JP7378085B2

JP7378085B2 - 体力向上作用及び抗疲労作用のうちの一以上の作用を有する組成物

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Publication number: JP7378085B2
Application number: JP2019546635A
Authority: JP
Inventors: 真嗣福田; 智恵狩野; 寛人森田
Original assignee: Keio University; Asahi Group Holdings Ltd
Current assignee: Keio University; Asahi Group Holdings Ltd
Priority date: 2017-10-03
Filing date: 2018-09-25
Publication date: 2023-11-13
Anticipated expiration: 2038-09-25
Also published as: CN111263590A; EP3692813B1; TW201927316A; EP3692813A1; EP3692813A4; WO2019069735A1; EP3692813C0; JPWO2019069735A1; US20200297020A1

Description

NPMD

NITE BP-02536

NPMD

NITE BP-02537

本発明は、体力及び疲労耐性のうちの一以上を向上するためのバクテロイデス・ユニフォルミスの使用に関する。

通常、労働や運動等の活動を行う場合には、少なくともこれらの活動に耐え得るだけの体力を要する。一方、これらの活動により身体には疲労が蓄積し、身体の機能は低下する。労働や運動等の活動を日常的に行うためには、体力の維持／向上や、疲労の予防／回復が不可欠であるといえる。

労働や運動等の活動を行うための体力には、筋力、持久力、柔軟性等の行動の基礎となる身体的能力が含まれる。

これまでに持久力を向上させ、かつ疲労の予防、軽減、回復に効果を有するとされるアミノ酸組成物が開発・報告されている（特許文献１）。

しかしながら、このようなアミノ酸組成物は、運動前や運動中に摂取され、その効果は一時的であり、摂取するタイミングによっては効果が期待できない場合もあった。摂取するタイミングに縛られることなく、持続的に効果を得ることが可能な手段が望まれている。

また、これまでに特定の微生物や、発酵組成物を摂取することにより、持久力の向上や抗疲労効果が得られることが報告されている。

特許文献２には、納豆菌を米糠類及び大豆類を含む培地に接種して得られた発酵組成物（発酵液）を摂取することにより、乳酸産生抑制効果、血中乳酸蓄積抑制効果、持久力の向上及び抗疲労効果が得られることが示されている。特許文献３には、乳酸菌（ロイコノストック・シュードメセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃｐｓｅｕｄｏｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）ＡＴＣＣ１２２９１株）による豆乳発酵物を摂取することにより、疲労蓄積予防活性を通じて自発運動量を増加させる効果が得られることが示されている。これらはいずれも発酵組成物全体に由来する効果を示すものであり、当該菌体自体が上記の効果を奏することを示すものではない。

特許文献４には、紅色非硫黄細菌（ロドバクター・アゾトフォルマンス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）ＢＰ０８９９株）の菌体粉末を摂取することにより、持久力向上や抗疲労効果が得られることが示されている。

非特許文献１には、バクテロイデス・フラジリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓｆｒａｇｉｌｉｓ）の単独定着マウスにおいて、無菌マウスと比較して持久力の向上が認められたことが記載されている。

バクテロイデス・ユニフォルミス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓｕｎｉｆｏｒｍｉｓ）は、０．８×１．５μｍ程度の大きさを有し、芽胞を作らず、運動性を有さない嫌気性グラム陰性桿菌である。バクテロイデス・ユニフォルミスは、ヒトをはじめとする多くの哺乳動物の腸内に通常存在する真性細菌である。

特開２００８－２５５０３３号公報特開２０１３－１７４４５号公報特開２００８－１７９５５９号公報ＷＯ２０１１／１０２０３５公報

ＪＳｔｒｅｎｇｔｈＣｏｎｄＲｅｓ．２０１５Ｆｅｂ；２９（２）：５５２－８

しかし、バクテロイデス・ユニフォルミスを摂取することにより、どのような効果が得られるか否か、これまで明らかにされてはいなかった。

本発明は、任意のタイミングで摂取でき、持続的に体力向上作用及び抗疲労作用のうちの一以上の作用を奏することが可能な手段を提供することを目的とする。

本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、意外にも、バクテロイデス・ユニフォルミスを摂取することにより、上記課題を解決できることを見出し、本発明を完成させるに至った。

