JP7347899B2 - Ｃｄ８結合物質 - Google Patents

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Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１７年８月９日出願の米国特許仮出願第６２／５４２，９２０号の利益および優先権を主張する。この特許の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
発明の分野
本発明は、一部は、ＣＤ８を結合する結合物質（例えば、限定されないが、ＶＨＨなどの抗体）ならびに治療薬および診断薬としてのそれらの使用に関する。
電子申請したテキストファイルの説明
本明細書と共に電子申請された次記のテキストファイルの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる：配列リストのコンピュータ可読形式コピー（ファイル名：ＯＲＮ－０３２ＰＣ＿ＳＴ２５、作成日付：２０１８年８月８日、ファイルサイズ：８２８ＫＢ）。
活性化ＣＤ８＋ Ｔリンパ球（細胞傷害性Ｔ細胞またはＣＴＬとしても知られる）は、広範囲の病原性微生物に対する主要な防御線である。さらに、ＣＴＬは抗腫瘍免疫において重要な役割も果たす。具体的には、これらのエフェクター細胞は、インターフェロン（ＩＦＮ）－γおよび細胞毒素の産生、溶解タンパク質（例えば、パーフォリン、グランザイム）のエキソサイトーシス、およびＦＡＳ分子の受容体リガンド結合を含む機序により癌発生を抑制できる。
それにもかかわらず、病原性微生物および腫瘍細胞は、ＣＴＬによる免疫破壊を回避する種々の機序を発達させている。例えば、腫瘍は、例えば、癌細胞それ自身によるかまたは腫瘍微小環境中に存在する非癌細胞による免疫抑制サイトカインの産生および免疫チェックポイント阻害の関与を介して、ＣＴＬの機能を無能にすることにより免疫監視を回避できる。癌細胞は、アポトーシスによりＣＴＬを除去することも示されている。
したがって、例えば、腫瘍回避を効果的に逸脱させかつ、例えば、ＣＴＬにより媒介される抗腫瘍免疫を強化できる薬剤を含む、改善された免疫療法薬に対する必要性が残されている。
種々の態様では、本発明は、ＣＤ８に特異的に結合する少なくとも１つの標的化部分を有するＣＤ８結合物質に関する。種々の実施形態では、これらのＣＤ８結合物質は、ＣＤ８に結合するが、ＣＤ８を機能的に調節しない（限定されないが、部分的にまたは完全に中和しないことを含む）。したがって、種々の実施形態では、本発明のＣＤ８結合物質は、例えば、ＣＤ８発現細胞にＣＤ８を介してシグナル伝達させつつそのＣＤ８発現細胞を目的の部位に動員するのに使用される（すなわち、ＣＤ８結合物質の結合は、目的の部位でのＣＤ８シグナル伝達を低減または除去しない）。ある実施形態では、標的化部分は単一ドメイン抗体（ＶＨＨ）である。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、シグナル伝達物質、例えば、限定されないが、活性を弱めるように改変され得るインターフェロン、インターロイキン、および腫瘍壊死因子をさらに含む。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、目的とする他の抗原に結合する追加の標的化部分を含む。ある実施形態では、目的とする他の抗原は、腫瘍細胞上に存在する。別の実施形態では、目的とする他の抗原は、免疫細胞上に存在する。これらの実施形態では、本発明のＣＤ８結合物質は、免疫細胞、例えば、腫瘍を死滅させるおよび／または抑制することができる免疫細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞）を、作用部位（非限定的例であるが、腫瘍微小環境など）に直接的にまたは間接的に動員し得る。
種々の実施形態では、本発明のＣＤ８結合物質は、癌、感染症、免疫異常、自己免疫疾患、ならびに他の疾患および障害などの種々の疾患または障害の治療で使用され、また、本発明は、種々の治療方法を包含する。
図１は、ヒトＣＤ８に特異的な６９種類の異なるＶＨＨのヌクレオチド配列を示す。ギャップは、配列を整列させるために導入された。 図２は、ヒトＣＤ８に特異的な６９種類の異なるＶＨＨのアミノ酸配列を示す。示した相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）は、Ｋａｂａｔに従って決定された。ギャップは、配列を整列させるために導入された。上記６９種類の異なるＶＨＨは、３１個の異なるＣＤＲ３群に属する（図３参照）。同じ群に属するＶＨＨは極めて類似しており、それらのアミノ酸配列は、それらが体細胞超変異から生じるまたは同じＢ細胞から生じるクローン的に関連したＢ細胞由来であるがライブラリー構築中にＲＴおよび／またはＰＣＲエラーにより多様化したことを示唆している。同じ群に属するＶＨＨは同じエピトープを認識するが、それらの他の特性（例えば、親和性、効力、安定性、発現量、など）は異なる可能性がある。 図３は、６９種類の異なるＶＨＨが３１個の異なるＣＤＲ３群に属することを示す表である。 図４は、ヒトＣＤ８を遺伝子導入したＨｅｋ２９３ Ｔ細胞への種々のＶＨＨの結合を示す。 図５Ａは、ＣＤ８陽性細胞でのｐＳＴＡＴ１シグナル伝達アッセイを示す。調査したキメラは、抗ヒトＣＤ８ ＨＨ／ヒトＩＦＮ Ｒ１４９Ａ（すなわち、ＣＤ８ ＶＨＨ－ＡＦＮ）であった。健康なドナー由来の末梢血単核球（ＰＢＭＣ）をＣＤ８抗体で染色し、ＣＤ８ ＶＨＨ－ＡＦＮで１５分間刺激した。固定および透過処理後に、細胞をｐＳＴＡＴ１抗体で染色した。データは、ｐＳＴＡＴ１陽性細胞のパーセンテージとしてプロットされる。 図５Ｂは、ＣＤ８陰性細胞（図５Ｂ）でのｐＳＴＡＴ１シグナル伝達アッセイを示す。調査したキメラは、抗ヒトＣＤ８ ＶＨＨ／ヒトＩＦＮ Ｒ１４９Ａ（すなわち、ＣＤ８ ＶＨＨ－ＡＦＮ）であった。健康なドナー由来の末梢血単核球（ＰＢＭＣ）をＣＤ８抗体で染色し、ＣＤ８ ＶＨＨ－ＡＦＮで１５分間刺激した。固定および透過処理後に、細胞をｐＳＴＡＴ１抗体で染色した。データは、ｐＳＴＡＴ１陽性細胞のパーセンテージとしてプロットされる。 図６Ａは、健康なドナー由来のＰＢＭＣでのＳＴＡＴリン酸化のＣＤ８ ＶＨＨ ＡｃＴａｆｅｒｏｎ（ＡＦＮ）刺激を示すグラフである。健康なドナー由来のＰＢＭＣをＣＤ８ Ａｂで染色し、野生型ＩＦＮα２で１５分間刺激した。固定および透過処理後に、細胞をｐＳＴＡＴ１ Ａｂで染色した。データはベースラインＳＴＡＴ１リン酸化に対する増加としてプロットされる。 図６Ｂは、健康なドナー由来のＰＢＭＣでのＳＴＡＴリン酸化のＣＤ８ ＶＨＨ ＡｃＴａｆｅｒｏｎ（ＡＦＮ）刺激を示すグラフである。健康なドナー由来のＰＢＭＣをＣＤ８ Ａｂで染色し、ＣＤ８ ＶＨＨ ＡＦＮ（すなわち、ＡＦＮ ２ＣＤＡ５）で１５分間刺激した。固定および透過処理後に、細胞をｐＳＴＡＴ１ Ａｂで染色した。データはベースラインＳＴＡＴ１リン酸化に対する増加としてプロットされる。 図６Ｃは、健康なドナー由来のＰＢＭＣでのＳＴＡＴリン酸化のＣＤ８ ＶＨＨ ＡｃＴａｆｅｒｏｎ（ＡＦＮ）刺激を示すグラフである。健康なドナー由来のＰＢＭＣをＣＤ８ Ａｂで染色し、ＣＤ８ ＶＨＨ ＡＦＮ（すなわち、ＡＦＮ ３ＣＤＡ１９）で１５分間刺激した。固定および透過処理後に、細胞をｐＳＴＡＴ１ Ａｂで染色した。データはベースラインＳＴＡＴ１リン酸化に対する増加としてプロットされる。 図６Ｄは、健康なドナー由来のＰＢＭＣでのＳＴＡＴリン酸化のＣＤ８ ＶＨＨ ＡｃＴａｆｅｒｏｎ（ＡＦＮ）刺激を示すグラフである。健康なドナー由来のＰＢＭＣをＣＤ８ Ａｂで染色し、ＣＤ８ ＶＨＨ ＡＦＮ（すなわち、ＡＦＮ １ＣＤＡ６５）で１５分間刺激した。固定および透過処理後に、細胞をｐＳＴＡＴ１ Ａｂで染色した。データはベースラインＳＴＡＴ１リン酸化に対する増加としてプロットされる。 図６Ｅは、健康なドナー由来のＰＢＭＣでのＳＴＡＴリン酸化のＣＤ８ ＶＨＨ ＡｃＴａｆｅｒｏｎ（ＡＦＮ）刺激を示すグラフである。健康なドナー由来のＰＢＭＣをＣＤ８ Ａｂで染色し、ＣＤ８ ＶＨＨ ＡＦＮ（すなわち、ＡＦＮ ２ＣＤＡ７４（Ｃ５０Ｓ））で１５分間刺激した。固定および透過処理後に、細胞をｐＳＴＡＴ１ Ａｂで染色した。データはベースラインＳＴＡＴ１リン酸化に対する増加としてプロットされる。 図６Ｆは、健康なドナー由来のＰＢＭＣでのＳＴＡＴリン酸化のＣＤ８ ＶＨＨ ＡｃＴａｆｅｒｏｎ（ＡＦＮ）刺激を示すグラフである。健康なドナー由来のＰＢＭＣをＣＤ８ Ａｂで染色し、ＣＤ８ ＶＨＨ ＡＦＮ（すなわち、ＡＦＮ ２ＣＤＡ６８）で１５分間刺激した。固定および透過処理後に、細胞をｐＳＴＡＴ１ Ａｂで染色した。データはベースラインＳＴＡＴ１リン酸化に対する増加としてプロットされる。 図７Ａは、ＣＤ８ ＶＨＨ（すなわち、２ＣＤＡ５）が、ＦＡＣにあるヒトおよびカニクイザルＣＤ８アルファに同程度に結合することを示すグラフである。 図７Ｂは、ＣＤ８ ＶＨＨ（すなわち、３ＣＤＡ１９）が、ＦＡＣにあるヒトおよびカニクイザルＣＤ８アルファに同程度に結合することを示すグラフである。 図７Ｃは、ＣＤ８ ＶＨＨ（すなわち、１ＣＤＡ６５）が、ＦＡＣにあるヒトおよびカニクイザルＣＤ８アルファに同程度に結合することを示すグラフである。 図７Ｄは、ＣＤ８ ＶＨＨ（すなわち、２ＣＤＡ７４（Ｃ５０Ｓ））が、ＦＡＣにあるヒトおよびカニクイザルＣＤ８アルファに同程度に結合することを示すグラフである。 図７Ｅは、ＣＤ８ ＶＨＨ（すなわち、２ＣＤＡ６８）が、ＦＡＣにあるヒトおよびカニクイザルＣＤ８アルファに同程度に結合することを示すグラフである。
本発明は、一部は、ＣＤ８を認識し、それに結合する物質（例えば、非限定的例であるが、ＶＨＨなどの抗体）の発見に基づいている。種々の実施形態では、これらのＣＤ８結合物質は、ＣＤ８に結合するが、ＣＤ８を機能的に調節しない。種々の実施形態では、これらのＣＤ８結合物質は、ＣＤ８に結合しＣＤ８を治療作用の必要な部位（例えば、腫瘍）へ直接的にまたは間接的に動員する。本発明は、ＣＤ８結合物質を含む医薬組成物および種々の疾患の治療でのそれらの使用をさらに提供する。
ＣＤ８結合物質
種々の実施形態では、本発明のＣＤ８結合物質は、ＣＤ８に特異的に結合できるタンパク質ベースの物質である。種々の実施形態では、本発明のＣＤ８結合物質は、ＣＤ８を機能的に調節すること（例えば、部分的なまたは完全な中和）なしに、ＣＤ８に特異的に結合できるタンパク質ベースの物質である。
ＣＤ８は、ヘテロダイマーＩ型膜貫通型糖タンパク質であり、そのαおよびβ鎖はどちらも伸長Ｏ－グリコシル化ストークにより単回通過膜貫通ドメインに連結された免疫グロブリン（Ｉｇ）様細胞外ドメインおよび短い細胞質側末端から構成される（Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，２０１３）。ＣＤ８α鎖の細胞質領域は、ｓｒｃチロシンキナーゼｐ５６ｌｃｋ（Ｌｃｋ）に対するドッキング部位として機能する２つのシステインモチーフを含む。対照的に、このＬｃｋ結合ドメインは、β鎖には存在しないように見え、ＣＤ８β鎖は下流シグナル伝達に関与しないことを示唆している（Ａｒｔｙｏｍｏｖ ｅｔ ａｌ．，２０１０）。ＣＤ８は、Ｔ細胞受容体に対する共受容体として機能し、その基本的な役割は、ＭＨＣに共受容体結合した後にＬｃｋをＴＣＲ－ｐＭＨＣ複合体へと動員することである（Ｔｕｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｖｅｉｌｌｅｔｔｅ ｅｔ ａｌ．，１９８８）。このキナーゼの局所濃度の増加は、ζ鎖結合プロテインキナーゼ７０（ＺＡＰ－７０）を動員しおよび活性化するシグナル伝達カスケードを活性化し、その後、Ｔ細胞活性化信号の増幅をもたらす（Ｐｕｒｂｈｏｏ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｌａｕｇｅｌ ｅｔ ａｌ．，２００７ａ）。
種々の実施形態では、本発明のＣＤ８結合物質は、ＣＤ８αおよび／またはβ鎖上に存在するエピトープを認識する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。ある実施形態では、抗原認識ドメインは、ＣＤ８αおよび／またはβ鎖上の１つまたは複数の線形エピトープ（ｌｉｎｅａｒ ｅｐｉｔｏｐｅ）を認識する。本明細書で使用される場合、線形エピトープは、ＣＤ８αおよび／またはβ鎖上に存在するアミノ酸の任意の連続配列を意味する。別の実施形態では、抗原認識ドメインは、ＣＤ８αおよび／またはβ鎖上に存在する１つまたは複数の立体構造エピトープ（ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ ｅｐｉｔｏｐｅ）を認識する。本明細書で使用される場合、立体構造エピトープは、抗原認識ドメインにより認識され得る特徴および／または形状および／または三次構造を備えた３次元表面を形成する１つまたは複数のアミノ酸の部分（これは不連続であってよい）を指す。
種々の実施形態では、本発明のＣＤ８結合物質は、ヒトＣＤ８αおよび／またはβ鎖の完全長型および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／または任意のその他の天然または合成類似体、バリアント、または変異体に結合し得る。種々の実施形態では、本発明のＣＤ８結合物質は、モノマー、ダイマー、ヘテロダイマー、マルチマーおよび会合型を含む任意の型のヒトＣＤ８αおよび／またはβ鎖に結合し得る。ある実施形態では、ＣＤ８結合物質は、モノマー型のＣＤ８α鎖またはＣＤ８β鎖に結合する。別の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、２つのＣＤ８α鎖または２つのＣＤ８β鎖からなるホモダイマー型に結合する。さらなる実施形態では、ＣＤ８結合物質は、１つのＣＤ８α鎖または１つのＣＤ８β鎖からなるヘテロダイマー型に結合する。
ある実施形態では、本発明のＣＤ８結合物質は、ヒトＣＤ８α鎖上に存在する１つまたは複数のエピトープを認識する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。ある実施形態では、ヒトＣＤ８α鎖は、アイソフォーム１のアミノ酸配列（配列番号１）を含む。
ある実施形態では、ヒトＣＤ８α鎖は、アイソフォーム２のアミノ酸配列（配列番号２）を含む。
ある実施形態では、ヒトＣＤ８α鎖は、アイソフォーム３のアミノ酸配列（配列番号３）を含む。
ある実施形態では、本発明のＣＤ８結合物質は、ヒトＣＤ８β鎖上に存在する１つまたは複数のエピトープを認識する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。ある実施形態では、ヒトＣＤ８β鎖は、アイソフォーム１のアミノ酸配列（配列番号４）を含む。
ある実施形態では、ヒトＣＤ８β鎖は、アイソフォーム２のアミノ酸配列（配列番号５）を含む。
ある実施形態では、ヒトＣＤ８β鎖は、アイソフォーム３のアミノ酸配列（配列番号６）を含む。
ある実施形態では、ヒトＣＤ８β鎖は、アイソフォーム４のアミノ酸配列（配列番号７）を含む。
ある実施形態では、ヒトＣＤ８β鎖は、アイソフォーム５のアミノ酸配列（配列番号８）を含む。
ある実施形態では、ヒトＣＤ８β鎖は、アイソフォーム６のアミノ酸配列（配列番号９）を含む。
ある実施形態では、ヒトＣＤ８β鎖は、アイソフォーム７のアミノ酸配列（配列番号１０）を含む。
ある実施形態では、ヒトＣＤ８β鎖は、アイソフォーム８のアミノ酸配列（配列番号１１）を含む。
種々の実施形態では、本発明のＣＤ８結合物質は、特異的に結合できる標的化部分を含む。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、抗体またはその誘導体などの抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。ある実施形態では、ＣＤ８結合物質は、抗体である標的化部分を含む。種々の実施形態では、抗体は、２つの重鎖および２つの軽鎖を含む完全長マルチマータンパク質である。それぞれの重鎖は、１つの可変領域（例えば、ＶＨ）および少なくとも３つの定常領域（例えば、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）を含み、それぞれの軽鎖は、１つの可変領域（ＶＬ）および１つの定常領域（ＣＬ）を含む。可変領域は抗体の特異性を決定する。それぞれの可変領域は、４つの比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）により挟まれた、相補性決定領域（ＣＤＲ）としても知られる、３つの高頻度可変領域を含む。３つのＣＤＲは、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と呼ばれ、抗体の結合特異性に寄与する。いくつかの実施形態では、抗体はキメラ抗体である。いくつかの実施形態では、抗体はヒト化抗体である。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、特定の抗体誘導体または抗体フォーマットである標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、本発明のＣＤ８結合物質は、次の標的化部分を含む：単一ドメイン抗体、組み換え型の重鎖抗体（重鎖抗体）（ＶＨＨ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、サメの重鎖抗体（ＶＮＡＲ）、マイクロタンパク質（システインノットタンパク質、ノッチン）、ＤＡＲＰｉｎ；テトラネクチン；アフィボディ；トランスボディ；アンチカリン；アドネクチン；アフィリン；アフィマー；ミクロボディ；アプタマー；ａｌｔｅｒａｓｅ；プラスチック抗体；フィロマー；ストラドボディ；マキシボディ；エビボディ；フィノマー；アルマジロリピートタンパク質（ａｒｍａｄｉｌｌｏ ｒｅｐｅａｔ ｐｒｏｔｅｉｎ）；クニッツドメイン、アビマー、アトリマー、プロボディ、イムノボディ、トリオマブ、トロイボディ、ペプボディ、ワクシボディ、ユニボディ；デュオボディ、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ペプチド模倣分子、または合成分子。これらは、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第７，４１７，１３０号、米国特許出願公開第２００４／１３２０９４号、米国特許第５，８３１，０１２号、米国特許出願公開第２００４／０２３３３４号、米国特許第７，２５０，２９７号、米国特許第６，８１８，４１８号、米国特許出願公開第２００４／２０９２４３号、米国特許第７，８３８，６２９号、米国特許第７，１８６，５２４号、米国特許第６，００４，７４６号、米国特許第５，４７５，０９６号、米国特許出願公開第２００４／１４６９３８号、米国特許出願公開第２００４／１５７２０９号、米国特許第６，９９４，９８２号、米国特許第６，７９４，１４４号、米国特許出願公開第２０１０／２３９６３３号、米国特許第７，８０３，９０７号、米国特許出願公開第２０１０／１１９４４６号、および／または米国特許第７，１６６，６９７号に記載されている。Ｓｔｏｒｚ ＭＡｂｓ．２０１１ Ｍａｙ－Ｊｕｎ；３（３）：３１０－３１７、も参照されたい。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、ＶＨＨなどの単一ドメイン抗体である標的化部分を含む。ＶＨＨは、例えば、ラクダ類、サメなどのＶＨＨ抗体を産生する生物からから誘導するか、またはＶＨＨは設計によるＶＨＨであってもよい。ＶＨＨは、天然起源の重鎖抗体の特有の構造および機能特性を含む、抗体由来の治療用タンパク質である。ＶＨＨ技術は、軽鎖を欠くラクダ類由来の完全に機能的な抗体に基づいている。これらの重鎖抗体は、単一可変ドメイン（ＶＨＨ）および２つの定常ドメイン（ＣＨ２およびＣＨ３）を含む。
ある実施形態では、ＣＤ８結合物質はＶＨＨを含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、ヒト化ＶＨＨまたはラクダ化ＶＨＨである。
いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、完全ヒトＶＨドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＹ（Ｃｒｅｓｃｅｎｄｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）を含む。いくつかの実施形態では、完全ヒトＶＨドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＹは、一価、二価、または三価である。いくつかの実施形態では、完全ヒトＶＨドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＹは、単一特異性、二重特異性、または三重特異性などの単一特異性または多重特異性である。例示的な完全ヒトＶＨドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＩＥＳは、例えば、国際公開第２０１６／１１３５５５号および国際公開第２０１６／１１３５５７号に記載されている。これらの全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、４つの「フレームワーク領域」またはＦＲおよび３つの「相補性決定領域」またはＣＤＲを有する単一アミノ酸鎖を含むＶＨＨである標的化部分を含む。本明細書で使用される場合、「フレームワーク領域」または「ＦＲ」は、ＣＤＲの間に位置する可変ドメイン中の領域を意味する。本明細書で使用される場合、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、抗原性標的に特異的に結合できるアミノ酸配列を含むＶＨＨ中の可変領域を指す。
種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３配列のうちの少なくとも１つを含む可変ドメインを有するＶＨＨを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ１配列は、下記から選択される：
ＧＲＳＦＳＳＹＴＬＡ（配列番号１２）；ＧＲＴＦＳＳＹＴＭＧ（配列番号１３）；ＧＲＴＦＳＳＹＩＭＧ（配列番号１４）；ＧＲＴＦＳＳＹＴＭＧ（配列番号１５）；ＧＲＴＳＧＲＴＦＳＳＹＴＭＧ（配列番号１６）；ＧＲＴＦＳＳＹＡＭＧ（配列番号１７）；ＧＬＴＦＳＮＹＩＭＧ（配列番号１８）；ＧＲＴＦＳＳＹＴＭＧ（配列番号１９）；ＧＲＴＦＳＳＤＴＭＧ（配列番号２０）；ＧＬＴＦＳＮＹＩＭＧ（配列番号２１）；ＧＦＴＬＤＹＹＧＩＧ（配列番号２２）；ＧＨＴＦＳＳＹＴＭＧ（配列番号２３）；ＧＲＴＦＳＳＹＶＩＧ（配列番号２４）；ＧＦＡＦＤＧＹＡＩＧ（配列番号２５）；ＧＦＡＦＧＦＦＤＭＴ（配列番号２６）；ＧＲＴＦＳＮＹＶＩＧ（配列番号２７）；ＧＳＩＦＳＩＮＶＭＧ（配列番号２８）；ＧＲＴＦＳＮＹＮＶＧ（配列番号２９）；ＧＨＴＦＳＳＹＴＭＧ（配列番号３０）；ＧＲＴＦＳＴＹＰＶＧ（配列番号３１）；ＧＲＴＦＳＮＹＡＭＧ（配列番号３２）；ＧＲＴＦＳＤＹＲＭＧ（配列番号３３）；ＧＬＴＦＳＮＹＩＭＡ（配列番号３４）；ＧＲＴＦＳＮＳＶＭＧ（配列番号３５）；ＧＲＴＦＳＳＹＩＩＧ（配列番号３６）；ＧＲＴＦＳＳＹＶＭＧ（配列番号３７）；ＧＧＴＦＳＮＹＶＭＧ（配列番号３８）；ＧＲＴＦＳＮＹＧＩＧ（配列番号３９）；ＧＦＴＦＤＤＹＡＩＡ（配列番号４０）；ＧＲＴＦＳＳＹＴＶＡ（配列番号４１）；ＧＦＰＦＤＤＹＡＩＡ（配列番号４２）；ＧＲＴＦＳＳＹＶＭＧ（配列番号４３）；ＧＲＴＬＳＳＮＰＭＡ（配列番号４４）；ＧＦＴＦＤＮＹＡＩＧ（配列番号４５）；ＧＲＡＦＳＳＹＦＭＧ（配列番号４６）；ＴＰＴＦＳＳＹＮＭＧ（配列番号４７）；ＧＦＴＦＤＤＹＡＩＡ（配列番号４８）；ＧＧＴＦＳＧＹＩＭＧ（配列番号４９）；ＧＲＳＦＳＳＹＴＩＡ（配列番号５０）；ＧＦＳＳＤＤＹＴＩＧ（配列番号５１）；ＧＦＴＦＤＤＹＴＩＧ（配列番号５２）；ＧＦＳＳＤＤＹＴＩＧ（配列番号５３）；ＧＦＴＦＤＱＹＴＩＡ（配列番号５４）；ＧＲＴＦＳＳＹＡＭＡ（配列番号５５）；ＧＦＡＦＤＧＹＡＩＧ（配列番号５６）；ＧＦＳＳＤＤＹＴＩＡ（配列番号５７）；ＧＦＳＳＤＤＹＴＩＧ（配列番号５８）；ＧＦＴＦＤＤＹＴＩＧ（配列番号５９）；ＧＦＳＳＤＤＹＴＩＧ（配列番号６０）；ＧＦＳＳＤＤＹＴＩＧ（配列番号６１）；ＧＦＳＦＤＤＹＡＩＡ（配列番号６２）；ＧＦＳＳＤＤＹＴＩＧ（配列番号６３）；ＧＦＴＧＮＤＬＡＩＧ（配列番号６４）；ＧＦＳＳＤＤＹＴＩＡ（配列番号６５）；ＥＧＴＬＳＳＹＧＩＧ（配列番号６６）；ＧＦＳＳＤＤＹＴＩＡ（配列番号６７）；ＧＦＴＦＤＤＹＡＩＡ（配列番号６８）；ＧＬＳＳＤＤＹＴＩＧ（配列番号６９）；ＧＬＳＳＤＤＹＴＩＧ（配列番号７０）；ＧＦＳＳＤＤＹＴＩＧ（配列番号７１）；ＧＦＳＦＤＤＹＴＩＧ（配列番号７２）；ＧＦＴＦＤＤＹＡＩＡ（配列番号７３）；ＧＦＴＦＤＤＹＡＩＧ（配列番号７４）；ＧＦＴＦＧＤＹＴＩＧ（配列番号７５）；ＥＧＴＦＳＳＹＧＩＧ（配列番号７６）；ＧＦＳＳＤＤＹＴＩＧ（配列番号７７）；ＧＶＳＩＧＤＹＮＩＧ（配列番号７８）；ＧＦＴＦＤＤＹＴＩＡ（配列番号７９）；ＧＦＴＦＤＤＹＴＩＡ（配列番号８０）。
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ２配列は、下記から選択される：
ＡＳＩＴＷＧＧＧＮＴＹ（配列番号８１）；ＡＡＴＶＷＴＧＡＧＴＶ（配列番号８２）；ＡＡＩＧＷＳＡＤＩＴＶ（配列番号８３）；ＡＦＩＤＷＳＧＧＧＴＹ（配列番号８４）；ＡＴＩＴＷＧＧＧＳＴＹ（配列番号８５）；ＡＡＩＳＷＳＧＧＰＴＶ（配列番号８６）；ＡＡＩＴＷＧＧＧＳＴＶ（配列番号８７）；ＡＡＩＴＷＳＧＶＳＴＶ（配列番号８８）；ＧＡＩＭＷＳＧＡＦＴＨ（配列番号８９）；ＡＡＩＴＷＧＧＧＳＴＶ（配列番号９０）；ＳＣＩＳＳＳＤＲＮＴＹ（配列番号９１）；ＡＦＩＤＷＳＧＧＧＴＹ（配列番号９２）；ＡＶＩＴＷＳＧＤＳＴＹ（配列番号９３）；ＡＣＩＳＳＫＤＧＳＴＹ（配列番号９４）；ＳＧＩＮＳＩＧＧＳＴＴ（配列番号９５）；ＡＶＶＴＷＳＧＤＳＴＹ（配列番号９６）；ＡＫＩＴＮＦＧＩＴＳ（配列番号９７）；ＳＦＩＳＷＩＳＤＩＴＹ（配列番号９８）；ＡＦＩＤＷＳＧＧＧＴＹ（配列番号９９）；ＡＶＩＬＷＳＧＶＳＴＹ（配列番号１００）；ＡＡＩＶＷＳＧＧＳＴＹ（配列番号１０１）；ＡＡＩＳＳＳＧＹＨＴＹ（配列番号１０２）；ＳＣＩＳＳＰＤＧＳＴＹ（配列番号１０３）；ＡＡＶＬＷＳＧＶＳＴＡ（配列番号１０４）；ＶＡＩＴＷＤＧＳＡＴＴ（配列番号１０５）；ＡＡＩＧＷＮＧＧＩＴＹ（配列番号１０６）；ＧＦＩＴＷＳＧＡＳＴＹ（配列番号１０７）；ＡＧＩＮＷＳＧＥＳＡＤ（配列番号１０８）；ＳＣＩＥＲＳＤＧＳＴＹ（配列番号１０９）；ＳＣＩＳＮＴＤＳＳＴＹ（配列番号１１０）；ＳＣＩＳＮＴＤＳＳＴＹ（配列番号１１１）；ＡＱＩＳＷＳＡＧＳＩＹ（配列番号１１２）；ＡＧＭＳＷＮＰＧＰＡＶ（配列番号１１３）；ＳＣＩＳＲＳＤＧＳＴＹ（配列番号１１４）；ＡＮＩＧＷＴＧＤＭＴＹ（配列番号１１５）；ＡＡＩＩＷＳＧＳＭＴＹ（配列番号１１６）；ＳＣＩＳＮＴＤＳＳＴＹ（配列番号１１７）；ＡＡＮＴＷＳＧＧＰＴＹ（配列番号１１８）；ＳＣＩＳＳＤＧＳＴＧ（配列番号１１９）；ＳＣＹＳＳＳＤＧＳＴＧ（配列番号１２０）；ＳＣＩＳＳＤＧＳＴＧ（配列番号１２１）；ＧＣＩＫＳＳＤＧＴＴＧ（配列番号１２２）；ＳＣＩＳＮＴＤＳＳＴＹ（配列番号１２３）；ＡＡＩＡＷＳＡＧＳＴＹ（配列番号１２４）；ＳＣＩＳＳＫＥＧＳＴＹ（配列番号１２５）；ＳＣＩＳＳＳＤＧＳＴＧ（配列番号１２６）；ＳＣＹＳＳＲＤＧＴＴＧ（配列番号１２７）；ＳＣＩＳＳＤＧＳＴＧ（配列番号１２８）；ＳＣＹＳＳＳＤＧＳＴＧ（配列番号１２９）；ＳＣＦＳＳＳＤＧＳＴＧ（配列番号１３０）；ＳＣＩＳＮＴＤＳＳＴＦ（配列番号１３１）；ＳＣＹＳＳＳＤＧＳＴＧ（配列番号１３２）；ＳＣＩＳＮＴＤＳＳＴＹ（配列番号１３３）；ＳＣＩＳＳＳＤＧＳＴＧ（配列番号１３４）；ＧＧＩＮＷＳＧＤＳＴＤ（配列番号１３５）；ＳＣＦＳＳＳＤＧＳＡＧ（配列番号１３６）；ＳＣＩＳＮＴＤＳＳＴＹ（配列番号１３７）；ＳＣＦＳＴＲＤＧＮＡＧ（配列番号１３８）；ＳＣＦＳＳＲＤＧＳＴＧ（配列番号１３９）；ＳＣＦＳＳＲＤＧＳＴＧ（配列番号１４０）；ＳＣＩＳＳＤＧＳＴＧ（配列番号１４１）；ＳＣＩＳＮＴＤＳＳＴＹ（配列番号１４２）；ＳＣＩＳＳＰＤＧＳＴＹ（配列番号１４３）；ＳＣＹＳＳＳＤＧＮＴＧ（配列番号１４４）；ＧＧＩＮＷＳＧＤＳＴＤ（配列番号１４５）；ＳＣＦＳＳＳＤＧＳＴＧ（配列番号１４６）；ＳＣＩＳＳＧＤＧＴＴＹ（配列番号１４７）；ＳＣＩＳＳＤＧＳＴＧ（配列番号１４８）；ＳＣＩＳＳＤＧＳＴＧ（配列番号１４９）；およびＳＳＩＳＲＳＤＧＳＴＹ（配列番号１２２１）。
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ３配列は、下記から選択される：
ＡＫＧＬＲＮＳＤＷＤＬＲＲＧＹＥＹＤＹ（配列番号１５０）；ＡＤＱＡＳＶＰＰＰＹＧＳＥＲＹＤＩＡＳＰＳＥＹＤＹ（配列番号１５１）；ＡＮＳＲＡＹＹＳＳＳＹＤＬＧＲＬＡＳＹＤＹ（配列番号１５２）；ＡＡＱＲＬＧＳＶＴＤＹＴＫＹＤＹ（配列番号１５３）；ＡＳＶＫＶＶＡＧＳＧＩＤＩＳＧＳＲＮＹＤＹ（配列番号１５４）；ＡＫＲＬＤＹＳＡＴＤＫＧＶＤＬＳＤＥＹＤＹ（配列番号１５５）；ＡＡＧＧＳＧＲＬＲＤＬＫＶＧＱＮＹＤＹ（配列番号１５６）；ＡＤＳＰＰＲＴＹＳＳＧＳＶＮＬＥＤＧＳＥＹＤＹ（配列番号１５７）；ＶＩＰＧＲＧＳＡＬＰＩＤＶＧＫＳＤＥＹＥＹ（配列番号１５８）；ＡＡＧＡＳＧＲＬＲＤＬＫＶＧＱＮＹＤＹ（配列番号１５９）；ＡＤＧＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＡＧＰＰＰＧＧＭＤＹ（配列番号１６０）；ＡＡＱＲＬＧＳＶＴＤＹＴＫＹＤＹ（配列番号１６１）；ＡＩＰＰＲＡＹＳＧＧＳＹＳＬＫＤＱＳＫＹＥＹ（配列番号１６２）；ＡＤＧＮＶＷＳＰＰＩＣＳＳＡＧＰＰＰＧＧＭＤＹ（配列番号１６３）；ＫＳＲＳＳＹＳＮＮ（配列番号１６４）；ＡＭＰＰＲＡＹＴＧＲＳＶＳＬＫＤＱＳＫＹＥＹ（配列番号１６５）；ＬＤＴＴＧＷＧＰＰＰＹＱＹ（配列番号１６６）；ＡＨＰＰＤＰＳＲＧＧＥＷＲＬＱＴＰＳＥＹＤＹ（配列番号１６７）；ＡＡＱＲＬＧＳＶＴＤＹＴＫＹＤＹ（配列番号１６８）；ＶＰＲＳＨＦＴＴＡＱＤＭＧＱＤＭＧＡＰＳＷＹＥＹ（配列番号１６９）；ＡＶＬＩＲＹＹＳＧＧＹＱＧＬＳＤＡＮＥＹＤＹ（配列番号１７０）；ＶＶＫＹＬＳＧＳＹＳＹＡＧＱＹＮＦ（配列番号１７１）；ＡＤＦＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＶＧＰＰＰＧＧＭＤＹ（配列番号１７２）；ＡＨＥＳＴＹＹＳＧＴＹＹＬＴＤＰＲＲＹＶＹ（配列番号１７３）；ＡＶＰＡＲＧＬＴＭＤＬＥＮＳＤＩＹＤＨ（配列番号１７４）；ＡＡＴＬＱＶＴＧＳＹＹＬＤＬＳＴＶＤＩＹＤＮ（配列番号１７５）；ＡＴＬＦＲＳＮＧＰＫＤＬＳＳＧＹＥＹＤＹ（配列番号１７６）；ＡＧＥＳＧＶＷＶＧＧＬＤＹ（配列番号１７７）；ＶＧＳＡＮＳＧＥＦＲＦＧＷＶＬＫＰＤＬＹＮＹ（配列番号１７８）；ＡＤＧＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＡＧＰＰＰＧＧＭＤＹ（配列番号１７９）；ＡＤＧＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＡＧＰＰＰＧＧＭＤＹ（配列番号１８０）；ＥＲＧＹＡＹＣＳＤＤＧＣＱＲＴＱＤＹＤＹ（配列番号１８１）；ＧＡＡＲＡＷＷＳＧＳＹＤＹＴＲＭＮＮＹＤＹ（配列番号１８２）；ＡＥＴＳＡＤＳＧＥＦＲＦＧＷＶＬＫＰＳＬＹＤＹ（配列番号１８３）；ＡＡＧＳＡＹＳＧＳＹＷＮＩＴＭＡＡＮＹＤＹ（配列番号１８４）；ＡＱＲＩＦＧＡＱＰＭＤＬＳＧＤＹＥＹ（配列番号１８５）；ＡＤＧＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＡＧＰＰＰＧＧＭＤＹ（配列番号１８６）；ＡＲＤＹＲＧＩＫＤＬＤＬＫＧＤＹＤＹ（配列番号１８７）；ＡＤＦＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＩＷＹＧＰＰＰＲＧＭＤＹ（配列番号１８８）；ＡＤＳＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＲＷＹＧＰＰＰＧＧＭＡＹ（配列番号１８９）；ＡＤＦＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＮＷＹＧＰＰＰＧＧＭＤＹ（配列番号１９０）；ＡＤＦＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＩＷＹＧＰＰＰＧＧＭＤＹ（配列番号１９１）；ＡＤＧＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＡＧＰＰＰＧＧＭＤＹ（配列番号１９２）；ＡＲＩＩＴＶＡＴＭＲＬＤＳＤＹＤＹ（配列番号１９３）；ＡＤＧＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＡＧＰＰＰＧＧＭＤＹ（配列番号１９４）；ＡＤＳＮＶＷＳＰＰＩＣＧＲＴＷＹＧＰＰＰＧＧＭＤＹ（配列番号１９５）；ＡＤＦＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＩＷＹＧＰＰＰＧＧＭＡＹ（配列番号１９６）；ＡＤＦＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＮＷＹＧＰＰＰＧＧＭＤＹ（配列番号１９７）；ＡＤＦＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＳＷＹＧＰＰＰＧＧＭＤＹ（配列番号１９８）；ＡＤＦＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＲＷＹＧＰＰＰＧＧＭＥＹ（配列番号１９９）；ＡＤＧＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＡＧＰＰＰＧＧＭＤＹ（配列番号２００）；ＡＤＦＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＲＷＹＧＰＰＰＧＧＭＡＹ（配列番号２０１）；ＡＤＧＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＡＧＰＰＰＧＧＭＤＹ（配列番号２０２）；ＡＤＳＮＶＷＳＰＰＩＣＧＫＴＷＹＧＰＰＰＧＧＭＤＹ（配列番号２０３）；ＡＧＥＳＧＶＷＶＧＧＬＤＹ（配列番号２０４）；ＡＤＳＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＴＷＹＧＰＰＰＧＧＭＡＹ（配列番号２０５）；ＡＤＧＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＡＧＰＰＰＧＧＭＤＹ（配列番号２０６）；ＡＤＦＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＲＷＹＧＰＰＰＧＧＭＤＹ（配列番号２０７）；ＡＤＦＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＲＷＹＧＰＰＰＧＧＭＤＹ（配列番号２０８）；ＡＤＦＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＲＷＹＧＰＰＰＧＧＭＤＹ（配列番号２０９）；ＡＤＦＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＩＷＹＧＰＰＰＧＧＭＤＹ（配列番号２１０）；ＡＤＧＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＡＧＰＰＰＧＧＭＤＹ（配列番号２１１）；ＡＤＦＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＶＧＰＰＰＧＧＭＤＹ（配列番号２１２）；ＡＤＦＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＳＷＹＧＰＰＰＧＧＭＡＹ（配列番号２１３）；ＡＧＥＳＧＶＷＶＧＧＬＤＹ（配列番号２１４）；ＡＤＦＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＳＷＹＧＰＰＰＧＧＭＥＹ（配列番号２１５）；ＡＤＧＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＡＧＰＰＰＧＧＭＤＹ（配列番号２１６）；ＡＤＦＮＶＷＳＰＰＩＣＳＳＮＷＹＧＰＰＰＲＧＭＤＹ（配列番号２１７）；ＡＤＦＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＩＷＹＧＰＰＰＲＧＭＤＹ（配列番号２１８）。
種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、下記の配列から選択されるアミノ酸配列を含む：
１ＣＤＡ７（配列番号２１９）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＳＦＳＳＹＴＬＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＳＩＴＷＧＧＧＮＴＹＹＰＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＫＧＬＲＮＳＤＷＤＬＲＲＧＹＥＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ；
１ＣＤＡ１２（配列番号２２０）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＤＧＧＳＬＲＬＳＣＡＦＳＧＲＴＦＳＳＹＴＭＧＷＦＲＱＧＰＧＫＥＲＥＦＶＡＡＴＶＷＴＧＡＧＴＶＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＤＱＡＳＶＰＰＰＹＧＳＥＲＹＤＩＡＳＰＳＥＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ；
１ＣＤＡ１４（配列番号２２１）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＡＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＳＳＹＩＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＡＩＧＷＳＡＤＩＴＶＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＥＮＭＶＹＬＱＭＮＳＬＮＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＮＳＲＡＹＹＳＳＳＹＤＬＧＲＬＡＳＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ；
１ＣＤＡ１５（配列番号２２２）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＳＳＹＴＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＦＩＤＷＳＧＧＧＴＹＹＤＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＥＮＴＶＹＬＱＭＮＮＬＥＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＡＱＲＬＧＳＶＴＤＹＴＫＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ；
１ＣＤＡ１７（配列番号２２３）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＳＧＲＴＦＳＳＹＴＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＴＩＴＷＧＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＮＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＳＶＫＶＶＡＧＳＧＩＤＩＳＧＳＲＮＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ；
１ＣＤＡ１８（配列番号２２４）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＬＡＳＧＲＴＦＳＳＹＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＡＩＳＷＳＧＧＰＴＶＹＡＤＨＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＶＮＳＬＫＰＥＤＴＡＤＹＹＣＡＡＫＲＬＤＹＳＡＴＤＫＧＶＤＬＳＤＥＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ；
１ＣＤＡ１９（配列番号２２５）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＤＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＬＴＦＳＮＹＩＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＡＩＴＷＧＧＧＳＴＶＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＧＴＫＮＴＶＳＬＱＭＮＳＬＬＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＡＧＧＳＧＲＬＲＤＬＫＶＧＱＮＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ；
１ＣＤＡ２４（配列番号２２６）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＳＳＹＴＭＧＷＦＲＱＡＰＧＲＥＲＥＦＶＡＡＩＴＷＳＧＶＳＴＶＹＴＤＳＶＫＧＲＦＴＶＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＤＳＰＰＲＴＹＳＳＧＳＶＮＬＥＤＧＳＥＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ；
１ＣＤＡ２６（配列番号２２７）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＳＳＤＴＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＧＡＩＭＷＳＧＡＦＴＨＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＡＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＶＩＰＧＲＧＳＡＬＰＩＤＶＧＫＳＤＥＹＥＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ；
１ＣＤＡ２８（配列番号２２８）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＤＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＬＴＦＳＮＹＩＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＡＩＴＷＧＧＧＳＴＶＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＧＴＫＮＴＶＳＬＱＭＮＳＬＱＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＡＧＡＳＧＲＬＲＤＬＫＶＧＱＮＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ；
１ＣＤＡ３７（配列番号２２９）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＧＳＧＦＴＬＤＹＹＧＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＳＣＩＳＳＳＤＲＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＧＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＮＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＤＧＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＡＧＰＰＰＧＧＭＤＹＷＧＫＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ；
１ＣＤＡ４３（配列番号２３０）
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１ＣＤＡ４５（配列番号２３１）
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１ＣＤＡ４７（配列番号２３２）
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１ＣＤＡ４８（配列番号２３３）
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１ＣＤＡ５８（配列番号２３４）
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１ＣＤＡ６５（配列番号２３５）
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１ＣＤＡ６８（配列番号２３６）
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１ＣＤＡ７３（配列番号２３７）
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１ＣＤＡ７５（配列番号２３８）
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１ＣＤＡ８６（配列番号２３９）
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１ＣＤＡ８８（配列番号２４１）
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１ＣＤＡ８９（配列番号２４２）
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１ＣＤＡ９２（配列番号２４３）
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１ＣＤＡ９３（配列番号２４４）
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２ＣＤＡ１（配列番号２４５）
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２ＣＤＡ５（配列番号２４６）
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２ＣＤＡ２８（配列番号２４８）
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２ＣＤＡ６２（配列番号２４９）
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２ＣＤＡ６８（配列番号２５０）
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２ＣＤＡ７３（配列番号２５１）
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２ＣＤＡ７４（配列番号２５２）
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２ＣＤＡ７４（Ｃ５０Ｓ）（配列番号１２１６）
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２ＣＤＡ７５（配列番号２５３）
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２ＣＤＡ７７（配列番号２５４）
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２ＣＤＡ８１（配列番号２５５）
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２ＣＤＡ８７（配列番号２５６）
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２ＣＤＡ８８（配列番号２５７）
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２ＣＤＡ８９（配列番号２５８）
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２ＣＤＡ９１（配列番号２５９）
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２ＣＤＡ９３（配列番号２６１）
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２ＣＤＡ９４（配列番号２６２）
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３ＣＤＡ１９（配列番号２６８）
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３ＣＤＡ２１（配列番号２６９）
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３ＣＤＡ２４（配列番号２７０）
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３ＣＤＡ２８（配列番号２７１）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＶＧＧＳＬＲＬＳＣＴＩＳＧＦＴＧＮＤＬＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＤＱＲＥＧＩＳＣＩＳＮＴＤＳＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＳＤＮＡＫＮＴＶＨＬＱＭＳＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＤＧＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＡＧＰＰＰＧＧＭＤＹＷＧＫＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ；
３ＣＤＡ２９（配列番号２７２）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＳＳＤＤＹＴＩＡＷＦＲＲＡＰＧＫＥＲＥＧＩＳＣＩＳＳＳＤＧＳＴＧＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＳＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＴＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＤＳＮＶＷＳＰＰＩＣＧＫＴＷＹＧＰＰＰＧＧＭＤＹＷＧＫＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ；
３ＣＤＡ３１（配列番号２７３）
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３ＣＤＡ３２（配列番号２７４）
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３ＣＤＡ３３（配列番号２７５）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＴＳＧＦＴＦＤＤＹＡＩＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＳＣＩＳＮＴＤＳＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＳＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＳＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＤＧＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＡＧＰＰＰＧＧＭＤＹＷＧＫＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ；
３ＣＤＡ３７（配列番号２７６）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＥＶＳＧＬＳＳＤＤＹＴＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＦＳＣＦＳＴＲＤＧＮＡＧＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＳＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＮＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＤＦＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＲＷＹＧＰＰＰＧＧＭＤＹＷＧＫＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ；
３ＣＤＡ４０（配列番号２７７）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＥＶＳＧＬＳＳＤＤＹＴＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＫＲＥＧＦＳＣＦＳＳＲＤＧＳＴＧＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＳＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＤＦＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＲＷＹＧＰＰＰＧＧＭＤＹＷＧＫＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ；
３ＣＤＡ４１（配列番号２７８）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＳＳＤＤＹＴＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＦＳＣＦＳＳＲＤＧＳＴＧＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＳＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＤＦＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＲＷＹＧＰＰＰＧＧＭＤＹＷＧＫＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ；
３ＣＤＡ４８（配列番号２７９）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＳＦＤＤＹＴＩＧＷＦＲＱＶＰＧＫＥＲＥＧＩＳＣＩＳＳＤＧＳＴＧＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＳＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＩＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＤＦＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＩＷＹＧＰＰＰＧＧＭＤＹＷＧＫＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ；
３ＣＤＡ５７（配列番号２８０）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＴＦＧＦＴＦＤＤＹＡＩＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＩＳＣＩＳＮＴＤＳＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＳＤＮＡＫＮＴＶＨＬＱＭＳＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＤＧＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＡＧＰＰＰＧＧＭＤＹＷＧＫＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ；
３ＣＤＡ６５（配列番号２８１）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＸＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＳＣＩＳＳＰＤＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＳＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＤＦＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＶＧＰＰＰＧＧＭＤＹＷＧＫＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ；
３ＣＤＡ７０（配列番号２８２）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＡＳＬＲＬＳＣＫＡＳＧＦＴＦＧＤＹＴＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＩＳＣＹＳＳＳＤＧＮＴＧＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＳＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＤＦＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＳＷＹＧＰＰＰＧＧＭＡＹＷＧＫＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ；
