JP7245520B2 - 阻害剤およびそれらの使用 - Google Patents
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Description
式中、
R1は、H、-OH、-O-、C1-6アルキル、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C1-6ハロアルキル、ハロゲン、-CN、-OC1-6アルキルであり、
R2は、H、-OH、-O-、C1-6アルキル、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C1-6ハロアルキル、ハロゲン、-CNまたは-OC1-6アルキルであるか、5員または6員のシクロアリール、シクロアルキルまたは複素環――O、SおよびNから選択される1個、2個または3個のヘテロ原子を有する――、例えばベンゼン、モルホリニル、ピペリジン、ピペラジンであり、
R3は、C3-6シクロアルキル、例えばシクロプロピルであり、
または
式中、
R4は、H、-OH、-O-、C1-6アルキル、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C1-6ハロアルキル、ハロゲン、-CN、-OC1-6アルキルであり、
R5は、H;-OH;-O-;C1-6アルキル;C2-6アルケニル;C2-6アルキニル;C1-6ハロアルキル;ハロゲン;-CN;-OC1-6アルキル;C1-6アルキル-N-(X)(Y);5員もしくは6員のシクロアリール、シクロアルキルもしくは複素環――O、SおよびNから選択される1個、2個もしくは3個のヘテロ原子を有する――であって、前記シクロアリール、シクロアルキルもしくは複素環が、C1-3アルキルに任意に置換されている5員もしくは6員のシクロアリール、シクロアルキルもしくは複素環――例えばN-メチルピペラジニル――;または-OC1-6アルキル-N(X)(Y)であり、
式中、Xは、HまたはC1-6アルキルであり、Yは、HまたはC1-6アルキルであり、
式中、アルキル基は1個以上の-OH基に任意に置換され、
R6は、H、-OH、-O-、C1-6アルキル、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C1-6ハロアルキル、ハロゲン、-CN、-OC1-6アルキルである。
R1はHであり、
R2はHであり、
R3はC3-6シクロアルキル、例えばシクロプロピルであり、
または
式中、
R4は、H、-CN、-OC1-6アルキル、C1-6ハロアルキルであり、
R5は、H;C1-6アルキル-N-(X)(Y);5員または6員のシクロアリール、シクロアルキルまたは複素環――O、SおよびNから選択される1個、2個または3個のヘテロ原子を有する――であって、前記シクロアリール、シクロアルキルまたは複素環が、C1-3アルキルに任意に置換されている5員または6員のシクロアリール、シクロアルキルまたは複素環――例えばN-メチルピペラジニル――、-OC1-6アルキル-N(X)(Y)であり、
式中、Xは、HまたはC1-6アルキルであり、Yは、HまたはC1-6アルキルであり、
式中、アルキル基は1個以上の-OH基に任意に置換され、
R6は、Hまたは-OC1-6アルキルである。
R1はHであり、
R2はHであり、
R3はシクロプロピルであり、
または
式中、
R4は、H、-CN、-OCH3、CF3であり、
R5は、H、-CH2N(CH3)2、N-メチルピペラジニル、-OCH2CH(OH)CH2N(CH3)2であり、
R6は、Hまたは-OCH3である。
または
式中、
R4はHであり、R5は-CH2NEt2または-OCH2CH(OH)CH2N(CH3)2であり、R6はHであるか、
R4は-CN、-OCH3であり、R5はHであり、R6はHであるか、
R4は-CF3であり、R5はN-メチルピペラジニルであり、R6はHであるか、
R4は-OCH3であり、R5はHであり、R6は-OCH3である。
・スクリーニングのための分子を提供することと、
・分子がCDK12の活性を阻害するかどうかを検出することとを含み、
CDK12の阻害の検出により、潜在的候補治療剤として分子を選択する方法が提供される。
筋強直性ジストロフィーは、DMPK遺伝子の3’非翻訳領域内のCTG反復伸長によって引き起こされ、独特な核内フォーカスの形成をもたらす。キナーゼの関与は、病状の病態生理に結びつけられているが、今日まで、薬物開発ための決定的なキナーゼ標的は同定されていない。本明細書では、CDK12がDM細胞株およびDM患者筋生検で上昇することが観察されている。反復伸長転写物は核スペックルの周辺に蓄積し、CDK12はこれらの核スペックルと共局在する。CDK12の阻害は、DM関連核内フォーカスの分散および反復伸長転写物の分解をもたらすことが見出されている。
PKISコレクションのスクリーニング
以前に報告されたアッセイを用いて、核内フォーカスを減少させる化合物についてPKISコレクションをスクリーニングし、次いで、該化合物の既知の選択性プロファイルについて化合物を分析して、共通のキナーゼ標的を同定した(Ketley,A.ら(2014)、Hum Mol Genet、23:1551~1562)。2011M~19nMの11点希釈系列を用いて24時間かけてDM1線維芽細胞を化合物で処理した。処理後、核内フォーカスを視覚化するためにcy3標識CAG10プローブを用いて蛍光in situハイブリダイゼーションを行い、カスタマイズされたMetaExpressソフトウェアを用いて、Molecular Devicesプレートリーダーで細胞を分析した(Ketley,Aら(2014)、Hum Mol Genet、23:1551~1562)。DMSO処理細胞と比較して濃度依存的に核内フォーカスを減少させた化合物を同定し、その後の試験のために優先順位をつけた。共通のピラゾロ[1,5b]ピリダジンコアを有する6つの化合物が、DM細胞の24時間処理後に核内フォーカスの数を減少させることが分かった(図1)。
6つの活性化合物の既知の選択性プロファイルを検討して、共通のキナーゼ標的を同定した。フォーカスアッセイから生成されたpIC50値と、224のキナーゼ標的に対する化合物阻害プロファイルとを比較した(Drewry,D.H.ら(2014)、Current topics in medicinal chemistry、14:340~342)。部分最小二乗(PLS)モデルを用いて、共通の標的がCMGC(サイクリン依存性キナーゼ(CDK)、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ(MAPキナーゼ)、グリコーゲンシンターゼキナーゼ(GSK)およびCDK様キナーゼ)ファミリーのメンバーである可能性が高いことを示唆したデータをクラスター化した(図2A)。事実、これらの化合物は当初、CDKファミリーメンバーを標的とするように設計され(Stevens,K.L.ら(2008)、Bioorganic&medicinal chemistry letters、18:5758~5762)、核内フォーカスアッセイで活性な阻害剤はいずれも、CDKファミリーの多くのメンバーにわたって顕著な活性を示した。核内フォーカスアッセイでは、6つのヒット化合物のキナーゼ阻害プロファイルとそれらの活性とを比較し、CDK1、CDK2、CDK3、CDK5およびCDK6がフォーカス形成に関与しない可能性が示唆された(図2B~図2G)。PKISコレクションが対象とする標的のうち、CDK4は何らかの役割を果たしている可能性が高いように思われたが(図2E)、他のCDKファミリーメンバーはPKISアノテーションから漏れているため、考慮する必要があった。
次に、核内フォーカスアッセイでは、十分にアノテーションされた選択性プロファイルを有する追加の小分子CDK阻害剤を試験した(図13)。この阻害剤のサブセットは、核内フォーカスアッセイでは、特異的な活性、およびCDKファミリーメンバーにわたる様々な範囲の効力を示した(図3)。CDKファミリーの関与を確認するために、無差別なキナーゼ阻害剤の組合せを用いて誘導体化したセファロースビーズに基づくキノビーズ法を用いて(Bantscheff,Mら(2007)、Nat Biotechnol、25:1035~1044;Werner,T.ら(2012)、Analytical chemistry、84:7188~7194;およびKruse,Uら(2011)、Leukemia、25:89~100)、核内フォーカスアッセイで一連の活性を表す10種の化合物をプロファイリングした。2μMの濃度でK562赤白血病細胞抽出物に各化合物を添加し、続いて2種類のキノビーズとともにインキュベートし、ビーズ結合タンパク質を定量することによって、標的プロファイルを生成した。第1のタイプのビーズが、真核生物プロテインキナーゼファミリーのチロシンおよびセリン/スレオニンキナーゼのプロファイリングのために開発されたのに対して(Bantscheff,M.ら(2007)、Nat Biotechnol、25:1035~1044)、第2のタイプのビーズは、PI3K/脂質キナーゼファミリーから追加のキナーゼを捕捉する(Bergamini,G.ら(2012)、Nature chemical biology、8:576~582)。プロファイリング結果は、PKISデータと一致して、このサブセット中の最も活性な化合物がCDKファミリーのみにわたって共有活性を示したことを明確に示した(図9A)。
