JP7387163B2

JP7387163B2 - 内視鏡用粘膜下注入材

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Publication number: JP7387163B2
Application number: JP2020004869A
Authority: JP
Inventors: 哲志田口
Original assignee: National Institute for Materials Science
Current assignee: National Institute for Materials Science
Priority date: 2020-01-16
Filing date: 2020-01-16
Publication date: 2023-11-28
Anticipated expiration: 2040-01-16
Also published as: JP2021112234A

Description

本発明は、内視鏡用粘膜下注入材に関する。

内視鏡的粘膜切除術（Ｅｎｄｏｓｃｏｐｉｃｍｕｃｏｓａｌｒｅｓｅｃｔｉｏｎ：ＥＭＲ）、及び、内視鏡的粘膜下層剥離術（ＥｎｄｏｓｃｏｐｉｃＳｕｂｍｕｃｏｓａｌＤｉｓｓｅｃｔｉｏｎ：ＥＳＤ）は、食道、胃、及び、大腸における早期がんの病変に対して、内視鏡下で消化管の内腔から粘膜層を含めた粘膜下層までを切除、又は、剥離し、病変を一括切除する治療法として知られている。

ＥＭＲ、及び、ＥＳＤにおいては、粘膜層に生じた病変を切除するために、粘膜下層に粘膜注入材を注射し、病変部を膨隆（浮かせた）状態とし、その病変部を粘膜下層ごと剥ぎ取る方法が用いられる。
このような粘膜注入材として、特許文献１には、「シュードプラスティック粘性を示す多糖類を含有する粘膜下膨隆剤。」が記載されている。

国際公開２０１３／７７３５７号

本発明者らの検討によれば、上記粘膜下膨隆剤は、例えば病変部を粘膜下層ごと剥ぎ取った際、残った消化管の表面への接着性が不十分で、結果として、別途、止血処置、穿孔防止処置、及び／又は、癒着防止処置が必要であるという問題があった。
そこで、本発明は、膨隆効果と優れた組織接着性を有する内視鏡用粘膜下注入材を提供することを課題とする。

本発明者らは、上記課題を達成すべく鋭意検討した結果、以下の構成により上記課題を達成することができることを見出した。

［１］親水性基、及び、炭素数が５～１５個のアルキル基を有する高分子化合物と、シクロデキストリンと、を含有し、上記高分子化合物の少なくとも一部が上記シクロデキストリンで包接されてなる、内視鏡用粘膜下注入材。
［２］上記アルキル基が炭素数５～１２個の直鎖状のアルキル基である、［１］に記載の内視鏡用粘膜下注入材。
［３］上記炭素数が、７～１２個である、［１］又は［２］に記載の内視鏡用粘膜下注入材。
［４］ α－シクロデキストリン又はその誘導体を含有し、上記アルキル基の少なくとも一部が上記α－シクロデキストリンに包接されてなる、［１］～［３］のいずれかに記載の内視鏡用粘膜下注入材。
［５］上記高分子化合物が、コラーゲン、ゼラチン、グリコサミノグリカン、プロテオグリカン、ポリビニルアルコール、セルロース、デンプン、アルギン酸、キサンタンガム、カラギナン、ジェランガム、グアーガム、ローカストビーンガム、及び、サクランからなる群より選択される少なくとも１種の前駆体に上記アルキル基が導入された化合物である、［１］～［４］のいずれかに記載の内視鏡用粘膜下注入材。
［６］ β－シクロデキストリン又はその誘導体、及び、γ－シクロデキストリン又はその誘導体からなる群より選択される少なくとも1種と、α－シクロデキストリン又はその誘導体と、を含有する、［１］～［５］のいずれかに記載の内視鏡用粘膜下注入材。
［７］上記高分子化合物がポリビニルアルコール誘導体である、［１］～［５］のいずれかに記載の内視鏡用粘膜下注入材。
［８］上記ポリビニルアルコール誘導体が、後述する式１で表される繰り返し単位を有する、［７］に記載の内視鏡用粘膜下注入材。
［９］上記ポリビニルアルコール誘導体における上記アルキル基の導入量が５．０モル％未満である、［７］又は［８］に記載の内視鏡用粘膜下注入材。
［１０］上記Ｒ^１のアルキル基が、炭素数５～１２個の直鎖状のアルキル基である、［８］に記載の内視鏡用粘膜下注入材。
［１１］上記Ｒ^１のアルキル基の炭素数が７～１２個である、［６］又は［８］に記載の内視鏡用粘膜下注入材。
［１２］上記Ｒ^１のアルキル基が、上記シクロデキストリンに包接されてなる、［８］に記載の内視鏡用粘膜下注入材。
［１３］更に溶媒を含有する、［１］～［１２］のいずれかに記載の内視鏡用粘膜下注入材。
［１４］チキソトロピー性を有する［１］～［１３］のいずれかに記載の内視鏡用粘膜下注入材。