すなわち、本発明は、以下の発明を包含する。
［１］バクテロイデス・ユニフォルミス又はその処理物を含む、体力及び疲労耐性のうち一以上を向上するために使用される組成物。
［２］全身持久力、及び有酸素運動時の持久力のうち一以上を向上するために使用される、［１］の組成物。
［３］バクテロイデス・ユニフォルミスが、ＪＣＭ５８２８株、ＣＰ３５８５株又はＣＰ３５８６株である、［１］又は［２］の組成物。
［４］飲食品、医薬又は飼料もしくは飼料添加物である、［１］～［３］のいずれかの組成物。
［５］非ヒト動物に、バクテロイデス・ユニフォルミス又はその処理物を投与すること又は摂取させることを含む、非ヒト動物における体力及び疲労耐性のうち一以上を向上するための方法。
［６］全身持久力、及び有酸素運動時の持久力のうち一以上を向上するための、［５］の方法。
［７］バクテロイデス・ユニフォルミスＣＰ３５８５株。
［８］バクテロイデス・ユニフォルミスＣＰ３５８６株。
本明細書は本願の優先権の基礎である日本国特許出願２０１７－１９３１３２号の明細書および／または図面に記載される内容を包含する。
本明細書で引用した全ての刊行物、特許および特許出願をそのまま参考として本明細書にとり入れるものとする。

本発明によれば、任意のタイミングで摂取でき、持続的に体力向上作用及び抗疲労作用のうちの一以上の作用を奏することが可能な手段を提供することができる。

図１は、バクテロイデス・ユニフォルミスの投与開始前（Ａ）と投与開始から３週間後（Ｂ）の限界遊泳試験の結果を示すグラフ図である。

本発明は、バクテロイデス・ユニフォルミス又はその処理物を含む、体力向上作用及び抗疲労作用のうち一以上を有する組成物に関する。

本発明において「体力」とは、労働や運動等の活動を行うことを可能とする行動の基礎となる身体的能力に関し、特に、労働や運動等の活動に耐えることを可能とし、継続してそれらを行うことを可能とする身体の力を意味する。より好ましくは、「体力」とは、全身持久力、及び有酸素運動を継続して行うことを可能とする有酸素運動時の持久力のうちの一以上を意味する。「全身持久力」とは、一般的にスタミナとも呼ばれる、長時間身体を動かすことを可能とする能力をいう。

本発明において「体力向上」とは、体力の向上及び回復を促進することのうちの一以上を意味し、特に、労働や運動等の活動に耐え、継続してそれらを行うことを可能とする身体の力を向上すること、及び当該身体の力の回復を促進することのうちの一以上を意味し、より好ましくは、全身持久力及び有酸素運動時の持久力のうちの一以上を向上すること、ならびに全身持久力及び有酸素運動時の持久力のうちの一以上の回復を促進することからなる群から選択される一以上を意味する。

本発明において「疲労」とは、労働や運動等の活動が継続して行われた結果として、身体の機能が低下することを意味する。

本発明において「抗疲労」及び「疲労耐性を向上する」とは、疲労を軽減すること、疲労の回復を促進すること、及び疲労を予防することのうちの一以上を意味し、好ましくは、労働や運動等の活動が継続して行われた結果として生じる身体機能の低下を軽減すること、当該身体機能の低下の回復を促進すること、又は当該身体機能の低下を予防して当該身体機能の低下が生じにくい状態とすることを意味する。

「バクテロイデス・ユニフォルミス」は公知であり、バージーズ・マニュアル・オブ・バクテリオロジーＶｏｌ．４（１９８９）等に記載される公知の菌学的性質に基づいて特徴付けることができる。

本発明において「バクテロイデス・ユニフォルミス」は、哺乳動物（例えばヒト、サル、チンパンジー、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、イヌ、ネコ、マウス、ラット等）、好ましくはヒトの腸内より単離されたものを用いることができる。

