JP7329439B2 - ペプチド交換システムおよび方法 - Google Patents
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Description
本出願は、2016年5月13日に出願された米国仮出願番号第62/336,189号、および2016年11月15日に出願された米国仮出願番号第62/422,409号の利益を主張している。これら仮出願の各々の内容は、その全体が参考として本明細書中にすべてが援用される。
免疫応答の間、抗原提示細胞は、MHCクラスIおよびII分子の抗原特異的T細胞受容体との相互作用によりTリンパ球を活性化し、これは次いでCD4+およびCD8+Tリンパ球増殖を誘発する。これらの抗原特異的CD4+およびCD8+T細胞の検出は、参照により本明細書に全体が組み込まれる、Altmanらの米国特許第5,635,363号に記載されるように、それぞれMHCクラスIIおよびクラスIの4量体の使用によって可能である。MHCクラスIの4量体は、4つのビオチン化MHCペプチド単量体の蛍光色素コンジュゲートしたストレプトアビジンへの結合によって形成される。4量体を認識するT細胞受容体の能力は、MHC対立遺伝子およびペプチド配列の両方に依存する。特定の抗原/対立遺伝子組合せに特異的なCD8+Tリンパ球の割合は、免疫蛍光マルチカラーアッセイに続くフローサイトメトリー分析における蛍光MHCクラスIの4量体による白血球の染色によって決定され得る。MHCクラスIの単量体はMHC重鎖、β2ミクログロブリン、および抗原ペプチドを含有する。ほとんどのMHCクラスI分子に関して、MHC-ペプチド複合体のin vitroでのフォールディングの成功は、重鎖へのペプチド結合に基づき、典型的にはナノモル範囲の親和性でペプチドが重鎖に結合している必要がある。生じる4量体は、MHCタンパク質に強く結合しているペプチドを有する安定な実体である。
一態様では、本開示は、MHCタンパク質において、例えば定量化されたペプチド交換などペプチド交換を実施する方法を提供する。MHCタンパク質はクラスIまたはクラスII分子であり、それらは任意の多量体状態、例えば単量体、4量体、8量体、または12量体において交換され得る。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される:
(項目1)
MHC分子においてペプチド交換を実施する方法であって、
第1のペプチドに結合している前記MHC分子を提供するステップ、および
前記第1のペプチドに結合している前記MHC分子を第2の結合パートナーと接触させるステップであって、第2のペプチドに結合しているMHC分子を生成するステップ
を含む、方法。
(項目2)
前記接触させるステップがペプチド交換因子の存在下で起こる、項目1に記載の方法。
(項目3)
前記接触させるステップがペプチド交換因子の不在下で起こる、項目1に記載の方法。
(項目4)
前記第2の結合パートナーが第2のペプチドである、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
(項目5)
第1のペプチドに結合している前記MHC分子を提供するステップ、および
前記第1のペプチドに結合している前記MHC分子を第2のペプチドと接触させるステップであって、前記第2のペプチドに結合しているMHC分子を生成するステップ
を含む、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
(項目6)
前記MHC分子がMHCクラスI分子である、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
(項目7)
前記MHC分子がMHCクラスII分子である、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
(項目8)
前記項目のいずれか一項に記載のMHCクラスI分子においてペプチド交換を実施する方法であって、
第1のペプチドに結合している前記MHCクラスI分子を提供するステップ、および
第1のペプチドに結合している前記MHCクラスI分子をペプチド交換因子の存在下で第2のペプチドと接触させるステップであって、前記第2のペプチドに結合しているMHCクラスI分子を生成するステップ
を含む、方法。
(項目9)
前記第1のペプチドが第1の標識によって標識される、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
(項目10)
前記第1の標識がビオチン、ハプテン、またはタグである、項目9に記載の方法。
(項目11)
前記第1の標識が第1のタグである、項目10に記載の方法。
(項目12)
前記第1のタグがDNPである、項目11に記載の方法。
(項目13)
前記第2のペプチドが標識されない、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
(項目14)
前記第2のペプチドがタグを表示しない、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
(項目15)
前記第2のペプチドが第2の標識を表示し、さらに前記第1の標識が前記第2の標識と
異なる、項目1から12のいずれか一項に記載の方法。
(項目16)
前記第2の標識がビオチン、ハプテン、またはタグである、項目15に記載の方法。
(項目17)
前記第2の標識が第2のタグであり、さらに前記第1のタグが前記第2のタグと異なる、項目16に記載の方法。
(項目18)
前記項目のいずれか一項に記載のMHC分子においてペプチド交換を実施する方法であって、
第1のペプチドに結合している第1の量のMHC分子を提供するステップ、ならびに
前記第1のペプチドに結合している前記MHC分子に第2の量の第2の結合パートナーを添加するステップであって、それにより前記第1のペプチドに結合しているMHC分子、前記第2の結合パートナーに結合しているMHC分子、未結合の第1のペプチド、および未結合の第2の結合パートナーを含む混合物が形成されるステップ
を含む、方法。
(項目19)
前記添加するステップが、ペプチド交換因子を添加するステップをさらに含む、項目18に記載の方法。
(項目20)
添加するステップが、ペプチド交換因子を添加するステップを含まない、項目1に記載の方法。
(項目21)
前記第2の結合パートナーが第2のペプチドである、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
(項目22)
前記項目のいずれか一項に記載のMHC分子においてペプチド交換を実施する方法であって、
第1のペプチドに結合している第1の量のMHC分子を提供するステップ、ならびに