本発明によれば、優れた組織接着性を有する内視鏡用粘膜下注入材が提供できる。

レオメーターで評価した注入材２の構造回復の結果である。レオメーターで評価した注入材１の構造回復の結果である。レオメーターで評価した注入材３の構造回復の結果である。注入材１（実施例１）、注入材４（実施例４）、及び、注入材Ｃ（比較例）の注射効率である。注入材１（実施例１）、注入材４（実施例４）、及び、注入材Ｃ（比較例）の注射応力である。注入材１（実施例１）、注入材４（実施例４）、注入材Ｃ（比較例）、生理食塩水（参考例１）、ムコアップ（登録商標）（参考例２）、及び、リフタル（登録商標）Ｋ（参考例３）膨隆性の測定結果である。注入材１（実施例１）、注入材４（実施例４）、注入材Ｃ（比較例）、生理食塩水（参考例１）、ムコアップ（登録商標）（参考例２）、及び、リフタル（登録商標）Ｋ（参考例３）膨隆性評価の際のサンプルの断面画像である。注入材１（実施例１）の応力－距離カーブである。注入材４（実施例４）の応力－距離カーブである。生理食塩水（参考例１）の応力－距離カーブである。ムコアップ（登録商標）（参考例２）の応力－距離カーブである。リフタル（登録商標）Ｋ（参考例３）の応力－距離カーブである。注入材Ｃ（比較例）の応力－距離カーブである。実施例１、４、比較例、及び、参考例１～３の注入材の接着強度である。実施例１、４、比較例、及び、参考例１～３の注入材の接着エネルギーである。水中安定性試験の結果である。水中安定性試験の結果である。

以下、本発明について詳細に説明する。
以下に記載する構成要件の説明は、本発明の代表的な実施形態に基づいてなされることがあるが、本発明はそのような実施形態に制限されるものではない。
なお、本明細書において、「～」を用いて表される数値範囲は、「～」の前後に記載される数値を下限値及び上限値として含む範囲を意味する。

［内視鏡用粘膜下注入材（注入材）］
本発明に係る内視鏡用粘膜下注入材（以下、「本注入材」ともいう。）は、シクロデキストリンと、炭素数が５～１５個のアルキル基（以下、「特定アルキル基」ともいう。）及び親水性基を有する高分子化合物と、を含有し、上記高分子化合物の少なくとも一部が上記シクロデキストリンで包接されてなる。

なお、高分子化合物の少なくとも一部がシクロデキストリンで包接されている状態とは、注入材中に複数ある高分子化合物の分子の少なくとも一部がシクロデキストリンに包接されている状態を意味する。
包接とは、シクロデキストリンの分子の内側に形成された疎水性空隙（内腔）に他の分子が会合された状態を意味する。
具体的には、高分子化合物の構造のうち少なくとも一部（例えば、高分子化合物が有する一部の基等）がシクロデキストリンの内腔に会合されている状態を意味する。

また、シクロデキストリンがα－シクロデキストリン又はその誘導体を含有する場合、後述するとおり、その内腔の大きさが、高分子化合物が有するアルキル基を包接するのに適しているため、高分子化合物の特定アルキル基の少なくとも一部がα－シクロデキストリンに包接されると考えられる。

このとき、包接の形態としては、例えば特定アルキル基を構成する炭素原子の全部がα－シクロデキストリンの内腔に配置される形態であってもよいし、特定アルキル基を構成する炭素原子の一部がα－シクロデキストリンの外部に配置される形態、すなわち、特定アルキル基がα－シクロデキストリンを串刺し状に貫通する形態であってもよい。

本注入材により本発明の効果が得られる機序は必ずしも明らかではないが、本発明者らは以下のとおり推測している。なお、以下の機序は推測であり、以下の機序以外の機序により本発明の効果が得られる場合であっても本発明の範囲に含まれるものとする。

本注入材は、高分子化合物の少なくとも一部、典型的には、高分子化合物の特定アルキル基の少なくとも一部がシクロデキストリンで包接されてなるため、注入時における高分子化合物の分子内、及び／又は、分子間の特定アルキル基等に起因する相互作用を抑制することにより、注入時の応力が大きくなりにくい。

更に、高分子化合物により形成されるゲルは、その特定アルキル基の作用によって組織への優れた組織接着性（以下、単に「接着性」ともいう。）を有する。また、一旦注入された後は、シクロデキストリンで包接されていない、又は、包接されてはいるものの、その一部しか包接されていない特定アルキル基の疎水性相互作用やシクロデキストリンの水素結合等によって、強固なゲルが形成され、結果として優れた膨隆性が発揮される。
なお、本明細書において、組織接着性が高いとは、後述する実施例で示す評価方法により得られる接着エネルギーが大きいこを意味する。
以下では、本注入材の成分等について詳述する。