３ＣＤＡ７３（配列番号２８３）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＤＳＬＲＬＳＣＡＧＳＥＧＴＦＳＳＹＧＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＧＧＩＮＷＳＧＤＳＴＤＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＧＥＳＧＶＷＶＧＧＬＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ；
３ＣＤＡ８３（配列番号２８４）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＳＳＤＤＹＴＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＩＳＣＦＳＳＳＤＧＳＴＧＦＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＳＤＮＡＴＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＤＦＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＳＷＹＧＰＰＰＧＧＭＥＹＷＧＫＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ；
３ＣＤＡ８６（配列番号２８５）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＤＳＬＲＬＳＣＴＡＳＧＶＳＩＧＤＹＮＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＳＣＩＳＳＧＤＧＴＴＹＹＴＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＴＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＤＧＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＡＧＰＰＰＧＧＭＤＹＷＧＫＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ；
３ＣＤＡ８８（配列番号２８６）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＴＩＡＷＦＲＱＡＰＧＧＫＥＲＥＧＩＳＣＩＳＳＤＧＳＴＧＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＳＤＮＡＫＮＭＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＡＤＦＮＶＷＳＰＰＩＣＳＳＮＷＹＧＰＰＰＲＧＭＤＹＷＧＫＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ；または
３ＣＤＡ９０（配列番号２８７）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＴＩＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＩＳＣＩＳＳＤＧＳＴＧＹＡＤＳＶＲＧＲＦＴＩＳＳＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＤＦＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＩＷＹＧＰＰＰＲＧＭＤＹＷＧＫＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ。
種々の例示的実施形態では、ＣＤ８結合物質は、末端ヒスチジンタグ配列（すなわち、ＨＨＨＨＨＨ：配列番号１２１３）を含まない上記配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、末端ＨＡタグ（すなわち、ＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳ；配列番号１２１４）を含まない上記配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、ＡＡＡリンカーを含まない上記配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、ＡＡＡリンカー、ＨＡタグ、および末端ヒスチジンタグ配列（すなわち、ＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ；配列番号１２１５）を含まない上記配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。
種々の実施形態では、本発明は、本明細書に記載の本発明のＣＤ８結合物質の任意の天然または合成類似体、変異体、バリアント、アレル、同族体およびオーソログ（本明細書では、ひとまとめにして「類似体」と呼ぶ）の使用を意図している。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質のアミノ酸配列は、アミノ酸類似体、アミノ酸誘導体、またはその他の非古典的アミノ酸をさらに含む。
種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、本明細書で開示の配列のうちのいずれか１つに少なくとも６０％同一である配列を含む標的化部分を含む。例えば、ＣＤ８結合物質は、本明細書で開示の配列のうちのいずれか１つに、少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一（例えば、本明細書で開示の配列のうちのいずれか１つに約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、約９９％または約１００％の配列同一性）である配列を含む標的化部分を含み得る。
種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、本明細書で開示の配列のうちのいずれか１つに関して１つまたは複数のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む標的化部分を含む。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、本明細書で開示の配列のうちのいずれか１つに関して１個、または２個、または３個、または４個、または５個、または６個、または７個、または８個、または９個、または１０個、または１５個、または２０個のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸変異は、置換、挿入、欠失、および短縮化から独立に選択され得る。
いくつかの実施形態では、アミノ酸変異は、アミノ酸置換であり、保存的および／または非保存的置換を含み得る。
「保存的置換」は、例えば、関与するアミノ酸残基の極性、電荷、サイズ、溶解度、疎水性、親水性、および／または両親媒特性における類似性に基づいて行われ得る。２０種類の天然アミノ酸は、次の６つの標準的アミノ酸グループに分類できる：（１）疎水性：Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；Ａｓｎ、Ｇｌｎ；（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；（５）鎖配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；および（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
本明細書で使用される場合、「保存的置換」は、あるアミノ酸の、上記６つの標準的アミノ酸グループの同じグループ内に記載の別のアミノ酸による交換として定義される。例えば、ＡｓｐのＧｌｕによる交換は、そのように改変されたポリペプチド中で１つの負電荷を保持する。さらに、グリシンおよびプロリンは、それらのαヘリックスを破壊する能力に基づいて相互に置換され得る。
本明細書で使用される場合、「非保存的置換」は、あるアミノ酸の、上記６つの標準的アミノ酸グループ（１）～（６）の異なるグループに記載の別のアミノ酸による交換として定義される。
種々の実施形態では、置換はまた、非古典的アミノ酸（例えば、セレノシステイン、ピロールリジン、Ｎ－ホルミルメチオニンβ－アラニン、ＧＡＢＡおよびδ－アミノレブリン酸、４－アミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）、共通アミノ酸のＤ－異性体、２，４－ジアミノ酪酸、α－アミノイソ酪酸、４－アミノ酪酸、Ａｂｕ、２－アミノ酪酸、γ－Ａｂｕ、ε－Ａｈｘ、６－アミノヘキサン酸、Ａｉｂ、２－アミノイソ酪酸、３－アミノプロピオン酸、オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトルリン、ホモシトルリン、システイン酸、ｔ－ブチルグリシン、ｔ－ブチルアラニン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、β－アラニン、フルオロアミノ酸、βメチルアミノ酸などのデザイナーアミノ酸、Ｃ α－メチルアミノ酸、Ｎ α－メチルアミノ酸、および一般的にアミノ酸類似体）も含む。
種々の実施形態では、アミノ酸変異は、標的化部分のＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３領域）中にあってもよい。別の実施形態では、アミノ酸変化は、標的化部分のフレームワーク領域（ＦＲ）（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、またはＦＲ４領域）中にあってもよい。
アミノ酸配列の改変は、任意の当該技術分野において、周知の技術、例えば、部位特異的変異誘発またはＰＣＲベース変異誘発を用いて実現され得る。このような技術は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，Ｎ．Ｙ．，１９８９ ａｎｄ Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９８９に記載されている。
種々の実施形態では、変異は、ＣＤ８に特異的に結合する本発明のＣＤ８結合物質の能力を実質的に低下させない。種々の実施形態では、変異は、ＣＤ８を機能的に調節することなくＣＤ８に特異的に結合する本発明のＣＤ８結合物質の能力を実質的に低下させない。
種々の実施形態では、ヒトＣＤ８αおよび／またはβ鎖の完全長および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／または任意のその他の天然のまたは合成類似体、バリアント、または変異体（モノマー、ダイマー、ヘテロダイマー、マルチマーおよび／または会合型を含む）に対する本発明のＣＤ８結合物質の結合親和性は、平衡解離定数（ＫＤ）により特徴付けられる。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、ヒトＣＤ８αおよび／またはβ鎖の完全長および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／または任意のその他の天然のまたは合成類似体、バリアント、または変異体（モノマー、ダイマー、ヘテロダイマー、マルチマーおよび／または会合型を含む）に、約１ｕＭ、約９００ｎＭ、約８００ｎＭ、約７００ｎＭ、約６００ｎＭ、約５００ｎＭ、約４００ｎＭ、約３００ｎＭ、約２００ｎＭ、約１００ｎＭ、約９０ｎＭ、約８０ｎＭ、約７０ｎＭ、約６０ｎＭ、約５０ｎＭ、約４０ｎＭ、約３０ｎＭ、約２０ｎＭ、約１０ｎＭ、または約５ｎＭ、または約１ｎＭ未満のＫＤで結合する標的化部分を含む。
種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、目的の抗原、すなわち、ＣＤ８を結合するが機能的に調節しない標的化部分を含む。例えば、種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質の標的化部分は、単に抗原を標的とするが、抗原を実質的に機能的に調節せず、例えばそれは実質的に、抗原が有する生物学的作用を阻害せず、低下させず、または中和しない。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質の標的化部分は、生物活性にとって重要な抗原部位（例えば、抗原の活性部位）から物理的に離れたエピトープを結合する。
このような非機能調節（例えば、非中和）結合は、本発明のＣＤ８結合物質が直接的にまたは間接的に活性免疫細胞をエフェクター抗原を介して必要な部位に動員するために用いられる方法を含む本発明の種々の実施形態で使用される。例えば、種々の実施形態では、腫瘍を縮小させるまたは取り除く方法において、本発明のＣＤ８結合物質を使って、直接的または間接的にＣＤ８を介して細胞傷害性Ｔ細胞を腫瘍細胞に動員し得る（例えば、ＣＤ８結合物質は、抗ＣＤ８抗原認識ドメインを有する標的化部分および腫瘍抗原または受容体に対する認識ドメイン（例えば、抗原認識ドメイン）を有する標的化部分を含み得る）。このような実施形態では、直接的または間接的にＣＤ８発現細胞傷害性Ｔ細胞を動員するが、ＣＤ８活性を中和しないのが望ましい。これらの実施形態では、ＣＤ８シグナル伝達は、腫瘍を縮小させるまたは取り除く作用の重要な部分である。
本発明のＣＤ８結合物質を含む治療薬
シグナル伝達物質とのキメラおよび融合体
種々の実施形態では、本発明のＣＤ８結合物質は、１種類または複数種類のシグナル伝達物質とのキメラまたは融合体の一部である。したがって、本発明は、例えば、ＣＤ８に対する標的化部分および１種類または複数種類のシグナル伝達物質を含むキメラまたは融合タンパク質を提供する。
種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、１つまたは複数のその受容体に対する低減された親和性または活性を有するように改変され、それによりキメラまたは融合タンパク質の活性の減弱化（アゴニズムまたはアンタゴニズムを含む）を可能にし、および／または非特異的シグナル伝達または望ましくない隔離を防止する。種々の実施形態では、シグナル伝達物質は野生型の形態で拮抗性であり、そのアンタゴニスト活性を弱める１つまたは複数の変異を有する。種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、１つまたは複数の変異に起因して拮抗性であり、例えば、アゴニストシグナル伝達物質はアンタゴニストシグナル伝達物質に変換され、このような変換されたシグナル伝達物質は、場合により、そのアンタゴニスト活性を弱める１つまたは複数の変異も有する（例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号に記載のように、この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる）。
したがって、種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、１つまたは複数の改変（例えば、変異）を有する改変された（変異した）型のシグナル伝達物質である。種々の実施形態では、変異は改変シグナル伝達物質が、非変異型、すなわち、野生型形態のシグナル伝達物質に比べて（例えば、野生型形態と改変（例えば、変異）形態での同じシグナル伝達物質を比較して）、低減された結合親和性、低減された内在性活性、および低減された特定の生物活性のうちの１つまたは複数などの１つまたは複数の弱められた活性を有することを可能にする。いくつかの実施形態では、結合または親和性を弱めるまたは低減する変異は、結合または活性を実質的に低減または除去する変異を含む。いくつかの実施形態では、結合または親和性を弱めるまたは低減する変異は、結合または活性を実質的に低減または除去する変異とは異なる。結果として、種々の実施形態では、変異は、シグナル伝達物質が、非変異型、すなわち、野生型シグナル伝達物質に比べて（例えば、野生型形態と改変（例えば、変異）形態での同じシグナル伝達物質を比較して）、向上した安全性、例えば、低減された全身毒性、低減された副作用、および低減されたオフターゲット効果を有することを可能にする。
本明細書に記載のように、物質は、１つまたは複数の改変、例えば、変異により、向上した安全性を有し得る。種々の実施形態では、向上した安全性は、本キメラタンパク質がより低い毒性（例えば、全身性毒性および／または組織／器官関連毒性）；および／または低減されたまたは実質的に除去された副作用；および／または高められた耐容性、低減されたまたは実質的に除去された有害事象；および／または低減されたまたは実質的に除去された；および／または拡大された治療濃度域をもたらすことを意味する。
種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、１つまたは複数のその受容体に対する結合親和性または活性を低減する１つまたは複数の変異を有するように改変されている。いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、受容体に対する結合親和性または活性を実質的に低減または除去する１つまたは複数の変異を有するように改変されている。いくつかの実施形態では、野生型シグナル伝達物質により与えられる活性は、受容体に対するアゴニズム（例えば、治療の部位での細胞効果の活性化）である。例えば、野生型シグナル伝達物質は、その受容体を活性化し得る。このような実施形態では、変異は、受容体に対する活性化作用を低減または除去するように改変されたシグナル伝達物質をもたらす。例えば、変異は、標的細胞に低減された活性化シグナルを送るように改変されたシグナル伝達物質をもたらし得る、または活性化シグナルが除去され得る。いくつかの実施形態では、野生型シグナル伝達物質により与えられる作用は、受容体に対するアンタゴニズム（例えば、治療の部位での細胞効果の遮断または抑制）である。例えば、野生型シグナル伝達物質は、受容体をアンタゴナイズするかあるいは阻害し得る。これらの実施形態では、変異は、受容体に対するアンタゴナイズ活性を低減または除去するように改変されたシグナル伝達物質をもたらす。例えば、変異は、標的細胞に低減された阻害シグナルを送るように改変されたシグナル伝達物質をもたらし得る、または阻害シグナルが除去され得る。種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、１つまたは複数の変異に起因して拮抗性であり、例えば、アゴニストシグナル伝達物質はアンタゴニストシグナル伝達物質に変換され（例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５２０号に記載のように）、また、このような変換されたシグナル伝達物質は、場合により、１つまたは複数のその受容体に対するその結合親和性または活性を低減する、または１つまたは複数のその受容体に対する結合親和性または活性を実質的に低減または除去する１つまたは複数の変異も有する。
いくつかの実施形態では、受容体に対し低減された親和性または活性は、本明細書に記載の１つまたは複数の標的化部分（例えば、ＣＤ８に対する標的化部分）の結合により回復可能である。他の実施形態では、受容体に対し低減された親和性または活性は、１つまたは複数の標的化部分の活性により実質的に回復可能でない。
種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質は、それらのシグナル伝達物質が受容体に対する結合親和性または活性を弱めるまたは除去する変異を有するという理由で、オフターゲット効果を低減させる。種々の実施形態では、例えば、野生型シグナル伝達物質と比べて、副作用におけるこの低減が観察される。種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、標的細胞に対し活性である。理由は、標的化部分（単数または複数）が、実質的な活性化に必要とされる欠損した／不十分な結合（例えば、限定されないが、および／または結合力）を補償するためである。種々の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、治療作用部位へ向かう途上では実質的に不活性であり、特異的に標的とされる細胞型に対してその効果を実質的に有し、これにより望ましくない副作用を大きく低減する。
いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、１つの受容体（すなわち、治療受容体）に対する結合または親和性を弱めるまたは低減させる１つまたは複数の変異および第２の受容体に対する結合または活性を実質的に低減または除去する１つまたは複数の変異を含み得る。このような実施形態では、これらの変異は、同じまたは異なる位置にあってよい（すなわち、同じ変異または複数の変異）。いくつかの実施形態では、１つの受容体に対し結合および／または活性を低減する変異（単数または複数）は、別の受容体に対し実質的に低減または除去する変異（単数または複数）とは異なる。いくつかの実施形態では、１つの受容体に対し結合および／または活性を低減する変異（単数または複数）は、別の受容体に対し実質的に低減または除去する変異（単数または複数）と同じである。いくつかの実施形態では、本キメラタンパク質は、治療受容体に対し結合および／または活性を弱めしたがってより制御されたオンターゲット治療効果（例えば、野生型シグナル伝達物質に比較して）を可能にする変異および、別の受容体に対する結合および／または活性を実質的に低減または除去ししたがって副作用を低減する（例えば、野生型シグナル伝達物質に比べて）変異の両方を有する改変シグナル伝達物質を有する。
いくつかの実施形態では、結合または活性の実質的な低減または除去は、標的化部分（ＣＤ８に対する標的化部分または本明細書に記載の任意のその他の標的化部分）を用いて実質的に回復可能ではない。いくつかの実施形態では、結合または活性の実質的な低減または除去は、標的化部分を用いて回復可能である。種々の実施形態では、第２の受容体に対する結合または活性の実質的な低減または除去は、他の受容体により媒介される有害作用も防止し得る。あるいは、または加えて、他の受容体に対する結合または活性の実質的な低減または除去は、治療作用部位から離れて治療キメラタンパク質を隔離するのを低減するかあるいは無くするので、治療効果を改善させる。例えば、いくつかの実施形態では、これは、他の受容体での損失を補償するための高用量の本発明のキメラタンパク質の必要性を無くする。このような投与量を低減する能力は、さらに副作用の可能性を低くする。
種々の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、１つまたは複数のその受容体に対し、シグナル伝達物質に、親和性、例えば、結合（例えば、ＫＤ）および／または活性化（例えば、改変シグナル伝達物質がその受容体のアゴニストである場合、例えば、ＫＡおよび／またはＥＣ５０として測定可能である）および／または阻害（例えば、改変シグナル伝達物質がその受容体のアンタゴニストである場合、例えば、ＫＩおよび／またはＩＣ５０として測定可能である）を低減、実質的に低減、または除去する１つまたは複数の変異を含む。種々の実施形態では、免疫調節薬の受容体に対する低減された親和性は、活性の減弱化（アゴニズムまたはアンタゴニズムを含む）を可能にする。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、野生型シグナル伝達物質に比較して、受容体に対する約１％、または約３％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約１０％～２０％、約２０％～４０％、約５０％、約４０％～６０％、約６０％～８０％、約８０％～１００％の親和性を有する。いくつかの実施形態では、結合親和性は、野生型シグナル伝達物質に比べて、少なくとも約２倍低い、約３倍低い、約４倍低い、約５倍低い、約６倍低い、約７倍低い、約８倍低い、約９倍低い、少なくとも約１０倍低い、少なくとも約１５倍低い、少なくとも約２０倍低い、少なくとも約２５倍低い、少なくとも約３０倍低い、少なくとも約３５倍低い、少なくとも約４０倍低い、少なくとも約４５倍低い、少なくとも約５０倍低い、少なくとも約１００倍低い、少なくとも約１５０倍低い、または約１０～５０倍低い、約５０～１００倍低い、約１００～１５０倍低い、約１５０～２００倍低い、または２００倍超低い。
改変シグナル伝達物質が１つの受容体に対し結合を低減しかつ第２の受容体に対し結合を実質的に低減または除去する変異を有するいくつかの実施形態では、１つの受容体に対する改変シグナル伝達物質の結合親和性の減弱または低減は、他の受容体に対する親和性の実質的な低減または除去より小さい。いくつかの実施形態では、１つの受容体に対する改変シグナル伝達物質の結合親和性の減弱または低減は、他の受容体に対する親和性の実質的低減または除去よりも、約１％、または約３％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％だけ小さい。種々の実施形態では、実質的な低減または除去は、減弱または低減よりも大きい結合親和性および／または活性の低減を指す。
種々の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、例えば、野生型シグナル伝達物質に比べて、シグナル伝達物質の内在性活性を、約７５％、または約７０％、または約６０％、または約５０％、または約４０％、または約３０％、または約２５％、または約２０％、または約１０％、または約５％、または約３％、または約１％に低減する１つまたは複数の変異を含む。
いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、シグナル伝達物質が、その受容体に対する標的化部分の結合親和性より低い、その受容体に対する低減された親和性を有するようにさせる１つまたは複数の変異を含む。いくつかの実施形態では、この結合親和性の差異は、同じ細胞上のシグナル伝達物質／受容体と標的化部分／受容体との間に存在する。いくつかの実施形態では、この結合親和性の差異は、シグナル伝達物質、例えば、変異シグナル伝達物質が、局在化されたオンターゲット効果を有し、かつ野生型シグナル伝達物質で観察される副作用の根底にあるオフターゲット効果を最小化するのを可能にする。いくつかの実施形態では、この結合親和性は、少なくとも約２倍、または少なくとも約５倍、または少なくとも約１０倍、または少なくとも約１５倍低い、または少なくとも約２５倍、または少なくとも約５０倍低い、または少なくとも約１００倍、または少なくとも約１５０倍低い。
受容体結合活性は、当該技術分野において既知の方法を使用して測定され得る。例えば、親和性および／または結合活性は、スキャッチャードプロット分析および結合データのコンピューターフィッティング（例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄ，１９４９）またはＢｒｅｃｈｔら（１９９３）により記載のように、フロースルー条件下で反射型干渉分光法により評価し得る。これらの文献の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、免疫調節薬、例えば、インターロイキン、インターフェロン、および腫瘍壊死因子のうちの１つまたは複数である。
いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、インターロイキンまたは改変インターロイキンであり、例えば、ＩＬ１、ＩＬ２、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ８、ＩＬ９、ＩＬ１０、ＩＬ１１、ＩＬ１２、ＩＬ１３、ＩＬ１４、ＩＬ１５、ＩＬ１６、ＩＬ１７、ＩＬ１８、ＩＬ１９、ＩＬ２０、ＩＬ２１、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＬ２４、ＩＬ２５、ＩＬ２６、ＩＬ２７、ＩＬ２８、ＩＬ２９、ＩＬ３０、ＩＬ３１、ＩＬ３２、ＩＬ３３、ＩＬ３５、ＩＬ３６またはそのフラグメント、バリアント、類似体、またはファミリーメンバーを含む。インターロイキンは、リンパ球、単球、およびマクロファージにより合成される多機能サイトカイン群である。既知の機能は、免疫細胞（例えば、ヘルパーＴ細胞、Ｂ細胞、好酸球、およびリンパ球）の増殖の刺激、好中球およびＴリンパ球の遊走作用、および／またはインターフェロンの阻害を含む。インターロイキン活性は、当該技術分野において既知のアッセイを使用して測定できる（Ｍａｔｔｈｅｗｓ ｅｔ ａｌ．，ｉｎ Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｃｌｅｍｅｎｓ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．１９８７，ｐｐ．２２１－２２５；ａｎｄ Ｏｒｅｎｃｏｌｅ ＆ Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ（１９８９）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ １，１４－２０）。
いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、インターフェロンまたはインターフェロンＩ、ＩＩ、およびＩＩＩ型などの改変型のインターフェロンである。インターフェロンの例としては、例えば、インターフェロンα－１、２、４、５、６、７、８、１０、１３、１４、１６、１７、および２１、インターフェロンβおよびインターフェロンγ、インターフェロンκ、インターフェロンε、インターフェロンτ、およびインターフェロンωが挙げられる。
いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）または腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）の改変型またはＴＮＦファミリーのタンパク質であり、限定されないが、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＬＴβ、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、ＦＡＳＬ、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、およびＴＲＡＩＬを含む。
本明細書に記載の野生型シグナル伝達物質のアミノ酸配列は、当該技術分野において、周知である。したがって、種々の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、本明細書に記載のシグナル伝達物質の既知の野生型アミノ酸配列との少なくとも約６０％、または少なくとも約６１％、または少なくとも約６２％、または少なくとも約６３％、または少なくとも約６４％、または少なくとも約６５％、または少なくとも約６６％、または少なくとも約６７％、または少なくとも約６８％、または少なくとも約６９％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約７１％、または少なくとも約７２％、または少なくとも約７３％、または少なくとも約７４％、または少なくとも約７５％、または少なくとも約７６％、または少なくとも約７７％、または少なくとも約７８％、または少なくとも約７９％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約８１％、または少なくとも約８２％、または少なくとも約８３％、または少なくとも約８４％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約８６％、または少なくとも約８７％、または少なくとも約８８％、または少なくとも約８９％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性（例えば、約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、または約９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む。
種々の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、本明細書に記載のシグナル伝達物質のうちのいずれかのアミノ酸配列との少なくとも約６０％、または少なくとも約６１％、または少なくとも約６２％、または少なくとも約６３％、または少なくとも約６４％、または少なくとも約６５％、または少なくとも約６６％、または少なくとも約６７％、または少なくとも約６８％、または少なくとも約６９％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約７１％、または少なくとも約７２％、または少なくとも約７３％、または少なくとも約７４％、または少なくとも約７５％、または少なくとも約７６％、または少なくとも約７７％、または少なくとも約７８％、または少なくとも約７９％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約８１％、または少なくとも約８２％、または少なくとも約８３％、または少なくとも約８４％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約８６％、または少なくとも約８７％、または少なくとも約８８％、または少なくとも約８９％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性（例えば、約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、または約９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む。
種々の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、１つまたは複数のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸変異は、置換、挿入、欠失、および短縮化から独立に選択され得る。いくつかの実施形態では、アミノ酸変異はアミノ酸置換であり、本明細書の他の場所で記載のように、保存的置換および／または非保存的置換を含み得る。種々の実施形態では、本明細書の他の場所で記載のように、置換は非古典的アミノ酸も含んでよい。
本明細書に記載のように、改変シグナル伝達物質は、１つまたは複数の受容体に対し親和性および／または活性に影響を与える変異を有する。種々の実施形態では、治療受容体、例えば、それにより目的の治療効果が媒介される（例えば、アゴニズムまたはアンタゴニズム）受容体に対する低減された親和性および／または活性が存在する。種々の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、受容体、例えば、それにより目的の治療効果が媒介されない（例えば、結合の混乱状態の結果として）受容体に対する親和性および／または活性が実質的に低減または除去される変異を有する。改変シグナル伝達物質の受容体、例えば、本明細書に記載のサイトカイン、成長因子、およびホルモンのうちの１つの受容体は当技術分野において既知である。
受容体に対し低減された親和性および／または活性（例えば、アゴニスト活性）をもたらす変異の例は、国際公開第２０１３／１０７７９１号および国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１７／０６１５４４号（例えば、インターフェロンに関して）、国際公開第２０１５／００７５４２号（例えば、インターロイキンに関して）、および国際公開第２０１５／００７９０３号（例えば、ＴＮＦに関して）で見出され、これらのそれぞれの全内容は参照により本明細書に組み込まれる。治療受容体に対する親和性および／または活性（例えば、アンタゴニスト活性）を低減する変異の例は、国際公開第２０１５／００７５２０号で見出され、この全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、シグナル伝達物質のＩ型サイトカイン受容体、ＩＩ型サイトカイン受容体、ケモカイン受容体、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）スーパーファミリーの受容体、ＴＧＦベータ受容体、免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーの受容体、および／またはチロシンキナーゼスーパーファミリーの受容体に対する親和性および／または活性を低減させる１つまたは複数の変異を含む。
種々の実施形態では、シグナル伝達物質に対する受容体は、Ｉ型サイトカイン受容体である。Ｉ型サイトカイン受容体は当技術分野において既知であり、限定されないが、ＩＬ２（ベータサブユニット）、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ９、ＩＬ１１、ＩＬ１２、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｇ－ＣＳＦ、ＬＩＦ、ＣＮＴＦに対する受容体、および同様に、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、プロラクチン、および成長ホルモンに対する受容体が挙げられる。例示Ｉ型サイトカイン受容体としては、限定されないが、ＧＭ－ＣＳＦ受容体、Ｇ－ＣＳＦ受容体、ＬＩＦ受容体、ＣＮＴＦ受容体、ＴＰＯ受容体、およびＩ型ＩＬ受容体が挙げられる。
種々の実施形態では、シグナル伝達物質に対する受容体は、ＩＩ型サイトカイン受容体である。ＩＩ型サイトカイン受容体は、異種のサブユニットからなる多量体受容体であり、主にインターフェロンに対する受容体である。この受容体ファミリーは、限定されないが、インターフェロンα、インターフェロンβおよびインターフェロンγ、ＩＬ１０、ＩＬ２２、および組織因子に対する受容体を含む。例示ＩＩ型サイトカイン受容体としては、限定されないが、ＩＦＮα受容体（例えば、ＩＦＮＡＲ１およびＩＦＮＡＲ２）、ＩＦＮβ受容体、ＩＦＮγ受容体（例えば、ＩＦＮＧＲ１およびＩＦＮＧＲ２）、およびＩＩ型ＩＬ受容体が挙げられる。
種々の実施形態では、シグナル伝達物質に対する受容体は、Ｇタンパク質共役受容体である。ケモカイン受容体は、７回膜貫通型構造を有し、シグナル伝達のためにＧタンパク質に結合されるＧタンパク質共役受容体である。ケモカイン受容体としては、限定されないが、ＣＣケモカイン受容体、ＣＸＣケモカイン受容体、ＣＸ３Ｃケモカイン受容体、およびＸＣケモカイン受容体（ＸＣＲ１）が挙げられる。代表的ケモカイン受容体としては、限定されないが、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ３Ｂ、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＳＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ＸＣＲ１、およびＣＸ３ＣＲ１が挙げられる。
種々の実施形態では、シグナル伝達物質に対する受容体は、ＴＮＦＲファミリーメンバーである。腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）ファミリーメンバーは、細長い分子を作成するＣＸＸＣＸＸＣのコアモチーフを取り囲む３つのジスルフィド結合から形成されるシステインリッチドメイン（ＣＲＤ）を共有する。代表的腫瘍壊死因子受容体ファミリーとしては、下記が挙げられる：ＣＤ１２０ａ（ＴＮＦＲＳＦ１Ａ）、ＣＤ１２０ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ）、リンホトキシンベータ受容体（ＬＴＢＲ、ＴＮＦＲＳＦ３）、ＣＤ１３４（ＴＮＦＲＳＦ４）、ＣＤ４０（ＣＤ４０、ＴＮＦＲＳＦ５）、ＦＡＳ（ＦＡＳ、ＴＮＦＲＳＦ６）、ＴＮＦＲＳＦ６Ｂ（ＴＮＦＲＳＦ６Ｂ）、ＣＤ２７（ＣＤ２７、ＴＮＦＲＳＦ７）、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ１３７（ＴＮＦＲＳＦ９）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ（ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、（ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ（ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ（ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ）、ＲＡＮＫ（ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ）、破骨細胞分化抑制因子（ＴＮＦＲＳＦ１１Ｂ）、ＴＮＦＲＳＦ１２Ａ（ＴＮＦＲＳＦ１２Ａ）、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ）、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ（ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ）、ＴＮＦＲＳＦ１４（ＴＮＦＲＳＦ１４）、神経成長因子受容体（ＮＧＦＲ、ＴＮＦＲＳＦ１６）、ＴＮＦＲＳＦ１７（ＴＮＦＲＳＦ１７）、ＴＮＦＲＳＦ１８（ＴＮＦＲＳＦ１８）、ＴＮＦＲＳＦ１９（ＴＮＦＲＳＦ１９）、ＴＮＦＲＳＦ２１（ＴＮＦＲＳＦ２１）、およびＴＮＦＲＳＦ２５（ＴＮＦＲＳＦ２５）。ある実施形態では、ＴＮＦＲファミリーメンバーは、ＣＤ１２０ａ（ＴＮＦＲＳＦ１Ａ）またはＴＮＦ－Ｒ１である。別の実施形態では、ＴＮＦＲファミリーメンバーは、ＣＤ１２０ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ）またはＴＮＦ－Ｒ２である。
種々の実施形態では、シグナル伝達物質に対する受容体は、ＴＧＦベータ受容体である。ＴＧＦベータ受容体は、１回膜貫通型セリン／トレオニンキナーゼ受容体である。ＴＧＦベータ受容体としては、限定されないが、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、およびＴＧＦＢＲ３が挙げられる。
種々の実施形態では、シグナル伝達物質に対する受容体は、Ｉｇスーパーファミリー受容体である。免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーの受容体は、免疫グロブリンとの構造的相同性を共有する。Ｉｇスーパーファミリーの受容体としては、限定されないが、インターロイキン－１受容体、ＣＳＦ－１Ｒ、ＰＤＧＦＲ（例えば、ＰＤＧＦＲＡおよびＰＤＧＦＲＢ）、およびＳＣＦＲが挙げられる。
種々の実施形態では、シグナル伝達物質に対する受容体は、チロシンキナーゼスーパーファミリー受容体である。チロシンキナーゼチロシンキナーゼスーパーファミリーの受容体は、当該技術分野において周知である。２０のサブファミリーに分類される約５８個の受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）が存在する。チロシンキナーゼスーパーファミリーの受容体としては、限定されないが、ＦＧＦ受容体およびそれらの種々のアイソフォーム、例えば、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、およびＦＧＦＲ５が挙げられる。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はインターフェロンαである。このような実施形態では、改変ＩＦＮα物質は、ＩＦＮα／β受容体（ＩＦＮＡＲ）、すなわち、ＩＦＮＡＲ１および／またはＩＦＮＡＲ２鎖に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮα物質は、ＩＦＮα／β受容体（ＩＦＮＡＲ）、すなわち、ＩＦＮＡＲ１および／またはＩＦＮＡＲ２鎖に対し、実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
変異型のインターフェロンαは、当業者に既知である。ある例示的実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＦＮα２ａ（配列番号２８８）のアミノ酸配列を有するアレル型ＩＦＮα２ａである。
ある例示的実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＦＮα２ｂ（配列番号２８９）のアミノ酸配列（これはアミノ酸位置２３でＩＦＮα２ａと異なる）を有するアレル型のＩＦＮα２ｂである。
いくつかの実施形態では、上記ＩＦＮα２変異体（ＩＦＮα２ａまたはＩＦＮα２ｂ）は、位置１４４～１５４、例えば、アミノ酸位置１４８、１４９および／または１５３に、１つまたは複数のアミノ酸の変異が導入されている。いくつかの実施形態では、ＩＦＮα２変異体は、Ｌ１５３Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＭ１４８Ａから選択される１つまたは複数の変異を含む。このような変異体は、例えば、国際公開第２０１３／１０７７９１号およびＰｉｅｈｌｅｒら、（２０００）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ，２７５：４０４２５－３３に記載されている。これらの文献の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、ＩＦＮα２変異体は、ＩＦＮＡＲ１に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、国際公開第２０１０／０３０６７１号に記載のように、ＩＦＮα２変異体は、Ｆ６４Ａ、Ｎ６５Ａ、Ｔ６９Ａ、Ｌ８０Ａ、Ｙ８５Ａ、およびＹ８９Ａから選択される１つまたは複数の変異を含む。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、国際公開第２００８／１２４０８６号に記載のように、ＩＦＮα２変異体は、Ｋ１３３Ａ、Ｒ１４４Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＬ１５３Ａから選択される１つまたは複数の変異を含む。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、国際公開第２０１５／００７５２０号および国際公開第２０１０／０３０６７１号に記載のように、ＩＦＮα２変異体は、Ｒ１２０ＥおよびＲ１２０Ｅ／Ｋ１２１Ｅから選択される１つまたは複数の変異を含む。これらの特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。このような実施形態では、上記ＩＦＮα２変異体は、野生型ＩＦＮα２活性をアンタゴナイズする。このような実施形態では、上記変異体ＩＦＮα２は、ＩＦＮＡＲ１に対する低減された親和性および／または活性を有するが、ＩＦＮＡＲ２に対する活性は保持される。
いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮα２変異体は、（１）Ｒ１２０ＥおよびＲ１２０Ｅ／Ｋ１２１Ｅから選択される１つまたは複数の変異（理論に束縛されることを望むものではないが、これらはアンタゴニスト効果を作り出す）、および（２）Ｋ１３３Ａ、Ｒ１４４Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＬ１５３Ａから選択される１つまたは複数の変異（理論に束縛されることを望むものではないが、これらは、例えば、ＩＦＮＡＲ２に対する減弱化効果を可能とする）を含む。ある実施形態では、ヒトＩＦＮα２変異体は、Ｒ１２０ＥおよびＬ１５３Ａを含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮα２変異体は、国際公開第２０１３／０５９８８５号に開示のように、Ｌ１５Ａ、Ａ１９Ｗ、Ｒ２２Ａ、Ｒ２３Ａ、Ｌ２６Ａ、Ｆ２７Ａ、Ｌ３０Ａ、Ｌ３０Ｖ、Ｋ３１Ａ、Ｄ３２Ａ、Ｒ３３Ｋ、Ｒ３３Ａ、Ｒ３３Ｑ、Ｈ３４Ａ、Ｄ３５Ａ、Ｑ４０Ａ、Ｄ１１４Ｒ、Ｌ１１７Ａ、Ｒ１２０Ａ、Ｒ１２５Ａ、Ｋ１３４Ａ、Ｒ１４４Ａ、Ａ１４５Ｇ、Ａ１４５Ｍ、Ｍ１４８Ａ、Ｒ１４９Ａ、Ｓ１５２Ａ、Ｌ１５３Ａ、およびＮ１５６Ａから選択される１つまたは複数の変異を含み、この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、ヒトＩＦＮα２変異体は、変異Ｈ５７Ｙ、Ｅ５８Ｎ、Ｑ６１Ｓ、および／またはＬ３０Ａを含む。いくつかの実施形態では、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、ヒトＩＦＮα２変異体は、変異Ｈ５７Ｙ、Ｅ５８Ｎ、Ｑ６１Ｓ、および／またはＲ３３Ａを含む。いくつかの実施形態では、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、ヒトＩＦＮα２変異体は、変異Ｈ５７Ｙ、Ｅ５８Ｎ、Ｑ６１Ｓ、および／またはＭ１４８Ａを含む。いくつかの実施形態では、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、ヒトＩＦＮα２変異体は、変異Ｈ５７Ｙ、Ｅ５８Ｎ、Ｑ６１Ｓ、および／またはＬ１５３Ａを含む。いくつかの実施形態では、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、ヒトＩＦＮα２変異体は、変異Ｎ６５Ａ、Ｌ８０Ａ、Ｙ８５Ａ、および／またはＹ８９Ａを含む。いくつかの実施形態では、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、ヒトＩＦＮα２変異体は、変異Ｎ６５Ａ、Ｌ８０Ａ、Ｙ８５Ａ、Ｙ８９Ａおよび／またはＤ１１４Ａを含む。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はインターフェロンβである。このような実施形態では、改変インターフェロンβ物質は、ＩＦＮα／β受容体（ＩＦＮＡＲ）、すなわち、ＩＦＮＡＲ１および／またはＩＦＮＡＲ２鎖に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮβ物質は、ＩＦＮα／β受容体（ＩＦＮＡＲ）、すなわち、ＩＦＮＡＲ１および／またはＩＦＮＡＲ２鎖に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＦＮβである。種々の実施形態では、ＩＦＮβは、官能性誘導体、類似体、前駆物質、アイソフォーム、スプライスバリアント、またはＩＦＮβのフラグメントを包含する。種々の実施形態では、ＩＦＮβは、任意の種由来のＩＦＮβを包含する。ある実施形態では、キメラタンパク質は、改変型のマウスＩＦＮβを含む。ある実施形態では、キメラタンパク質は、改変型のヒトＩＦＮβを含む。ヒトＩＦＮβは、１６６個のアミノ酸残基を含む約２２ｋＤａの分子量を有するポリペプチドである。ヒトＩＦＮβのアミノ酸配列は、配列番号２９０である。
いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮβは、ヒトＩＦＮβのグリコシル化型であるＩＦＮβ１ａである。いくつかの実施形態では、ＩＦＮβは、Ｍｅｔ－１欠失およびＣｙｓ－１７のＳｅｒへの変異を有する非グリコシル化型のヒトＩＦＮβであるＩＦＮβ１ｂである。
種々の実施形態では、改変ＩＦＮβは、ＩＦＮＡＲのＩＦＮＡＲ１サブユニットに対するその結合または親和性を低減する１つまたは複数の変異を有する。一実施形態では、改変ＩＦＮβは、ＩＦＮＡＲ１に対する低減された親和性および／または活性を有する。種々の実施形態では、改変ＩＦＮβは、ヒトＩＦＮβであり、位置Ｆ６７、Ｒ７１、Ｌ８８、Ｙ９２、Ｉ９５、Ｎ９６、Ｋ１２３、およびＲ１２４に１つまたは複数の変異を有する。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の変異は、Ｆ６７Ｇ、Ｆ６７Ｓ、Ｒ７１Ａ、Ｌ８８Ｇ、Ｌ８８Ｓ、Ｙ９２Ｇ、Ｙ９２Ｓ、Ｉ９５Ａ、Ｎ９６Ｇ、Ｋ１２３Ｇ、およびＲ１２４Ｇから選択される置換である。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｆ６７Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｋ１２３Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｆ６７ＧおよびＲ７１Ａ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｌ８８ＧおよびＹ９２Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｙ９２Ｇ、Ｉ９５Ａ、およびＮ９６Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｋ１２３ＧおよびＲ１２４Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｆ６７Ｇ、Ｌ８８Ｇ、およびＹ９２Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｆ６７Ｓ、Ｌ８８Ｓ、およびＹ９２Ｓ変異を含む。
いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮβは、ＩＦＮＡＲのＩＦＮＡＲ２サブユニットに対するその結合または親和性を低減する１つまたは複数の変異を有する。一実施形態では、改変ＩＦＮβは、ＩＦＮＡＲ２に対する低減された親和性および／または活性を有する。種々の実施形態では、改変ＩＦＮβは、ヒトＩＦＮβであり、位置Ｗ２２、Ｒ２７、Ｌ３２、Ｒ３５、Ｖ１４８、Ｌ１５１、Ｒ１５２、およびＹ１５５に１つまたは複数の変異を有する。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の変異は、Ｗ２２Ｇ、Ｒ２７Ｇ、Ｌ３２Ａ、Ｌ３２Ｇ、Ｒ３５Ａ、Ｒ３５Ｇ、Ｖ１４８Ｇ、Ｌ１５１Ｇ、Ｒ１５２Ａ、Ｒ１５２Ｇ、およびＹ１５５Ｇから選択される置換である。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｗ２２Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｌ３２Ａ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｌ３２Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｒ３５Ａ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｒ３５Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｖ１４８Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｒ１５２Ａ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｒ１５２Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｙ１５５Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｗ２２ＧおよびＲ２７Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｌ３２ＡおよびＲ３５Ａ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｌ１５１ＧおよびＲ１５２Ａ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｖ１４８ＧおよびＲ１５２Ａ変異を含む。
いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮβは、１つまたは複数の次の変異を有する：Ｒ３５Ａ、Ｒ３５Ｔ、Ｅ４２Ｋ、Ｍ６２Ｉ、Ｇ７８Ｓ、Ａ１４１Ｙ、Ａ１４２Ｔ、Ｅ１４９Ｋ、およびＲ１５２Ｈ。いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮβは、１つまたは複数の次の変異を有する：Ｃ１７ＳまたはＣ１７Ａと組み合わせた、Ｒ３５Ａ、Ｒ３５Ｔ、Ｅ４２Ｋ、Ｍ６２Ｉ、Ｇ７８Ｓ、Ａ１４１Ｙ、Ａ１４２Ｔ、Ｅ１４９Ｋ、およびＲ１５２Ｈ。
いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮβは、１つまたは複数の次の変異を有する：本明細書で記載の他のＩＦＮβ変異と組み合わせた、Ｒ３５Ａ、Ｒ３５Ｔ、Ｅ４２Ｋ、Ｍ６２Ｉ、Ｇ７８Ｓ、Ａ１４１Ｙ、Ａ１４２Ｔ、Ｅ１４９Ｋ、およびＲ１５２Ｈ。