前記第1のペプチドに結合している前記MHC分子に、ペプチド交換因子および第2の量の第2のペプチドを添加するステップであって、それにより前記第1のペプチドに結合しているMHC分子、前記第2のペプチドに結合しているMHC分子、未結合の第1のペプチド、および未結合の第2のペプチドを含む混合物が形成されるステップ
を含む、方法。
(項目23)
前記MHC分子がMHCクラスI分子である、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
(項目24)
前記MHC分子がMHCクラスII分子である、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
(項目25)
前記項目のいずれか一項に記載のペプチド交換を実施する方法であって、
第1のペプチドに結合している第1の量のMHCクラスI分子を提供するステップ、ならびに
第1のペプチドに結合している前記MHCクラスI分子に、ペプチド交換因子および第2の量の第2のペプチドを添加するステップであって、それにより前記第1のペプチドに結合しているMHCクラスI分子、前記第2のペプチドに結合しているMHCクラスI分子、未結合の第1のペプチド、および未結合の第2のペプチドを含む混合物が形成されるステップ
を含む、方法。
(項目26)
前記第1のペプチドが第1の標識で標識される、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
(項目27)
前記第1の標識がビオチン、ハプテン、またはタグである、項目26に記載の方法。
(項目28)
前記第1の標識が第1のタグである、項目27に記載の方法。
(項目29)
前記第1のタグがDNPである、項目28に記載の方法。
(項目30)
前記第2のペプチドが標識されない、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
(項目31)
前記第2のペプチドがタグを表示しない、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
(項目32)
前記第2のペプチドが第2の標識を表示し、さらに前記第1の標識が前記第2の標識と異なる、項目1から29のいずれか一項に記載の方法。
(項目33)
前記第2の標識がビオチン、ハプテン、またはタグから選択される、項目32に記載の方法。
(項目34)
前記第2の標識が、第2のタグであり、さらに前記第1のタグが前記第2のタグと異なる、項目33に記載の方法。
(項目35)
前記第1のペプチドに結合しているMHC分子の量、前記第2のペプチドに結合しているMHC分子の量、未結合の第1のペプチドの量、または未結合の第2のペプチドの量の少なくとも1つを決定するステップをさらに含む、項目18から34のいずれか一項に記載の方法。
(項目36)
前記第1のペプチドに結合している前記MHCクラスI分子の量と、前記第2のペプチドに結合している前記MHCクラスI分子の量の比を決定するステップを含む、項目18から35のいずれか一項に記載の方法。
(項目37)
未結合の第1のペプチドの量を決定するステップ、および未結合の第1のペプチドの量を前記第1のペプチドに結合しているMHC分子の前記第1の量と比較するステップをさらに含む、項目18から36のいずれか一項に記載の方法。
(項目38)
未結合の第1のペプチドの量を決定するステップ、および未結合の第1のペプチドの量を前記第1のペプチドに結合しているMHCクラスI分子の前記第1の量と比較するステップをさらに含む、項目18から37のいずれか一項に記載の方法。
(項目39)
前記決定するステップがイムノアッセイを実施するステップを含む、項目35から38のいずれか一項に記載の方法。
(項目40)
前記決定するステップがイムノアッセイを実施するステップによって達成される、項目39に記載の方法。
(項目41)
前記イムノアッセイがサンドイッチイムノアッセイである、項目40に記載の方法。
(項目42)
前記サンドイッチイムノアッセイを実施するステップが、
第1の抗体にコンジュゲートしている支持体を提供すること;
前記第1の抗体を、前記第1のペプチドに結合している前記MHC分子および前記第2の
ペプチドに結合している前記MHC分子に結合させること;
前記第1のペプチドに結合することができる第2の抗体を提供すること;
前記第2の抗体を、前記第1のペプチドに結合している前記MHC分子に結合させることであって、それにより前記第2の抗体が前記支持体に結合されること;
前記支持体に結合している前記第2の抗体の量を決定すること
を含む、項目41から42のいずれか一項に記載の方法。
(項目43)
前記支持体が磁気ビーズまたは非磁気ビーズを含む、項目42に記載の方法。
(項目44)
前記サンドイッチイムノアッセイを実施するステップが、磁気を使用して、遠心分離によって、または吸引によってビーズをペレット化することを含む、項目41から43のいずれか一項に記載の方法。
(項目45)
前記第1の抗体が抗MHCまたは抗ストレプトアビジン抗体である、項目42から44のいずれか一項に記載の方法。
(項目46)
前記第1のペプチドがDNPで標識され、前記第2の抗体が抗DNP抗体である、項目42から45のいずれか一項に記載の方法。
(項目47)
前記第2の抗体がフルオロフォアまたは放射標識で標識される、項目42から46のいずれか一項に記載の方法。
(項目48)
前記第2の抗体がフルオロフォアで標識される、項目42から47のいずれか一項に記載の方法。
(項目49)
制御ペプチド交換を行うステップをさらに含む、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
(項目50)
前記混合物が、追加のペプチド、脂質、またはポリヌクレオチドをさらに含む、項目18から49のいずれか一項に記載の方法。
(項目51)
第1のペプチドに結合しているMHC分子を含む、ペプチド交換のためのキット。
(項目52)
ペプチド交換因子をさらに含む、項目51に記載のペプチド交換のためのキット。
(項目53)
前記第1のペプチドが第1の標識で標識される、項目51から52のいずれか一項に記載のキット。
(項目54)
前記第1の標識がビオチン、ハプテン、またはタグである、項目51から53のいずれか一項に記載のキット。
(項目55)
前記第1の標識が第1のタグである、項目51から54のいずれか一項に記載のキット。
(項目56)
前記第1のタグがDNPである、項目51から55のいずれか一項に記載のキット。
(項目57)
抗第1のタグ抗体をさらに含む、項目55から56のいずれか一項に記載のキット。
(項目58)
