JP7386383B2

JP7386383B2 - ノルエピネフリン輸送体を標的とする化合物

Info

Publication number: JP7386383B2
Application number: JP2021541087A
Authority: JP
Inventors: シンユーチェン; ミヒャエルデッカー; 隆弘樋口
Original assignee: ペキンラドテクノロジーカンパニーリミテッド
Priority date: 2019-01-17
Filing date: 2020-01-09
Publication date: 2023-11-27
Anticipated expiration: 2040-01-09
Also published as: CN113301926A; EP3911372A1; AU2020208383B2; JP2022518439A; CA3127127A1; EP3911372B8; WO2020148154A1; EP3911372B1; CN113301926B; CA3127127C; EP3682906A1; AU2020208383A1; US20220096667A1

Description

本発明は、化合物、診断法に使用される化合物、ノルエピネフリン輸送体（ＮＥＴ）の生成、分解、分布又は機能の障害を診断する診断法に使用される化合物、及び化合物を合成する方法に関する。

ノルエピネフリン（ＮＥ）は神経伝達物質である。ＮＥの機能には、脳及び身体の全般的な可動化（general mobilization）、並びに心拍数及び血圧の上昇が含まれる。ＮＥＴは、シナプス間隙に放出されたＮＥのシナプス前ニューロンへの再取込みに関与する。それにより、ＮＥＴはシナプス間隙におけるＮＥの濃度を調節する。ヒト又は動物の身体におけるＮＥＴの検出のために、ＮＥＴに結合し、陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）において検出することができる幾つかのトレーサーが開発されている。

特許文献１は、^１８Ｆを含む造影剤の合成及び使用のための組成物、方法及びシステムを開示している。この造影剤は、心臓、心血管系、心臓血管、脳及び他の器官を含む被験体内の対象の領域の画像化に使用することができる。或る特定の実施形態では、開示の方法は、ＮＥＴを検出する方法を含む。

特許文献２から、心臓神経支配の画像化のための核医学用途（ＰＥＴ画像化）において造影剤として使用される化合物及びこれらの化合物を放射標識形態で得るための合成方法が知られている。

非特許文献１は、４－［^１８Ｆ］フルオロプロポキシ－３－ヨードベンジルグアニジンの合成及び評価を開示している。

非特許文献２は、心臓の交感神経支配の非侵襲的評定のためのＰＥＴトレーサーとして^１８Ｆ－Ｎ－［３－ブロモ－４－（３－フルオロ－プロポキシ）－ベンジル］－グアニジンを開示している。

非特許文献３から、心臓交感神経支配の放射性トレーサーが知られている。この放射性トレーサーは、以下の式を有する４－［^１８Ｆ］フルオロ－ｍ－ヒドロキシフェネチルグアニジン（［^１８Ｆ］４Ｆ－ＭＨＰＧ、［^１８Ｆ］１）及びその構造異性体３－［^１８Ｆ］フルオロ－ｐ－ヒドロキシフェネチルグアニジン（［^１８Ｆ］３Ｆ－ＰＨＰＧ、［^１８Ｆ］２）である。

非特許文献３によると、フッ素－１８は、中心生産施設から独立したＰＥＴ画像化センターへの^１８Ｆ標識放射性医薬品の生産及び流通が実現可能であるように、十分に長い半減期を有する。非特許文献３では、［^１８Ｆ］１及び［^１８Ｆ］２について、急速な小胞への取込み及び貯蔵小胞からのトレーサーのごく僅かな拡散と一致して、非ヒト霊長類心筋における非常に長いニューロン保持時間がＰＥＴ研究により示されたことが更に述べられている。さらに、［^１８Ｆ］１及び［^１８Ｆ］２の側鎖のグアニジン基は、ニューロン酵素に対する安定性をもたらす。

非特許文献４は、ＰＥＴトレーサーとして^１８Ｆ－Ｎ－［３－ブロモ－４－（３－フルオロ－プロポキシ）－ベンジル］－グアニジン（^１８Ｆ－ＬＭＩ１１９５）を開示している。このトレーサーは、心臓の交感神経支配の評定のために設計されている。^１８Ｆ－ＬＭＩ１１９５について、簡便であり、商業的調製及び用途に適した容易かつ高収率の標識手順が存在することが記載されている。

国際公開第２０１３／０３６８６９号国際公開第２００８／０８３０５６号

Vaidyanathan G. et al., Nucl Med Biol. 2015 August, 42(8), pages 673 to 684 Werner, R. A., J Nucl Med. 2015 September, 56(9), pages 1429 to 1433 Jung, Yong-Woon et al., ACS Chem. Neurosci. 2017, 8, pages 1530 to 1542 Chen, X. et al., EJNMMI Research (2018) 8:12, pages 1 to 8

本発明が解決しようとする課題は、ＮＥＴに結合する代替トレーサー、診断法に使用されるトレーサー及びトレーサーを合成する方法を提供することである。

この課題は、請求項１、２、３及び６の特徴によって解決される。実施の形態は、請求項４、５及び７～１３の主題である。

本発明によれば、以下の式：

（式中、Ｒ１はＦ又はＩ残基、特にＦ残基である）による化合物が提供される。

本発明は、生きているヒト又は動物の身体に対して、すなわちｉｎｖｉｖｏで行われる診断法に使用される本発明による化合物に更に関する。この診断法は、ヒト又は動物の身体におけるＮＥＴの生成、分解、分布又は機能の障害を診断するための診断法であり得る。本発明者らは、本発明による化合物がｉｎｖｉｖｏで特定の遅い取込み及び肝臓による迅速な排出を示すことを見出した。

診断法は、ヒト又は動物の身体の陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）を含み得て、該ＰＥＴを行う前に該身体に前記化合物を投与する。ＮＥＴの生成、分解、分布又は機能の障害は、心血管疾患、血圧調節異常、腎障害、神経内分泌腫瘍性疾患又はパーキンソン病と関連し得る。

本発明は、本発明による化合物を合成する方法であって、
ａ）以下の化合物１４：

のメチル基を該化合物から除去し、以下の化合物１５：

を得る工程（式中、Ｒ１はハロゲン残基である）と、
ｂ）１－クロロ－３－ヨードプロパンを用いて化合物１５のクロロアルキル化を行い、以下の化合物２５：

を得る工程と、
ｃ）（メトキシメチル）トリフェニルホスホニウムハロゲン化物及びカリウムｔｅｒｔ－ブトキシド又は水素化ナトリウムを用いて化合物２５とのウィッティヒ反応を行い、以下の化合物２６：

を得る工程と、
ｄ）酢酸水銀の添加により化合物２６を２工程のワンポット反応において還元し、中間体を形成させ、続いてアルカリ金属水素化ホウ素、特に水素化ホウ素ナトリウム又は水素化ホウ素カリウムを添加して、以下の化合物２８：

を得る工程と、
ｅ）トリフェニルホスフィン、アゾジカルボキシレート及び以下の化合物２４：

の存在下で化合物２８との光延反応を行い、以下の化合物２９：

を得る工程と、
ｆ）工程ｂ）～ｅ）のいずれかによって得られる化合物のアルキル鎖の末端の塩素原子を、フィンケルシュタイン反応でヨウ素に置き換え、続いてｐ－トルエンスルホン酸銀を用いて暗所でトシル化を行い、本工程までに工程ａ）～ｅ）のいずれかを行っていない場合に、本工程までに行わなかった工程ａ）～ｅ）の全てを行い、以下の化合物３０：

を得る工程と、
ｇ）^１８Ｆ、特にＫ^１８Ｆのアルカリ金属塩を用いる求核置換によって化合物３０を放射性標識し、続いて酸性条件下にて少なくとも７０℃の温度で脱保護を行い、以下の化合物：

を得る工程と、
を含むか、又はそれらからなり、ハロゲン残基がＦ又はＩ残基、特にＦ残基である、方法に更に関する。

ハロゲン残基がＦ残基である場合、得られる化合物は、本願において^１８Ｆ－ＡＦ７８と指定される化合物であり、ハロゲン残基がＩ残基である場合、得られる化合物は、本願において^１８Ｆ－３７と指定される化合物である。これらの化合物の両方について、効率が本発明の実施の形態に示される。

化合物１４のアルデヒド基及びこのアルデヒド基から直接又は間接的に得られる基を修飾する工程は、化合物１４のメトキシ基及びこのメトキシ基から直接又は間接的に得られる基を修飾する工程の全て又は一部の前又は後に部分的又は完全に行うことができる。これは、上記工程ａ）～ｆ）を所与の順序だけでなく、工程を行うことで化合物３０が得られる限りにおいて任意の他の順序でも行うことができることを意味する。異なる順序での実行を図１及び図２及び図４～図６による反応スキームに示す。工程ａ）～ｆ）が所与の順序で行われる場合、工程ｂ）～ｆ）は全て、いずれの場合にも、先行工程において番号で識別される先行工程の生成物を用いて行われる。

一実施の形態では、ｅ）によって得られる化合物のアルキル鎖の末端の塩素原子は、工程ｆ）においてフィンケルシュタイン反応でヨウ素に置き換えられる。

図１に示される本発明による方法の利点は、通常は４工程かかる、フェネチル部分を達成するためにベンズアルデヒド残基をもう１つのメチレン基で伸長する反応が２工程しかかからないことである。これらの２工程は、ベンズアルデヒド２５からエノールエーテル２６へのウィッティヒ反応、及び推定中間体フェニルアセトアルデヒド２７を介したフェニルエタノール２８へのワンポット反応である。中間体２７は、当初は酸性条件で２６から調製される予定であった。しかし、塩酸又はギ酸等の複数の脱メチル化条件を適用した後に、所望の化合物を得ることができなかった。化合物２６は、酸の添加後に低温及び無水条件であっても非常に急速に分解し、出発物質である化合物２５を再び形成した。最終的に、水銀塩として適用される酢酸水銀（ＩＩ）を用いたワンポット反応が、おそらくは推定フェニルアセトアルデヒド中間体２７を安定させるため、これは単離されず、塩基性溶液中のＮａＢＨ_４の添加によって直接還元される。結果として、合成スキームが顕著に短縮され、アルコール２８が首尾よく形成される。酢酸水銀の添加の直後にアルカリ金属水素化ホウ素を添加した場合にも化合物２８が形成されるが、この場合の化合物２８の収率は低い。本発明者らは、酢酸水銀の添加と還元剤であるアルカリ金属水素化ホウ素の添加との間に中間体２７が形成する時間が十分にある場合に収率が改善されることを見出した。酢酸水銀の添加と還元剤の添加の間の時間が過度に長い場合、ベンズアルデヒド２５に戻る加水分解が起こる恐れがある。

