯＸ４０抗体である。
医薬組成物及び投与経路
また、本明細書には、本明細書に記載される抗体又は抗原結合断片のうちの少なくとも１つ（例えば、１、２、３、又は４つ）を含む医薬組成物も提供される。本明細書に記載される抗体又は抗原結合断片のいずれかの２つ以上（例えば、２、３、又は４つ）が任意の組み合わせで医薬組成物中に存在することができる。本医薬組成物は、当該技術分野において公知の任意の方法で製剤化され得る。
本医薬組成物は、その意図される投与経路（例えば、静脈内、動脈内、筋肉内、皮内、皮下、又は腹腔内）と適合性があるように製剤化される。本組成物は、滅菌希釈剤（例えば、滅菌水又は生理食塩水）、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール又は他の合成溶媒、抗細菌剤又は抗真菌剤、例えば、ベンジルアルコール又はメチルパラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなど、抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウムなど、キレート剤、例えばエチレンジアミン四酢酸など、緩衝液、例えば、酢酸塩、クエン酸塩、又はリン酸塩など、及び等張剤、例えば、糖類（例えば、デキストロース）、多価アルコール類（例えば、マンニトール又はソルビトール）、又は塩（例えば、塩化ナトリウム）など、又はこれらの任意の組み合わせを含むことができる。リポソーム懸濁液もまた、薬学的に許容可能な担体として使用することができる（例えば、米国特許第４，５２２，８１１号明細書を参照のこと）。本組成物の調製物は、製剤化し、アンプル、使い捨てシリンジ、又は頻回投与バイアルに封入することができる。必要に応じて（例えば注射用製剤の場合のように）、例えば、レシチンなどのコーティング、又は界面活性剤の使用によって適切な流動性を維持することができる。抗体又はその抗原結合断片の吸収は、吸収を遅延させる薬剤（例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチン）を含めることにより延長させることができる。或いは、制御放出は、インプラント及びマイクロカプセル化デリバリーシステムによって実現することができ、これらは、生分解性生体適合性ポリマー（例えば、エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル類、及びポリ乳酸；Ａｌｚａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ及びＮｏｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ，Ｉｎｃ．）を含み得る。
本明細書に記載される抗体又は抗原結合断片のいずれかの１つ以上を含む組成物は、非経口（例えば、静脈内、動脈内、筋肉内、皮内、皮下、又は腹腔内）投与用に投薬量単位形態（即ち、投与の容易さ及び投薬量の均一性のため所定分量の活性化合物を含有する物理的に個別の単位）で製剤化することができる。
組成物の毒性及び治療有効性は、細胞培養物又は実験動物（例えば、サル）において標準的な薬学的手順により決定することができる。例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に致死的な用量）及びＥＤ５０（集団の５０％に治療上有効な用量）：ＬＤ５０：ＥＤ５０の比である治療指数を決定することができる。高い治療指数を呈する薬剤が好ましい。薬剤が望ましくない副作用を呈する場合、潜在的損傷を最小限に抑える（即ち、望ましくない副作用を低減する）ように注意しなければならない。毒性及び治療有効性は、他の標準的な薬学的手順により決定することができる。
対象（例えば、ヒト）に用いるいずれか所与の薬剤の適切な投薬量の製剤化においては、細胞培養アッセイ及び動物試験から得られるデータを用いることができる。１つ以上（例えば、１、２、３、又は４つ）の抗体又はその抗原結合断片（例えば、本明細書に記載される抗体又は抗体断片のいずれか）の治療有効量とは、対象（例えば、癌を有すると同定されたヒト対象）、又は疾患を発症するリスクがあると同定された対象（例えば、過去に癌を発症したことがあるが、現在は治癒している対象）において対象の疾患を治療する（例えば、癌細胞を死滅させる）、対象（例えば、ヒト）における疾患の１つ以上の症状の重症度、頻度、及び／又は持続期間を低下させる量ということになる。本明細書に記載される抗体又は抗原結合断片のいずれかの有効性及び用量は、医療専門家又は獣医学専門家が当該技術分野において公知の方法を用いて、並びに対象（例えば、ヒト）における疾患の１つ以上の症状の観察により決定することができる。対象を有効に治療するために必要な投薬量及びタイミングには、特定の要因が影響を与え得る（例えば、疾患又は障害の重症度、治療歴、対象の全般的な健康及び／又は年齢、及び他の疾患の有無）。
例示的用量は、対象の体重１キログラム当たりの本明細書に記載される抗体又は抗原結合断片のいずれかのミリグラム又はマイクログラム量を含む（例えば、約１μｇ／ｋｇ～約５００ｍｇ／ｋｇ；約１００μｇ／ｋｇ～約５００ｍｇ／ｋｇ；約１００μｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ；約１０μｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ；約１０μｇ／ｋｇ～約０．５ｍｇ／ｋｇ；約１μｇ／ｋｇ～約５０μｇ／ｋｇ；約５００μｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ；又は約５００μｇ／ｋｇ～約２ｍｇ／ｋｇ）。これらの用量は広い範囲を網羅するが、当業者は、抗体及びその抗原結合断片を含めた治療剤がその効力の点で異なり、有効量は当該技術分野において公知の方法により決定し得ることを理解するであろう。典型的には、初めは比較的低い用量が投与され、担当の医療専門家又は獣医学専門家（治療適用の場合）又は研究者（未だ開発段階で作業中のとき）が続いて適切な反応が得られるまで用量を徐々に増加させることができる。加えて、任意の特定の対象についての具体的な用量レベルは、用いられる具体的な化合物の活性、対象の年齢、体重、全般的な健康、性別、及び食事、投与時間、投与経路、排泄速度、及び抗体又は抗体断片のインビボ半減期を含めた種々の要因に依存するであろうことが理解される。
本医薬組成物は、容器、パック、又はディスペンサーに投与説明書と共に封入することができる。本開示はまた、本明細書に記載されるとおりの様々な使用のための抗体又はその抗原結合断片の製造方法も提供する。
本発明は以下の実施例に更に記載され、実施例は特許請求の範囲に記載される本発明の範囲を限定するものではない。
実施例１．マウス抗ｈ４－１ＢＢ抗体の作成
ヒト４－１ＢＢ（ｈ４－１ＢＢ；配列番号２１７）に対するマウス抗体を作成するため、６～８週齢雌ＢＡＬＢ／ｃマウスをヒト４－１ＢＢで免疫した。以下に記載し、図１及び図２に図示するとおりの方法により、抗ｈ４－１ＢＢ抗体を採取した。
マウスの免疫化
６～８週齢雌ＢＡＬＢ／ｃマウスを１００μｇ／ｍｌの濃度のＨｉｓタグ付加ヒト４－１ＢＢタンパク質によって２０μｇ／マウスで免疫した。Ｈｉｓタグ付加ヒト４－１ＢＢタンパク質はアジュバントで乳化させて、マウスの背中の４つの位置に注射した。１回目の皮下（ｓ．ｃ．）注射については、抗原希釈液を等容積の完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）で乳化させた。続く皮下注射では、タンパク質を等容積の不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）で乳化させた。３回目の注射又はブースター免疫の３日後、血液（血清）を採取し、抗体力価に関してＥＬＩＳＡを用いて分析した。
別の実験では、ヒト４－１ＢＢをコードする発現プラスミドをマウスに注射することによって６～８週齢雌ＢＡＬＢ／ｃマウスを免疫した。抗原をコードするプラスミドは、遺伝子銃を使用することによりマウスの前脛骨筋（筋肉内注射；ｉ．ｍ．注射）に１０００μｇ／ｕｌの濃度で各マウスにつき６０μｇを注射した。少なくとも４回の注射を実施し、２つの注射間は少なくとも１４日空けた。最終回の免疫化から７日後に血液（血清）を採取し、血清の抗体力価をＥＬＩＳＡによって試験した。
前回の免疫化から少なくとも１４日後に、免疫化を亢進させるための手順もまた（プラスミドの注射によるか、又はタンパク質の注射によるかのいずれかで）実施した。表面上に４－１ＢＢ抗原を発現するＣＨＯ細胞をマウスの尾静脈に静脈内注射した。次に注射の４日後に脾臓を採取した。
ＳＰ２／０細胞と脾臓細胞との融合
脾臓組織を粉砕した。初めにＣＤ３εマイクロビーズ及び抗マウスＩｇＭマイクロビーズによって脾臓細胞を選択し、次にＳＰ２／０細胞と融合した。次にこの細胞をヒポキサンチン－アミノプテリン－チミジン（ＨＡＴ）培地が入った９６ウェルプレートにプレーティングした。
ハイブリドーマの一次スクリーニング
標準的手順に従い蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）を用いて９６ウェルプレート内のハイブリドーマ上清の一次スクリーニングを実施した。９６ウェルプレートにチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を加え（２×１０４細胞／ウェル）、その後スクリーニングした。５０μｌの上清を使用した。実験に使用した抗体は、
（１）フルオレセイン（ＦＩＴＣ）コンジュゲートＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｆ（ａｂ）２断片ヤギ抗マウスＩｇＧ、Ｆｃγ断片特異的、及び
（２）Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７コンジュゲートＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｆ（ａｂ）２断片ヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆｃγ断片特異的
であった。
サブクローニング
ＣｌｏｎｅＰｉｘ２を使用してサブクローニングを実施した。手短に言えば、一次スクリーニングで同定された陽性ウェルを半流動培地に移し、ＩｇＧ陽性クローンを同定して試験した。ＦＩＴＣ抗マウスＩｇＧ Ｆｃ抗体を使用した。
腹水抗体
１×１０６個の陽性ハイブリドーマ細胞をＢ－ＮＤＧ（商標）マウス（Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｂｉｏｃｙｔｏｇｅｎ、中国北京市）に腹腔内注射した。マウスの腹膜腔内でハイブリドーマ細胞を成長させることにより、モノクローナル抗体を産生した。ハイブリドーマ細胞が増大し、マウスの腹部に腹水が生じた。この水には、回収して後に使用し得る高濃度の抗体が含まれた。
抗体の精製