抗MHCタンパク質抗体を含む捕捉システムをさらに含む、項目51から57のいずれか一項に記載のキット。
(項目59)
前記捕捉システムが磁気捕捉ビーズを含む、項目51から58のいずれか一項に記載のキット。
(項目60)
前記第1のペプチドに結合しているMHCクラスI分子;および
ペプチド交換因子
を含む、項目51から59のいずれか一項に記載のキット。
(項目61)
前記第1のペプチドが第1のタグを表示し、
抗第1のタグ抗体;および
抗MHCタンパク質抗体を含む捕捉システム
をさらに含む、項目51から60のいずれか一項に記載のキット。
(項目62)
参照ペプチドをさらに含む、項目51から61のいずれか一項に記載のキット。
(項目63)
前記MHC分子がMHCクラスI分子の単量体である、前記項目のいずれか一項に記載の方法またはキット。
(項目64)
前記MHC分子がMHCクラスI多量体の成分である、前記項目のいずれか一項に記載の方法またはキット。
(項目65)
前記多量体が4つのMHCクラスI分子を含む、項目64に記載の方法またはキット。
(項目66)
前記多量体が6つのMHCクラスI分子を含む、項目65に記載の方法またはキット。
(項目67)
前記多量体が12個のMHCクラスI分子を含む、項目66に記載の方法またはキット。
(項目68)
前記MHC分子がHLA-A * 02:01である、前記項目のいずれか一項に記載の方法またはキット。
(項目69)
前記MHC分子がMHCクラスII分子の単量体である、項目1から62のいずれか一項に記載の方法またはキット。
(項目70)
前記MHC分子がMHCクラスII多量体の成分である、項目1から62のいずれか一項に記載の方法またはキット。
(項目71)
前記多量体が4つのMHCクラスII分子を含む、項目70に記載の方法またはキット。
(項目72)
前記多量体が6つのMHCクラスII分子を含む、項目71に記載の方法またはキット。
(項目73)
前記多量体が12個のMHCクラスII分子を含む、項目72に記載の方法またはキット。
(項目74)
前記MHCクラスII分子がHLA-DR4である、前記項目のいずれか一項に記載の方法またはキット。
(項目75)
前記ペプチド交換因子がペプチド交換因子1である、前記項目のいずれかに記載の方法またはキット。
(項目76)
前記第1のペプチドが、ILKEKK(DNP)VHGV、SIINK(DNP)EKL、MTYK(DNP)FPVT、もしくはYTVK(DNP)FALV、またはILKEKK(DNP)VHGV、SIINK(DNP)EKL、MTYK(DNP)FPVT、もしくはYTVK(DNP)FALVと少なくとも75%同一性を有するその機能的ホモログである、前記項目のいずれかに記載の方法またはキット。
(項目77)
前記第1のペプチドが、ILKEKK(DNP)VHGV、SIINK(DNP)EKL、MTYK(DNP)FPVT、もしくはYTVK(DNP)FALV、またはILKEKK(DNP)VHGV、SIINK(DNP)EKL、MTYK(DNP)FPVT、もしくはYTVK(DNP)FALVと少なくとも80%同一性を有するその機能的ホモログである、前記項目のいずれかに記載の方法またはキット。
(項目78)
前記第1のペプチドが、ILKEKK(DNP)VHGV、SIINK(DNP)EKL、MTYK(DNP)FPVT、もしくはYTVK(DNP)FALV、またはILKEKK(DNP)VHGV、SIINK(DNP)EKL、MTYK(DNP)FPVT、もしくはYTVK(DNP)FALVと少なくとも90%同一性を有するその機能的ホモログである、前記項目のいずれかに記載の方法またはキット。
(項目79)
前記第1のペプチドが、ILKEKK(DNP)VHGV、SIINK(DNP)EKL、MTYK(DNP)FPVT、またはYTVK(DNP)FALVである、前記項目のいずれかに記載の方法またはキット。
(項目80)
前記第2のペプチドが、ILKEKKVHGV、SIINKEKL、MTYKFPVT、YTVKFALV、ELAGIGILTV、ILKEPVHGV、AAGIGILTV、YLLEFTPPV、もしくはKAFSPEVIPMF、またはILKEKKVHGV、SIINKEKL、MTYKFPVT、YTVKFALV、ELAGIGILTV、ILKEPVHGV、AAGIGILTV、YLLEFTPPV、もしくはKAFSPEVIPMFと少なくとも75%同一性を有するその機能的ホモログである、前記項目のいずれかに記載の方法またはキット。
(項目81)
前記第2のペプチドが、ILKEKKVHGV、SIINKEKL、MTYKFPVT、YTVKFALV、ELAGIGILTV、ILKEPVHGV、AAGIGILTV、YLLEFTPPV、もしくはKAFSPEVIPMF、またはILKEKKVHGV、SIINKEKL、MTYKFPVT、YTVKFALV、ELAGIGILTV、ILKEPVHGV、AAGIGILTV、YLLEFTPPV、もしくはKAFSPEVIPMFと少なくとも80%同一性を有するその機能的ホモログである、前記項目のいずれかに記載の方法またはキット。
(項目82)
前記第2のペプチドが、ILKEKKVHGV、SIINKEKL、MTYKFPVT、YTVKFALV、ELAGIGILTV、ILKEPVHGV、AAGIGILTV、YLLEFTPPV、もしくはKAFSPEVIPMF、またはILKEKKVHGV、SIINKEKL、MTYKFPVT、YTVKFALV、ELAGIGILTV、ILKEPVHGV、AAGIGILTV、YLLEFTPPV、もしくはKAFSPEVIPMFと少なくとも90%同一性を有するその機能的ホモログである、前記項目のいずれかに記載の方法またはキット。
(項目83)
前記第2のペプチドが、ILKEKKVHGV、SIINKEKL、MTYKFPVT、YTVKFALV、ELAGIGILTV、ILKEPVHGV、AAGIGILTV、YLLEFTPPV、またはKAFSPEVIPMFである、前記項目のいずれかに記載の方法またはキット。
(項目84)
前記第1のペプチドが、ILKEKK(DNP)VHGV、ILKEK(DNP)VHGV、SIINK(DNP)EKL、MTYK(DNP)FPVT、もしくはYTVK(DNP)FALV、またはILKEKK(DNP)VHGV、SIINK(DNP)EKL、MTYK(DNP)FPVT、もしくはYTVK(DNP)FALVと少なくとも75%同一性を有するその機能的ホモログである、前記項目のいずれかに記載の方法またはキット。
(項目85)
前記第1のペプチドが、ILKEKK(DNP)VHGV、ILKEK(DNP)VHGV、SIINK(DNP)EKL、MTYK(DNP)FPVT、もしくはYTVK(DNP)FALV、またはILKEKK(DNP)VHGV、SIINK(DNP)EKL、MTYK(DNP)FPVT、もしくはYTVK(DNP)FALVと少なくとも80%同一性を有するその機能的ホモログである、前記項目のいずれかに記載の方法またはキット。