核内フォーカス減少の原因となる特異的なCDKを特定するために、好適な第2級アミンを含む2つの活性化合物、SNS-032およびAT7519の固定化によって、CDKファミリー内の標的範囲を拡大することが求められた(図10)。いずれかの化合物によって誘導体化されたビーズは、市販のキナーゼパネルには存在しないファミリーメンバーを含め、CDKファミリーの良好な範囲を示した。CDKファミリーにわたる阻害剤選択性をプロファイリングする詳細なケモプロテオミクス試験のために、K562細胞またはA204横紋筋肉腫細胞に対する活性化合物全種、および不活性化合物のうち1つ(PD0332991)について、用量応答競合結合プロファイルを作成した。K562、A204およびDM1細胞株が同じキナーゼを発現することを確認するために、全プロテオーム解析を行った。プロファイリングによって同定されたCDK/PCTKタンパク質はいずれも、以下のような表現型フォーカスアッセイに使用された細胞でも同定された:
CDK1:P06493
CDK2:CAA43807.1
CDK4:CAG47043
CDK5:CAG33322
CDK6:Q00534
CDK7:P50613
CDK9:AAF72183
CDK10:AAH25301
CDK12:Q9NYV4.2
CDK13:Q14004.2
PCTK1:Q00536
PCTK2:Q00537.2
これまでのところ、実験は、反復伸長フォーカスとの関連性を有する可能性が最も高いキナーゼとして、CDK12を提示している。DM発症の潜在的関与を検討するために、ウェスタンブロットを使用して、DM1患者4例および健常被験者4例から得られた外側広筋生検サンプルに対して、CDK9に加えてCDK12の内在量を評価した。対照と比較してCDK9タンパク質の量に有意差は検出され得なかった(図5Aおよび図5C)。しかし、健常被験者から得られたものと比較して、DM生検ではCDK12の量が明らかに増加し、DMサンプルでは48%多いCDK12タンパク質が検出された(p=0.0025)(図5Bおよび図5D)。
CDK12と核内フォーカスとの間の関連が確立され、核内フォーカスが反復伸長転写物を含むことから、反復伸長転写物の量に対する阻害剤治療の効果を確立することが求められた。このために、Bpml多型を利用して野生型と変異DMPK転写物とを区別するためにするRT-PCRアッセイを用いた(図6A)(Hamshere,M.G.ら(1997)、Pro Natl Acad Sci USA、94:7394~7399)。ジナシクリブで処理した後、核および細胞質細胞抽出物の分析は、反復伸長転写物が核画分内に依然として保持されていることを示した。しかし、Genescan分析を用いた定量は、核内の野生型転写物と比較して反復伸長転写物の相対的比率が59%減少していることを示した(図6B)。これらのデータは、ジナシクリブへの曝露が転写物を含む反復の優先的消失をもたらすことを示し、ひいては、CDK12を標的とすることが、DM治療開発のための実行可能な選択肢を提供することを示唆している。
細胞培養
ペニシリンおよびストレプトマイシンならびに10%ウシ胎児血清(Sigma)を含むダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)中で線維芽細胞を増殖させた。
細胞を化合物に24時間曝露した後、in situハイブリダイゼーションを行って、Cy3標識(CAG)10プローブを用いてフォーカスを同定した。Molecular Devices Micro High Content Imagingシステムを用いてプレートを分析し、化合物処理1回当たり、ウェル当たり9個の領域を画像化して、ウェル当たり約100個の細胞を得た。Hoechst染色によって核領域を同定し、背景を超えて80グレースケール以上の隣接するピクセルをスコアすることによって、フォーカスの数、大きさおよび輝度を決定した。
K562およびA204細胞をATCCから入手し、10%FCSを含むRPMI培地で培養した。細胞を1,5×106細胞/mlまで増殖させた。15%FCSを含むMcCoy 5A培地でA204細胞を培養した。細胞を100%コンフルエントまで増殖させた。細胞を採取し、氷冷PBSで3回洗浄した。アリコートを液体窒素中で急速冷凍し、-80℃で保存した。記載されているように細胞抽出物を調製した(Bantscheff,M.ら(2011)、Nat Biotechnol、29:255~265)。
以前に記載されたように親和性プロファイリングを行った(Bantscheff,M.ら(2007)、Nat Biotechnol、25:1035~1044およびBantscheff,M.ら(2011)、Nat Biotechnol、29:255~265)。1mMの濃度でSNS-032を用いてセファロースビーズを誘導体化してビーズマトリックスを生成したか、キノビーズTMをプロファイリングのためのマトリックスとして使用した。ビーズ(キノビーズTMの場合には35μlまたはSNS-032の場合には5μl)を洗浄し、化合物または緩衝液で予めインキュベートした1ml(5mg)のK562細胞抽出物を用いて4℃で1時間かけて溶解緩衝液中で平衡化した。ビーズを使い捨てカラム(MoBiTec)に移し、溶解緩衝液で十分に洗浄し、SDSサンプル緩衝液を用いて溶出した。タンパク質をアルキル化し、4~12%NuPAGE(Invitrogen)を用いて分離し、コロイド状クマシーで染色し、アイソバリック質量タギング(isobaric mass tagging)およびLC-MS/MSにより定量した。
TMTアイソバリック質量タグによるサンプル調製および標識は、基本的に記載されているように行った(Bantscheff,M.ら(2011)、Nat Biotechnol、29:255~265)。質量分光分析のために、サンプルを真空中で乾燥させ、0.1%ギ酸水溶液に再懸濁し、質量分析計に連結したナノLCシステムにサンプルのアリコートを注入した:Eksigent 1D+をLTQ-OrbitrapXL質量分析計に連結、Waters nanoAcquityをOrbitrap Elite質量分析計に連結、またはUltimate 3000 RSLC nanoをQ Exactive質量分析計(Thermo Fisher Scientific)に連結。カスタマイズされた50cm×75μM(内径)の逆相カラム(Reprosil)上で40℃でペプチドを分離させた。0.1%ギ酸中の3%アセトニトリル~40%アセトニトリルを用いて120~270分間かけて勾配溶離を行った。LTQ-Orbitrap XLはXcalibur 2.0を用いて操作し、Orbitrap EliteおよびQ Exactiveの機器はXcalibur 2.2ソフトウェアを用いて操作した。LTQ-OrbitrapXL/Orbitrap Eliteでは30.000の分解能(m/z=400で測定)、Q Exactiveでは70.000の分解能(m/z=200)で完全なペプチドを検出した。m/z 445.120025で(Si(CH3)20)6H+からのイオンシグナルを使用して、LTQ-OrbitrapXLによって内部較正を行った。15.000/17.500の分解能で、CID/HCD(LTQ-Orbitrap XL)法の組合せまたはHCDのみ(Orbitrap Elite/Q Exactive)を用いて、10個までのペプチド前駆体(LTQ-OrbitrapXL/Orbitrap Eliteは6個の前駆体、Q Exactiveは10個)について、データ依存性タンデム質量スペクトルを生成した。CIDでは、最大5,000個のイオン(LTQ-Orbitrap XL)がイオントラップ(最大イオン蓄積時間=150msec)に蓄積され、HCDでは、最大50.000個のイオン(LTQ-OrbitrapXL、最大イオン蓄積時間=350msec)、最大30.000個のイオン(Orbitrap Elite、最大イオン蓄積時間=150msec)および1e6イオン(Q Exactive、最大イオン蓄積時間=60msec)がHCDセルに蓄積された。ペプチド前駆体では10p.p.m.の質量許容差(mass tolerance)およびフラグメントイオンでは0.6Da(CID)または20mDa(HCD)の許容差を使用するタンパク質同定に、Mascot 2.3および2.4(Matrix Science)を用いた。システイン残基のカルバミドメチル化およびリジン残基のTMT修飾を固定修飾として設定し、メチオニン酸化と、タンパク質のN末端アセチル化と、ペプチドN末端のTMT修飾とを可変修飾として設定した。検索データベースは、International Protein Indexデータベースのカスタムバージョンに、Matrix Scienceが提供するスクリプトを使用して作成されたこのデータベースのデコイバージョンとを組み合わせて構成した。タンパク質定量の基準:独特なペプチドに一致する最小2つの配列割り当てが必要であった(定量されたタンパク質のためのFDR<<0.1%)。Mascotイオンスコア>10、前駆体イオンのシグナル対バックグラウンド比>4、シグナル対干渉>0.5(Savitski,M.M.ら(2010)、Journal of the American Society for Mass Spectrometry、21:1668~1679)。レポーターイオン強度とイオン蓄積時間とを乗算し、質量分析計に存在するレポーターイオンの数に比例する面積値を得た。ペプチドの折りたたみ変化(fold change)は、記載されるように同位体純度について補正し、シグナル対干渉測定により推定されるように、ほぼアイソバリックピークを共溶出させることによって引き起こされる干渉について調整した(Savitski.M.M.ら(2013)、Journal of proteome research、12:3586~3598)。合計ベースのブートストラップアルゴリズム(Savitski,M.M.(2011)、Analytical chemistry、83:8959~8967)を用いてタンパク質の定量を達成した。