ＧＥ ＡＫＴＡタンパク質クロマトグラフィー（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｃｈｉｃａｇｏ、米国イリノイ州）を使用して腹水中の抗体を精製した。少なくとも２７種のマウス抗体を作製した。所望の特性があるという理由で幾つかの抗体を選択した。上記に記載される方法によって作製したこれらの選択のマウス抗体には、例えば、１６－１Ｃ４（「１Ｃ４」）、２９－６Ａ５（「６Ａ５」）、３０－５Ｆ９（「５Ｆ９」）、４５－２Ｂ３（「２Ｂ３」）、４５－４Ｂ９（「４Ｂ９」）、４５－７Ｅ９（「７Ｅ９」）、４５－７Ｇ９（「７Ｇ９」）、４５－８Ｅ１１（「８Ｅ１１」）、４５－８Ｅ２（「８Ｅ２」）、４５－８Ｆ１（「８Ｆ１」）、５４－８Ｂ１１（「８Ｂ１１」）、５５－８Ｆ６（「８Ｆ６」）、５６－２Ａ６（「２Ａ６」）、５９－５Ｅ４（「５Ｅ４」）、６１－６Ａ７（「６Ａ７」）、６９－３Ｃ２（「３Ｃ２」）、７０－３Ｆ９（「３Ｆ９」）、及び７０－６Ｆ１０（「６Ｆ１０」）等が含まれる。
抗体のＶＨ、ＶＬ及びＣＤＲ領域を決定した。これらの抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３、及び軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列を表１、図５２及び図５３に示す。
実施例２．マウス抗体のヒト化
ヒト化の出発点は、マウス抗体（例えば、ＩＣ４、６Ａ５、及び５Ｆ９）であった。これらのマウス抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列を決定した。
ＩＣ４について、異なる修飾又は置換を含む４つのヒト化重鎖可変領域変異体（配列番号２２１～２２４）及び４つのヒト化軽鎖可変領域変異体（配列番号２２５～２２８）を構築した。
６Ａ５について、異なる修飾又は置換を含む３つのヒト化重鎖可変領域変異体（配列番号２２９～２３１）及び４つのヒト化軽鎖可変領域変異体（配列番号２３２～２３５）を構築した。
５Ｆ９について、異なる修飾又は置換を含む３つのヒト化重鎖可変領域変異体（配列番号２３６～２３８）及び４つのヒト化軽鎖可変領域変異体（配列番号２３９～２４２）を構築した。
これらのヒト化重鎖可変領域変異体は、同じマウス抗体に由来する軽鎖可変領域変異体のいずれかと組み合わせることができる。例えば、１Ｃ４－Ｈ１（配列番号２２１）は、同じマウス抗体１Ｃ４をベースとするいずれかのヒト化軽鎖可変領域変異体（例えば、配列番号２２５～２２８）と組み合わせることができ、その抗体には、それに従った抗体名が付与されることになる。例えば、１Ｃ４－Ｈ１を１Ｃ４－Ｋ３（配列番号２２７）と組み合わせる場合、その抗体は１Ｃ４－Ｈ１Ｋ３と名付けられる。
実施例３．ヒト４－１ＢＢに対する抗ｈ４－１ＢＢ抗体の結合活性
マウス腹水から抗ｈ４－１ＢＢ抗体を採取し、クロマトグラフィーによって精製した。ヒト４－１ＢＢを一過性にトランスフェクトした２５μｌ ＣＨＯ細胞をプレートの各ウェルに加えた。精製抗体は、１０、１、０．１、０．０１、０．００１μｇ／ｍｌの終濃度に用量調整した。用量調整後の抗体を４℃で各ウェルに加え、３０分間インキュベートした。
リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（１２００ｒｐｍ、５分）で２回洗浄した後、各ウェルに１：１００希釈の５０μｌのＦＩＴＣ標識抗マウスＩｇＧ Ｆｃ抗体（抗ｍＩｇＧ Ｆｃ－ＦＩＴＣ）を加え、４℃で３０分間インキュベートし、続いてＰＢＳ洗浄した（１２００ｒｐｍ、５分）。フローサイトメトリーによりＦＩＴＣのシグナルを検出した。
図３に示されるとおり、１Ｃ４及び５Ｆ９はｈ４－１ＢＢとの強力な結合活性を有した。図３において、ＮＣは陰性対照を意味する。
以下の表には、試験した細胞のうち、フローサイトメトリー分析でＦＩＴＣシグナルを有した割合をまとめる。より低い抗体濃度で割合が高いほど、結合親和性が高いことを示している。
Figure 0007387743000005
実施例４．サル、マウス、及びヒト－マウスキメラ４－１ＢＢに対する抗ｈ４－１ＢＢ抗体の交差反応性
いずれの実験においても、ＣＨＯ細胞にマウス４－１ＢＢ（ｍ４－１ＢＢ、配列番号２１８）、サル（アカゲザル（ｒｈｅｓｕｓ ｍａｃａｑｕｅ））４－１ＢＢ（ｒ４－１ＢＢ、配列番号２１９）、又はキメラ（マウス及びヒト）４－１ＢＢ（ｃ４－１ＢＢ、配列番号２２０）をトランスフェクトした。
各ウェルに２５μｌ ＣＨＯ細胞を加えた。各ウェルに２５μｌの精製抗ｈ４－１ＢＢ抗体（１μｇ／ｍｌ）を加え、４℃で３０分間インキュベートした。
ＰＢＳ（１２００ｒｍｐ、５分）で２回洗浄した後、各ウェルに５０μｌのＦＩＴＣ標識抗マウスＩｇＧ Ｆｃ抗体（抗ｍＩｇＧ Ｆｃ－ＦＩＴＣ）を１：１００希釈で加え、続いて４℃で３０分間インキュベートし、次にＰＢＳ洗浄（１２００ｒｍｐ、５分）した。ある場合には、代わりにＰＥ標識抗マウスＩｇＧ Ｆｃ抗体（抗ｍＩｇＧ Ｆｃ－ＰＥ）を使用して抗体を標識し、各試験ウェルに１：５００希釈で加えた。フローサイトメトリーによりＦＩＴＣ及びＰＥのシグナルを決定した。
図４に示されるとおり、１Ｃ４及び５Ｆ９はマウス４－１ＢＢと交差反応しなかったが、サル４－１ＢＢ（ｒ４－１ＢＢ）とは強力な交差反応性があり、及びキメラ４－１ＢＢ（ｃ４－１ＢＢ）とは強力な交差反応性があった。図４において、ＮＣは陰性対照を意味する。
試験した抗体のサル（ｒ４－１ＢＢ）、マウス（ｍ４－１ＢＢ）、及びヒト－マウスキメラ４－１ＢＢ（ｃ４－１ＢＢ）との交差反応性を以下の表にまとめる。
Figure 0007387743000006
実施例５．抗ｈ４－１ＢＢ抗体の結合親和性
予め固定化されたプロテインＡセンサーチップを備えたＢｉａｃｏｒｅ（Ｂｉａｃｏｒｅ，ＩＮＣ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ Ｎ．Ｊ．）Ｔ２００バイオセンサーを使用した表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を用いて抗ｈ４－１ＢＢ抗体の結合親和性を測定した。
キメラ抗ｈ４－１ＢＢ抗体１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ４（１μｇ／ｍＬ）をＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００バイオセンサーに１０μＬ／分で２０秒間注入して所望のタンパク質密度（約５１．６反応単位（ＲＵ））を得た。次に、８００、２００、５０、１２．５、３．１２５ｎＭの濃度のヒスチジンタグ付加ヒト４－１ＢＢタンパク質（ｈ４－１ＢＢ－Ｈｉｓ）を３０μＬ／分で１８０秒間注入した。解離を３００秒間モニタした。各調整濃度の最後の注入後に、グリシン（ｐＨ２．０、３０μＬ／分で５秒間）でチップを再生した。１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ４の結果を図５に示す。
Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェア３．０を用いてデータを１：１ラングミュア結合モデルに大域的に当てはめることにより、動的会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）を同時に求めた（Ｋａｒｌｓｓｏｎ，Ｒ．Ｒｏｏｓ，Ｈ．Ｆａｇｅｒｓｔａｍ，Ｌ．Ｐｅｔｅｒｓｓｏｎ，Ｂ．，１９９４．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ６．９９－１１０）。動的速度定数の商から親和性を計算した（ＫＤ＝ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）。
当業者であれば理解するであろうとおり、試験した各抗体について、パラメータ（例えば、抗体濃度）を適宜調整しつつ同じ方法を実施した。例えば、２９－６Ａ５－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２の結果を図６に示す。試験した抗体の結果を以下の表にまとめる。
Figure 0007387743000007
Figure 0007387743000008
実施例１に記載されるとおり、１６－１Ｃ４、２９－６Ａ５、３０－５Ｆ９、４５－２Ｂ３、４５－４Ｂ９、４５－７Ｅ９、４５－７Ｇ９、４５－８Ｅ１１、４５－８Ｅ２、４５－８Ｆ１、５４－８Ｂ１１、５５－８Ｆ６、５６－２Ａ６、５９－５Ｅ４、６１－６Ａ７、６９－３Ｃ２、７０－３Ｆ９、及び７０－６Ｆ１０は、マウス抗ｈ４－１ＢＢ抗体である。これらのマウス抗ｈ４－１ＢＢ抗体をベースとして、例えば、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ４、２９－６Ａ５－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、３０－５Ｆ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ４、４５－２Ｂ３－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、４５－４Ｂ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、４５－７Ｅ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、４５－７Ｇ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、４５－８Ｅ１１－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、４５－８Ｅ２－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、４５－８Ｆ１－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、５４－８Ｂ１１－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、５５－８Ｆ６－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、５６－２Ａ６－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、５９－５Ｅ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、６１－６Ａ７－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、６９－３Ｃ２－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、７０－３Ｆ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、及び７０－６Ｆ１０－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２を含めたキメラ抗ｈ４－１ＢＢ抗体を作成した。これらのキメラ抗体は、対応するマウス抗ｈ４－１ＢＢ抗体からの重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインと、ヒトＩｇＧ抗体からの定常ドメイン（例えば、ＣＬ、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３ドメインを含む）とを有する。