(項目86)
前記第1のペプチドが、ILKEKK(DNP)VHGV、ILKEK(DNP)VHGV、SIINK(DNP)EKL、MTYK(DNP)FPVT、もしくはYTVK(DNP)FALV、またはILKEKK(DNP)VHGV、SIINK(DNP)EKL、MTYK(DNP)FPVT、もしくはYTVK(DNP)FALVと少なくとも90%同一性を有するその機能的ホモログである、前記項目のいずれかに記載の方法またはキット。
(項目87)
前記第1のペプチドが、ILKEKK(DNP)VHGV、ILKEK(DNP)VHGV、SIINK(DNP)EKL、MTYK(DNP)FPVT、もしくはYTVK(DNP)FALVである、前記項目のいずれかに記載の方法またはキット。
(項目88)
前記第2のペプチドが、ILKEKKVHGV、ILKEKVHGV、SIINKEKL、MTYKFPVT、YTVKFALV、ELAGIGILTV、ILKEPVHGV、AAGIGILTV、YLLEFTPPV、もしくはKAFSPEVIPMF、またはILKEKKVHGV、SIINKEKL、MTYKFPVT、YTVKFALV、ELAGIGILTV、ILKEPVHGV、AAGIGILTV、YLLEFTPPV、もしくはKAFSPEVIPMFと少なくとも75%同一性を有するその機能的ホモログである、前記項目のいずれかに記載の方法またはキット。
(項目89)
前記第2のペプチドが、ILKEKKVHGV、ILKEKVHGV、SIINKEKL、MTYKFPVT、YTVKFALV、ELAGIGILTV、ILKEPVHGV、AAGIGILTV、YLLEFTPPV、もしくはKAFSPEVIPMF、またはILKEKKVHGV、SIINKEKL、MTYKFPVT、YTVKFALV、ELAGIGILTV、ILKEPVHGV、AAGIGILTV、YLLEFTPPV、もしくはKAFSPEVIPMFと少なくとも80%同一性を有するその機能的ホモログである、前記項目のいずれかに記載の方法またはキット。
(項目90)
前記第2のペプチドが、ILKEKKVHGV、ILKEKVHGV、SIINKEKL、MTYKFPVT、YTVKFALV、ELAGIGILTV、ILKEPVHGV、AAGIGILTV、YLLEFTPPV、もしくはKAFSPEVIPMF、またはILKEKKVHGV、SIINKEKL、MTYKFPVT、YTVKFALV、EL
AGIGILTV、ILKEPVHGV、AAGIGILTV、YLLEFTPPV、もしくはKAFSPEVIPMFと少なくとも90%同一性を有するその機能的ホモログである、前記項目のいずれかに記載の方法またはキット。
(項目91)
前記第2のペプチドが、ILKEKKVHGV、ILKEKVHGV、SIINKEKL、MTYKFPVT、YTVKFALV、ELAGIGILTV、ILKEPVHGV、AAGIGILTV、YLLEFTPPV、またはKAFSPEVIPMFである、前記項目のいずれかに記載の方法またはキット。
一部の態様では、本開示は、MHC分子においてペプチド交換を実施する方法であって、
第1のペプチドに結合しているMHC分子を提供するステップ、および
任意選択により第3の結合パートナーと組み合わせて、任意選択によりペプチド交換因子の存在下で、第1のペプチドに結合しているMHC分子を、第2の結合パートナーと接触させるステップであって、第2の結合パートナーおよび任意選択により第3の結合パートナーに結合しているMHC分子を生成するステップ
を含む、方法を提供する。
第1のペプチドに結合している第1の量のMHC分子を提供するステップ、および
第1のペプチドに結合しているMHC分子に、任意選択によりペプチド交換因子、および任意選択により第3の結合パートナーと組み合わせて、第2の量の第2の結合パートナーを添加するステップであって、それにより生じる、第1のペプチドに結合しているMHC分子または第2の結合パートナーおよび任意選択により第3の結合パートナーに結合しているMHC分子、ならびに未結合の第1のペプチドまたは未結合の第2の結合パートナーおよび任意選択により第3の結合パートナーを含む混合物が形成されるステップを含む。
第1のペプチドに結合しているMHC分子を提供するステップ、および
任意選択によりペプチド交換因子の存在下で、第1のペプチドに結合しているMHC分子を第2のペプチドと接触させるステップであって、第2のペプチドに結合しているMHC分子を生成するステップ
を含む、方法を提供する。
第1のペプチドに結合している第1の量のMHC分子を提供するステップ、および
第1のペプチドに結合しているMHC分子に、任意選択によりペプチド交換因子、および第2の量の第2のペプチドを添加するステップであって、それにより生じる、第1のペプチドに結合しているMHC分子または第2のペプチドに結合しているMHC分子、ならびに未結合の第1のペプチドまたは未結合の第2のペプチドを含む混合物が形成されるステップ
を含む。
第1の(すなわち、脱出)ペプチドに結合しているMHCクラスI分子を提供するステップ、および
任意選択によりペプチド交換因子の存在下で、第1のペプチドに結合しているMHCクラスI分子を第2の(すなわち、侵入)ペプチドと接触させるステップであって、第2のペプチドに結合しているMHCクラスI分子を生成するステップ
を含む、方法を提供する。
第1のペプチドに結合している第1の量のMHCクラスI分子を提供するステップ、および
第1のペプチドに結合しているMHCクラスI分子に、任意選択によりペプチド交換因子、および第2の量の第2のペプチドを添加するステップであって、それにより生じる、第1のペプチドに結合しているMHCクラスI分子または第2のペプチドに結合しているMHCクラスI分子、ならびに未結合の第1のペプチドまたは未結合の第2のペプチドを含む混合物が形成されるステップ
を含む。
第1の(すなわち、脱出)ペプチドに結合しているMHCクラスII分子を提供するステップ、および
任意選択によりペプチド交換因子の存在下で、第1のペプチドに結合しているMHCクラスII分子を第2の(すなわち、侵入)ペプチドと接触させるステップであって、第2のペプチドに結合しているMHCクラスII分子を生成するステップ
を含む、方法を提供する。
第1のペプチドに結合している第1の量のMHCクラスII分子を提供するステップ、および
第1のペプチドに結合しているMHCクラスII分子に、任意選択によりペプチド交換因子および第2の量の第2のペプチドを添加するステップであって、それにより生じる、第1のペプチドに結合しているMHCクラスII分子または第2のペプチドに結合しているMHCクラスII分子、ならびに未結合の第1のペプチドまたは未結合の第2のペプチドを含む混合物が形成されるステップ