〔親水性ポリマー〕
本注入材は、親水性基、及び、炭素数が５～１５個のアルキル基を有する高分子化合物を含有する。
本注入材における高分子化合物の含有量としては特に制限されないが、より優れた本発明の効果を有するが得られる点で、一般に本注入材の全質量に対して、０．１～９９．９質量％が好ましく、１～３０質量％がより好ましい。

なお、本注入材は、高分子化合物の１種を単独で含有してもよく、２種以上を含有していてもよい。本注入材が、２種以上の高分子化合物を含有する場合には、その合計含有量が上記数値範囲内であることが好ましい。

高分子化合物が有する親水性基としては特に制限されないが、例えば、ヒドロキシ基、カルボキシ基、スルホン酸基、アルコキシ基、及び、（ポリ）オキシアルキレン基等が挙げられ、ヒドロキシ基が好ましい。

高分子化合物としては、例えば、コラーゲン、ゼラチン、グリコサミノグリカン（例えば、ヒアルロン酸、及び、コンドロイチン硫酸等）、プロテオグリカン、ポリビニルアルコール、セルロース、デンプン、アルギン酸、キサンタンガム、カラギナン、ジェランガム、グアーガム、ローカストビーンガム、及び、サクランからなる群より選択される少なくとも１種の前駆体にアルキル基が導入された化合物（その塩であってもよい）が挙げられる。

なかでも、より優れた本発明の効果を有する注入材が得られる点で、ゼラチン、グリコサミノグリカン、及び、ポリビニルアルコールからなる群より選択される少なくとも１種の前駆体に特定アルキル基が導入された化合物が好ましく、ポリビニルアルコールに特定アルキル基が導入された化合物（以下「ＰＶＡ誘導体」ともいう。）がより好ましい。

ＰＶＡ誘導体としては、例えば、ポリビニルアセタール、ポリビニルブチラール、完全鹸化ポリビニルアルコール、及び、ポリ酢酸ビニルを部分鹸化したポリビニルアルコール等が挙げられる。

また、ＰＶＡ誘導体としては、以下の式１で表される繰り返し単位（以下、「単位１」ともいう。）を有することが好ましい。以下、式１で表される繰り返し単位を有するＰＶＡ誘導体を、「特定ＰＶＡ誘導体」ともいう。

上記式中、Ｒ^１は炭素数５～１５個のアルキル基を表し、特定アルキル基に該当する。上記Ｒ^１の炭素数としては特に制限されないが、５～１２個が好ましく、７～１２個がより好ましく、８～１２個が更に好ましい。
また、上記アルキル基は、直鎖状、分岐鎖状、及び、環状のいずれであってもよいが、より優れた本発明の効果を有する注入材が得られる点で、直鎖状であることが好ましく、炭素数が５～１２個の直鎖状のアルキル基が好ましく、炭素数が７～１２個の直鎖状のアルキル基であることがより好ましく、炭素数が８～１２個の直鎖状のアルキル基であることが更に好ましい。

注入材がシクロデキストリンとしてα－シクロデキストリンを含有する場合、特定アルキル基の炭素数が７個以上であると、α－シクロデキストリンに串刺し状に包接されたアルキル基の一部が、α－シクロデキストリンを「貫通する」形態となりやすく、結果としてより優れた本発明の効果を有する注入材が得られる点で好ましい。
また、特定アルキル基の炭素数が１２個以下であると、組織（細胞）に対するより優れた接着性が得られ、結果としてより優れた本発明の効果を有する注入材が得られる点で好ましい。

特定ＰＶＡ誘導体は、式１で表される以外の繰り返し単位を有していてもよい。このような繰り返し単位としては、例えば、以下の式２、及び、式３で表される繰り返し単位（以下、それぞれ「単位２」、及び、「単位３」ともいう。）が挙げられる。

特定ＰＶＡ誘導体中における単位１の含有量としては特に制限されないが、特定ＰＶＡ誘導体中における全繰り返し単位を１００モル％としたとき、単位１の含有量が１０モル％以下であることが好ましく、１０モル％未満であることがより好ましく、５．０モル％以下であることが更に好ましい。

高分子化合物の分子量としては特に制限されないが、一般に、１０，０００～２００，０００が好ましく、５０，０００～１００，０００がより好ましい。

特定ＰＶＡ誘導体の製造方法としては特に制限されず、公知の製造方法が適用可能である。典型的には、ポリ酢酸ビニルをけん化して得られたポリビニルアルコールを酸触媒下でアルデヒドと縮合させることによって得ることができる。得られる特定ＰＶＡ誘導体におけるアルキル基は、上記アルデヒドに由来し、用いるアルデヒドの種類を適宜変更することによって所望のアルキル基を有する特定ＰＶＡ誘導体が得られる。