バクテロイデス・ユニフォルミスは公知の手法に準じて単離することができる（ＰａｏｌａＧａｕｆｆｉｎＣａｎｏｅｔａｌ，ＰＬｏＳＯｎｅ．Ｊｕｌｙ２０１２，Ｖｏｌｕｍｅ７，Ｉｓｓｕｅ７，ｅ４１０７９）。すなわち、哺乳動物の糞便、糞便物、便を適当な溶媒中に希釈して、プレート培地に播種し、嫌気条件下にて培養を行い、培地に出現したコロニーより釣菌する。培地は下記に詳述するものを利用することができるが、単離の効率性からバクテロイデスを鑑別・選別することが可能な選択分離培地を用いることが好ましい（Ｊａｐ．Ｊ．ｖｅｔ．Ｓｃｉ．，３６，９３－９８（１９７４））。得られた菌について、グラム染色と検鏡によりグラム陰性桿菌であることを確認した後、選択された菌について、１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列に基づく分析を行うことにより、バクテロイデス・ユニフォルミスを同定・クローニングすることができる。バクテロイデス・ユニフォルミスの１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列は公知であり、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ等の公知のデータベースに開示されており、ＮＲ＿０４０８６６、ＡＢ０５０１１０、ＡＢ５１０７１１、Ｌ１６４８６として登録されている。１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の分析に際しては、これらの配列情報を利用することができる。１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の分析・同定は、定量的ＰＣＲ法、ＤＧＧＥ／ＴＧＧＥ法、ＦＩＳＨ法、１６ＳｒＤＮＡクローニングライブラリー法、Ｔ－ＲＦＬＰ法、ＦＩＳＨ－ＦＣＭ法、塩基配列決定法等の公知の手法に基づいて行うことができる（生化学．第８０巻．第５号．４２１－４２５．２００８年；ＪＮｕｔｒ．２００４Ｆｅｂ；１３４（２）：４６５－７２．；Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６４．３３３６－３３４５．１９９８；Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，６５，４７９９－４８０７，１９９９；Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，６２，２２７３－２２７８，１９９６；Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，６４，３８５４－３８５９，１９９８）。例えば、定量的ＰＣＲ法によれば、バクテロイデス・ユニフォルミスの１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の公知の塩基配列情報に基づいて、当該菌に特異的なプライマーを作製する。選択された菌より抽出されたＤＮＡを鋳型として、当該プライマーを用いてＰＣＲ反応を行い、意図されたサイズのＰＣＲ増幅産物の有無に基づいて当該菌がバクテロイデス・ユニフォルミスであるか否かを判断することができる。特異的なプライマーの設計やＰＣＲ条件の決定は、定法に従って行うことができる（バイオ実験イラストレイテッド３本当にふえるＰＣＲ：細胞工学別紙目で見る実験ノートシリーズ；中山広樹著株式会社秀潤社）。

本発明においては、バクテロイデス・ユニフォルミスに分類される任意の菌株、又は体力向上作用及び抗疲労作用のうち一以上を有する限りその変異株もしくは育種株を利用することができる。本発明において利用可能なバクテロイデス・ユニフォルミス株としては、ＡＴＣＣ８４９２株、ＣＣＵＧ４９４２株、ＣＩＰ１０３６９５株、ＤＳＭ６５９７株、ＮＣＴＣ１３０５４株、ＪＣＭ５８２８株、ＣＰ３５８５株及びＣＰ３５８６株等が挙げられる。好ましくは、ＪＣＭ５８２８株、ＣＰ３５８５株及びＣＰ３５８６株である。ＪＣＭ５８２８株は、理化学研究所バイオリソースセンター微生物材料開発室（〒３０５－００７４茨城県つくば市高野台３－１－１）に登録・保存されている基準株である。ＣＰ３５８５株及びＣＰ３５８６株は、２０１７年８月２５日に独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター（〒２９２－０８１８千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８１２２号室）に受託番号ＮＩＴＥＢＰ－０２５３６及びＮＩＴＥＢＰ－０２５３７として国際寄託されている。