試験した抗体にはまた、ヒト化抗体、例えば、１Ｃ４－Ｈ１Ｋ１－ＩｇＧ４、１Ｃ４－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ４、１Ｃ４－Ｈ１Ｋ３－ＩｇＧ４、１Ｃ４－Ｈ１Ｋ４－ＩｇＧ４、１Ｃ４－Ｈ２Ｋ１－ＩｇＧ４、１Ｃ４－Ｈ２Ｋ２－ＩｇＧ４、１Ｃ４－Ｈ２Ｋ３－ＩｇＧ４、１Ｃ４－Ｈ２Ｋ４－ＩｇＧ４、１Ｃ４－Ｈ３Ｋ１－ＩｇＧ４、１Ｃ４－Ｈ３Ｋ２－ＩｇＧ４、１Ｃ４－Ｈ３Ｋ３－ＩｇＧ４、１Ｃ４－Ｈ３Ｋ４－ＩｇＧ４、１Ｃ４－Ｈ４Ｋ１－ＩｇＧ４、１Ｃ４－Ｈ４Ｋ２－ＩｇＧ４、１Ｃ４－Ｈ４Ｋ３－ＩｇＧ４、１Ｃ４－Ｈ４Ｋ４－ＩｇＧ４、５Ｆ９－Ｈ１Ｋ１－ＩｇＧ４、５Ｆ９－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ４、５Ｆ９－Ｈ１Ｋ３－ＩｇＧ４、５Ｆ９－Ｈ１Ｋ４－ＩｇＧ４、５Ｆ９－Ｈ２Ｋ１－ＩｇＧ４、５Ｆ９－Ｈ２Ｋ２－ＩｇＧ４、５Ｆ９－Ｈ２Ｋ３－ＩｇＧ４、５Ｆ９－Ｈ２Ｋ４－ＩｇＧ４、５Ｆ９－Ｈ３Ｋ１－ＩｇＧ４、５Ｆ９－Ｈ３Ｋ２－ＩｇＧ４、５Ｆ９－Ｈ３Ｋ３－ＩｇＧ４、５Ｆ９－Ｈ３Ｋ４－ＩｇＧ４、６Ａ５－Ｈ１Ｋ１－ＩｇＧ２、６Ａ５－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ２、６Ａ５－Ｈ１Ｋ３－ＩｇＧ２、６Ａ５－Ｈ１Ｋ４－ＩｇＧ２、６Ａ５－Ｈ２Ｋ１－ＩｇＧ２、６Ａ５－Ｈ２Ｋ２－ＩｇＧ２、６Ａ５－Ｈ２Ｋ３－ＩｇＧ２、６Ａ５－Ｈ２Ｋ４－ＩｇＧ２、６Ａ５－Ｈ３Ｋ１－ＩｇＧ２、６Ａ５－Ｈ３Ｋ２－ＩｇＧ２、６Ａ５－Ｈ３Ｋ３－ＩｇＧ２、及び６Ａ５－Ｈ３Ｋ４－ＩｇＧ２等も含まれる。これらのヒト化抗体はヒト抗体定常ドメイン（例えば、ＣＬ、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３ドメインを含む）を有する。重鎖のヒト化可変ドメインは、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３等と番号が付与される；及び軽鎖のヒト化可変ドメインは、Ｋ１、Ｋ２、Ｋ３等と番号が付与される。ヒト化可変ドメインの配列は、図５５、図５６、及び図５７にまとめる。例えば、１Ｃ４－Ｈ１Ｋ１－ＩｇＧ４はマウス抗体１Ｃ４をベースとし、ヒト化重鎖可変ドメインＨ１（配列番号２２１）及びヒト化軽鎖可変ドメインＫ１（配列番号２２５）を有する。同様に、５Ｆ９－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ４はマウス抗体５Ｆ９をベースとし、ヒト化重鎖可変ドメインＨ１（配列番号２３６）及びヒト化軽鎖可変ドメインＫ２（配列番号２４０）を有する。
実施例６．抗ｈ４－１ＢＢ抗体の熱安定性
Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｈｅｒｍａｌ Ｓｈｉｆｔ（商標）Ｄｙｅキット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）及びＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ（商標）５リアルタイムＰＣＲシステム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用してＴｈｅｒｍｏｆｌｕｏｒアッセイを実施した。このアッセイは、タンパク質のアンフォールディングに伴い露出する疎水性パッチに結合する蛍光色素を用いて熱安定性を測定するものであった。
この実験は製造者のプロトコルに従い実施した。２μＬの抗体、１０．５μＬの水、５μＬのＰｒｏｔｅｉｎ Ｔｈｅｒｍａｌ Ｓｈｉｆｔ緩衝液、及び２．５μＬのＰｒｏｔｅｉｎ Ｔｈｅｒｍａｌ Ｓｈｉｆｔ Ｄｙｅ希釈物を混合した。試料を１．６℃／秒で２５℃に加熱し、次に０．０５℃／秒で９９℃に加熱した。
以下の表に、幾つかのヒト化又はキメラ抗ｈ４－１ＢＢ抗体のＴｍをまとめる。
Figure 0007387743000009
これらの結果から、本明細書に記載される抗ｈ４－１ＢＢ抗体はウトミルマブ及びウレルマブよりもＴｍが高いことが示される。
実施例７．マウス抗ｈ４－１ＢＢ抗体のインビボ試験
抗ｈ４－１ＢＢ抗体をインビボで試験し、ヒトにおけるこれらの抗体の効果を予測するため、ヒト化４－１ＢＢマウスモデルを作成した。このヒト化４－１ＢＢマウスモデルはキメラ４－１ＢＢタンパク質（配列番号２２０）を発現するようにエンジニアリングしたもので、マウス４－１ＢＢタンパク質の細胞外領域の一部を対応するヒト４－１ＢＢ細胞外領域に置き換えた。マウス４－１ＢＢ（配列番号２１８）のアミノ酸残基１～１８３をヒト４－１ＢＢ（配列番号２１７）のアミノ酸残基１～１８４によって置き換えた。ヒト化マウスモデル（Ｂ－ｈ４－１ＢＢマウス）は、ヒトとマウス４－１ＢＢを発現する普通のマウスとの間の臨床転帰の違いを大幅に減らすことにより、臨床セッティングで新規の治療処置を試験する新規ツールを提供する。ヒト化４－１ＢＢマウスモデルに関する詳細な説明は、ＰＣＴ／ＣＮ２０１７／１２０３８８号明細書（全体として参照により本明細書に援用される）を参照することができる。
抗ｈ４－１ＢＢ抗体がインビボで腫瘍成長に及ぼすその効果に関して結腸癌モデルで試験した。約５×１０５ＭＣ－３８癌腫瘍細胞（結腸腺癌細胞）をＢ－ｈ４－１ＢＢマウスに皮下注射した。マウスの腫瘍が１５０±５０ｍｍ３の容積に達したところで、マウスを腫瘍の容積に基づき異なる群に無作為に分けた。
次にマウスに生理食塩水（ＰＳ）及び抗ｈ４－１ＢＢ抗体を腹腔内（ｉ．ｐ．）投与によって注射した。
注射容積はマウスの体重に基づき１ｍｇ／ｋｇ又は３ｍｇ／ｋｇで計算した。腫瘍の長軸及び短軸の長さを測定し、腫瘍の容積を０．５×（長軸）×（短軸）２として計算した。マウスの体重はまた、注射前、マウスを異なる群に分けたとき（初回抗体注射の前）、抗体注射期間中週２回、及び安楽死前にも測定した。
以下の式：ＴＧＩ（％）＝［１－（Ｔｉ－Ｔ０）／（Ｖｉ－Ｖ０）］×１００を用いて腫瘍成長阻害率（ＴＧＩ％）を計算した。Ｔｉは、ｉ日目における治療群の平均腫瘍容積である。Ｔ０は、０日目における治療群の平均腫瘍容積である。Ｖｉは、ｉ日目における対照群の平均腫瘍容積である。Ｖ０は、０日目における対照群の平均腫瘍容積である。
統計的分析にはｔ検定を実施した。６０％より高いＴＧＩ％は、腫瘍成長の明らかな抑制を示している。Ｐ＜０．０５が、有意差を示す閾値である。
マウス抗ｈ４－１ＢＢ抗体１６－１Ｃ４（「１Ｃ４」）及び３０－５Ｆ９（「５Ｆ９」）のインビボ結果
各群において、Ｂ－ｈ４－１ＢＢマウスに生理食塩水（ＰＳ）（Ｇ１）、１ｍｇ／ｋｇウレルマブ（Ｇ２）、３ｍｇ／ｋｇウレルマブ（Ｇ３）、１ｍｇ／ｋｇのマウス抗ｈ４－１ＢＢ抗体１６－１Ｃ４（Ｇ４）、３ｍｇ／ｋｇの１６－１Ｃ４（Ｇ５）、１ｍｇ／ｋｇのマウス抗ｈ４－１ＢＢ抗体３０－５Ｆ９（Ｇ６）又は３ｍｇ／ｋｇの３０－５Ｆ９（Ｇ７）を注射した。
Figure 0007387743000010
全治療期間にわたってマウスの体重をモニタした。異なる群のマウスの平均体重が全て、程度は異なるものの、増加していた（図７、及び図８）。治療期間の終わりに異なる群間に明らかな体重差は認められなかった。これらの結果から、１Ｃ４及び６Ａ５がマウスに良好に忍容され、明らかな毒性はなかったことが示された。
ウレルマブ、１Ｃ４、又は６Ａ５で治療した群の腫瘍サイズは全て減少した（図９）。
以下の表に示すとおり、１９日目（群分け後１９日）におけるＴＧＩ％も計算した。
Figure 0007387743000011
これらの結果から、抗ｈ４－１ＢＢ抗体１Ｃ４及び５Ｆ９が腫瘍成長を有意に阻害したことが示された。更に、１Ｃ４及び５Ｆ９は１ｍｇ／ｋｇ及び３ｍｇ／ｋｇで同程度のＴＧＩ％であった。この結果は、１Ｃ４及び５Ｆ９の投薬量が高くても腫瘍阻害効果に明らかな向上はないことを示唆している。
マウス抗ｈ４－１ＢＢ抗体２９－６Ａ５（「６Ａ５」）、２９－４Ａ１０（「４Ａ１０」）、２９－５Ｆ１０（「５Ｆ１０」）、４５－８Ｆ１（「８Ｆ１」）、及び４５－４Ｂ９（「４Ｂ９」）のインビボ結果
Ｂ－ｈ４－１ＢＢマウスに対照としての生理食塩水（ＰＳ）（Ｇ１）、３ｍｇ／ｋｇ ２９－６Ａ５（Ｇ２）、３ｍｇ／ｋｇ ２９－４Ａ１０（Ｇ３）、３ｍｇ／ｋｇ ２９－５Ｆ１０（Ｇ４）、３ｍｇ／ｋｇ ４５－８Ｆ１（Ｇ５）、及び３ｍｇ／ｋｇ ４５－４Ｂ９（Ｇ６）を注射した。比較のため、３ｍｇ／ｋｇウレルマブもまたマウスに投与した（Ｇ７）。
Figure 0007387743000012
全治療期間にわたってマウスの体重をモニタした。治療期間の終わりに異なる群のマウスの体重が全て増加していた（図１０、及び図１１）。異なる群間に明らかな体重差は認められなかった。これらの結果から、これらの抗ｈ４－１ＢＢ抗体がマウスに良好に忍容され、明らかな毒性はなかったことが示された。２９－６Ａ５、２９－４Ａ１０、２９－５Ｆ１０、４５－８Ｆ１、及び４５－４Ｂ９で治療した群の腫瘍サイズを図１２に示す。
以下の表に示すとおり、１７日目（群分け後１７日）におけるＴＧＩ％も計算した。
Figure 0007387743000013
これらの結果から、抗ｈ４－１ＢＢ抗体６Ａ５、４Ａ１０、８Ｆ１、４Ｂ９が全て、腫瘍成長を阻害したことが示された。更に、６Ａ５及び８Ｆ１は、試験した他の抗体（例えば、ウレルマブ）よりもＴＧＩ％が高かった。
マウス抗ｈ４－１ＢＢ抗体４５－８Ｅ２（「８Ｅ２」）、４５－７Ｅ９（「７Ｅ９」）、４５－７Ｇ９（「７Ｇ９」）、４５－２Ｂ３（「２Ｂ３」）、及び４５－２Ｃ１１（「２Ｃ１１」）のインビボ結果
Ｂ－ｈ４－１ＢＢマウスに対照としての生理食塩水（ＰＳ）（Ｇ１）、１ｍｇ／ｋｇ ４５－８Ｅ２（Ｇ２）、１ｍｇ／ｋｇ ４５－７Ｅ９（Ｇ３）、１ｍｇ／ｋｇ ４５－７Ｇ９（Ｇ４）、１ｍｇ／ｋｇ ４５－２Ｂ３（Ｇ５）、及び１ｍｇ／ｋｇ ４５－２Ｃ１１（Ｇ６）を注射した。比較のため、１ｍｇ／ｋｇウレルマブもまたマウスに投与した（Ｇ７）。
Figure 0007387743000014
全治療期間にわたってマウスの体重をモニタした。治療期間の終わりに異なる群のマウスの平均体重が全て増加していた（図１３、及び図１４）。異なる群間に体重の有意差は認められなかった。これらの結果から、これらの抗ｈ４－１ＢＢ抗体がマウスに良好に忍容され、明らかな毒性はなかったことが示された。
対照群と比較したとき、４５－８Ｅ２、４５－７Ｅ９、４５－７Ｇ９、４５－２Ｂ３、及び４５－２Ｃ１１は全て、腫瘍成長を阻害した（図１５）。以下の表に示すとおり、２４日目（群分け後２４日）におけるＴＧＩ％も計算した。
Figure 0007387743000015