酢酸水銀及び還元剤の添加の間の時間は、５分間～２５分間、特に６分間～２０分間、特に７分間～１５分間、特に８分間～１５分間、特に９分間～１２分間の範囲であり得る。特に、酢酸水銀及び還元剤の添加の間の時間は、１０分間又は約１０分間である。

さらに、ベンズアルデヒド残基をもう１つのメチレン基で伸長する反応は、０℃～５℃、特に０℃～４℃、特に０℃～２℃、特に０℃～１℃の範囲の温度、特に０℃の温度で行う必要がある。

化合物２４は、完全に保護されたグアニジン部分を化合物２８に導入して、化合物２９を得るために光延反応に使用される。アルキル鎖の末端の塩素原子は、フィンケルシュタイン反応でヨウ素に置き換えられ、このヨウ素が続いて放射性標識法のために、トシル酸銀と暗所で反応させることによってトシレート残基に置き換えられる。反応スキーム全体を図１に示す。

放射性フッ素化は、図２に示される求核法によって行われる。トシレート部分は、非常に良好な脱離基であり、これが［^１８Ｆ］フッ素に置き換えられる。オートラジオグラフィーを用いたＴＬＣにより、脱保護前のフッ素化中間体の形成が示された。両方のＢｏｃ基の除去後に形成された中間体は、依然としてグアニジン上にトリアジナノン構造を含有していた。この構造は、予想よりも安定していることが分かった。したがって、この部分の分解に６ＮＨＣｌを使用した。標識の総合成時間は、およそ１２０分間である。平均全放射化学的収率は、７．９±３．１％（５回の標識の記録から算出された出発放射活性に基づいて減衰補正した）であり、９７％を超える放射化学的純度であった。

工程ｃ）の（メトキシメチル）トリフェニルホスホニウムハロゲン化物は、（メトキシメチル）トリフェニルホスホニウムクロリドであり得る。

一実施の形態では、工程ｅ）のアゾジカルボキシレートは、ジエチルアゾジカルボキシレート（ＤＥＡＤ）又はジイソプロピルアゾジカルボキシレート（ＤＩＡＤ）である。

工程ｇ）の酸性条件下での脱保護を最高でも１００℃の温度で行うことができる。

化合物２４の合成を、
ｈ）カルバミン酸ベンジル、Ｎ，Ｎ’－ジメチル尿素及び水を少なくとも８０℃の温度で反応させ、以下の化合物２３：

を得る工程と、
ｉ）パラジウム活性炭によって触媒される化合物２３と水素との反応により、化合物２２：

を得る工程と、
ｊ）化合物２２と以下の化合物１３：

とをＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）の存在下で反応させ、化合物２４を得る工程（式中、Ｂｏｃはｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル保護基である）と、
を含む方法において合成することができる。

一実施の形態では、工程ｊ）の化合物１３を、１，３－ビス（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－２－メチル－２－チオプソイド尿素と５－クロロベンゾトリアゾールとを塩化水銀（ＩＩ）（ＨｇＣｌ_２）の存在下で反応させることによって合成する。

化合物２４の合成の反応スキーム全体を図３に示す。化合物２４の合成のために、トリアジナン中間体２２を初めに調製する。ベンジルアミンを出発物質として使用する場合、得られる化合物２１：

（式中、Ｂｎはベンジルである）から化合物２２への水素化工程は、非常に高い圧力を必要とし、これは実験室条件で達成することが困難であり、またスケールアップ調製には実現不可能である。本発明の改善された方法では、ベンジルアミンの代わりにカルバミン酸ベンジルをトリアジナン中間体２３の調製に使用し、これは保護基の除去においてはるかに温和な条件を受ける。完全に保護されたグアニジン化合物２４が化合物２２から形成されるが、プソイド尿素：

との反応は、トリアジナン中間体の分解のために奏功しなかった。しかしながら、本発明者らは、化合物１３をプソイド尿素の代わりに使用した場合に化合物２４を得ることができることを見出した。

トレーサー２（＝^１８Ｆ－ＡＦ７８）の前駆体としての化合物３０の合成のための反応スキームを示す図である。 ^１８Ｆ－ＡＦ７８の合成のための反応スキームを示す図である。化合物２４の合成のための反応スキームを示す図である。化合物１１７の合成のための反応スキームを示す図である。トレーサー^１８Ｆ－３７の前駆体としての化合物１２３の合成のための反応スキームを示す図である。化合物^１８Ｆ－３７の合成のための反応スキームを示す図である。漸増濃度の非放射性化合物の存在下でのＳＫ－Ｎ－ＳＨ細胞における^１３１Ｉ－ＭＩＢＧの取込みの用量応答曲線を示す図である。ＮＥＴ阻害剤デシプラミン（ＤＭＩ）を用いた場合及び用いない場合のＳＫ－Ｎ－ＳＨ細胞における^１８Ｆ－ＡＦ７８の取込みを示す図である。漸増濃度の非放射性参照の存在下でのＳＫ－Ｎ－ＳＨ細胞における^１８Ｆ－ＡＦ７８の取込みの用量応答曲線を示す図である。事前のＮＥＴ遮断を行った場合及び行わない場合の^１８Ｆ－ＡＦ７８の投与後のラットの左室短軸切片のオートラジオグラフィーを示す図である。事前のＮＥＴ遮断を行った場合及び行わない場合の^１８Ｆ－ＡＦ７８の投与後の組織分布研究の結果を示す図である。事前のＮＥＴ遮断を行った場合及び行わない場合の健常なラットにおける^１８Ｆ－ＡＦ７８の心臓取込みの静止ＰＥＴ像を示す図である。事前のＮＥＴ遮断を行った場合及び行わない場合の健常なラットにおける^１８Ｆ－３７の心臓取込みの静止ＰＥＴ像を示す図である。事前のＮＥＴ遮断を行った場合及び行わない場合の対照サルにおける動態ＰＥＴ像から作成した^１８Ｆ－ＡＦ７８の時間－活性曲線を示す図である。ラットにおける動態ＰＥＴ像から作成した^１８Ｆ－３７の時間－活性曲線（左パネル）、並びにトレーサー注射の１０分後の心臓対血液（Ｈ／Ｂ）比、心臓対肝臓（Ｈ／Ｌ）比及び心臓対筋肉（Ｈ／Ｍ）比を示すラット（ｎ＝４）における生体内分布研究の結果（右パネル）を示す図である。健常なラット、ウサギ、ブタ及びサルにおける^１８Ｆ－ＡＦ７８の心臓取込みの静止ＰＥＴ像を示す図である。サルにおける^１８Ｆ－ＡＦ７８を用いた生体内分布研究の結果を示す図である。サルの心臓において^１８Ｆ－ＡＦ７８を用いて行った動態研究の結果を示す図である。上パネルは、ＮＥＴ遮断剤デシプラミン（ＤＭＩ）の前処理を行った場合（ＤＭＩ遮断）及び行わない場合（ＣＯＮＴ）の心臓トレーサー取込みを示す。中央パネルは、対照（ＣＯＮＴ）と比較したＤＭＩ追跡（トレーサー投与後のＤＭＩ注射）によるトレーサー取込みを示す。下パネルは、対照（ＣＯＮＴ）と比較したチラミン追跡（トレーサー投与後に注射したＴＹＲ追跡、チラミン、カテコールアミン放出剤）によるトレーサー取込みを示す。

本発明による化合物の合成
図１による合成の条件は、以下の通りであった：
（ａ）１－クロロ－３－ヨードプロパン、Ｋ_２ＣＯ_３、アセトン、６０℃、１４時間、８７％；（ｂ）（メトキシメチル）トリフェニルホスホニウムクロリド、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（ＫＯｔＢｕ）、ＴＨＦ、０℃→室温、２４時間、５０％；（ｃ）Ｈｇ（ＯＡｃ）_２、ＴＨＦ、Ｈ_２Ｏ、０℃、１５分；（ｄ）ＮａＢＨ_４、Ｋ_２ＣＯ_３、Ｈ_２Ｏ、０℃、３０分、６８％；（ｅ）化合物２４、トリフェニルホスフィン（ＰＰｈ_３）、ジイソプロピルアゾジカルボキシレート（ＤＩＡＤ）、ＴＨＦ、０℃→室温、１６時間、８４％；（ｆ）ＮａＩ、アセトン、７０℃、１４時間、９９％；（ｇ）ｐ－トルエンスルホン酸銀、ＣＨ_３ＣＮ、０℃→室温、暗所、７２時間、９８％。

図３による合成の条件は、以下の通りであった：
（ａ）Ｈ_２Ｏ、１００℃、１４時間、７７％；（ｂ）ＣＨ_３ＯＨ、Ｈ_２Ｏ、１００℃、１４時間、３５％；（ｃ）Ｈ_２、Ｐｄ／Ｃ、室温、１４時間、８８％；（ｄ）化合物１３、ＤＩＰＥＡ、ＣＨ_３ＣＮ、５０℃、１４時間、５８％；（ｅ）化合物２３、ＨｇＣｌ_２、ＤＭＦ、Ｎ_２、５０℃、１４時間。

図１～図３の化合物の合成の詳細：
溶媒を公開された方法に従って乾燥させ、使用前に新たに蒸留した。他の全ての試薬は、市販の化合物であり、特段の記載がない限り更に精製することなく使用した。全ての反応を窒素雰囲気下で行った。^１Ｈ及び^１３ＣＮＭＲスペクトルデータは、BrukerのＡｖａｎｃｅＩＩ４００ＭＨｚによって得た。^１Ｈ及び^１３ＣＮＭＲ化学シフト（δ）は、内部標準ＴＭＳに対するパーツパーミリオン（ｐｐｍ）単位で報告し、結合定数（Ｊ）はＨｚ単位である。

薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、２５４ｎｍ蛍光指示薬を用いてシリカゲル６０で行った。ＵＶ光又はヨウ素蒸気を検出に使用した。純度は、ＬＣ２０ＡＢ液体クロマトグラフ、ＳＰＤ－２０ＡＵＶ／Ｖｉｓ検出器及びＤＧＵ－２０Ａ３Ｒ脱気ユニットを備える、株式会社島津製作所（Shimadzu Products）によるＬＣＭＳシステムで行われるＬＣＭＳによって評価した。固定相は、Ｓｙｎｅｒｇｉ４μｍｆｕｓｉｏｎ－ＲＰ（１５０×４．６ｍｍ）カラム（Phenomenex、ドイツ、アシャッフェンブルク）であった。質量スペクトルは、株式会社島津製作所のＬＣＭＳ－２０２０（９５％以上の確認純度）によって得た。カラムクロマトグラフィーについては、Merckによるシリカゲル６０、２３０～４００メッシュを使用した。分取薄層クロマトグラフィーについては、Merckによるシリカゲル６０ＰＦ_２５４を使用した。

ｔｅｒｔ－ブチル（Ｅ）－（（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）イミノ）（５－クロロ－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール－１－イル）メチル）カルバメート（１３）
１，３－ビス（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－２－メチル－２－チオプソイド尿素及び５－クロロベンゾトリアゾールをジメチルホルムアミド及びトリエチルアミン（０．３５ｇ、３．４５ｍｏｌ）に溶解した。塩化水銀（ＩＩ）（ＨｇＣｌ_２）を添加し、反応混合物を５０℃で２４時間撹拌した。混合物を炭酸水素ナトリウム及び水で洗浄し、酢酸エチル（８×５０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させた。粗生成物をジクロロメタンに溶解し、カラム（５：１→１：１の石油エーテル：酢酸エチル）によって精製し、標的化合物１３を白色の固体（０．７４ｇ、１８．７ｍｍｏｌ、収率５７％）として得て、これを更に精製することなく次の工程に使用した。ESI-MS (m/z): 396.05 [M+H]⁺.

３－フルオロ－４－ヒドロキシベンズアルデヒド（１５）
３－フルオロ－４－メトキシベンズアルデヒド１４（５．００ｇ、３２．５ｍｍｏｌ）を４８％ＨＢｒ（３０ｍＬ）と混合し、１４０℃に加熱し、アルゴン雰囲気下で３時間撹拌した。混合物を水（１５０ｍＬ）で希釈し、ジクロロメタン（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を真空で除去し、化合物１５を褐色の固体（４．３６ｇ、３０．２ｍｍｏｌ、収率９７％）として得た。ＮＭＲは文献に従う（Jiang 2014）。ESI-MS (m/z): 141.00 [M+H]⁺.

５－ベンジル－１，３－ジメチル－１，３，５－トリアジナン－２－オン（２１）
ベンジルアミン（９．８１ｇ、９１．７ｍｍｏｌ）をホルムアルデヒド（１４．７ｇ、１８３ｍｍｏｌ、４０％水溶液）に溶解し、アルゴン雰囲気下で１００℃に加熱した。Ｎ，Ｎ’－ジメチル尿素（８．０７ｇ、９１．７ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１４時間撹拌した。混合物を水で洗浄し、ジクロロメタン（２×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を真空で除去し、粗生成物をカラムクロマトグラフィー（１：１の石油エーテル：酢酸エチル）によって精製して、表題化合物２１を黄色の結晶（１５．５ｇ、７０．９ｍｍｏｌ、収率７７％）として得た。¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ = 2.85 (s, 6 H), 3.90 (s, 2 H), 4.16 (s, 4 H), 7.28 (m, 5 H) ppm. ¹³C NMR (CDCl₃, 101 MHz) δ = 32.47, 55.36, 67.72, 127.70, 128.60, 129.11, 137.49, 156.04 ppm. ESI-MS (m/z): 220.10 [M+H]⁺.

ベンジル３，５－ジメチル－４－オキソ－１，３，５－トリアジナン－１－カルボキシレート（２３）
カルバミン酸ベンジル（１．００ｇ、６．６２ｍｍｏｌ）をホルムアルデヒド（１．１８ｇ、１４．６ｍｍｏｌ、４０％水溶液）及びメタノールに溶解した。混合物をアルゴン雰囲気下で１００℃に加熱し、Ｎ，Ｎ’－ジメチル尿素（０．５８ｇ、６．６２ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１４時間撹拌した。溶媒を真空で除去し、粗生成物を水で洗浄し、ジクロロメタン（２×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を真空で除去し、粗生成物をカラムクロマトグラフィー（１：１の石油エーテル：酢酸エチル、次いで２５：１のジクロロメタン：メタノール）によって精製して、表題化合物２３を無色の液体（０．６０ｇ、２．２９ｍｍｏｌ、収率３５％）として得た。¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ = 2.79 (s, 6H), 4.62 (s, 4H), 5.09 (s, 2H), 7.26-7.27 (5H) ppm. ¹³C NMR (CDCl₃, 101 MHz) δ = 32.66, 60.34, 68.15, 128.04, 128.40, 128.58, 135.56, 154.39, 156.07 ppm. ESI-MS (m/z): 264.00 [M+H]⁺.

１，３－ジメチル－１，３，５－トリアジナン－２－オン（２２）
化合物２３（６０３ｍｇ、２．２９ｍｍｏｌ）をメタノールに溶解し、パラジウム活性炭（３０ｍｇ）を添加し、反応混合物を水素雰囲気下にて室温で１４時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液を真空で濃縮して、表題化合物２２を白色の固体（２５９ｍｇ、２．０１ｍｍｏｌ、収率８８％）として得た。¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ = 2.77 (s, 1H), 2.85 (s, 5H), 4.16 (s, 4H) ppm.

ｔｅｒｔ－ブチル（Ｚ）－（（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）イミノ）（３，５－ジメチル－４－オキソ－１，３，５－トリアジナン－１－イル）メチル）カルバメート（２４）
アセトニトリル中の化合物２２（１３７ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ）及び化合物１３（４２０ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（２７４ｍｇ、２．１３ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を５０℃で１４時間撹拌した。溶媒を真空で除去した。残渣を水（５０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（２×３０ｍｌ）及びジクロロメタン（２×３０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を真空で除去した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（６：１、次いで２：１の石油エーテル：酢酸エチル、１：１：０．０５の石油エーテル：酢酸エチル：トリエチルアミン）によって精製して、標的化合物２４を白色の結晶（２２６ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ、収率５８％）として得た。¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ = 1.47-1.48 (m, 18H), 2.01-2.02 (m, 1H), 2.90-2.91 (m, 6H), 4.69 (s, 6H) ppm. ¹³C NMR (CDCl₃, 101 MHz) δ = 28.16, 33.18, 60.47, 62.31, 81.82, 154.01, 157.30 ppm. ESI-MS (m/z): 372.20 [M+H]⁺.

４－（３－クロロプロポキシ）－３－フルオロベンズアルデヒド（２５）
アセトン中の化合物１５（２．５０ｇ、１７．９ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（２．７１ｇ、１９．６ｍｍｏｌ）の溶液に、１－クロロ－３－ヨードプロパン（３．６４ｇ、１７．９ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を６０℃で１４時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を水（１００ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（２×５０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を真空で除去し、粗生成物をカラムクロマトグラフィー（５：１の石油エーテル：酢酸エチル）によって精製した。溶媒を真空で除去し、化合物２５を淡黄色の液体（３．３６ｇ、１５．６ｍｍｏｌ、収率８７％）として得た。¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ = 2.23-2.32 (m, 2 H), 3.74-3.78 (m, 2 H), 4.22-4.28 (m, 2 H), 7.58-7.80 (m, 3 H), 9,85 (s, 1 H) ppm. ¹³C NMR (CDCl₃, 101 MHz) δ = 31.98, 41.14, 65.69, 113.62, 113.81, 115.94, 116.15, 123.30, 123.37, 130.20, 130.30, 147.54, 148.66, 150.66-153.12 (J(C-F) = 254.4 Hz), 189.96 ppm. ESI-MS (m/z): 217.10 [M+H]⁺.

（Ｅ）－１－（３－クロロプロポキシ）－２－フルオロ－４－（２－メトキシビニル）ベンゼン（２６）
（メトキシメチル）トリフェニルホスホニウムクロリド（５３８ｍｇ、１．５７ｍｍｏｌ）を乾燥テトラヒドロフランに溶解し、０℃に冷却した。カリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（２２８ｍｇ、２．０４ｍｍｏｌ）を少量ずつ添加し、混合物を１時間撹拌した。乾燥テトラヒドロフラン中の化合物２５（２００ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）を冷却下で滴加し、反応物を室温まで一晩温めた。混合物を水でクエンチした後、溶媒を真空で除去し、残渣を水（１００ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（２×５０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を真空で除去し、粗生成物をカラムクロマトグラフィー（１５：１の石油エーテル：酢酸エチル）によって精製して、標的化合物２６を無色の油（１９２ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ、収率５０％）として得た。¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ = 2.25 (m, 2 H), 3.37 (s, 2 H), 3.76-3.77 (m, 3 H), 4.16 (m, 2H), 5.13-5.14 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 5.70-5.73 (d, J = 13.0 Hz, 0.5 H), 6.08-6.10 (d, J = 7.0 Hz, 0.5 H), 6.87-6.89 (m, 3 H) ppm. ¹³C NMR (CDCl₃, 101 MHz) δ = 32.47, 41.52, 41.55, 56.70, 60.78, 66.15, 66.29, 112.69, 112.88, 115.08, 115.10, 115.84, 115.86, 116.02, 116.21, 121.13, 121.17, 147.57, 148.78, 151.91-154.35 (J(C-F) = 245.1 Hz), 153.80 ppm.