特定ＰＶＡ誘導体をポリビニルアルコールとアルデヒドとの縮合により得る場合、アルキル基の導入量としては特に制限されないが、より優れた本発明の効果を有する注入材が得られる点で、１０モル％以下が好ましく、５．０モル％以下がより好ましく、５．０モル％未満が更に好ましい。なお、下限は特に制限されないが、０モル％超である。
なお、アルキル鎖の導入量の計算方法は実施例に示したとおりである。

〔シクロデキストリン〕
本注入材はシクロデキストリンを含有する。
シクロデキストリンは、Ｄ－グルコース単位がα－１，４－グルコシド結合で環状に結合した環状化合物であり、澱粉及び／又は澱粉の加水分解物にシクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ等の酵素を作用させて製造することができる。

シクロデキストリンとしては、構成するグルコースの数が６個（α型）、７個（β型）、及び、８個（γ型）等のシクロデキストリンを用いることができ、更にその誘導体も使用することができる。
なかでも、α－シクロデキストリン又はその誘導体は、その内腔の大きさから、高分子化合物が有するアルキル基がより包接されやすく、結果としてより優れた本発明の効果を有する注入材が得られる点で好ましい。

α－シクロデキストリン誘導体としては特に制限されないが、メチルα－シクロデキストリン、ブチルα－シクロデキストリン、２－ヒドロキシプロピルα－シクロデキストリン、アセチルα－シクロデキストリン、スクシニルα－シクロデキストリン、グルコシルα－シクロデキストリン、マルトシルα－シクロデキストリン、α－シクロデキストリンカルボキシメチルエーテル、リン酸エステルα－シクロデキストリン、及び、カルボキシメチルα－シクロデキストリン等が挙げられる。

β－シクロデキストリン誘導体としては、例えば、メチル－β－シクロデキストリン（ＭＢＣＤ）、（２－ヒドロキシプロピル）－β－シクロデキストリン（ＨＰＢＣＤ）、カルボキシメチル－β－シクロデキストリン、カルボキシメチル－エチル－β－シクロデキストリン、ジエチル－β－シクロデキストリン、ジメチル－β－シクロデキストリン、グルコシル－β－シクロデキストリン、ヒドロキシブテニル－β－シクロデキストリン、ヒドロキシエチル－β－シクロデキストリン、マルトシル－β－シクロデキストリン、ランダムメチル－β－シクロデキストリン、スルホブチルエーテル－β－シクロデキストリン、２－セレニウム架橋－β－シクロデキストリン、及び、２－テルリウム架橋－β－シクロデキストリン等が挙げられる。

γ－シクロデキストリン誘導体としては、例えば、２－ヒドロキシエチル－γ－シクロデキストリン、２－ヒドロキシプロピル－γ－シクロデキストリン、ブチル－γ－シクロデキストリン、３Ａ－アミノ－３Ａ－デオキシ－（２ＡＳ，３ＡＳ）－γ－シクロデキストリン、モノ－２－Ｏ－（ｐ－トルエンスルホニル）－γ－シクロデキストリン、モノ－６－Ｏ－（ｐ－トルエンスルホニル）－γ－シクロデキストリン、モノ－６－Ｏ－メシチレンスルホニル－γ－シクロデキストリン、オクタキス（２，３，６－トリ－Ｏ－メチル）－γ－シクロデキストリン、オクタキス（２，６－ジ－Ｏ－フェニル）－γ－シクロデキストリン、オクタキス（６－Ｏ－ｔ－ブチルジメチルシリル）－γ－シクロデキストリン、及び、オクタキス（２，３，６－トリ－Ｏ－アセチル）－γ－シクロデキストリン等が挙げられる。

高分子化合物がゼラチンに特定アルキル基が導入された、ゼラチン誘導体を含有する場合、シクロデキストリンが、β－シクロデキストリン、及び／又は、γ－シクロデキストリンを含有すると、ゼラチン誘導体が有するプロリン、及び、ヒドロキシプロリンに由来する構造をより包接しやすく、注射応力をより低下させやすい点で好ましい。

本注入材におけるシクロデキストリンの含有量としては特に制限されないが、より優れた本発明の効果を有する注入材が得られる点で、一般に本注入材の全質量に対して、０．１～９９．９質量％が好ましく、０．１～１０質量％がより好ましく、０．１～５質量％が更に好ましい。
なお、本注入材は、シクロデキストリンの１種を単独で含有してもよく、２種以上を含有していてもよい。本注入材が、２種以上のシクロデキストリンを含有する場合には、その合計含有量が上記数値範囲内であることが好ましい。