ヒトＩＦＮβの結晶構造は既知であり、Ｋａｒｐｕｓａｓ ｅｔ ａｌ．，（１９９８）ＰＮＡＳ，９４（２２）：１１８１３－１１８１８に記載されている。特に、ヒトＩＦＮβの構造は、５つのαヘリックス（すなわち、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、およびＥ）およびこれらのヘリックスを連結する４つのループ領域（すなわち、ＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、およびＤＥループ）を含むことが示された。種々の実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅヘリックスおよび／またはＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、およびＤＥループ中に、ＩＦＮＡＲなどの治療受容体に対するその結合親和性または活性を低減させる１つまたは複数の変異を有する。代表的変異は、国際公開第２０００／０２３１１４号および米国特許出願公開第２０１５００１１７３２号に記載されている。これらの全内容は参照により本明細書に組み込まれる。代表的実施形態では、改変ＩＦＮβは、アミノ酸位置１５、１６、１８、１９、２２、および／または２３にアラニン置換を含むヒトＩＦＮβである。代表的実施形態では、改変ＩＦＮβは、アミノ酸位置２８～３０、３２、および３３にアラニン置換を含むヒトＩＦＮβである。代表的実施形態では、改変ＩＦＮβは、アミノ酸位置３６、３７、３９、および４２にアラニン置換を含むヒトＩＦＮβである。代表的実施形態では、改変ＩＦＮβは、アミノ酸位置６４および６７にアラニン置換を含み、位置６８にセリン置換を含むヒトＩＦＮβである。代表的実施形態では、改変ＩＦＮβは、アミノ酸位置７１～７３にアラニン置換を含むヒトＩＦＮβである。代表的実施形態では、改変ＩＦＮβは、アミノ酸位置９２、９６、９９、および１００にアラニン置換を含むヒトＩＦＮβである。代表的実施形態では、改変ＩＦＮβは、アミノ酸位置１２８、１３０、１３１、および１３４にアラニン置換を含むヒトＩＦＮβである。代表的実施形態では、改変ＩＦＮβは、アミノ酸位置１４９、１５３、１５６、および１５９にアラニン置換を含むヒトＩＦＮβである。いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２９０およびＷ２２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２９０およびＲ２７での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２９０およびＷ２２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＲ２７での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２９０およびＬ３２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２９０およびＲ３５での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２９０およびＬ３２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＲ３５での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２９０およびＦ６７での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２９０およびＲ７１での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２９０およびＦ６７での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＲ７１での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２９０およびＬ８８での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２９０およびＹ９２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２９０およびＦ６７での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、およびＬ８８での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、およびＹ９２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２９０およびＬ８８での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＹ９２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２９０およびＩ９５での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＹ９２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２９０およびＮ９６での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＹ９２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２９０およびＹ９２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、およびＩ９５での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、およびＮ９６での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２９０およびＫ１２３での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２９０およびＲ１２４での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２９０およびＫ１２３での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＲ１２４での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２９０およびＬ１５１での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２９０およびＲ１５２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２９０およびＬ１５１での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＲ１５２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２９０およびＶ１４８での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、およびメチオニン（Ｍ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２９０およびＶ１４８での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＲ１５２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２９０およびＲ１５５での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号２９０のアミノ酸配列および位置Ｗ２２に変異を有し、変異は脂肪族疎水性残基である改変ＩＦＮβ；および（ｂ）１つまたは複数の標的化部分を含むキメラタンパク質に関し、上記標的化部分は、目的の抗原または受容体（例えば、ＣＤ８）に特異的に結合する認識ドメインを含み、改変ＩＦＮβおよび標的化部分は、任意に１つまたは複数のリンカーにより連結されていてもよい。種々の実施形態では、位置Ｗ２２の変異は、Ｇ、Ａ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、およびＶから選択される脂肪族疎水性残基である。種々の実施形態では、位置Ｗ２２の変異はＧである。
追加の代表的ＩＦＮβ変異体は、国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１７／０６１５４４号で提供される。この全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はインターフェロンγである。このような実施形態では、改変インターフェロンγ物質は、インターフェロンガンマ受容体（ＩＦＮＧＲ）、すなわち、ＩＦＮＧＲ１および／またはＩＦＮＧＲ２鎖に対し、低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変インターフェロンγ物質は、インターフェロンガンマ受容体（ＩＦＮＧＲ）、すなわち、ＩＦＮＧＲ１および／またはＩＦＮＧＲ２鎖に対し、実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）である。ＶＥＧＦは、生理学的であるが病的でもある血管新生において重要な役割を果たし、血管透過性を調節し、ＶＥＧＦ受容体を発現する細胞に対して成長因子として作用できる、強力な成長因子である。さらなる機能は、特に、マクロファージ系統および内皮細胞の細胞遊走の刺激を含む。少なくとも３個の受容体（ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２およびＶＥＧＦＲ３）に加えて、ＶＥＧＦ成長因子ファミリーのいくつかのメンバーが存在する。ＶＥＧＦファミリーのメンバーは、２種以上のＶＥＧＦＲタイプを結合し活性化できる。例えば、ＶＥＧＦ－Ａは、ＶＥＧＦＲ１およびＶＥＧＦＲ２を結合し、一方、ＶＥＧＦ－Ｃは、ＶＥＧＦＲ２およびＶＥＧＦＲ３を結合できる。ＶＥＧＦＲ１およびＶＥＧＦＲ２活性化は、血管新生を調節し、ＶＥＧＦＲ３活性化は、リンパ脈管新生に関与する。大部分の血管新生促進シグナルは、ＶＥＧＦＲ２の活性化から生成される。ＶＥＧＦＲ１活性化は、血管新生の負の役割と関連する可能性があることが報告された。ＶＥＧＦＲ１シグナル伝達は、腫瘍の骨髄由来ＶＥＧＦＲ１陽性細胞を介したインビボ進行にも重要である（骨中の転移前微小環境の形成の一因となる）ことも報告された。治療抗体を指向する／治療抗体を中和するＶＥＧＦ－Ａをベースにしたいくつかの治療法が、主に、血管新生に依存する種々のヒト腫瘍の治療での使用のために開発されてきた。しかし、これらは、副作用がないわけではない。これは、これらが一般的な非細胞／組織特異的ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ相互作用阻害剤として作用することを考慮すると驚くべきことではない。従って、特定の標的細胞（例えば、腫瘍血管系内皮細胞）に対するＶＥＧＦ（例えば、ＶＥＧＦ－Ａ）／ＶＥＧＦＲ２阻害を制限することが望ましいであろう。
いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦは、ＶＥＧＦ－Ａ、ＶＥＧＦ－Ｂ、ＶＥＧＦ－Ｃ、ＶＥＧＦ－Ｄ、またはＶＥＧＦ－ＥおよびＶＥＧＦ１２１、ＶＥＧＦ１２１ｂ、ＶＥＧＦ１４５、ＶＥＧＦ１６５、ＶＥＧＦ１６５ｂ、ＶＥＧＦ１８９、およびＶＥＧＦ２０６などの種々のＶＥＧＦ－Ａのアイソフォームを含むこれらのアイソフォームである。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ－１（Ｆｌｔ－１）および／またはＶＥＧＦＲ－２（ＫＤＲ／Ｆｌｋ－１）に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ－１（Ｆｌｔ－１）および／またはＶＥＧＦＲ－２（ＫＤＲ／Ｆｌｋ－１）に対する低減または除去された親和性および／または活性を有する。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ－２（ＫＤＲ／Ｆｌｋ－１）に対する低減された親和性および／または活性を有し、および／またはＶＥＧＦＲ－１（Ｆｌｔ－１）に対する低減または除去された親和性および／または活性を有する。このような実施形態は、例えば、創傷治癒方法または虚血関連疾患の治療で使用される（理論に束縛されることを意図するものではないが、内皮細胞機能および血管新生に対するＶＥＧＦＲ２の効果により媒介されて）。種々の実施形態では、癌および炎症促進性活性と関連するＶＥＧＦＲ－１（Ｆｌｔ－１）への結合が回避される。種々の実施形態では、ＶＥＧＦＲ－１（Ｆｌｔ－１）は、デコイ受容体として機能し、そのため、この受容体に対する親和性を実質的に低減または除去し、治療薬の隔離を回避する。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ－１（Ｆｌｔ－１）に対する低減または除去された親和性および／または活性を有し、および／またはＶＥＧＦＲ－２（ＫＤＲ／Ｆｌｋ－１）に対する低減または除去された親和性および／または活性を有する。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ３に対する低減された親和性および／または活性を有する。あるいは、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ３に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
血管新生促進治療法はまた、種々の疾患（例えば、虚血性心疾患、出血など）に重要であり、ＶＥＧＦベース治療薬を含む。ＶＥＧＦＲ２の活性化は血管新生促進性である（内皮細胞上で作用する）。ＶＥＧＦＲ１は、炎症細胞（例えば、マクロファージを含む）の遊走の刺激を生じ、血管過多透過性に関連する炎症をもたらし得る。ＶＥＧＦＲ１の活性化はまた、腫瘍微小環境形成に関連する骨髄を活性化できる。従って、ＶＥＧＦＲ２活性化に対し選択性があるＶＥＧＦベース治療薬は、この場合には望ましいであろう。さらに、例えば、内皮細胞を特異的に標的とする細胞が望ましいであろう。
いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ－２に対する低減された親和性および／または活性（例えば、拮抗的な）を有し、および／またはＶＥＧＦＲ－１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。腫瘍内皮細胞マーカー（例えば、ＰＳＭＡなど）に結合する標的化部分を介して腫瘍血管系内皮細胞を標的にする場合、このような構築物は、このようなマーカー陽性細胞上で特異的にＶＥＧＦＲ２活性化を阻害するが、標的細胞へ向かう途上および標的細胞上では（活性が除去された場合）ＶＥＧＦＲ１を活性化せず、従って、例えば、炎症反応の誘導を無くする。これは、ＶＥＧＦ－Ａ中和療法に比べて、多くの腫瘍型に対するより選択的で安全な抗血管新生薬療法を提供することになろう。
いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ－２に対する低減された親和性および／または活性（例えば、アゴニスト活性）を有し、および／またはＶＥＧＦＲ－１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。血管内皮細胞への標的化により、いくつかの実施形態では、このような構築物は、ＶＥＧＦＲ１が関連する炎症反応誘導を生じることなく、血管新生を促進する。従って、このような構築物は、ＶＥＧＦＲ２ならびにＶＥＧＦＲ１の全身性活性化に起因する副作用の実質的に低減されたリスクを有する、標的化血管新生促進効果を有するであろう。
ある例示的実施形態では、改変シグナル伝達物質は、配列番号２９１のアミノ酸を有するＶＥＧＦ１６５である。
別の例示的実施形態では、改変シグナル伝達物質は、配列番号２９２のアミノ酸配列を有するＶＥＧＦ１６５ｂである。
これらの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、アミノ酸Ｉ８３に変異を有する（例えば、Ｉ８３での置換変異、例えば、Ｉ８３Ｋ、Ｉ８３Ｒ、またはＩ８３Ｈ）。理論に束縛されることを意図するものではないが、このような変異は、低減された受容体結合親和性を生じ得ると考えられている。例えば、米国特許第９，０７８，８６０号を参照されたい。この全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＴＮＦαである。ＴＮＦは、細胞増殖、分化、アポトーシス、腫瘍形成、ウイルス複製、自己免疫、免疫細胞機能および輸送、炎症、ならびに敗血性ショックの調節を含む、多くの多様な機能を有する多面的サイトカインである。それは、標的細胞：ＴＮＦＲ１（ｐ５５）およびＴＮＦＲ２（ｐ７５）上の２つの別々の膜受容体に結合する。ＴＮＦＲ１は非常に広範な発現パターンを示すが、ＴＮＦＲ２はリンパ球、Ｔｒｅｇ、内皮細胞、特定のニューロン、ミクログリア、心筋細胞および間葉系幹細胞の特定の集団上で選択的に発現される。受容体活性化に応答して、全く別々の生物学的経路が活性化されるが、若干の重なり合いも存在する。一般原則として、理論に束縛されることを望むものではないが、ＴＮＦＲ１シグナル伝達はアポトーシス（細胞死）の誘導に関連し、ＴＮＦＲ２シグナル伝達は細胞生存シグナルの活性化に関連する（例えば、ＮＦκＢ経路の活性化）。ＴＮＦの投与は、全身的毒性であり、これは主にＴＮＦＲ１の関与のためである。しかし、ＴＮＦＲ２の活性化もまた、ＴＮＦＲ１と同様に、多様な作用に関連し、ＴＮＦ系治療薬の開発においては、ＴＮＦ標的化および活性に対する制御が重要であることに留意されたい。
いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦＲ１および／またはＴＮＦＲ２に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦＲ１および／またはＴＮＦＲ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。ＴＮＦＲ１はほとんどの組織で発現され、かつ細胞死シグナル伝達に関与するが、対照的に、ＴＮＦＲ２は細胞生存シグナルに関与する。したがって、癌の治療法に関する実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦＲ１に対する低減された親和性および／または活性を有し、および／またはＴＮＦＲ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。これらの実施形態では、キメラタンパク質は、アポトーシスが望ましい細胞、例えば、腫瘍細胞または腫瘍血管内皮細胞を標的にし得る。例えば、神経変性障害の治療のためのニューロン新生における、細胞生存を促進する方法に関する実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦＲ２に対する低減された親和性および／または活性および／またはＴＮＦＲ１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。言い方を変えれば、本キメラタンパク質は、いくつかの実施形態では、死シグナルまたは生存シグナルのどちらかを優先できる改変ＴＮＦα物質を含む。
いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、ＴＮＦＲ１に対する低減された親和性および／または活性および／またはＴＮＦＲ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する改変ＴＮＦを有する。このようなキメラは、いくつかの実施形態では、野生型ＴＮＦおよび／またはＴＮＦＲ１に対する低減された親和性および／または活性をもたらす変異のみを有するキメラに比べて、より強力なアポトーシスの誘導因子である。このようなキメラは、いくつかの実施形態では、腫瘍細胞死または腫瘍血管内皮細胞死の誘導に使用される（例えば、癌の治療において）。また、いくつかの実施形態では、これらのキメラは、例えば、ＴＮＦＲ２を介してＴｒｅｇ細胞の活性化を回避または低減し、したがってインビボでのＴＮＦＲ１介在性抗腫瘍活性をさらに支持する。
いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、ＴＮＦＲ２に対する低減された親和性および／または活性を有し、および／またはＴＮＦＲ１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する改変ＴＮＦを有する。このようなキメラは、いくつかの実施形態では、いくつかの細胞型での細胞生存のより強力な活性化因子であり、これは種々の疾患における具体的治療目的であり得、限定されないが、ニューロン新生の刺激を含む。さらに、このようなＴＮＦＲ２選択キメラはまた、自己免疫疾患（例えば、クローン病、糖尿病、ＭＳ、大腸炎など、および本明細書に記載の多くの他の疾患）の治療において有用である。いくつかの実施形態では、キメラは自己反応性Ｔ細胞を標的にする。いくつかの実施形態では、キメラは、Ｔｒｅｇ細胞活性化および細胞傷害性Ｔ細胞の間接的抑制を促進する。
いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、例えば、ＴＮＦＲ２の活性化および／またはＴＮＦＲ１の回避により（例えば、ＴＮＦＲ２に対する低減された親和性および／または活性を有し、および／またはＴＮＦＲ１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する改変ＴＮＦにより）自己反応性Ｔ細胞の死をもたらす。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの自己反応性Ｔ細胞は、ＮＦκＢ経路活性／シグナル伝達の変化により、変更されたアポトーシス／生存シグナルを有する。いくつかの実施形態では、キメラは、細胞死（アポトーシス）／生存シグナル特性の不均衡の根底にある、ＮＦκＢ経路での損傷または変更および、場合により特定の死誘導シグナルに対する変更された感受性（例えば、ＴＮＦＲ２活性化）を有する自己反応性Ｔ細胞の死をもたらす。
いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ２ベースキメラは、種々の自己免疫疾患、特に、心臓疾患、脱髄性および神経変性障害、および感染症を含む疾患に対する追加の治療用途を有する。
ある実施形態では、野生型ＴＮＦαは、配列番号２９３のアミノ酸配列を有する。
このような実施形態では、改変ＴＮＦα物質は、１つまたは複数のアミノ酸位置２９、３１、３２、８４、８５、８６、８７、８８、８９、１４５、１４６および１４７に変異を有し、これが、低減された受容体結合親和性を有する改変ＴＮＦαをもたらす。例えば、米国特許第７，９９３，６３６号を参照されたい。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７９０３号に記載のように、改変ヒトＴＮＦα部分は、アミノ酸位置Ｒ３２、Ｎ３４、Ｑ６７、Ｈ７３、Ｌ７５、Ｔ７７、Ｓ８６、Ｙ８７、Ｖ９１、Ｉ９７、Ｔ１０５、Ｐ１０６、Ａ１０９、Ｐ１１３、Ｙ１１５、Ｅ１２７、Ｎ１３７、Ｄ１４３、Ａ１４５、およびＥ１４６のうちの１つまたは複数に変異を有する（ジェンバンク受入番号ＢＡＧ７０３０６、バージョンＢＡＧ７０３０６．１ ＧＩ：１９７６９２６８５、ヒトＴＮＦ配列に従ってナンバリング）。いくつかの実施形態では、改変ヒトＴＮＦα部分は、Ｌ２９Ｓ、Ｒ３２Ｇ、Ｒ３２Ｗ、Ｎ３４Ｇ、Ｑ６７Ｇ、Ｈ７３Ｇ、Ｌ７５Ｇ、Ｌ７５Ａ、Ｌ７５Ｓ、Ｔ７７Ａ、Ｓ８６Ｇ、Ｓ８６Ｔ、Ｙ８７Ｑ、Ｙ８７Ｌ、Ｙ８７Ａ、Ｙ８７Ｆ、Ｙ８７Ｈ、Ｖ９１Ｇ、Ｖ９１Ａ、Ｉ９７Ａ、Ｉ９７Ｑ、Ｉ９７Ｓ、Ｔ１０５Ｇ、Ｐ１０６Ｇ、Ａ１０９Ｙ、Ｐ１１３Ｇ、Ｙ１１５Ｇ、Ｙ１１５Ａ、Ｅ１２７Ｇ、Ｎ１３７Ｇ、Ｄ１４３Ｎ、Ａ１４５Ｇ、Ａ１４５Ｒ、Ａ１４５Ｔ、Ｅ１４６Ｄ、Ｅ１４６Ｋ、およびＳ１４７Ｄから選択される置換変異を有する。ある実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｙ８７Ｑ、Ｙ８７Ｌ、Ｙ８７Ａ、およびＹ８７Ｆ、およびＹ８７Ｈから選択される変異を有する。別の実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｉ９７Ａ、Ｉ９７Ｑ、およびＩ９７Ｓから選択される変異を有する。さらなる実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｙ１１５ＡおよびＹ１１５Ｇから選択される変異を有する。ある実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｅ１４６Ｋ変異を有する。ある実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｙ８７ＨおよびＥ１４６Ｋ変異を有する。ある実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｙ８７ＨおよびＡ１４５Ｒ変異を有する。ある実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｒ３２ＷおよびＳ８６Ｔ変異を有する。ある実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｒ３２ＷおよびＥ１４６Ｋ変異を有する。ある実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｌ２９ＳおよびＲ３２Ｗ変異を有する。ある実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｄ１４３ＮおよびＡ１４５Ｒ変異を有する。ある実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｄ１４３ＮおよびＡ１４５Ｒ変異を有する。ある実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ａ１４５Ｔ、Ｅ１４６Ｄ、およびＳ１４７Ｄ変異を有する。ある実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ａ１４５Ｔ、およびＳ１４７Ｄ変異を有する。
いくつかの実施形態では、国際公開第２００８／１２４０８６号に記載のように、改変ＴＮＦα物質は、Ｎ３９Ｙ、Ｓ１４７Ｙ、およびＹ８７Ｈから選択される１つまたは複数の変異を含む。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、改変ヒトＴＮＦα部分は、国際出願第ＰＣＴ／ＩＢ２０１６／００１６６８号に記載のような受容体選択性をもたらす変異を有する。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、ＴＮＦに対する変異は、ＴＮＦＲ１選択的である。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ１選択的であるＴＮＦに対する変異は、位置Ｒ３２、Ｓ８６、およびＥ１４６のうちの１つまたは複数に対するものである。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ１選択的であるＴＮＦに対する変異は、Ｒ３２Ｗ、Ｓ８６Ｔ、およびＥ１４６Ｋのうちの１つまたは複数である。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ１選択的であるＴＮＦに対する変異は、Ｒ３２Ｗ、Ｒ３２Ｗ／Ｓ８６Ｔ、Ｒ３２Ｗ／Ｅ１４６ＫおよびＥ１４６Ｋのうちの１つまたは複数である。いくつかの実施形態では、ＴＮＦに対する変異は、ＴＮＦＲ２選択的である。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ２選択的であるＴＮＦに対する変異は、位置Ａ１４５、Ｅ１４６、およびＳ１４７のうちの１つまたは複数に対するものである。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ２選択的であるＴＮＦに対する変異は、Ａ１４５Ｔ、Ａ１４５Ｒ、Ｅ１４６Ｄ、およびＳ１４７Ｄのうちの１つまたは複数である。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ２選択的であるＴＮＦに対する変異は、Ａ１４５Ｒ、Ａ１４５Ｔ／Ｓ１４７Ｄ、およびＡ１４５Ｔ／Ｅ１４６Ｄ／Ｓ１４７Ｄのうちの１つまたは複数である。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＴＮＦβである。ＴＮＦβは、ＬＴβ（ＬＴα１β２）と、ホモトリマーまたはヘテロトリマーを形成できる。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦＲ１および／またはＴＮＦＲ２および／またはヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＥＶＭ）および／またはＬＴβＲに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
ある実施形態では、野生型ＴＮＦβは、ＴＮＦベータ配列番号２９４のアミノ酸配列を有する。
このような実施形態では、改変可溶性物質は、１つまたは複数のアミノ酸位置１０６～１１３に変異を含み得、これが、ＴＮＦＲ２に対する低減された受容体結合親和性を有する改変ＴＮＦβをもたらす。ある実施形態では、改変可溶性物質は、アミノ酸位置１０６～１１３に１つまたは複数の置換変異を有する。例示的実施形態では、置換変異は、Ｑ１０７Ｅ、Ｑ１０７Ｄ、Ｓ１０６Ｅ、Ｓ１０６Ｄ、Ｑ１０７Ｒ、Ｑ１０７Ｎ、Ｑ１０７Ｅ／Ｓ１０６Ｅ、Ｑ１０７Ｅ／Ｓ１０６Ｄ、Ｑ１０７Ｄ／Ｓ１０６Ｅ、およびＱ１０７Ｄ／Ｓ１０６Ｄから選択される。別の実施形態では、改変可溶性物質は、位置１０６～１１３に、約１～約３個のアミノ酸の挿入を有する。
いくつかの実施形態では、国際公開第２０１５／００７９０３号に記載のように、改変物質は、ＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ）であり、これは、単鎖トリマー型であり得る。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、改変物質は、ＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ）であり、これは、ＴＮＦＲ１に対し、低減された親和性および／または活性、すなわちアンタゴニスト活性（例えば、天然のアンタゴニスト活性または１つまたは複数の変異の結果としてのアンタゴニスト活性、例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照）を有する。これらの実施形態では、改変物質は、ＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ）であり、これもまた、場合により、ＴＮＦＲ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変物質は、ＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ）であり、これは、ＴＮＦＲ２に対し、低減された親和性および／または活性、すなわちアンタゴニスト活性（例えば、天然のアンタゴニスト活性または１つまたは複数の変異の結果としてのアンタゴニスト活性、例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）を有する。これらの実施形態では、改変物質は、ＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ）であり、これも同様に、場合により、ＴＮＦＲ１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。このような実施形態の構築物は、例えば、細胞特異的な様式でＴＮＦ応答を抑制する方法において使用される。いくつかの実施形態では、アンタゴニストＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ）は、国際公開第２０１５／００７９０３号に記載のように、単鎖トリマー型である。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＴＲＡＩＬである。いくつかの実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、ＤＲ４（ＴＲＡＩＬ－ＲＩ）および／またはＤＲ５（ＴＲＡＩＬ－ＲＩＩ）および／またはＤｃＲ１および／またはＤｃＲ２に対して、低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、ＤＲ４（ＴＲＡＩＬ－ＲＩ）および／またはＤＲ５（ＴＲＡＩＬ－ＲＩＩ）および／またはＤｃＲ１および／またはＤｃＲ２に対して、低減された親和性および／または活性を有する。
ある実施形態では、野生型ＴＲＡＩＬは、ＴＲＡＩＬ配列番号２９５のアミノ酸配列を有する。
このような実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、アミノ酸位置Ｔ１２７～Ｒ１３２、Ｅ１４４～Ｒ１４９、Ｅ１５５～Ｈ１６１、Ｙ１８９～Ｙ２０９、Ｔ２１４～１２２０，Ｋ２２４～Ａ２２６、Ｗ２３１、Ｅ２３６～Ｌ２３９、Ｅ２４９～Ｋ２５１、Ｔ２６１～Ｈ２６４およびＨ２７０～Ｅ２７１に変異を含み得る（ジェンバンク受入番号ＮＰ＿００３８０１、バージョン１０ＮＰ＿００３８０１．１、ＧＩ：４５０７５９３、ヒト配列に基づいてナンバリング、上記参照）。
いくつかの実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、ＴＲＡＩＬ－Ｒ１に対するその親和性および／または活性を実質的に低減する１つまたは複数の変異を含み得る。このような実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、ＴＲＩＬ－Ｒ２に特異的に結合し得る。代表的変異は、アミノ酸位置Ｙ１８９、Ｒ１９１、Ｑ１９３、Ｈ２６４、Ｉ２６６、およびＤ２６７のうちの１つまたは複数での変異が挙げられる。例えば、変異は、Ｙ１８９Ｑ、Ｒ１９１Ｋ、Ｑ１９３Ｒ、Ｈ２６４Ｒ、Ｉ２６６ＬおよびＤ２６７Ｑのうちの１つまたは複数であり得る。ある実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、変異Ｙ１８９Ｑ、Ｒ１９１Ｋ、Ｑ１９３Ｒ、Ｈ２６４Ｒ、Ｉ２６６ＬおよびＤ２６７Ｑを含む。
いくつかの実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、ＴＲＡＩＬ－Ｒ２に対するその親和性および／または活性を実質的に低減する１つまたは複数の変異を含み得る。このような実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、ＴＲＩＬ－Ｒ１に特異的に結合し得る。代表的変異には、アミノ酸位置Ｇ１３１、Ｒ１４９、Ｓ１５９、Ｎ１９９、Ｋ２０１、およびＳ２１５のうちの１つまたは複数の変異が挙げられる。例えば、変異は、Ｇ１３１Ｒ、Ｒ１４９Ｉ、Ｓ１５９Ｒ、Ｎ１９９Ｒ、Ｋ２０１Ｈ、およびＳ２１５Ｄのうちの１つまたは複数であり得る。ある実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、変異Ｇ１３１Ｒ、Ｒ１４９Ｉ、Ｓ１５９Ｒ、Ｎ１９９Ｒ、Ｋ２０１Ｈ、およびＳ２１５Ｄを含む。さらなるＴＲＡＩＬ変異は、例えば、Ｔｒｅｂｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，（２０１４）Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ ａｎｄ Ｄｉｓｅａｓｅ，５：ｅ１０３５に記載されている。これらの全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＴＧＦαである。このような実施形態では、改変ＴＧＦα物質は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変ＴＧＦα物質は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＴＧＦβである。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＧＦＢＲ１および／またはＴＧＦＢＲ２に対する低減された親和性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＧＦＢＲ１および／またはＴＧＦＢＲ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、場合により、ＴＧＦＢＲ３に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有し、これは、理論に束縛されることを意図するものではないが、ＴＧＦベータ受容体に対するリガンドのリザーバーとして作用し得る。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβは、ＴＧＦＢＲ２よりもＴＧＦＢＲ１またはＴＧＦＢＲ１よりもＴＧＦＢＲ２を選択する。同様に、理論に束縛されることを意図するものではないが、ＬＡＰは、ＴＧＦベータ受容体に対するリガンドのリザーバーとして作用し得る。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＧＦＢＲ１および／またはＴＧＦＢＲ２に対する低減された親和性および／または活性および／または潜在関連ペプチド（ＬＡＰ）に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、このようなキメラは、カムラチ・エンゲルマン病、または不適切なＴＧＦβシグナル伝達に関連する他の疾患において使用される。
いくつかの実施形態では、改変物質は、ＴＧＦファミリーメンバー（例えば、ＴＧＦα、ＴＧＦβ）であり、これは、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＧＦＢＲ３のうちの１つまたは複数に対し、低減された親和性および／または活性、すなわち、アンタゴニスト活性（例えば、天然のアンタゴニスト活性または１つまたは複数の変異の結果であるアンタゴニスト活性、例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）を有する。これらの実施形態では、改変物質は、ＴＧＦファミリーメンバー（例えば、ＴＧＦα、ＴＧＦβ）であり、これも同様に、場合により、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＧＦＢＲ３のうちの１つまたは複数に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
いくつかの実施形態では、改変物質は、ＴＧＦファミリーメンバー（例えば、ＴＧＦα、ＴＧＦβ）であり、これは、ＴＧＦＢＲ１および／またはＴＧＦＢＲ２に対して、低減された親和性および／または活性、すなわち、アンタゴニスト活性（例えば、天然のアンタゴニスト活性または１つまたは複数の変異の結果であるアンタゴニスト活性、例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）を有する。これらの実施形態では、改変物質は、ＴＧＦファミリーメンバー（例えば、ＴＧＦα、ＴＧＦβ）であり、これも同様に、場合により、ＴＧＦＢＲ３に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はインターロイキンである。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ１である。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ１αまたはＩＬ１βである。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１Ｒ１および／またはＩＬ１ＲＡｃＰに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１Ｒ１および／またはＩＬ１ＲＡｃＰに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１Ｒ２に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１Ｒ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。例えば、いくつかの実施形態では、本改変ＩＬ１物質は、ＩＬ１Ｒ２に対する相互作用を回避し、したがって、治療薬に対するデコイおよび／またはシンクとしてのその機能を実質的に低減する。
ある実施形態では、野生型ＩＬ１βは、配列番号２９６のアミノ酸配列を有する。
ＩＬ１は、炎症促進性のサイトカインであり、重要な免疫系制御因子である。それは、ＣＤ４ Ｔ細胞応答の強力な活性化因子であり、Ｔｈ１７細胞の比率を高め、ＩＦＮγおよびＩＬ４産生細胞の増殖を増大させる。ＩＬ１はまた、ＣＤ８＋ Ｔ細胞の強力な制御因子であり、抗原特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞増殖、分化、周辺部への移動および記憶を強化する。ＩＬ１受容体は、ＩＬ１Ｒ１およびＩＬ１Ｒ２を含む。ＩＬ１Ｒ１への結合およびＩＬ１Ｒ１を介したシグナル伝達は、それによりＩＬ１が多くのその生物学的（および病理学的）作用を媒介する機序を構成する。ＩＬ１Ｒ２は、デコイ受容体として機能でき、それにより、ＩＬ１Ｒ１を介した相互作用およびシグナル伝達のためのＩＬ１の利用可能性を減らす。
いくつかの実施形態では、改変ＩＬ１は、ＩＬ１Ｒ１に対する低減された親和性および／または活性（例えば、アゴニスト活性）を有する。いくつかの実施形態では、改変ＩＬ１は、ＩＬ１Ｒ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。このような実施形態では、回復可能なＩＬ１／ＩＬ１Ｒ１シグナル伝達ならびにＩＬＲ２に対する治療用キメラの損失の防止およびその結果としての必要なＩＬ１投与量の削減（例えば、野生型またはＩＬＲ１に対する減弱化変異のみを有するキメラに比べて）がもたらされる。このような構築物は、例えば、免疫系を刺激して抗癌応答を開始することを含む、例えば、癌を治療する方法で使用される。
いくつかの実施形態では、改変ＩＬ１は、ＩＬ１Ｒ１に対し、低減された親和性および／または活性（例えば、アンタゴニスト活性、例えば、天然のアンタゴニスト活性または１つまたは複数の変異の結果としてのアンタゴニスト活性、例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）を有する。いくつかの実施形態では、改変ＩＬ１は、ＩＬ１Ｒ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。このような実施形態では、ＩＬ１／ＩＬ１Ｒ１シグナル伝達は回復可能でなく、また、ＩＬＲ２に対する治療用キメラの損失の防止およびその結果として必要とされるＩＬ１投与量の削減（例えば、野生型またはＩＬＲ１に対する減弱化変異のみを有するキメラに比べて）がもたらされる。このような構築物は、例えば、免疫系を抑制することを含む、例えば、自己免疫疾患を治療する方法で使用される。
このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、アミノ酸５２～５４の欠失を有し、これは、Ｉ型ＩＬ１Ｒに対して、低減された結合親和性および低減された生物活性を有する改変ヒトＩＬ１βを産生する。例えば、国際公開第１９９４／０００４９１号を参照されたい。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、Ａ１１７Ｇ／Ｐ１１８Ｇ、Ｒ１２０Ｘ、Ｌ１２２Ａ、Ｔ１２５Ｇ／Ｌ１２６Ｇ、Ｒ１２７Ｇ、Ｑ１３０Ｘ、Ｑ１３１Ｇ、Ｋ１３２Ａ、Ｓ１３７Ｇ／Ｑ１３８Ｙ、Ｌ１４５Ｇ、Ｈ１４６Ｘ、Ｌ１４５Ａ／Ｌ１４７Ａ、Ｑ１４８Ｘ、Ｑ１４８Ｇ／Ｑ１５０Ｇ、Ｑ１５０Ｇ／Ｄ１５１Ａ、Ｍ１５２Ｇ、Ｆ１６２Ａ、Ｆ１６２Ａ／Ｑ１６４Ｅ、Ｆ１６６Ａ、Ｑ１６４Ｅ／Ｅ１６７Ｋ、Ｎ１６９Ｇ／Ｄ１７０Ｇ、Ｉ１７２Ａ、Ｖ１７４Ａ、Ｋ２０８Ｅ、Ｋ２０９Ｘ、Ｋ２０９Ａ／Ｋ２１０Ａ、Ｋ２１９Ｘ、Ｅ２２１Ｘ、Ｅ２２１Ｓ／Ｎ２２４Ａ、Ｎ２２４Ｓ／Ｋ２２５Ｓ、Ｅ２４４Ｋ、Ｎ２４５Ｑから選択される１つまたは複数の置換変異（Ｘはアミノ酸の任意の変化、例えば、非保存的変化であり得る）を有し、これらは、例えば、全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５４２号および国際公開第２０１５／００７５３６号に記載のように、ＩＬ１Ｒに対し低減された結合を示す（ジェンバンク受入番号ＮＰ＿０００５６７、バージョンＮＰ－０００５６７．１、ＧＩ：１０８３５１４５、ヒトＩＬ１β配列に基づいてナンバリング）。いくつかの実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、Ｒ１２０Ａ、Ｒ１２０Ｇ、Ｑ１３０Ａ、Ｑ１３０Ｗ、Ｈ１４６Ａ、Ｈ１４６Ｇ、Ｈ１４６Ｅ、Ｈ１４６Ｎ、Ｈ１４６Ｒ、Ｑ１４８Ｅ、Ｑ１４８Ｇ、Ｑ１４８Ｌ、Ｋ２０９Ａ、Ｋ２０９Ｄ、Ｋ２１９Ｓ、Ｋ２１９Ｑ、Ｅ２２１ＳおよびＥ２２１Ｋから選択される１つまたは複数の変異を有し得る。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、変異Ｑ１３１ＧおよびＱ１４８Ｇを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、変異Ｑ１４８ＧおよびＫ２０８Ｅを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＱ１３１Ｇを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＨ１４６Ａを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＨ１４６Ｎを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＨ１４６Ｒを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＨ１４６Ｅを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＨ１４６Ｇを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＫ２０８Ｅを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、変異Ｒ１２０Ｇ、Ｆ１６２Ａ、およびＱ１６４Ｅを含む。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ２である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ２Ｒαおよび／またはＩＬ２Ｒβおよび／またはＩＬ２Ｒγに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ２Ｒβおよび／またはＩＬ２Ｒγに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ２Ｒαに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。このような実施形態は、例えば、改変ＩＬ２がＩＬ２Ｒβおよび／またはＩＬ２Ｒγに対し拮抗的である場合、癌の治療に適切であり得る。例えば、本発明の構築物は、ＩＬ２受容体βおよびγを有するＣＤ８＋ Ｔ細胞（抗腫瘍効果を与えることができる）の減弱化された活性化を優先し、ＩＬ２受容体α、β、およびγを有するＴｒｅｇ（免疫抑制効果、腫瘍促進効果を与えることができる）を優先しない。さらに、いくつかの実施形態では、ＩＬ２ＲαよりもＩＬ２Ｒβおよび／またはＩＬ２Ｒγに対する選択性は、肺水腫などのＩＬ２副作用を回避させる。また、ＩＬ２ベースキメラは、例えば、改変ＩＬ２が、ＩＬ２Ｒβおよび／またはＩＬ２Ｒγに対してアンタゴニスト（例えば、天然のアンタゴニスト活性または１つまたは複数の変異の結果としてのアンタゴニスト活性、例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）である場合、自己免疫疾患の治療に有用である。例えば、本発明の構築物は、ＩＬ２受容体βおよびγを有するＣＤ８＋ Ｔ細胞の抑制の減弱化（したがって、免疫応答を抑制する）を優先し、ＩＬ２受容体α、β、およびγを有するＴｒｅｇを優先しない。あるいは、いくつかの実施形態では、ＩＬ２を有するキメラは、Ｔｒｅｇの活性化、したがって免疫抑制を優先し、ＣＤ８＋ Ｔ細胞の活性化を優先しない。例えば、これらの構築物は、疾患または免疫抑制により恩恵を受けると思われる疾患、例えば、自己免疫障害の治療に使用される。
いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、ＣＤ８＋ Ｔ細胞を指向する本明細書に記載の標的化部分を有し、改変ＩＬ２物質は、ＩＬ２Ｒβおよび／またはＩＬ２Ｒγに対する低減された親和性および／または活性および／またはＩＬ２Ｒαに対し実質的に低減されたまたは除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、これらの構築物は、ＣＤ８＋ Ｔ細胞活性を標的とし、通常、Ｔｒｅｇ細胞に対して不活性である（または実質的に低減された活性を有する）。いくつかの実施形態では、このような構築物は、野生型ＩＬ２に比べて、高められた免疫刺激効果を有し（理論に束縛されることを望むものではないが、Ｔｒｅｇを刺激しないことにより）、一方で、ＩＬ２に関連する全身毒性を除去または低減する。
ある実施形態では、野生型ＩＬ２は、配列番号２９７のアミノ酸配列を有する。
このような実施形態では、改変ヒトＩＬ２物質は１つまたは複数の変異を、アミノ酸Ｌ７２の位置（Ｌ７２Ｇ、Ｌ７２Ａ、Ｌ７２Ｓ、Ｌ７２Ｔ、Ｌ７２Ｑ、Ｌ７２Ｅ、Ｌ７２Ｎ、Ｌ７２Ｄ、Ｌ７２Ｒ、またはＬ７２Ｋ）、Ｆ４２の位置（Ｆ４２Ａ、Ｆ４２Ｇ、Ｆ４２Ｓ、Ｆ４２Ｔ、Ｆ４２Ｑ、Ｆ４２Ｅ、Ｆ４２Ｎ、Ｆ４２Ｄ、Ｆ４２Ｒ、またはＦ４２Ｋ）およびＹ４５の位置（Ｙ４５Ａ、Ｙ４５Ｇ、Ｙ４５Ｓ、Ｙ４５Ｔ、Ｙ４５Ｑ、Ｙ４５Ｅ、Ｙ４５Ｎ、Ｙ４５Ｄ、Ｙ４５ＲまたはＹ４５Ｋ）に有する。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの改変ＩＬ２物質は、野性型ＩＬ２と比べて、高親和性ＩＬ２受容体に対して低減された親和性を有し、中間的親和性ＩＬ２受容体に対しては親和性をそのまま維持すると考えられる。例えば、米国特許出願公開第２０１２／０２４４１１２号を参照されたい。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、改変ＩＬ２物質は、アミノ酸位置Ｒ３８、Ｆ４２、Ｙ４５、およびＥ６２に１つまたは複数の変異を有する。例えば、改変ＩＬ２物質は、Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ａ、Ｙ４５Ａ、およびＥ６２Ａのうちの１つまたは複数を含み得る。いくつかの実施形態では、改変ＩＬ２物質は、Ｃ１２５で変異を含み得る。例えば、Ｃ１２５Ｓであってよい。このような実施形態では、改変ＩＬ２物質は、例えば、Ｃａｒｍｅｎａｔｅ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９０：６２３０－６２３８に記載されているように、ＩＬ２Ｒαに対して実質的に低減された親和性および／または活性を有し得る。この全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、Ｒ３８、Ｆ４２、Ｙ４５、および／またはＥ６２に変異を有する改変ＩＬ２物質は、ＣＤ８＋ Ｔ細胞およびＮＫ細胞を含むが、Ｔｒｅｇ細胞を含まない、エフェクター細胞の増殖を誘導できる。いくつかの実施形態では、Ｒ３８、Ｆ４２、Ｙ４５、および／またはＥ６２に変異を有する改変ＩＬ２物質は、野生型ＩＬ２物質よりも少ない毒性である。ＩＬ２Ｒαに対する実質的に低減された親和性および／または活性を有する改変ＩＬ２物質を含むキメラタンパク質は、例えば、腫瘍学において用途が見出され得る。
他の実施形態では、改変ＩＬ２物質は、例えば、国際公開第２０１６／０２５３８５号に記載されているように、ＩＬ２Ｒβに対して実質的に低減された親和性および／または活性を有し得る。この全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。このような実施形態では、改変ＩＬ２物質は、Ｔｒｅｇ細胞の増殖を誘導し得るが、ＣＤ８＋ Ｔ細胞およびＮＫ細胞などのエフェクター細胞の増殖を誘導し得ない。ＩＬ２Ｒβに対する実質的に低減された親和性および／または活性を有する改変ＩＬ２物質を含むキメラタンパク質は、例えば、自己免疫疾患の治療で用途が見出され得る。いくつかの実施形態では、改変ＩＬ２物質は、アミノ酸位置Ｎ８８、Ｄ２０、および／またはＡ１２６に１つまたは複数の変異を有し得る。例えば、改変ＩＬ２物質は、Ｎ８８Ｒ、Ｎ８８Ｉ、Ｎ８８Ｇ、Ｄ２０Ｈ、Ｑ１２６Ｌ、およびＱ１２６Ｆのうちの１つまたは複数を含み得る。
種々の実施形態では、改変ＩＬ２物質は、Ｄ１０９またはＣ１２５に変異を含み得る。例えば、変異は、Ｄ１０９ＣまたはＣ１２５Ｓであってよい。いくつかの実施形態では、Ｄ１０９またはＣ１２５に変異を有する改変ＩＬ２は、ＰＥＧ部分への結合のために利用され得る。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ３である。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ３受容体に対する低減された親和性および／または活性を有し、ＩＬ３受容体は共通のベータ（ベータｃまたはＣＤ１３１）サブユニットと対になった特有のアルファ鎖を有するヘテロダイマーである。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ３受容体に対して実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有し、ＩＬ３受容体は共通のベータ（ベータｃまたはＣＤ１３１）サブユニットと対になった特有のアルファ鎖を有するヘテロダイマーである。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ４である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、１型および／または２型ＩＬ４受容体に対する低減された親和性および／または活性を有する。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、１型および／または２型ＩＬ４受容体に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。１型ＩＬ４受容体は、共通のγ鎖を有するＩＬ４Ｒαサブユニットから構成され、ＩＬ４を特異的に結合する。２型ＩＬ４受容体は、ＩＬ１３Ｒα１として知られる異なるサブユニットに結合したＩＬ４Ｒαサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、２型ＩＬ４受容体に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
ある実施形態では、野生型ＩＬ４は、配列番号２９８のアミノ酸配列を有する。
このような実施形態では、改変ＩＬ４物質は、アミノ酸Ｒ１２１（Ｒ１２１Ａ、Ｒ１２１Ｄ、Ｒ１２１Ｅ、Ｒ１２１Ｆ、Ｒ１２１Ｈ、Ｒ１２１Ｉ、Ｒ１２１Ｋ、Ｒ１２１Ｎ、Ｒ１２１Ｐ、Ｒ１２１Ｔ、Ｒ１２１Ｗ）、Ｅ１２２（Ｅ１２２Ｆ）、Ｙ１２４（Ｙ１２４Ａ、Ｙ１２４Ｑ、Ｙ１２４Ｒ、Ｙ１２４Ｓ、Ｙ１２４Ｔ）およびＳ１２５（Ｓ１２５Ａ）に１つまたは複数の変異を有する。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの改変ＩＬ４物質は、Ｉ型受容体により媒介される活性を維持するが、その他の受容体により媒介される生物活性を顕著に低減すると考えられる。例えば、米国特許第６，４３３，１５７号を参照されたい。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ６である。ＩＬ６は、リガンド結合ＩＬ６Ｒ鎖（ＣＤ１２６）およびシグナル伝達成分ｇｐ１３０を含む細胞表面Ｉ型サイトカイン受容体複合体を介して信号を伝達する。ＩＬ６はまた、可溶性型のＩＬ６Ｒ（ｓＩＬ６Ｒ）にも結合し得、これは、ＩＬ６Ｒの細胞外の部分である。ｓＩＬ６Ｒ／ＩＬ６複合体は、神経突起の成長およびニューロンの生存に関与し、したがって、再ミエリン化による神経再生に重要であり得る。したがって、いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ６Ｒ／ｇｐ１３０および／またはｓＩＬ６Ｒに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ６Ｒ／ｇｐ１３０および／またはｓＩＬ６Ｒに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
ある実施形態では、野生型ＩＬ６は、ＩＬ６（成熟型、野生型）（配列番号２９９）のアミノ酸配列を有する。
このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、アミノ酸５８、１６０、１６３、１７１または１７７に１つまたは複数の変異を有する。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの改変ＩＬ６物質は、ＩＬ６Ｒαに対し低減された結合親和性および低減された生物活性を示すと考えられている。例えば、国際公開第９７／１０３３８号を参照されたい。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ１０である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１０受容体１およびＩＬ１０受容体２に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１０受容体１およびＩＬ１０受容体２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ１１である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１１Ｒαおよび／またはＩＬ１１Ｒβおよび／またはｇｐ１３０に対する低減された親和性および／または活性を有する。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１１Ｒαおよび／またはＩＬ１１Ｒβおよび／またはｇｐ１３０に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ１２である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１２Ｒβ１および／またはＩＬ１２Ｒβ２に対する低減された親和性および／または活性を有する。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１２Ｒβ１および／またはＩＬ１２Ｒβ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ１３である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ４受容体（ＩＬ４Ｒα）およびＩＬ１３Ｒα１に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ４受容体（ＩＬ４Ｒα）またはＩＬ１３Ｒα１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
ある実施形態では、野生型ＩＬ１３は、ＩＬ１３（成熟型、野生型）（配列番号３００）のアミノ酸配列を有する。