を含む。
第1の抗体にコンジュゲートしている支持体、例えばビーズまたはマイクロプレートウェルを提供するステップ;
第1の抗体を、第1のペプチドに結合しているMHC分子および第2の結合パートナー(例えば第2のペプチド)に結合しているMHC分子の両方に結合させるステップ;
第1のペプチドを結合することができる第2の抗体を提供するステップ;
第2の抗体を、第1のペプチドに結合しているMHC分子に結合させ、それにより第2の抗体が支持体、例えばビーズまたはマイクロプレートウェルに結合されるステップ;
支持体、例えばビーズまたはマイクロプレートウェルに結合している第2の抗体の量を決定するステップ
を含む。
本開示の方法で提供および使用されるMHCタンパク質は、当技術分野で公知の任意の好適なMHC分子であってよく、元々MHCタンパク質が含有しているペプチドを別のペプチドと交換することが望ましい。一般に、それらは式(α-β-P)nを有し、nは少なくとも2、例えば2~10の間、例えば4である。αは、クラスIまたはクラスII MHCタンパク質のα鎖である。βはβ鎖であり、本明細書ではクラスII MHCタンパク質のβ鎖またはMHCクラスIタンパク質のβ2ミクログロブリンとして定義される。Pはペプチド抗原である。
本明細書に開示されている方法の一部の実施形態によれば、MHCタンパク質に結合しているままである脱出ペプチドの比率が、例えばサンドイッチイムノアッセイによって定量化され得るように、脱出ペプチド(すなわち交換されるペプチド)は標識される。
任意の好適なペプチド交換因子は、本明細書で提供される方法で使用され得る。例示的なペプチド交換因子は、グリシル-メチオニン、グリシル-シクロヘキシルアラニン、グリシル-ロイシン、グリシル-アルギニン、グリシル-リシン、グリシル-(tert)-ブチルアラニン、グリシル-ホモロイシンを含む。
当業者は、多くの公知のMHC対立遺伝子のいずれか1つに好適な強度で結合するように適応された様々な標識および様々な配列を有する脱出ペプチドを含む、本明細書に記載のものに加えて脱出ペプチドを作製することができる。そのような脱出ペプチドは、特定のペプチドの特定のMHC対立遺伝子への親和性を予測する利用可能な手段によるなど、公知の技術によって設計され得る。それらは、本明細書に開示されているように任意選択により標識され得る。本明細書に開示されている例示的な脱出ペプチドは、ILKEKK(DNP)VHGV、ILKEK(DNP)VHGV、SIINK(DNP)EKL、MTYK(DNP)FPVT、TFQRK(DNP)PAAFまたはYTVK(DNP)FALVを含む。他の例示的な脱出ペプチドは、前述のものと少なくとも75%、80%、85%、90%、または95%の配列同一性を有するものである。
当業者は、使用される脱出ペプチドより大きいまたは使用される脱出ペプチドに相当する結合強度など、多くの公知のMHC対立遺伝子のいずれか1つに好適な強度で結合するように適応される様々な標識および様々な配列を有する侵入ペプチドを含む、本明細書に記載のものに加えて侵入ペプチドを作製することができる。そのような侵入ペプチドは、特定のペプチドの特定のMHC対立遺伝子への親和性を予測する利用可能な手段によるなど、公知の技術によって設計され得る。それらは、本明細書に開示されているように任意選択により標識され得る。本明細書に開示されている例示的な侵入ペプチドは、ILKEKKVHGV、ILKEKVHGV、SIINKEKL、MTYKFPVT、YTVKFALV、ELAGIGILTV、ILKEPVHGV、AAGIGILTV、YLLEFTPPV、KAFSPEVIPMF、AMAPRTLLL、ATDALMTGY、EVDPIGHLY、FLSELTQQL、FMYSDFHFI、GLADQLIHL、GLAVVTHGL、GYSLKLSKL、IMDQVPFSV、IYSTVASSL、LNMADKKET、RAHYNIVTF、RVRAYTYSK、RYMRWTYRF、SLYNTVATL、FLYDDNQRV、GLADQLIHL、AVLDGLLSL、GLAVVTHGL、WMHKVPASL、CINGVCWTV、WMHHNMDLI、SLPPPGTRV、LTLGEFLKL、IMQLMPFGC、IMQIMPYGC、RIKDFLRNL、ALLAVGATK、CSLWNGPHL、EYILSLEEL、ALALEVGEL、SYVPSAEQI、ATVQGQNLKまたはIRLRPGGKKを含む。他の例示的な侵入ペプチドは、前述のものと少なくとも75%、80%、85%、90%、または95%の配列同一性を有するものである。
本明細書に記載の方法は、任意の好適な媒体中で実施され得る。
一部の態様では、本開示はペプチド交換、例えば定量化されたペプチド交換のためのキットを提供する。キットは、MHCモジュール、ペプチド検出モジュール、交換因子モジュール、および/または参照ペプチドモジュールを含み得る、いくつかのモジュールを含み得る。キットの成分は、キットの使用者が本明細書に開示されている方法を行うために必要な成分の残りを調製できるように選択され得る。
冠詞「1つの(a)」および「1つの(an)」は本明細書で使用されて、冠詞の文法的な対象の1つまたは1つより多く(すなわち、少なくとも1つ)を指す。例により、「要素(an element)」は、1つの要素または1つより多くの要素を意味する。
ペプチド置換の測定のための例示的なプロトコール
試薬:以下のストック溶液が調製または提供される:
タンパク質安定化剤および≦0.09%アジ化ナトリウムを添加した緩衝溶液50μg/mL(単量体含量によって測定した)中の脱出ペプチドを含む4量体(例えば、HLA-A*02:01)。
FITCコンジュゲートしたDNP特異的抗体による脱出ペプチドの検出は、ペプチド交換を正確に測定する
HLA-A*02:01 4量体を、様々な比率のペプチドILKEKK(DNP)VHGVおよびILKEPVHGVで構築した。それらを、抗HLA-ABC抗体コンジュゲートしたビーズで捕捉し、FITCコンジュゲートした抗DNPで染色した。FL1の平均蛍光強度をフローサイトメーターで回収し、ILKEKK(DNP)VHGVのパーセンテージに対してプロットした。図4に示すように、結果は、フローサイトメトリーによって測定された抗DNPシグナルと実際の脱出DNPタグ付きペプチドレベルの間に直線的相関があることを示す。
FITCコンジュゲートしたDNP特異的抗体によるDNPの検出は、H-2 Kb 4量体のペプチド交換を正確に測定する