化合物処理細胞および未処理細胞由来の1μgの全RNAを用いて逆転写を行った。プライマーN11、5’-CACTGTCGGACATTCGGGAAGGTGCおよび133、5’GCTTGCACGTGTGGCTCAAGCAGCTGを用いて合成したcDNAの1/20を用いてPCRを行った。Genescan分析では、プライマーN11をFAMで標識した。Tm58℃で増幅を行った。続いてPCR産物を2分間かけて95℃に加熱してから、4℃に冷却した。DMPK PCR産物のBpml制限消化分析のために、37℃で20μlの総反応容量で、制限酵素Bpml(NEB)によって8μlのPCR混合物を一晩消化させた。3%アガロースゲルを用いて90Vで電気泳動により最終産物を分析し、ImageJソフトウェアを用いて、またはAB1377シーケンサーでのフラグメント分析、続いてGenescan定量によって、バンドの密度を定量した。
製造者の指示に従って市販のNuPageシステム(Invitrogen、UK)を使用して、ウェスタンブロットを行った。この試験で使用された一次抗体は、ヒトCDK9(Abcam、1:1000希釈)、ヒトCDK12(Abcam、1:400希釈)、ヒトα-チューブリンおよびヒトラミンB(ともにSanta Cruzから入手し、1:500の希釈で使用)であった。抗マウスIgG-西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)を二次抗体として使用した。ウェスタンブロットでのバンドの定量にImageJソフトウェアを使用した。
カバーガラス上で24時間細胞を増殖させた後、50:50の氷冷したアセトン:メタノールで固定し、透過処理した。5%のヒツジ血清を含む5%BSA中で細胞をブロックした。抗CDK12抗体(Abcam)を1:1000希釈で4℃で一晩使用し、続いてAlexafluor-488抗マウス二次抗体(1:500)で染色した。細胞を4%PFA中で5分間インキュベートし、続いてプレハイブリダイゼーション溶液(40%ホルムアミド、10%20×SSC、50%DEPC水)中で15分間インキュベートし、Cy3標識CAGioプローブとともに37℃で一晩インキュベートした。DAPIを用いたVectorshield Mounting Mediaを用いて、カバーガラスをスライド上に載せた。Zeiss 710共焦点顕微鏡を用いて画像を取得し、LSM画像ブラウザを用いて分析した。
ABI 394 DNA/RNA合成機を用いてsiRNAオリゴヌクレオチドを合成した。カラム(SynBase商標CPG1000Å、RNA:0.2μmol)、標準2’-OTBDMS RNA-ホスホラミダイトおよび合成機用試薬はLink Technologies Ltd.から購入し、MeNH2溶液(エタノール中33重量%)はFlukaから入手し、NEt3・3HF、N-メチルピロリジノン(NMP)はAldrichから購入し、illustra Nap商標-10カラムはGE Healthcare Europe GmbHから入手した。合成機で使用する前に、CaH2からジクロロメタンおよびアセトニトリルを新たに蒸留した。
スクランブル:5’ACGUGACACGUUCGGAGAAUUおよびCDK12:5’CGAAAUAAUGAUGUUGGCACCAGUU siRNA配列。1日目および4日目にAmaxa Nucleofectorシステムを使用して、800nMのスクランブルsiRNAまたはCDK12 siRNAを細胞にエレクトロポレーションした。免疫組織化学的検査、in situハイブリダイゼーションおよびウェスタンブロット分析のために、7日目に細胞を回収した。
96ウェルフォーマットでの感染前日に、40%コンフルエントで細胞を播種した。DMEM培地に希釈した5μg/mlポリブレン中に、10のMOIでレンチウイルス力価(SantaCruz sc-44343-V)を添加した。2500rpmで30分間の遠心分離により細胞をスピン接種(spin inoculated)した。24時間のインキュベーション後、ウイルスを除去し、新鮮なDMEM培地と交換した。4日目に感染を繰り返し、免疫組織化学的検査およびin situハイブリダイゼーション解析のために7日目に細胞を回収した。
なお、本発明に包含され得る諸態様は、以下のように要約される。
[態様1]
反復伸長転写物の生成によって引き起こされる対象の障害の治療または予防に使用するための阻害剤であって、前記阻害剤がCDK12(サイクリン依存性キナーゼ12)の阻害剤である、阻害剤。
[態様2]
前記反復伸長転写物が核内に保持される前記転写物をもたらす、上記態様1に記載の使用のための阻害剤。
[態様3]
前記障害が、筋強直性ジストロフィー1型、筋強直性ジストロフィー2型、脆弱X随伴振戦/失調症候群、筋萎縮性側索硬化症(ALS)および前頭側頭型認知症(C9ORF72)、ハンチントン病類縁疾患2型、ハンチントン病、脊髄小脳失調症1型、2型、3型、6型、7型、8型、10型、31型、17型、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症ならびに球脊髄性筋萎縮症を含む群から選択された任意の障害を含む、上記態様1または2に記載の使用のための阻害剤。
[態様4]
前記反復伸長転写物が、CTG DNA反復、CCTG DNA反復、CGG DNA反復、GGGGCC DNA反復、ATTCT DNA反復、TGGAA DNA反復またはCAG DNA反復由来のRNAを含む、上記態様1~3のいずれか一項に記載の使用のための阻害剤。
[態様5]
前記阻害剤がCDK12に特異的である、上記態様1~4のいずれか一項に記載の使用のための阻害剤。
[態様6]
前記阻害剤がCDK9の活性または利用能の阻害剤ではない、上記態様1~5のいずれか一項に記載の使用のための阻害剤。
[態様7]
前記阻害剤がCDK12発現の阻害剤を含む、上記態様1~4のいずれか一項に記載の使用のための阻害剤。
[態様8]
前記阻害剤が、CDK12発現を阻害することができるオリゴヌクレオチドを含む、上記態様7に記載の使用のための阻害剤。
[態様9]
前記オリゴヌクレオチドがCDK12 mRNA転写物に実質的に相補的な配列を含む、上記態様8に記載の使用のための阻害剤。
[態様10]
前記阻害剤が、CDK12に結合することができ、および/またはその標的分子に対するCDK12の結合を遮断することができる分子を含む、上記態様1~6のいずれか一項に記載の使用のための阻害剤。
[態様11]
前記阻害剤が、サイクリンKに対するCDK12の結合を妨げることができる分子を含む、上記態様1~6または10のいずれか一項に記載の使用のための阻害剤。
[態様12]
前記阻害剤が、CDK12がRNAポリメラーゼIIのc末端ドメイン上でSer2をリン酸化するのを妨げることができる分子を含む、上記態様1~6、10または11のいずれか一項に記載の使用のための阻害剤。
[態様13]
CDK12に対する前記阻害剤の前記結合が、CDK12活性部位が遮断されるように、前記活性部位にあるか、前記CDK12活性部位に隣接している、上記態様10~12のいずれか一項に記載の使用のための阻害剤。
[態様14]
CDK12に対する前記阻害剤の前記結合がアミノ酸位置727~1020にある、上記態様10~13のいずれか一項に記載の使用のための阻害剤。
[態様15]
CDK12に対する前記阻害剤の前記結合がNおよびC末端ローブの周りに伸び、結合したATPと接触するC末端ドメイン伸長部にある、上記態様10~14のいずれか一項に記載の使用のための阻害剤。
[態様16]
CDK12に対する前記阻害剤の前記結合が、Thr737、Lys756、Glu814、Met816およびAsp819から選択されるATP接触残基のうち任意の1つ以上にある、上記態様10~15のいずれか一項に記載の使用のための阻害剤。
[態様17]
前記阻害剤が、CDK12に結合することができる小分子、オリゴヌクレオチド、ペプチドまたはタンパク質を含む、上記態様1~6または10~16のいずれか一項に記載の使用のための阻害剤。