これらの結果から、抗ｈ４－１ＢＢ抗体４５－８Ｅ２、４５－７Ｅ９、４５－７Ｇ９、４５－２Ｂ３、及び４５－２Ｃ１１が全て、腫瘍成長を有意に阻害したことが示された。更に、４５－８Ｅ２、４５－７Ｅ９、４５－７Ｇ９、４５－２Ｂ３、及び４５－２Ｃ１１は全て、ウレルマブよりもＴＧＩ％が高かった。
マウス抗ｈ４－１ＢＢ抗体１６－１Ｃ４（「１Ｃ４」）、５５－８Ｆ６（「８Ｆ６」）、及び５４－８Ｂ１１（「８Ｂ１１」）のインビボ結果
Ｂ－ｈ４－１ＢＢマウスに対照としての生理食塩水（ＰＳ）（Ｇ１）、１ｍｇ／ｋｇ １６－１Ｃ４（Ｇ２）、１ｍｇ／ｋｇ ５５－８Ｆ６（Ｇ３）、及び１ｍｇ／ｋｇ ５４－８Ｂ１１（Ｇ４）を注射した。比較のため、１ｍｇ／ｋｇウレルマブもまたマウスに投与した（Ｇ５）。
Figure 0007387743000016
全治療期間にわたってマウスの体重をモニタした。治療期間の終わりに異なる群のマウスの平均体重が全て増加していた（図１６、及び図１７）。異なる群間に明らかな体重差は認められなかった。これらの結果から、これらの抗ｈ４－１ＢＢ抗体がマウスに良好に忍容され、明らかな毒性はなかったことが示された。対照群と比較したとき、１６－１Ｃ４、５５－８Ｆ６、及び５４－８Ｂ１１は全て、腫瘍成長を阻害した（図１８）。
以下の表に示すとおり、２４日目（群分け後２４日）におけるＴＧＩ％も計算した。
Figure 0007387743000017
これらの結果から、抗ｈ４－１ＢＢ抗体１６－１Ｃ４、５５－８Ｆ６、及び５４－８Ｂ１１が全て、腫瘍成長を有意に阻害したことが示された。
マウス抗ｈ４－１ＢＢ抗体５４－１Ａ１１（「１Ａ１１」）、５５－１Ｅ３（「１Ｅ３」）、５５－８Ｈ５（「８Ｈ５」）、及び５６－２Ａ６（「２Ａ６」）のインビボ結果
Ｂ－ｈ４－１ＢＢマウスに生理食塩水（ＰＳ）（Ｇ１）、１ｍｇ／ｋｇ ５４－１Ａ１１（Ｇ２）、１ｍｇ／ｋｇ ５５－１Ｅ３（Ｇ３）、１ｍｇ／ｋｇ ５５－８Ｈ５（Ｇ４）、及び１ｍｇ／ｋｇ ５６－２Ａ６（Ｇ５）を注射した。比較のため、１ｍｇ／ｋｇウレルマブもまたマウスに投与した（Ｇ６）。
Figure 0007387743000018
全治療期間にわたってマウスの体重をモニタした。治療期間の終わりに異なる群のマウスの平均体重が全て増加していた（図１９、及び図２０）。異なる群間に明らかな体重差は認められなかった。これらの結果から、これらの抗ｈ４－１ＢＢ抗体がマウスに良好に忍容され、明らかな毒性はなかったことが示された。各群の腫瘍サイズを図２１に示す。
以下の表に示すとおり、２４日目（群分け後２４日）におけるＴＧＩ％も計算した。
Figure 0007387743000019
これらの結果から、抗ｈ４－１ＢＢ抗体５４－１Ａ１１、５５－８Ｈ５、及び５６－２Ａ６が全て、腫瘍成長を有意に阻害したことが示された。５５－１Ｅ３は腫瘍成長の阻害に有効でなかった。
マウス抗ｈ４－１ＢＢ抗体５８－４Ｂ８（「４Ｂ８」）、６９－３Ｃ２（「３Ｃ２」）、及び６９－４Ｂ１１（「４Ｂ１１」）のインビボ結果
Ｂ－ｈ４－１ＢＢマウスに生理食塩水（ＰＳ）（Ｇ１）、１ｍｇ／ｋｇ ５８－４Ｂ８（Ｇ２）、１ｍｇ／ｋｇ ６９－３Ｃ２（Ｇ３）、及び１ｍｇ／ｋｇ ６９－４Ｂ１１（Ｇ４）を注射した。比較のため、１ｍｇ／ｋｇウレルマブもまたマウスに投与した（Ｇ５）。
Figure 0007387743000020
全治療期間にわたってマウスの体重をモニタした。異なる群のマウスの体重が全て増加していた（図２２、及び図２３）。異なる群間に明らかな体重差は認められなかった。これらの結果から、これらの抗ｈ４－１ＢＢ抗体がマウスに良好に忍容され、明らかな毒性はなかったことが示された。各群の腫瘍サイズを図２４に示す。
以下の表に示すとおり、２５日目（群分け後２５日）におけるＴＧＩ％も計算した。
Figure 0007387743000021
これらの結果から、抗ｈ４－１ＢＢ抗体５８－４Ｂ８、６９－３Ｃ２、及び６９－４Ｂ１１が全て、腫瘍成長を有意に阻害したことが示された。
実施例８．キメラ抗ｈ４－１ＢＢ抗体のインビボ試験
４－１ＢＢヒト化マウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）においてキメラ抗ｈ４－１ＢＢ抗体を試験して、インビボで腫瘍成長に及ぼすその効果を決定した。Ｂ－ｈ４－１ＢＢマウスにＭＣ－３８癌腫瘍細胞（結腸腺癌細胞）を皮下注射した。マウスにおいて腫瘍が１５０±５０ｍｍ３の容積に達したところで、マウスを腫瘍の容積に基づき異なる群に無作為に分けた。
３０－５Ｆ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、３０－５Ｆ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ４、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ４、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１のインビボ結果
Ｂ－ｈ４－１ＢＢマウスに生理食塩水（ＰＳ）（Ｇ１）、３０－５Ｆ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ２）、３０－５Ｆ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ４（Ｇ３）、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ４）、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ４（Ｇ５）、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１（Ｇ６）、３０－５Ｆ９（Ｇ７）、１６－１Ｃ４（Ｇ８）、ウトミルマブ（Ｇ９）、及びウレルマブ（Ｇ１０）を注射した。
Figure 0007387743000022
全治療期間にわたってマウスの体重をモニタした。治療期間の終わりに異なる群のマウスの平均体重が全て増加していた（図２５、及び図２６）。異なる群間に明らかな体重差は認められなかった。これらの結果から、これらの抗ｈ４－１ＢＢ抗体がマウスに良好に忍容され、明らかな毒性はなかったことが示された。各群の腫瘍サイズを図２７に示す。
以下の表に示すとおり、２４日目（群分け後２４日）におけるＴＧＩ％も計算した。
Figure 0007387743000023
これらの結果から、これらの全ての抗ｈ４－１ＢＢ抗体が腫瘍成長を阻害できることが示された。特に、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖのＩｇＧ１サブクラス（Ｇ６）は、ＩｇＧ２サブクラス（Ｇ４）及びＩｇＧ４サブクラス（Ｇ５）よりもＴＧＩ％が高かった。
１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、２９－６Ａ５－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、３０－５Ｆ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、４５－２Ｂ３－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、４５－７Ｅ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、４５－７Ｇ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、４５－８Ｅ２－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２、及び４５－８Ｆ１－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２のインビボ結果
Ｂ－ｈ４－１ＢＢマウスに生理食塩水（ＰＳ）（Ｇ１）、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ２）、２９－６Ａ５－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ３）、３０－５Ｆ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ４）、４５－２Ｂ３－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ５）、４５－７Ｅ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ６）、４５－７Ｇ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ７）、４５－８Ｅ２－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ８）、４５－８Ｆ１－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ９）、及びウレルマブ（Ｇ１０）を注射した。
Figure 0007387743000024
全治療期間にわたってマウスの体重をモニタした。治療期間の終わりに異なる群のマウスの平均体重が全て増加していた（図２８、及び図２９）。異なる群間に明らかな体重差は認められなかった。これらの結果から、これらの抗ｈ４－１ＢＢ抗体がマウスに良好に忍容され、明らかな毒性はなかったことが示された。各群の腫瘍サイズを図３０に示す。
以下の表に示すとおり、２１日目（群分け後２１日）におけるＴＧＩ％も計算した。
Figure 0007387743000025
これらの結果から、これらのキメラ抗体の全てが、程度は異なるものの、腫瘍成長を阻害できることが示された。
実施例９．ヒト化抗ｈ４－１ＢＢ抗体のインビボ試験
４－１ＢＢヒト化マウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）においてヒト化抗ｈ４－１ＢＢ抗体を試験して、インビボで腫瘍成長に及ぼすその効果を実証した。Ｂ－ｈ４－１ＢＢマウスにＭＣ－３８癌腫瘍細胞（結腸腺癌細胞）を皮下注射した。マウスにおいて腫瘍が１５０±５０ｍｍ３の容積に達したところで、マウスを腫瘍の容積に基づき異なる群に無作為に分けた。
ヒト化抗４－１ＢＢ抗体６Ａ５－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ２、６Ａ５－Ｈ１Ｋ３－ＩｇＧ２、及び６Ａ５－Ｈ２Ｋ２－ＩｇＧ２のインビボ結果
Ｇ１群では、Ｂ－ｈ４－１ＢＢマウスに対照として生理食塩水（ＰＳ）を注射した。治療群では、マウスに６Ａ５－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ２（Ｇ２）、６Ａ５－Ｈ１Ｋ３－ＩｇＧ２（Ｇ３）、６Ａ５－Ｈ２Ｋ２－ＩｇＧ２（Ｇ４）、６Ａ５（Ｇ５）、及びウレルマブ（Ｇ６）を投与した。
Figure 0007387743000026