H-2 Kb 4量体を、様々な比率のペプチドSIINFEKLおよびSIINK(DNP)EKLで構築した。それらを、抗H-2 Kb抗体コンジュゲートしたビーズで捕捉し、FITCコンジュゲートした抗DNPで染色した。FL1の平均蛍光強度を回収し、SIINK(DNP)EKLのパーセンテージに対してプロットした。図5に示すように、結果は、フローサイトメトリーによって測定された抗DNPシグナルと捕捉された実際のDNP抗原の間に正確な直線的相関があることを示す。
脱出ペプチド配列の選択
ペプチド交換を、ペプチドMTYK(DNP)FPVTおよびYTVK(DNP)FALVで作製した、2つのH-2 Kb 4量体を280μg/mLで使用して実施した。交換は、10μg/mLの競合ペプチドの存在下で実施した。4量体は、抗H-2 Kb特異的抗体をコンジュゲートしたビーズで捕捉した。検出は、10μg/mLのFITCコンジュゲートした抗DNP抗体で実施した。結果は図6に示し、脱出ペプチドは以下のように標識されている:
脱出ペプチド配列の比較
ペプチド交換を、ペプチドILKEKK(DNP)VHGVおよびILKEK(DNP)VHGVで作製した、2つのHLA-A*02:01 4量体を280μg/mLで使用して実施した。交換は、10mMのGM(グリシン-メチオニン)ならびに10および1μg/mLの高親和性競合ペプチドYLLEFTPPVの存在下で実施した。4量体は、10μg/mLの抗HLA-ABC特異的抗体をコンジュゲートしたビーズで捕捉した。図7に示した結果は、ILKEKK(DNP)VHGVで構築した4量体がペプチド交換をよりよく実施することを示す。
細胞染色のための交換された4量体の使用
図2Aに模式的に図示したように、HLA-A*02:01 4量体を、ペプチドRMFNAPYL(本実施例に示した)ならびにペプチドRMYSYVATLで構築し、ILKEK(DNP)VHGVおよびILKEKK(DNP)VHGVを、競合ペプチドMart-1(ELAGIGILTV)1~100μg/mLと、交換因子グリシン-メチオニン10mMと、4時間インキュベートした。MHCタンパク質は、αサブユニット(1)およびβサブユニット(2)の組合せによって形成する。MHCタンパク質は、ストレプトアビジン(3)への結合によって4量体化する。4量体MHC複合体を標識する(ここではフルオロフォアにより)(4)。複合体中の各MHCタンパク質への結合は、脱出ペプチドである(5)。交換のため、侵入ペプチド(6)およびペプチド交換因子(7)を添加する。脱出ペプチド(5)を置き換える。生じる複合体は、MHCタンパク質に結合している侵入ペプチド(6)を含有する。交換された4量体を、次いで細胞染色のために使用し、Mart-1ペプチドで元々フォールドされた4量体(すなわち、ペプチド交換無し)と比較した。図2Bに示したように、ペプチド交換によって得た4量体は、Mart-1ペプチドで元々調製された4量体と同じように細胞を染色した。
異なるフルオロフォアによる交換率の比較
脱出ペプチドTFQRK(DNP)PAAFを有する50μLのMHC4量体(H-2 Kb PE、H-2 Kb APCまたはH-2 Kb BV421)を、1μLの0.25Mペプチド交換因子(グリシン-メチオニン)および1μLの1mMまたは0.1mM参照侵入ペプチド(SIYRYYGL)と混合した。混合物を、光から保護して、室温で4時間インキュベートした。
HLA-A*02:01ペプチド交換定量化および予測される親和性の比較
予測されるHLA-A*02:01結合親和性の異なるランダムペプチドを、最終濃度20μMで脱出ペプチドILKEKK(DNP)VHGVを有する交換可能なHLA-A*02:01 4量体に添加した。ペプチド交換データは、ペプチド(最終20μM)を4量体と4時間インキュベートし、次いで抗HLA-ABCビーズにより捕捉、および抗DNP FITC抗体により染色した後に得られた。
脱出ペプチドTFQRK(DNP)PAAFとともに作製されたHLA-A*24:02 4量体はペプチド交換に受け入れられる
予測されるHLA-A*02:01結合親和性の異なるランダムペプチドを、最終濃度20μMで脱出ペプチドTFQRK(DNP)PAAFを有する交換可能なHLA-A*24:02 4量体に添加した。ペプチド交換データは、ペプチド(最終20μM)を4量体と4時間インキュベートし、次いで抗HLA-ABCビーズにより捕捉、および抗DNP FITC抗体により染色した後に得られた。
ペプチド交換によって生成されたHLA-A*24:02 4量体は、フォールディングによって生成されたものと同じ細胞反応性を有する。
脱出ペプチドTFQRK(DNP)PAAFを有する50μLのHLA-A*24:02 4量体を、1μLの0.25Mペプチド交換因子(グリシン-メチオニン)および1μLの1mMまたは0.1mM CMVペプチドQYDPVAALFと混合した。混合物を、光から保護し、室温で4時間インキュベートした。複合体HLA-A*24:02/QYDPVAALFのためのT細胞受容体を発現するS2昆虫細胞を、0.2%BSAおよび0.1%NaN3を含有するPBS中に、mL当たり5×106個の細胞で再懸濁した。100μLの細胞を、2.5または5μLの4量体、陰性対照の4量体(PN T01044)、市販のHLA-A*24:02 CMV QYDPVAALF PE 4量体(T01043)またはペプチド交換によって得られたHLA-A*24:02 CMV QYDPVAALF PE 4量体のいずれかと、室温で30分間インキュベートした。0.2%BSAおよび0.1%NaN3を含有するPBSによる洗浄後、細胞を、0.5%ホルムアルデヒドを含有する400μLのPBS中に再懸濁し、次いでFC500フローサイトメーターで分析した。図10に表したデータは、市販のHLA-A*24:02 CMV QYDPVAALF PE 4量体(T01043)がペプチド交換によって得られたHLA-A*24:02 CMV QYDPVAALF PE 4量体と区別できないことを示す。
MHCクラスII 4量体のペプチドの交換
脱出ペプチド配列K(Dnp)LPKPPKPVSKMRMATPLLMQALPMを有するPEコンジュゲートしたMHCクラスII DRB1*04:01 4量体の50μLの試料を、2μLの24.1mM、12.05mM、および6.025mMシスプラチンと、暗中、室温で3時間インキュベートした。シスプラチンで誘発されるペプチド置換の定量化は、フローサイトメトリーサンドイッチイムノアッセイで行った。20μLの抗HLA DRコンジュゲートした磁気捕捉ビーズを、V底の96ウェルプレートの各試験シスプラチン希釈物のウェルと対照試料のウェルに添加した。各試験ウェルに、シスプラチン処理試料から5μL入れた。プレートを、光から保護し、室温、550rpmで45分間振盪した。ビーズをすすいだ後、ウェルに25μLの1×脱出ペプチド抗体を入れた。プレートを、光から保護し、室温、550rpmで45分間振盪した。ビーズをすすぎ、1×アッセイ緩衝液中に再懸濁し、FC500フローサイトメーターを実行した。単一のビーズを、FSC対SSCでゲートをかけ、MFIを試験当たり500回測定した。ペプチド交換率は、対照からのMFI値で生成した検量線を使用して算出した。結果は図11に図示する。