[態様18]
前記阻害剤がピラゾロ[1,5b]ピリダジンコア構造を含み、CDK12活性を阻害することができる、上記態様1~6または10~17のいずれか一項に記載の使用のための阻害剤。
[態様19]
前記阻害剤が式(I)の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を含み、
[化1]
式中、
R 1 は、H、-OH、-O-、C 1-6 アルキル、C 2-6 アルケニル、C 2-6 アルキニル、C 1-6 ハロアルキル、ハロゲン、-CN、-OC 1-6 アルキルであり、
R 2 は、H、-OH、-O-、C 1-6 アルキル、C 2-6 アルケニル、C 2-6 アルキニル、C 1-6 ハロアルキル、ハロゲン、-CNまたは-OC 1-6 アルキルであるか、O、SおよびNから選択される1個、2個または3個のヘテロ原子を有する5員または6員のシクロアリール、シクロアルキルまたは複素環、例えばベンゼン、モルホリニル、ピペリジン、ピペラジンであり、
R 3 は、C 3-6 シクロアルキル、例えばシクロプロピルであり、
[化2]
または
[化3]
式中、
R 4 は、H、-OH、-O-、C 1-6 アルキル、C 2-6 アルケニル、C 2-6 アルキニル、C 1-6 ハロアルキル、ハロゲン、-CN、-OC 1-6 アルキルであり、
R 5 は、H;-OH;-O-;C 1-6 アルキル;C 2-6 アルケニル;C 2-6 アルキニル;C 1-6 ハロアルキル;ハロゲン;-CN;-OC 1-6 アルキル;C 1-6 アルキル-N-(X)(Y);O、SおよびNから選択される1個、2個または3個のヘテロ原子を有する5員もしくは6員のシクロアリール、シクロアルキルもしくは複素環であって、前記シクロアリール、シクロアルキルもしくは複素環が、C 1-3 アルキル、例えばN-メチルピペラジニルに任意に置換されている5員もしくは6員のシクロアリール、シクロアルキルもしくは複素環;または-OC 1-6 アルキル-N(X)(Y)であり、
式中、Xは、HまたはC 1-6 アルキルであり、Yは、HまたはC 1-6 アルキルであり、
式中、アルキル基は1個以上の-OH基に任意に置換され、
R 6 は、H、-OH、-O-、C 1-6 アルキル、C 2-6 アルケニル、C 2-6 アルキニル、C 1-6 ハロアルキル、ハロゲン、-CN、-OC 1-6 アルキルである、上記態様1~6または10~18のいずれか一項に記載の使用のための阻害剤。
[態様20]
上記態様19に記載の使用のための阻害剤であって、
R 1 はHであり、
R 2 はHであり、
R 3 はC 3-6 シクロアルキル、例えばシクロプロピルであり、
[化4]
または
[化5]
式中、
R 4 は、H、-CN、-OC 1-6 アルキル、C 1-6 ハロアルキルであり、
R 5 は、H;C 1-6 アルキル-N-(X)(Y);O、SおよびNから選択される1個、2個または3個のヘテロ原子を有する5員または6員のシクロアリール、シクロアルキルまたは複素環であって、前記シクロアリール、シクロアルキルまたは複素環が、C 1-3 アルキル、例えばN-メチルピペラジニルに任意に置換されている5員または6員のシクロアリール、シクロアルキルまたは複素環、-OC 1-6 アルキル-N(X)(Y)であり、
式中、Xは、HまたはC 1-6 アルキルであり、Yは、HまたはC 1-6 アルキルであり、
式中、アルキル基は1個以上の-OH基に任意に置換され、
R 6 は、Hまたは-OC 1-6 アルキルである、阻害剤。
[態様21]
上記態様19に記載の使用のための阻害剤であって、
R 1 はHであり、
R 2 はHであり、
R 3 はシクロプロピルであり、
[化6]
または
[化7]
式中、
R 4 は、H、-CN、-OCH 3 、CF 3 であり、
R 5 は、H、-CH 2 N(CH 3 ) 2 、N-メチルピペラジニル、-OCH 2 CH(OH)CH 2 N(CH 3 ) 2 であり、
R 6 は、Hまたは-OCH 3 である、阻害剤。
[態様22]
上記態様19に記載の使用のための阻害剤であって、
R 1 はHであり、
R 2 はHであり、
R 3 はシクロプロピルであり、
[化8]
または
[化9]
式中、
R4はHであり、R5は-CH 2 NEt 2 または-OCH 2 CH(OH)CH 2 N(CH 3 ) 2 であり、R6はHであるか、
R4は-CN、-OCH 3 であり、R5はHであり、R6はHであるか、
R4は-CF 3 であり、R5はN-メチルピペラジニルであり、R6はHであるか、
R4は-OCH 3 であり、R5はHであり、R6は-OCH 3 である、阻害剤。
[態様23]
式(I)の前記阻害剤が以下の式を備えている、上記態様19に記載の使用のための阻害剤。
[化10]
または
[化11]
または
[化12]
または
[化13]
または
[化14]
または
[化15]
または
[化16]
または
[化17]
[態様24]
前記阻害剤が式(X)の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を含む、上記態様1~6または10~16に記載の使用のための阻害剤。
[化18]
[態様25]
前記阻害剤が式(XI)の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を含む、上記態様1~6または10~16に記載の使用のための阻害剤。
[化19]
[態様26]
前記阻害剤が式(XII)の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を含む、上記態様1~6または10~16に記載の使用のための阻害剤。
[化20]
[態様27]
前記阻害剤が式(XIII)の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を含む、上記態様1~6または10~16に記載の使用のための阻害剤。
[化21]
[態様28]
前記阻害剤が式(XIV)の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を含む、上記態様1~6または10~16に記載の使用のための阻害剤。
[化22]
[態様29]
前記阻害剤が少なくとも1つの他の治療剤と組み合わせて投与されるか、投与されるように構成される、上記態様1~28のいずれか一項に記載の使用のための阻害剤。
[態様30]
前記1つの他の治療剤が、オリゴヌクレオチド、例えば、siRNAもしくはmiRNAまたはその等価物を含むか、
前記少なくとも1つの他の治療剤が、小分子、薬物、プロドラッグ、ペプチド、タンパク質、抗体、ヌクレオチドまたはワクチンを含んでもよい、上記態様29に記載の使用のための阻害剤。
[態様31]
前記少なくとも1つの他の治療剤が、ナトリウムチャネル遮断薬、CNS刺激薬、デヒドロエピアンドロステロン(DHEA)、クレアチン補充、メカセルミンリンファベート(IPLEX、組換えインスリン様成長因子1およびその結合タンパク質、BP-3の組合せ)、ペンタミジン、ビスアミジニウム阻害剤、ロモフンギンもしくはジロモフンギンまたはそれらの組合せを含む、上記態様29に記載の使用のための阻害剤。
[態様32]
前記使用が、前記DMPK遺伝子を標的とするオリゴヌクレオチドと組み合わされたものである、上記態様1~31のいずれか一項に記載の使用のための阻害剤。
[態様33]
前記阻害剤が断続的に投与されるか、投与されるように構成される、上記態様1~32のいずれか一項に記載の使用のための阻害剤。
[態様34]
対象の反復伸長転写物の生成によって引き起こされる障害の治療または予防のための医薬品の調製でのCDK12阻害剤の使用。
[態様35]
対象の反復伸長転写物の生成によって引き起こされる障害を治療または予防する方法であって、CDK12の阻害剤を対象に投与することを含む方法。
[態様36]
前記方法が少なくとも1つの他の治療剤のその後の投与をさらに含む、上記態様35に記載の方法。
[態様37]
反復伸長転写物の生成によって引き起こされる障害のための治療剤のスクリーニング方法であって、
・スクリーニングのための分子を提供することと、
・前記分子がCDK12の活性を阻害するかどうかを検出することとを含み、
CDK12の阻害の検出により、潜在的候補治療剤として分子を選択する方法。
[態様38]
CDK12阻害剤および薬学的に許容される担体を含む組成物。
[態様39]
少なくとも1つの他の治療剤をさらに含む、上記態様38に記載の組成物。
[態様40]
場合により添付の図面を参照して、本明細書に実質的に記載された阻害剤、方法、使用または組成物。
10 20 30 40 50
MPNSERHGGK KDGSGGASGT LQPSSGGGSS NSRERHRLVS KHKRHKSKHS
60 70 80 90 100
KDMGLVTPEA ASLGTVIKPL VEYDDISSDS DTFSDDMAFK LDRRENDERR
110 120 130 140 150