２－（４－（３－クロロプロポキシ）－３－フルオロフェニル）エタン－１－オール（２８）
化合物２６（９０ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフランに溶解し、水中の酢酸水銀（ＩＩ）（１２９ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）の溶液を氷／水浴において冷却下で添加した。反応混合物を１５分間撹拌し、飽和炭酸カリウム溶液中の水素化ホウ素ナトリウム（５６ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）を滴加した。反応混合物を３０分間撹拌し、水で希釈し、酢酸エチル（４×１０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を真空で除去し、粗生成物をカラムクロマトグラフィー（４：１の石油エーテル：酢酸エチル）によって精製して、標的化合物２８を無色の油（５８．５ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ、収率６８％）として得た。¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ = 2.22-2.28 (m, 2 H), 2.77-2.80 (t, J = 6.5 Hz, 2 H), 3.75-3.83 (m, 4 H), 4.15-4.18 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 6.91-6.98 (m, 3 H) ppm. ¹³C NMR (CDCl₃, 101 MHz) δ = 31.27, 38.82, 41.32, 41.43, 62.64, 65.98, 113.39, 113.46, 116.63, 116.84, 125.48, 125.56, 133.36, 133.39, 144.45, 144.85, 153.22-156.17 (J(C-F) = 251.5 Hz) ppm.

ｔｅｒｔ－ブチル（Ｅ）－（（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）イミノ）（３，５－ジメチル－４－オキソ－１，３，５－トリアジナン－１－イル）メチル）（４－（３－クロロプロポキシ）－３－フルオロフェネチル）カルバメート（２９）
化合物２８（７２ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）、化合物２４（１７２ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）及びトリフェニルホスフィン（１２２ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）を乾燥テトラヒドロフランに溶解した。乾燥テトラヒドロフラン中のＤＩＡＤ（９４ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）の溶液を０℃で滴加し、反応混合物を室温までゆっくりと温め、１６時間撹拌した。混合物を水（４０ｍＬ）で希釈し、ジエチルエーテル（４×１０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を真空で除去し、粗生成物をカラムクロマトグラフィー（２．５：１．５：０．５の石油エーテル：アセトン：酢酸エチル）によって精製して、標的化合物２９を無色の液体（１５２ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ、収率８４％）として得た。¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ = 1.47 (s, 18 H), 2.22-2.25 (m, 2 H), 2.84 (m, 6 H), 3.57 (bs, 4 H), 3.74-3.77 (m, 2 H), 4.13-4.16 (m, 2 H), 4.52 (bs, 4 H), 6.89-6.95 (m, 3 H) ppm. ¹³C NMR (CDCl₃, 101 MHz) δ = 28.14, 28.25, 41.43, 48.87, 60.49, 61.02, 66.02, 80.84, 83.00, 115.48, 116.55, 116.73, 124.40, 124.43, 131.50, 131.56, 145.60, 145.71, 150.98, 151.52-153.97 (J(C-F) = 246.8 Hz), 152.31, 156.98, 158.39 ppm. ESI-MS (m/z): 586.25, 588.25 [M+H]⁺.

ｔｅｒｔ－ブチル（Ｅ）－（（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）イミノ）（３，５－ジメチル－４－オキソ－１，３，５－トリアジナン－１－イル）メチル）（３－フルオロ－４－（３－ヨードプロポキシ）フェネチル）カルバメート（３０ａ）
化合物２９（７２ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）及びヨウ化ナトリウム（３７ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）をアセトンに溶解し、反応混合物を７０℃で１４時間撹拌した。混合物を水（４０ｍＬ）で希釈し、ジエチルエーテル（４×１０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を真空で除去し、標的化合物３０ａを黄色の液体（８３ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ、収率９９％）として得て、更に精製することなく直接次の工程に使用した。ESI-MS (m/z): 678.20 [M+H]⁺, 700.20 [M+Na]⁺.

（Ｅ）－３－（４－（２－（Ｎ，Ｎ’－ビス（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－３，５－ジメチル－４－オキソ－１，３，５－トリアジナン－１－カルボキシイミドアミド）エチル）－２－フルオロフェノキシ）プロピル４－メチルベンゼンスルホネート（３０）
化合物３０ａ（７２ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）をアセトニトリル及びｐ－トルエンスルホン酸銀（１４８ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）に暗所にて０℃で溶解した。反応混合物を室温で７２時間撹拌した。粗生成物を水（４０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（４×１０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を真空で除去し、標的化合物３０を黄色の液体（７５ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ、収率９８％）として得た。¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ = 1.48 (s, 18 H), 2.11-2.14 (m, 2 H), 2.14 (s, 3H), 2.85 (s, 6H), 3.85 (bs, 4H), 3.89-4.01 (m, 2H), 4.22-4.25 (m, 2H), 4.55 (bs, 4H), 6.77-6.93 (m, 3H), 7.26-7.28 (m, 2H), 7.75-7.77 (d, J = 8.3 Hz) ppm. ¹³C NMR (CDCl₃, 101 MHz) δ = 28.15, 28.26, 29.05, 29.80, 33.22, 33.66, 60.50, 61.20, 64.87, 66.98, 80.93, 83.06, 115.32, 116.49, 116.67, 124.42, 127.98, 129.95, 131.55, 132.92, 144.92, 145.36, 145.47, 151.37, 152.28, 153.82, 156.95 ppm. ESI-MS (m/z): 722.35 [M+H]⁺, 744.30 [M+Na]⁺.

放射化学
Ｓｅｐ－ＰａｋＱＭＡカートリッジに捕捉させた^１８Ｆ－フッ化物を初めに蒸留水（３ｍＬ）で洗浄し、^１８Ｏ－水を除去した。次いで、^１８Ｆ－フッ化物をＫ_２ＣＯ_３溶液（０．３ｍＬ、２３μｍｏｌ／ｍＬ）でカートリッジからＫｒｙｐｔｏｆｉｘ_２２２（２２．５ｍｇ、５９．７μｍｏｌ）の入ったバイアルに溶出させた。アセトニトリル（０．５ｍＬ×４）をバイアルに添加し、溶液をアルゴン下にて１２０℃で共沸乾燥させた。標識は、乾燥アセトニトリル（０．３ｍＬ）中の前駆体（４．８ｍｇ）の溶液を添加し、続いて加熱し、１１０℃で１０分間撹拌することによって行う。塩酸（６Ｎ、０．３ｍＬ）を反応混合物に添加し、反応を１００℃で２０分間継続した。混合物を冷却し、１ｍＬの水及びアセトニトリル（１：１）の混合溶液で希釈し、精製のために半分取ＨＰＬＣに適用した。ＨＰＬＣ条件：カラム：９．４×２５０ｍｍ５ミクロンＺＯＲＢＡＸＥｃｌｉｐｓｅＸＤＢ－Ｃ１８（製品番号：９９０９６７－２０２）。移動相：Ａ相：０．１％ギ酸を含むＭｉｌｌｉｐｏｒｅ水；Ｂ相：０．１％ギ酸を含むメタノール。条件：０分～２０分、３０％→６０％のＢ、２０分～２２分、６０％→１００％のＢ、２２分～５０分、１００％のＢ；流量３ｍＬ／分。オートラジオグラフィーの条件：順相シリカゲル６０を用いたＴＬＣ。溶媒系：３ｍＬのメタノール＋２０μＬのギ酸、Ｒｆ：０．６。^１３１Ｉ－ＭＩＢＧは、GE Healthcare（ドイツ、フライブルク・イム・ブライスガウ）から購入し、較正時間後２時間以内に使用した。^１３１Ｉ－ＭＩＢＧを、研究目的及び経済的理由で好都合である、その比較的長い半減期のために^１２３Ｉ－ＭＩＢＧの代わりに選んだ。

図４～図６の化合物の合成の詳細：
（Ｅ／Ｚ）－２－ヨード－１－メトキシ－４－（２－メトキシビニル）ベンゼンＣ_１０Ｈ_１１Ｏ_２Ｉ（１０７）

（メトキシメチル）トリフェニルホスホニウムクロリド（３．９４ｇ、１１．５０ｍｍｏｌ、１．５０当量）を不活性ガス雰囲気下で乾燥テトラヒドロフラン（６０ｍＬ）に溶解し、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（１．４７ｇ、１３．１３ｍｍｏｌ、１．７１当量）を０℃で添加した。反応混合物を０℃で２分間撹拌した後、市販の３－ヨード－４－メトキシベンズアルデヒド１０６（２．０１ｇ、７．６６ｍｍｏｌ、１．００当量）を添加した。溶液を室温で１８時間撹拌し、蒸発乾固した。残渣を酢酸エチル（５０ｍＬ）と水（５０ｍＬ）との間で分配し、続いて層を分離した。水層を酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をブライン（１×１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、粗物質をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、石油エーテル／酢酸エチル＝１２：１、Ｒ_ｆ＝０．３７）によって精製して、所望の生成物１０７を淡黄色の油（１．７９ｇ、収率８１％）として得た。¹H-NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ = 8.02 (1H, d, J = 2.13 Hz, H^h'), 7.66 (1H, d, J = 2.18 Hz, H^h), 7.50 (1H, dd, J = 2.13 Hz, 8.54 Hz, H^d'), 7.15 (1H, dd, J = 2.25 Hz, 8.46 Hz, H^d), 6.92 (1H, d, J = 12.92 Hz, H^a), 6.78 - 6.71 (2H, m, H^e/e'), 6.07 (1H, d, J = 6.94 Hz, H^a'), 5.70 (1H, d, J = 13.00 Hz, H^b), 5.09 (1H, d, J = 6.98 Hz, H^b'), 3.86/3.85 (6H, s, H^i/i'), 3.77 (3H, s, H^j'), 3.66 (3H, s, H^j) ppm. ¹³C-NMR (CDCl₃, 101 MHz) δ = 156.4 (C^f), 156.1 (C^f'), 148.5 (C^a), 147.3 (C^a'), 139.1 (C^h'), 136.1 (C^h), 131.3 (C^c), 131.0 (C^c'), 129.4 (C^d'), 126.3 (C^d), 111.2/110.7 (C^e/e'), 103.9 (C^b'), 103.4 (C^b), 86.5 (C^g), 86.0 (C^g'), 60.8 (C^j'), 56.7/56.6/56.5 (C^j/i/i') ppm. ESI-MS (m/z): 290.80 [M+H]⁺.