全治療期間にわたってマウスの体重をモニタした。治療期間の終わりに異なる群のマウスの平均体重が全て増加していた（図３１、及び図３２）。異なる群間に明らかな体重差は認められなかった。これらの結果から、これらの抗ｈ４－１ＢＢ抗体がマウスに良好に忍容され、明らかな毒性はなかったことが示された。各群の腫瘍サイズを図３３に示す。
以下の表に示すとおり、２１日目（群分け後２１日）におけるＴＧＩ％も計算した。
Figure 0007387743000027
これらの結果から、これらのヒト化抗ｈ４－１ＢＢ抗体の全て（Ｇ２、Ｇ３、及びＧ４）が腫瘍成長を阻害できることが示された。
ヒト化抗４－１ＢＢ抗体１Ｃ４－Ｈ１Ｋ１－ＩｇＧ４、１Ｃ４－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ４、５Ｆ９－Ｈ１Ｋ１－ＩｇＧ４、及び３０－５Ｆ９－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ４のインビボ結果
Ｇ１群では、Ｂ－ｈ４－１ＢＢマウスに対照として生理食塩水（ＰＳ）を注射した。治療群では、マウスに１Ｃ４－Ｈ１Ｋ１－ＩｇＧ４（Ｇ２）、１Ｃ４－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ４（Ｇ３）、５Ｆ９－Ｈ１Ｋ１－ＩｇＧ４（Ｇ４）、５Ｆ９－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ４（Ｇ５）、１６－１Ｃ４（Ｇ６）、３０－５Ｆ９（Ｇ７）及びウレルマブ（Ｇ８）を投与した。
Figure 0007387743000028
全治療期間にわたってマウスの体重をモニタした。治療期間の終わりに異なる群のマウスの平均体重が全て増加していた（図３４、及び図３５）。異なる群間に明らかな体重差は認められなかった。これらの結果から、これらの抗ｈ４－１ＢＢ抗体がマウスに良好に忍容され、明らかな毒性はなかったことが示された。各群の腫瘍サイズを図３６に示す。
以下の表に示すとおり、２５日目（群分け後２５日）におけるＴＧＩ％も計算した。
Figure 0007387743000029
これらの結果から、これらのヒト化抗ｈ４－１ＢＢ抗体が様々な腫瘍阻害効果を有することが示された。
実施例１０．ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ４抗体のインビボ試験
Ｂ－ｈ４－１ＢＢマウスにＭＣ－３８癌腫瘍細胞（結腸腺癌細胞）を皮下注射した。マウスにおいて腫瘍が１５０±５０ｍｍ３の容積に達したところで、マウスを腫瘍の容積に基づき異なる群に無作為に分けた。
Ｇ１群では、Ｂ－ｈ４－１ＢＢマウスに対照として生理食塩水（ＰＳ）を注射した。マウスにキメラ抗ｈ４－１ＢＢ抗体１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１（Ｇ２）、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ３）、１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ４（Ｇ４）、マウス抗ｈ４－１ＢＢ抗体１６－１Ｃ４（Ｇ５）、及びウレルマブ（Ｇ６）を投与した。
Figure 0007387743000030
全治療期間にわたってマウスの体重をモニタした。治療期間の終わりに異なる群のマウスの平均体重が全て増加していた（図３７、及び図３８）。異なる群間に明らかな体重差は認められなかった。これらの結果から、これらの抗ｈ４－１ＢＢ抗体がマウスに良好に忍容され、明らかな毒性はなかったことが示された。各群の腫瘍サイズを図３９に示す。
以下の表に示すとおり、２５日目（群分け後２５日）におけるＴＧＩ％も計算した。
Figure 0007387743000031
これらの結果から、これらの抗ｈ４－１ＢＢ抗体の全てが腫瘍成長を阻害したことが示された。特に、ＩｇＧ１サブクラスはＩｇＧ２及びＩｇＧ４サブクラスよりもＴＧＩ％が高かった。
実施例１１．キメラ抗４－１ＢＢ ＩｇＧ２抗体のインビボ試験
Ｂ－ｈ４－１ＢＢマウスにＭＣ－３８癌腫瘍細胞（結腸腺癌細胞）を皮下注射した。マウスにおいて腫瘍が１５０±５０ｍｍ３の容積に達したところで、マウスを腫瘍の容積に基づき異なる群に無作為に分けた。
Ｇ１群では、Ｂ－ｈ４－１ＢＢマウスに対照として生理食塩水（ＰＳ）を注射した。治療群では、マウスに腹腔内（ｉ．ｐ．）注射でキメラ抗ｈ４－１ＢＢ抗体５４－８Ｂ１１－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ２）、５５－８Ｆ６－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ３）、５６－２Ａ６－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ４）、６９－３Ｃ２－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ５）、６１－６Ａ７－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ６）、７０－６Ｆ１０－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ７）、７０－３Ｆ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ２（Ｇ８）、４５－４Ｂ９－ｍＨｖｋｖ－ＩｇＧ２（Ｇ９）、及びまたウレルマブ（Ｇ１０）を投与した。
Figure 0007387743000032
全治療期間にわたってマウスの体重をモニタした。治療期間の終わりに異なる群のマウスの平均体重が全て増加していた（図４０、及び図４１）。異なる群間に明らかな体重差は認められなかった。これらの結果から、これらの抗ｈ４－１ＢＢ抗体がマウスに良好に忍容され、明らかな毒性はなかったことが示された。各群の腫瘍サイズを図４２に示す。
以下の表に示すとおり、２７日目（群分け後２７日）におけるＴＧＩ％も計算した。
Figure 0007387743000033
これらの結果から、これらのキメラ抗ｈ４－１ＢＢ抗体が様々な腫瘍阻害効果を有したことが示された。
実施例１２．ヒト化及びキメラ抗４－１ＢＢ ＩｇＧ２抗体のインビボ試験
Ｂ－ｈ４－１ＢＢマウスにＭＣ－３８癌腫瘍細胞を皮下注射した。マウスにおいて腫瘍が１５０±５０ｍｍ３の容積に達したところで、マウスを腫瘍の容積に基づき異なる群に無作為に分け、以下の表に示すとおりの様々な抗体を投与した。
Figure 0007387743000034
全治療期間にわたってマウスの体重をモニタした。治療期間の終わりに異なる群のマウスの平均体重が全て増加していた（図４３、及び図４４）。異なる群間に明らかな体重差は認められなかった。これらの結果から、これらの抗ｈ４－１ＢＢ抗体がマウスに良好に忍容され、明らかな毒性はなかったことが示された。各群の腫瘍サイズを図４５に示す。
以下の表に示すとおり、２１日目（群分け後２１日）におけるＴＧＩ％も計算した。
Figure 0007387743000035
これらの結果から、これらのヒト化及びキメラ抗体が様々な腫瘍阻害効果を有したことが示された。
実施例１３．ヒト抗４－１ＢＢ ＩｇＧ１抗体は他のＩｇＧサブクラスよりも良好な有効性を有する
上記に記載したとおりの１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１の結果に基づけば、同じＶＨ及びＶＬについて、ＩｇＧ１サブクラスが他のＩｇＧサブクラスよりも良好な腫瘍阻害効果を有すると仮定された。４－１ＢＢヒト化マウス（Ｂ－ｈ４－１ＢＢ）において様々なサブクラスの抗ｈ４－１ＢＢ ＩｇＧ抗体を試験し、インビボで腫瘍成長に及ぼすその効果を決定した。更に、Ｎ２９７Ａ（ＥＵ付番）突然変異を有するＩｇＧ１抗体、ＦＣ－ＳＩ突然変異（ＥＵ付番：Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｖ３０５Ｉ／Ｐ３９６Ｌ）を有するＩｇＧ１抗体、及びＦＣ－Ｖ１１突然変異（Ｇ２３７Ｄ／Ｐ２３８Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ）を有するＩｇＧ１抗体もまた試験した。Ｎ２９７Ａ突然変異はＡＤＣＣ効果を低下させ得る。ＦＣ－ＳＩ突然変異は、ほぼ全てのＦｃ受容体、特にＦｃγＲＩＩＩＡ／ＩＩＡとの結合親和性を増加させることができ、ＡＤＣＣ効果を高め得る。及びＦＣ－Ｖ１１突然変異はＦｃγＲＩＩＢとの結合親和性を増加させることができ、しかしＦｃγＲＩＩＡとの結合親和性を増加させることはなく、従ってＦｃγＲＩＩＩＡとの結合親和性は低下することになる。
Ｂ－ｈ４－１ＢＢマウスにＭＣ－３８癌腫瘍細胞（結腸腺癌細胞）を皮下注射した。マウスにおいて腫瘍が１５０±５０ｍｍ３の容積に達したところで、マウスを腫瘍の容積に基づき異なる群に無作為に分け、以下の表に示すとおりの様々な抗体を投与した。ウレルマブは完全ヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体である。抗体ウレルマブ－ＩｇＧ１はウレルマブのＶＨ及びＶＬを有し、且つ定常ドメインがＩｇＧ１サブクラスからのものである。同様に、抗体ウレルマブ－ＩｇＧ２はウレルマブのＶＨ及びＶＬを有し、且つ定常ドメインがＩｇＧ２サブクラスからのものである。抗体ウレルマブ－ＩｇＧ４はヒトＩｇＧ４の定常ドメインを有する。
Figure 0007387743000036
全治療期間にわたってマウスの体重をモニタした。治療期間の終わりに異なる群のマウスの平均体重が全て増加していた（図４６、及び図４７）。異なる群間に明らかな体重差は認められなかった。これらの結果から、これらの抗ｈ４－１ＢＢ抗体がマウスに良好に忍容され、明らかな毒性はなかったことが示された。各群の腫瘍サイズを図４８に示す。
以下の表に示すとおり、２５日目（群分け後２５日）におけるＴＧＩ％も計算した。
Figure 0007387743000037
これらの結果から、抗ｈ４－１ＢＢ ＩｇＧ１サブクラスがＩｇＧ２及びＩｇＧ４サブクラスと比較したとき高い腫瘍阻害効果を有したことが確認された。
実施例１４．キメラ抗４－１ＢＢ ＩｇＧ１抗体は他のＩｇＧサブクラスよりも良好な有効性を有する
実験を繰り返して異なるサブクラスの抗ｈ４－１ＢＢ ＩｇＧ抗体を試験した。Ｂ－ｈ４－１ＢＢマウスにＭＣ－３８癌腫瘍細胞（結腸腺癌細胞）を皮下注射した。マウスにおいて腫瘍が１５０±５０ｍｍ３の容積に達したところで、マウスを腫瘍の容積に基づき異なる群に無作為に分け、以下の表に示すとおり様々な抗体を週１回（ＱＷ）投与した。
Figure 0007387743000038
全治療期間にわたってマウスの体重をモニタした。治療期間の終わりに異なる群のマウスの平均体重が全て増加していた（図４９、及び図５０）。異なる群間に明らかな体重差は認められなかった。これらの結果から、これらの抗ｈ４－１ＢＢ抗体がマウスに良好に忍容され、明らかな毒性はなかったことが示された。各群の腫瘍サイズを図５１に示す。
以下の表に示すとおり、２５日目（群分け後２５日）におけるＴＧＩ％も計算した。