GSDRSDRLHK HRHHQHRRSR DLLKAKQTEK EKSQEVSSKS GSMKDRISGS
160 170 180 190 200
SKRSNEETDD YGKAQVAKSS SKESRSSKLH KEKTRKEREL KSGHKDRSKS
210 220 230 240 250
HRKRETPKSY KTVDSPKRRS RSPHRKWSDS SKQDDSPSGA SYGQDYDLSP
260 270 280 290 300
SRSHTSSNYD SYKKSPGSTS RRQSVSPPYK EPSAYQSSTR SPSPYSRRQR
310 320 330 340 350
SVSPYSRRRS SSYERSGSYS GRSPSPYGRR RSSSPFLSKR SLSRSPLPSR
360 370 380 390 400
KSMKSRSRSP AYSRHSSSHS KKKRSSSRSR HSSISPVRLP LNSSLGAELS
410 420 430 440 450
RKKKERAAAA AAAKMDGKES KGSPVFLPRK ENSSVEAKDS GLESKKLPRS
460 470 480 490 500
VKLEKSAPDT ELVNVTHLNT EVKNSSDTGK VKLDENSEKH LVKDLKAQGT
510 520 530 540 550
RDSKPIALKE EIVTPKETET SEKETPPPLP TIASPPPPLP TTTPPPQTPP
560 570 580 590 600
LPPLPPIPAL PQQPPLPPSQ PAFSQVPASS TSTLPPSTHS KTSAVSSQAN
610 620 630 640 650
SQPPVQVSVK TQVSVTAAIP HLKTSTLPPL PLPPLLPGDD DMDSPKETLP
660 670 680 690 700
SKPVKKEKEQ RTRHLLTDLP LPPELPGGDL SPPDSPEPKA ITPPQQPYKK
710 720 730 740 750
RPKICCPRYG ERRQTESDWG KRCVDKFDII GIIGEGTYGQ VYKAKDKDTG
760 770 780 790 800
ELVALKKVRL DNEKEGFPIT AIREIKILRQ LIHRSVVNMK EIVTDKQDAL
810 820 830 840 850
DFKKDKGAFY LVFEYMDHDL MGLLESGLVH FSEDHIKSFM KQLMEGLEYC
860 870 880 890 900
HKKNFLHRDI KCSNILLNNS GQIKLADFGL ARLYNSEESR PYTNKVITLW
910 920 930 940 950
YRPPELLLGE ERYTPAIDVW SCGCILGELF TKKPIFQANL ELAQLELISR
960 970 980 990 1000
LCGSPCPAVW PDVIKLPYFN TMKPKKQYRR RLREEFSFIP SAALDLLDHM
1010 1020 1030 1040 1050
LTLDPSKRCT AEQTLQSDFL KDVELSKMAP PDLPHWQDCH ELWSKKRRRQ
1060 1070 1080 1090 1100
RQSGVVVEEP PPSKTSRKET TSGTSTEPVK NSSPAPPQPA PGKVESGAGD
1110 1120 1130 1140 1150
AIGLADITQQ LNQSELAVLL NLLQSQTDLS IPQMAQLLNI HSNPEMQQQL
1160 1170 1180 1190 1200
EALNQSISAL TEATSQQQDS ETMAPEESLK EAPSAPVILP SAEQTTLEAS
1210 1220 1230 1240 1250
STPADMQNIL AVLLSQLMKT QEPAGSLEEN NSDKNSGPQG PRRTPTMPQE
1260 1270 1280 1290 1300
EAAACPPHIL PPEKRPPEPP GPPPPPPPPP LVEGDLSSAP QELNPAVTAA
1310 1320 1330 1340 1350
LLQLLSQPEA EPPGHLPHEH QALRPMEYST RPRPNRTYGN TDGPETGFSA
1360 1370 1380 1390 1400
IDTDERNSGP ALTESLVQTL VKNRTFSGSL SHLGESSSYQ GTGSVQFPGD
1410 1420 1430 1440 1450
QDLRFARVPL ALHPVVGQPF LKAEGSSNSV VHAETKLQNY GELGPGTTGA
1460 1470 1480 1490
SSSGAGLHWG GPTQSSAYGK LYRGPTRVPP RGGRGRGVPY
1 gtgtgactgg gtctgtgtga gggagagagt gtgtgtggtg tggaggtgaa acggaggcaa
61 gaaagggggc tacctcagga gcgagggaca aagggggcgt gaggcaccta ggccgcggca
121 ccccggcgac aggaagccgt cctgaaccgg gctaccgggt aggggaaggg cccgcgtagt
181 cctcgcaggg ccccagagct ggagtcggct ccacagcccc gggccgtcgg cttctcactt
241 cctggacctc cccggcgccc gggcctgagg actggctcgg cggagggaga agaggaaaca
301 gacttgagca gctccccgtt gtctcgcaac tccactgccg aggaactctc atttcttccc
361 tcgctccttc accccccacc tcatgtagaa gggtgctgag gcgtcgggag ggaggaggag
421 cctgggctac cgtccctgcc ctccccaccc ccttcccggg gcgctttggt gggcgtggag
481 ttggggttgg gggggtgggt gggggttgct ttttggagtg ctggggaact tttttccctt
541 cttcaggtca ggggaaaggg aatgcccaat tcagagagac atgggggcaa gaaggacggg
601 agtggaggag cttctggaac tttgcagccg tcatcgggag gcggcagctc taacagcaga
661 gagcgtcacc gcttggtatc gaagcacaag cggcataagt ccaaacactc caaagacatg
721 gggttggtga cccccgaagc agcatccctg ggcacagtta tcaaaccttt ggtggagtat
781 gatgatatca gctctgattc cgacaccttc tccgatgaca tggccttcaa actagaccga
841 agggagaacg acgaacgtcg tggatcagat cggagcgacc gcctgcacaa acatcgtcac
901 caccagcaca ggcgttcccg ggacttacta aaagctaaac agaccgaaaa agaaaaaagc
961 caagaagtct ccagcaagtc gggatcgatg aaggaccgga tatcgggaag ttcaaagcgt
1021 tcgaatgagg agactgatga ctatgggaag gcgcaggtag ccaaaagcag cagcaaggaa
1081 tccaggtcat ccaagctcca caaggagaag accaggaaag aacgggagct gaagtctggg
1141 cacaaagacc ggagtaaaag tcatcgaaaa agggaaacac ccaaaagtta caaaacagtg
1201 gacagcccaa aacggagatc caggagcccc cacaggaagt ggtctgacag ctccaaacaa
1261 gatgatagcc cctcgggagc ttcttatggc caagattatg accttagtcc ctcacgatct
1321 catacctcga gcaattatga ctcctacaag aaaagtcctg gaagtacctc gagaaggcag
1381 tcggtcagtc ccccttacaa ggagccttcg gcctaccagt ccagcacccg gtcaccgagc
1441 ccctacagta ggcgacagag atctgtcagt ccctatagca ggagacggtc gtccagctac
1501 gaaagaagtg gctcttacag cgggcgatcg cccagtccct atggtcgaag gcggtccagc
1561 agccctttcc tgagcaagcg gtctctgagt cggagtccac tccccagtag gaaatccatg
1621 aagtccagaa gtagaagtcc tgcatattca agacattcat cttctcatag taaaaagaag