このような実施形態では、改変ＩＬ１３物質は、アミノ酸１３、１６、１７、６６、６９、９９、１０２、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１２、１１３および１１４に１つまたは複数の変異を有する。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの改変ＩＬ１３物質は、低減された生物活性を示すと考えられている。例えば、国際公開第２００２／０１８４２２号を参照されたい。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ１８である。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１８Ｒαおよび／またはＩＬ１８Ｒβに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１８Ｒαおよび／またはＩＬ１８Ｒβに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、シグナル伝達に必要なＴＩＲドメインを欠くＩＬ１８ＲαのアイソフォームであるＩＬ１８Ｒα２型に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
ある実施形態では、野生型ＩＬ１８は、ＩＬ１８（野生型）（配列番号３０１）のアミノ酸配列を有する。
このような実施形態では、全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５４２号に記載のように、改変ＩＬ１８物質は、Ｙ３７～Ｋ４４、Ｒ４９～Ｑ５４、Ｄ５９～Ｒ６３、Ｅ６７～Ｃ７４、Ｒ８０、Ｍ８７～Ａ９７、Ｎ１２７～Ｋ１２９、Ｑ１３９～Ｍ１４９、Ｋ１６５～Ｋ１７１、Ｒ１８３およびＱ１９０～Ｎ１９１から選択されるアミノ酸またはアミノ酸領域に１つまたは複数の変異を含み得る（ジェンバンク受入番号ＡＡＶ３８６９７、バージョンＡＡＶ３８６９７．１、ＧＩ：５４６９６６５０、ヒトＩＬ１８配列に基づいてナンバリング）。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ３３である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＳＴ２受容体１およびＩＬ１ＲＡｃＰに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＳＴ２受容体およびＩＬ１ＲＡｃＰに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
ある実施形態では、野生型ＩＬ３３は、配列番号３０２のアミノ酸配列を有する。
このような実施形態では、全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５４２号に記載のように、改変ＩＬ３３物質は、Ｉ１１３～Ｙ１２２、Ｓ１２７～Ｅ１３９、Ｅ１４４～Ｄ１５７、Ｙ１６３～Ｍ１８３、Ｅ２００、Ｑ２１５、Ｌ２２０～Ｃ２２７およびＴ２６０～Ｅ２６９から選択されるアミノ酸またはアミノ酸領域に１つまたは複数の変異を含み得る（ジェンバンク受入番号ＮＰ＿２５４２７４、バージョン２５４２７４．１、Ｇｌ：１５５５９２０９、ヒト配列に基づいてナンバリング）。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は上皮増殖因子（ＥＧＦ）である。ＥＧＦは、強力な成長因子のファミリーである。メンバーは、ＥＧＦ、ＨＢ－ＥＧＦ、およびＴＧＦα、アンフィレギュリン、ニューレグリン、エピレギュリン、ベータセルリンなどの他のものを含む。ＥＧＦファミリー受容体は、ＥＧＦＲ（ＥｒｂＢ１）、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３およびＥｒｂＢ４を含む。これらは、ホモダイマーおよび／またはヘテロダイマー受容体サブタイプとして機能し得る。異なるＥＧＦファミリーメンバーは、種々の受容体サブタイプに対して、他と異なる選択性を示す。例えば、ＥＧＦは、ＥｒｂＢ１／ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ１／ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ４／ＥｒｂＢ２およびいくつかの他のヘテロダイマーサブタイプと結合する。ＨＢ－ＥＧＦは、類似のパターンを有するが、ＥｒｂＢ４／４と結合する。ＥＧＦ（ＥＧＦ様）増殖因子シグナル伝達の正または負方向への調節は、大きな治療上の観点から関心がもたれている。例えば、ＥＧＦＲシグナル伝達の阻害は、ＥＧＦＲシグナル伝達が主要な成長促進シグナルを構成する種々の癌の治療で関心がもたれている。あるいは、ＥＧＦＲシグナル伝達の刺激は、例えば、創傷治癒（急性および慢性）、口腔粘膜炎（限定されないが、放射線療法を含む種々の癌療法の主要な副作用）における治療上の観点から関心が持たれている。
いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、および／またはＥｒｂＢ４に対する低減された親和性および／または活性を有する。このような実施形態は、例えば、創傷の治療方法で使用される。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、およびＥｒｂＢ４のうちの１つまたは複数に結合し、その受容体の活性をアンタゴナイズする。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、および／またはＥｒｂＢ４に対する低減された親和性および／または活性を有し、これにより、その受容体の活性が、弱められる様式でアンタゴナイズされる。このような実施形態は、例えば、癌の治療で使用される。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＥｒｂＢ１に対する低減された親和性および／または活性を有する。ＥｒｂＢ１は、キナーゼ阻害剤の治療標的であるが－大抵の場合、副作用があり、その理由は、それらがあまり選択的でないためである（例えば、ゲフィチニブ、エルロチニブ、アファチニブ、ブリガチニブおよびイコチニブ）。いくつかの実施形態では、弱められた拮抗的ＥｒｂＢ１シグナル伝達は、ＥＧＦの受容体を標的とする他の物質より、オンターゲットであり、少ない副作用を有する。
いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＥｒｂＢ１に対し、低減された親和性および／または活性（例えば、アンタゴニスト活性、例えば、天然のアンタゴニスト活性または１つまたは複数の変異の結果としてのアンタゴニスト活性、例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照、この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）および／またはＥｒｂＢ４またはそれが相互作用し得る他のサブタイプに対し実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。標的化部分を介した特異的標的化により、ＥｒｂＢ１／ＥｒｂＢ１受容体活性化の細胞選択的抑制（アンタゴニズム、例えば、天然のアンタゴニスト活性または１つまたは複数の変異の結果とてのアンタゴニスト活性、例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照、この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）が達成されるであろう－阻害関連副作用に関連する可能性のある他の受容体サブタイプを関与させずに。従って、身体中の全ての細胞型のＥＧＦＲ活性を阻害するＥＧＦＲキナーゼ阻害剤と対照的に、このような構築物は、副作用の低減された細胞選択的（例えば、受容体の増幅、過剰発現などよる活性化ＥＧＦＲシグナル伝達を有する腫瘍細胞）抗ＥＧＦＲ（ＥｒｂＢ１）薬物作用を提供するであろう。
いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＥｒｂＢ４および／またはそれが相互作用する他のサブタイプに対する低減された親和性および／または活性（例えば、アゴニスト活性）を有する。標的化部分を介した特定の標的細胞に対する標的化により、ＥｒｂＢ１シグナル伝達の選択的活性化が達成される（例えば、上皮細胞）。このような構築物は、いくつかの実施形態では、副作用が低減された創傷の治療（創傷治癒の促進）、特に慢性状態の治療および治療薬局所投与以外の適用（例えば、全身性創傷治癒）のために使用される。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は、インスリンまたはインスリン類似体である。いくつかの実施形態では、改変インスリンまたはインスリン類似体は、インスリン受容体および／またはＩＧＦ１またはＩＧＦ２受容体に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変インスリンまたはインスリン類似体は、インスリン受容体および／またはＩＧＦ１またはＩＧＦ２受容体に対する低減または除去された親和性および／または活性を有する。インスリン受容体に対する弱められた応答は、糖尿病、肥満症、代謝障害などの制御を可能にし、同時に、ＩＧＦ１またはＩＧＦ２受容体から離すことにより、癌促進性作用を回避する。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は、インスリン様増殖因子－Ｉまたはインスリン様増殖因子－ＩＩ（ＩＧＦ１またはＩＧＦ２）である。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＧＦ１である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、インスリン受容体および／またはＩＧＦ１受容体に対する低減された親和性および／または活性を有する。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＧＦ１受容体に結合し、受容体の活性をアンタゴナイズする。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＧＦ１受容体に対する低減された親和性および／または活性を有し、これにより、受容体の活性が、弱められる形式でアンタゴナイズされることを可能にする。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＧＦ１受容体に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＧＦ２受容体に対する低減された親和性および／または活性を有し、これにより、受容体の活性が、弱められる形式でアンタゴナイズされることを可能にする。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は、インスリン受容体に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有し、したがって、インスリンシグナル伝達を妨げない。種々の実施形態では、これは、癌治療に適用される。種々の実施形態では、本物質は、ＩＲアイソフォームＡが癌治療に対し耐性を生じるのを防止し得る。
一実施形態では、本キメラタンパク質は、本明細書に記載のうちのいずれかの改変（例えば、変異体）型のシグナル伝達物質と共に、（ｉ）ＣＤ８結合物質および（ｉｉ）腫瘍細胞を指向する標的化部分を有する。ある実施形態では、本キメラタンパク質は、Ｔ細胞上のＣＤ８を指向する標的化部分および腫瘍細胞上のＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２を指向する第２の標的化部分を有する。
種々の実施形態では、シグナル伝達物質は毒素または毒性酵素である。いくつかの実施形態では、毒素または毒性酵素は、植物および細菌から誘導される。毒素または毒性酵素の例としては、ジフテリア毒素、シュードモナス毒素、炭疽病毒素、リシンおよびサポリンなどのリボソーム不活化タンパク質（ＲＩＰ）、モデシン、アブリン、ゲロニン、およびヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質が挙げられるが、これらに限定されない。追加の毒素は、Ｍａｔｈｅｗ ｅｔ ａｌ．，（２００９）Ｃａｎｃｅｒ Ｓｃｉ １００（８）：１３５９－６５、に開示のものを含む。この文献の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。このような実施形態では、本発明のキメラタンパク質は、細胞型特異的に細胞死を誘導するのに利用し得る。このような実施形態では、毒素は改変されて、例えば、変異導入されて、本明細書で他のシグナル伝達物質に関し記載のように、効果を弱めるために毒素の親和性および／または活性を低減させ得る。
シグナル伝達物質との多重特異的キメラおよび融合体
種々の実施形態では、本発明のＣＤ８結合物質は、本明細書に記載の１種類または複数種類のシグナル伝達物質および／または１つまたは複数の追加の標的化部分のキメラまたは融合体の一部である。したがって、本発明は、例えば、１種類または複数種類のシグナル伝達物質およびＣＤ８に対する標的化部分および／または１つまたは複数の追加の標的化部分を含むキメラまたは融合タンパク質を提供する。
種々の実施形態では、本発明のＣＤ８結合物質は、多重特異的であり、すなわち、ＣＤ８結合物質は、２つ以上の標的、例えば、抗原、または受容体、またはエピトープを認識して結合する認識ドメインを有する２つ以上の標的化部分を有する。このような実施形態では、本発明のＣＤ８結合物質は、同じ抗原上または異なる抗原上の２個以上のエピトープを認識して結合する認識ドメインを有する２つ以上の標的化部分を含み得る。種々の実施形態では、このような多重特異的ＣＤ８結合物質は、向上した結合力および／または改善された選択性などの有利な性質を示す。ある実施形態では、本発明のＣＤ８結合物質は、２つの標的化部分を含み、二重特異性であり、すなわち、同じ抗原上または異なる抗原上の２個のエピトープを結合し認識する。
種々の実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、それぞれの標的化部分が本明細書に記載の抗体または抗体誘導体である２つ以上の標的化部分を含む。ある実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、ＣＤ８に対する抗原認識ドメインを含む少なくとも１種類のＶＨＨおよび腫瘍抗原に対する抗原認識ドメインを含む１種類の抗体または抗体誘導体を含む。
種々の実施形態では、本多重特異的ＣＤ８結合物質は、異なる抗原または受容体を標的とする２つ以上の標的化部分を有し、１つの標的化部分は、その抗原または受容体に対し減弱化され得、例えば、標的化部分はその抗原または受容体を低親和性または結合力で結合する（例えば、その他の標的化部分がその抗原または受容体に対して有する親和性または結合力より低い親和性または結合力で結合することを含み、例えば、結合親和性の間の差異は、約１０倍、または２５倍、または５０倍、または１００倍、または３００倍、または５００倍、または１０００倍、または５０００倍であってよく；例えば、より低い親和性または結合力の標的化部分はその抗原または受容体に中～高ｎＭまたは低～中μＭの範囲ＫＤで結合し得るが、より高い親和性または結合力の標的化部分は、中～高ｐＭまたは低～中ｎＭの範囲のＫＤで結合し得る）。例えば、いくつかの実施形態では、本多重特異的ＣＤ８結合物質は、無差別の抗原または受容体を指向する減弱化標的化部分を含み、これは、目的の細胞への標的化を改善し（例えば、その他の標的化部分を介して）、治療用の標的にされないものを含む、複数細胞型間にまたがる効果を防止し得る（例えば、これらの実施形態で与えられるものより高い親和性で無差別の抗原または受容体に結合することによる）。種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質は、低親和性または低結合力で異なる抗原または受容体を標的とする１つまたは複数の標的化部分を有し、他方の結合を、例えば、協力して高めることができる。
本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、当該技術分野において既知の方法を使用して構築し得る。例えば、米国特許第９，０６７，９９１号、米国特許出願公開第２０１１０２６２３４８号および国際公開第２００４／０４１８６２号を参照されたい。これらの特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、２つ以上の標的化部分を含む本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、例えば、アミノ酸残基と、全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Ｂｌａｔｔｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２４，１５１７－１５２４および欧州特許第２９４７０３号に記載のような有機誘導体化試薬とを反応させることにより、化学架橋により構築され得る。別の例示的実施形態では、２つ以上の標的化部分を含む多重特異的ＣＤ８結合物質は、遺伝子融合、すなわち、個別の標的化部分のポリペプチドを含む単一ポリペプチドを構築することにより、構築される。例えば、ＣＤ８に対する抗原認識ドメインを有する第１のＶＨＨおよび腫瘍抗原に対する抗原認識ドメインを有する第２の抗体または抗体誘導体をコードする、単一ポリペプチド構築物を形成し得る。二価または多価性のＶＨＨポリペプチド構築物を産生する方法は、国際公開第９６／３４１０３号に開示され、この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。さらなる例示的実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、リンカーを用いて構築され得る。例えば、ＣＤ８に対する抗原認識ドメインを有する第１のＶＨＨのカルボキシ末端を、腫瘍抗原に対する抗原認識ドメインを有する第２の抗体または抗体誘導体のアミノ末端に連結され得る（または逆もまた同様）。使用し得る代表的リンカーは、本明細書に記載されている。いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質の成分は、リンカーを使用せずに、相互に直接連結される。
種々の実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、ＣＤ８および１つまたは複数の免疫細胞上に見つけた１つまたは複数の抗原を認識して、それらに結合する。免疫細胞には、巨核球、血小板、赤血球、マスト細胞、好塩基球、好中球、好酸球、単球、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、Ｔリンパ球（例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球、ヘルパーＴ細胞）、Ｂリンパ球、プラズマ細胞、樹状細胞、またはこれらのサブセットを含め得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、目的の抗原に特異的に結合し、直接または間接的に１つまたは複数の免疫細胞を効果的に動員する。
種々の実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、ＣＤ８および腫瘍細胞上に見つけた１つまたは複数の抗原を認識して、それらに結合する。これらの実施形態では、本ＣＤ８結合物質は、免疫細胞を直接的にまたは間接的に腫瘍細胞にまたは腫瘍微小環境に動員し得る。いくつかの実施形態では、本ＣＤ８結合物質は、免疫細胞、例えば、腫瘍を死滅させるおよび／または抑制することができる免疫細胞（例えば、ＣＴＬ）を、作用部位（非限定的例であるが、腫瘍微小環境など）に直接的にまたは間接的に動員し得る。
いくつかの実施形態では、本ＣＤ８結合物質は、腫瘍の免疫攻撃に有利なように免疫細胞のバランスを変化させることができ、または免疫細胞のバランスを変化させることを含む方法において使用される。例えば、本ＣＤ８結合物質は、臨床的に重要な部位の免疫細胞の比率を、腫瘍を死滅させるおよび／または抑制することができる細胞（例えば、Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、抗腫瘍マクロファージ（例えば、Ｍ１マクロファージ）、好中球、Ｂ細胞、樹状細胞またはこれらのサブセット）に有利なように、および腫瘍を保護する細胞（例えば、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）；腫瘍関連好中球（ＴＡＮ）、Ｍ２マクロファージ、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）、またはこれらのサブセット）に不利なように変化させることができる。いくつかの実施形態では、本ＣＤ８結合物質は、エフェクターＴ細胞の制御性Ｔ細胞に対する比率を高めることができる。
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、腫瘍細胞を直接または間接的に動員する。例えば、いくつかの実施形態では、腫瘍細胞の動員は、腫瘍細胞を死滅させることができるおよび／または抑制できる１つまたは複数のエフェクター細胞（例えば、本明細書に記載の免疫細胞）に対するものである。いくつかの実施形態では、標的化部分は、腫瘍およびＣＤ８陽性免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）上でそれらのそれぞれの抗原と相互作用する２つの標的化部分によって、Ｔ細胞を腫瘍細胞に直接または間接的に動員する。
腫瘍細胞、または癌細胞は、身体の器官およびシステムの正常な機能動作を妨害する、細胞または組織の無制御な増殖および／または細胞生存の異常な増大および／またはアポトーシスの抑制の異常な増大を指す。例えば、腫瘍細胞は、良性および悪性の癌、ポリープ、過形成、ならびに休眠腫瘍または微小転移を含む。腫瘍細胞の例としては、基底細胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脳および中枢神経系癌、乳癌、腹膜の癌、子宮頸癌、絨毛癌、結腸および直腸癌、結合組織癌、消化器系の癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、頭頸部の癌、胃癌（胃腸癌を含む）、神経膠芽腫、肝癌、ヘパトーマ、上皮内腫瘍、腎臓癌または腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙ ｏｒ ｒｅｎａｌ ｃａｎｃｅｒ）、喉頭癌、白血病、肝臓癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、および肺扁平上皮癌）、黒色腫、骨髄腫、神経芽腫、口腔癌（唇、舌状、舌、口内、および咽頭）、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸癌、呼吸器系癌、唾液腺癌腫、肉腫、皮膚癌、扁平上皮細胞癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮または子宮内膜癌、泌尿器系の癌、外陰癌、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫、ならびにＢ細胞リンパ腫を含むリンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽細胞ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ、巨大腫瘤病変ＮＨＬ、マントル細胞リンパ腫、エイズ関連リンパ腫、およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、毛様細胞性白血病、慢性骨髄芽球性白血病、ならびにその他の癌腫および肉腫、および移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症、浮腫（例えば、脳腫瘍に関連するもの）、およびメグズ症候群と関連する異常血管増殖の細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
腫瘍細胞または癌細胞としては、癌腫、例えば、種々のサブタイプ（例えば、腺癌、基底細胞癌、扁平上皮細胞癌、および移行性上皮癌を含む）、肉腫（例えば、骨および軟組織を含む）、白血病（例えば、急性骨髄性、急性リンパ芽球性、慢性骨髄性、慢性リンパ球性、およびヘアリー細胞を含む）、リンパ腫および骨髄腫（例えば、ホジキンおよび非ホジキンリンパ腫、軽鎖型、非分泌型ＭＧＵＳ、および形質細胞腫を含む）、および中枢神経系癌（例えば、脳腫瘍（例えば、神経膠腫（例えば、星状細胞腫、乏突起細胞腫および上衣腫）、髄膜腫、下垂体腺腫、および神経腫）、および脊髄腫瘍（例えば、髄膜腫および神経線維腫））も挙げられるが、これらに限定されない。
腫瘍抗原の例としては、ＭＡＲＴ－１／Ｍｅｌａｎ－Ａ、ｇｐ１００、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）、アデノシンデアミナーゼ結合タンパク質（ＡＤＡｂｐ）、シクロフィリンｂ、結腸直腸関連性抗原（ＣＲＣ）－００１７－１Ａ／ＧＡ７３３、癌胎児抗原（ＣＥＡ）およびその免疫原性エピトープＣＡＰ－１およびＣＡＰ－２、ｅｔｖ６、ａｍｌ１、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）およびその免疫原性エピトープＰＳＡ－１、ＰＳＡ－２、およびＰＳＡ－３、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、Ｔ細胞受容体／ＣＤ３－ゼータ鎖、ＭＡＧＥファミリーの腫瘍抗原（例えば、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＡＧＥ－Ａ５、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＧＥ－Ａ７、ＭＡＧＥ－Ａ８、ＭＡＧＥ－Ａ９、ＭＡＧＥ－Ａ１０、ＭＡＧＥ－Ａ１１、ＭＡＧＥ－Ａ１２、ＭＡＧＥ－Ｘｐ２（ＭＡＧＥ－Ｂ２）、ＭＡＧＥ－Ｘｐ３（ＭＡＧＥ－Ｂ３）、ＭＡＧＥ－Ｘｐ４（ＭＡＧＥ－Ｂ４）、ＭＡＧＥ－Ｃ１、ＭＡＧＥ－Ｃ２、ＭＡＧＥ－Ｃ３、ＭＡＧＥ－Ｃ４、ＭＡＧＥ－Ｃ５）、ＧＡＧＥファミリーの腫瘍抗原（例えば、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＧＡＧＥ－３、ＧＡＧＥ－４、ＧＡＧＥ－５、ＧＡＧＥ－６、ＧＡＧＥ－７、ＧＡＧＥ－８、ＧＡＧＥ－９）、ＢＡＧＥ、ＲＡＧＥ、ＬＡＧＥ－１、ＮＡＧ、ＧｎＴ－Ｖ、ＭＵＭ－１、ＣＤＫ４、チロシナーゼ、ｐ５３、ＭＵＣファミリー、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ｐ２１ｒａｓ、ＲＣＡＳ１、α－フェトプロテイン、Ｅ－カドヘリン、α－カテニン、β－カテニンおよびγ－カテニン、ｐ１２０ｃｔｎ、ｇｐ１００ Ｐｍｅｌ１１７、ＰＲＡＭＥ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ｃｄｃ２７、大腸腺腫症タンパク質（ＡＰＣ）、フォドリン、コネキシン３７、Ｉｇ－イディオタイプ、ｐ１５、ｇｐ７５、ＧＭ２およびＧＤ２ガングリオシド、ヒトパピローマウイルスタンパク質などのウイルス産物、Ｓｍａｄファミリーの腫瘍抗原、ｌｍｐ－１、ＮＡ、ＥＢＶ－コード化核内抗原（ＥＢＮＡ）－１、脳グリコーゲンホスホリラーゼ、ＳＳＸ－１、ＳＳＸ－２（ＨＯＭ－ＭＥＬ－４０）、ＳＳＸ－１、ＳＳＸ－４、ＳＳＸ－５、ＳＣＰ－１ ＣＴ－７、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ１３８、ＡＧＳ１６、ＭＵＣ１、ＧＰＮＭＢ、Ｅｐ－ＣＡＭ、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＰＭＳＡ、およびＢＣＭＡ（ＴＮＦＲＳＦ１７）が挙げられるが、これらに限定されない。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、１つまたは複数のこれらの腫瘍抗原を結合する標的化部分を含む。
いくつかの実施形態では、本多重特異的ＣＤ８結合物質は、腫瘍細胞上のＣＤ８ならびに抗原を認識して結合する。いくつかの実施形態では、多重特異的ＣＤ８結合物質は、ＣＴＬを直接的にまたは間接的に腫瘍細胞にまたは腫瘍微小環境に動員する。
種々の実施形態では、本多重特異的ＣＤ８結合物質は、２個の異なる細胞（例えば、シナプスを作るために）または同じ細胞（例えば、より高濃度のシグナル伝達物質効果を得るために）を標的とする標的化部分を有する。
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、Ｔ細胞関連標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、Ｔ細胞を直接または間接的に動員する。ある実施形態では、抗原認識ドメインは、エフェクターＴ細胞に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗原認識ドメインは、エフェクターＴ細胞を、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１つまたは複数の疾患細胞または治療効果を得るために調節されるべき細胞を有する部位）に直接または間接的に動員する。エフェクターＴ細胞の例としては、細胞傷害性Ｔ細胞（例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＯ＋）；ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞（例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＩＬ７Ｒ／ＣＤ１２７＋）；ＣＤ８＋ エフェクターＴ細胞（例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＩＬ７Ｒ／ＣＤ１２７＋）；エフェクターメモリーＴ細胞（例えば、ＣＤ６２Ｌｌｏｗ、ＣＤ４４＋、ＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＩＬ７Ｒ／ＣＤ１２７＋、ＩＬ１５Ｒ＋、ＣＣＲ７ｌｏｗ）；セントラルメモリーＴ細胞（例えば、ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ２７＋；またはＣＣＲ７ｈｉ、ＣＤ４４＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＩＬ７Ｒ／ＣＤ１２７＋、ＩＬ１５Ｒ＋）；ＣＤ６２Ｌ＋ エフェクターＴ細胞；早期エフェクターメモリーＴ細胞（ＣＤ２７＋ ＣＤ６２Ｌ－）および後期エフェクターメモリーＴ細胞（ＣＤ２７－ ＣＤ６２Ｌ－）（それぞれ、ＴｅｍＥおよびＴｅｍＬ）を含むＣＤ８＋ エフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）；ＣＤ１２７（＋）ＣＤ２５（ｌｏｗ／－）エフェクターＴ細胞；ＣＤ１２７（－）ＣＤ２５（－）エフェクターＴ細胞；ＣＤ８＋ 幹細胞メモリーエフェクター細胞（ＴＳＣＭ）（例えば、ＣＤ４４（ｌｏｗ）ＣＤ６２Ｌ（ｈｉｇｈ）ＣＤ１２２（ｈｉｇｈ）ｓｃａ（＋））；ＴＨ１エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＸＣＲ３＋、ＣＸＣＲ６＋およびＣＣＲ５＋；またはαβＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＩＬ１２Ｒ＋、ＩＦＮγＲ＋、ＣＸＣＲ３＋）、ＴＨ２エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＣＲ３＋、ＣＣＲ４＋およびＣＣＲ８＋；またはαβＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＩＬ４Ｒ＋、ＩＬ３３Ｒ＋、ＣＣＲ４＋、ＩＬ１７ＲＢ＋、ＣＲＴＨ２＋）；ＴＨ９エフェクターＴ細胞（例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋）；ＴＨ１７エフェクターＴ細胞（例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＩＬ２３Ｒ＋、ＣＣＲ６＋、ＩＬ１Ｒ＋）；ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ＋ＣＣＲ７＋ エフェクターＴ細胞、ＩＣＯＳ＋ エフェクターＴ細胞；ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ＋ＣＣＲ７（－）エフェクターＴ細胞；およびＩＬ２、ＩＬ４および／またはＩＦＮ－γを分泌するエフェクターＴ細胞が挙げられる。
目的とするＴ細胞抗原の例としては、例えば、下記が挙げられる（該当する場合には、細胞外ドメインも含む）：ＣＤ８、ＣＤ３、ＳＬＡＭＦ４、ＩＬ２Ｒα、４－１ＢＢ／ＴＮＦＲＳＦ９、ＩＬ２Ｒβ、ＡＬＣＡＭ、Ｂ７－１、ＩＬ４Ｒ、Ｂ７－Ｈ３、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＩＬ６Ｒ、ＣＣＲ３、ＩＬ７Ｒα、ＣＣＲ４、ＣＸＣＲｌ／ＩＬＳＲＡ、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＩＬ１０Ｒα、ＣＣＲ７、ＩＬ１０Ｒβ、ＣＣＲＳ、ＩＬ１２Ｒβ１、ＣＣＲ９、ＩＬ１２Ｒβ２、ＣＤ２、ＩＬ１３Ｒα１、ＩＬ１３、ＣＤ３、ＣＤ４、ＩＬＴ２／ＣＤＳ５ｊ、ＩＬＴ３／ＣＤＳ５ｋ、ＩＬＴ４／ＣＤＳ５ｄ、ＩＬＴ５／ＣＤＳ５ａ、ｌｕｔｅｇｒｉｎ α４／ＣＤ４９ｄ、ＣＤＳ、インテグリンαＥ／ＣＤ１０３、ＣＤ６、インテグリンαＭ／ＣＤ１１ｂ、ＣＤＳ、インテグリンαＸ／ＣＤ１１ｃ、インテグリンβ２／ＣＤｌＳ、ＫＩＲ／ＣＤ１５Ｓ、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＣＤ２Ｓ、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦＳ、ＫＩＲ２ＤＬ４／ＣＤ１５Ｓｄ、ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ－１、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＣＤ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＬＡＧ－３、ＣＤ４３、ＬＡＩＲ１、ＣＤ４５、ＬＡＩＲ２、ＣＤＳ３、ロイコトリエンＢ４－Ｒ１、ＣＤＳ４／ＳＬＡＭＦ５、ＮＣＡＭ－Ｌ１、ＣＤ９４、ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ９７、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ２Ｆ－１０／ＳＬＡＭＦ９、ＮＴ－４、ＣＤ６９、ＮＴＢ－Ａ／ＳＬＡＭＦ６、共通γ鎖／ＩＬ２Ｒγ、オステオポンチン、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＰＤ－１、ＣＲＴＡＭ、ＰＳＧＬ－１、ＣＴＬＡ－４、ＲＡＮＫ／ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸ３ＣＬ１、Ｌ－セレクチン、ＣＸＣＲ３、ＳＩＲＰβ１、ＣＸＣＲ４、ＳＬＡＭ、ＣＸＣＲ６、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ－１、ＤＮＡＭ－１、サイモポエチン、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＴＩＭ－１、ＥｐｈＢ６、ＴＩＭ－２、Ｆａｓ／ＴＮＦＲＳＦ６、ＴＩＭ－３、Ｆａｓリガンド／ＴＮＦＳＦ６、ＴＩＭ－４、ＦｃγＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＴＩＭ－６、ＴＮＦＲ１／ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、グラニュライシン、ＴＮＦＲＩＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＲＡＩＬＲｌ／ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ、ＩＣＡＭ－１／ＣＤ５４、ＴＲＡＩＬＲ２／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＩＣＡＭ－２／ＣＤ１０２、ＴＲＡＩＬＲ３／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＩＦＮ－γＲ１、ＴＲＡＩＬＲ４／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ、ＩＦＮ－γＲ２、ＴＳＬＰ、ＩＬ１Ｒ１およびＴＳＬＰＲ。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、１つまたは複数のこれらの例示Ｔ細胞抗原を結合する標的化部分を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、Ｂ細胞関連標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１つまたは複数の疾患細胞または治療効果を得るために調節されるべき細胞を有する部位）に、直接または間接的にＢ細胞を動員する。目的のＢ細胞抗原の例としては、例えば、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤｗ７５、ＣＤｗ７６、ＣＤ７７、ＣＤ７８、ＣＤ７９ａ／ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８５、ＣＤ８６、ＣＤ８９、ＣＤ９８、ＣＤ１２６、ＣＤ１２７、ＣＤｗ１３０、ＣＤ１３８、ＣＤｗ１５０、およびＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）が挙げられる。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、１つまたは複数のこれらの例示Ｂ細胞抗原を結合する標的化部分を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、ナチュラルキラー細胞関連標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、例えば、いくつかの実施形態では、ナチュラルキラー細胞を、治療部位（例えば、１つまたは複数の疾患細胞または治療効果を得るために調節されるべき細胞を有する部位）へ直接または間接的に動員する。目的のナチュラルキラー細胞抗原の例としては、例えば、ＴＩＧＩＴ、２Ｂ４／ＳＬＡＭＦ４、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＣＤ９４、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＤ６９、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、Ｋｉｒ１ａｌｐｈａ、ＤＮＡＭ－１、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、Ｆｃ－イプシロンＲＩＩ、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、Ｆｃ－γＲｌ／ＣＤ６４、ＭＩＣＡ、Ｆｃ－γＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、ＭＩＣＢ、Ｆｃ－γＲＩＩＣ／ＣＤ３２ｃ、ＭＵＬＴ－１、Ｆｃ－γＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、Ｎｅｃｔｉｎ－２／ＣＤ１１２、Ｆｃ－γＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＮＫＧ２Ａ、ＦｃＲＨ１／ＩＲＴＡ５、ＮＫＧ２Ｃ、ＦｃＲＨ２／ＩＲＴＡ４、ＮＫＧ２Ｄ、ＦｃＲＨ４／ＩＲＴＡ１、ＮＫｐ３０、ＦｃＲＨ５／ＩＲＴＡ２、ＮＫｐ４４、Ｆｃ－受容体様３／ＣＤ１６－２、ＮＫｐ４６／ＮＣＲ１、ＮＫｐ８０／ＫＬＲＦ１、ＮＴＢ－Ａ／ＳＬＡＭＦ６、Ｒａｅ－１、Ｒａｅ－１α、Ｒａｅ－１β、Ｒａｅ－１δ、Ｈ６０、Ｒａｅ－１ε、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、Ｒａｅ－１γ、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、ＴＲＥＭ－１、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、ＴＲＥＭ－２、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、ＴＲＥＭ－３、ＫＩＲ／ＣＤ１５８、ＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ－１、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＵＬＢＰ－１、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＵＬＢＰ－２、ＫＩＲ２ＤＬ４／ＣＤ１５８ｄおよびＵＬＢＰ－３が挙げられる。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、１つまたは複数のこれらの例示ＮＫ細胞抗原を結合する標的化部分を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、マクロファージ／単球関連標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、例えば、いくつかの実施形態では、マクロファージ／単球を直接または間接的に、治療部位（例えば、１つまたは複数の疾患細胞または治療効果を得るために調節されるべき細胞を有する部位）に動員する。目的のマクロファージ／単球抗原の例としては、例えば、ＳＩＲＰ１ａ、Ｂ７－１／ＣＤ８０、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、Ｂ７－Ｈ１、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、共通β鎖、インテグリンα４／ＣＤ４９ｄ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、インテグリンαＸ／ＣＤｌｌｃ、ＣＣＬ６／Ｃ１０、インテグリンβ２／ＣＤ１８、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、インテグリンβ３／ＣＤ６１、ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ－１、Ｌａｔｅｘｉｎ、ＣＤ３６／ＳＲ－Ｂ３、ロイコトリエンＢ４Ｒ１、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＬＩＭＰＩＩＩＳＲ－Ｂ２、ＣＤ４３、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＤ４５、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣＤ６８、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、ＣＤ９７、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＤ１６３、ＬＲＰ－１、ＣＤ２Ｆ－１０／ＳＬＡＭＦ９、ＭＡＲＣＯ、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＭＤ－１、ＥＣＦ－Ｌ、ＭＤ－２、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＭＧＬ２、エンドグリン／ＣＤ１０５、オステオアクチビン／ＧＰＮＭＢ、Ｆｃ－γＲＩ／ＣＤ６４、オステオポンチン、Ｆｃ－γＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、ＰＤ－Ｌ２、Ｆｃ－γＲＩＩＣ／ＣＤ３２ｃ、Ｓｉｇｌｅｃ－３／ＣＤ３３、Ｆｃ－γＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、ＳＩＧＮＲ１／ＣＤ２０９、Ｆｃ－γＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＳＬＡＭ、ＧＭ－ＣＳＦＲα、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ－１、ＩＣＡＭ－２／ＣＤ１０２、ＴＬＲ３、ＩＦＮ－γＲｌ、ＴＬＲ４、ＩＦＮ－ｇａｎｎｎａＲ２、ＴＲＥＭ－ｌ、ＩＬ－ｌＲＩＩ、ＴＲＥＭ－２、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、ＴＲＥＭ－３、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、ＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ－１、２Ｂ４／ＳＬＡＭＦ ４、ＩＬ１０Ｒα、ＡＬＣＡＭ、ＩＬ１０Ｒβ、アミノペプチダーゼＮ／ＡＮＰＥＰ、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、共通β鎖、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、ＣｌｑＲ１／ＣＤ９３、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、ＣＣＲ１、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、ＣＣＲ２、ＣＤ２０６、インテグリンα４／ＣＤ４９ｄ、ＣＣＲ５、インテグリンαＭ／ＣＤｌｌｂ、ＣＣＲ８、インテグリンαＸ／ＣＤｌｌｃ、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、インテグリンβ２／ＣＤ１８、ＣＤ１４、インテグリンβ３／ＣＤ６１、ＣＤ３６／ＳＲ－Ｂ３、ＬＡＩＲ１、ＣＤ４３、ＬＡＩＲ２、ＣＤ４５、ロイコトリエンＢ４－Ｒ１、ＣＤ６８、ＬＩＭＰＩＩＩＳＲ－Ｂ２、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＤ９７、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣＤ１６３、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、凝固因子ＩＩＩ／組織因子、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸ３ＣＬ１、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＸＣＲ４、ＬＲＰ－１、ＣＸＣＲ６、Ｍ－ＣＳＦ Ｒ、ＤＥＰ－１／ＣＤ１４８、ＭＤ－１、ＤＮＡＭ－１、ＭＤ－２、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＭＭＲ、エンドグリン／ＣＤ１０５、ＮＣＡＭ－Ｌ１、Ｆｃ－γＲＩ／ＣＤ６４、ＰＳＧＬ－１、Ｆｃ－γＲＩＩＩＩＣＤ１６、ＲＰ１０５、Ｇ－ＣＳＦ Ｒ、Ｌ－セレクチン、ＧＭ－ＣＳＦＲα、シグレック－３／ＣＤ３３、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＳＬＡＭ、ＩＣＡＭ－１／ＣＤ５４、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ－１、ＩＣＡＭ－２／ＣＤ１０２、ＴＲＥＭ－ｌ、ＩＬ６Ｒ、ＴＲＥＭ－２、ＣＸＣＲｌ／ＩＬ８ＲＡ、ＴＲＥＭ－３およびＴＲＥＭＬｌ／ＴＬＴ－１が挙げられる。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、１つまたは複数のこれらの例示マクロファージ／単球抗原を結合する標的化部分を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、樹状細胞関連標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１つまたは複数の疾患細胞または治療効果を得るために調節されるべき細胞を有する部位）に、直接または間接的に樹状細胞を動員する。目的の樹状細胞抗原の例としては、例えば、ＣＬＥＣ９Ａ、ＸＣＲ１、ＲＡＮＫ、ＣＤ３６／ＳＲＢ３、ＬＯＸ－１／ＳＲ－Ｅ１、ＣＤ６８、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ１６３、ＳＲ－Ａ１／ＭＳＲ、ＣＤ５Ｌ、ＳＲＥＣ－１、ＣＬ－Ｐｌ／ＣＯＬＥＣ１２、ＳＲＥＣ－ＩＩ、ＬＩＭＰＩＩＩＳＲＢ２、ＲＰ１０５、ＴＬＲ４、ＴＬＲ１、ＴＬＲ５、ＴＬＲ２、ＴＬＲ６、ＴＬＲ３、ＴＬＲ９、４－ＩＢＢリガンド／ＴＮＦＳＦ９、ＩＬ１２／ＩＬ２３ｐ４０、４－Ａｍｉｎｏ－１、８－ナフタルイミド、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、ＣＣＬ２１／６Ｃｋｉｎｅ、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、８－ｏｘｏ－ｄＧ、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、８Ｄ６Ａ、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、Ａ２Ｂ５、ｌｕｔｅｇｒｉｎ α４／ＣＤ４９ｄ、Ａａｇ、インテグリンβ２／ＣＤ１８、ＡＭＩＣＡ、Ｌａｎｇｅｒｉｎ、Ｂ７－２／ＣＤ８６、ロイコトリエンＢ４ Ｒｌ、Ｂ７－Ｈ３、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣｌｑＲ１／ＣＤ９３、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、ＣＣＲ６、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢＣＣＲ７、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＭＡＧ／Ｓｉｇｌｅｃ－４－ａ、ＣＤ４３、ＭＣＡＭ、ＣＤ４５、ＭＤ－１、ＣＤ６８、ＭＤ－２、ＣＤ８３、ＭＤＬ－１／ＣＬＥＣ５Ａ、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＭＭＲ、ＣＤ９７、ＮＣＡＭＬｌ、ＣＤ２Ｆ－１０／ＳＬＡＭＦ９、Ｏｓｔｅｏａｃｔｉｖｉｎ ＧＰＮＭＢ、Ｃｈｅｒｎ２３、ＰＤ－Ｌ２、ＣＬＥＣ－１、ＲＰ１０５、ＣＬＥＣ－２、ＣＬＥＣ－８、シグレック－２／ＣＤ２２、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、シグレック－３／ＣＤ３３、ＤＣ－ＳＩＧＮ、ＤＥＣ２０５、シグレック－５、ＤＣ－ＳＩＧＮＲ／ＣＤ２９９、シグレック－６、ＤＣＡＲ、シグレック－７、ＤＣＩＲ／ＣＬＥＣ４Ａ、シグレック－９、ＤＥＣ－２０５、シグレック－１０、Ｄｅｃｔｉｎ－１／ＣＬＥＣ７Ａ、シグレック－Ｆ、Ｄｅｃｔｉｎ－２／ＣＬＥＣ６Ａ、ＳＩＧＮＲ１／ＣＤ２０９、ＤＥＰ－１／ＣＤ１４８、ＳＩＧＮＲ４、ＤＬＥＣ、ＳＬＡＭ、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ－１、Ｆｃ－γＲ１／ＣＤ６４、ＴＬＲ３、Ｆｃ－γＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、ＴＲＥＭ－１、Ｆｃ－γＲＩＩＣ／ＣＤ３２ｃ、ＴＲＥＭ－２、Ｆｃ－γＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、ＴＲＥＭ－３、Ｆｃ－γＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ－１、ＩＣＡＭ－２／ＣＤ１０２、ＤＥＣ２０５、およびバニロイドＲ１が挙げられる。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、１つまたは複数のこれらの例示ＤＣ抗原を結合する標的化部分を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、４つの「フレームワーク領域」またはＦＲおよび３つの「相補性決定領域」またはＣＤＲを有する単一アミノ酸鎖を含むＶＨＨであるＣｌｅｃ９Ａに対する標的化部分を含む。本明細書で使用される場合、「フレームワーク領域」または「ＦＲ」は、ＣＤＲの間に位置する可変ドメイン中の領域を意味する。本明細書で使用される場合、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、抗原性標的に特異的に結合できるアミノ酸配列を含むＶＨＨ中の可変領域を指す。
種々の実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３配列のうちの少なくとも１つを含む可変ドメインを有するＣｌｅｃ９Ａに対するＶＨＨを含む。
例示的実施形態では、ＣＤＲ１配列は、配列番号３０３～配列番号３２２から選択される。
例示的実施形態では、ＣＤＲ２配列は、配列番号３２３～配列番号３４４から選択される。
例示的実施形態では、ＣＤＲ３配列は、配列番号３４５～配列番号３５９；またはＬＧＲ；またはＶＩＫから選択される。
種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ標的化部分は、次記の配列から選択されるアミノ酸配列を含む：Ｒ２ＣＨＣＬ８（配列番号３６０）；Ｒ１ＣＨＣＬ５０（配列番号３６１）；Ｒ１ＣＨＣＬ２１（配列番号３６２）；Ｒ２ＣＨＣＬ８７（配列番号３６３）；Ｒ２ＣＨＣＬ２４（配列番号３６４）；Ｒ２ＣＨＣＬ３８（配列番号３６５）；Ｒ１ＣＨＣＬ１６（配列番号３６６）；Ｒ２ＣＨＣＬ１０（配列番号３６７）；Ｒ１ＣＨＣＬ３４（配列番号３６８）；Ｒ１ＣＨＣＬ８２（配列番号３６９）；Ｒ２ＣＨＣＬ３（配列番号３７０）；Ｒ２ＣＨＣＬ６９（配列番号３７１）；Ｒ１ＣＨＣＬ５６（配列番号３７２）；Ｒ２ＣＨＣＬ３２（配列番号３７３）；Ｒ２ＣＨＣＬ４９（配列番号３７４）；Ｒ２ＣＨＣＬ５３（配列番号３７５）；Ｒ２ＣＨＣＬ２２（配列番号３７６）；Ｒ２ＣＨＣＬ２５（配列番号３７７）；Ｒ２ＣＨＣＬ１８（配列番号３７８）；Ｒ１ＣＨＣＬ２３（配列番号３７９）；Ｒ１ＣＨＣＬ２７（配列番号３８０）；Ｒ２ＣＨＣＬ１３（配列番号３８１）；Ｒ２ＣＨＣＬ１４（配列番号３８２）；Ｒ２ＣＨＣＬ４２（配列番号３８３）；Ｒ２ＣＨＣＬ４１（配列番号３８４）；Ｒ２ＣＨＣＬ９４（配列番号３８５）；またはＲ２ＣＨＣＬ２７（配列番号３８６）。
種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ標的化部分は、後述のように少なくとも１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３配列を含む可変ドメインを有するＶＨＨを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ１配列は、配列番号３８７～配列番号４５２から選択される。
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ２配列は、配列番号４５３～配列番号５１８から選択される。
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ３配列は、配列番号５１９～配列番号５８４から選択される。
種々の例示的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ標的化部分は、次記の配列から選択されるアミノ酸配列を含む：１ＬＥＣ７（配列番号５８５）または１ＬＥＣ９（配列番号５８６）または１ＬＥＣ２６（配列番号５８７）または１ＬＥＣ２７（配列番号５８８）または１ＬＥＣ２８（配列番号５８９）または１ＬＥＣ３０（配列番号５９０）または１ＬＥＣ３８（配列番号５９１）または１ＬＥＣ４２（配列番号５９２）または１ＬＥＣ５１（配列番号５９３）または１ＬＥＣ６１（配列番号５９４）または１ＬＥＣ６２（配列番号５９５）または１ＬＥＣ６３（配列番号５９６）または１ＬＥＣ６４（配列番号５９７）または１ＬＥＣ７０（配列番号５９８）または１ＬＥＣ８４（配列番号５９９）または１ＬＥＣ８８（配列番号６００）または１ＬＥＣ９１（配列番号６０１）または１ＬＥＣ９２（配列番号６０２）または１ＬＥＣ９４（配列番号６０３）または２ＬＥＣ６（配列番号６０４）または２ＬＥＣ１３（配列番号６０５）または２ＬＥＣ１６（配列番号６０６）または２ＬＥＣ２０（配列番号６０７）または２ＬＥＣ２３（配列番号６０８）または２ＬＥＣ２４（配列番号６０９）または２ＬＥＣ２６（配列番号６１０）または２ＬＥＣ３８（配列番号６１１）または２ＬＥＣ４８（配列番号６１２）または２ＬＥＣ５３（配列番号６１３）または２ＬＥＣ５４（配列番号６１４）または２ＬＥＣ５５（配列番号６１５）または２ＬＥＣ５９（配列番号６１６）または２ＬＥＣ６０（配列番号６１７）または２ＬＥＣ６１（配列番号６１８）または２ＬＥＣ６２（配列番号６１９）または２ＬＥＣ６３（配列番号６２０）または２ＬＥＣ６７（配列番号６２１）または２ＬＥＣ６８（配列番号６２２）または２ＬＥＣ７６（配列番号６２３）または２ＬＥＣ８３（配列番号６２４）または２ＬＥＣ８８（配列番号６２５）または２ＬＥＣ８９（配列番号６２６）または２ＬＥＣ９０（配列番号６２７）または２ＬＥＣ９３（配列番号６２８）または２ＬＥＣ９５（配列番号６２９）または３ＬＥＣ４（配列番号６３０）または３ＬＥＣ６（配列番号６３１）または３ＬＥＣ９（配列番号６３２）または３ＬＥＣ１１（配列番号６３３）または３ＬＥＣ１３（配列番号６３４）または３ＬＥＣ１５（配列番号６３５）または３ＬＥＣ２２（配列番号６３６）または３ＬＥＣ２３（配列番号６３７）または３ＬＥＣ２７（配列番号６３８）または３ＬＥＣ３０（配列番号６３９）または３ＬＥＣ３６（配列番号６４０）または３ＬＥＣ５５（配列番号６４１）または３ＬＥＣ５７（配列番号６４２）または３ＬＥＣ６１（配列番号６４３）または３ＬＥＣ６２（配列番号６４４）または３ＬＥＣ６６（配列番号６４５）または３ＬＥＣ６９（配列番号６４６）または３ＬＥＣ７６（配列番号６４７）または３ＬＥＣ８２（配列番号６４８）または３ＬＥＣ８９（配列番号６４９）または３ＬＥＣ９４（配列番号６５０）。種々の例示的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ標的化部分は、末端ヒスチジンタグ配列（すなわち、ＨＨＨＨＨＨ：配列番号１２１３）を含まない上記配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、末端ＨＡタグ（すなわち、ＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳ；配列番号１２１４）を含まない上記配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、ＡＡＡリンカーを含まない上記配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、ＡＡＡリンカー、ＨＡタグ、および末端ヒスチジンタグ配列（すなわち、ＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ；配列番号１２１５）を含まない上記配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。