２－（３－ヨード－４－メトキシフェニル）エタン－１－オールＣ_９Ｈ_１１Ｏ_２Ｉ（１０８）

（Ｅ／Ｚ）－２－ヨード－１－メトキシ－４－（２－メトキシビニル）ベンゼン１０７（１．７９ｇ、６．１７ｍｍｏｌ、１．００当量）をテトラヒドロフラン（４６ｍＬ）及び水（７４ｍＬ）に懸濁した後、酢酸水銀（２．１８ｇ、６．８４ｍｍｏｌ、１．１０当量）を０℃で添加した。反応混合物を０℃で３０分間撹拌し、続いて５０％炭酸カリウム水溶液（３０ｍＬ）及び水素化ホウ素ナトリウム（９４２ｍｇ、２４．９０ｍｍｏｌ、４．００当量）を添加した。反応混合物を０℃で２．５時間撹拌した後、沈殿物を濾別し、濾液を酢酸エチル（３×８０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で除去した。粗物質をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、石油エーテル／酢酸エチル＝１：１、Ｒ_ｆ＝０．４５）によって精製して、アルコール１０８を黄色の油（１．３６ｇ、収率７９％）として得た。¹H-NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ = 7.65 (1H, d, J = 2.13 Hz, H^h), 7.16 (1H, dd, J = 2.14 Hz, 8.35 Hz, H^d), 6.76 (1H, d, J = 8.35 Hz, H^e), 3.85 (3H, s, Hⁱ), 3.81 (2H, t, J = 6.55 Hz, H^a), 2.76 (2H, t, J = 6.53 Hz, H^b), 1.69 (1H, s, H^j) ppm. ¹³C-NMR (CDCl₃, 101 MHz) δ = 157.0 (C^f), 139.9 (C^h), 132.9 (C^c), 130.2 (C^d), 111.1 (C^e), 86.2 (C^g), 63.7 (C^a), 56.5 (Cⁱ), 37.8 (C^b) ppm. ESI-MS (m/z): 278.80 [M+H]⁺.

３－ヨード－４－メトキシフェネチルアセテートＣ_１１Ｈ_１３Ｏ_３Ｉ（１１３）

２－（３－ヨード－４－メトキシフェニル）エタン－１－オール１０８（１．０４ｇ、３．７４ｍｍｏｌ、１．００当量）をアセトン（２０ｍＬ）に溶解し、塩化アセチル（８００μＬ、１１．２１ｍｍｏｌ、３．００当量）を０℃で添加した。反応混合物を室温で１８時間撹拌した後、溶媒を減圧下で除去した。残渣を酢酸エチル（２０ｍＬ）に溶解し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（１×２０ｍＬ）及びブライン（１×２０ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で除去した。粗物質をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、石油エーテル／酢酸エチル＝３：１、Ｒ_ｆ＝０．５４）によって精製して、アセテート１１３を黄色の油（１．０７ｇ、収率９０％）として得た。¹H-NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ = 7.63 (1H, d, J = 2.15 Hz, H^h), 7.15 (1H, dd, J = 2.16 Hz, 8.39 Hz, H^d), 6.75 (1H, d, J = 8.38 Hz, H^e), 4.22 (2H, t, J = 7.01 Hz, H^a), 3.85 (3H, s, Hⁱ), 2.83 (2H, t, J = 7.01 Hz, H^b), 2.03 (3H, s, H^k) ppm. ¹³C-NMR (CDCl₃, 101 MHz) δ = 171.1 (C^j), 157.1 (C^f), 139.9 (C^h), 132.2 (C^c), 130.0 (C^d), 111.0 (C^e), 86.1 (C^g), 64.9 (C^a), 56.5 (Cⁱ), 33.8 (C^b), 21.1 (C^k) ppm. ESI-MS (m/z): 342.85 [M+Na]⁺.

４－ヒドロキシ－３－ヨードフェネチルアセテートＣ_１０Ｈ_１１Ｏ_３Ｉ（１１４）

３－ヨード－４－メトキシフェネチルアセテート１１３（５８８ｍｇ、１．８７ｍｍｏｌ、１．００当量）を不活性ガス雰囲気下で乾燥ジクロロメタン（１２ｍＬ）に溶解し、乾燥ジクロロ－メタン（１２ｍＬ）中の三臭化ホウ素（４４５μＬ、４．６９ｍｍｏｌ、２．５０当量）の溶液を－２０℃で添加した。反応混合物を２時間撹拌し、酢酸エチル（６０ｍＬ）と５０％重炭酸ナトリウム水溶液（６０ｍＬ）との間で分配した。層を分離し、水層を酢酸エチル（２×６０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１×１８０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で蒸発させ、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、石油エーテル／酢酸エチル＝３：１、Ｒ_ｆ＝０．３６）によって精製して、フェノール１１４を黄色の油（６０２ｍｇ、収率９２％）として得た。¹H-NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ = 7.51 (1H, d, J = 2.08 Hz, H^h), 7.08 (1H, dd, J = 2.05 Hz, 8.28 Hz, H^d), 6.91 (1H, d, J = 8.29 Hz, H^e), 5.47 (1H, bs, Hⁱ), 4.22 (2H, t, J = 7.02 Hz, H^a), 2.83 (2H, t, J = 6.99 Hz, H^b), 2.04 (3H, s, H^k) ppm. ¹³C-NMR (CDCl₃,101 MHz) δ = 171.2 (C^j), 153.8 (C^f), 138.5 (C^h), 132.0 (C^c), 130.8 (C^d), 115.1 (C^e), 85.6 (C^g), 65.0 (C^a), 33.8 (C^b), 21.1 (C^k) ppm. ESI-MS (m/z): 328.85 [M+Na]⁺.

４－（３－クロロプロポキシ）－３－ヨードフェネチルアセテートＣ_１３Ｈ_１６Ｏ_３ＩＣｌ

４－ヒドロキシ－３－ヨードフェネチルアセテート１１４（３３０ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ、１．００当量）をアセトン（１７ｍＬ）に溶解し、続いて３－クロロ－１－ヨードプロパン（１７７μＬ、１．６５ｍｍｏｌ、１．５３当量）及び炭酸セシウム（７０２ｍｇ、２．１５ｍｍｏｌ、２．００当量）を添加した。反応混合物を７０℃で１８時間撹拌した後、水（８５ｍＬ）を添加した。酢酸エチル（３×８５ｍＬ）で抽出した後、合わせた有機層をブライン（１×２１５ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、石油エーテル／酢酸エチル＝５：１、Ｒ_ｆ＝０．４２）によって精製して、表題化合物を黄色の油（３７２ｍｇ、収率９０％）として得た。¹H-NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ = 7.63 (1H, d, J = 2.16 Hz, H^h), 7.13 (1H, dd, J = 2.15 Hz, 8.33 Hz, H^d), 6.76 (1H, d, J = 8.35 Hz, H^e), 4.22 (2H, t, J = 6.99 Hz, H^a), 4.14 (2H, t, J = 5.68 Hz, H^k), 3.84 (2H, t, J = 6.33 Hz, H^m), 2.83 (2H, t, J = 6.99 Hz, H^b), 2.23 (2H, quint, J = 6.00 Hz, H^l), 2.03 (3H, s, H^j) ppm. ¹³C-NMR (CDCl₃, 101 MHz) δ = 171.1 (Cⁱ), 156.1 (C^f), 139.8 (C^h), 132.5 (C^c), 130.0 (C^d), 112.2 (C^e), 86.8 (C^g), 65.6 (C^k), 64.9 (C^a), 41.8 (C^m), 33.8 (C^b), 32.3 (C^l), 21.1 (C^j) ppm. ESI-MS (m/z): 404.80 [M+Na]⁺.

２－（４－（３－クロロプロポキシ）－３－ヨードフェニル）エタン－１－オールＣ_１１Ｈ_１４Ｏ_２ＩＣｌ（１１７）

４－（３－クロロプロポキシ）－３－ヨードフェネチルアセテート（１８９ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ、１．００当量）をメタノール（９ｍＬ）に溶解した後、炭酸カリウム（６５０ｍｇ、４．７０ｍｍｏｌ、９．６０当量）を添加した。反応混合物を室温で３時間撹拌し、水（６０ｍＬ）とジクロロメタン（６０ｍＬ）との間で分配し、続いて層を分離した。水層をジクロロメタン（２×６０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をブライン（１×１８０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、アルコール１１７を黄色の油（１７５ｍｇ、定量的）として得て、これを直接次の工程に使用した。¹H-NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ = 7.65 (1H, d, J = 2.15 Hz, H^h), 7.16 (1H, dd, J = 2.12 Hz, 8.32 Hz, H^d), 6.77 (1H, d, J = 8.36 Hz, H^e), 4.14 (2H, t, J = 5.72 Hz, Hⁱ), 3.87 - 3.78 (4H, m, H^a,k), 2.77 (2H, t, J = 6.48 Hz, H^b), 2.27 (2H, quint, J = 6.00 Hz, H^j) ppm. ¹³C-NMR (CDCl₃, 101 MHz) δ = 156.1 (C^f), 139.9 (C^h), 133.3 (C^c), 130.2 (C^d), 112.3 (C^e), 87.0 (C^g), 65.7 (Cⁱ), 63.7 (C^a), 41.8 (C^k), 37.9 (C^b), 32.3 (C^j) ppm. ESI-MS (m/z): 362.80 [M+Na]⁺.