Figure 0007387743000039
これらの結果からも、ＩｇＧ１サブクラスがＩｇＧ２及びＩｇＧ４サブクラスと比較したとき高い腫瘍阻害効果を有したことが改めて確認された。
実施例１５．キメラ及びヒト抗４－１ＢＢ ＩｇＧ１抗体は他のＩｇＧサブクラスよりも良好な有効性を有する
実験を繰り返して異なるサブクラスのキメラ及びヒト抗ｈ４－１ＢＢ ＩｇＧ抗体を試験した。ｍＩｇＧ２Ａ及びヒトＩｇＧ１はより良好なＡＤＣＣ効果を有し、ｍＩｇＧ１及びヒトＩｇＧ４はＡＤＣＣ効果が弱いか、又は全くない。
Ｂ－ｈ４－１ＢＢマウスにＭＣ－３８癌腫瘍細胞（結腸腺癌細胞）を皮下注射した。マウスにおいて腫瘍が１５０±５０ｍｍ３の容積に達したところで、マウスを腫瘍の容積に基づき異なる群に無作為に分け、以下の表に示すとおり様々な抗体を週１回（ＱＷ）投与した。
Figure 0007387743000040
全治療期間にわたってマウスの体重をモニタした。治療期間の終わりに異なる群のマウスの平均体重が全て増加していた（図５９、及び図６０）。異なる群間に明らかな体重差は認められなかった。これらの結果から、これらの抗ｈ４－１ＢＢ抗体がマウスに良好に忍容され、明らかな毒性はなかったことが示された。各群の腫瘍サイズを図６１に示す。
以下の表に示すとおり、２４日目（群分け後２４日）におけるＴＧＩ％も計算した。
Figure 0007387743000041
これらの結果からも、ｍＩｇＧ２Ａ又はヒトＩｇＧ１サブクラスがｍＩｇＧ１又はヒトＩｇＧ４サブクラスと比較したとき高い腫瘍阻害効果を有したことが改めて確認された。従って、これらの結果は、抗４－１ＢＢ抗体が主にＡＤＣＣによって腫瘍成長を阻害することを示している。
実施例１６．抗４－１ＢＢ ＩｇＧ１抗体は抗４－１ＢＢ ＩｇＧ４抗体と比較したとき高い腫瘍阻害効果を有した
Ｂ－ｈ４－１ＢＢマウスにＭＣ－３８癌腫瘍細胞（結腸腺癌細胞）を皮下注射した。マウスにおいて腫瘍が１００～１５０ｍｍ３の容積に達したところで、マウスを腫瘍の容積に基づき異なる群に無作為に分け、以下の表に示すとおりの様々な抗体を投与した。上記で考察したとおり、ウレルマブは完全ヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体である。抗体ウレルマブ－ＩｇＧ１はウレルマブからのＶＨ及びＶＬを有し、且つ定常ドメインがＩｇＧ１サブクラスからのものである。
Figure 0007387743000042
全治療期間にわたってマウスの体重をモニタした。治療期間の終わりに異なる群のマウスの平均体重が全て増加していた（図６２及び図６３）。異なる群間に明らかな体重差は認められなかった。これらの結果から、これらの抗ｈ４－１ＢＢ抗体がマウスに良好に忍容され、明らかな毒性はなかったことが示された。各群の腫瘍サイズを図６４に示す。
以下の表に示すとおり、２４日目（群分け後２４日）におけるＴＧＩ％も計算した。
Figure 0007387743000043
これらの結果から、ウレルマブ－ＩｇＧ１抗体がウレルマブ（ＩｇＧ４）と比較したとき高い腫瘍阻害効果を有し；１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１抗体が１６－１Ｃ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ４抗体と比較したとき高い腫瘍阻害効果を有し；１Ｃ４－Ｈ１Ｋ１－ＩｇＧ１抗体が１Ｃ４－Ｈ１Ｋ１－ＩｇＧ４抗体と比較したとき高い腫瘍阻害効果を有し；１Ｃ４－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ１抗体が１Ｃ４－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ４抗体と比較したとき高い腫瘍阻害効果を有したことが確認された。まとめると、この結果から、同じ抗原結合ドメインについて、ＩｇＧ１抗体はＩｇＧ４抗体と比較したとき高い腫瘍阻害効果を有したことが示された。
実施例１７．抗ｈ４－１ＢＢ抗体併用療法
Ｂ－ｈ４－１ＢＢマウスに、ヒトＰＤ－Ｌ１を発現するＭＣ－３８癌腫瘍細胞（結腸腺癌細胞）を皮下注射した。マウスにおいて腫瘍が約４００ｍｍ３の容積に達したところで、マウスを腫瘍の容積に基づき異なる群に無作為に分け、以下の表に示すとおりの様々な抗体を投与した。キイトルーダ（ペンブロリズマブ）はヒト化抗ＰＤ－１ ＩｇＧ４抗体である。
Figure 0007387743000044
全治療期間にわたってマウスの体重をモニタした。治療期間の終わりに異なる群のマウスの平均体重が全て増加していた（図６５及び図６６）。異なる群間に明らかな体重差は認められなかった。これらの結果から、これらの抗ｈ４－１ＢＢ抗体がマウスに良好に忍容され、明らかな毒性はなかったことが示された。各群の腫瘍サイズを図６７に示す。
以下の表に示すとおり、２５日目（群分け後２５日）におけるＴＧＩ％も計算した。
Figure 0007387743000045
これらの結果から、１Ｃ４－Ｈ１Ｋ１－ＩｇＧ１抗体が１Ｃ４－Ｈ１Ｋ１－ＩｇＧ４と比較したとき高い腫瘍阻害効果を有し；及びウレルマブ－ＩｇＧ１抗体がウレルマブ－ＩｇＧ４抗体と比較したとき高い腫瘍阻害効果を有したことが確認された。更に、これらの結果から、抗４－１ＢＢ抗体と抗ＰＤ－１抗体との併用が、抗４－１抗体を単独で使用した治療又は抗ＰＤ－１抗体を単独で使用した治療と比較したとき高い腫瘍阻害効果を有したことが示された。加えて、抗４－１ＢＢ ＩｇＧ１抗体と抗ＰＤ－１抗体との併用が、抗４－１ＢＢ ＩｇＧ４抗体と抗ＰＤ－１抗体との併用と比較したとき高い腫瘍阻害効果を有した。
実施例１８．黒色腫癌細胞によるインビボ試験
Ｂ－ｈ４－１ＢＢマウスに、ヒトＰＤ－Ｌ１を発現するＢ１６－Ｆ１０細胞（黒色腫細胞株）を皮下注射した。マウスにおいて腫瘍が１００～１５０ｍｍ３の容積に達したところで、マウスを腫瘍の容積に基づき異なる群に無作為に分け、以下の表に示すとおりの様々な抗体を投与した。
Figure 0007387743000046
全治療期間にわたってマウスの体重をモニタした。治療期間の終わりに異なる群のマウスの平均体重が全て増加していた（図６８、及び図６９）。異なる群間に明らかな体重差は認められなかった。これらの結果から、これらの抗ｈ４－１ＢＢ抗体がマウスに良好に忍容され、明らかな毒性はなかったことが示された。各群の腫瘍サイズを図７０に示す。
以下の表に示すとおり、１８日目（群分け後１８日）におけるＴＧＩ％も計算した。
Figure 0007387743000047
これらの結果から、抗ｈ４－１ＢＢ ＩｇＧ１抗体が黒色腫癌細胞に対して優れた腫瘍阻害効果を有したとともに、抗ｈ４－１ＢＢ ＩｇＧ１抗体を抗ＰＤ－１抗体と併用すると腫瘍阻害効果が更に向上し得ることが示された。Ｇ３のＴＧＩ％は８１．０％であったが、このＴＧＩ％は４匹の生存マウスのみに基づき計算されたもので、Ｇ３の生存率は僅か８匹中４匹であった。対照的に、Ｇ４の生存率は８匹中７匹であった。これらの結果から、併用治療が生存率を大幅に改善したことが示された。
実施例１９．リンパ腫癌細胞によるインビボ試験
Ｂ－ｈ４－１ＢＢマウスにＥＬ４細胞（リンパ腫癌細胞）を皮下注射した。マウスにおいて腫瘍が１００～１５０ｍｍ３の容積に達したところで、マウスを腫瘍の容積に基づき異なる群に無作為に分け、以下の表に示すとおりの様々な抗体を投与した。
Figure 0007387743000048
全治療期間にわたってマウスの体重をモニタした。治療期間の終わりに異なる群のマウスの平均体重が全て増加していた（図７１、及び図７２）。異なる群間に明らかな体重差は認められなかった。これらの結果から、これらの抗ｈ４－１ＢＢ抗体がマウスに良好に忍容され、明らかな毒性はなかったことが示された。各群の腫瘍サイズを図７３に示す。
以下の表に示すとおり、１７日目（群分け後１７日）におけるＴＧＩ％も計算した。
Figure 0007387743000049
これらの結果から、抗ｈ４－１ＢＢ ＩｇＧ１抗体がリンパ腫癌細胞に対して優れた腫瘍阻害効果を有したとともに、抗ｈ４－１ＢＢ ＩｇＧ１抗体を抗ＰＤ－１抗体と併用すると腫瘍阻害効果が更に向上し得ることが示された。
実施例２０．ヒト化抗４－１ＢＢ抗体の効果の更なる分析
Ｂ－ｈ４－１ＢＢマウスにＭＣ－３８癌腫瘍細胞（結腸腺癌細胞）を皮下注射した。マウスにおいて腫瘍が約２００±５０ｍｍ３の容積に達したところで、マウスを腫瘍の容積に基づき異なる群に無作為に分け、以下の表に示すとおりの様々な抗体を投与した。
Figure 0007387743000050
投与の２日後、マウスを犠牲にした。更なる分析のため、腫瘍試料及び脾臓試料を採取した。以下の表に示すとおり、マウスの体重も記録した。異なる群間に明らかな体重差は認められなかった。
Figure 0007387743000051
採取した腫瘍及び脾臓試料を粉砕し、消化酵素で処理した。この混合物を３７℃で６０分間インキュベートし、ろ過し、洗浄し、単一細胞懸濁液として再懸濁した。
細胞を蛍光標識抗体とインキュベートし、フローサイトメトリーによって分析した。脾臓試料は、図７４及び図７５に示すとおりの手順によって処理した。腫瘍試料は、図７６及び図７７に示すとおりの手順によって処理した。
結果は図７８～図８３に示す。図７９Ｄに示されるとおり、抗４－１ＢＢ ＩｇＧ１抗体は、腫瘍中のＴｒｅｇ細胞の割合を有効に低下させることができ、従って免疫応答を増加させることができる。この結果はまた、Ｔｒｅｇに対するＣＤ８の比率が低いほど不利な結果に結び付くという図８２Ａの結果とも整合している。加えて、図８２Ａの結果はまた、１Ｃ４抗４－１ＢＢ抗体がウレルマブと比較したときより高い腫瘍阻害効果を有することも説明する。
実施例２１．抗ｈ４－１ＢＢ ＩｇＧ１抗体に関する更なる試験
実験を繰り返して様々なサブクラスの抗ｈ４－１ＢＢ ＩｇＧ抗体を試験する。
Ｂ－ｈ４－１ＢＢマウスにＭＣ－３８癌腫瘍細胞（結腸腺癌細胞）を皮下注射する。マウスにおいて腫瘍が１５０±５０ｍｍ３に達したところで、マウスを腫瘍の容積に基づき異なる群に無作為に分け（例えば、ｎ＝５）、表１、表２、及び／又は表４から選択される抗体のＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ４バージョンを１ｍｇ／ｋｇ又は３ｍｇ／ｋｇ投薬量で週２回のｉ．ｐ．投与によって投与する。合計６回の投与を実施する。１つの群のマウスには、対照として生理食塩水（ＰＳ）を投与する。
全治療期間にわたってマウスの体重及び腫瘍サイズをモニタする。治療期間の終わりにＴＧＩ％を計算する。
抗ｈ４－１ＢＢ ＩｇＧ１サブクラスはＩｇＧ２及びＩｇＧ４サブクラスと比較したときより高いＴＧＩ％、ひいてはより良好な腫瘍阻害効果を有することが予想される。
他の実施形態
本発明はその詳細な説明と併せて説明されているが、前述の説明は、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲を限定するものではなく、例示することが意図されると理解されるべきである。他の態様、利点、及び変形例が、以下の特許請求の範囲内にある。