本発明で利用可能なバクテロイデス・ユニフォルミスは、当該菌を培養することができる通常の培養培地及び培養条件を用いて培養し、回収することができる。

培養培地はバクテロイデス・ユニフォルミスを培養可能であればよく、特に限定されるものではないが、例えば、炭素源として、グルコース、フルクトース、ガラクトース、マルトース、ラクトース、セロビオース、スクロース、ラムノース、アミグダリン、エスクリン、サリシン、メリビオース、トレハロース、Ｌ－アラビノース、リボース、Ｄ－キシロース、イヌリン、ラフィノース、スターチ、糖蜜等、窒素源として、硫安、硝安等の無機アンモニウム塩、尿素、アミノ酸、肉エキス、酵母エキス、ポリペプトン、タンパク質分解物等の有機窒素含有物等、ならびに無機塩類として、硫酸マグネシウム、リン酸２水素カリウム、酒石酸カリウム、硫酸亜鉛、硫酸マグネシウム、硫酸銅、塩化カルシウム、塩化鉄、塩化マンガン等を含めることができる。バクテロイデス・ユニフォルミスの培養に好適な公知の培養培地（例えば、ＮＢＧＴ培地、ＢＬ培地、ＧＡＭ培地等）を利用することができる。培養培地は液体培地が好ましいが、必要に応じて、寒天やゼラチンを加えて、固体培地又は半流動培地として用いてもよい。

培養は、２０℃～５０℃、好ましくは２５℃～４５℃、より好ましくは３５℃～３７℃の温度にて、嫌気条件下で行うことができる。「嫌気条件」とは、バクテロイデス・ユニフォルミスが増殖可能な程度に低酸素環境であればよく、例えば、嫌気チャンバー、嫌気ボックス、脱酸素剤を入れた密閉容器もしくは培養容器等を用いて、嫌気条件とすることができる。

培養は、静置培養、振とう培養、タンク培養等の任意の形式で行うことが可能であり、また、培養時間は、特に制限されないが、例えば３時間～７日間とすることができる。

培養後、得られた培養物をそのまま使用してもよいし、あるいは培養物よりバクテロイデス・ユニフォルミスを精製又は粗精製して使用してもよい。培養物からの菌体の精製又は粗精製は任意の手段を用いて行うことができ、例えば、遠心分離や濾過等を用いて行うことができる。

本発明において使用するバクテロイデス・ユニフォルミスは、生菌体であっても又は死菌体であってもよいし、湿潤菌体であっても又は乾燥菌体であってもよい。

本発明においては、バクテロイデス・ユニフォルミスの処理物も利用することができる。本発明において「処理物」としては、バクテロイデス・ユニフォルミスの菌体破砕物や菌体抽出物が挙げられる。

菌体破砕物は、菌体を物理的処理、化学的処理、酵素処理、自己融解等の公知の処理により得ることができ、体力向上作用及び抗疲労作用のうち一以上を有する限りその形態は限定されない。例えば、菌体破砕物は、菌体をホモジナイザー、ボールミル、ビーズミル、ダイノミル、遊星ミル、ジェットミル、フレンチプレス、細胞破砕機、フィルター濾過等の手段に付すことにより得ることができる。物理的破砕処理は、湿式（菌体懸濁液の状態で処理）で行ってもよいし、又は乾式（菌体粉末の状態で処理）で行ってもよい。

菌体抽出物は、菌体又は菌体の破砕物から抽出溶媒を用いて抽出操作を行い、体力向上作用及び抗疲労作用のうち一以上を有する画分を回収することによって得ることができる。抽出溶媒としては、例えば、水、アルコール（エタノール、メタノール等）、アセトン、アセトニトリル、ジオキサン、ＤＭＳＯ、ＤＭＦ、ジエチルエーテル、ヘキサン、ヘプタン、ジクロロメタン、クロロホルム等、又はそれらの混合溶媒を利用することができる。得られた菌体抽出物は、必要に応じてさらに、エバポレーター等の蒸発器に供され濃縮されてもよいし、あるいは、菌体抽出物より、体力向上作用及び抗疲労作用のうち一以上を有する画分をさらに精製又は粗精製してもよい。当該さらなる精製又は粗精製には、クロマトグラフィーカラム、フィルター、限外濾過、塩析、溶媒沈殿、溶媒抽出、蒸留、免疫沈降、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、等電点電気泳動法、透析、再結晶等を適宜選択、組み合わせて用いることができる。