ある実施形態では、標的化部分は、Ｔｕｌｌｅｔｔ ｅｔ ａｌ．，ＪＣＩ Ｉｎｓｉｇｈｔ．２０１６；１（７）：ｅ８７１０２で開示の抗Ｃｌｅｃ９Ａ抗体を含む。この文献の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。
種々の実施形態では、本発明は、本明細書に記載の本発明のＣｌｅｃ９Ａを指向する標的化部分の任意の天然または合成類似体、変異体、バリアント、アレル、同族体およびオーソログ（本明細書では、ひとまとめにして「類似体」と呼ぶ）の使用を意図している。種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａを指向する標的化部分のアミノ酸配列は、アミノ酸類似体、アミノ酸誘導体、またはその他の非古典的アミノ酸をさらに含む。
種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質は、本明細書で開示の配列のうちのいずれか１つに少なくとも６０％同一であるアミノ酸配列を含む標的化部分を含む。例えば、キメラタンパク質は、本明細書で開示の配列のうちのいずれか１つに、少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一（例えば、本明細書で開示の配列のうちのいずれか１つに約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、約９９％または約１００％の配列同一性）であるアミノ酸配列を含む標的化部分を含み得る。
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、限定されないが、巨核球、血小板、赤血球、マスト細胞、好塩基球、好中球、および好酸球から選択される免疫細胞上の標的（例えば、抗原、受容体）を特異的に結合する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、抗原認識ドメインは、巨核球、血小板、赤血球、マスト細胞、好塩基球、好中球、および好酸球を、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１つまたは複数の疾患細胞または治療効果を得るために調節されるべき細胞を有する部位）に、直接または間接的に動員する。
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、巨核球および／または血小板関連標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。巨核球および／または血小板抗原の例としては、例えば、ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ、ＧＰＩｂ、ｖＷＦ、ＰＦ４、およびＴＳＰが挙げられる。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、１つまたは複数のこれらの例示巨核球および／または血小板抗原を結合する標的化部分を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、赤血球関連標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。目的の赤血球抗原の例としては、例えば、ＣＤ３４、ＣＤ３６、ＣＤ３８、ＣＤ４１ａ（血小板糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ）、ＣＤ４１ｂ（ＧＰＩＩｂ）、ＣＤ７１（トランスフェリン受容体）、ＣＤ１０５、グリコホリンＡ、グリコホリンＣ、ｃ－ｋｉｔ、ＨＬＡ－ＤＲ、Ｈ２（ＭＨＣ－ＩＩ）、およびＲｈ抗原が挙げられる。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、１つまたは複数のこれらの例示赤血球抗原を結合する標的化部分を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、マスト細胞関連標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。目的のマスト細胞抗原の例としては、例えば、ＳＣＦＲ／ＣＤ１１７、ＦｃεＲＩ、ＣＤ２、ＣＤ２５、ＣＤ３５、ＣＤ８８、ＣＤ２０３ｃ、Ｃ５Ｒ１、ＣＭＡｌ、ＦＣＥＲｌＡ、ＦＣＥＲ２、ＴＰＳＡＢｌが挙げられる。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、１つまたは複数のこれらの例示マスト細胞抗原を結合する標的化部分を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、好塩基球関連標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。目的の好塩基球抗原の例としては、例えば、ＦｃεＲＩ、ＣＤ２０３ｃ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ１０７ｂ、およびＣＤ１６４が挙げられる。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、１つまたは複数のこれらの好塩基球抗原を結合する標的化部分を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、好中球関連標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。目的の好中球抗原の例としては、例えば、７Ｄ５、ＣＤ１０／ＣＡＬＬＡ、ＣＤ１３、ＣＤ１６（ＦｃＲＩＩＩ）、ＣＤ１８タンパク質（ＬＦＡ－１、ＣＲ３、およびｐ１５０、９５）、ＣＤ４５、ＣＤ６７、およびＣＤ１７７が挙げられる。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、１つまたは複数のこれらの好中球抗原を結合する標的化部分を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、好酸球関連標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。目的の好酸球抗原の例としては、例えば、ＣＤ３５、ＣＤ４４およびＣＤ６９が挙げられる。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、１つまたは複数のこれらの好酸球抗原を結合する標的化部分を含む。
種々の実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、当業者に既知の任意の適切な抗原または受容体または細胞表面マーカーに特異的に結合する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、抗原または細胞表面マーカーは、組織特異的マーカーである。組織特異的マーカーの例としては、ＡＣＥ、ＣＤ１４、ＣＤ３４、ＣＤＨ５、ＥＮＧ、ＩＣＡＭ２、ＭＣＡＭ、ＮＯＳ３、ＰＥＣＡＭｌ、ＰＲＯＣＲ、ＳＥＬＥ、ＳＥＬＰ、ＴＥＫ、ＴＨＢＤ、ＶＣＡＭｌ、ＶＷＦなどの内皮細胞表面マーカー；ＡＣＴＡ２、ＭＹＨｌＯ、ＭＹＨｌ １、ＭＹＨ９、ＭＹＯＣＤなどの平滑筋細胞表面マーカー；ＡＬＣＡＭ、ＣＤ３４、ＣＯＬｌＡｌ、ＣＯＬ１Ａ２、ＣＯＬ３Ａ１、ＦＡＰ、ＰＨ－４などの線維芽細胞（間質）細胞表面マーカー；ＣＤｌＤ、Ｋ６ＩＲＳ２、ＫＲＴｌＯ、ＫＲＴ１３、ＫＲＴ１７、ＫＲＴ１８、ＫＲＴ１９、ＫＲＴ４、ＫＲＴ５、ＫＲＴ８、ＭＵＣｌ、ＴＡＣＳＴＤｌなどの上皮細胞表面マーカー；ＣＤ１３、ＴＦＮＡ、アルファ－ｖ ベータ－３（αＶβ３）、Ｅ－セレクチンなどの新生血管マーカー；およびＡＤＩＰＯＱ、ＦＡＢＰ４、およびＲＥＴＮなどの脂肪細胞表面マーカーが挙げられるが、これらに限定されない。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、１つまたは複数のこれらの抗原を結合する標的化部分を含む。
種々の実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、Ｔ細胞上に発現されるチェックポイントマーカー、例えば、ＰＤ－１、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ４、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ４０Ｌ、ＴＩＭ３、およびＡ２ａＲのうちの１つまたは複数に特異的に結合する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。
種々の実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、チェックポイントマーカー、例えば、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２、ＣＤ２８／ＣＤ８０またはＣＤ８６、ＣＴＬＡ４／ＣＤ８０またはＣＤ８６、ＩＣＯＳ／ＩＣＯＳＬまたはＢ７ＲＰ１、ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＣＤ１３７／ＣＤ１３７Ｌ、ＯＸ４０／ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ２７、ＣＤ４０Ｌ、ＴＩＭ３／Ｇａｌ９、およびＡ２ａＲのうちの１つまたは複数に特異的に結合する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。
非限定的例であるが、種々の実施形態では、本多重特異的ＣＤ８結合物質は、（ｉ）ＣＤ８；（ｉｉ）Ｔ細胞上に発現されるチェックポイントマーカー、例えば、ＰＤ－１、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ４、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、Ｃｄ２７、ＣＤ４０Ｌ、ＴＩＭ３、およびＡ２ａＲのうちの１つまたは複数を指向する標的化部分を含み、および／または（ｉｉｉ）標的化部分は、本明細書に記載のうちのいずれかの改変（例えば、変異体）シグナル伝達物質に加えて、腫瘍細胞を指向する。
種々の実施形態では、本多重特異的ＣＤ８結合物質は、ＰＤ－１を指向する１つまたは複数の標的化部分を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、ＰＤ－１ポリペプチドに選択的に結合する１つまたは複数の標的化部分を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、ＰＤ－１ポリペプチドに選択的に結合する、抗体、抗体誘導体もしくはフォーマット、ペプチドもしくはポリペプチド、または融合タンパク質のうちの１つまたは複数を含む。
種々の実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３配列のうちの少なくとも１つを含む可変ドメインを有するＰＤ１に対するＶＨＨを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ１配列は、配列番号６５１～配列番号６６４から選択される。
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ２配列は、配列番号６６５～配列番号６７８から選択される。
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ３配列は、配列番号６７９～配列番号６９２から選択される。
種々の例示的実施形態では、ＰＤ１標的化部分は、下記の配列から選択されるアミノ酸配列を含む：２ＰＤ２３（配列番号６９３）；または２ＰＤ２６（配列番号６９４）；または２ＰＤ９０（配列番号６９５）；または２ＰＤ１０６（配列番号６９６）；または２ＰＤ１６（配列番号６９７）；または２ＰＤ７１（配列番号６９８）；または２ＰＤ１５２（配列番号６９９）；または２ＰＤ１２（配列番号７００）；または３ＰＤ５５（配列番号７０１）；または３ＰＤ８２（配列番号７０２）；または２ＰＤ８（配列番号７０３）；または２ＰＤ２７（配列番号７０４）；または２ＰＤ８２（配列番号７０５）；または３ＰＤ３６（配列番号７０６）。
種々の例示的実施形態では、ＰＤ１標的化部分は、末端ヒスチジンタグ配列（すなわち、ＨＨＨＨＨＨ：配列番号１２１３）を含まない上記配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＰＤ１標的化部分は、末端ＨＡタグ（すなわち、ＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳ；配列番号１２１４）を含まない上記配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＰＤ１標的化部分は、ＡＡＡリンカーを含まない上記配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＰＤ１標的化部分は、ＡＡＡリンカー、ＨＡタグ、および末端ヒスチジンタグ配列（すなわち、ＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ；配列番号１２１５）を含まない上記配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。
ある実施形態では、標的化部分は、抗ＰＤ－１抗体ペムブロリズマブ（別名ＭＫ－３４７５、キイトルーダ）、またはそのフラグメントを含む。ペムブロリズマブおよびその他のヒト化抗ＰＤ－１抗体は、Ｈａｍｉｄ，ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ３６９（２）：１３４－４４，ＵＳ ８，３５４，５０９、および国際公開第２００９／１１４３３５号に開示されている。これらの全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのペムブロリズマブまたはその抗原結合フラグメントは、配列番号７０７のアミノ酸配列を含む重鎖および／または配列番号７０８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
ある実施形態では、標的化部分は、抗ＰＤ－１抗体、ニボルバム（別名ＢＭＳ－９３６５５８、ＭＤＸ－１１０６、ＯＮＯ－４５３８、オプジーボ）、またはそのフラグメントを含む。ＰＤ－１に特異的に結合するニボルバム（クローン５Ｃ４）およびその他のヒトモノクローナル抗体は、米国特許第８，００８，４４９号および国際公開第２００６／１２１１６８号に開示されている。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、ニボルバムまたはその抗原結合フラグメントは、配列番号７０９のアミノ酸配列を含む重鎖および／または配列番号７１０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
ある実施形態では、標的化部分は、抗ＰＤ－１抗体ピディリズマブ（別名ＣＴ－０１１、ｈＢＡＴまたはｈＢＡＴ－１）、またはそのフラグメントを含む。ピディリズマブおよびその他のヒト化抗ＰＤ－Ｉモノクローナル抗体は、米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号および国際公開第２００９／１０１６１１号に開示されている。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合フラグメントは、米国特許出願公開第２００８／００２５９８０の配列番号１５～１８：米国特許出願公開第２００８／００２５９８０の配列番号１５（配列番号７１１）；米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号１６（配列番号７１２）；米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号１７（配列番号７１３）；米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号１８（配列番号７１４）から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および／または米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２０～２４：米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２０（配列番号７１５）；米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２１（配列番号７１６）；米国特許出願公開第２００８号／００２５９８０の配列番号２２（配列番号７１７）；米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２３（配列番号７１８）；または米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２４（配列番号７１９）から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号１８を含む軽鎖および米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２２を含む重鎖を含む。
ある実施形態では、標的化部分は、ＡＭＰ－５１４（別名ＭＥＤＩ－０６８０）を含む。
ある実施形態では、標的化部分は、ｐｄ－ｌ２－Ｆｃ融合タンパク質ＡＭＰ－２２４を含み、これは国際公開第２０１０／０２７８２７号および同第２０１１／０６６３４２号に開示され、これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。このような実施形態では、標的化部分は、国際公開第２０１０／０２７８２７号の配列番号４（配列番号７２０）を含む標的化ドメインおよび／または国際公開第２０１０／０２７８２７号の配列番号８３（配列番号７２１）を含むＢ７－ＤＣ融合タンパク質を含み得る。
ある実施形態では、標的化部分は、ペプチドＡＵＮＰ１２または米国特許出願公開第２０１１／０３１８３７３号または米国特許第８，９０７，０５３号に開示のうちのいずれかの他のペプチドを含む。例えば、標的化部分は、ＡＵＮＰ１２（すなわち、米国特許出願公開第２０１１／０３１８３７３号の化合物８または配列番号４９）を含み得、これは、配列番号７２２の下記配列を有する：
ＳＮＴＳＥＳＦＫ（ＳＮＴＳＥＳＦ）ＦＲＶＴＱＬＡＰＫＡＱＩＫＥ－ＮＨ２
ある実施形態では、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、標的化部分は、抗ＰＤ－１抗体１Ｅ３またはそのフラグメントを含む。この特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１Ｅ３またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７２３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号７２４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、標的化部分は、抗ＰＤ－１抗体１Ｅ８またはそのフラグメントを含む。この特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１Ｅ８またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７２５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号７２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、標的化部分は、抗ＰＤ－１抗体１Ｈ３またはそのフラグメントを含む。この特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１Ｈ３またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７２７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号７２８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、標的化部分は、例えば、米国特許第８，９０７，０６５号および国際公開第２００８／０７１４４７号に開示のように、ＰＤ－１を指向するＶＨＨを含む。これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、ＰＤ－１に対するＶＨＨは、米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３４７～３５１：米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３４７（配列番号７２９）；米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３４８（配列番号７３０）；米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３４９（配列番号７３１）；米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３５０（配列番号７３２）；または米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３５１（配列番号７３３）を含む。
ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号および国際公開第２０１０／０３６９５９号に開示のように、抗ＰＤ－１抗体またはそのフラグメントのうちのいずれか１種類を含み、これらの特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号２５～２９：米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号２５（配列番号７３４）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号２６（配列番号７３５）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号２７（配列番号７３６）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号２８（配列番号７３７）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号２９（配列番号７３８）から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；および／または米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３０～３３：米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３０（配列番号７３９）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３１（配列番号７４０）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３２（配列番号７４１）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３３（配列番号７４２）から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
種々の実施形態では、本多重特異的ＣＤ８結合物質は、ＴＳＲ－０４２（Ｔｅｓａｒｏ，Ｉｎｃ．）、ＲＥＧＮ２８１０（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）、ＰＤＲ００１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、およびＢＧＢ－Ａ３１７（ＢｅｉＧｅｎｅ Ｌｔｄ．）から選択されるＰＤ－１を指向する１種類または複数種類の抗体、またはその抗体フラグメントを含む。
種々の実施形態では、本多重特異的ＣＤ８結合物質は、ＰＤ－Ｌ１を指向する１つまたは複数の標的化部分を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドに選択的に結合する１つまたは複数の標的化部分を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドに選択的に結合する、抗体、抗体誘導体もしくはフォーマット、ペプチドもしくはポリペプチド、または融合タンパク質のうちの１つまたは複数を含む。
種々の実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３配列のうちの少なくとも１つを含む可変ドメインを有するＰＤ－Ｌ１に対するＶＨＨを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ１配列は、配列番号７４３～配列番号７７３から選択される。
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ２配列は、配列番号７７４～配列番号８０４から選択される。
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ３配列は、配列番号８０５～配列番号８３５から選択される。
種々の例示的実施形態では、ＰＤ－Ｌ１標的化部分は、次記の配列から選択されるアミノ酸配列を含む：２ＬＩＧ２（配列番号８３６）；または２ＬＩＧ３（配列番号８３７）；または２ＬＩＧ１６（配列番号８３８）または２ＬＩＧ２２（配列番号８３９）または２ＬＩＧ２７（配列番号８４０）または２ＬＩＧ２９（配列番号８４１）または２ＬＩＧ３０（配列番号８４２）または２ＬＩＧ３４（配列番号８４３）または２ＬＩＧ３５（配列番号８４４）または２ＬＩＧ４８（配列番号８４５）または２ＬＩＧ６５（配列番号８４６）または２ＬＩＧ８５（配列番号８４７）または２ＬＩＧ８６（配列番号８４８）または２ＬＩＧ８９（配列番号８４９）または２ＬＩＧ９７（配列番号８５０）または２ＬＩＧ９９（配列番号８５１）または２ＬＩＧ１０９（配列番号８５２）または２ＬＩＧ１２７（配列番号８５３）または２ＬＩＧ１３９（配列番号８５４）または２ＬＩＧ１７６（配列番号８５５）または２ＬＩＧ１８９（配列番号８５６）または３ＬＩＧ３（配列番号８５７）または３ＬＩＧ７（配列番号８５８）または３ＬＩＧ８（配列番号８５９）または３ＬＩＧ９（配列番号８６０）または３ＬＩＧ１８（配列番号８６１）または３ＬＩＧ２０（配列番号８６２）または３ＬＩＧ２８（配列番号８６３）または３ＬＩＧ２９（配列番号８６４）または３ＬＩＧ３０（配列番号８６５）または３ＬＩＧ３３（配列番号８６６）。
種々の例示的実施形態では、ＰＤ－Ｌ１標的化部分は、末端ヒスチジンタグ配列（すなわち、ＨＨＨＨＨＨ：配列番号１２１３）を含まない上記配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１標的化部分は、末端ＨＡタグ（すなわち、ＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳ；配列番号１２１４）を含まない上記配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１標的化部分は、ＡＡＡリンカーを含まない上記配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１標的化部分は、ＡＡＡリンカー、ＨＡタグ、および末端ヒスチジンタグ配列（すなわち、ＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ；配列番号１２１５）を含まない上記配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。
ある実施形態では、標的化部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体ＭＥＤＩ４７３６（別名デュルバルマブ）、またはそのフラグメントを含む。ＭＥＤＩ４７３６は、ＰＤ－Ｌ１に対し選択的であり、ＰＤ－Ｌ１のＰＤ－１およびＣＤ８０受容体に対する結合を阻止する。本明細書で提供される方法で使用するためのＭＥＤＩ４７３６およびその抗原結合フラグメントは、重鎖および軽鎖または重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。ＭＥＤＩ４７３６の配列は、国際公開第２０１６／０６２７２号に開示され、この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのＭＥＤＩ４７３６またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８６７のアミノ酸配列を含む重鎖および／または配列番号８６８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのＭＥＤＩ４７３６またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１６／０６２７２号の配列番号４（配列番号８６９）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または国際公開第２０１６／０６２７２号の配列番号３（配列番号８７０）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、標的化部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体アテゾリズマブ（別名ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＲＧ７４４６）、またはそのフラグメントを含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのアテゾリズマブまたはその抗原結合フラグメントは、配列番号８７１のアミノ酸配列を含む重鎖；および／または配列番号８７２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
ある実施形態では、標的化部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体アベルマブ（別名ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、またはそのフラグメントを含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのアテゾリズマブまたはその抗原結合フラグメントは、配列番号８７３のアミノ酸配列を含む重鎖；および／または配列番号８７４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体ＢＭＳ－９３６５５９（別名１２Ａ４、ＭＤＸ－１１０５）、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのＢＭＳ－９３６５５９またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８７５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号８７６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体３Ｇ１０、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための３Ｇ１０またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８７７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号８７８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１０Ａ５、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１０Ａ５またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８７９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号８８０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体５Ｆ８、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための５Ｆ８またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８８１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号８８２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１０Ｈ１０、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１０Ｈ１０またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８８３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号８８４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、標的化部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１Ｂ１２、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１Ｂ１２またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８８５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号８８６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、標的化部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体７Ｈ１、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための７Ｈ１またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８８７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号８８８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、標的化部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１１Ｅ６、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１１Ｅ６またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８８９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号８９０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１２Ｂ７、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１２Ｂ７またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号８９２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１３Ｇ４、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１３Ｇ４またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８９３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号８９４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、標的化部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１Ｅ１２またはそのフラグメントを含む。この特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１Ｅ１２またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８９５アミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号８９６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、標的化部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１Ｆ４またはそのフラグメントを含む。この特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１Ｆ４またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号８９８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、標的化部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体２Ｇ１１またはそのフラグメントを含む。この特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための２Ｇ１１またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８９９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号９００のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体３Ｂ６、またはそのフラグメントを含む。この特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための３Ｂ６またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９０１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号９０２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号および国際公開第２０１２／１４５４９３号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体３Ｄ１０、またはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための３Ｄ１０またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９０３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号９０４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号および国際公開第２０１０／０３６９５９号に開示のうちのいずれか１種類の抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む。これらの特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３４～３８：米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３４（配列番号９０５）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３５（配列番号９０６）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３６（配列番号９０７）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３７（配列番号９０８）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３８（配列番号９０９）から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；および／または米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３９～４２：米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３９（配列番号９１０）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４０（配列番号９１１）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４１（配列番号９１２）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４２（配列番号９１３）から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
ある実施形態では、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、標的化部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体２．７Ａ４またはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための２．７Ａ４またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号２（配列番号９１４）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号７（配列番号９１５）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、標的化部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体２．９Ｄ１０またはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための２．９Ｄ１０またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号１２（配列番号９１６）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号１７（配列番号９１７）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、標的化部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体２．１４Ｈ９またはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための２．１４Ｈ９またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号２２（配列番号９１８）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号２７（配列番号９１９）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、標的化部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体２．２０Ａ８またはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための２．２０Ａ８またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号３２（配列番号９２０）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号３７（配列番号９２１）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、標的化部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体３．１５Ｇ８またはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための３．１５Ｇ８またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号４２（配列番号９２２）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号９２３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、標的化部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体３．１８Ｇ１またはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための３．１８Ｇ１またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号５２（配列番号９２４）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号５７（配列番号９２５）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、標的化部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体２．７Ａ４ＯＰＴまたはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための２．７Ａ４ＯＰＴまたはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号６２（配列番号９２６）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号６７（配列番号９２７）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、標的化部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体２．１４Ｈ９ＯＰＴまたはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための２．１４Ｈ９ＯＰＴまたはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号７２（配列番号９２８）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号７７（配列番号９２９）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、標的化部分は、国際公開第２０１６／０６１１４２号に開示されるいずれか１種類の抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む。この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号１８、３０、３８、４６、５０、５４、６２、７０、および７８：国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号１８（配列番号９３０）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号３０（配列番号９３１）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号３８（配列番号９３２）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号４６（配列番号９３３）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号５０（配列番号９３４）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号５４（配列番号９３５）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号６２（配列番号９３６）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号７０（配列番号９３７）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号７８（配列番号９３８）から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；および／または、国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号２２、２６、３４、４２、５８、６６、７４、８２、および８６：国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号２２（配列番号９３９）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号２６（配列番号９４０）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号３４（配列番号９４１）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号４２（配列番号９４２）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号５８（配列番号９４３）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号６６（配列番号９４４）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号７４（配列番号９４５）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号８２（配列番号９４６）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号８６（配列番号９４７）から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
ある実施形態では、標的化部分は、国際公開第２０１６／０２２６３０号に開示されるいずれか１種類の抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む。この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、および４６：国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２（配列番号９４８）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号６（配列番号９４９）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号１０（配列番号９５０）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号１４（配列番号９５１）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号１８（配列番号９５２）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２２（配列番号９５３）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２６（配列番号９５４）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号３０（配列番号９５５）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号３４（配列番号９５６）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号３８（配列番号９５７）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４２（配列番号９５８）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４６（配列番号９５９）から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；および／または、国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３６、４０、４４、および４８：国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４（配列番号９６０）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号８（配列番号９６１）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号１２（配列番号９６２）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号１６（配列番号９６３）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２０（配列番号９６４）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２４（配列番号９６５）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２８（配列番号９６６）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号３２（配列番号９６７）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号３６（配列番号９６８）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４０（配列番号９６９）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４４（配列番号９７０）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４８（配列番号９７１）から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
ある実施形態では、標的化部分は、国際公開第２０１５／１１２９００号に開示されるいずれか１種類の抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む。この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号３８、５０、８２、および８６：国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号３８（配列番号９７２）；国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号５０（配列番号９７３）；国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号８２（配列番号９７４）；国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号８６（配列番号９７５）から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；および／または国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号４２、４６、５４、５８、６２、６６、７０、７４、および７８：国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号４２（配列番号９７６）；国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号４６（配列番号９７７）；国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号５４（配列番号９７８）；国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号５８（配列番号９７９）；国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号６２（配列番号９８０）；国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号６６（配列番号９８１）；国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号７０（配列番号９８２）；国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号７４（配列番号９８３）；国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号７８（配列番号９８４）から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