ワクチンの生物活性の決定
本明細書に記載の方法を評価し、それらがワクチンの生物活性を検出できたかどうか決定した。試験したワクチンは、DPX-Survivacであって、それぞれが異なるヒトクラスI対立遺伝子に制限されるいくつかのサバイビンペプチド抗原を含む卵巣がんワクチン候補であった。ワクチン中のペプチドの1つは、SurA2.Mであって、HLA-A2-制限ペプチドであった。本研究に使用したペプチドは、IEDB人工神経ネットワーク法によって算出したHLA-A2に対するそれらの親和性と共に、表4に列挙する。
各それぞれの刊行物または特許が具体的におよび個々に参照により組み込まれることが示されるかのように、本明細書に記載した全ての刊行物および特許は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。矛盾する場合、本明細書の任意の定義を含む本出願が制御する。
1. Altman JD, Davis MM. MHC-peptide tetramers to visualize antigen-specific T cells. Curr Protoc Immunol. 2003;17(17):13
2. Toebes M, et al. (2006) Design and use of conditional MHC class I ligands. Nat Med 12(2):246-251.
3. Rodenko B, Toebes M, Celie PH, Perrakis A, Schumacher TN: Ovaa H: Class I major histocompatibility complexes loaded by a periodate trigger. J Am Chem Soc 2009, 131:12305-12313.
4. Saini SK, Schuster H, Ramnarayan VR, Rammensee HG, Stevanovic S, Springer S. Dipeptides catalyze rapid peptide exchange on MHC class I molecules. Proc Natl Acad Sci U S A. 2015 112(1):202-7.
5. Luft, T. et al. Exogenous peptides presented by transporter associated with antigen processing (TAP)-deficient and TAP-competent cells: intracellular loading and kinetics of presentation. J. Immunol. 167, 2529-2537 (2001).
対象の発明の具体的な実施形態が議論されるが、上記の明細書は例示であり、限定ではない。本発明の多くのバリエーションが、本明細書および以下の特許請求の範囲の検討により当業者には明らかである。本発明の全範囲は、それらの等価物の全範囲およびそのようなバリエーションを伴う明細書と共に、特許請求の範囲を参照することにより決定されるべきである。
Claims (23)
- 第1のペプチドに結合しているMHC分子を含む、定量化されたペプチド交換のためのキットであって、前記第1のペプチドが第1の標識で標識されており、前記定量化されたペプチド交換が、前記第1のペプチドを第2のペプチドで交換することを含み、前記第1のペプチドが、ILKEKKVHGV、ILKEKVHGV、SIINKEKL、MTYKFPVT、またはYTVKFALVである、キット。
- ペプチド交換因子をさらに含む、請求項1に記載のキット。
- 前記第1の標識がビオチン、ハプテン、またはタグである、請求項1または2に記載のキット。
- 前記第1の標識が第1のタグである、請求項1から3のいずれか一項に記載のキット。
- 前記第1のタグがDNPである、請求項4に記載のキット。
- 抗第1のタグ抗体をさらに含む、請求項4または5に記載のキット。
- MHC分子に結合する分子を含む捕捉システムをさらに含む、請求項1から6のいずれか一項に記載のキット。
- 前記MHC分子に結合する分子が抗MHCタンパク質抗体である、請求項7に記載のキット。
- 前記捕捉システムが捕捉ビーズを含む、請求項7または8に記載のキット。
- 前記捕捉システムが磁気捕捉ビーズを含む、請求項9に記載のキット。
- 参照ペプチドをさらに含む、請求項1から10のいずれか一項に記載のキット。
- MHC分子において定量化されたペプチド交換を実施する方法であって、
第1のペプチドに結合している前記MHC分子を提供するステップであって、前記第1のペプチドは、第1の標識で標識されている、ステップ、
前記第1のペプチドに結合している前記MHC分子を第2の結合パートナーと接触させるステップであって、前記第2の結合パートナーに結合しているMHC分子を生成するステップ、
を含み、前記第2の結合パートナーが第2のペプチドであり、前記第1のペプチドが、ILKEKKVHGV、ILKEKVHGV、SIINKEKL、MTYKFPVT、またはYTVKFALVである、方法。 - 前記接触させるステップがペプチド交換因子の存在下または不在下で起こる、請求項12に記載の方法。
- 第1のペプチドに結合している第1の量のMHC分子を提供するステップであって、第1のペプチドが第1の標識で標識されているステップ、
前記第1のペプチドに結合している前記MHC分子に第2の量の第2の結合パートナーを添加するステップであって、それにより前記第1のペプチドに結合しているMHC分子、前記第2の結合パートナーに結合しているMHC分子、未結合の第1のペプチド、および未結合の第2の結合パートナーを含む混合物が形成されるステップ
を含み、前記第2の結合パートナーが第2のペプチドである、請求項12に記載の方法。 - (1)前記第1のペプチドに結合しているMHC分子の量、前記第2のペプチドに結合しているMHC分子の量、未結合の第1のペプチドの量、または未結合の第2のペプチドの量の少なくとも1つを決定するステップ;
(2)前記第1のペプチドに結合している前記MHC分子の量と、前記第2のペプチドに結合している前記MHC分子の量の比を決定するステップ;ならびに/あるいは
(3)未結合の第1のペプチドの量を決定するステップ、および未結合の第1のペプチドの量を前記第1のペプチドに結合しているMHC分子の前記第1の量と比較するステップ