1681 agatccagtt cacgcagtcg tcattccagt atctcacctg tcaggcttcc acttaattcc
1741 agtctgggag ctgaactcag taggaaaaag aaggaaagag cagctgctgc tgctgcagca
1801 aagatggatg gaaaggagtc caagggttca cctgtatttt tgcctagaaa agagaacagt
1861 tcagtagagg ctaaggattc aggtttggag tctaaaaagt tacccagaag tgtaaaattg
1921 gaaaaatctg ccccagatac tgaactggtg aatgtaacac atctaaacac agaggtaaaa
1981 aattcttcag atacagggaa agtaaagttg gatgagaact ccgagaagca tcttgttaaa
2041 gatttgaaag cacagggaac aagagactct aaacccatag cactgaaaga ggagattgtt
2101 actccaaagg agacagaaac atcagaaaag gagacccctc cacctcttcc cacaattgct
2161 tctcccccac cccctctacc aactactacc cctccacctc agacaccccc tttgccacct
2221 ttgcctccaa taccagctct tccacagcaa ccacctctgc ctccttctca gccagcattt
2281 agtcaggttc ctgcttccag tacttcaact ttgccccctt ctactcactc aaagacatct
2341 gctgtgtcct ctcaggcaaa ttctcagccc cctgtacagg tttctgtgaa gactcaagta
2401 tctgtaacag ctgctattcc acacctgaaa acttcaacgt tgcctccttt gcccctccca
2461 cccttattac ctggagatga tgacatggat agtccaaaag aaactcttcc ttcaaaacct
2521 gtgaagaaag agaaggaaca gaggacacgt cacttactca cagaccttcc tctccctcca
2581 gagctccctg gtggagatct gtctccccca gactctccag aaccaaaggc aatcacacca
2641 cctcagcaac catataaaaa gagaccaaaa atttgttgtc ctcgttatgg agaaagaaga
2701 caaacagaaa gcgactgggg gaaacgctgt gtggacaagt ttgacattat tgggattatt
2761 ggagaaggaa cctatggcca agtatataaa gccaaggaca aagacacagg agaactagtg
2821 gctctgaaga aggtgagact agacaatgag aaagagggct tcccaatcac agccattcgt
2881 gaaatcaaaa tccttcgtca gttaatccac cgaagtgttg ttaacatgaa ggaaattgtc
2941 acagataaac aagatgcact ggatttcaag aaggacaaag gtgcctttta ccttgtattt
3001 gagtatatgg accatgactt aatgggactg ctagaatctg gtttggtgca cttttctgag
3061 gaccatatca agtcgttcat gaaacagcta atggaaggat tggaatactg tcacaaaaag
3121 aatttcctgc atcgggatat taagtgttct aacattttgc tgaataacag tgggcaaatc
3181 aaactagcag attttggact tgctcggctc tataactctg aagagagtcg cccttacaca
3241 aacaaagtca ttactttgtg gtaccgacct ccagaactac tgctaggaga ggaacgttac
3301 acaccagcca tagatgtttg gagctgtgga tgtattcttg gggaactatt cacaaagaag
3361 cctatttttc aagccaatct ggaactggct cagctagaac tgatcagccg actttgtggt
3421 agcccttgtc cagctgtgtg gcctgatgtt atcaaactgc cctacttcaa caccatgaaa
3481 ccgaagaagc aatatcgaag gcgtctacga gaagaattct ctttcattcc ttctgcagca
3541 cttgatttat tggaccacat gctgacacta gatcctagta agcggtgcac agctgaacag
3601 accctacaga gcgacttcct taaagatgtc gaactcagca aaatggctcc tccagacctc
3661 ccccactggc aggattgcca tgagttgtgg agtaagaaac ggcgacgtca gcgacaaagt
3721 ggtgttgtag tcgaagagcc acctccatcc aaaacttctc gaaaagaaac tacctcaggg
3781 acaagtactg agcctgtgaa gaacagcagc ccagcaccac ctcagcctgc tcctggcaag
3841 gtggagtctg gggctgggga tgcaataggc cttgctgaca tcacacaaca gctgaatcaa
3901 agtgaattgg cagtgttatt aaacctgctg cagagccaaa ccgacctgag catccctcaa
3961 atggcacagc tgcttaacat ccactccaac ccagagatgc agcagcagct ggaagccctg
4021 aaccaatcca tcagtgccct gacggaagct acttcccagc agcaggactc agagaccatg
4081 gccccagagg agtctttgaa ggaagcaccc tctgccccag tgatcctgcc ttcagcagaa
4141 cagacgaccc ttgaagcttc aagcacacca gctgacatgc agaatatatt ggcagttctc
4201 ttgagtcagc tgatgaaaac ccaagagcca gcaggcagtc tggaggaaaa caacagtgac
4261 aagaacagtg ggccacaggg gccccgaaga actcccacaa tgccacagga ggaggcagca
4321 gcatgtcctc ctcacattct tccaccagag aagaggcccc ctgagccccc cggacctcca
4381 ccgccgccac ctccaccccc tctggttgaa ggcgatcttt ccagcgcccc ccaggagttg
4441 aacccagccg tgacagccgc cttgctgcaa cttttatccc agcctgaagc agagcctcct
4501 ggccacctgc cacatgagca ccaggccttg agaccaatgg agtactccac ccgaccccgt
4561 ccaaacagga cttatggaaa cactgatggg cctgaaacag ggttcagtgc cattgacact
4621 gatgaacgaa actctggtcc agccttgaca gaatccttgg tccagaccct ggtgaagaac
4681 aggaccttct caggctctct gagccacctt ggggagtcca gcagttacca gggcacaggg
4741 tcagtgcagt ttccagggga ccaggacctc cgttttgcca gggtcccctt agcgttacac
4801 ccggtggtcg ggcaaccatt cctgaaggct gagggaagca gcaattctgt ggtacatgca
4861 gagaccaaat tgcaaaacta tggggagctg gggccaggaa ccactggggc cagcagctca
4921 ggagcaggcc ttcactgggg gggcccaact cagtcttctg cttatggaaa actctatcgg
4981 gggcctacaa gagtcccacc aagaggggga agagggagag gagttcctta ctaacccaga