ｔｅｒｔ－ブチル（（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）イミノ）（３，５－ジメチル－４－オキソ－１，３，５－トリアジナン－１－イル）メチル）（４－（３－クロロプロポキシ）－３－ヨードフェネチル）カルバメートＣ_２７Ｈ_４１Ｎ_５Ｏ_６ＩＣｌ（１２１）

２－（４－（３－クロロプロポキシ）－３－ヨードフェニル）エタン－１－オール１１７（１６０ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ、１．００当量）、トリフェニルホスフィン（１８５ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ、１．５１当量）及び２４（１７５ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ、１．００当量）を乾燥テトラヒドロフラン（２３ｍＬ）に不活性ガス雰囲気下で溶解した。ＤＩＡＤ（１４０μＬ、０．７１ｍｍｏｌ、１．５１当量）を０℃で添加し、反応混合物を室温で１８時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残渣を水（２０ｍＬ）と酢酸エチル（２０ｍＬ）との間で分配し、続いて層を分離した。水層を酢酸エチル（２×２０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をブライン（１×６０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で蒸発させ、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、石油エーテル／アセトン／酢酸エチル＝５：３：１、Ｒ_ｆ＝０．３８）によって精製して、表題化合物１２１を淡緑色の油（２７２ｍｇ、収率８３％）として得た。¹H-NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ = 7.61 (1H, d, J = 1.81 Hz, H^h), 7.12 (1H, dd, J = 1.71 Hz, 8.25 Hz, H^d), 6.74 (1H, d, J = 8.31 Hz, H^e), 4.50 (4H, bs, H^p), 4.16 - 4.07 (3H, m, Hⁱ), 3.82 (2H, t, J = 6.25 Hz, H^k), 3.57 (2H, bs, H^a), 2.88 - 2.80 (8H, m, H^b,q), 2.26 (2H, quint, J = 5.96 Hz, H^j), 1.48 (9H, s, H^o), 1.47 (9H, s, H^o) ppm. ¹³C-NMR (CDCl₃, 101 MHz) δ = 156.3 (C^f,r), 152.4/151.3 (C^l,m), 139.6 (C^h), 132.5 (C^c), 129.9 (C^d), 112.3 (C^e), 87.0 (C^g), 83.1/80.9 (Cⁿ), 65.7 (Cⁱ), 61.2 (C^p), 49.0 (C^a), 41.7 (C^k), 33.2 (C^q), 33.1 (C^b), 32.2 (C^j), 28.3/28.2 (C^o) ppm. ESI-MS (m/z): 694.20 [M+H]⁺, 716.05 [M+Na]⁺.

ｔｅｒｔ－ブチル（（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）イミノ）（３，５－ジメチル－４－オキソ－１，３，５－トリアジナン－１－イル）メチル）（３－ヨード－４－（３－ヨードプロポキシ）フェネチル）カルバメートＣ_２７Ｈ_４１Ｎ_５Ｏ_６Ｉ_２（１２２）

１２１（２３６ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ、１．００当量）をアセトン（３０ｍＬ）に溶解し、ヨウ化ナトリウム（５１０ｍｇ、３．４０ｍｍｏｌ、１０．００当量）を添加した。反応混合物を７０℃で１８時間撹拌し、溶媒を減圧下で除去した。ＬＣ－ＭＳによって出発物質の不完全な変換が示されたため、付加的な量のヨウ化ナトリウム（８１６ｍｇ、５．４４ｍｍｏｌ、１６．００当量）を添加した。反応混合物を７０℃で更に１日撹拌した。更なる量のヨウ化ナトリウム（８１６ｍｇ、５．４４ｍｍｏｌ、１６．００当量）を添加してから、反応混合物を７０℃で更に１８時間撹拌した後、水（１５ｍＬ）とジエチルエーテル（１５ｍＬ）との間で分配し、続いて層を分離した。水層をジエチルエーテル（２×１５ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をブライン（１×４５ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、ヨウ化物１２２を黄色の油（２２１ｍｇ、収率８３％）として得て、これを直接次の工程に使用した。¹H-NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ = 7.62 (1H, d, J = 2.16 Hz, H^h), 7.13 (1H, dd, J = 2.22 Hz, 8.31 Hz, H^d), 6.75 (1H, d, J = 8.33 Hz, H^e), 4.51 (4H, bs, H^p), 4.05 (3H, t, J = 5.69 Hz, Hⁱ), 3.58 (2H, bs, H^a), 3.46 (3H, t, J = 6.60 Hz, H^k), 2.90 - 2.75 (8H, m, H^b,q), 2.32 - 2.24 (2H, m, H^j), 1.48 (9H, s, H^o), 1.47 (10H, s, H^o) ppm. ¹³C-NMR (CDCl₃, 101 MHz) δ = 157.0 (C^r), 156.2 (C^f), 152.3/151.1 (C^l,m), 139.6 (C^h), 132.6 (C^c), 129.8 (C^d), 112.4 (C^e), 87.0 (C^g), 83.1/81.0 (Cⁿ), 68.7 (Cⁱ), 61.2 (C^p), 49.0 (C^a), 33.3 (C^q), 33.1 (C^b), 32.9 (C^j), 28.3/28.2 (C^o), 3.1 (C^k) ppm. ESI-MS (m/z): 786.00 [M+H]⁺, 807.90 [M+Na]⁺.

３－（４－（２－（Ｎ，Ｎ’－ビス（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－３，５－ジメチル－４－オキソ－１，３，５－トリアジナン－１－カルボキシイミドアミド）エチル）－２－ヨードフェノキシ）プロピル４－メチルベンゼンスルホネートＣ_３４Ｈ_４８Ｎ_５Ｏ_９ＳＩ（１２３）

１２２（１９１ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ、１．００当量）をアセトニトリル（１０ｍＬ）に溶解し、ｐ－トルエンスルホン酸銀（３４０ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ、５．００当量）を添加した。反応混合物を暗所にて室温で７２時間撹拌した後、溶媒を減圧下で除去した。残渣を水（１５ｍＬ）と酢酸エチル（１５ｍＬ）との間で分配し、続いて層を分離した。水層を酢酸エチル（２×１５ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をブライン（１×４０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で蒸発させ、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、石油エーテル／アセトン／酢酸エチル＝６：３：１、Ｒ_ｆ＝０．３３）によって精製して、標的化合物１２３を無色の発泡体（１１３ｍｇ、収率５６％）として得た。¹H-NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ = 7.75 (2H, d, J = 8.33 Hz, H^t), 7.58 (1H, d, J = 2.06 Hz, H^h), 7.23 (2H, d, J = 8.32 Hz, H^u), 7.10 (1H, dd, J = 2.04 Hz, 8.33 Hz, H^d), 6.62 (1H, d, J = 8.22 Hz, H^e), 4.52 (3H, bs, H^p), 4.31 (2H, t, J = 6.02 Hz, H^k), 3.96 (2H, t, J = 5.78 Hz, Hⁱ), 3.56 (2H, bs, H^a), 2.88 - 2.79 (8H, m, H^b,q), 2.36 (3H, s, H^w), 2.19 - 2.10 (2H, m, H^j), 1.48 (9H, s, H^o), 1.47 (9H, s, H^o) ppm. ¹³C-NMR (CDCl₃, 101 MHz) δ = 157.0 (C^r), 156.0 (C^f), 152.3/151.0 (C^l,m), 144.9 (C^v), 139.6 (C^h), 132.9 (C^s), 132.5 (C^c), 130.0 (C^u), 129.7 (C^d), 127.9 (C^t), 112.1 (C^e), 86.8 (C^g), 83.0/81.0 (Cⁿ), 67.2 (C^k), 64.4 (Cⁱ), 61.2 (C^p), 49.1 (C^a), 33.3 (C^q), 33.2 (C^b), 29.0 (C^j), 28.3/28.2 (C^o), 21.8 (C^w) ppm. ESI-MS (m/z): 830.10 [M+H]⁺, 852.05 [M+Na]⁺.

放射化学
放射性フッ素化を、Ｋ^１８Ｆを用いて行い、前駆体１２３のトシレート基を^１８Ｆに置き換えた。６ＮＨＣｌの添加により、ｂｏｃ基及びトリアジナノン部分の切断が達成された（図６）。所望の放射性標識化合物^１８Ｆ－３７が２２％の全放射化学的収率（減衰補正した）及び９９％を超える放射化学的純度で得られた。

競合的結合／細胞取込み研究
ＮＥＴを発現するＳＫ－Ｎ－ＳＨ細胞を、供給業者（Sigma-Aldrich Chemie GmbH、ドイツ、ミュンヘン）からの指示に従って培養した。細胞を１２ウェルプレートに移し、１ｍＬのＥＭＥＭ中でインキュベートすると、試験日に２×１０^５細胞／ウェルの密度に達した。培地を除去し、細胞を１ｍＬのＥＭＥＭで洗浄した。ＥＭＥＭ（７００μＬ）中の^１８Ｆ－ＡＦ７８（３．７ｋＢｑ）の溶液を、阻害剤（各々１００ｎＭ、１μＭ、１０μＭ及び１００μＭのそれぞれの最終濃度のＮＥ、ＭＨＰＧ、コールド（cold）ＡＦ７８；デシプラミン１０μＭ）を含む又は含まない各ウェルに添加した。プレートを３７℃で６０分間インキュベートした。非結合トレーサーを除去するために細胞を氷冷ＰＢＳバッファー（１ｍＬ×２）で洗浄した。ＮａＯＨ溶液（０．１Ｎ、５００μＬ）を各ウェルに添加し、続いて細胞ペレットを回収し、^１８Ｆ及び^１３１Ｉについて差次的エネルギーウィンドウ（±２０％）を用いるγ－カウンター（ＦＨ４１２、Frieseke & Hoepfner、ドイツ、エルランゲン）において測定した。

本発明による化合物及び以下の化合物１：

のコールド、すなわち非放射性の参照化合物ＡＦ７８を合成した。化合物を、ＮＥＴを発現するＳＫ－Ｎ－ＳＨ細胞において試験し、^１３１Ｉ－ＭＩＢＧに対するそれらの競合的結合親和性を評価した。図７に、漸増濃度の以下の非放射性化合物：ＮＥ（●）、ＭＨＰＧ（黒塗り四角）、コールド参照１（＝化合物１）（◆）、コールド参照２（＝化合物ＡＦ７８）（▲）の存在下でのＳＫ－Ｎ－ＳＨ細胞における^１３１Ｉ－ＭＩＢＧ取込みの用量応答曲線を示す。結果を対照ＭＩＢＧ取込みに対するパーセントとして表す。ＮＥ、ＭＨＰＧ及びコールド参照２ＡＦ７８のＩＣ５０は、それぞれ１．３８±０．２５μＭ、６．８０±０．７３μＭ及び２．５７±１．３７μＭである（ＡＦ７８対ＭＨＰＧのＩＣ５０ｐ値＜０．０１）。