より優れた本発明の効果を有する注入材が得られる点で、注入材がα－シクロデキストリンを含有する場合、高分子化合物の特定アルキル基の含有量（モル基準）に対するα－シクロデキストリン等の含有量（モル基準）の含有モル比（以下、「α－ＣＤ／アルキル基」ともいう。）としては、０．１～５．０が好ましく、０．５～１．５がより好ましく、０．５を超え、１．５未満であることが好ましい。
α－ＣＤ／アルキル基が０．５を超えると、得られる注入材はより優れたチキソトロピー性を有する。
また、α－ＣＤ／アルキル基が１．５未満だと、得られる注入材はより優れたチキソトロピー性を有する。

〔その他の成分〕
本注入材は、本発明の効果を奏する範囲内で別の成分を含有してもよい。このような成分としては例えば、溶媒、及び、添加剤等が挙げられる。

（溶媒）
溶媒としては特に制限されないが、典型的にはより優れた本発明の効果を有する注入材が得られる点で、水が挙げられる。注入材中における水の含有量としては特に制限されないが、一般に注入材がより優れた強度、及び、より優れた注射性を有する点で、注入材の固形分が、０．０１～９９質量％に調整されることが好ましく、０．１～２０質量％に調整されることがより好ましい。

（添加剤）
添加剤としては特に制限されず、例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、及び、炭酸水素ナトリウム等の電解質、ブドウ糖、果糖、クエン酸、リンゴ酸、及び、酒石酸等が挙げられる。
上記添加剤は溶媒とともに注入材に添加されてもよい。例えば、溶媒として水を、添加剤として塩化ナトリウム等を含有する注入材を調製する場合、生理食塩水を添加する形態であってもよい。

本注入材の製造方法としては特に制限されないが、上記の各成分を混合、攪拌して混合物を調製し、シクロデキストリン（ホスト分子）に、高分子化合物（ゲスト分子）を包接させる方法が挙げられる。

このような方法としては、例えば、特開昭５８－１５２８０号公報に記載されているような、溶媒を含有する混合物を攪拌しながら加熱し、その後静置する方法；特開平１１－２７９１３９号公報に記載されているような、溶媒を含有する混合物を攪拌し、その後、乾燥させる方法；及び、特開２００１－０８９５０３号公報に記載されているような溶媒を含有する混合物を加圧、及び、加熱する方法等が挙げられる。
シクロデキストリンに高分子化合物を包接させる方法は、高分子化合物の耐熱性等に応じて適宜選択すればよい。

以下に実施例に基づいて本発明を更に詳細に説明する。以下の実施例に示す材料、使用量、割合、処理内容、処理手順等は、本発明の趣旨を逸脱しない限り適宜変更することができる。したがって、本発明の範囲は以下に示す実施例により限定的に解釈されるべきものではない。

（合成例１：ポリビニルアルコール誘導体「２．５Ｃ９－ＰＶＡ」の合成）
まず、以下の手順に従い、ポリビニルアルコール誘導体を合成した。具体的には、アルデヒドと、ＰＶＡ（ポリビニルアルコール）のヒドロキシ基とを酸触媒下で脱水縮合させて合成した。

まず、８０℃でＰＶＡ（１０ｇ、けん化率９８．５ｍｏｌ％以上、重合度約２０００）を４８ｍＬのＨ_２Ｏに溶解させた。次に、１５０ｍＬのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）と２ｍＬの１ＮＨＣｌを添加して、５ｍａｓｓ／ｖｏｌｕｍｅ％ＰＶＡと１ｖｏｌｕｍｅ／ｖｏｌｕｍｅ％１ＮＨＣｌの２００ｍＬ溶液を得た。

なお、以下ではｍａｓｓ／ｖｏｌｕｍｅ、すなわち、質量／体積を「ｍａｓｓ／ｖｏｌ」と、ｖｏｌｕｍｅ／ｖｏｌｕｍｅ、すなわち、体積／体積を「ｖｏｌ／ｖｏｌ」ということがある。

次に、アルデヒド（ｎｏｎａｎａｌ、Ｃ_９Ｈ_１８Ｏ）を上記溶液に加え、得られた混合液を５０℃で１時間攪拌させた。すべてのプロセスで還流冷却器を使用した。
反応後、得られたポリビニルアルコール誘導体（Ｈ_２Ｏ／ＤＭＳＯ＝２５／７５（ｖｏｌ／ｖｏｌ））溶液を６００ｍＬ（約３倍）の冷エタノールに攪拌しながら加え、ポリビニルアルコール誘導体を沈殿させた。

次に、沈殿したポリビニルアルコール誘導体を２００ｍＬのエタノールで３回洗浄して、未反応のアルデヒドとＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）を除去し、更に、溶媒を真空下で乾燥させ、白色の結晶を得た。得られた結晶は粉砕機（ＷｏｎｄｅｒｃｒｕｓｈｅｒＷＣ－３、ＯｓａｋａＣｈｅｍｉｃａｌ、Ｏｓａｋａ、Ｊａｐａｎ）を使用して細かく粉砕した。