本発明において使用するバクテロイデス・ユニフォルミス又はその処理物は、乾燥物、凍結物、水分散物、乳化物等の任意の形態で用いることができる。乾燥物は、例えば、噴霧乾燥、ドラム乾燥、真空乾燥、凍結乾燥等の任意の乾燥手段を用いて得ることができ、粉状、粒状等の形態とすることができる。

本発明の組成物には、バクテロイデス・ユニフォルミス又はその処理物と共に、医薬や飲食品の製造において通常用いられている、賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤等の添加剤を含めることができ、企図される投与経路や摂取方法に適した剤型又は形態として製造することができる。

賦形剤としては、乳糖、白糖、Ｄ－マンニトール、Ｄ－ソルビトール、デンプン、α化デンプン、デキストリン、ブドウ糖、コーンスターチ、結晶セルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、アラビアゴム、プルラン、軽質無水ケイ酸、合成ケイ酸アルミニウム、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム等が挙げられる。

滑沢剤としては、例えば、ショ糖脂肪酸エステルやグリセリン脂肪酸エステルなどのシュガーエステル類、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ステアリルアルコール、粉末植物油脂などの硬化油、サラシミツロウなどのロウ類、タルク、ケイ酸、ケイ素等が挙げられる。

結合剤としては、α化デンプン、ショ糖、ゼラチン、アラビアゴム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、結晶セルロース、白糖、Ｄ－マンニトール、トレハロース、デキストリン、プルラン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン等が挙げられる。

崩壊剤としては、乳糖、白糖、デンプン、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、軽質無水ケイ酸、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース等が挙げられる。

また、本発明の組成物に利用可能な、医薬や飲食品の製造において通常用いられている添加剤の例としては、各種油脂（例えば、大豆油、コーン油、サフラワー油、オリーブ油などの植物油、牛脂、イワシ油などの動物油脂）、生薬（例えばロイヤルゼリー、人参など）、アミノ酸（例えばグルタミン、システイン、ロイシン、アルギニンなど）、多価アルコール（例えばエチレングリコール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン、糖アルコール、例としてソルビトール、エリスリトール、キシリトール、マルチトール、マンニトールなど）、天然高分子（例えばアラビアガム、寒天、水溶性コーンファイバー、ゼラチン、キサンタンガム、カゼイン、グルテン又はグルテン加水分解物、レシチン、澱粉、デキストリンなど）、ビタミン（例えばビタミンＣ、ビタミンＢ群など）、ミネラル（例えばカルシウム、マグネシウム、亜鉛、鉄など）、食物繊維（例えばマンナン、ペクチン、ヘミセルロースなど）、界面活性剤（例えばグリセリン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステルなど）、精製水、希釈剤、安定化剤、等張化剤、ｐＨ調製剤、緩衝剤、湿潤剤、溶解補助剤、懸濁化剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤、香料、酸化防止剤、甘味料、呈味成分、酸味料等が挙げられる。

また、本発明の組成物には、体力向上作用及び抗疲労作用のうち一以上を有することが公知である他の成分を含めることができる。このような他の成分としては、タウリン、グルタチオン、カルニチン、クレアチン、コエンザイムＱ１０、グルクロン酸、グルクロノラクトン、ガラナエキス、テアニン、γ－アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）、カプサイシン、カプシエイト、アリシン、ビタミン類（ビタミンＢ₁、Ｂ₂、Ｂ₆、Ｂ₁₂、Ｃ、Ｅ等）、各種有機酸（クエン酸等）、フラボノイド類、ポリフェノール類、カテキン類、カフェイン等が挙げられるが、これらに限定はされない。