ＮＥ及びコールドＭＩＢＧを参照として使用した。結果として、コールド参照２（ＡＦ７８）は、^１３１Ｉ－ＭＩＢＧの細胞取込みを濃度依存的に阻害することができた。対照的に、コールド参照１は、試験した最高濃度であっても^１３１Ｉ－ＭＩＢＧの取込みを遮断することができなかった。阻害は１００μＭで僅か４０％であった。この結果は構造－活性関係を示唆する。ベンゼン環の３位での長いアルキル鎖の導入は、許容されないようであるが、４位での導入は十分に許容されるようである。

放射性標識が成功した後に、^１８Ｆ－ＡＦ７８もＳＫ－Ｎ－ＳＨ細胞において試験し、細胞取込みを確認した。抗鬱剤デシプラミン（ＤＭＩ）をＮＥＴの阻害剤として使用した。結果を図８に示す。ＤＭＩの添加は、ＮＥＴによって特異的に輸送されるトレーサーの細胞取込みを遮断する。結果から、参照としての^１３１Ｉ－ＭＩＢＧの８７％と比較して、^１８Ｆ－ＡＦ７８の取込みの９４％がＤＭＩの添加によって阻害されたことが示される。

トレーサーの結合親和性を更に確認するために、^１８Ｆ標識ＡＦ７８を競合的阻害アッセイにおいて使用し、これに異なる濃度のＮＥ、ＭＨＰＧ及びコールド参照２（ＡＦ７８）を添加した。図９に、漸増濃度の以下の非放射性化合物：ＮＥ（●）、ＭＨＰＧ（黒塗り四角）及びコールドＡＦ７８（▲）の存在下でのＳＫ－Ｎ－ＳＨ細胞における^１８Ｆ－ＡＦ７８取込みの用量応答曲線を示す。結果を対照ＡＦ７８の取込みに対するパーセンテージとして表す。ＮＥ、ＭＨＰＧ及びコールドＡＦ７８は、^１８Ｆ－ＡＦ７８の取込みをそれぞれ０．６０±０．２７μＭ、０．８５±０．６３μＭ及び２．６８±０．８３μＭのＩＣ５０値で阻害することができた（ＭＨＰＧ対ＡＦ７８のＩＣ５０、ｐ値＜０．０５）。これらの結果は、参照として^１３１Ｉ－ＭＩＢＧを用いて達成された結果に一致する。したがって、構造修飾が、元の参照及び臨床的に使用されるトレーサー^１３１Ｉ－ＭＩＢＧと比較して、ＮＥＴによって特異的に取り込まれる特性を保持することが更に確認された。

ｅｘｖｉｖｏオートラジオグラフィー及び組織計数研究
小動物の非侵襲的ＰＥＴ画像化のための標準的なプロトコル及びデータ分析法が、本発明者らの研究グループで確立されている（Rischpler C. et al., Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2013; 40(7): 1077-83）。各々体重２００ｇ～２５０ｇの健常な雄性Ｗｉｓｔａｒラット（日本エスエルシー株式会社、日本）を使用した。ラットを２％イソフルランで麻酔する。１０ＭＢｑ～２０ＭＢｑのトレーサーを尾静脈注射によって投与した。トレーサー投与の１０分後に、動物を即座に安楽死させた。オートラジオグラフィー（ＴｙｐｈｏｏｎＦＬＡ７０００）によるｅｘｖｉｖｏ分析及びγ－カウンター（１４８０ＷＩＺＡＲＤ（商標）３’’）による組織計数のために心臓、肝臓及び血液を得た。組織計数の体重及び減衰補正後に、心臓対血液（Ｈ／Ｂ）及び心臓対肝臓（Ｈ／Ｌ）の計数比をそれぞれ算出した。オートラジオグラフィーについては、ラットに初めに、麻酔後に５０ｍｇ／ｋｇの（対照）ＮＥＴ遮断剤フェノキシベンザミンを用いて又は用いずに尾静脈注射した。１０分後にトレーサー（１０ＭＢｑ～２０ＭＢｑ）を投与した。心臓を１０分後に摘出し、凍結し、クライオスタット（ＣｒｙｏｔｏｍｅＦＳＥ、Thermo Fisher Scientific）を用いて２０μｍの短軸切片に切断した。トレーサーの分布を得るために、オートラジオグラフィープレート（ＦｕｊｉＳＲ型イメージプレート、富士フイルム株式会社、日本、東京）を即座に短軸切片に１８時間曝露し、その後、デジタルオートラジオグラフィーシステム（ＴｙｐｈｏｏｎＦＬＡ７０００）を用いて画像化した。

ラット及びサルにおける心臓画像化研究
ラットに由来する左室短軸（ＬＶＳＡ）切片のオートラジオグラフィー研究では、^１８Ｆ－ＡＦ７８は、健常な心筋の左室壁全体にわたって均一なトレーサー取込みを示した。結果を図１０に示す。^１８Ｆ－ＡＦ７８は、心筋全体にわたって均等な分布を示し（対照）、これをトレーサー注射１０分前のフェノキシベンザミン（ＰｈＢ、５０ｍｇ／ｋｇｉ．ｖ．注射）での前処理によって阻害することができた。右室壁は、その薄さ及び切断位置のために描写されない場合がある。

ｅｘｖｉｖｏ組織計数研究から、それぞれ１２．５４及び６．１４となる心臓対血液（Ｈ／Ｂ）比及び心臓対肝臓（Ｈ／Ｌ）比で実証されるように、トレーサーが心臓において十分な取込みを有することが示された。この取込みは、ＰｈＢ（５０ｍｇ／ｋｇ）によって特異的に遮断することができ、Ｈ／Ｂ比のおよそ６倍の低下及びＨ／Ｌ比の５倍の低下をもたらし、それぞれ２．４１及び１．３０となった。組織分布研究の結果を図１１に示す。縦棒は２匹のラットの平均値である。データは注射の１０分後に決定した。ｙ軸は心臓／組織分布比を表す。心臓対血液（Ｈ／Ｂ）比及び心臓対肝臓（Ｈ／Ｌ）比の両方が、トレーサー注射の１０分前のＰｈＢ（５０ｍｇ／ｋｇ、ＮＥＴ遮断）による前処理後に顕著に減少した。比較すると、Raffel, D. et al., J. Nucl. Med. 2017, 58(Suppl 1): 96によれば、ＭＨＰＧ及びＰＨＰＧは、５０分～６０分の時間枠の画像化で以下のような組織濃度比を示す：ＭＨＰＧではＨ／Ｂ３．６及びＨ／Ｌ２．３；ＰＨＰＧではそれぞれ５．４及び１．１。したがって、^１８Ｆ－ＡＦ７８の低い肝臓取込みは、心臓の低い壁活性を評価する可能性を促進する。この高度に特異的な心臓取込みは、^１８Ｆ－ＡＦ７８が心臓のほぼ理想的なＰＥＴ画像化であることを示す。

動物における心臓ＰＥＴ画像化
ラットを、２％イソフルランにより実験全体を通して麻酔したままにした。全てのスキャンは、専用の小動物ＰＥＴシステム（ｍｉｃｒｏＰＥＴＦＯＣＵＳ１２０、SIEMENS、ドイツ）を用いて得た。ＰＥＴ画像化プロトコルは、^１８Ｆ－ＡＦ７８の全身及び心筋トレーサー分布を評定するように設計した。１０ＭＢｑ～２０ＭＢｑの^１８Ｆ－ＡＦ７８の尾静脈注射の直前に動態ＰＥＴスキャンを開始した。トレーサーの心臓取込み機構を評価するために、ラットをフェノキシベンザミン（静脈内で５０ｍｇ／ｋｇ、シグマアルドリッチジャパン合同会社、日本、東京）で前処理した。前処理の１０分後に、１０ＭＢｑ～２０ＭＢｑの^１８Ｆ－ＡＦ７８を尾静脈投与した。１０分間の動態ＰＥＴ期間をトレーサー注射の直前に開始した。ＰＥＴ像をリストモードフォーマットで取得した。データを三次元ソノグラムに分類し、その後フーリエアルゴリズムによって再結合し、二次元順序付けサブセット期待値最大化（ＯＳＥＭ）アルゴリズムを用いて動態画像を再構築した。全ての画像を^１８Ｆ減衰、ランダム及び不感時間に対して補正し、減衰補正は行わなかった（Higuchi JNM 2013）。得られるＰＥＴ像を、公開ツールであるＡＭＩＤＥ画像化ソフトウェア（ＭｅｄｉｃａｌＩｍａｇｉｎｇＤａｔａＥｘａｍｉｎｅｒ、バージョン１．０１）を用いて分析した。

トレーサー注射の１０分前のＮＥＴ遮断剤ＰｈＢ（５０ｍｇ／ｋｇｉｖ注射）による前処理を行った場合（ＮＥＴ遮断）又は行わない場合（前処理なし）のｉｎｖｉｖｏＰＥＴによる健常なラット心筋における^１８Ｆ－ＡＦ７８及び^１８Ｆ－３７の全身分布を図１２及び図１３に示す。静止ＰＥＴ像は、左室壁全体にわたって均一かつ明らかなトレーサー取込みを示す。ＮＥＴ遮断剤ＰｈＢによる前処理（尾静脈を介して静脈内に５０ｍｇ／ｋｇ）は、心筋トレーサー取込みを顕著に減少させた（図１２及び図１３、ＮＥＴ遮断）。

対照のために、カニクイザル（雄性、５．３ｋｇ）を画像化研究中に３．３％セボフルランを用いて麻酔したままにした。トレーサー（４４ＭＢｑ）の静脈注射を行う直前に、１２０分間の動態ＰＥＴ期間を開始した。加えて、心臓ニューロンｕｐｔａｋｅ－１の阻害を調査するために、ＤＭＩ（１ｍｇ／ｋｇ、ｉｖ．）を、トレーサー（１８．２ＭＢｑ）注射の１０分前にカニクイザル（雌性、５．６ｋｇ）に注射し、ＰＥＴ評定を開始した。ＰＥＴは、ＰＣＡ－２０００Ａポジトロンスキャナー（東芝メディカルシステムズ株式会社、日本、大田原市）を用いて行った。サイノグラムを以下のパターン：１０秒×１２、３０秒×６、３００秒×２３で収集した。組織取込みを任意単位（Ａ．Ｕ．）として決定し、それにより異なる器官の時間－活性曲線を作成した。