^１Ｈ－ＮＭＲの測定結果から、得られたポリビニルアルコール誘導体におけるアルキル基の導入量（モル％）を以下の式により計算した。
（式）{アルキル基の含有量（モル基準）／２}／主鎖のエチレン基の含有量（モル基準）

その結果、アルキル基の導入量は２．５モル％であり、得られたポリビニルアルコール誘導体を「２．５Ｃ９－ＰＶＡ」とした。

（合成例２：ポリビニルアルコール誘導体「５Ｃ９－ＰＶＡ」の合成）
ノナナールの仕込み量を合成例１の２倍の量としたことを除いては、合成例１と同様にして、ポリビニルアルコール誘導体を合成した。
得られたポリビニルアルコール誘導体におけるアルキル基の導入量は５．０モル％であり、これを「５Ｃ９－ＰＶＡ」とした。

［実施例１：注入材１の合成］
次に、「２．５Ｃ９－ＰＶＡ」の粉体（２００ｍｇ）をスクリュー管瓶に加え、２ｍＬのＨ_２Ｏを加えて１０ｍａｓｓ／ｖｏｌ％「２．５Ｃ９－ＰＶＡ」懸濁液を調製した。次に、上記懸濁液に１０３ｍｇのα－ＣＤを加え、オートクレーブ（ＬＳＸ－５００、ＴＯＭＹ、東京、日本）を用いて、１ａｔｍ、９５℃で１０分間加熱し、溶液を得た。次に、上記溶液を２５℃で一晩攪拌（５００ｒｐｍ）し、注入材１を得た。

［実施例２～４：注入材２～４の合成］
α－ＣＤの添加量を表１に記載したとおりにした以外は実施例１と同様にして、注入材２及び３を合成した。
また、２．５Ｃ９－ＰＶＡに代えて５Ｃ９－ＰＶＡを用い、α－ＣＤの添加量を表１に記載したとおりにした以外は実施例１と同様にして、注入材４を合成した。

［比較例：注入材Ｃの合成］
５Ｃ９－ＰＶＡに代えて、原料ＰＶＡをそのまま用いたことを除いては、実施例１と同様にして、注入材Ｃを合成した。

表１には、各注入材の合成に使用したＰＶＡ誘導体の種類と量、α－ＣＤの量、及び、注入材中におけるＰＶＡ誘導体が有するアルキル鎖のモル基準の含有量に対する、α－ＣＤのモル基準の含有量の含有モル比を示した。

（粘性）
１０ｍａｓｓ／ｖｏｌ％の２．５Ｃ９－ＰＶＡの水溶液に、α－ＣＤを加え、α－ＣＤとＰＶＡ誘導体のアルキル鎖とのモル比が表２に記載したとおりになるよう組成物を調製し、実施例１と同様の方法により注入材を作成して、評価用の試料とした。
上記試料について、レオメーターを用いてせん断粘度を評価した。
なお、測定は、治具ＰＰ２５（直径２５ｍｍ）を使用して、２９８Ｋで０．１ｓ^－１（１／ｓｅｃ）のせん断速度で測定した。測定は、各サンプルにつき５回行った。結果を表２に示した。

表２に示した結果から、α－ＣＤ／アルキル基が１．０以上であると、せん断粘度がより低くなりやすく、１．０を超えるとせん断粘度が更に低くなりやすいことがわかった。

（構造回復）
注入材１～３について、構造回復をレオメーターで評価した。
測定は２９８Ｋ下、３ステップで行った。第１ステップの条件はひずみγ＝１％；角周波数ω＝１０ｒａｄ／ｓ、測定点間隔１２ｓとした。第２ステップの条件はひずみγ＝１０００％；角周波数ω＝１０ｒａｄ／ｓ、測定点間隔１２ｓとした。第３ステップの条件はひずみγ＝１％；角周波数ω＝１０ｒａｄ／ｓ、測定点間隔１２ｓとした。各ステップは１５点測定した。
結果を図１（注入材２）、図２（注入材１）、及び、図３（注入材３）に示した。

（注射効率、及び、注射応力）
注入材１、注入材４、及び、注入材Ｃを２．５ｍＬのシリンジ（テルモ株式会社、東京、日本）に充填した。このシリンジ（２０Ｇ、及び、２５Ｇの針をシリンジにセット）を穴のある金型にセットし、試験機（ＥＺ－ＬＸ、島津製作所、京都、日本）で注射性試験を行った。試験中押し出し応力が２５０Ｎに達した場合にはプロセスを停止することとした。注射応力は平衡応力に達した数値を試験機から記録した。また、注射効率は、次の式によって計算した。