本発明の組成物の剤型又は形態は、特に制限されない。医薬としては例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、粉剤、シロップ剤、ドライシロップ剤、液剤、懸濁剤、吸入剤、坐剤等の剤型とすることができるが、好ましくは、経口剤である。液剤、懸濁剤などの液体製剤は、凍結乾燥化し保存し得る状態で提供され、用時、水や生埋的食塩水等を含む緩衝液等で溶解して適当な濃度に調製した後に使用されるものであってもよい。また錠剤等の固形の剤形を有するものは、必要に応じてコーティングを施されていてもよいし（例えば、糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶錠等）、公知の技術を使用して、徐放性製剤、遅延放出製剤又は即時放出製剤などの放出が制御された製剤としてもよい。

飲食品としては例えば、錠菓、錠剤、チュアブル錠、粉剤、散剤、カプセル剤、顆粒剤、ドリンク剤等の形態を有する健康飲食品（サプリメント、栄養補助食品、健康補助食品、栄養調整食品等）、清涼飲料、茶飲料、ゼリー飲料、スポーツ飲料、コーヒー飲料、炭酸飲料、野菜飲料、果汁飲料、醗酵野菜飲料、醗酵果汁飲料、発酵乳飲料（ヨーグルトなど）、乳酸菌飲料、乳飲料、粉末飲料、ココア飲料、菓子（例えば、ビスケットやクッキー類、チョコレート、キャンディ、チューインガム、タブレット）、ゼリー等の形態とすることができる（これらに限定はされない）。

飲食品は、体力向上作用及び抗疲労作用のうち一以上を有する成分を含有する、保健機能食品（特定保健用食品（条件付き特定保健用食品を含む）、栄養機能食品、機能性表示食品や、健康食品、美容食品等とすることができる。

また、本発明の組成物は、ヒト用の飲食品だけでなく、家畜、競走馬、ペット等の飼料又は飼料添加物の形態とすることもできる。

本発明の組成物に含まれるバクテロイデス・ユニフォルミス又はその処理物の量は、当該組成物の剤型や形態に応じて変化し得るが、通常、組成物に対して０．０００１～９９質量％、好ましくは０．００１～８０質量％、より好ましくは０．００１～７５質量％の範囲より選択される量とすることができる。例えば、本発明の組成物に含まれるバクテロイデス・ユニフォルミス又はその処理物の量は、菌体の数にして、組成物１ｋｇあたり、１×１０⁵個～１×１０¹⁷個、好ましくは１×１０⁶個～１×１０¹⁶個、より好ましくは１×１０⁷個～１×１０¹⁵個から選択される量とすることができる。

本発明の組成物を投与又は摂取する対象（被験体）は、体力向上及び抗疲労の効果のうち一以上を必要とする哺乳動物（例えばヒト、霊長類（サル、チンパンジー等）、家畜（ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ等）、ペット（イヌ、ネコ等）、実験動物（マウス、ラット等））、鳥類、爬虫類等が挙げられるが、好ましくは哺乳動物であり、特に好ましくはヒトである。

本発明の組成物の投与量又は摂取量は、対象の年齢及び体重、投与経路、投与・摂取回数、体力や疲労のうち一以上の程度等の要因に応じて変化し得、任意の投与量又は摂取量を採用し得る。例えば、経口的に投与又は摂取する場合には、バクテロイデス・ユニフォルミス又はその処理物を菌体の数にして、１日当たり１×１０⁵個／ｋｇ～１×１０¹⁵個／ｋｇ、好ましくは１日当たり１×１０⁶個／ｋｇ～１×１０¹⁴個／ｋｇ、より好ましくは１日当たり１×１０⁸個／ｋｇ～１×１０¹³個／ｋｇから選択される量を１回又は複数回（例えば、２～５回、好ましくは２～３回）に分けて投与又は摂取することができる。

本発明の組成物は、微量かつ短期間で効果を奏することができるが、長期間にわたって投与又は摂取することができる。例えば、本発明の組成物を、上記用法用量にしたがい、１か月以上、２か月以上、６ヶ月以上、１年以上、又はそれ以上の期間にわたって継続して投与又は摂取することができる。