ある実施形態では、標的化部分は、国際公開第２０１０／０７７６３４号および米国特許第８，２１７，１４９号に開示されるいずれか１種類の抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む。これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗ＰＤ－Ｌ１またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１０／０７７６３４号の配列番号２０（配列番号９８５）のアミノ酸配列を含む重鎖領域；および／または国際公開第２０１０／０７７６３４号の配列番号２１（配列番号９８６）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１２００３９９０６号に開示されているように、ＣＮＣＭ受託番号ＣＮＣＭ Ｉ－４１２２、ＣＮＣＭ Ｉ－４０８０およびＣＮＣＭ Ｉ－４０８１により入手可能なハイブリドーマから得ることができるいずれか１種類の抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
ある実施形態では、標的化部分は、例えば、米国特許第８，９０７，０６５号および国際公開第２００８／０７１４４７号に開示のように、ＰＤ－Ｌ１抗体を指向するたＶＨＨを含む。これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、ＰＤ－Ｌ１に対するＶＨＨは、米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９４～３９９：米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９４（配列番号９８７）；米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９５（配列番号９８８）；米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９６（配列番号９８９）；米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９７（配列番号９９０）；米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９８（配列番号９９１）；米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９９（配列番号９９２）を含む。
種々の実施形態では、本多重特異的ＣＤ８結合物質は、ＰＤ－Ｌ２を指向する１つまたは複数の標的化部分を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、ＰＤ－Ｌ２ポリペプチドに選択的に結合する１つまたは複数の標的化部分を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、ＰＤ－Ｌ２ポリペプチドを選択的に結合する、抗体、抗体誘導体もしくはフォーマット、ペプチドもしくはポリペプチド、または融合タンパク質のうちの１つまたは複数を含む。
ある実施形態では、標的化部分は、例えば、米国特許第８，９０７，０６５号および国際公開第２００８／０７１４４７号に開示のように、ＰＤ－Ｌ２を指向するＶＨＨを含む。これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、ＰＤ－１に対するＶＨＨは、米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４４９～４５５：米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４４９（配列番号９９３）；米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４５０（配列番号９９４）；米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４５１（配列番号９９５）；米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４５２（配列番号９９６）；米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４５３（配列番号９９７）；米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４５４（配列番号９９８）；米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４５５（配列番号９９９）を含む。
ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号および国際公開第２０１０／０３６９５９号に開示のうちのいずれか１種類の抗ＰＤ－Ｌ２抗体を含む。これらの特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４３～４７：米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４３（配列番号１０００）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４４（配列番号１００１）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４５（配列番号１００２）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４６（配列番号１００３）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４７（配列番号１００４）から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；および／または米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４８～５１：米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４８（配列番号１００５）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４９（配列番号１００６）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号５０（配列番号１００７）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号５１（配列番号１００８）から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
種々の実施形態では、本発明の標的化部分は、本明細書で開示の配列のうちのいずれかに少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一（例えば、本明細書で開示の配列のうちのいずれかと約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、約９９％または約１００％の配列同一性）である、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、および／またはＰＤ－Ｌ２を標的とする配列を含み得る。
種々の実施形態では、本発明の標的化部分は、本明細書で開示のＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、および／またはＰＤ－Ｌ２を標的とする重鎖、軽鎖、重鎖可変領域、軽鎖可変領域、相補性決定領域（ＣＤＲ）、およびフレームワーク領域配列のいずれの組み合わせを含み得る。
ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２を選択的に結合するかあるいは標的にする追加の抗体、抗体誘導体もしくはフォーマット、ペプチドもしくはポリペプチドまたは融合タンパク質は、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号、米国特許出願公開第２０１３／００３４５５９号、米国特許第８，７７９，１０８号、米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号、米国特許第８，６０９，０８９号、米国特許出願公開第２０１０／０２８３３０号、米国特許出願公開第２０１２／０１１４６４９号、国際公開第２０１０／０２７８２７号、国際公開第２０１１／０６６３４２号、米国特許第８，９０７，０６５号、国際公開第２０１６／０６２７２２号、国際公開第２００９／１０１６１１号、国際公開第２０１０／０２７８２７号、国際公開第２０１１／０６６３４２号、国際公開第２００７／００５８７４号、国際公開第２００１／０１４５５６号、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号、国際公開第２０１０／０３６９５９号、国際公開第２０１０／０７７６３４号、米国特許第８，２１７，１４９号、米国特許出願公開第２０１２／００３９９０６号、国際公開第２０１２／１４５４９３号、米国特許出願公開第２０１１／０３１８３７３号、米国特許第８，７７９，１０８号、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号、国際公開第２００９／０８９１４９号、国際公開第２００７／００５８７号、国際公開第２０１６／０６１１４２号、国際公開第２０１６／０２２６３号、国際公開第２０１０／０７７６３４号、および国際公開第２０１５／１１２９００号で開示されている。これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。
種々の実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、例えばＤＣ上で、ＸＣＲ１に特異的に結合する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。種々の実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、ＸＣＬ１の全体または一部を含む抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。
種々の実施形態では、多重特異的ＣＤ８結合物質は、非細胞構造の一部である標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する認識ドメインを有する標的化部分を有する。いくつかの実施形態では、抗原または受容体は、無傷の細胞または細胞構造の不可欠な構成要素ではない。いくつかの実施形態では、抗原または受容体は、細胞外の抗原または受容体である。いくつかの実施形態では、標的は、非タンパク質性の非細胞マーカーであり、これらは、限定されないが、例えば、壊死腫瘍細胞から放出されたＤＮＡ、などのＤＮＡまたはＲＮＡを含む、核酸またはコレステロールなどの細胞外沈着物を含む。
いくつかの実施形態では、目的の標的（例えば、抗原、受容体）は、ストローマもしくは細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の非細胞成分またはそれと関連するマーカーの一部である。本明細書で使用される場合、ストローマは、組織または器官の連結および支持フレームワークを指す。ストローマは、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）および細胞外分子と共に線維芽細胞／筋線維芽細胞／膠細胞、上皮、脂肪、免疫、血管、平滑筋、および免疫細胞などの細胞の寄せ集めを含み得る。種々の実施形態では、目的の標的（例えば、抗原、受容体）は、細胞外マトリックスおよび細胞外分子などのストローマの非細胞成分の一部である。本明細書で使用される場合、ＥＣＭは、全ての組織および器官内に存在する非細胞成分を指す。ＥＣＭは、限定されないが、タンパク質、糖タンパク質、プロテオグリカン、および多糖類を含む生化学的に別々の成分の多数の集まりからなる。これらのＥＣＭ成分は通常、隣接する細胞により産生され、エキソサイトーシスによりＥＣＭ中に分泌される。分泌されると、ＥＣＭ成分は多くの場合、集合して、巨大分子の複合体ネットワークを形成する。種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質は、ＥＣＭの任意の成分上に位置する標的（例えば、抗原または受容体または非タンパク質分子）を認識する標的化部分を含む。ＥＣＭの成分の例としては、限定されないが、プロテオグリカン、非プロテオグリカン多糖類、繊維および他のＥＣＭタンパク質またはＥＣＭ非タンパク質、例えば、多糖類および／または脂質、またはＥＣＭ関連分子（例えば、タンパク質または非タンパク質、例えば、多糖類、核酸および／または脂質）が挙げられる。
いくつかの実施形態では、標的化部分は、ＥＣＭプロテオグリカン上の標的（例えば、抗原、受容体）を認識する。プロテオグリカンはグリコシル化タンパク質である。塩基性プロテオグリカン単位は、１つまたは複数の共有結合グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）鎖を有するコアタンパク質を含む。プロテオグリカンは、正電荷のナトリウムイオン（Ｎａ＋）を引き付ける正味負電荷を有し、これは、浸透を介して水を引き付け、ＥＣＭおよび常在性細胞を水和した状態に保持する。プロテオグリカンはまた、成長因子を捕捉し、ＥＣＭ内に貯蔵し得る。本発明のキメラタンパク質により標的とされ得るプロテオグリカンの例としては、ヘパラン硫酸、コンドロイチン硫酸、およびケラタン硫酸が挙げられるが、これらに限定されない。ある実施形態では、標的化部分は、ヒアルロン酸などの非プロテオグリカン多糖類上の標的（例えば、抗原、受容体）を認識する。
いくつかの実施形態では、標的化部分は、ＥＣＭ繊維上の標的（例えば、抗原、受容体）を認識する。ＥＣＭ繊維は、コラーゲン繊維およびエラスチン繊維を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、コラーゲンまたはコラーゲン繊維上の１つまたは複数のエピトープを認識する。コラーゲンは、ＥＣＭ中で最も豊富なタンパク質である。コラーゲンはＥＣＭ中に線維性タンパク質として存在し、常在性細胞に対し構造支持を与える。１つまたは複数の実施形態では、標的化部分は、限定されないが、線維性コラーゲン（Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、Ｖ、ＸＩ型）、ＦＡＣＩＴコラーゲン（ＩＸ、ＸＩＩ、ＸＩＶ型）、短鎖コラーゲン（ＶＩＩＩ、Ｘ型）、基底膜コラーゲン（ＩＶ型）、および／またはＶＩ、ＶＩＩ、またはＸＩＩＩ型コラーゲンを含む、ＥＣＭ内に存在する様々な種類のコラーゲンを認識し、これに結合する。エラスチン繊維は、組織に弾性を与え、組織が必要に応じ伸縮し、その後、元の状態に戻ることを可能にする。いくつかの実施形態では、標的化部分は、エラスチンまたはエラスチン繊維上の１つまたは複数のエピトープを認識する。
いくつかの実施形態では、標的化部分は、限定されないが、テネイシン、フィブロネクチン、フィブリン、ラミニン、またはナイドジェン／エンタクチンを含む、１種類または複数種類のＥＣＭタンパク質を認識する。
ある実施形態では、標的化部分は、テネイシンを認識し、これに結合する。テネイシン（ＴＮ）ファミリーの糖タンパク質は、少なくとも４種類のメンバー：テネイシン－Ｃ、テネイシン－Ｒ、テネイシン－Ｘ、およびテネイシン－Ｗを含む。テネイシンタンパク質の一次構造は、同じ連続配列中に順序づけられたいくつかの共通のモチーフ：アミノ末端７個の反復、上皮増殖因子（ＥＧＦ）様反復、フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン反復、およびカルボキシル末端フィブリノーゲン様球状ドメインを含む。それぞれのタンパク質メンバーは、ＥＧＦ様およびフィブロネクチンＩＩＩ型反復の数および性質における典型的な変動に関連付けられる。アイソフォームバリアントはまた、特にテネイシン－Ｃに対して存在する。２７種を超えるテネイシン－Ｃのスプライスバリアントおよび／またはアイソフォームが知られている。特定の実施形態では、標的化部分は、テネイシン－ＣＡ１を認識し、これに結合する。同様に、テネイシン－Ｒはまた、種々のスプライスバリアントおよびアイソフォームを有する。テネイシン－Ｒは通常、ダイマーまたはトリマーとして存在する。テネイシン－Ｘは、テネイシンファミリーの最大メンバーであり、トリマーとして存在することが知られている。テネイシン－Ｗは、トリマーとして存在する。いくつかの実施形態では、標的化部分は、テネイシンタンパク質上の１つまたは複数のエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、標的化部分は、モノマーおよび／またはダイマーおよび／またはトリマーおよび／またはヘキサマー型のテネイシンタンパク質を認識する。
ある実施形態では、標的化部分は、フィブロネクチンを認識し、これに結合する。フィブロネクチンは、細胞をＥＣＭ中のコラーゲン繊維と連結し、細胞がＥＣＭ中を移動することを可能にする糖タンパク質である。インテグリンに結合時には、フィブロネクチンは折り畳みをほどいて機能的ダイマーを形成する。いくつかの実施形態では、標的化部分は、モノマーおよび／またはダイマー型のフィブロネクチンを認識する。いくつかの実施形態では、標的化部分は、フィブロネクチン上の１つまたは複数のエピトープを認識する。例示的実施形態では、標的化部分は、フィブロネクチン細胞外ドメインＡ（ＥＤＡ）またはフィブロネクチン細胞外ドメインＢ（ＥＤＢ）を認識する。ＥＤＡレベルの上昇は、乾癬、関節リウマチ、糖尿病、および癌を含む種々の疾患および障害に関連する。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ＥＤＡアイソフォームを含むフィブロネクチンを認識し、癌細胞を含む疾患細胞にキメラタンパク質を標的化するために使用し得る。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ＥＤＢアイソフォームを含むフィブロネクチンを認識する。種々の実施形態では、このような標的化部分は、腫瘍新生血管を含む腫瘍細胞にキメラタンパク質を標的化するために使用し得る。
ある実施形態では、標的化部分は、フィブリンを認識し、これに結合する。フィブリンは、ＥＣＭのマトリックスネットワーク中に見つかることが多い、もう１つのタンパク質物質である。フィブリンは、フィブリノーゲンに対するプロテアーゼトロンビンの作用により形成され、これにより、フィブリンを重合させる。いくつかの実施形態では、標的化部分は、フィブリン上の１つまたは複数のエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、標的化部分は、モノマーならびに重合型のフィブリンを認識する。
ある実施形態では、標的化部分は、ラミニンを認識し、これに結合する。ラミニンは、基底膜の主要成分であり、細胞および器官のためのタンパク質ネットワーク基盤である。ラミニンは、α鎖、β鎖、およびγ鎖を含むヘテロトリマータンパク質である。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ラミニン上の１つまたは複数のエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、標的化部分は、モノマー、ダイマーならびにトリマー型のラミニンを認識する。
ある実施形態では、標的化部分は、ナイドジェンまたはエンタクチンを認識し、これらに結合する。ナイドジェン／エンタクチンは、高度に保存された硫酸化糖タンパク質ファミリーである。それらは基底膜の主要構造的成分をなし、ラミニンと、基底膜中のコラーゲンＩＶネットワークを連結するように機能する。このファミリーのメンバーは、ナイドジェン－１およびナイドジェン－２を含む。種々の実施形態では、標的化部分は、ナイドジェン－１および／またはナイドジェン－２上のエピトープを認識する。
種々の実施形態では、標的化部分は、本明細書に記載のうちのいずれかの標的（例えば、ＥＣＭタンパク質）上に存在するエピトープを認識する抗原認識ドメインを含む。ある実施形態では、抗原認識ドメインは、タンパク質上に存在する１つまたは複数の線形エピトープを認識する。本明細書で使用される場合、線形エピトープは、タンパク質上に存在するアミノ酸の任意の連続配列を指す。別の実施形態では、抗原認識ドメインは、タンパク質上に存在する１つまたは複数の立体構造エピトープを認識する。本明細書で使用される場合、立体構造エピトープは、抗原認識ドメインにより認識され得る特徴および／または形状および／または三次構造を備えた３次元表面を形成する１つまたは複数のアミノ酸の部分（これは不連続であってよい）を指す。
種々の実施形態では、標的化部分は、本明細書に記載のうちのいずれかの標的（例えば、ＥＣＭタンパク質）の完全長型および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／または任意の他の天然または合成の類似体、バリアント、または変異体に結合し得る。種々の実施形態では、標的化部分は、モノマー、ダイマー、トリマー、テトラマー、ヘテロダイマー、マルチマーおよび会合型を含む、本明細書に記載の任意の型のタンパク質に結合し得る。種々の実施形態では、標的化部分は、グリコシル化および／またはリン酸化型などの、本明細書に記載の任意の翻訳後修飾型のタンパク質に結合し得る。
種々の実施形態では、標的化部分は、ＤＮＡなどの細胞外分子を認識する抗原認識ドメインを含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ＤＮＡを認識する抗原認識ドメインを含む。ある実施形態では、ＤＮＡは、壊死細胞またはアポトーシス腫瘍細胞または他の疾患細胞から細胞外間隙中に脱落する。
種々の実施形態では、標的化部分は、アテローム斑と関連する１種類または複数種類の非細胞構造を認識する抗原認識ドメインを含む。２つのタイプのアテローム斑が知られている。線維－脂質（線維－脂肪）斑（ｆｉｂｒｏ－ｌｉｐｉｄ（ｆｉｂｒｏ－ｆａｔｔｙ）ｐｌａｑｕｅ）は、動脈の内膜の下の脂質を取り込んだ（ｌｉｐｉｄ－ｌａｄｅｎ）細胞の蓄積を特徴とする。内皮の下には、アテローム性のプラークコアを覆う繊維状キャップが存在する。コアは、増大した組織コレステロールおよびコレステロールエステル含量を有する脂質を取り込んだ細胞（マクロファージおよび平滑筋細胞）、フィブリン、プロテオグリカン、コラーゲン、エラスチン、ならびに壊死細胞片を含む。進行型プラークでは、プラークの中心コアは通常、細胞外のコレステロール沈着物（死細胞から放出）を含み、これは、空の針状間隙を有するコレステロール結晶の領域を形成する。プラークの周辺部には、より若い泡沫状細胞および毛細血管がある。繊維状プラークはまた、動脈壁内の内膜下にも局在し、壁の肥厚化および増殖、および時には、筋層の若干の萎縮を伴う内腔の飛び飛びに局在化した狭小化をもたらす。繊維状プラークは、コラーゲン繊維（エオシン好性）、カルシウムの沈殿物（ヘマトキシリン好性）および脂質を取り込んだ細胞を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、フィブリン、プロテオグリカン、コラーゲン、エラスチン、壊死細胞片、およびカルシウムまたは他の鉱物沈着物または沈殿物などのこれらのプラークの１種類または複数種類の非細胞成分を認識し、これに結合する。いくつかの実施形態では、壊死細胞片は、核酸、例えば、死細胞から放出されるＤＮＡまたはＲＮＡである。
種々の実施形態では、標的化部分は、神経変性疾患と関連する脳プラーク中で見つかる１種類または複数種類の非細胞構造を認識する抗原認識ドメインを含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、アルツハイマー病の患者の脳中で見つかるアミロイド斑中に局在化する１種類または複数種類の非細胞構造を認識し、これに結合する。例えば、標的化部分は、ペプチドアミロイドベータを認識し、これに結合する。ペプチドアミロイドベータは、アミロイド斑の主要な成分である。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ハンチントン病の患者で見つかる脳プラーク中にある１種類または複数種類の非細胞構造を認識し、これに結合する。種々の実施形態では、標的化部分は、レヴィー小体認知症および封入体筋炎などの他の神経変性疾患または筋骨格疾病と関連するプラークで見つかる１種類または複数種類の非細胞構造を認識し、これに結合する。
リンカーおよび官能基
種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、１つまたは複数の官能基、残基、または部分を含み得る。種々の実施形態では、１つまたは複数の官能基、残基、または部分は、本明細書に記載のうちのいずれかのシグナル伝達物質または標的化部分に結合されるか、または遺伝的に融合される。いくつかの実施形態では、このような官能基、残基または部分は、１つまたは複数の望ましい特性または官能基を本発明のＣＤ８結合物質に付与する。このような官能基およびそれらをＣＤ８結合物質に導入する技術の例は、当技術分野において既知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．（１９８０）を参照されたい。
種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、別の物質と複合化および／または融合して、半減期を延長するか、または別の方法で薬力学的および薬物動態学的特性を改善し得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、ＰＥＧ、ＸＴＥＮ（例えば、ｒＰＥＧとして）、ポリシアル酸（ＰＯＬＹＸＥＮ）、アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミンまたはＨＡＳ）、エラスチン様タンパク質（ＥＬＰ）、ＰＡＳ、ＨＡＰ、ＧＬＫ、ＣＴＰ、トランスフェリンなどのうちの１つまたは複数と融合または複合化され得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、抗体またはＦｃフラグメントなどの抗体フラグメントと融合または複合化され得る。例えば、キメラタンパク質は、ヒト免疫グロブリン（Ｉｇ）ＧのＦｃドメインのＮ－末端またはＣ末端に融合され得る。種々の実施形態では、それぞれ個々のキメラタンパク質は、ＢｉｏＤｒｕｇｓ（２０１５）２９：２１５－２３９に記載の１種類または複数種類の物質に融合され、この文献の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分は、好適な薬学的に許容可能なポリマー、例えばポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）またはその誘導体（例えば、メトキシポリ（エチレングリコール）またはｍＰＥＧ）を含む。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ部分の結合は、半減期を伸ばし、および／またはＣＤ８結合タンパク質の免疫原性を低減する。例えば、抗体および抗体フラグメント（限定されないが、ＶＨＨなどの単一ドメイン抗体を含む）に対し当該技術分野で用いられるペグ化などの任意の好適な形態のペグ化が通常用いられる；例えば、Ｃｈａｐｍａｎ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，５４，５３１－５４５（２００２）；ＶｅｒｏｎｅｓｅおよびＨａｒｒｉｓによる、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５４，４５３－４５６（２００３），ＨａｒｒｉｓおよびＣｈｅｓｓによる、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｉｓｃｏｖ．，２，（２００３）ならびに国際公開第０４／０６０９６５号を参照されたい。これらの文献の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。タンパク質のペグ化のための種々の試薬も、例えば、Ｎｅｋｔａｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＵＳＡから市販されている。いくつかの実施形態では、特に、システイン残基を介した部位特異的なペグ化が使用される（例えば、Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，１６，１０，７６１－７７０（２００３）を参照されたい、この文献の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）。例えば、このために、本発明のＣＤ８結合物質中の天然のシステイン残基に結合され得る。いくつかの実施形態では、本発明のＣＤ８結合物質は、ＰＥＧの結合のための１つまたは複数のシステイン残基を適切に導入するように修飾されるか、またはＰＥＧの結合のための１つまたは複数のシステイン残基を含むアミノ酸配列が、当該技術分野において既知の技術を使用してＣＤ８結合物質のアミノ末端および／またはカルボキシ末端に融合され得る。いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分には、Ｎ結合型またはＯ結合型グリコシル化を含む。いくつかの実施形態では、Ｎ結合型またはＯ結合型グリコシル化は、翻訳時修飾および／または翻訳後修飾の一部として導入される。
いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分は、１つまたは複数の検出可能なラベルまたはその他のシグナル生成基または部分を含む。好適なラベルおよびそれらの結合、使用および検出のための技術は、当技術分野において、既知であり、限定されないが、蛍光標識（例えば、フルオレセイン、イソチオシアネート、ローダミン、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ－フタルアルデヒド、ならびにフルオレサミンおよび蛍光金属、例えば、Ｅｕまたはランタニド系列の他の金属）、リン光標識、化学発光ラベルまたは生物発光ラベル（例えば、ルミノール、イソルミノール、セロマティックアクリジニウム・エステル、イミダゾール、アクリジニウム塩、オキサレートエステル、ジオキセタンまたはＧＦＰおよびその類似体）、放射性同位体、金属、金属キレートもしくは金属カチオンまたはインビボ、インビトロまたはインサイツ診断および画像処理での使用に特に適している他の金属もしくは金属カチオン、ならびに発色団および酵素（例えば、リンゴ酸脱水素酵素、ブドウ球菌ヌクレアーゼ、デルタ－Ｖ－ステロイドイソメラーゼ、酵母アルコール脱水素酵素、アルファグリセロリン酸脱水素酵素、トリオースリン酸イソメラーゼ、ビオチンアビジンペルオキシダーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、ベータガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース－ＶＩ－リン酸脱水素酵素、グルコアミラーゼおよびアセチルコリンエステラーゼ）を含む。他の好適なラベルとしては、ＮＭＲまたはＥＳＲ分光法を用いて検出できる部分が挙げられる。このように標識した本発明のＶＨＨおよびポリペプチドは、特定の標識の選択により、例えば、インビトロ、インビボまたはインサイツアッセイ（これ自体ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡおよびＥＩＡおよびその他の「サンドイッチ法」などとして知られるイムノアッセイ）ならびにインビボ診断および画像処理の目的に使用し得る。
いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分には、ＣＤ８結合物質に結合または遺伝的に融合されたタグが含まれる。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、単一タグまたは複数タグを含み得る。例えば、タグは、ＣＤ８結合物質のＣＤ８またはいずれか他の腫瘍抗原などの目的抗原に対する結合を阻害または妨害しない、ペプチド、糖、またはＤＮＡ分子である。種々の実施形態では、タグは、少なくとも約：３～５アミノ酸長さ、５～８アミノ酸長さ、８～１２アミノ酸長さ、１２～１５アミノ酸長さ、または１５～２０アミノ酸長さである。代表的タグは、例えば、米国特許出願公開第２０１３／００５８９６２号に記載されている。いくつかの実施形態では、タグは、グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）およびヒスチジン（Ｈｉｓ）タグなどの親和性タグである。ある実施形態では、ＣＤ８結合物質はＨｉｓタグを含む。
いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分は、例えば、金属または金属カチオンのうちの１つをキレートするためのキレート化基を含む。好適なキレート化基は、例えば、限定されないが、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）またはエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を含む。
いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分は、ビオチン－（ストレプト）アビジン結合対などの、特異的結合対の片方の一部である官能基を含む。このような官能基を使って、本発明のＣＤ８結合物質を、結合対のもう一方の半分に結合した別のタンパク質、ポリペプチドまたは化学化合物に、すなわち、結合対の結合を介して、連結し得る。例えば、本発明のＣＤ８結合物質をビオチンに複合化させ、アビジンまたはストレプトアビジンに複合化させた別のタンパク質、ポリペプチド、化合物または担体に連結し得る。例えば、検出可能なシグナル生成物質がアビジンまたはストレプトアビジンに複合化されている診断システムにおいて、このような結合ＣＤ８結合物質を、例えば、レポーターとして用い得る。例えば、このような結合対を使用して、ＣＤ８結合物質を医薬品目的に好適する担体などの担体に結合し得る。１つの非限定的例は、Ｃａｏ ａｎｄ Ｓｕｒｅｓｈ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ，８，４，２５７（２０００）に記載されたリポソーム製剤である。また、このような結合対を使用して、治療活性薬剤を、本発明のＣＤ８結合物質に連結し得る。
いくつかの実施形態では、本ＣＤ８結合物質は、必要に応じ、１つまたは複数のリンカーを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＤ８結合物質は、標的化部分とシグナル伝達物質とを連結するリンカーを含む。いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質は、シグナル伝達物質内にリンカーを含む（例えば、単鎖ＴＮＦの場合には、トリマーを生じる２つのリンカーを含み得る）。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、結合領域および／または標的化部分をそれぞれ連結するリンカーを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、本明細書に記載の種々の官能基、残基、または部分をＣＤ８結合物質に連結するのに利用し得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、結合領域および結合タンパク質の安定性、配向、結合、中和、および／または排出特性に影響を与えない、またはそれらを低下させない単一アミノ酸または複数のアミノ酸である。種々の実施形態では、リンカーは、ペプチド、タンパク質、糖、または核酸から選択される。
本発明は、種々のリンカー配列の使用を意図する。種々の実施形態では、リンカーは、天然のマルチドメインタンパク質から誘導され得るか、または、例えば、Ｃｈｉｃｈｉｌｉ ｅｔ ａｌ．，（２０１３），Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．２２（２）：１５３－１６７；Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１３），Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．６５（１０）：１３５７－１３６９に記載されている経験的リンカーである。これらの文献の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、リンカーは、リンカー設計データベースおよびＣｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１３），Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．６５（１０）：１３５７－１３６９ ａｎｄ Ｃｒａｓｔｏ ｅｔ ａｌ．，（２０００），Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１３（５）：３０９－３１２に記載のものなどのコンピュータープログラムを用いて設計し得る。種々の実施形態では、リンカーは機能性であり得る。例えば、限定されないが、リンカーは、折り畳みおよび／または安定性を改善するように、発現を改善するように、薬物動態学を改善するように、および／または本ＣＤ８結合物質の生物活性を改善するように機能し得る。
いくつかの実施形態では、リンカーはポリペプチドである。いくつかの実施形態では、リンカーは約１００アミノ酸長未満である。例えば、リンカーは、約１００、約９５、約９０、約８５、約８０、約７５、約７０、約６５、約６０、約５５、約５０、約４５、約４０、約３５、約３０、約２５、約２０、約１９、約１８、約１７、約１６、約１５、約１４、約１３、約１２、約１１、約１０、約９、約８、約７、約６、約５、約４、約３、または約２アミノ酸長未満であり得る。いくつかの実施形態では、リンカーはフレキシブルである。別の実施形態では、リンカーは剛性である。
いくつかの実施形態では、リンカーはポリペプチドである。いくつかの実施形態では、リンカーは約１００アミノ酸長を超える。例えば、リンカーは、約１００、約９５、約９０、約８５、約８０、約７５、約７０、約６５、約６０、約５５、約５０、約４５、約４０、約３５、約３０、約２５、約２０、約１９、約１８、約１７、約１６、約１５、約１４、約１３、約１２、約１１、約１０、約９、約８、約７、約６、約５、約４、約３、または約２アミノ酸長を超え得る。いくつかの実施形態では、リンカーはフレキシブルである。別の実施形態では、リンカーは剛性である。
種々の実施形態では、リンカーは、グリシンおよびセリン残基から実質的に構成される（例えば、約３０％、または約４０％、または約５０％、または約６０％、または約７０％、または約８０％、または約９０％、または約９５％、または約９７％のグリシンとセリン）。例えば、いくつかの実施形態では、リンカーは（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎであり、式中、ｎは、約１～約８、例えば、１、２、３、４、５、６、７、または８（配列番号１００９～１０１６）である。ある実施形態では、リンカー配列は、ＧＧＳＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０１７）である。追加のリンカーの例としては、限定されないが、次記配列を有するリンカーが挙げられる：ＬＥ、ＧＧＧＧＳ（配列番号１００９）、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ｎ＝１～４）（配列番号１００９～１０１２）、（Ｇｌｙ）８（配列番号１０１８）、（Ｇｌｙ）６（配列番号１０１９）、（ＥＡＡＡＫ）ｎ（ｎ＝１～３）（配列番号１０２０～１０２２）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｎＡ（ｎ＝２～５）（配列番号１０２３～１０２６）、ＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡ（配列番号１０２７）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）４ＡＬＥＡ（ＥＡＡＡＫ）４Ａ（配列番号１０２８）、ＰＡＰＡＰ（配列番号１０２９）、ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号１０３０）、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴ（配列番号１０３１）、ＧＳＡＧＳＡＡＧＳＧＥＦ（配列番号１０３２）、および（ＸＰ）ｎ、Ｘは、任意のアミノ酸、例えば、Ａｌａ、Ｌｙｓ、またはＧｌｕを示す。種々の実施形態では、リンカーは（ＧＧＳ）ｎ（ｎ＝１～２０）（配列番号１１７６～配列番号１１９５）である。いくつかの実施形態では、リンカーはＧである。いくつかの実施形態では、リンカーはＡＡＡである。いくつかの実施形態では、リンカーは（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ｎ＝９～２０）（配列番号１１９６～配列番号１２０７）である。
いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＳＥ（配列番号１２０８）、ＧＳＥＳＧ（配列番号１２０９）、ＧＳＥＧＳ（配列番号１２１０）、ＧＥＧＧＳＧＥＧＳＳＧＥＧＳＳＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＳ（配列番号１２１１）、および４アミノ酸間隔毎にランダムに配置されたＧ、Ｓ、およびＥのリンカーのうちの１つまたは複数である。
いくつかの実施形態では、リンカーは抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４、およびＩｇＡ１およびＩｇＡ２）を含む）のヒンジ部である。種々の実施形態では、リンカーは抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４、およびＩｇＡ１およびＩｇＡ２）を含む）のヒンジ部である。ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥクラス抗体で見つかるヒンジ部は、フレキシブルスペーサーとして機能し、Ｆａｂ部が空間中で自由に動くことを可能にする。定常領域と対照的に、ヒンジドメインは、構造上多様であり、免疫グロブリンクラスおよびサブクラス中の配列および長さの両方で変動する。例えば、ヒンジ部の長さおよび可撓性は、ＩｇＧサブクラス内で変動する。ＩｇＧ１のヒンジ部は、アミノ酸２１６～２３１を包含し、それが自由にフレキシブルであるために、Ｆａｂフラグメントは、それらの対称軸の周りで回転でき、２つの重鎖間ジスルフィド架橋の最初の位置を中心とする球内で移動できる。ＩｇＧ２は、ＩｇＧ１より短いヒンジを有し、１２個のアミノ酸残基と４個のジスルフィド架橋を有する。ＩｇＧ２のヒンジ部は、グリシン残基を欠き、比較的短く、また、追加の重鎖間ジスルフィド架橋により安定化された剛性ポリプロリン二重らせん体を含む。これらの特性は、ＩｇＧ２分子の可撓性を制限する。ＩｇＧ３は、６２個のアミノ酸を含む（２１個のプロリンと１１個のシステインを含む）その特有の延長されたヒンジ部（ＩｇＧ１ヒンジの約４倍の長さ）により、他のサブクラスとは異なり、柔軟性を欠くポリプロリン二重らせん体を形成する。ＩｇＧ３では、Ｆａｂフラグメントは、Ｆｃフラグメントから比較的遠くに離れており、より大きな可撓性を分子に与える。ＩｇＧ３の伸びたヒンジは、他のサブクラスに比べて、そのより高分子量の原因でもある。ＩｇＧ４のヒンジ部は、ＩｇＧ１より短く、その可撓性は、ＩｇＧ１とＩｇＧ２との中間である。ヒンジ部の可撓性は、次の順に低下すると報告されている：ＩｇＧ３＞ＩｇＧ１＞ＩｇＧ４＞ＩｇＧ２。
結晶学的調査によれば、免疫グロブリンヒンジ部は、機能的に次の３つの領域にさらに細分できる：上部ヒンジ部、コア部、および下部ヒンジ部。Ｓｈｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９９２ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ １３０：８７を参照されたい。上部ヒンジ部は、ＣＨ１のカルボキシル末端～運動を制限するヒンジ中の最初の残基、通常は２つの重鎖間の鎖間ジスルフィド結合を形成する最初のシステイン残基のアミノ酸を含む。上部ヒンジ部の長さは、抗体のセグメントの可撓性と相関する。コアヒンジ部は重鎖間ジスルフィド架橋を含み、下部ヒンジ部はＣＨ２ドメインのアミノ末端に繋がり、ＣＨ２中の残基を含む（同上文献）。野性型ヒトＩｇＧ１のコアヒンジ部は、配列Ｃｙｓ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ（配列番号１２１２）を含み、これは、ジスルフィド結合形成により二量体化されると、環状オクタペプチドを生成し、これが旋回軸として機能することにより、可撓性を付与すると考えられている。種々の実施形態では、本発明のリンカーは、任意の抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４、およびＩｇＡ１およびＩｇＡ２）を含む）の１、または２、または３個の上部ヒンジ部、コア部および下部ヒンジ部を含む。ヒンジ部はまた、１つまたは複数のグリコシル化部位も含み得、これは、多くの構造上異なるタイプの炭水化物付着部位を含む。例えば、ＩｇＡ１は、ヒンジ部の１７アミノ酸セグメント内に５つのグリコシル化部位を含み、腸内プロテアーゼに対するヒンジ部ポリペプチドの耐性を付与し、これは、分泌性免疫グロブリンにとって、有利な性質であると考えられる。種々の実施形態では、本発明のリンカーは、１つまたは複数のグリコシル化部位を含む。種々の実施形態では、リンカーは、ヒトＩｇＧ４抗体のヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインである。
必要に応じ、本ＣＤ８結合物質は抗体Ｆｃ領域に連結されてよく、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインの片方または両方、および場合によりヒンジ部を含む例えば、単一ヌクレオチド配列としてＦｃ領域に連結された本ＣＤ８結合物質をコードするベクターを用いて、このようなポリペプチドを調製できる。
いくつかの実施形態では、リンカーはＰＥＧなどの合成リンカーである。
種々の実施形態では、リンカーは機能性であり得る。例えば、限定されないが、リンカーは、折り畳みおよび／または安定性を改善するように、発現を改善するように、薬物動態学を改善するように、および／または本ＣＤ８結合物質の生物活性を改善するように機能し得る。別の例では、リンカーは、特定の細胞型または部位にＣＤ８結合物質を標的化するように機能し得る。
ＣＤ８結合物質の改変と産生
種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、ＶＨＨである標的化部分を含む。種々の実施形態では、ＶＨＨは、特定の生物源または特定の調製法に限定されない。例えば、ＶＨＨは通常、次記により得ることができる：（１）天然の重鎖抗体のＶＨＨドメインを単離することにより；（２）天然のＶＨＨドメインをコードするヌクレオチド配列の発現により；（３）天然のＶＨＨドメインの「ヒト化」により、またはこのようなヒト化ＶＨＨドメインをコードする核酸の発現により；（４）ヒト由来などの哺乳動物種由来などの任意の動物種由来の天然のＶＨドメインの「ラクダ化」、またはこのようなラクダ化ＶＨドメインをコードする核酸の発現により；（５）当該技術分野で記載の「ドメイン抗体」または「Ｄａｂ」の「ラクダ化」により、またはこのようなラクダ化ＶＨドメインをコードする核酸の発現により；（６）当該技術分野において既知のタンパク質、ポリペプチドまたはその他のアミノ酸配列のための合成または半合成技術を用いることにより；（７）当該技術分野において既知の核酸合成技術を用いてＶＨＨをコードする核酸を調製し、続けて、こうして得られた拡散を発現させることにより；および／または（８）前述のうちの１つまたは複数の任意の組み合わせにより。
ある実施形態では、ＣＤ８結合物質は、ヒトＣＤ８を指向する天然の重鎖抗体のＶＨＨドメインに対応するＶＨＨを含む。いくつかの実施形態では、このようなＶＨＨ配列は通常、ラクダ科の動物種をＣＤ８分子で適切に免疫化する（すなわち、ＣＤ８に対する免疫応答を生じさせる、および／またはＣＤ８に対する重鎖抗体を産生させるように免疫化する）ことにより、ラクダ科の動物から好適な生物試料（例えば、血液試料、またはＢ細胞の任意の試料）を得ることにより、および任意の好適な既知の技術を用いて、試料から出発して、ＣＤ８に対するＶＨＨ配列を生成することにより、生成または得ることができる。いくつかの実施形態では、ＣＤ８に対する天然のＶＨＨドメインは、ラクダ科の動物ＶＨＨ配列の未処理ライブラリーから、例えば、当技術分野で既知の１種類または複数種類のスクリーニング技術を使って、ＣＤ８、またはその少なくとも１つの部分、フラグメント、抗原決定基またはエピトープを用いてこのようなライブラリーをスクリーニングすることにより、得ることができる。このようなライブラリーおよび技術は、例えば、国際公開第９９／３７６８１号、国際公開第０１／９０１９０号、国際公開第０３／０２５０２０号、および国際公開第０３／０３５６９４号に記載されている。これらの特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、例えば、国際公開第００／４３５０７号に記載のランダム変異誘発および／またはＣＤＲシャッフリングなどの技術により未処理ＶＨＨライブラリーから得られたＶＨＨライブラリーなどの未処理ＶＨＨライブラリー由来の改善された合成または半合成ライブラリーを使用し得る。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、ＣＤ８に対するＶＨＨ配列を得る別の技術は、重鎖抗体を発現できる遺伝子導入哺乳動物を適切に免疫化し（すなわち、ＣＤ８に対する免疫応答を生じさせる、および／またはＣＤ８に対する重鎖抗体を産生させるように免疫化し）、遺伝子導入哺乳動物から好適な生物試料（例えば、血液試料、またはＢ細胞の任意の試料）を得て、その後、任意の好適な既知の技術を用いて、試料から出発して、ＣＤ８に対するＶＨＨ配列を生成することを含む。例えば、このために、国際公開第０２／０８５９４５号および国際公開第０４／０４９７９４号（これらの特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）に記載の重鎖抗体発現マウスおよびさらなる方法および技術を使用できる。
ある実施形態では、ＣＤ８結合物質は、「ヒト化」、すなわち、天然のＶＨＨ配列（および特に、フレームワーク配列中の）のアミノ酸配列中の１つまたは複数のアミノ酸残基を、ヒトの従来の４鎖抗体由来のＶＨドメイン中の対応する位置（単一または複数）にある１つまたは複数のアミノ酸残基で置換しているＶＨＨを含む。これは、当該技術分野において既知のヒト化技術を使用して実施できる。いくつかの実施形態では、可能なヒト化置換またはヒト化置換の組み合わせは、当該技術分野において既知の方法、例えば、ＶＨＨの配列と天然のヒトＶＨドメインの配列との間の比較により決定し得る。いくつかの実施形態では、ヒト化置換は、得られたヒト化ＶＨＨが有利な機能特性をなお保持するように選択される。通常、ヒト化の結果として、本発明のＶＨＨは、より「ヒト様」になり得るが、対応する天然のＶＨＨドメインと比較して、低減された免疫原性などの好ましい特性を依然として保持している。種々の実施形態では、本発明のヒト化ＶＨＨは、当該技術分野において既知の任意の好適な方法で得ることができ、したがって、出発材料として天然のＶＨＨドメインを含むポリペプチドを用いて得たポリペプチドに厳密に限定されない。
ある実施形態では、ＣＤ８結合物質は、「ラクダ化」、すなわち、従来の４鎖抗体由来の天然のＶＨドメインのアミノ酸配列中の１つまたは複数のアミノ酸残基を、ラクダ科の動物の重鎖抗体のＶＨＨドメイン中の対応する位置（単一または複数）にある１つまたは複数のアミノ酸残基で置換しているＶＨＨを含む。いくつかの実施形態では、このような「ラクダ化」置換は、ＶＨ－ＶＬインターフェースを形成するおよび／または、そこに存在するアミノ酸位置に、および／またはいわゆるラクダ科の顕著な特徴残基（例えば、国際公開第９４／０４６７８号を参照されたい、この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる）の位置に挿入されるいくつかの実施形態では、ラクダ化ＶＨＨを生成するかあるいは設計するための出発材料または出発点として用いられるＶＨ配列は、哺乳動物由来のＶＨ配列、例えば、ＶＨ３配列などの、ヒトのＶＨ配列である。種々の実施形態では、ラクダ化ＶＨＨは、当該技術分野において既知の任意の好適な方法で得ることができ（すなわち、上記（１）～（８）で示したような）、したがって、出発材料として天然のＶＨドメインを含むポリペプチドを用いて得たポリペプチドに厳密に限定されない。
種々の実施形態では、「ヒト化」および「ラクダ化」の両方は、天然のＶＨＨドメインまたはＶＨドメインをコードするヌクレオチド配列をそれぞれ用意し、次に、当該技術分野において既知の方法で、ヌクレオチド配列中の１つまたは複数のコドンを新規ヌクレオチド配列がそれぞれ「ヒト化」または「ラクダ化」ＶＨＨをコードするような方法で変更することにより実施することができる。この核酸は、その後、本発明の目的のＶＨＨを得るように、当該技術分野において既知の方法で発現させることができる。あるいは、天然のＶＨＨドメインまたはＶＨドメインそれぞれのアミノ酸配列に基づいて、目的の本発明のヒト化またはラクダ化ＶＨＨのそれぞれのアミノ酸配列を設計し、その後、当該技術分野において既知のペプチド合成技術を用いて新規に合成できる。また、天然のＶＨＨドメインまたはＶＨドメインそれぞれのアミノ酸配列またはヌクレオチド配列に基づいて、目的のヒト化またはラクダ化ＶＨＨのそれぞれをコードするヌクレオチド配列を設計し、次に当該技術分野において既知の核酸合成技術を用いて新規に合成でき、その後、こうして得られた核酸を、本発明の目的のＶＨＨが得られるように、当該技術分野において既知の方法で発現させることができる。天然のＶＨ配列またはＶＨＨ配列から出発して、本発明のＶＨＨおよび／またはそれをコードする核酸を得るその他の好適な方法および技術は、当技術分野において既知であり、例えば、１つまたは複数の天然のＶＨ配列（１つまたは複数のＦＲ配列および／またはＣＤＲ配列など）中の１つまたは複数の部分、１つまたは複数の天然のＶＨＨ配列（１つまたは複数のＦＲ配列またはＣＤＲ配列など）中の１つまたは複数の部分、および／または１つまたは複数の合成または半合成配列を、本発明のＶＨＨまたはそれをコードするヌクレオチド配列もしくは核酸を得るように、好適な方法で組み合わせることを含み得る。
本発明のＣＤ８結合物質を産生する方法は、本明細書に記載されている。例えば、本発明のＣＤ８結合物質をコードするＤＮＡ配列は、当該技術分野において既知の方法を使用して化学的に合成できる。合成ＤＮＡ配列は、例えば、発現制御配列を含む他の適切なヌクレオチド配列に連結し、目的のＣＤ８結合物質をコードする遺伝子発現構築物を産生できる。したがって、種々の実施形態では、本発明は、本発明のＣＤ８結合物質をコードするヌクレオチド配列を含む単離核酸を提供する。
本発明のＣＤ８結合物質をコードする核酸は、発現ベクター中に組み込まれ（連結され）てよく、このベクターは、遺伝子導入、形質転換、または形質導入技術により宿主細胞中に導入できる。例えば、本発明のＣＤ８結合物質をコードする核酸を、レトロウイルス形質導入により宿主細胞中に導入できる。宿主細胞の例は、大腸菌細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト胎児腎臓２９３（ＨＥＫ２９３）細胞、ヒーラ細胞、仔ハムスター腎（ＢＨＫ）細胞、サル腎培養細胞（ＣＯＳ）、またはヒト肝細胞癌細胞（例えば、Ｈｅｐ Ｇ２）、および骨髄腫細胞である。形質転換宿主細胞は、宿主細胞に、本発明のＣＤ８結合物質をコードする遺伝子を発現させるのを可能とする条件下で増殖させることができる。したがって、種々の実施形態では、本発明は、本発明のＣＤ８結合物質をコードする核酸を含む発現ベクターを提供する。種々の実施形態では、本発明は、このような発現ベクターを含む宿主細胞をさらに提供する。
特定の発現および精製条件は、用いられる発現系に応じて変化する。例えば、遺伝子が大腸菌中で発現される場合、遺伝子は最初に、操作された遺伝子を細菌プロモーター、例えば、ＴｒｐまたはＴａｃ、および原核生物シグナル配列の下流に配置することにより発現ベクター中に挿入される。別の例では、操作された遺伝子が真核生物宿主細胞、例えば、ＣＨＯ細胞中で発現される場合、遺伝子は最初に、例えば、好適な真核生物プロモーター、分泌シグナル、転写促進因子、および種々のイントロンを含む発現ベクター中に挿入される。遺伝子構築物は、遺伝子導入、形質転換、または形質導入技術を用いて宿主細胞中に導入できる。
本発明のＣＤ８結合物質は、タンパク質の発現を許容する条件下で、ＣＤ８結合物質をコードする発現ベクターを形質導入した宿主細胞を増殖させることにより産生できる。発現後、タンパク質を収集し、例えば、グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）およびヒスチジン（Ｈｉｓ）などの親和性タグまたはクロマトグラフィーにより、当該技術分野において周知の技術を用いて精製できる。ある実施形態では、ＣＤ８結合物質はＨｉｓタグ（これは、必要に応じ、操作されたタンパク質切断部位により切断可能である）を含む。
したがって、種々の実施形態では、本発明は、本発明のＣＤ８結合物質をコードする核酸を提供する。種々の実施形態では、本発明は、本発明のＣＤ８結合物質をコードする核酸を含む宿主細胞を提供する。