注射効率（％）＝１００×（Ｗｔ－Ｗｒ）／Ｗｔ
ここで、ＷｔとＷｒはそれぞれ、試験前（Ｗｔ）と、試験後（Ｗｒ）のシリンジ内の注入材の質量である。注射効率を図４に、注射応力を図５に示した。

図４及び図５に示した結果から、注入材１及び注入材４はいずれも注射効率が略１００％であり、注射応力もいずれも２５０Ｎには到達せず、実用的な応力で注射可能であった。
なかでも、式１で表される単位の導入量が５．０モル％未満である注入材１は、注入材４と比較して、より小さな押し出し力で注射できることがわかった。

（膨隆性）
まず、ブタの胃を洗浄し、ダンベルカッターを用いて、直径３５ｍｍの円形に切り取った。次に、注入材１、注入材４、及び、注入材Ｃを２．５ｍＬのシリンジに充填し、２５Ｇの針で０．５ｍＬ分を胃の粘膜下層に注入した。
注入後、２５℃で３０分静置させた。その後、冷凍庫（－２０℃）でサンプルを凍らせた。凍結した胃のサンプルを隆起部位からメスで剪断して、隆起した高さを定量した。試験は各サンプル６回行った。

また、参考例として、生理食塩水（参考例１）、ムコアップ（登録商標）（０．８ｍａｓｓ％ヒアルロン酸ナトリウム水溶液、ボストンサイエンティフィック社製、参考例２）、リフタル（登録商標）Ｋ（１．２ｍａｓｓ％アルギン酸ナトリウム水溶液、カイゲンファーマ社製、参考例３）についても上記と同様に試験を実施し、結果を図６に、メスで剪断したサンプルの断面画像を図７にまとめて示した。

図６、及び、図７に示した結果から、注入材１、及び、注入材４は、注入材Ｃ、及び、参考例１～３の注入材と比較して優れた膨隆性を有していることがわかった。

（接着性）
ＡＳＴＭＦ２２５８－０５に準拠して注入材の接着性を評価した。
まず、粘膜下層を剥離したブタの胃の組織を正方形（２５ｍｍ×２５ｍｍ）にカットし、シアノアクリレート系接着剤（商品名「アロンアルファ」）を用い、３７℃でヒーターの表面に貼り付けた。上記組織の表面の余分な水分を除去するために、メッシュを使用して、上記組織の表面を軽く拭いた。次に、注入材（０．２ｍＬ）を上記組織（ブタの胃）に塗布し、注入材を塗布した層を形成した。次に、注入材を塗布した層に、上記組織と同様の組織を粘膜下層剥離組織側が注入材を塗布した層に接触するようにして貼り合わせ（反対側の表面は、上記シアノアクリレート系接着剤で治具に貼り合わせ）、２Ｎの応力で３分間圧着した。その後、トラッキング速度１０ｍｍ／ｍｉｎで治具を引き上げ、注入材の接着強度を測定した。
また、このときの接着エネルギーはＩｍａｇｅＪソフトを利用して応力－距離のカーブから計算した。試験は各サンプル５回行った。
応力－距離カーブを図８～１３に、接着強度を図１４に、接着エネルギーを図１５に示した。

なお、図８は注入材１の応力－距離カーブであり、図９は注入材４の応力－距離カーブであり、図１０は注入材１に代えて生理食塩水を使用した場合（参考例１）の応力－距離カーブであり、図１１は、注入材１に代えて商品名「ムコアップ（登録商標）」を使用した場合（参考例２）の応力－距離カーブであり、図１２は、注入材１に代えて商品名「リフタル（登録商標）Ｋ」を使用した場合（参考例３）の応力－距離カーブであり、図１３は、注入材１に代えて注入材Ｃを使用した場合（比較例）の応力－距離カーブである。図１４及び図１５における試料名は、上記に対応している。

図８～１５に示した結果から、注入材１及び注入材４は、注入材Ｃ及び参考例１～３の注入材と比較して、組織への優れた接着性を有していて、引き剥がしにくい、言い換えれば、より大きな接着エネルギーを有していることがわかった。
また、式１で表される単位の含有量が５．０モル％未満である注入材１は、注入材４と比較して、組織へのより優れた接着強度を有していることがわかった。

（水中安定性）
粘膜層を剥離したブタの胃を正方形（２５ｍｍ×２５ｍｍ）にカットし、０．５ｍＬの注入材１（後述する図１６中「α－ＣＤ／２．５Ｃ９－ＰＶＡ」と記載した）を均一に表面に塗布し、試料とした。次に、上記試料を５０ｍＬの生理食塩水（０．２ｍｇ／ｍＬのアジ化ナトリウム添加）に浸し、３７℃でインキュベーションし、１日、３日、７日経過後の試料を１０％中性緩衝ホルマリンリン液で固定した。更に、ＨＥ（ヘマトキシリン・エオジン）染色により、組織表面に残存するゲル（内視鏡用粘膜下注入材の層）の状態を確認した。