ラットにおいて観察されたものと一致する組織生体内分布を、合計１２０分間のスキャンにおいて明らかな長時間の安定した心臓取込みで観察することができ、隣接した肝臓及び肺における取込みは低かった。対照及び交感神経ブロックサルにおいて^１８Ｆ－ＡＦ７８動態画像から得られる代表的な時間活性曲線をスキャンデータから作成した。分単位の時間に対する任意単位Ａ．Ｕ．で表された時間活性曲線を図１４に示す。^１８Ｆ－ＡＦ７８の心臓取込みは、最初のウォッシュアウト後に高いトレーサー活性を示し、１２０分間のスキャン時間全体を通して活性を維持した。トレーサー注射の１０分前のｕｐｔａｋｅ－１阻害剤ＤＭＩ（１ｍｇ／ｋｇ、ｉｖ）による前処理は、心臓取込みレベルを著しく低下させ、このレベルは殆ど間を置かずに血液中と同じレベルまで低下した。対照では、肝臓における活性は、トレーサー注射後しばらくしてからピークに達した、その後６０分でゆっくりと血中レベルまで減少した。結果は、好ましい心臓／血液比及び心臓／肝臓比で安定した長時間の心臓特異的取込みを示す。肝臓におけるトレーサー取込みは、ＤＭＩによる前処理の影響を受けなかった。

更なる生体内分布研究をトレーサー^１８Ｆ－３７の注射の１０分後にラット（ｎ＝４）において行い、好ましい心臓対血液（Ｈ／Ｂ、およそ６：１）比及び心臓対肝臓（Ｈ／Ｌ、およそ２：１）比が示された（図１５、右パネル）。心臓対筋肉（Ｈ／Ｍ）比は非常に高く、およそ１２：１の値であった。時間活性曲線は、安定した長時間の心臓取込み（任意単位Ａ．Ｕ．で表される）を示した。これを図１５（左パネル）に示す。１６ＭＢｑのトレーサー活性を注射した。

健常なラット、ウサギ、ブタ及びサルにおける^１８Ｆ－ＡＦ７８の心臓取込みの静止ＰＥＴ像（図１６）から、^１８Ｆ－ＡＦ７８がこれらの種の全てにおいて奏功することが示され、これがヒトを含む全ての哺乳動物において奏功すると推定することができる。

サルにおける^１８Ｆ－ＡＦ７８を用いた更なる生体内分布研究を行った。ＳＵＶ（標準化取込み値）として算出した結果を図１７に示す。結果は、急速な血液プールウォッシュアウト及び比較的急速な肝臓取込みウォッシュアウトと同時に安定した心臓取込みを示す。肝臓取込みは減少し、トレーサー投与の３５分後には心臓取込みよりも低くなる。

動態研究をサルの心臓において^１８Ｆ－ＡＦ７８を用いて行った。結果から、交感神経末端におけるＮＥＴ及び安定した小胞貯蔵機構による^１８Ｆ－ＡＦ７８の特異的取込みが確認された。トレーサー投与の１０分前に注射した場合に、ＮＥＴ遮断剤デシプラミン（ＤＭＩ）はトレーサー取込みを特異的に遮断し、対照と比較して有意差（ｐ＜０．０００１）が見られた（図１８、上パネル）。対照的に、ＤＭＩ追跡（トレーサー投与の１０分後に注射した）を行った場合、対照群と比較して差は見られなかった（図１８、中央パネル）。さらに、連続チラミン（ＴＹＲ）追跡をトレーサー投与後に適用した。チラミンは、カテコールアミン放出を引き起こすことでトレーサーのウォッシュアウトを増強する作用物質として知られている。^１８Ｆ－ＡＦ７８の心臓取込みは、大幅に減少した。減少は、対照群と比較して統計的に有意であった（ｐ＜０．００５）（図１８、下パネル）。

統計分析
全ての結果を平均±ＳＤとして示す。対応のある両側スチューデントｔ検定を用いて、２つの関連群間の差を比較し、独立群間の差については対応のない両側スチューデントｔ検定を用いた。複数群比較は、分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用いて行った。０．０５未満のｐ値を統計的に有意とみなした。統計分析は、ＳｔａｔＭａｔｅＩＩＩ（株式会社アトムス）を用いて行った。

本明細書で使用される略語の意味は、以下の通りである：
ＤＩＡＤ、ジイソプロピルアゾジカルボキシレート；ＤＩＰＥＡ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン；ＤＭＦ、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド；ＤＭＩ、デシプラミン；^１１Ｃ－ＨＥＤ、^１１Ｃ－（－）－ｍ－ヒドロキシエフェドリン；ｉｖ、静脈内；^１８Ｆ－ＭＨＰＧ、^１８Ｆ－４－フルオロ－３－ヒドロキシフェネチルグアニジン；^{１２３／１３１}Ｉ－ＭＩＢＧ、^{１２３／１３１}Ｉ－メタ－ヨードベンジルグアニジン；ＮＥ、ノルエピネフリン；ＮＥＴ、ノルエピネフリン輸送体；ＰＥＴ、陽電子放射断層撮影；ＰｈＢ、フェノキシベンザミン；^１８Ｆ－ＰＨＰＧ、^１８Ｆ－３－フルオロ－４－ヒドロキシフェネチルグアニジン；ＳＰＥＣＴ、単光子放射型コンピュータ断層撮影法；ＴＨＦ、テトラヒドロフラン

Claims

以下の式：

（式中、Ｒ_１はＦ又はＩ残基である）による化合物。
生きているヒト又は動物の身体に対して行われる診断法に使用される、請求項１に記載の化合物。
ヒト又は動物の身体におけるノルエピネフリン輸送体（ＮＥＴ）の生成、分解、分布又は機能の障害を診断するための生きているヒト又は動物の身体に対して行われる診断法に使用される、請求項１に記載の化合物。
前記診断法が前記ヒト又は動物の身体の陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）を含み、該ＰＥＴを行う前に該身体に前記化合物を投与する、請求項３に記載の使用のための請求項３に記載の化合物。
前記ＮＥＴの生成、分解、分布又は機能の障害が心血管疾患、血圧調節異常、腎障害、神経内分泌腫瘍性疾患又はパーキンソン病と関連する、請求項３に記載の使用のための請求項３又は４に記載の化合物。
請求項１に記載の化合物を合成する方法であって、
ａ）以下の化合物１４：

のメチル基を該化合物から除去し、以下の化合物１５：

を得る工程（式中、Ｒ１はハロゲン残基である）と、
ｂ）１－クロロ－３－ヨードプロパンを用いて化合物１５のクロロアルキル化を行い、以下の化合物２５：

を得る工程と、
ｃ）（メトキシメチル）トリフェニルホスホニウムハロゲン化物及びカリウムｔｅｒｔ－ブトキシド又は水素化ナトリウムを用いて化合物２５とのウィッティヒ反応を行い、以下の化合物２６：

（ただし、上記式において、工程ｆ）が本工程の前に行われている場合は、Ｃｌ基はトシル化されている）を得る工程と、
ｄ）酢酸水銀の添加により化合物２６を２工程のワンポット反応において還元し、中間体を形成させ、続いてアルカリ金属水素化ホウ素を添加して、以下の化合物２８：

（ただし、上記式において、工程ｆ）が本工程の前に行われている場合は、Ｃｌ基はトシル化されている）を得る工程と、
ｅ）トリフェニルホスフィン、アゾジカルボキシレート及び以下の化合物２４：

の存在下で化合物２８との光延反応を行い、以下の化合物２９：

（ただし、上記式において、工程ｆ）が本工程の前に行われている場合は、Ｃｌ基はトシル化されている）を得る工程と、
ｆ）工程ｂ）～ｅ）のいずれかによって得られる化合物のアルキル鎖の末端の塩素原子を、フィンケルシュタイン反応でヨウ素に置き換え、続いてｐ－トルエンスルホン酸銀を用いて暗所でトシル化を行い、本工程までに工程ａ）～ｅ）のいずれかを行っていない場合に、本工程までに行わなかった工程ａ）～ｅ）の全てを行い、以下の化合物３０：

を得る工程と、
ｇ）^１８Ｆのアルカリ金属塩を用いる求核置換によって化合物３０を放射性標識し、続いて酸性条件下にて少なくとも７０℃の温度で脱保護を行い、以下の化合物：

を得る工程と、
を含み、前記ハロゲン残基がＦ又はＩ残基である、方法。
工程ｃ）の前記（メトキシメチル）トリフェニルホスホニウムハロゲン化物が（メトキシメチル）トリフェニルホスホニウムクロリドである、請求項６に記載の方法。
工程ｅ）の前記アゾジカルボキシレートが、ジエチルアゾジカルボキシレート（ＤＥＡＤ）又はジイソプロピルアゾジカルボキシレート（ＤＩＡＤ）である、請求項６又は７に記載の方法。
工程ｄ）の前記アルカリ金属水素化ホウ素が、水素化ホウ素ナトリウム又は水素化ホウ素カリウムである、請求項６～８のいずれか一項に記載の方法。
工程ｇ）に使用される前記^１８Ｆのアルカリ金属塩がＫ^１８Ｆである、請求項６～９のいずれか一項に記載の方法。
工程ｇ）の酸性条件下での脱保護を最高でも１００℃の温度で行う、請求項６～１０のいずれか一項に記載の方法。
化合物２４の合成が、
ｈ）カルバミン酸ベンジル、Ｎ，Ｎ’－ジメチル尿素及び水を少なくとも８０℃の温度で反応させ、以下の化合物２３：

を得る工程と、
ｉ）パラジウム活性炭によって触媒される化合物２３と水素との反応により、化合物２２：

を得る工程と、
ｊ）化合物２２と以下の化合物１３：

とをＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）の存在下で反応させ、化合物２４を得る工程（式中、Ｂｏｃはｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル保護基である）と、
を含む、請求項６～１１のいずれか一項に記載の方法。
工程ｊ）の化合物１３を、１，３－ビス（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－２－メチル－２－チオプソイド尿素と５－クロロベンゾトリアゾールとを塩化水銀（ＩＩ）（ＨｇＣｌ_２）の存在下で反応させることによって合成する、請求項１２に記載の方法。