本発明の組成物は、体力向上作用及び抗疲労作用のうち一以上を有する。具体的には、本発明の組成物は、投与又は摂取された対象において、投与又は摂取されない場合と比べて、体力を向上及び回復することのうちの一以上、特に労働や運動に耐え、継続してそれらを行うことを可能とする身体の力を向上すること、及び当該身体の力の回復を促進することのうちの一以上、より好ましくは、全身持久力や有酸素運動時の持久力のうちの一以上を向上すること、全身持久力及び有酸素運動時の持久力のうちの一以上の回復を促進すること、ならびに、疲労を軽減すること、疲労の回復を促進すること、及び疲労を予防することのうちの一以上、好ましくは労働や運動等の活動が継続して行われた結果として生じる身体機能の低下を軽減すること、当該身体機能の低下の回復を促進すること、及び当該身体機能の低下を予防して当該身体機能の低下が生じにくい状態とすることのうちの一以上の作用をもたらすことができる。これらの作用に基づいて、本発明の組成物は、滋養強壮、虚弱体質、肉体疲労等の場合における栄養補給等に効能・効果を有する。

本発明の組成物を、上記対象に投与又は摂取させることにより、投与又は摂取されない場合と比べて、当該対象における体力及び疲労耐性のうち一以上を向上することができる。

以下、本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。

実施例１．バクテロイデス・ユニフォルミスの釣菌
ヒト由来の糞便を希釈して、選択培地（ＮＢＧＴ寒天培地）に播種し、４８時間嫌気状態で培養した。

次いで、得られたコロニーを１つずつ拾ってＰＢＳに懸濁し、懸濁液の一部をＢＬ寒天培地に播種して４８時間嫌気状態で培養した。また、残りの懸濁液を使ってＤＮＡを抽出し、このＤＮＡを鋳型として用いて定量ＰＣＲ法ならびに１６ＳｒＲＮＡ遺伝子配列の決定を行い、バクテロイデス・ユニフォルミスである菌株を同定した。

同定された菌株をそれぞれ、ＢＬ寒天培地より回収し、ＧＡＭ軟寒天培地に植菌・培養した。

実施例２．バクテロイデス・ユニフォルミス懸濁液の調製
実施例１で得られたバクテロイデス・ユニフォルミスのうち２株をＢＬ寒天培地に塗布し、４８時間培養を行った。次いで、各株について得られたコロニーを１つずつＧＡＭ液体培地に拾って、さらに１６時間培養を行った。培養はすべて嫌気条件下にて行った。得られた菌株をそれぞれ、「ＣＰ３５８５株」及び「ＣＰ３５８６株」とした。

培養終了後、遠心分離して上清を除去し、回収された菌体を－８０℃にて凍結して、投与まで保存した。

投与に際しては、菌体を１×１０⁹ＣＦＵ／ｍｌになるようＰＢＳにて希釈して、各菌体の懸濁液を調製した。

さらに、バクテロイデス・ユニフォルミスの基準株であるＪＣＭ５８２８株を用いて同様に、懸濁液を調製した。

実施例３．体力及び疲労のうち一以上に対する効果
（１）動物
雄のＣ５７ＢＬ／６マウス（５週齢）を用いた。
各個体の運動能力に差があるため、投与前に限界遊泳試験を１回実施し、各群の限界遊泳時間の平均値が、おおよそ同じになるように、マウスを対照群、ＪＣＭ５８２８株投与群、ＣＰ３５８５株投与群、及びＣＰ３５８６株投与群に振り分けた（各ｎ＝８）。
各マウスは、Ｓｐｅｃｉｆｉｃ－ｐａｔｈｏｇｅｎｆｒｅｅ（ＳＰＦ）環境下で飼育した。

（２）菌体の投与
ＪＣＭ５８２８株、ＣＰ３５８５株及びＣＰ３５８６株のいずれかの懸濁液を２×１０⁸ＣＦＵ／日の量で毎日、実験期間（４週間）にわたって強制経口投与した。
対照群には、同量のＰＢＳを投与した。