また、注入材１に代えて、注入材４（図１６中「α－ＣＤ／５Ｃ９－ＰＶＡ」と記載した。）、注入材Ｃ（図１６中「α－ＣＤ／ＰＶＡ」と記載した。）、生理食塩水、ムコアップ（登録商標）、及び、リフタル（登録商標）Ｋを用いて同様の試験を行った。結果を図１６、及び、図１７に示した。

図１６は、注入材１を用いた試料の、浸漬後１日経過後（図１６上）、及び、浸漬後７日間経過後（図１６下）の断面をヘマトキシリンエオジン染色した切片の位相差顕微鏡画像である。なお図中、Ｇは注入材の層（ゲル）、Ｔはブタ胃組織を表している。
図１６に示した結果から、注入材１は水中においても優れた安定性を有することがわかった。

図１７は、浸漬後７日間経過後のヘマトキシリンエオジン染色した切片の位相差顕微鏡画像である。Ａ、Ｂ、及び、Ｃの各行は同一試料の倍率の異なる画像（Ａ～Ｃの順に拡大）である。つまり、「生理食塩水」の列のＡ、Ｂ、及び、Ｃ行のそれぞれの画像は「生理食塩水」の同一試料の画像を示している。
また、図中、「Ｇ」とあるのは、注入材の層を表し、「Ｓ」とあるのは、粘膜下層を表し、「Ｍ」は固有筋層を表す。

図１７に示した結果から、生理食塩水、ムコアップ、リフタルＫ、及び、注入材Ｃを用いた場合、粘膜下層が大幅に膨潤している（画像上、色が薄く、粗になっている）ことがわかった。
一方、注入材１及び注入材４は上記と比較して粘膜下層の膨潤が抑制されていた。
また、式１で表される単位の含有量が５．０モル％未満である注入材１は、注入材４の内視鏡用粘膜下注入材と比較して、ゲル（内視鏡用粘膜下注入材の層）がより多く残存しており、より優れた水中安定性を有していることがわかった。

Claims

親水性基、及び、炭素数が５～１５個のアルキル基を有する高分子化合物と、
シクロデキストリンと、
を含有し、
前記高分子化合物の少なくとも一部が前記シクロデキストリンで包接されてなる、内視鏡用粘膜下注入材。
前記アルキル基が炭素数５～１２個の直鎖状のアルキル基である、請求項１に記載の内視鏡用粘膜下注入材。
前記炭素数が、７～１２個である、請求項１又は２に記載の内視鏡用粘膜下注入材。
α－シクロデキストリン又はその誘導体を含有し、
前記アルキル基の少なくとも一部が前記α－シクロデキストリンに包接されてなる、請求項１～３のいずれか１項に記載の内視鏡用粘膜下注入材。
前記高分子化合物が、コラーゲン、ゼラチン、グリコサミノグリカン、プロテオグリカン、ポリビニルアルコール、セルロース、デンプン、アルギン酸、キサンタンガム、カラギナン、ジェランガム、グアーガム、ローカストビーンガム、及び、サクランからなる群より選択される少なくとも１種の前駆体に前記アルキル基が導入された化合物である、請求項１～４のいずれか１項に記載の内視鏡用粘膜下注入材。
β－シクロデキストリン又はその誘導体、及び、γ－シクロデキストリン又はその誘導体からなる群より選択される少なくとも１種と、
α－シクロデキストリン又はその誘導体と、を含有する、請求項１～５のいずれか１項に記載の内視鏡用粘膜下注入材。
前記高分子化合物がポリビニルアルコール誘導体である、請求項１～５のいずれか１項に記載の内視鏡用粘膜下注入材。
前記ポリビニルアルコール誘導体が、以下の式１で表される繰り返し単位を有する、請求項７に記載の内視鏡用粘膜下注入材。

（式１中、Ｒ^１は炭素数５～１５個のアルキル基を表す。）
前記ポリビニルアルコール誘導体における前記アルキル基の導入量が５．０モル％未満である、請求項７又は８に記載の内視鏡用粘膜下注入材。
前記Ｒ^１のアルキル基が、炭素数５～１２個の直鎖状のアルキル基である、請求項８に記載の内視鏡用粘膜下注入材。
前記Ｒ^１のアルキル基の炭素数が７～１２個である、請求項８に記載の内視鏡用粘膜下注入材。
前記Ｒ^１のアルキル基が、前記シクロデキストリンに包接されてなる、請求項８に記載の内視鏡用粘膜下注入材。
更に溶媒を含有する、請求項１～１２のいずれか１項に記載の内視鏡用粘膜下注入材。
チキソトロピー性を有する請求項１～１３のいずれか１項に記載の内視鏡用粘膜下注入材。