種々の実施形態では、本発明のＣＤ８結合物質またはＣＤ８結合物質を含むキメラタンパク質は、例えば、患者中でインビボ発現され得る。例えば、種々の実施形態では、本発明のＣＤ８結合物質またはＣＤ８結合物質を含むキメラタンパク質は、本発明のＣＤ８結合物質またはＣＤ８結合物質を含むキメラタンパク質をコードする核酸の形態で投与され得る。種々の実施形態では、核酸はＤＮＡまたはＲＮＡである。いくつかの実施形態では、本発明のＣＤ８結合物質またはＣＤ８結合物質を含むキメラタンパク質は、修飾ｍＲＮＡ、すなわち、１種類または複数種類の修飾ヌクレオチドを含むｍＲＮＡによりコードされる。いくつかの実施形態では、修飾ｍＲＮＡは、米国特許第８，２７８，０３６号で見出される１つまたは複数の修飾を含む。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、修飾ｍＲＮＡは、ｍ５Ｃ、ｍ５Ｕ、ｍ６Ａ、ｓ２Ｕ、Ψ、および２’－Ｏ－メチル－Ｕのうちの１つまたは複数を含む。いくつかの実施形態では、本発明は、本発明の１種類または複数種類のキメラタンパク質をコードする修飾ｍＲＮＡの投与に関する。いくつかの実施形態では、本発明は、修飾ｍＲＮＡを含む遺伝子治療ベクターに関する。いくつかの実施形態では、本発明は、修飾ｍＲＮＡを含む遺伝子治療ベクターに関する。種々の実施形態では、核酸は、腫瘍溶解性ウイルス、例えば、アデノウイルス、レオウイルス、はしか、単純ヘルペス、ニューカッスル病ウイルスまたはワクシニアの形態である。
薬学的に許容可能な塩および賦形剤
本明細書で記載のＣＤ８結合物質は、無機もしくは有機酸と反応できる充分に塩基性の官能基を有して、または無機もしくは有機塩基と反応できるカルボキシル基を有して、薬学的に許容可能な塩を形成できる。薬学的に許容可能な酸付加塩は、当該技術分野でよく知られているように、薬学的に許容可能な酸から形成される。このような塩は、例えば、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，２－１９（１９７７およびＴｈｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ；Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｕｓｅ．Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ ａｎｄ Ｃ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（ｅｄｓ．），Ｖｅｒｌａｇ，Ｚｕｒｉｃｈ（Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）２００２、に挙げられた薬学的に許容可能な塩を含む。これらの文献は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
薬学的に許容可能な塩としては、非限定的例であるが、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、ホスフェート、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルカロン酸塩、サッカリン酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、樟脳スルホン酸塩、パモ酸塩、フェニル酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、アクリル酸塩、クロロ安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ｏ－アセトキシ安息香酸塩、ナフタレン－２－安息香酸塩、イソ酪酸塩、フェニル酪酸塩、α－ヒドロキシ酪酸塩、ブチン－１，４－ジカルボキシレート、ヘキシン－１，４－ジカルボキシレート、カプリン酸塩、カプリル酸塩、ケイ皮酸塩、グリコール酸塩、ヘプタン酸塩、ヒプル酸塩、リンゴ酸塩、ヒドロキシマレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、ニコチン酸塩、フタル酸塩、テラフタル酸塩、プロピオール酸塩、プロピオン酸塩、フェニルプロピオン酸塩、セバシン酸塩、スベリン酸塩、ｐ－ブロモベンゼンスルホン酸塩、クロロベンゼンスルホン酸塩、エチルスルホン酸塩、２－ヒドロキシエチルスルホン酸塩、メチルスルホン酸塩、ナフタレン－１－スルホン酸塩、ナフタレン－２－スルホン酸塩、ナフタレン－１，５－スルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩、および酒石酸塩が挙げられる。
「薬学的に許容可能な塩」という用語はまた、カルボン酸官能基などの酸性官能基、および塩基を有する本発明の組成物の塩を指す。適切な塩基としては、限定されないが、ナトリウム、カリウム、およびリチウムなどのアルカリ金属の水酸化物；カルシウムおよびマグネシウムなどのアルカリ土類金属の水酸化物；アルミニウムおよび亜鉛などのその他の金属の水酸化物；アンモニア、および非置換またはヒドロキシ置換のモノ－、ジ－、またはトリ－アルキルアミン、ジシクロヘキシルアミンなどの有機アミン；トリブチルアミン；ピリジン；Ｎ－メチル、Ｎ－エチルアミン；ジエチルアミン；トリエチルアミン；モノ－、ビス－、またはトリス－（２－ヒドロキシエチル）アミン、２－ヒドロキシ－ｔｅｒｔ－ブチルアミン、またはトリス－（ヒドロキシメチル）メチルアミンなどのモノ－、ビス－、またはトリス－（２－ＯＨ－低級アルキルアミン）、Ｎ，Ｎ－ジメチル－Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）アミンまたはトリ－（２－ヒドロキシエチル）アミンなどのＮ，Ｎ－ジ－低級アルキル－Ｎ－（ヒドロキシル－低級アルキル）－アミン；Ｎ－メチル－Ｄ－グルカミン；およびアルギニン、リシンなどのアミノ酸などが挙げられる。
いくつかの実施形態では、本明細書で記載の組成物は、薬学的に許容可能な塩の形態である。
医薬組成物および製剤
種々の実施形態では、本発明は、本明細書で記載のＣＤ８結合物質および薬学的に許容可能な担体または賦形剤を含む医薬組成物に関する。本明細書で記載のいずれの医薬組成物も、薬学的に許容可能な担体またはビークルを含む組成物の成分として、対象に投与することができる。このような組成物は必要に応じ、適切な投与用の形態を与えるように、適切な量の薬学的に許容可能な賦形剤を含み得る。
種々の実施形態では、医薬賦形剤は、ピーナッツオイル、大豆油、ミネラルオイル、ゴマ油などの石油、動物、植物、または人工起源のものを含む、水および油などの液体であり得る。医薬賦形剤は、例えば、食塩水、アカシアゴム、ゼラチン、デンプンペースト、滑石、ケラチン、コロイド状シリカ、尿素などであってよい。さらに、助剤、安定化剤、増粘化剤、潤滑剤、および着色料を使用することができる。一実施形態では、薬学的に許容可能な賦形剤は、対象に投与される場合、無菌である。本明細書で記載のうちのいずれかの薬剤が静脈内に投与される場合、水は有用な賦形剤である。生理食塩水および水性デキストロースならびにグリセリン溶液はまた、液体賦形剤として、特に注射可能溶液に用いることができる。適切な医薬賦形剤としては、デンプン、グルコース、ラクトース、ショ糖、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセリンモノステアレート、滑石、塩化ナトリウム、乾燥脱脂乳、グリセリン、プロピレン、グリコール、水、エタノールなども挙げられる。本明細書で記載のいずれの薬剤も、必要に応じ、少量の湿潤剤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩衝剤を含んでよい。適切な医薬賦形剤のそのほかの例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １４４７－１６７６（Ａｌｆｏｎｓｏ Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ ｅｄｓ．，１９ｔｈ ｅｄ．１９９５）に記載されている。この文献は参照により本明細書に組み込まれる。
本発明は、種々の製剤中に記載医薬組成物（および／または追加の治療薬）を含む。本明細書で記載のいずれの本発明の医薬組成物（および／または追加の治療薬）も、液剤、懸濁剤、乳濁液、点滴剤、錠剤、丸薬、ペレット、カプセル剤、液体含有カプセル剤、ゼラチンカプセル剤、散剤、徐放製剤、坐剤、乳剤、エアロゾル、噴霧剤、懸濁剤、凍結乾燥散剤、凍結懸濁剤、乾燥散剤、または使用に適するその他の任意の形態をとることができる。一実施形態では、組成物はカプセルの形態である。別の実施形態では、組成物は錠剤の形態である。さらに別の実施形態では、医薬組成物は、軟質ゲルカプセルの形態に処方される。さらなる実施形態では、医薬組成物は、ゼラチンカプセルの形態に処方される。さらに別の実施形態では、医薬組成物は、液剤として処方される。
必要に応じて、本発明の医薬組成物（および／または追加の薬剤）は、可溶化剤も含み得る。また、薬剤は当技術分野において既知の適切なビークルまたは送達装置を使って送達することができる。本明細書で概要を述べた併用療法剤は、単一の送達ビークルまたは送達担体で同時送達できる。
本発明の医薬組成物（および／または追加の薬剤）を含む製剤は単位剤形として好都合に提供でき、薬学の分野でよく知られたいずれかの方法により調製され得る。このような方法は通常、治療薬を担体と混合するステップを含み、担体は１種類または複数種類の補助成分を構成する。通常、製剤は、治療薬と、液体担体、微粉化固相担体、または両方とを均一に、完全に混合すること、その後、必要に応じ、生成物を所望の製剤の剤形に成形すること（例えば、湿式または乾式造粒、散剤ブレンド、など、それに続く当該技術分野で既知の従来の方法を使って錠剤化すること）により調製される。
種々の実施形態では、本明細書で記載のいずれの医薬組成物（および／または追加の薬剤）も、本明細書で記載の投与方法に適合された組成物として、ルーチン手順に従って処方される。
投与経路は、例えば、経口、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、舌下、鼻腔内、脳内、膣内、経皮、直腸内、吸入、または局所を含む。投与は局所的または全身性であり得る。いくつかの実施形態では、投与は、経口により行われる。別の実施形態では、投与は非経口の注射による。投与方法は、開業医の自由裁量に任すことができ、１部には、病状の部位に依存する。大抵の場合、投与は本明細書で記載のうちのいずれかの薬剤の血流中への放出をもたらす。
一実施形態では、本明細書で記載のＣＤ８結合物質は、経口投与に適合された組成物として、常法に従って処方される。経口送達用の組成物は、例えば、錠剤、トローチ剤、水性または油性懸濁剤、粒剤、散剤、乳剤、カプセル剤、シロップ剤、またはエリキシル剤の形態であってよい。経口投与される組成物は、薬学的に口当たりの良い製剤を提供するために、１種類または複数種類の薬剤、例えば、ラクトース、アスパルテームまたはサッカリンなどの甘味料、ペパーミント、冬緑油またはチェリー油などの調味料、着色料および保存剤を含み得る。さらに、タブレットまたは丸薬形態では、組成物をコートして、消化管での崩壊および吸収を遅らせることにより長期間にわたり持続作用を可能とすることができる。本明細書に記載のうちのいずれかのＣＤ８結合物質を運ぶ浸透圧的に活性な物質を取り囲む選択的透過性膜も、経口投与組成物として好適である。これらの後者のプラットフォームでは、カプセルの周りの環境からの液体が運搬化合物により吸収され、この化合物は膨潤し、開口部を介して薬剤または薬剤組成物を追い出す。これらの送達プラットフォームは、即時放出製剤の急上昇プロファイルとは対照的に、基本的に０次の送達プロファイルを提供することができる。グリセロールモノステアレートまたはグリセロールステアレートなどの時間遅延物質も使用することができる。経口組成物は、標準的な賦形剤、例えば、マンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、ナトリウムサッカリン、セルロース、および炭酸マグネシウムを含んでよい。一実施形態では、賦形剤は医薬品グレードである。活性化合物に加えて、懸濁剤には、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶セルロース、アルミニウムメタヒドロオキシド、ベントナイト、寒天、トラガント、など、およびこれらの混合物などの沈殿防止剤を含んでよい。
非経口投与（例えば、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下および関節内注射および注入）に好適な剤形は、例えば、液剤、懸濁剤、分散剤、乳剤、などを含む。それらは、無菌の固相組成物（例えば、凍結乾燥組成物）の形態で製造されてよく、これは、使用直前に、無菌の注入可能媒体中に溶解または懸濁され得る。それらは、例えば、当該技術分野において、既知の懸濁剤または分散剤を含み得る。非経口的投与に好適な製剤成分としては、注射用の水、食塩水溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、またはその他の合成溶媒などの無菌希釈剤、ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤、アスコルビン酸もしくは亜硫酸水素ナトリウムなどの酸化防止剤、ＥＤＴＡなどのキレート化剤、アセテート、シトレート、またはホスフェートなどの緩衝剤、および塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの浸透圧調節剤が挙げられる。
静脈内投与の場合、好適な担体としては、生理食塩水、静菌性水、クレモフォアＥＬＴＭ（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，ＮＪ）またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。担体は、製造および貯蔵条件下で安定でなければならず、微生物に対し保護されなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコール）、およびこれらの好適な混合物を含む、溶媒または分散媒であってよい。
本明細書にて提供される組成物は、単独でまたは他の好適な成分と組み合わせて、吸入により投与されるエーロゾル製剤（すなわち、「噴霧化」製剤）を作製することができる。エーロゾル製剤は、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素などの許容され得る加圧化噴射剤中に入れることができる。
本明細書で記載のいずれの本発明の医薬組成物（および／または追加の薬剤）も、当業者に既知の制御放出によりまたは徐放手段または送達装置により投与可能である。例としては、米国特許第３，８４５，７７０号；同第３，９１６，８９９号；同第３，５３６，８０９号；同第３，５９８，１２３号；同第４，００８，７１９号、同第５，６７４，５３３号、同第５，０５９，５９５号、同第５，５９１，７６７号、同第５，１２０，５４８号、同第５，０７３，５４３号、同第５，６３９，４７６号、同第５，３５４，５５６号、および同第５，７３３，５５６号に記載のものが挙げられるが、これらに限定されない。これらの特許のそれぞれは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。このような剤形は、例えば、ヒドロプロピルセルロース、ヒドロプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、その他のポリマーマトリクス、ゲル、浸透膜、浸透系、多層被膜、微粒子、リポソーム、マイクロスフェア、またはこれらの組み合わせを用いて、１つまたは複数の有効成分の制御放出または徐放を可能にするために有用であり、様々な割合での所望の放出プロファイルを提供することができる。本明細書に記載されたものを含む当業者に既知の適切な制御放出または徐放製剤は、本明細書で記載の薬剤の有効成分と共に使用する上で容易に選択することができる。本発明はこのように、限定されないが、制御放出または徐放に適合された錠剤、カプセル、ジェルカプセルおよびカプレットなどの経口投与に好適な単位剤形を提供する。
有効成分の制御放出または徐放は、限定されないが、ｐＨ変化、温度変化、適切な波長の光による刺激、酵素の濃度もしくは利用可能性、水の濃度または利用可能性、または他の生理学的条件または化合物を含む、種々の条件により刺激できる。
別の実施形態では、徐放系を、治療される標的領域の近傍に配置でき、したがって全身用量の一部のみを必要とする（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，ｓｕｐｒａ，ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５－１３８（１９８４）を参照）。Ｌａｎｇｅｒ，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－１５３３、中の概説で考察されている他の放出制御系を使用し得る。
医薬製剤は好ましくは無菌である。無菌化は、例えば、無菌濾過膜で濾過することにより達成される。組成物が凍結乾燥される場合、凍結乾燥および再構成の前またはその後でフィルター滅菌を行うことができる。
投与および投与量
本発明により投与されるＣＤ８結合物質の実際の用量は、特定の剤形および投与方法に応じて変わるであろうということは理解されよう。当業者なら、ＣＤ８結合物質の作用を変え得る多くの要因（例えば、体重、性別、食事、投与時期、投与経路、排出速度、対象の状態、薬剤の組み合わせ、遺伝的素因および反応感度）を考慮に入れることができる。投与は、最大耐量の範囲内で連続的にまたは１種類または複数種類の別々の投与量で実施できる。与えられた一連の条件に対する最適投与速度は、従来の用量投与試験を使って、当業者により確認できる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質の好適な投与量は、約０．０１ｍｇ／（対象のｋｇ体重）～約１０ｇ／（対象のｋｇ体重）、約０．０１ｍｇ／（対象のｋｇ体重）～約１ｇ／（対象のｋｇ体重）、約０．０１ｍｇ／（対象のｋｇ体重）～約１００ｍｇ／（対象のｋｇ体重）、約０．０１ｍｇ／（対象のｋｇ体重）～約１０ｍｇ／（対象のｋｇ体重）の範囲であり、例えば、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０２ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０４ｍｇ／ｋｇ、約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．０６ｍｇ／ｋｇ、約０．０７ｍｇ／ｋｇ、約０．０８ｍｇ／ｋｇ、約０．０９ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．２ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．８ｍｇ／ｋｇ、約０．９ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約１．１ｍｇ／ｋｇ、約１．２ｍｇ／ｋｇ、約１．３ｍｇ／ｋｇ、約１．４ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、約１．６ｍｇ／ｋｇ、約１．７ｍｇ／ｋｇ、約１．８ｍｇ／ｋｇ、１．９ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約１００ｍｇ／ｋｇ体重、約１ｇ／ｋｇ体重、約１０ｇ／ｋｇ体重（これらの間の全ての値および範囲を含む）である。
ＣＤ８結合物質の個々の用量は、例えば、単位剤形当たり、約０．０１ｍｇ～約１００ｇ、約０．０１ｍｇ～約７５ｇ、約０．０１ｍｇ～約５０ｇ、約０．０１ｍｇ～約２５ｇ、約０．０１ｍｇ～約１０ｇ、約０．０１ｍｇ～約７．５ｇ、約０．０１ｍｇ～約５ｇ、約０．０１ｍｇ～約２．５ｇ、約０．０１ｍｇ～約１ｇ、約０．０１ｍｇ～約１００ｍｇ、約０．１ｍｇ～約１００ｍｇ、約０．１ｍｇ～約９０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約８０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約７０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約６０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約５０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約４０ｍｇの有効成分、約０．１ｍｇ～約３０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約２０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約１０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約５ｍｇ、約０．１ｍｇ～約３ｍｇ、約０．１ｍｇ～約１ｍｇ、または単位剤形当たり約５ｍｇ～約８０ｍｇを含む単位剤形で投与できる。例えば、単位剤形は、約０．０１ｍｇ、約０．０２ｍｇ、約０．０３ｍｇ、約０．０４ｍｇ、約０．０５ｍｇ、約０．０６ｍｇ、約０．０７ｍｇ、約０．０８ｍｇ、約０．０９ｍｇ、約０．１ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．３ｍｇ、約０．４ｍｇ、約０．５ｍｇ、約０．６ｍｇ、約０．７ｍｇ、約０．８ｍｇ、約０．９ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、約５０ｍｇ、約５５ｍｇ、約６０ｍｇ、約６５ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約８５ｍｇ、約９０ｍｇ、約９５ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約５００ｍｇ、約１ｇ、約２．５ｇ、約５ｇ、約１０ｇ、約２５ｇ、約５０ｇ、約７５ｇ、約１００ｇ（これらの間の全ての値および範囲を含む）であってよい。
一実施形態では、ＣＤ８結合物質は、毎日約０．０１ｍｇ～約１００ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約７５ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約５０ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約２５ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約１０ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約７．５ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約５ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約２．５ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約１ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約１００ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約１００ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約９５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約９０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約８５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約８０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約７５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約７０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約６５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約６０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約５５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約５０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約４５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約４０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約３５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約３０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約２５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約２０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約１５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約１０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約３ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約１ｍｇ、または毎日約５ｍｇ～約８０ｍｇの量で投与される。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、約０．０１ｍｇ、約０．０２ｍｇ、約０．０３ｍｇ、約０．０４ｍｇ、約０．０５ｍｇ、約０．０６ｍｇ、約０．０７ｍｇ、約０．０８ｍｇ、約０．０９ｍｇ、約０．１ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．３ｍｇ、約０．４ｍｇ、約０．５ｍｇ、約０．６ｍｇ、約０．７ｍｇ、約０．８ｍｇ、約０．９ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、約５０ｍｇ、約５５ｍｇ、約６０ｍｇ、約６５ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約８５ｍｇ、約９０ｍｇ、約９５ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約５００ｍｇ、約１ｇ、約２．５ｇ、約５ｇ、約７．５ｇ、約１０ｇ、約２５ｇ、約５０ｇ、約７５ｇ、約１００ｇ（これらの間の全ての値および範囲を含む）の１日量で投与される。
本発明の特定の実施形態では、ＣＤ８結合物質を含む医薬組成物は、例えば、１日２回以上（例えば、毎日約２回、約３回、約４回、約５回、約６回、約７回、約８回、約９回、または約１０回）、１日約１回、約１日おき、約３日おき、週約１回、２週毎に約１回、毎月約１回、２ヶ月毎に約１回、３ヶ月毎に約１回、６ヶ月毎に約１回、または毎年約１回投与されてよい。
併用療法および追加の治療薬
種々の実施形態では、本発明の医薬組成物は、追加の治療薬と共に同時投与される。同時投与は、同時または順次であってよい。
一実施形態では、追加の治療薬および本発明のＣＤ８結合物質は、対象に同時に投与される。本明細書で使用される場合、用語の「同時に」は、追加の治療薬およびＣＤ８結合物質が約６０分程度、例えば、約３０分程度、約２０分程度、約１０分程度、約５分程度、または約１分程度の時間間隔で投与されることを意味する。追加の治療薬およびＣＤ８結合物質の投与は、単一製剤（例えば、追加の治療薬およびＣＤ８結合物質を含む製剤）または別々の製剤（例えば、追加の治療薬を含む第１の製剤およびＣＤ８結合物質を含む第２の製剤）の同時投与により行うことが可能である。
同時投与は、それらの投与のタイミングが、追加の治療薬およびＣＤ８結合物質の薬理学的活性が時間経過と共に重なりあい、それにより組み合わされた治療効果が発揮されるような場合には、治療薬が同時に投与される必要はない。例えば、追加の治療薬およびＣＤ８結合物質は、順次に投与できる。本明細書で使用される場合、用語の「順次に」は、追加の治療薬およびＣＤ８結合物質が約６０分を超える時間間隔で投与されることを意味する。例えば、追加の治療薬とＣＤ８結合物質との逐次投与の間の時間間隔を、約６０分を超えて、約２時間を超えて、約５時間を超えて、約１０時間を超えて、約１日を超えて、約２日を超えて、約３日を超えて、約１週間を超えて間隔を開ける、約２週間を超えて間隔を開ける、または約１ヶ月を越えて間隔を開けることができる。最適投与時間は、投与される追加の治療薬およびＣＤ８結合物質の代謝、排泄速度、および／または薬力学的活性に依存するであろう。追加の治療薬またはＣＤ８結合物質のうちのいずれかを、最初に投与してよい。
同時投与はまた、治療薬が同じ投与経路により対象に投与される必要はない。むしろ、それぞれの治療薬は、任意の適切な経路、例えば、非経口または経口（ｎｏｎ－ｐａｒｅｎｔｅｒａｌｌｙ）で投与できる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＤ８結合物質は、別の治療薬と同時投与されると、相乗的に作用する。このような実施形態では、ＣＤ８結合物質および追加の治療薬は、その治療薬が単剤療法で使用される場合に採用される用量よりも低い用量で投与され得る。
いくつかの実施形態では、本発明は、追加の治療薬としての化学療法剤に関する。例えば、限定されないが、本ＣＤ８結合物質と化学療法剤とのこのような組み合わせは、本明細書の別の場所で記載のように、癌の治療に使用される。化学療法剤の例としては、アルキル化剤、例えば、チオテパ、ＣＹＴＯＸＡＮ（シクロホスファミド）、スルホン酸アルキル、例えば、ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファン、アジリジン、例えば、ベンゾドーパ，カルボコン、メツレドーパ、およびウレドーパ、エチレンイミン、メチラメラミン例えば、アルトレタミン、トリエチルエネメラミン、トリエチレンネフォスフォラミド、トリエチレンチオフォスフォラミドおよび、トリメチロールメラミン、アセトゲニン（例えば、ブラタシン、ブラタチノン）、カントテシン（合成類似剤トポテカンを含む）、ブリオスタチン、カリスタチン（ｃａｌｌｙ ｓｔａｔｉｎ）、ＣＣ－１０６５（アドゼレシン、カルゼルシンおよびビゼレシン合成類似体を含む）、クリプトフィシン（例えば、クリプトフィシン１、クリプトフィシン８など）、ドラスタチン、デュオカルマイシン（合成類似薬ＫＷ－２１８９およびＣＢ１－ＴＭ１を含む）、エレウテロビン、パンクラチスタチン、サルコディクチン、スポンギスタチン、ナイトロジェンマスタード、例えば、クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、酸化メクロルエタミン塩酸塩、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード、ニトロソウレア、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチンおよびラニムスチン（ｒａｎｉｍｎｕｓｔｉｎｅ）、抗生物質、例えば、エンジイン抗生物質（カリチアマイシン、特にカリチアマイシンガンマＩＩとカリチアマイシンオメガＩＩ（Ａｇｎｅｗ，Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３－１８６（１９９４）を参照）、ダイネマイシン、ダイネマイシンＡを含む、ビスフォスフォネート、例えば、クロドロネート、エスペラマイシン、ならびに、ネオカルジノスタチン発色団および関連色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン（ｃａｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルジノフィリン、クロモマイシン（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎｉｓ）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、アドリアマイシン（ドキソルビシン）（モルフォリノドキソルビシン、シアノモルフォリノドキソルビシン、２－ピロリノドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン（例えば、マイトマイシンＣ）、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、チュベルシジン、ウベニメックス、ジノスタチン、ゾルビシン、代謝拮抗薬、例えば、メトトレキセートおよび５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、葉酸の類似体、例えば、デノプテリン、メトトレキセート、プテロプテリン、トリメトレキサート、プリン類似体、例えば、フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン、ピリミジン類似体、例えば、アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、アンドロゲン、例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン、抗副腎物質、例えば、アミノグルテチミド（ｍｉｎｏｇｌｕｔｅｔｈｉｍｉｄｅ）、ミトタン、トリロスタン、葉酸補充液、例えば、フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）、アセグラトン、アルドホスファミドグリコシド、アミノレブリン酸、エニルウラシル、アムサクリン、ベストラブシル、ビサントレン、エダトラキセート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）、デメコルチン、ジアジクオン、エルフォルミチン（ｅｌｆｏｒｍｉｔｈｉｎｅ）、エリプチニウムアセテート、エポチロン、エトグルシド、ガリウムニトレート、ヒドロキシ尿素、レンチナン、ロニダミン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）、メイタンシノイド、例えば、メイタンシンおよびアンサマイトシン、ミトグアゾン、ミトキサントロン、モピダモール、ニトラエリン、ペントスタチン、フェナメット、ピラルビシン、ロソキサントロン、ポドフィリン酸、２－エチルヒドラジド、プロカルバジン、ＰＳＫ多糖複合体（ＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，Ｏｒｅｇ．）、ラゾキサン、リゾキシン、シゾフィラン、スピロゲルマニウム、テヌアゾン酸、２，２’，２”－トリクロロトリエチルアミン、トリコテセン（例えば、Ｔ２毒、ベラクリンＡ、ロリジンＡ、およびアングイディン）、ウレタン、ビンデシン、ダカルバジン、マンノムスチン、ミトブロニトール、ミトラクトール、ピポブロマン、ガシトシン、アラビノシド（アラ－Ｃ）、シクロホスファミド、チオテパ、タキソイド、例えば、タキソールパクリタキセル（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、アブラキサンクレモフォアフリー、アルブミン処理ナノ粒子形成パクリタキセル（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐａｒｔｎｅｒｓ，Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ，１１１．）、タキソテールドキセタキセル（Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ，Ａｎｔｏｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ）、クロランブシル、ジェムザール（ゲムシタビン）、６－チオグアニン、メルカプトプリン、メトトレキセート、白金類似体、例えば、シスプラチン、オキサリプラチンおよびカルボプラチン、ビンブラスチン、白金、エトポシド（ＶＰ－１６）、イホスファミド、ミトキサントロン、ビンクリスチン、ナベルビン（ビノレルビン）、ノバントロン、テニポシド、エダトレキセート、ダウノマイシン、アミノプテリン、ゼローダ、イバンドロネート、イリノテカン（キャンプトサー，ＣＰＴ－１１）（イリノテカンと５－ＦＵおよびロイコボリンの治療法を含む）、トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００、ヂルルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）、レチノイド、例えば、レチノイン酸、カペシタビン、コンブレタスタチン、ロイコボリン（ＬＶ）、オキサリプラチン、オキサリプラチン治療法（ＦＯＬＦＯＸ）を含む、ラパチニブ（Ｔｙｋｅｒｂ）、ＰＫＣ－α、Ｒａｆ、Ｈ－Ｒａｓ、ＥＧＦＲの阻害剤（例えば、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ）および細胞増殖を抑制するＶＥＧＦ－Ａならびに上述のうちのいずれかの薬剤の薬学的に許容可能な塩、酸または誘導体、が挙げられるが、これらに限定されない。さらに、治療の方法は、放射線の使用をさらに含み得る。さらに、治療の方法は、光線力学的治療の使用をさらに含み得る。
限定されないが、感染症適用を含む、いくつかの実施形態では、本発明は、追加の治療薬としての抗感染薬に関する。いくつかの実施形態では、抗感染薬は、抗ウイルス薬であり、これは、限定されないが、アバカビル、アシクロビル、アデホビル、アンプレナビル、アタザナビル、シドフォヴィル、ダルナビル、デラビルジン、ジダノシン、ドコサノール、エファビレンツ、エルビテグラビル、エムトリシタビン、エンフビルチド、エトラビリン、ファムシクロビル、およびホスカルネットを含む。いくつかの実施形態では、抗感染薬は抗菌剤であり、これは、限定されないが、セファロスポリン系抗生物質（セファレキシン、セフロキシム、セファドロキシル、セファゾリン、セファロチン、セファクロール、セファマンドール、セフォキシチン、セフプロジル、およびセフトビプロール）；フルオロキノロン系抗生物質（シプロ、レヴァキン、フロキシン、テクイン、アベロックスおよびノルフロックス）；テトラサイクリン系抗生物質（テトラサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、およびドキシサイクリン）；ペニシリン系抗生物質（アモキシシリン、アンピシリン、ペニシリンＶ、ジクロキサシリン、カルベニシリン、バンコマイシン、およびメチシリン）；モノバクタム系抗生物質（アズトレオナム）；およびカルバペネム系抗生物質（エルタペネム、ドリペネム、イミペネム／シラスタチン、およびメロペネム）を含む。いくつかの実施形態では、抗感染薬は、抗マラリア薬（例えば、クロロキン、キニーネ、メフロキン、プリマキン、ドキシサイクリン、アーテメータ／ルメファントリン、アトバクオン／プログアニルおよびスルファドキシン／ピリメタミン）、メトロニダゾール、チニダゾール、イベルメクチン、パモ酸ピランテル、およびアルベンダゾールを含む。
限定されないが、自己免疫疾患適用を含むいくつかの実施形態では、追加の治療薬は、免疫抑制剤である。いくつかの実施形態では、免疫抑制剤は、ステロイド性抗炎症剤または非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）などの抗炎症剤である。ステロイド、特に副腎皮質ホルモン剤およびそれらの合成類似体は当該技術分野においてよく知られている。本発明で有用な副腎皮質ステロイドの例としては、ヒドロキシルトリアムシノロン、α－メチルデキサメタゾン、β－メチルβ－メタゾン、ベクロメタゾンジプロピオネート、β－メタゾンベンゾエート、β－メタゾンジプロピオネート、β－メタゾンバレレート、クロベタゾールバレレート、デソニド、デソキシメタゾン、デキサメタゾン、ジフロラソンジアセテート、ジフルコルトロンバレレート、フルアドレノロン、フルクロロロンアセトニド、フルメタゾンピバレート、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルコルチンブチルエステル、フルオコルトロン、フルプレドニデン（フルプレドニリデン）アセテート、フルランドレノロン、ハルシノニド、ヒドロコルチゾンアセテート、ヒドロコルチゾンブチレート、メチルプレドニゾロン、トリアムシノロンアセトニド、コルチゾン、コルトドキソン、フルセトニド、フルドロコルチゾン、ジフルオロゾンジアセテート、フルラドレノロンアセトニド、メドリゾン、アムシナフェル、アムシナフィド、ベタメタゾンおよびその残りのエステル、クロロプレドニソン、クロコルテロン、クレシノロン、ジクロリゾン、ジフルプレドネート、フルクロロニド、フルニソリド、フルオロメタロン、フルペロロン、フルプレドニソロン、ヒドロコルチゾン、メプレドニゾン、パラメタゾン、プレドニゾロン、プレドニゾン、ベクロメタゾンジプロピオネートが挙げられるが、これらに限定されない。本発明で使用してよい（ＮＳＡＩＤＳ）としては、限定されないが、サリチル酸、アセチルサリチル酸、サリチル酸メチル、グリコールサリチレート、サリチルアミド、ベンジル－２，５－ジアセトキシ安息香酸、イブプロフェン、スリンダク（ｆｕｌｉｎｄａｃ）、ナプロキセン、ケトプロフェン、エトフェナメート、フェニルブタゾン、およびインドメタシンが挙げられる。いくつかの実施形態では、免疫抑制剤は、アルキル化剤、代謝拮抗物質（例えば、アザチオプリン、メトトレキセート）、細胞傷害性抗生物質、抗体（バシリキシマブ、ダクリズマブ、およびムロモナブ）、抗イムノフィリン剤（例えば、シクロスポリン、タクロリムス、シロリムス）、インターフェロン、オピオイド、ＴＮＦ結合タンパク質、ミコフェノレート、および小分子生物学的製剤（例えば、フィンゴリモド、ミリオシン）などの細胞分裂阻害薬であってよい。追加の抗炎症剤は、例えば、米国特許第４，５３７，７７６号に記載され、この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、本発明は、１種類または複数種類の免疫調節薬、例えば、限定されないが、免疫チェックポイントを調節する物質を用いる併用療法に関する。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、およびＰＤ－Ｌ２のうちの１つまたは複数を標的とする。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＰＤ－１阻害剤である。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、およびＰＤ－Ｌ２のうちの１つまたは複数に特異的な抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、限定されないが、例えば、ニボルバム（ＯＮＯ－４５３８／ＢＭＳ－９３６５５８、ＭＤＸ１１０６、オプジーボ、ＢＲＩＳＴＯＬ ＭＹＥＲＳ ＳＱＵＩＢＢ）、ペムブロリズマブ（キイトルーダ、ＭＥＲＣＫ）、ピディリズマブ（ＣＴ－０１１，ＣＵＲＥ ＴＥＣＨ）、ＭＫ－３４７５（ＭＥＲＣＫ）、ＢＭＳ９３６５５９（ＢＲＩＳＴＯＬ ＭＹＥＲＳ ＳＱＵＩＢＢ）、ＭＰＤＬ３２８ＯＡ（ＲＯＣＨＥ）などの抗体である。いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、ＣＤ１３７またはＣＤ１３７Ｌのうちの１つまたは複数を標的とする。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＣＤ１３７またはＣＤ１３７Ｌのうちの１つまたは複数に特異的な抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、限定されないが、例えば、ウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３および抗４－１ＢＢ抗体としても知られる）などの抗体である。いくつかの実施形態では、本ＣＤ８結合物質は、固形腫瘍および／またはＢ細胞非ホジキンリンパ腫および／または頭頸部癌および／または多発性骨髄腫の治療のために、ウレルマブと組み合わされる（必要に応じ、ニボルバム、リリルマブ、およびウレルマブのうちの１つまたは複数と組み合わされる）。いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、ＣＴＬＡ－４、ＡＰ２Ｍ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＳＨＰ－２、およびＰＰＰ２Ｒ５Ａのうちの１つまたは複数を標的とする物質である。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＣＴＬＡ－４、ＡＰ２Ｍ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＳＨＰ－２、およびＰＰＰ２Ｒ５Ａのうちの１つまたは複数に特異的な抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、限定されないが、例えば、イピリムマブ（ＭＤＸ－０１０、ＭＤＸ－１０１、ヤーボイ、ＢＭＳ）および／またはトレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒ）などの抗体である。いくつかの実施形態では、本ＣＤ８結合物質は、黒色腫、前立腺癌、および肺癌のうちの１つまたは複数の治療のために、イピリムマブと組み合わされる（必要に応じ、バビツキシマブと組み合わされる）。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＣＤ２０を標的とする。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＣＤ２０に特異的な抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、限定されないが、オファツムマブ（ＧＥＮＭＡＢ）、オビヌツズマブ（ＧＡＺＹＶＡ）、ＡＭＥ－１３３ｖ（ＡＰＰＬＩＥＤ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＥＶＯＬＵＴＩＯＮ）、オクレリズマブ（ＧＥＮＥＮＴＥＣＨ）、ＴＲＵ－０１５（ＴＲＵＢＩＯＮ／ＥＭＥＲＧＥＮＴ）、ベルツズマブ（ＩＭＭＵ－１０６）などの抗体である。
いくつかの実施形態では、本発明は、国際公開第２０１３／１０７７９号、国際公開第２０１５／００７５３６号、国際公開第２０１５／００７５２０号、国際公開第２０１５／００７５４２号、および国際公開第２０１５／００７９０３号に記載の１種類または複数種類のキメラ物質との併用療法に関する。これらの特許の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、本明細書で記載のＣＤ８結合物質は、修飾されている誘導体、すなわち、共有結合が組成物の活性を妨げないようにして、任意のタイプの分子の、組成物への共有結合により修飾されている誘導体を含む。例えば、限定するものではないが、誘導体は、特に、グリコシル化、脂質化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、既知の保護／ブロック基による誘導体化、タンパク質切断、細胞リガンドまたはその他のタンパク質への結合、などにより修飾されている組成物を含む。多くの化学修飾のうちのいずれかを既知の技術、例えば、限定されないが、特異的化学切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝合成、などを使って行うことができる。
さらにその他の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ８結合物質は、例示的実施形態では、毒素、化学療法剤、放射性同位元素、およびアポトーシスまたは細胞死を引き起こす物質を含む細胞傷害薬をさらに含む。このような物質は、本明細書に記載の組成物に複合化され得る。
本明細書で記載のＣＤ８結合物質をこのように翻訳後修飾して、化学リンカーなどのエフェクター部分、例えば、蛍光染料、酵素、基質、生物発光物質、放射性物質、および化学発光部分などの検出可能な部分、または、例えば、ストレプトアビジン、アビジン、ビオチン、細胞毒、細胞傷害性薬、および放射性物質などの機能的部分を付加し得る。
細胞傷害薬の例としては、メトトレキセート、アミノプテリン、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、シタラビン、５－フルオロウラシルデカルバジン；アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオテパ（ｔｈｉｏｅｐａ）、クロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、マイトマイシンＣ、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、１－メチルニトロソウレア、シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｔｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、メクロレタミン、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、シス－ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチンおよびカルボプラチン（パラプラチン））；アントラサイクリン（ダウノルビシン（以前のダウノマイシン）およびドキソルビシン（アドリアマイシン）、デトルビシン、カルミノマイシン、イダルビシン、エピルビシン、ミトキサントロンおよびビサントレンを含む）；抗生物質（ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ブレオマイシン、カリチアマイシン、ミトラマイシン、およびアントラマイシン（ＡＭＣ）を含む）；有糸分裂阻害薬（ａｎｔｉｍｙｔｏｔｉｃ ａｇｅｎｔ）（例えば、ビンカアルカロイドビンカアルカロイド、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）が挙げられるが、これらに限定されない。その他の細胞傷害薬としては、パクリタキセル（タキソール）、リシン、緑膿菌外毒素、ゲムシタビン、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、エトポシド、テノポシド、コルヒチン、ジヒドロキシアントラシンジオン，１－デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン、プロカルバジン、ヒドロキシ尿素、アスパラギナーゼ、副腎皮質ステロイド、ミトタン（ｍｙｔｏｔａｎｅ）（Ｏ，Ｐ’－（ＤＤＤ））、インターフェロン、およびこれらの細胞傷害薬の混合物が挙げられる。
さらなる細胞傷害薬としては、化学療法剤、例えば、カルボプラチン、シスプラチン、パクリタキセル、ゲムシタビン、カリチアマイシン、ドキソルビシン、５－フルオロウラシル、マイトマイシンＣ、アクチノマイシンＤ、シクロホスファミド、ビンクリスチン、ブレオマイシン、ＶＥＧＦアンタゴニスト、ＥＧＦＲアンタゴニスト、プラチン、タキソール、イリノテカン、５－フルオロウラシル、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｙｔａｂｉｎｅ）、ロイコボリン、ステロイド類、シクロホスファミド、メルファラン、ビンカアルカロイド（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシンおよびビノレルビン）、ムスチン、チロシンキナーゼ阻害剤、放射線療法、性ホルモン拮抗薬、選択的アンドロゲン受容体調節薬、選択的エストロゲン受容体調節薬、ＰＤＧＦアンタゴニスト、ＴＮＦアンタゴニスト、ＩＬ１アンタゴニスト、インターロイキン（例えば、ＩＬ１２またはＩＬ２）、ＩＬ１２Ｒアンタゴニスト、毒素複合化モノクローナル抗体、腫瘍抗原特異的モノクローナル抗体、アービタックス、アバスチン、ペルツズマブ、抗ＣＤ２０抗体、リツキサン、オクレリズマブ、オファツムマブ、ＤＸＬ６２５、ハーセプチン（登録商標）、またはこれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。リシン、ジフテリア毒素およびシュードモナス毒素などの植物および細菌由来の毒性酵素は、治療薬（例えば、抗体）と複合体形成して、細胞型特異的殺作用剤を生成し得る（Ｙｏｕｌｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：５４８３（１９８０）；Ｇｉｌｌｉｌａｎｄ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４５３９（１９８０）；Ｋｒｏｌｉｃｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：５４１９（１９８０））。
他の細胞傷害薬としては、Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇによる米国特許第６．６５３，１０４号に記載される細胞傷害性リボヌクレアーゼが挙げられる。本発明の実施形態はまた、放射性免疫複合体に関し、複合体形成剤を使用してまたは使用せずに、アルファまたはベータ粒子を放出する放射性核種がＣＤ８結合物質に安定に結合される。このような放射性核種としては、例えば、リン－３２、スカンジウム－４７、銅－６７、ガリウム－６７、イットリウム－８８、イットリウム－９０、ヨウ素－１２５、ヨウ素－１３１、サマリウム－１５３、ルテチウム－１７７、レニウム－１８６またはレニウム－１８８などのβ放射体、およびアスタチン－２１１、鉛－２１２、ビスマス－２１２、ビスマス－２１３またはアクチニウム－２２５などのα放射体が挙げられる。
検出可能な部分の例としては、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アセチルコリンエステラーゼ、アルカリフォスファターゼ、ベータガラクトシダーゼおよびルシフェラーゼが挙げられるが、これらに限定されない。蛍光材料のさらなる例としては、ローダミン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ウンベリフェロン、ジクロロトリアジニルアミン、フィコエリトリンおよびダンシルクロリドが挙げられるが、これらに限定されない。化学発光部分のさらなる例としては、ルミノールが挙げられるが、これに限定されない。生物発光材料のさらなる例としては、ルシフェリンおよびエクオリンが挙げられるが、これらに限定されない。放射性材料のさらなる例としては、ヨウ素－１２５、炭素－１４、硫黄－３５、トリチウムおよびリン－３２が挙げられるが、これらに限定されない。
治療方法
本明細書に記載の方法および組成物は、限定されないが、癌、感染症、免疫異常、炎症性疾患または状態、および自己免疫疾患を含む種々の疾患および障害を治療する用途がある。
さらに、本発明の物質は、限定されないが、癌、感染症、免疫異常、炎症性疾患または状態、および自己免疫疾患を含む、種々の疾患および障害の治療、または治療用の薬物の製造において使用し得る。
いくつかの実施形態では、本発明は、癌の治療、または癌の患者に関する。本明細書で使用される場合、癌は、身体の器官およびシステムの正常な機能動作を妨害し得る任意の制御されない細胞増殖を指し、原発性および転移性の腫瘍の両方を含む。元の位置から移動し重要な器官に播種される原発性腫瘍または癌は、罹患した器官の機能劣化により対象の死を最終的にもたらす場合がある。転移は、原発腫瘍部位のものとは異なる癌細胞または一群の癌細胞であり、原発腫瘍から身体の他の部位への癌細胞の播種から生ずる。転移は、最終的に対象の死をもたらす場合がある。例えば、癌は、良性および悪性の癌、ポリープ、過形成、ならびに休眠腫瘍または微小転移を含み得る。
治療され得る癌の例としては、基底細胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脳および中枢神経系癌、乳癌、腹膜の癌、子宮頸癌、絨毛癌、結腸および直腸癌、結合組織癌、消化器系の癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、頭頸部の癌、胃癌（胃腸癌を含む）、神経膠芽腫、肝癌、ヘパトーマ、上皮内腫瘍、腎臓癌または腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙ ｏｒ ｒｅｎａｌ ｃａｎｃｅｒ）、喉頭癌、白血病、肝臓癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、および肺扁平上皮癌）、黒色腫、骨髄腫、神経芽腫、口腔癌（唇、舌状、舌、口内、および咽頭）、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸癌、呼吸器系癌、唾液腺癌腫、肉腫、皮膚癌、扁平上皮細胞癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮または子宮内膜癌、泌尿器系の癌、外陰癌、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫、ならびにＢ細胞リンパ腫を含むリンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽細胞ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ、巨大腫瘤病変ＮＨＬ、マントル細胞リンパ腫、エイズ関連リンパ腫、およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、毛様細胞性白血病、慢性骨髄芽球性白血病、ならびに他の癌腫および肉腫、および移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症、浮腫（例えば、脳腫瘍に関連するもの）、およびメグズ症候群に関連する異常血管増殖が挙げられるが、これらに限定されない。