（３）評価方法
菌体の投与による、体力及び疲労のうち一以上に対する効果は、限界遊泳試験により評価した（日本栄養・食糧学会誌第６２巻第４号１６５－１７０（２００９））。すなわち、長さ９０ｃｍ、幅４５ｃｍで３８ｃｍの深さまで湯を満たしたアクリル水槽にポンプを接続して水槽表面に流れを発生させることにより、マウス用流水プールを作成した（京大松元式運動量測定流水槽）。流水プールにマウスを入れると、マウスは流れに逆らって遊泳し、疲労困憊すると水槽後部で水没した。遊泳開始から水没するまでの遊泳時間を測定した。限界遊泳試験は、実験期間（４週間）にわたって毎週１回実施した。

（４）結果
投与開始前（各群への振り分けのための限界遊泳試験）と投与開始から３週目の限界遊泳試験の結果を図１に示す。なお、図１は、バクテロイデス・ユニフォルミスの投与開始前（Ａ）と投与開始から３週間後（Ｂ）の限界遊泳試験の結果を示すグラフ図である。対照群を「対照」、投与群を「ＪＣＭ５８２８株」、「ＣＰ３５８５株」及び「ＣＰ３５８６株」とそれぞれ示す。各群ｎ＝８。＊＊：ｐ＜０．０５、＊：ｐ＜０．１（ｖｓ対照、ＳｔｕｄｅｎｔＴ検定）

投与開始前の結果（図１（Ａ））においては、対照群とＪＣＭ５８２８株、ＣＰ３５８５株及びＣＰ３５８６株の各投与群との間において、遊泳時間に有意な差は認められなかった。一方、投与開始から３週目の結果（図１（Ｂ））においては、対照群と比較して、ＪＣＭ５８２８株、ＣＰ３５８５株及びＣＰ３５８６株の各投与群において遊泳時間の延長が認められた。

また、投与開始前の結果（図１（Ａ））と比べて、３週目の結果（図１（Ｂ））においては、対照群の遊泳時間が短くなっていることが確認された。これは長期の実験期間にわたる疲労の蓄積によるものであると考えられる。一方、ＪＣＭ５８２８株、ＣＰ３５８５株及びＣＰ３５８６株の各投与群においてはそのような短縮は認められなかった。これは、投与した菌体による体力向上作用及び抗疲労作用のうち一以上の作用である。

以上の結果より、バクテロイデス・ユニフォルミスの投与により、遊泳（運動）の継続時間を延長することができ、体力の向上や体力の改善もしくは回復を促進する効果が得られることが明らかとなった。また、バクテロイデス・ユニフォルミスの投与により、継続的な活動に由来する身体の機能の低下（疲労）を抑制することができ、疲労の軽減や予防、疲労の改善もしくは回復を促進する効果が得られることが明らかとなった。

なお、実験期間にわたって、対照群と各菌体の投与群において体重変動に有意な差異は認められなかった。

Claims

バクテロイデス・ユニフォルミスを含む、健常な対象における体力及び疲労耐性のうち一以上を向上するために使用される組成物。
全身持久力、及び有酸素運動時の持久力のうち一以上を向上するために使用される、請求項１に記載の組成物。
バクテロイデス・ユニフォルミスが、ＪＣＭ５８２８株、ＣＰ３５８５株（受託番号ＮＩＴＥＢＰ－０２５３６）又はＣＰ３５８６株（受託番号ＮＩＴＥＢＰ－０２５３７）である、請求項１又は２に記載の組成物。
飲食品、医薬又は飼料もしくは飼料添加物である、請求項１～３のいずれか一項に記載の組成物。
健常な非ヒト動物に、バクテロイデス・ユニフォルミスを投与すること又は摂取させることを含む、健常な非ヒト動物における体力及び疲労耐性のうち一以上を向上するための方法。
健常な非ヒト動物における全身持久力、及び有酸素運動時の持久力のうち一以上を向上するための、請求項５に記載の方法。
バクテロイデス・ユニフォルミスＣＰ３５８５株（受託番号ＮＩＴＥＢＰ－０２５３６）。
バクテロイデス・ユニフォルミスＣＰ３５８６株（受託番号ＮＩＴＥＢＰ－０２５３７）。