Claims (10)

  1. 選択のＶＨ配列と同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、選択のＶＬ配列と同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、
    前記選択のＶＨ配列が配列番号２２１、２２２、２２３、２２４、又は２４３であり、前記選択のＶＬ配列が配列番号２２５、２２６、２２７、２２８、又は２４４である
    ４－１ＢＢ（ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー９）に結合する抗体又はその抗原結合断片。
  2. 以下：
    （１）前記抗体又はその抗原結合断片が、ヒト４－１ＢＢに特異的に結合する；
    （２）前記抗体又はその抗原結合断片が、ヒト化抗体又はその抗原結合断片である；及び
    （３）前記抗体又はその抗原結合断片が、単鎖可変断片（ｓｃＦＶ）である；
    （４）前記抗体がＩｇＧ１抗体である；又は
    （５）前記抗体がヒトＩｇＧ１抗体である、
    のうち１つ以上を満たすことを特徴とする請求項１に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  3. 前記選択のＶＨ配列及び前記選択のＶＬ配列が、以下：
    （１）前記選択のＶＨ配列が配列番号２２１であり、前記選択のＶＬ配列が配列番号２２５である；
    （２）前記選択のＶＨ配列が配列番号２２１であり、前記選択のＶＬ配列が配列番号２２６である；
    （３）前記選択のＶＨ配列が配列番号２２１であり、前記選択のＶＬ配列が配列番号２２７である；
    （４）前記選択のＶＨ配列が配列番号２２１であり、前記選択のＶＬ配列が配列番号２２８である；
    （５）前記選択のＶＨ配列が配列番号２２２であり、前記選択のＶＬ配列が配列番号２２５である；
    （６）前記選択のＶＨ配列が配列番号２２２であり、前記選択のＶＬ配列が配列番号２２６である；
    （７）前記選択のＶＨ配列が配列番号２２２であり、前記選択のＶＬ配列が配列番号２２７である；
    （８）前記選択のＶＨ配列が配列番号２２２であり、前記選択のＶＬ配列が配列番号２２８である；
    （９）前記選択のＶＨ配列が配列番号２２３であり、前記選択のＶＬ配列が配列番号２２５である；
    （１０）前記選択のＶＨ配列が配列番号２２３であり、前記選択のＶＬ配列が配列番号２２６である；
    （１１）前記選択のＶＨ配列が配列番号２２３であり、前記選択のＶＬ配列が配列番号２２７である；
    （１２）前記選択のＶＨ配列が配列番号２２３であり、前記選択のＶＬ配列が配列番号２２８である；
    （１３）前記選択のＶＨ配列が配列番号２２４であり、前記選択のＶＬ配列が配列番号２２５である；
    （１４）前記選択のＶＨ配列が配列番号２２４であり、前記選択のＶＬ配列が配列番号２２６である；又は
    （１５）前記選択のＶＨ配列が配列番号２２４であり、前記選択のＶＬ配列が配列番号２２７である
    （１６）前記選択のＶＨ配列が配列番号２２４であり、前記選択のＶＬ配列が配列番号２２８である；又は
    （１７）前記選択のＶＨ配列が配列番号２４３であり、前記選択のＶＬ配列が配列番号２４４である
    のうちの一つである、
    請求項１に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  4. 治療剤に共有結合的に結合した請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片を含む抗体－薬物コンジュゲート。
  5. 請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドを含む核酸。
  6. 請求項５に記載の核酸のうちの１つ以上を含む
    ベクター。
  7. 請求項５に記載の核酸のうちの１つ以上を含む細胞。
  8. 医薬の製造における請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片、又は請求項４の抗体－薬物コンジュゲートの使用であって、前記医薬が、
    （１）癌を有する対象を治療すること；
    （２）それを必要としている対象の腫瘍成長速度を低下させること；又は
    （３）それを必要としている対象の腫瘍細胞を死滅させること
    のために使用される
    使用。
  9. 請求項８の使用であって、以下
    （１）前記対象が固形腫瘍を有する；
    （２）前記癌が、乳癌、中咽頭癌、卵巣癌、Ｂ細胞リンパ腫、又は非ホジキンリンパ腫である；又は
    （３）前記癌が、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、黒色腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、結腸直腸癌、又は多発性骨髄腫である
    の一つ以上を満たすことを特徴とする使用。
  10. 請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合断片、又は請求項４に記載の抗体－薬物コンジュゲートと、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物。
JP2021538883A 2018-09-12 2019-09-11 抗ｔｎｆｒｓｆ９抗体及びその使用 Active JP7387743B2 (ja)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2023118891A JP2023138538A (ja) 2018-09-12 2023-07-21 抗ｔｎｆｒｓｆ９抗体及びその使用