5041 gacttcagtg tcctgaaaga ttcctttcct atccatcctt ccatccagtt ctctgaatct
5101 ttaatgaaat catttgccag agcgaggtaa tcatctgcat ttggctactg caaagctgtc
5161 cgttgtattc cttgctcact tgctactagc aggcgactta cgaaataatg atgttggcac
5221 cagttccccc tggatgggct atagccagaa catttacttc aactctacct tagtagatac
5281 aagtagagaa tatggagagg atcattacat tgaaaagtaa atgttttatt agttcattgc
5341 ctgcacttac tgatcggaag agagaaagaa cagtttcagt attgagatgg ctcaggagag
5401 gctctttgat ttttaaagtt ttggggtggg ggattgtgtg tggtttcttt cttttgaatt
5461 ttaatttagg tgttttgggt ttttttcctt taaagagaat agtgttcaca aaatttgagc
5521 tgctctttgg cttttgctat aagggaaaca gagtggcctg gctgatttga ataaatgttt
5581 ctttcctctc caccatctca cattttgctt ttaagtgaac actttttccc cattgagcat
5641 cttgaacata ctttttttcc aaataaatta ctcatcctta aagtttactc cactttgaca
5701 aaagatacgc ccttctccct gcacataaag caggttgtag aacgtggcat tcttgggcaa
5761 gtaggtagac tttacccagt ctctttcctt ttttgctgat gtgtgctctc tctctctctt
5821 tctctctctc tctctctctc tctctctctc tctctctctc tgtctcgctt gctcgctctc
5881 gctgtttctc tctctttgag gcatttgttt ggaaaaaatc gttgagatgc ccaagaacct
5941 gggataattc tttacttttt ttgaaataaa ggaaaggaaa ttcagactct tacattgttc
6001 tctgtaactc ttcaattcta aaatgttttg ttttttaaac catgttctga tggggaagtt
6061 gatttgtaag tgtggacagc ttggacattg ctgctgagct gtggttagag atgatgcctc
6121 cattcctaga gggctaataa cagcatttag catattgttt acacatatat ttttatgtca
6181 aaaaaaaaac aaaaaccttt caaacagagc attgtgatat tgtcaaagag aaaaacaaat
6241 cctgaagata catggaaatg taacctagtt tagggtgggt atttttctga agatacatca
6301 atacctgacc ttttttaaaa aaataatttt aaaacagcat actgtgagga agaacagtat
6361 tgacataccc acatcccagc atgtgtaccc tgccagttct tttagggatt tttcctccaa
6421 agagatttgg atttggtttt ggtaaaaggg gttaaattgt gcttccaggc aagaactttg
6481 ccttatcata aacaggaaat gaaaaaggga agggctgtca ggatgggata atttgggagg
6541 cttctcattc tggcttctat ttctatgtga gtaccagcat atagagtgtt ttaaaaacag
6601 atacatgtca tataatttat ctgcacagac ttagaccttc aggaaacata ggttaagccc
6661 ccttttacaa agaaaaagta aacatacttc agcatcttgg agggtagttt tcaaaactca
6721 agtttcatgt ttcaatgcca agttcttatt ttaaaaaata aaatctactt ataagagaaa
6781 ggtgcattac ttaaaaaaaa aaaactttaa agaaatgaaa gaagaaccct cttcagatac
6841 ttacttgaag actgttttcc cctgttaatg agatatagct agatatcggt gtgtgtattt
6901 ctttattatt ctctggtttt tgatctggcc ttgcctccag ggccaaacac tgatttagaa
6961 agagagcctt ctagctattt tggcattgat ggctttttat accagtgtgt ccagttagat
7021 ttactaggct tactgacatg ctattggtaa atcgcattaa agttcatctg aaccttctgt
7081 ctgttgactt cttagtcctc agacatgggc ctttgtgttt tagaatattt gaatttgagt
7141 tattgggccc cactccctgt tttttattaa agaacgtgag cctgggatac tttcagaagt
7201 atctgttcaa tgaaaaaaag ttggtttccc atcaaatatg aataaaattc tctatatatt
7261 tcattgtatt ttggttatca gcagtcatca ataatgtttt tccctcccct ctcccacctc
7321 ttatttttaa ttatgccaaa tatcctaaat aatatactta agcctccatt ccctcatccc
7381 tactagggaa gggggtgagt gtatgtgtga gtgtatgtgt atgtatgatc ccatctcacc
7441 cccaccccca ttttgggagt cttttaaaat gaaaacaaag tttggtagtt ttgactattt
7501 ctaaaagcag aggagaaaaa aaaacttatt taaatatcct ggaatctgta tggaggaaga
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7621 gcagaatttc accttgacta tttgaaaatt acagacccaa ttaattccat tcaaaagtgg
7681 ttttcgtttt gttttaatta ttgtacaatg agagatattg tctattaaat acattatttt
7741 gaacagatga gaaatctgat tctgttcatg agtgggaggc aaaactggtt tgaccgtgat
7801 catttttgtg gttttgaaaa caaatatact tgacccagtt tccttagttt tttcttcaac
7861 tgtccatagg aacgataagt atttgaaagc aacatcaaat ctatacgttt aaagcagggc
7921 agttagcaca aatttgcaag tagaacttct attagcttat gccatagaca tcacccaacc
7981 acttgtatgt gtgtgtgtat atataatatg catatatagt taccgtgcta aaatggttac
8041 cagcaggttt tgagagagaa tgctgcatca gaaaagtgtc agttgccacc tcattctccc
8101 tgatttaggt tcctgacact gattcctttc tctctcgttt ttgaccccca ttgggtgtat
8161 cttgtctatg tacagatatt ttgtaatata ttaaattttt ttctttcagt ttataaaaat
8221 ggaaagtgga gattggaaaa ttaaatattt cctgttacta taccactttt gctccattgc
8281 att
Claims (24)
- 筋強直性ジストロフィー1型、筋強直性ジストロフィー2型、または前頭側頭型認知症(C9ORF72)の治療または予防に使用するための阻害剤であって、
前記阻害剤がCDK12(サイクリン依存性キナーゼ12)の阻害剤であり、
前記阻害剤が、
(a)式(I)の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物:
式中、