治療し得る癌の例としては、癌腫、例えば、種々のサブタイプ（例えば、腺癌、基底細胞癌、扁平上皮細胞癌、および移行性上皮癌を含む）、肉腫（例えば、骨および軟組織を含む）、白血病（例えば、急性骨髄性、急性リンパ芽球性、慢性骨髄性、慢性リンパ球性、およびヘアリー細胞を含む）、リンパ腫および骨髄腫（例えば、ホジキンおよび非ホジキンリンパ腫、軽鎖型、非分泌型ＭＧＵＳ、および形質細胞腫を含む）、および中枢神経系癌（例えば、脳腫瘍（例えば、神経膠腫（例えば、星状細胞腫、乏突起細胞腫および上衣腫）、髄膜腫、下垂体腺腫、および神経腫）、および脊髄腫瘍（例えば、髄膜腫および神経線維腫））が挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、本発明は、微生物感染症および／または慢性感染症の治療、またはそれらの感染症を罹患している患者に関する。感染症の例としては、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、結核、骨髄炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、エプスタイン・バールウイルスまたはパルボウイルス感染症、Ｔ細胞白血病ウイルス感染症、細菌過剰症候群、真菌または寄生虫感染症が挙げられるが、これらに限定されない。
種々の実施形態では、本発明の組成物は、炎症、急性炎症、慢性炎症、呼吸器疾患、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、敗血性ショック、関節リウマチ、炎症性腸疾患、炎症性骨盤疾患、痛み、眼の炎症性疾患、セリアック病、リー症候群、グリセロールキナーゼ欠損症、家族性好酸球増加症（ＦＥ）、常染色体劣性遺伝性脊髄小脳変性症、炎症性喉頭疾患、結核、慢性胆嚢炎、気管支拡張症、珪肺症および他の塵肺症などの１種類または複数種類の炎症性疾患または状態を治療または予防するために使用される。
種々の実施形態では、本組成物は、多発性硬化症、糖尿病、ループス、セリアック病、クローン病、潰瘍性大腸炎、ギラン・バレー症候群、強皮症、グッドパスチャー症候群、ウェゲナー肉芽腫症、自己免疫性てんかん、ラスムッセン脳炎、原発性硬化性胆管炎、硬化性胆管炎、自己免疫性肝炎、アジソン病、橋本甲状腺炎、線維筋痛症、メニエール症候群（Ｍｅｎｉｅｒ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、移植拒絶反応（例えば、移植片拒絶の防止）、悪性貧血、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、皮膚筋炎、シェーグレン症候群、紅斑性狼瘡、多発性硬化症、重症筋無力症、ライター症候群、グレーブス病、およびその他の自己免疫疾患などの１種類または複数種類の自己免疫疾患または状態の治療または予防に使用される。
キット
本発明はまた、本明細書に記載のうちのいずれかのＣＤ８結合物質の投与（例えば、追加の治療薬を含み、または含まずに）のためのキットを提供する。キットは、本明細書に記載の少なくとも１種類の本発明の医薬組成物を含む、材料または成分の集合体である。したがって、いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載の少なくとも１種類の医薬組成物を含む。
キットを構成する成分の明確な性質は、その意図される目的に依存する。一実施形態では、キットは、ヒト対象用を治療する目的のために構成される。
使用説明書をキット中に含めてもよい。使用説明書は、通常、癌の治療などの望まれる治療結果を達成するために、キットの成分を使用する際に採用すべき技術を説明する明確な表現を含む。必要に応じ、キットは、他の有用な成分、例えば、希釈剤、緩衝剤、薬学的に許容可能な担体、シリンジ、カテーテル、塗布具、ピペット操作または測定用ツール、包帯材料または当業者なら容易に気付くような他の有用な備品一式も含む。
キットに組込まれる材料および成分は、それらの操作性および有用性を維持する任意の便利で適切な方法で保管され開業医に提供され得る。例えば、成分は、室温、冷蔵温度、または凍結温度で提供できる。成分は通常、適切な梱包材料に収容される。種々の実施形態では、梱包材料は、よく知られた方法、好ましくは、無菌の、混入物のない環境を与える方法で構築される。梱包材料は、内容物および／またはキットの目的および／またはその成分を表示する外部ラベルを有してよい。
定義
本明細書で使用される場合、「ａ」、「ａｎ」、または「ｔｈｅ」は、１つ（１種類）または２つ以上（２種類以上）を意味し得る。
さらに、参照数値表示に関連して使われる用語の「約」は、参照数値表示±参照数値表示の最大で１０％を意味する。例えば、用語の「約５０」は、４５～５５の範囲を含む。
「有効量」という用語は、医学的使用に関連して使用される場合、測定できるほどの目的の疾患の治療、予防、または発病速度の低下をもたらすのに効果的である量である。
本明細書で使用される場合、物質または刺激の存在下で、このような調節の非存在下に比べて、活性および／または効果の出力値がかなりの量、例えば、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、またはそれを超えて、少なくとも最大約１００％（約１００％を含む）低減されるとき、何かが「減少され」ている。当業者により理解されるように、いくつかの実施形態では、活性は減少され、かついくつかの下流の出力値は減少されるが、他のものは増加し得る。
逆に、物質または刺激の存在下で、このような物質または刺激の非存在下に比べて、活性および／または効果の出力値がかなりの量、例えば、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、またはそれを超えて、最大少なくとも約１００％（約１００％を含む）またはそれを超えて、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍増加する場合、活性は「増加され」る。
本明細書において、参照される場合、全ての組成物に関するパーセンテージは、特に指定がない限り、総組成物の重量による。本明細書で使用する場合、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」という単語とその変形物は、非限定であることを意図し、それにより、リスト中の項目の記載は、この技術の組成物および方法に有用である可能性を同様に有する他の類似項目の除外を意図するものではない。同様に、用語の「ｃａｎ」および「ｍａｙ」およびその変形物は、非限定であることを意図し、それにより、ある実施形態が特定の要素または特徴を含むことが「できる（ｃａｎ）」または含んでも「よい（ｍａｙ）」という記載は、これらの要素または特徴を含まない本発明の技術のその他の実施形態を排除するものではない。
ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ、ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ、またはｈａｖｉｎｇなどの用語の同義語としてのオープンエンド用語の「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」を本明細書で使用して本発明を記載および請求するが、本発明、またはその実施形態は、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」または「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」などの代替用語を使って、代わりに記載することができる。
本明細書で使用される場合、用語の「好ましい」および「好ましくは」は、特定の状況下で、特定の利点をもたらす本技術の実施形態を指す。しかしながら、同じまたは他の環境下で、他の実施形態も好ましい場合がある。さらに、１つまたは複数の好ましい実施形態の記載は、他の実施形態が有用でないことを示すものではなく、また、本技術の範囲から他の実施形態を排除することを意図するものではない。
治療効果の達成に必要な本明細書で記載の組成物の量は、特定目的のための従来の手順に従って経験的に決定されてよい。一般に、治療目的のために治療薬を投与する場合、治療薬は薬理学的有効量で投与される。「薬理学的有効量」、「薬理学的有効用量」、「治療有効量」、または「有効量」は、特に障害または疾患を治療するために、目的の生理的な効果を生み出すのに十分な量または目的の結果を達成することができる量を意味する。本明細書で使用される場合、有効量は、例えば、障害または疾患の症状の進展を遅らせる、障害または疾患の症状の経過を変える（例えば、疾患の症状の進展を遅らせる）、障害または疾患のうちの１つまたは複数の症状または発症を減らすまたはなくす、および障害または疾患の症状を回復させるのに十分な量を含んでよい。治療効果はまた、改善が実現されるかどうかにかかわらず、根底にある疾患または障害の進行を止めるまたは遅らせることも含む。
有効量、毒性、および治療効果は、例えば、細胞培養または実験動物によりＬＤ５０（集団の約５０％に対する致死用量）およびＥＤ５０（集団の約５０％での治療的有効量）を測定するための標準的薬学的手順により決定できる。投与量は、用いられる剤形および利用される投与経路に応じて変化し得る。毒性と治療効果との間の用量比率は、治療指数であり、比率ＬＤ５０／ＥＤ５０で表すことができる。いくつかの実施形態では、大きな治療指数を示す組成物および方法が好ましい。治療有効量は、最初は、例えば、細胞培養アッセイを含むインビトロアッセイから推測することができる。また、用量は、細胞培養または適切な動物モデルで決定したＩＣ５０などの循環血漿中濃度を達成するように動物モデルで処方することができる。記載の組成物の血漿中レベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィーにより測定することができる。いずれかの特定の投与量の効果は、適切なバイオアッセイによりモニターすることができる。投与量は医師により決定されてよく、必要に応じて、観察された治療の効果に適合するように調節できる。
特定の実施形態では、効果は、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約５０％、少なくとも約７０％、または少なくとも約９０％の定量可能な変化をもたらすであろう。いくつかの実施形態では、効果は、約１０％、約２０％、約３０％、約５０％、約７０％、またはさらに約９０％以上の定量化可能な変化をもたらすであろう。治療効果はまた、改善が実現されるかどうかにかかわらず、根底にある疾患または障害の進行を止めるまたは遅らせることも含む。
本明細書で使用される場合、「治療方法」は、本明細書に記載の疾患または障害の治療のための組成物および／または本明細書に記載の疾患または障害の治療のための薬剤の製造での使用および／または複数使用のための組成物に等しく適用可能である。
実施例１．ヒトＣＤ８特異的ＶＨＨの構築と評価
抗原特異的ＶＨＨの単離
免役したラマからＶＨＨライブラリーを構築した。ヒトＣＤ８を発現している安定に遺伝子導入されたＣＨＯ－Ｋ１細胞を用いて、溶液中でＶＨＨライブラリーの３回の連続パニングラウンドを実施した。各パニングラウンド後に、遺伝子導入細胞から溶出されたファージミド粒子の数（出力）を、パニングに使用したファージミド粒子の数（入力）と比較することにより、抗原特異的ファージの濃縮を評価した。ファージ出力は、第１ラウンドの出力と比較して、第２ラウンドで約１０２倍、第３ラウンドで１０３倍に増大した。入力ファージは、常に約１０１１であり、第１ラウンドからの出力は約１０７ファージ粒子であった。第１および第２および第３パニングラウンドから２８５個の無作為に選択したコロニー（各ラウンドから９５個）を配列決定し、その後、ＣＤＲ３配列に基づいて分類した。ＶＨＨを含む粗製ペリプラズム抽出物を使用し、安定にヒトＣＤ８を遺伝子導入したＣＨＯ－Ｋ１細胞を用いて、フローサイトメトリーにより、８９種類の特有の配列のＣＤ８に対する特異性を分析した。親の非遺伝子導入ＣＨＯ－Ｋ１細胞は、陰性対照細胞としての役割を果たした。無関係のＶＨＨをナノボディ陰性対照として使用した。フローサイトメトリー実験は、３１種類の異なる群に属する６９種類の異なるＶＨＨがヒトＣＤ８に特異的であることを明らかにした（図３参照）。下表は、６９種類の異なる抗ヒトＣＤ８ ＶＨＨ遺伝子を表す６９個のクローンの説明である。抗ヒトＣＤ８Ａ ＶＨＨ配列を含む組換えファージミドｐＭＥＣＳを含む大腸菌ＴＧ１を生成し、－８０℃で保存した。ベクターｐＭＥＣＳは、アンピシリン耐性をコードする。

組換えｐＭＥＣＳを用いた非サプレッサー株（例えば、ＷＫ６）の形質転換
Ｎ－末端にＰｅｌＢシグナル配列、ならびにＣ－末端にＨＡタグおよびＨｉｓ６タグを含むｐＭＥＣＳベクターにＶＨＨ遺伝子をクローニングした（ＰｅｌＢリーダー－ＶＨＨ－ＨＡ－Ｈｉｓ６）。ＰｅｌＢリーダー配列は、ＶＨＨを大腸菌の細胞膜周辺腔に標的化し、ＨＡおよびＨｉｓ６タグはＶＨＨの精製と検出（例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット、などで）に使用された。
ｐＭＥＣＳベクター中では、Ｈｉｓ６タグに続けて、アンバー停止コドン（ＴＡＧ）およびこのアンバー停止コドンの後に、Ｍ１３ファージのｇｅｎｅＩＩＩが続いた。サプレッサー大腸菌株（例えば、ＴＧ１）では、アンバー停止コドンがグルタミンとして読み取られ、したがって、ＶＨＨはファージのタンパク質ＩＩＩとの融合タンパク質として発現され、これは、パニングのために、ファージコート上のＶＨＨの提示を可能にする。ＴＧ１サプレッサー株では、抑制の効率は１００％ではなく、したがって、抑制因子株中のＶＨＨの発現は、２種類の異なるタイプのＶＨＨ分子、タンパク質ＩＩＩに融合されたものとタンパク質ＩＩＩのないもの、をもたらす。非サプレッサー大腸菌株（例えば、ＷＫ６）では、アンバー停止コドンが停止コドンとして読み取られ、したがって、得られたＶＨＨはタンパク質ＩＩＩに融合されなかった。
ｐＭＥＣＳベクターにクローニングされたＶＨＨを発現させ精製するために、目的のＶＨＨの遺伝子を含むｐＭＥＣＳを作製し、プラスミドを非サプレッサー株（例えば、ＷＫ６）中に形質転換した。得られたクローンのＶＨＨをＭＰ０５７プライマー（５’－ＴＴＡＴＧＣＴＴＣＣＧＧＣＴＣＧＴＡＴＧ－３’）（配列番号１０３３）を用いて配列決定し、クローンの同一性を確認した。抗原結合能を、ＥＬＩＳＡまたは任意の他の適切なアッセイにより再試験した。ＶＨＨ遺伝子を有する組換えｐＭＥＣＳベクターを含む非サプレッサー株（例えば、ＷＫ６）をＶＨＨの発現と精製に使用した。
ｐＭＥＣＳベクターでは、ＶＨＨの保存時に、Ｈｉｓ６タグを切断した。したがって、Ｈｉｓ６タグが検出などのために使われる場合には、ＶＨＨ遺伝子を、ｐＭＥＣＳからｐＨＥＮ６ｃベクター中に再クローニングした。具体的には、テンプレートとしてＶＨＨ遺伝子を含む組換えｐＭＥＣＳを用い、プライマーとしてＡ６ＥおよびＰＭＣＦを用いて、ＶＨＨ遺伝子をＰＣＲにより増幅した。プライマーＡ６ＥおよびＰＭＣＦは、それぞれ、フレームワーク１およびフレームワーク４プライマーであった。プライマー配列は以下の通り：
増幅プロトコルは、約３０サイクルのＰＣＲを含み、それぞれのサイクルは、９４℃で３０秒、５５℃で３０秒および７２℃で４５秒、その後、ＰＣＲの最後に７２℃で１０分間の伸長反応を含んだ。約４００ｂｐのフラグメントが増幅された。
ＰＣＲ産物を精製し（例えば、ＱｉａｇｅｎのＱｉａｑｕｉｃｋ ＰＣＲ精製キットを用いて）、ＰｓｔＩで一晩消化した。精製ＰＣＲ産物をＢｓｔＥＩＩで（またはＦｅｒｍｅｎｔａｓのＥｃｏ９１Ｉで）一晩消化した。消化に用いた温度は様々であった。例えば、ＢｓｔＥＩＩによる消化は、酵素の供給業者に応じて、５０℃または６０℃で実施した。
ライゲーションのために、ＰＣＲ産物を精製した。ｐＨＥＮ６ｃベクターをＰｓｔＩで３時間消化し、上述のように精製した後、ＢｓｔＥＩＩで２～３時間消化した。あるいは、消化をＦｅｒｍｅｎｔａｓのＥｃｏ９１Ｉを用いて実施した。消化ベクターを１％アガロースゲルで泳動し、ベクターバンドをゲルから切り出し、精製した（例えば、ＱｉａｇｅｎのＱｉａｑｕｉｃｋゲル抽出キットにより）。ＰＣＲフラグメントをその後ベクターに連結した。
エレクトロコンピテントＷＫ６細胞を連結反応で形質転換し、ＬＢ／寒天／アンピシリン（１００μｇ／ｍｌ）／グルコース（１～２％）プレートを用いて形質転換体を選択した。陽性クローンを、ユニバーサル逆方向およびユニバーサル順方向プライマーを用いてＰＣＲによりスクリーニングした。インサートが存在する場合には、約５５０ｂｐのフラグメントを増幅した。クローンの同一性を確認するために、ユニバーサル逆方向プライマーを用いて、それぞれのＶＨＨ当たり、少なくとも２種類のクローンを配列決定した。抗原結合能を、ＥＬＩＳＡまたは任意の他の適切なアッセイにより再試験した。
上記プロトコルに続き、ｐＨＥＮ６ｃベクター中でクローニングしたＶＨＨ遺伝子を生成した。これは、Ｎ－末端にＰｅｌＢシグナル配列およびＣ－末端にＨｉｓ６テイルを含んだ。ＰｅｌＢリーダー配列は、ＶＨＨを大腸菌の細胞膜周辺腔に標的化し、ＨｉｓタグはＶＨＨの精製と検出（例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット、などで）に使用された。
ＶＨＨの発現および精製
ＶＨＨの発現および精製を実施した。具体的には、１日目に、１０～２０ｍｌのＬＢ＋アンピシリン（１００μｇ／ｍｌ）＋グルコース（１％）に、新たに形質転換したＷＫ６コロニーを接種した。この前培養液を３７℃で一晩、２００～２５０ｒｐｍで振盪を加えながらインキュベートした。２日目に、ＶＨＨ発現用にＴＢ培地を用いた。ＴＢ培地は、１リットル当たり、次記を含んだ：２．３ｇのＫＨ２ＰＯ４、１６．４ｇのＫ２ＨＰＯ４・３Ｈ２Ｏ、１２ｇのトリプトン（Ｄｕｃｈｅｆａ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｅ）、２４ｇの酵母（Ｄｕｃｈｅｆａ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｅ）、および４ｍｌの１００％グリセロール（Ｄｕｃｈｅｆａ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｅ）。
１リットルのバッフル付振とうフラスコを、３３０ｍｌのＴＢで満たし、オートクレーブ処理した。ＫＨ２ＰＯ４およびＫ２ＨＰＯ４・３Ｈ２Ｏは、オートクレーブ処理しなかった。その代わりに、ＫＨ２ＰＯ４およびＫ２ＨＰＯ４・３Ｈ２Ｏを調製し、フィルター滅菌した後、既にオートクレーブ処理されている残りの培地に加えた。約１ｍｌの前培養液を、１００μｇのアンピシリン、３３０ｍｌの、２ｍＭのＭｇＣｌ２および０．１％のグルコースを補充したＴＢに加えた後、３７℃で振盪（２００～２５０ｒｐｍ）を加えながら、０．６～０．９のＯＤ６００に達するまで増殖させた。ＩＰＴＧ（１ｍＭの最終濃度）を加え、ＶＨＨ発現を誘導した。この培養液を２８℃で振盪を加えながら一晩（約１６～１８時間）インキュベートした。一晩誘導後、ＯＤ６００は通常、２５～３０であった。クローン当たり少なくとも１リットルの培養液（３つのボトル）を、平均収量１～１５ｍｇ／ｌで調製した。
大腸菌の周辺質からのＶＨＨの抽出を３日目に実施した。使用した溶液は、次を含んだ：ＴＥＳ：０．２Ｍ トリスｐＨ８．０、０．５ｍＭ ＥＤＴＡ、０．５Ｍショ糖、およびＴＥＳ／４：水中４倍希釈ＴＥＳ。
一晩の誘導培養液を８０００ｒｐｍで８分間遠心分離した。１リットルの培養液からの細胞ペレットを、上下のピペッティングにより１２ｍｌのＴＥＳ中に再懸濁し、氷上で１時間震盪した。使用した各１２ｍｌのＴＥＳ当たり、約１８ｍｌのＴＥＳ／４を加え、氷上で追加の１時間振盪を加えながらインキュベートし、続けて、４℃、８０００ｒｐｍで３０分間遠心分離した。細胞膜周辺腔から抽出したタンパク質を含む上清を新しいファルコンチューブに移した。
ＶＨＨをその後、次の溶液を使用するＩＭＡＣにより精製した：ＨＩＳ－ｓｅｌｅｃｔ（Ｓｉｇｍａ）、ＰＢＳ、および５０ｍＭの酢酸ナトリウムｐＨ４．６。
ＨＩＳ－ｓｅｌｅｃｔをＰＢＳで平衡化した。具体的には、１リットルの培養液からのペリプラズム抽出物当たり、１ｍｌのレジン（約２ｍｌのＨｉｓ－ｓｅｌｅｃｔ溶液）を５０ｍｌのファルコンチューブに加えた。ＰＢＳも加えて、最終体積の５０ｍｌにし、混合した。２０００ｒｐｍで２分間遠心分離し、上清を廃棄した。上述のように、レジンをＰＢＳで２回洗浄した。周辺質抽出物をレジンに加え、緩やかな振盪を加えながら室温で３０分～１時間インキュベートした。試料を底部にフィルターを備えたＰＤ－１０カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ番号１７－０４３５－０１）に加え、５０～１００ｍｌのＰＢＳ（使用した１ｍｌのレジン当たり、５０～１００ｍｌのＰＢＳ）で洗浄した。溶出を３回実施し、各回に１ｍｌの使用したレジン当たり、１ｍｌのＰＢＳ／０．５Ｍのイミダゾールを用いた（溶出を効率化するために、ビーズを再懸濁し、カラムの低部を閉止して、４℃で一晩放置した）。ＰＢＳに対し４℃で一晩透析を実施（カットオフ３５００ダルトン）して、イミダゾールを除去した。透析を効率化するために、透析緩衝液（ＰＢＳ）を２、３回交換した。あるいは、イミダゾールを用いる溶出の代わりに、結合ＶＨＨを１０ｍｌの５０ｍＭの酢酸ナトリウムｐＨ４．６で溶出することも可能である。５０ｍＭの酢酸ナトリウムｐＨ４．６をＶＨＨの溶出に使用する場合、溶出したＶＨＨをすぐに１ＭのトリスｐＨ８．０で中和し、透析は必要なかった。
タンパク質の量は、溶出試料のＯＤ２８０測定により推定した。各クローンの消光率を、ＥｘＰＡＳｙプロテオミクスサーバーでの一次構造分析に基づいて、ｐｒｏｔＰａｒａｍツールにより測定した。ＶＨＨのさらなる精製は、異なる方法で達成できるであろう。例えば、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ７５ １６／６０へのロード用の適切な体積が得られるまで（最大４ｍｌ）、４℃、２０００ｒｐｍでの遠心分離（Ｖｉｖａｓｐｉｎ ５０００ＭＷカットオフ、Ｖｉｖａｓｃｉｅｎｃｅ）により試料を濃縮し得る。濃縮試料を、ＰＢＳで平衡化したＳｕｐｅｒｄｅｘ ７５ １６／６０カラムにロードした。ピーク画分をプールし、定量化するために、ＯＤ２８０測定を実施した。一般に、１ｍｌ／分で実施した場合、８５～９５分後にＶＨＨが溶出した。濃縮ＶＨＨ試料の分割量を、－２０℃下、約１ｍｇ／ｍｌの濃度で貯蔵した。
実施例２．ヒトＣＤ８結合ＶＨＨの機能特性評価
種々のＶＨＨ（実施例１で記載のような）の結合特性をフローサイトメトリーで試験した。ＨＥＫ２９３－Ｔ細胞にヒトＣＤ８α発現プラスミドを遺伝子導入し、２μｇ／ｍｌのＨｉｓタグ付きＶＨＨで染色し、続けて、抗ヒスＦｉｔｃ標識抗体で染色した。フローサイトメトリーを介して細胞蛍光を検出することにより結合を測定した。図４に示す結果は、ＶＨＨがＣＤ８に結合することを示す。
実施例３．抗ヒトＣＤ８ ＶＨＨキメラにより誘導されるｐＳＴＡＴシグナル伝達
用語の「ＡｃＴａｆｅｒｏｎ」（ＡＦＮ）は、インターフェロンベースキメラに言及するために本明細書で使われる。下記の実施例では、特に断りのない限り、ＩＦＮ対する変異は、ヒトＩＦＮα２（配列番号１２）に対するものである。
ＣＤ８陽性細胞およびＣＤ８陰性細胞でｐＳＴＡＴシグナル伝達アッセイを行った。調査したキメラは、抗ヒトＣＤ８ ＶＨＨ／ヒトＩＦＮ Ｒ１４９Ａ融合体であった。
ＣＤ８に対する結合のＦＡＣＳ分析および配列類似度に基づいて、６種類のＣＤ８ ＶＨＨ：３ＣＤＡ１９、３ＣＤＡ６５、３ＣＤＡ３３、３ＣＤＡ２８、３ＣＤＡ３１、および２ＣＤＡ５をさらなる分析のために選択した。これらのＶＨＨを、真核生物発現のためのｐＭＴＷ中で、次記のようにＡｃＴａｆｅｒｏｎ（ＡＦＮ）背景にクローン化した：ｐｍＴＷ－ＳＩｇＫ－ｈＣＤ８＿ＶＨＨ－（ＧＧＳ）２０－ｈＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａ－ＧＧＳ－（Ｈｉｓ）９。目的のタンパク質を、標準的プロトコルに従って２５Ｋ ＰＥＩ（ポリエチレンイミン）を用いて意Ｈｅｋ２９３Ｆ細胞で産生した。培地を採取し、細胞を遠心分離により除去し、濾過滅菌した。組換えタンパク質を、製造業者の説明書に従いＮｉ Ｅｘｃｅｌレジン（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて精製し、イミダゾールをＰＤ１０カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）により試料から除去した。
健康なドナーのバフィーコート由来のＰＢＭＣを、Ｆｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いる密度勾配遠心分離により単離した。細胞をＦＡＣＳ緩衝液（２％ＦＢＳ、ＰＢＳ中１ｍＭのＥＤＴＡ）で２回洗浄し、抗ヒトＣＤ８ ＡＰＣ（クローンＲＥＡ７３４；Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を用いて４℃で２０分間染色した。２回の洗浄後、細胞を系列希釈したＣＤ８－ＡｃＴａｆｅｒｏｎを用いて３７℃で１５分間刺激した。固定（１０分間、３７℃、Ｆｉｘ Ｂｕｆｆｅｒ Ｉ；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）および透過処理（３０分、氷上、Ｐｅｒｍ ＩＩＩ Ｂｕｆｆｅｒ Ｉ；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）および洗浄後に、細胞を抗ＳＴＡＴ１ ｐＹ７０１ Ａｂ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で染色した。試料を、ＣｅｌｌＱｕｅｓｔ Ｐｒｏ Ｖｅｒｓｉｏｎ ４．０．２ソフトウェア（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で取得した。
図５Ａ～Ｂに示すように、ＣＤ８ ＶＨＨ標的化変異体ＩＦＮ（すなわち、Ｒ１４９Ａ）は、ＣＤ８陽性細胞（図５Ａ）中でＳＴＡＴ１をリン酸化できたが、ＣＤ８陰性細胞中（図５Ｂ）ではリン酸化できず、効率的なＣＤ８標的化を示す。
実施例４．抗ヒトＣＤ８ ＶＨＨ ＡｃＴａｆｅｒｏｎにより誘導されるｐＳＴＡＴ１シグナル伝達
実施例３では、図３に示すように、ＣＤ８ ＶＨＨがより大きな配列群１、２、および１５から選択された。ＦＡＣＳにおけるＣＤ８への結合に基づいて（実施例２および図４を参照）、群３、４、２２、および３０を含む追加の配列群が、ＣＤ８に対する強い結合を示した。これらのＣＤ８ ＶＨＨを、ＣＤ８陽性およびＣＤ８陰性末梢血単核球（ＰＢＭＣ）でのＳＴＡＴ１リン酸化のＦＡＣＳを用いた定量化による、ＡｃＴａｆｅｒｏｎのヒトＣＤ８標的化のそれらの効率のさらなる評価のために選択した。配列群３および４は類似であると見なされ、より強い結合のＶＨＨ ２ＣＤＡ７４が代表的メンバーとして選択された。２ＣＤＡ７４の配列は、位置５０にＣＤＲ２中に遊離システインを含む。この残基を、ジスルフィドベースの二量体形成を回避するためにセリンへ変異させた。変異は、ＳＳＩＳＲＳＤＧＳＴＹ（配列番号１２２１）のＣＤＲ２配列を有する２ＣＤＡ７４をもたらした。
ＣＤ８ ＶＨＨ：１ＣＤＡ６５、２ＣＤＡ５、２ＣＤＡ６８、２ＣＤＡ７４（Ｃ５０Ｓ）、および３ＣＤＡ１９（下記に示す配列）の親和性を測定した（表１参照）。ＣＤ８ ＶＨＨの親和性を、バイオレイヤー干渉法であるＯｃｔｅｔ ＲＥＤ９６ ｓｙｓｔｅｍ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を用いて測定した：ビオチン化ＣＤ８（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）をストレプトアビジンバイオセンサー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）上に固定し、段階希釈ＣＤ８ ＡＦＮ中に浸漬したた。親和性を、Ｏｃｔｅｔソフトウェア（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を用いて計算した。
１ＣＤＡ６５（配列番号１２１７）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＦＳＩＮＶＭＧＷＹＲＱＴＰＧＫＥＲＥＬＶＡＫＩＴＮＦＧＩＴＳＹＡＤＳＡＱＧＲＦＴＩＳＲＧＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＬＤＴＴＧＷＧＰＰＰＹＱＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ。
２ＣＤＡ５（配列番号１２１８）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＤＳＬＲＬＴＣＴＡＳＧＲＴＦＳＮＹＧＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＮＷＳＧＥＳＡＤＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＧＥＳＧＶＷＶＧＧＬＤＹＷＸＱＧＴＱＶＴＶＳＳ。
２ＣＤＡ６８（配列番号１２１９）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＳＳＹＶＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＱＩＳＷＳＡＧＳＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＮＤＮＡＫＲＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＥＲＧＹＡＹＣＳＤＤＧＣＱＲＴＱＤＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ。
２ＣＤＡ７４（Ｃ５０Ｓ）（配列番号１２１６）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＦＴＦＤＮＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＳＳＩＳＲＳＤＧＳＴＹＹＡＤＳＶＲＧＲＦＴＩＳＳＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＥＴＳＡＤＳＧＥＦＲＦＧＷＶＬＫＰＳＬＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ。
３ＣＤＡ１９（配列番号１２２０）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＳＳＤＤＹＴＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＩＳＣＦＳＳＳＤＧＳＴＧＦＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＳＤＮＡＴＮＴＶＹＬＥＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＤＦＮＶＷＳＰＰＩＣＧＳＲＷＹＧＰＰＰＧＧＭＥＹＷＧＫＧＴＱＶＴＶＳＳ。
ＣＤ８ ＶＨＨ：１ＣＤＡ６５、２ＣＤＡ５、２ＣＤＡ６８、２ＣＤＡ７４（Ｃ５０Ｓ）、および３ＣＤＡ１９を次記のように、真核生物発現のためのｐＭＴＷベクター中の、ＡＦＮにクローン化した：ｐｍＴＷ－ＳＩｇＫ－ｈＣＤ８＿ＶＨＨ－（ＧＧＳ）２０－ｈＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａ－ＧＧＳ－（Ｈｉｓ）９。目的のＣＤ８ ＶＨＨ ＡＦＮタンパク質（すなわち、ＡＦＮ １ＣＤＡ６５、ＡＦＮ、２ＣＤＡ５、ＡＦＮ ２ＣＤＡ６８、ＡＦＮ ２ＣＤＡ７４（Ｃ５０Ｓ）、およびＡＦＮ ３ＣＤＡ１９）を製造者のガイドラインに従って、ＥｘｐｉＣＨＯ細胞（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）中で産生した。培地を採取し、細胞を遠心分離により除去し、濾過滅菌した。組換えタンパク質を、ＨｉｓＰｕｒ Ｃｏｂａｌｔビーズ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて精製し、イミダゾールをＰＤ１０カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて試料から除去した。
得られたＣＤ８ ＶＨＨ ＡＦＮの生物活性を試験するために、ＰＢＭＣを、Ｆｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いる密度勾配遠心分離により、健康なドナーのバフィーコートから単離した。細胞をＦＡＣＳ緩衝液（２％ＦＢＳ、ＰＢＳ中１ｍＭのＥＤＴＡ）で２回洗浄し、抗ヒトＣＤ８－ＦＩＴＣ（クローンＲＥＡ７３４；Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を用いて４℃で２０分間染色した。２回の洗浄後、細胞をＣＤ８ ＶＨＨ ＡＦＮ（すなわち、ＡＦＮ １ＣＤＡ６５、ＡＦＮ ２ＣＤＡ５、ＡＦＮ ２ＣＤＡ６８、ＡＦＮ ２ＣＤＡ７４（Ｃ５０Ｓ）、またはＡＦＮ ３ＣＤＡ１９）の系列希釈または野生型ＩＦＮａ２（陽性対照）を用いて３７℃で１５分間刺激した。固定（１０分間、３７℃、Ｆｉｘ Ｂｕｆｆｅｒ Ｉ；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）および透過処理（３０分、氷上、Ｐｅｒｍ ＩＩＩ Ｂｕｆｆｅｒ Ｉ；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）および洗浄後に、細胞を抗ＳＴＡＴ１ ｐＹ７０１ Ａｂ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で染色した。試料を、ＣｅｌｌＱｕｅｓｔ Ｐｒｏ Ｖｅｒｓｉｏｎ ４．０．２ソフトウェア（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて、ＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｕｒ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で取得し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（ＦｌｏｗＪｏ）を用いて分析した。
図６Ａ～Ｆは、ＣＤ８ ＶＨＨ ＡＦＮによる処理が、ＣＤ８陰性細胞に比べて、ＣＤ８陽性細胞でＳＴＡＴ１のより多くのリン酸化をもたらすことを示す（データは、ベースラインＳＴＡＴ１リン酸化に対する増加としてプロットされた）。
実施例５．カニクイザルＣＤ８との交差反応性
実施例４からのＣＤ８ ＶＨＨの、ヒトおよびカニクイザルＣＤ８アルファへ結合する能力をＦＡＣＳで試験した。
Ｈｅｋ２９３Ｔ細胞を、標準的リン酸カルシウム法を使ってヒトまたはカニクイザルＣＤ８アルファをコードする発現プラスミドで一時的にトランスフェクトした。２日後に、細胞を再懸濁し、段階希釈ＣＤ８ ＡＦＮおよびＦＩＴＣ結合ＴＨＥ ＨＩＳ Ａｂ（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ）と順次インキュベートした。試料を、ＣｅｌｌＱｕｅｓｔ Ｐｒｏ Ｖｅｒｓｉｏｎ ４．０．２ソフトウェア（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて、ＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｕｒ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で取得し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（ＦｌｏｗＪｏ）を用いて分析した。
図７Ａ～Ｅは、５つ全てのＣＤ８ ＶＨＨが同様に等しく、ヒトおよびカニクイザルＣＤ８アルファに結合することを示す。
等価物
本発明をその特定の実施形態と関連付けて説明してきたが、その実施形態はさらに修正が可能であり、本出願は、一般的に、本発明の原理に従った本発明の任意の変形、使用、または改変を包含することが意図され、本発明が属する技術内の既知のまたは日常的な実施の範囲に入る、および上に示されるおよび以下の添付の請求項の範囲に入る本質的な特徴に該当し得る本開示からの乖離を含むものと理解されよう。
当業者は、本明細書で具体的に記載された特定の実施形態に対する多数の等価物を、ルーチン実験のみを用いて認識し、確認できるであろう。このような等価物は、次の請求項の範囲内に包含されることが意図されている。
参照による組み込み
本明細書で引用されている全ての特許および刊行物は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本明細書で考察された出版物は、単に本出願の出願日に先行してそれらが開示されているという理由で提供されている。本明細書のいずれも、本発明が、先行発明の理由でこのような出版物に先行する権利がないことを容認すると解釈されるべきではない。
本明細書で使用されている全ての見出しは、単に構成上の理由によるものであり、どんな形にせよ、本開示を限定することを意図するものではない。任意の個別のセクションの内容は、等しく全てのセクションに適用できる。
参考文献
以下は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
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Ｌｉ Ｙ，Ｙｉｎ Ｙ，Ｍａｒｉｕｚｚａ ＲＡ，２０１３．Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ａｎｄ ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ＣＤ４ ａｎｄ ＣＤ８ ｉｎ Ｔ ｃｅｌｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ４，２０６．
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Ｐｕｒｂｈｏｏ ＭＡ，Ｂｏｕｌｔｅｒ ＪＭ，Ｐｒｉｃｅ ＤＡ，ｅｔ ａｌ．，２００１．Ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ＣＤ８ ｃｏｒｅｃｅｐｔｏｒ ｅｆｆｅｃｔｓ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｔ ｃｅｌｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎｔｉｇｅｎ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｐｒｉｍａｒｉｌｙ ｂｙ ｍｅｄｉａｔｉｎｇ ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｚｅｔａ ｃｈａｉｎ．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２７６，３２７８６－９２．
Ｓｉｎｇｅｒ Ａ，Ｂｏｓｓｅｌｕｔ Ｒ，２００４．ＣＤ４／ＣＤ８ ｃｏｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｉｎ ｔｈｙｍｏｃｙｔｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ ｌｉｎｅａｇｅ ｃｏｍｍｉｔｍｅｎｔ：ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ＣＤ４／ＣＤ８ ｌｉｎｅａｇｅ ｄｅｃｉｓｉｏｎ．Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ８３，９１－１３１．
Ｔｕｒｎｅｒ ＪＭ，Ｂｒｏｄｓｋｙ ＭＨ，Ｉｒｖｉｎｇ ＢＡ，Ｌｅｖｉｎ ＳＤ，Ｐｅｒｌｍｕｔｔｅｒ ＲＭ，Ｌｉｔｔｍａｎ ＤＲ，１９９０．Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｕｎｉｑｕｅ Ｎ－ｔｅｒｍｉｎａｌ ｒｅｇｉｏｎ ｏｆ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｐ５６ｌｃｋ ｗｉｔｈ ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ ｄｏｍａｉｎｓ ｏｆ ＣＤ４ ａｎｄ ＣＤ８ ｉｓ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ｃｙｓｔｅｉｎｅ ｍｏｔｉｆｓ．Ｃｅｌｌ ６０，７５５－６５．
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Ｚａｍｏｙｓｋａ Ｒ，１９９８．ＣＤ４ ａｎｄ ＣＤ８：ｍｏｄｕｌａｔｏｒｓ ｏｆ Ｔ－ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｇｅｎ ａｎｄ ｏｆ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ？ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １０，８２－７．
本発明の態様は以下を含む。
［付記１］
配列番号２３５、２４６、２５０、２５２、２６８、および１２１６のうちの１つと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤ８結合物質。
［付記２］
３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含む少なくとも１つの標的化部分を含むＣＤ８結合物質であって、
（ａ）ＣＤＲ１が、配列番号２９、３７、３９、４５、および５１のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み；
（ｂ）ＣＤＲ２が、配列番号９７、１０８、１１２、１１４、１３０、および１２２１のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み；ならびに
（ｃ）ＣＤＲ３が、配列番号１６６、１７７、１８１、１８３、および１９９のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む、
ＣＤ８結合物質。
［付記３］
前記標的化部分が、完全長抗体、単一ドメイン抗体、組換え重鎖抗体（ＶＨＨ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、サメ重鎖抗体（ＶＮＡＲ）、マイクロタンパク質、ｄａｒｐｉｎ、アンチカリン、アドネクチン、アプタマー、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’） ２ 、ペプチド模倣分子、受容体に対する天然リガンド、または合成分子である、付記１または２に記載のＣＤ８結合物質。
［付記４］
前記標的化部分が、単一ドメイン抗体である、付記１～３のいずれか１項に記載のＣＤ８結合物質。
［付記５］
前記標的化部分が、Ｖ Ｈ Ｈ、ヒト化Ｖ Ｈ Ｈ、またはラクダ化Ｖ Ｈ Ｈを含む、付記３に記載のＣＤ８結合物質。
［付記６］
１種類または複数種類のシグナル伝達物質を含む、付記１～５のいずれか１項に記載のＣＤ８結合物質。
［付記７］
前記シグナル伝達物質が、インターフェロン、インターロイキン、および腫瘍壊死因子のうちの１つまたは複数から選択され、これらはいずれも任意に改変されていてもよい、付記６に記載のＣＤ８結合物質。
［付記８］
１つまたは複数の追加の標的化部分を含む、付記１～７のいずれか１項に記載のＣＤ８結合物質。
［付記９］
前記１つまたは複数の追加の標的化部分が腫瘍抗原を認識し、腫瘍抗原を機能的に調節してもよい、付記８に記載のＣＤ８結合物質。
［付記１０］
前記１つまたは複数の追加の標的化部分が免疫細胞上の抗原を認識し、任意に免疫細胞上の抗原を機能的に調節してもよい、付記９に記載のＣＤ８結合物質。
［付記１１］
前記免疫細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、好中球、およびＮＫ細胞から選択される、付記１０に記載のＣＤ８結合物質。
［付記１２］
細胞傷害性Ｔ細胞を腫瘍細胞にまたは腫瘍環境に動員する、付記１～１１のいずれか１項に記載のＣＤ８結合物質。
［付記１３］
ＣＤ８を認識して、その活性を実質的に機能的に調節することなくＣＤ８に結合する、付記１～１２のいずれか１項に記載のＣＤ８結合物質。
［付記１４］
付記１～１３のいずれか１項に記載のＣＤ８結合物質をコードする組換え核酸組成物。
［付記１５］
付記１４に記載の核酸を含む宿主細胞。
［付記１６］
３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含む少なくとも１つの標的化部分を含むＣＤ８結合物質であって、
（ａ）ＣＤＲ１が、配列番号１２～８０のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み；
（ｂ）ＣＤＲ２が、配列番号８１～１４９または１２２１のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み；および
（ｃ）ＣＤＲ３が、配列番号１５０～２１８のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む、
ＣＤ８結合物質。
［付記１７］
前記標的化部分が、完全長抗体、単一ドメイン抗体、組換え重鎖抗体（ＶＨＨ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、サメ重鎖抗体（ＶＮＡＲ）、マイクロタンパク質、ｄａｒｐｉｎ、アンチカリン、アドネクチン、アプタマー、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’） ２ 、ペプチド模倣分子、受容体に対する天然リガンド、または合成分子である、付記１６に記載のＣＤ８結合物質。
［付記１８］
前記標的化部分が、単一ドメイン抗体である、付記１６または付記１７に記載のＣＤ８結合物質。
［付記１９］
前記標的化部分が、Ｖ Ｈ Ｈ、ヒト化Ｖ Ｈ Ｈ、またはラクダ化Ｖ Ｈ Ｈを含む、付記１８に記載のＣＤ８結合物質。
［付記２０］
配列番号２１９～２８７または配列番号１２１６のうちの１つと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、付記１９に記載のＣＤ８結合物質。
［付記２１］
１種類または複数種類のシグナル伝達物質を含む、付記１６～２０のいずれか１項に記載のＣＤ８結合物質。
［付記２２］
前記シグナル伝達物質が、インターフェロン、インターロイキン、および腫瘍壊死因子のうちの１つまたは複数から選択され、これらはいずれも任意に改変されていてもよい、付記２１に記載のＣＤ８結合物質。
［付記２３］
１つまたは複数の追加の標的化部分を含む、付記１６～２２のいずれか１項に記載のＣＤ８結合物質。
［付記２４］
前記１つまたは複数の追加の標的化部分が腫瘍抗原を認識し、腫瘍抗原を機能的に調節してもよい、付記２３に記載のＣＤ８結合物質。
［付記２５］
前記１つまたは複数の追加の標的化部分が免疫細胞上の抗原を認識し、任意に免疫細胞上の抗原を機能的に調節してもよい、付記２４に記載のＣＤ８結合物質。
［付記２６］
前記免疫細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、好中球、およびＮＫ細胞から選択される、付記２５に記載のＣＤ８結合物質。
［付記２７］
細胞傷害性Ｔ細胞を腫瘍細胞にまたは腫瘍環境に動員する、付記１６～２６のいずれか１項に記載のＣＤ８結合物質。
［付記２８］
ＣＤ８を認識して、その活性を実質的に機能的に調節することなくＣＤ８に結合する、付記１６～２７のいずれか１項に記載のＣＤ８結合物質。
［付記２９］
付記１６～２８のいずれか１項に記載のＣＤ８結合物質をコードする組換え核酸組成物。
［付記３０］
付記２９に記載の核酸を含む宿主細胞。
［付記３１］
癌、感染症、免疫異常、および／または自己免疫疾患のうちの１つまたは複数を有する患者における使用に適している、付記１～１３または付記１６～２８のいずれか１項に記載のＣＤ８結合物質。
［付記３２］
ＣＤ８を標的とする抗原または受容体認識ドメインを含む標的化部分ならびにインターフェロン、インターロイキン、および腫瘍壊死因子のうちの１つまたは複数から選択されるシグナル伝達物質を含むキメラの有効量を、投与を必要とする患者に投与することを含む、癌を治療または予防するための方法。
［付記３３］
前記シグナル伝達物質が、改変されている、付記３２に記載の方法。
［付記３４］
前記ＣＤ８結合物質が、付記１～１３または付記１６～２８のいずれか１項に記載のＣＤ８結合物質である、付記３２または３３に記載の方法。
［付記３５］
前記ＣＤ８結合物質が、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含む少なくとも１つの標的化部分を含み、
（ａ）ＣＤＲ１が、配列番号１２～８０のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み；
（ｂ）ＣＤＲ２が、配列番号８１～１４９または１２１６のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み；および
（ｃ）ＣＤＲ３が、配列番号１５０～２１８のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む、
付記３２～３４のいずれか１項に記載の方法。
［付記３６］
前記癌が、基底細胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脳および中枢神経系癌、乳癌、腹膜の癌、子宮頸癌、絨毛癌、結腸および直腸癌、結合組織癌、消化器系の癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、頭頸部の癌、胃癌（胃腸癌を含む）、神経膠芽腫、肝癌、ヘパトーマ、上皮内腫瘍、腎臓癌または腎性癌（ｋｉｄｎｅｙ ｏｒ ｒｅｎａｌ ｃａｎｃｅｒ）、喉頭癌、白血病、肝臓癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、および肺扁平上皮癌）、黒色腫、骨髄腫、神経芽腫、口腔癌（唇、舌状、舌、口内、および咽頭）、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸癌、呼吸器系癌、唾液腺癌腫、肉腫、皮膚癌、扁平上皮細胞癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮または子宮内膜癌、泌尿器系の癌、外陰癌、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫、ならびにＢ細胞リンパ腫を含むリンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽細胞ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ、巨大腫瘤病変ＮＨＬ、マントル細胞リンパ腫、エイズ関連リンパ腫、およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、毛様細胞性白血病、慢性骨髄芽球性白血病、ならびに他の癌腫および肉腫、および移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症、浮腫（例えば脳腫瘍に関連するもの）、およびメグズ症候群に関連する異常血管増殖のうちの１つまたは複数から選択される、付記３２～３５のいずれか１項に記載の方法。
［付記３７］
癌、感染症、免疫異常、および／または自己免疫疾患のうちの１つまたは複数の治療における使用のための付記１～３６のいずれか１項に記載のＣＤ８結合物質。
［付記３８］
本明細書に記載の、癌、感染症、免疫異常、および／または自己免疫疾患のうちの１つまたは複数を治療するための薬物の製造のための付記１～３７のいずれか１項に記載のＣＤ８結合物質の使用。
［付記３９］
（ａ）付記１～１３または付記１６～２８に記載のＣＤ８結合物質のうちのいずれか１つ；および
（ｂ）野生型ＩＦＮα２に比べて改善された安全性を付与する１つまたは複数の変異を有する改変ヒトＩＦＮα２、
を含むキメラタンパク質であって、
前記標的化部分および前記改変シグナル伝達物質が、任意に１つまたは複数のリンカーにより連結されていてもよい、キメラタンパク質。
［付記４０］
前記改変ヒトＩＦＮα２が、位置Ｒ１２０、Ｍ１４８、Ｒ１４９、およびＬ１５３に１つまたは複数の変異を含む、付記３９に記載のキメラタンパク質。
［付記４１］
前記改変ヒトＩＦＮα２が、Ｒ１２０Ｅ、Ｒ１４９Ａ、およびＬ１５３Ａから選択される１つまたは複数の変異を含む、付記４０に記載のキメラタンパク質。
［付記４２］
前記改変ヒトＩＦＮα２が、Ｒ１２０Ｅ変異と、Ｒ１４９ＡまたはＬ１５３Ａ変異のいずれかとを含む、付記４０に記載のキメラタンパク質。
［付記４３］
（ａ）付記１～１３または付記１６～２８に記載のＣＤ８結合物質のうちのいずれか１つ；および
（ｂ）野生型ＩＦＮβに比べて改善された安全性を付与する１つまたは複数の変異を有する改変ヒトＩＦＮβ、
を含むキメラタンパク質であって、
前記標的化部分および前記改変シグナル伝達物質が、任意に１つまたは複数のリンカーにより連結されていてもよい、キメラタンパク質。
［付記４４］
前記改変ヒトＩＦＮβが、位置Ｗ２２、Ｒ２７、Ｌ３２、Ｒ３５、Ｖ１４８、Ｌ１５１、Ｒ１５２、およびＹ１５５に１つまたは複数の変異を含む、付記４３に記載のキメラタンパク質。
［付記４５］
前記改変ヒトＩＦＮβが、Ｗ２２Ｇ、Ｒ２７Ｇ、Ｌ３２Ａ、Ｌ３２Ｇ、Ｒ３５Ａ、Ｒ３５Ｇ、Ｖ１４８Ｇ、Ｌ１５１Ｇ、Ｒ１５２Ａ、Ｒ１５２Ｇから選択される１つまたは複数の変異を含む、付記４４に記載のキメラタンパク質。

Claims (17)

  1. ３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含む単一ドメイン抗体を含む、ＣＤ８結合物質であって、
    （ａ）ＣＤＲ１が配列番号２８のアミノ酸配列からなり、ＣＤＲ２が配列番号９７のアミノ酸配列からなり、ＣＤＲ３が配列番号１６６のアミノ酸配列からなる；
    （ｂ）ＣＤＲ１が配列番号３９のアミノ酸配列からなり、ＣＤＲ２が配列番号１０８のアミノ酸配列からなり、ＣＤＲ３が配列番号１７７のアミノ酸配列からなる；
    （ｃ）ＣＤＲ１が配列番号３７のアミノ酸配列からなり、ＣＤＲ２が配列番号１１２のアミノ酸配列からなり、ＣＤＲ３が配列番号１８１のアミノ酸配列からなる；
    （ｄ）ＣＤＲ１が配列番号４５のアミノ酸配列からなり、ＣＤＲ２が配列番号１１４のアミノ酸配列からなり、ＣＤＲ３が配列番号１８３のアミノ酸配列からなる；
    （ｅ）ＣＤＲ１が配列番号５１のアミノ酸配列からなり、ＣＤＲ２が配列番号１３０のアミノ酸配列からなり、ＣＤＲ３が配列番号１９９のアミノ酸配列からなる；又は
    （ｆ）ＣＤＲ１が配列番号４５のアミノ酸配列からなり、ＣＤＲ２が配列番号１２２１のアミノ酸配列からなり、ＣＤＲ３が配列番号１８３のアミノ酸配列からなり、
    前記ＣＤ８結合物質は、
    配列番号２３５、２４６、２５０、２５２、および２６８から配列番号１２１５の、ＡＡＡリンカー、ＨＡタグ、および末端ヒスチジンタグ配列を除いたアミノ酸配列、ならびに配列番号１２１６のアミノ酸配列のうちの１つのアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、
    前記ＣＤ８結合物質。
  2. 前記単一ドメイン抗体が、組換え重鎖抗体（ＶＨＨ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、またはヒト化ＶＨＨである、請求項１に記載のＣＤ８結合物質。
  3. １種類または複数種類のシグナル伝達物質を含む、請求項１または２に記載のＣＤ８結合物質。
  4. 前記１種類または複数種類のシグナル伝達物質が、インターフェロン、インターロイキン、および腫瘍壊死因子のうちの１つまたは複数から選択され、これらはいずれも改変されていてもよい、請求項３に記載のＣＤ８結合物質。
  5. １つまたは複数の追加の標的化部分を含む、請求項１～４のいずれか１項に記載のＣＤ８結合物質。
  6. 前記１つまたは複数の追加の標的化部分が腫瘍抗原を認識し、前記１つまたは複数の追加の標的化部分は腫瘍抗原を機能的に調節してもよい、請求項５に記載のＣＤ８結合物質。
  7. 前記１つまたは複数の追加の標的化部分が免疫細胞上の抗原を認識し、前記１つまたは複数の追加の標的化部分は免疫細胞上の抗原を機能的に調節してもよい、請求項６に記載のＣＤ８結合物質。
  8. 前記免疫細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、好中球、およびＮＫ細胞からなる群から選択される、請求項７に記載のＣＤ８結合物質。
  9. 細胞傷害性Ｔ細胞を腫瘍細胞にまたは腫瘍環境に動員する、請求項１～８のいずれか１項に記載のＣＤ８結合物質。
  10. ＣＤ８を認識して、その活性を機能的に調節することなくＣＤ８に結合する、請求項１～９のいずれか１項に記載のＣＤ８結合物質。
  11. 請求項１～１０のいずれか１項に記載のＣＤ８結合物質をコードする組換え核酸。
  12. 請求項１１に記載の組換え核酸を含む宿主細胞。
  13. （ａ）請求項１～１０のいずれか１項に記載のＣＤ８結合物質；および
    （ｂ）位置Ｒ１２０、Ｍ１４８、Ｒ１４９、およびＬ１５３から選択される位置に、野生型ＩＦＮα２に比べて改善された安全性を付与する１つまたは複数の変異を有する、配列番号２８８又は２８９と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有する改変ヒトＩＦＮα２、
    を含むキメラタンパク質であって、
    前記単一ドメイン抗体および前記改変ヒトＩＦＮα２が、１つまたは複数のリンカーにより連結されていてもよい、キメラタンパク質。
  14. 前記改変ヒトＩＦＮα２が、Ｒ１２０Ｅ、Ｒ１４９Ａ、およびＬ１５３Ａからなる群から選択される１つまたは複数の変異を含む、請求項１３に記載のキメラタンパク質。
  15. 前記改変ヒトＩＦＮα２が、Ｒ１２０Ｅ変異と、Ｒ１４９ＡまたはＬ１５３Ａ変異のいずれかとを含む、請求項１３に記載のキメラタンパク質。
  16. （ａ）請求項１～１０のいずれか１項に記載のＣＤ８結合物質；および
    （ｂ）位置Ｗ２２、Ｒ２７、Ｌ３２、Ｒ３５、Ｖ１４８、Ｌ１５１、Ｒ１５２、およびＹ１５５から選択される位置に、野生型ＩＦＮβに比べて改善された安全性を付与する１つまたは複数の変異を有する、配列番号２９０と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有する改変ヒトＩＦＮβ、
    を含むキメラタンパク質であって、
    前記単一ドメイン抗体および前記改変ヒトＩＦＮβが、１つまたは複数のリンカーにより連結されていてもよい、キメラタンパク質。
  17. 前記改変ヒトＩＦＮβが、Ｗ２２Ｇ、Ｒ２７Ｇ、Ｌ３２Ａ、Ｌ３２Ｇ、Ｒ３５Ａ、Ｒ３５Ｇ、Ｖ１４８Ｇ、Ｌ１５１Ｇ、Ｒ１５２Ａ、およびＲ１５２Ｇからなる群から選択される１つまたは複数の変異を含む、請求項１６に記載のキメラタンパク質。
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