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CNPCT/CN2018/105162 2018-09-12
CN2018105162 2018-09-12
PCT/CN2019/105315 WO2020052581A1 (en) 2018-09-12 2019-09-11 Anti-tnfrsf9 antibodies and uses thereof

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2023118891A Division JP2023138538A (ja) 2018-09-12 2023-07-21 抗ｔｎｆｒｓｆ９抗体及びその使用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2022516916A JP2022516916A (ja) 2022-03-03
JP7387743B2 true JP7387743B2 (ja) 2023-11-28

Family

ID=69776768

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2021538883A Active JP7387743B2 (ja) 2018-09-12 2019-09-11 抗ｔｎｆｒｓｆ９抗体及びその使用
JP2023118891A Pending JP2023138538A (ja) 2018-09-12 2023-07-21 抗ｔｎｆｒｓｆ９抗体及びその使用

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2023118891A Pending JP2023138538A (ja) 2018-09-12 2023-07-21 抗ｔｎｆｒｓｆ９抗体及びその使用

Country Status (12)

Country Link
US (3) US11292849B2 (ja)
EP (1) EP3850012A4 (ja)
JP (2) JP7387743B2 (ja)
KR (1) KR20210062026A (ja)
CN (1) CN112739718A (ja)
AU (1) AU2019340530A1 (ja)
BR (1) BR112021004698A2 (ja)
CA (1) CA3110006A1 (ja)
IL (1) IL281202A (ja)
MX (1) MX2021002750A (ja)
SG (1) SG11202102335YA (ja)
WO (1) WO2020052581A1 (ja)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111320691B (zh) * 2018-12-17 2022-04-05 程联胜 一种抗人4-1bb单克隆抗体及其应用
WO2022162015A1 (en) * 2021-01-26 2022-08-04 Universite Brest Bretagne Occidentale Novel stim1 splicing variants and uses thereof
CN115960242B (zh) * 2021-09-09 2023-10-17 广东东阳光药业股份有限公司 抗癌结合分子及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018091740A2 (en) 2016-11-21 2018-05-24 Alligator Bioscience Ab Novel antibodies and uses thereof
WO2018127787A1 (en) 2017-01-06 2018-07-12 Eutilex Co., Ltd. Anti-human 4-1 bb antibodies and use thereof

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4603112A (en) 1981-12-24 1986-07-29 Health Research, Incorporated Modified vaccinia virus
US4769330A (en) 1981-12-24 1988-09-06 Health Research, Incorporated Modified vaccinia virus and methods for making and using the same
US4522811A (en) 1982-07-08 1985-06-11 Syntex (U.S.A.) Inc. Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides
GB8508845D0 (en) 1985-04-04 1985-05-09 Hoffmann La Roche Vaccinia dna
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US4777127A (en) 1985-09-30 1988-10-11 Labsystems Oy Human retrovirus-related products and methods of diagnosing and treating conditions associated with said retrovirus
GB8702816D0 (en) 1987-02-07 1987-03-11 Al Sumidaie A M K Obtaining retrovirus-containing fraction
WO1989001973A2 (en) 1987-09-02 1989-03-09 Applied Biotechnology, Inc. Recombinant pox virus for immunization against tumor-associated antigens
AP129A (en) 1988-06-03 1991-04-17 Smithkline Biologicals S A Expression of retrovirus gag protein eukaryotic cells
WO1991002805A2 (en) 1989-08-18 1991-03-07 Viagene, Inc. Recombinant retroviruses delivering vector constructs to target cells
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US20080226635A1 (en) 2006-12-22 2008-09-18 Hans Koll Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof
WO2009134389A2 (en) * 2008-05-01 2009-11-05 Gtc Biotherapeutics, Inc. An anti-cd137 antibody as an agent in the treatment of inflammatory conditions
CN101586460B (zh) 2009-06-02 2011-03-30 中国矿业大学 一种采煤固体物充填方法
JP2018508509A (ja) * 2015-02-22 2018-03-29 ソレント・セラピューティクス・インコーポレイテッド Ｃｄ１３７に結合する抗体医薬
DE102015212848A1 (de) 2015-07-09 2017-01-12 Forschungszentrum Jülich GmbH Filterschaltung zur Filterung eines Eingangssignals eines Analog-Digital-Wandlers
EP3464362B1 (en) * 2016-05-27 2020-12-09 AbbVie Biotherapeutics Inc. Anti-4-1bb antibodies and their uses

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018091740A2 (en) 2016-11-21 2018-05-24 Alligator Bioscience Ab Novel antibodies and uses thereof
WO2018127787A1 (en) 2017-01-06 2018-07-12 Eutilex Co., Ltd. Anti-human 4-1 bb antibodies and use thereof

Also Published As

Publication number Publication date
CN112739718A (zh) 2021-04-30
WO2020052581A1 (en) 2020-03-19
MX2021002750A (es) 2021-05-12
US20220251229A1 (en) 2022-08-11
CA3110006A1 (en) 2020-03-19
AU2019340530A1 (en) 2021-03-11
US20210206867A1 (en) 2021-07-08
US20240092922A1 (en) 2024-03-21
KR20210062026A (ko) 2021-05-28
JP2023138538A (ja) 2023-10-02
SG11202102335YA (en) 2021-04-29
JP2022516916A (ja) 2022-03-03
US11292849B2 (en) 2022-04-05
EP3850012A1 (en) 2021-07-21
EP3850012A4 (en) 2022-06-15
BR112021004698A2 (pt) 2021-06-01
IL281202A (en) 2021-04-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10934365B2 (en) Anti-OX40 antibodies and uses thereof
US11292849B2 (en) Anti-TNFRSF9 antibodies and uses thereof
US11155625B2 (en) Anti-PD-1 antibodies and uses thereof
JP2023037000A (ja) 抗ｃｄ４０抗体及びその使用
WO2020103885A1 (en) Anti-pd-1 antibodies and uses thereof
RU2812200C2 (ru) Антитела против tnfrsf9 и их применение
RU2796413C2 (ru) Антитела против cd40 и их применения
RU2783314C2 (ru) Антитела против ox40 и их применения

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20211014

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20211014

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20220915

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20221215

A02 Decision of refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02

Effective date: 20230323

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20230721

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821

Effective date: 20230724

A911 Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911

Effective date: 20230920

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20231017

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20231115

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 7387743

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150