をさらに含む、請求項14に記載の方法。 - 前記決定するステップがサンドイッチイムノアッセイを実施するステップを含むかまたはそれによって達成され、
前記サンドイッチイムノアッセイを実施するステップが、
第1の抗体もしくはMHC分子に結合する分子にコンジュゲートしている支持体を提供すること;
前記第1の抗体もしくはMHC分子に結合する分子を、前記第1のペプチドに結合している前記MHC分子および前記第2のペプチドに結合している前記MHC分子に結合させること;
前記第1のペプチドに結合することができる第2の抗体を提供すること;
前記第2の抗体を、前記第1のペプチドに結合している前記MHC分子に結合させることであって、それにより前記第2の抗体が前記支持体に結合されること;ならびに
前記支持体に結合している前記第2の抗体の量を決定すること
を含む、請求項15に記載の方法。 - 前記MHC分子が(1)MHCクラスI分子の単量体;または(2)MHCクラスI多量体の成分である、請求項1から16のいずれか一項に記載の方法またはキット。
- 前記MHC分子がHLA-A*02:01である、請求項17に記載の方法またはキット。
- 前記MHC分子が(1)MHCクラスII分子の単量体;または(2)MHCクラスII多量体の成分である、請求項1から18のいずれか一項に記載の方法またはキット。
- 前記MHC分子がHLA-DR4である、請求項19に記載の方法またはキット。
- 前記第1のペプチドが、ILKEKK(DNP)VHGV、ILKEK(DNP)VHGV、SIINK(DNP)EKL、MTYK(DNP)FPVT、またはYTVK(DNP)FALVである、請求項1から20のいずれか一項に記載の方法またはキット。
- 前記定量化されたペプチド交換が、前記MHC分子に結合したままの前記標識された第1のペプチドを用いてペプチド交換率を計算することを含む、請求項1~11および17~21のいずれか一項に記載のキット。
- 前記MHC分子に結合したままの前記標識された第1のペプチドを用いてペプチド交換率を計算するステップをさらに含む、請求項12~21のいずれか一項に記載の方法。
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Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2004537047A (ja) | 2001-06-14 | 2004-12-09 | アナディーズ ファーマスーティカルズ,アイエヌシー. | 標的分子のリガンドをスクリーニングする方法 |
JP2007511760A (ja) | 2003-11-03 | 2007-05-10 | ベックマン コールター インコーポレーティッド | Mhc結合ペプチドを検出するための溶液ベースの方法 |
US20080044405A1 (en) | 2006-02-25 | 2008-02-21 | President And Fellows Of Harvard College | Noble metal complex-mediated immunosuppression |
JP2011182702A (ja) | 2010-03-08 | 2011-09-22 | Tokyo Univ Of Agriculture & Technology | 融合mhc分子連結磁気微粒子、抗原ペプチドのスクリーニング方法、組換えベクター、及び磁性細菌の形質転換体 |
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---|---|---|---|---|
WO1992007952A1 (en) * | 1990-10-30 | 1992-05-14 | Immulogic Pharmaceutical Corporation | Peptide binding assays with mhc antigens |
US6696061B1 (en) * | 1992-08-11 | 2004-02-24 | President And Fellows Of Harvard College | Immunomodulatory peptides |
US20050100928A1 (en) * | 1999-09-16 | 2005-05-12 | Zycos Inc., A Delaware Corporation | Nucleic acids encoding polyepitope polypeptides |
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DE10310261A1 (de) * | 2003-03-05 | 2004-09-23 | Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. | Identifizierung von Antigen-Epitopen |
EP1648919B1 (en) * | 2003-07-22 | 2010-11-17 | Beckman Coulter, Inc. | Methods for detecting activation of t-cells by mhc binding peptides |
GB2430256B (en) * | 2005-09-19 | 2008-06-25 | Proimmune Ltd | A method of screening MHC molecules |
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---|---|---|---|---|
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JP2007511760A (ja) | 2003-11-03 | 2007-05-10 | ベックマン コールター インコーポレーティッド | Mhc結合ペプチドを検出するための溶液ベースの方法 |
US20080044405A1 (en) | 2006-02-25 | 2008-02-21 | President And Fellows Of Harvard College | Noble metal complex-mediated immunosuppression |
JP2011182702A (ja) | 2010-03-08 | 2011-09-22 | Tokyo Univ Of Agriculture & Technology | 融合mhc分子連結磁気微粒子、抗原ペプチドのスクリーニング方法、組換えベクター、及び磁性細菌の形質転換体 |
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