R1は、H、-OH、C1-6アルキル、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C1-6ハロアルキル、ハロゲン、-CN、-OC1-6アルキルであり、
R2は、H、-OH、C1-6アルキル、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C1-6ハロアルキル、ハロゲン、-CNまたは-OC1-6アルキルであるか、5員または6員のシクロアリール、シクロアルキルまたは複素環――O、SおよびNから選択される1個、2個または3個のヘテロ原子を有する――であり、
R3は、C3-6シクロアルキルであり、
または
式中、
R4は、H、-OH、C1-6アルキル、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C1-6ハロアルキル、ハロゲン、-CN、-OC1-6アルキルであり、
R5は、H;-OH;C1-6アルキル;C2-6アルケニル;C2-6アルキニル;C1-6ハロアルキル;ハロゲン;-CN;-OC1-6アルキル;C1-6アルキル-N-(X)(Y);5員もしくは6員のシクロアリール、シクロアルキルもしくは複素環――O、SおよびNから選択される1個、2個または3個のヘテロ原子を有する――であって、前記シクロアリール、シクロアルキルもしくは複素環が、C1-3アルキルに任意に置換されている5員もしくは6員のシクロアリール、シクロアルキルもしくは複素環;または-OC1-6アルキル-N(X)(Y)であり、
式中、Xは、HまたはC1-6アルキルであり、Yは、HまたはC1-6アルキルであり、
式中、アルキル基は1個以上の-OH基に任意に置換され、
R6は、H、-OH、C1-6アルキル、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C1-6ハロアルキル、ハロゲン、-CN、-OC1-6アルキルである;
(b)式(X)の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物:
(c)式(XI)の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物:
(d)式(XII)の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物:
(e)式(XIII)の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物:
(f)式(XIV)の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物:
を含む、阻害剤。 - R2が、ベンゼン、モルホリニル、ピペリジン、又はピペラジンである、請求項1に記載の使用のための阻害剤。
- 請求項1に記載の使用のための阻害剤であって、
前記阻害剤が、前記(a)式(I)の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を含み、
R1はHであり、
R2はHであり、
R3はC3-6シクロアルキルであり、
または
式中、
R4は、H、-CN、-OC1-6アルキル、C1-6ハロアルキルであり、
R5は、H;C1-6アルキル-N-(X)(Y);5員または6員のシクロアリール、シクロアルキルまたは複素環――O、SおよびNから選択される1個、2個または3個のヘテロ原子を有する――であって、前記シクロアリール、シクロアルキルまたは複素環が、C1-3アルキルに任意に置換されている5員または6員のシクロアリール、シクロアルキルまたは複素環、-OC1-6アルキル-N(X)(Y)であり、
式中、Xは、HまたはC1-6アルキルであり、Yは、HまたはC1-6アルキルであり、
式中、アルキル基は1個以上の-OH基に任意に置換され、
R6は、Hまたは-OC1-6アルキルである、阻害剤。 - R3がシクロプロピルである、請求項1~3のいずれかに記載の使用のための阻害剤。
- R5がN-メチルピペラジニルである、請求項1~5のいずれかに記載の使用のための阻害剤。
- 前記阻害剤が少なくとも1つの他の治療剤と組み合わせて投与されるか、投与されるように構成される、請求項1~8のいずれか一項に記載の使用のための阻害剤。
- 前記1つの他の治療剤が、オリゴヌクレオチドを含むか、
前記少なくとも1つの他の治療剤が、小分子、薬物、プロドラッグ、ペプチド、タンパク質、抗体、ヌクレオチドまたはワクチンを含んでもよい、請求項9に記載の使用のための阻害剤。 - 前記1つの他の治療剤が、siRNAもしくはmiRNAまたはその等価物を含む、請求項9に記載の使用のための阻害剤。
- 前記少なくとも1つの他の治療剤が、ナトリウムチャネル遮断薬、CNS刺激薬、デヒドロエピアンドロステロン(DHEA)、クレアチン補充、メカセルミンリンファベート(IPLEX、組換えインスリン様成長因子1およびその結合タンパク質、BP-3の組合せ)、ペンタミジン、ビスアミジニウム阻害剤、ロモフンギンもしくはジロモフンギンまたはそれらの組合せを含む、請求項9に記載の使用のための阻害剤。
- 前記使用が、前記DMPK遺伝子を標的とするオリゴヌクレオチドと組み合わされたものである、請求項1~12のいずれか一項に記載の使用のための阻害剤。
- 前記阻害剤が断続的に投与されるか、投与されるように構成される、請求項1~13のいずれか一項に記載の使用のための阻害剤。
- 対象の筋強直性ジストロフィー1型、筋強直性ジストロフィー2型、または前頭側頭型認知症(C9ORF72)の治療または予防のための医薬品の調製でのCDK12阻害剤の使用であって、
前記阻害剤が、式(I)の化合物を含む使用:
式中、
R1は、H、-OH、C1-6アルキル、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C1-6ハロアルキル、ハロゲン、-CN、-OC1-6アルキルであり、
R2は、H、-OH、C1-6アルキル、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C1-6ハロアルキル、ハロゲン、-CNまたは-OC1-6アルキルであるか、5員または6員のシクロアリール、シクロアルキルまたは複素環――O、SおよびNから選択される1個、2個または3個のヘテロ原子を有する――であり、
R3は、C3-6シクロアルキルであり、
または
式中、
R4は、H、-OH、C1-6アルキル、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C1-6ハロアルキル、ハロゲン、-CN、-OC1-6アルキルであり、
R5は、H;-OH;C1-6アルキル;C2-6アルケニル;C2-6アルキニル;C1-6ハロアルキル;ハロゲン;-CN;-OC1-6アルキル;C1-6アルキル-N-(X)(Y);5員もしくは6員のシクロアリール、シクロアルキルもしくは複素環――O、SおよびNから選択される1個、2個もしくは3個のヘテロ原子を有する――であって、前記シクロアリール、シクロアルキルもしくは複素環が、C1-3アルキルに任意に置換されている5員もしくは6員のシクロアリール、シクロアルキルもしくは複素環;または-OC1-6アルキル-N(X)(Y)であり、
式中、Xは、HまたはC1-6アルキルであり、Yは、HまたはC1-6アルキルであり、
式中、アルキル基は1個以上の-OH基に任意に置換され、
R6は、H、-OH、C1-6アルキル、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C1-6ハロアルキル、ハロゲン、-CN、-OC1-6アルキルである。 - R2が、ベンゼン、モルホリニル、ピペリジン、又はピペラジンである、請求項15に記載の使用。
- R3がシクロプロピルである、請求項15又は16に記載の使用。
- R5がN-メチルピペラジニルである、請求項15~17のいずれかに記載の使用。
- 筋強直性ジストロフィー1型、筋強直性ジストロフィー2型、または前頭側頭型認知症(C9ORF72)のための治療剤のスクリーニング方法であって、
・スクリーニングのための分子を提供することと、
・前記分子がCDK12の活性を阻害するかどうかを検出することとを含み、
CDK12の阻害の検出により、潜在的候補治療剤として分子を選択する方法。 - 筋強直性ジストロフィー1型、筋強直性ジストロフィー2型、または前頭側頭型認知症(C9ORF72)の治療または予防に使用するための、CDK12阻害剤および薬学的に許容される担体を含む組成物であって、
前記阻害剤が、式(I)の化合物を含む組成物:
式中、
R1は、H、-OH、C1-6アルキル、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C1-6ハロアルキル、ハロゲン、-CN、-OC1-6アルキルであり、
R2は、H、-OH、C1-6アルキル、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C1-6ハロアルキル、ハロゲン、-CNまたは-OC1-6アルキルであるか、5員または6員のシクロアリール、シクロアルキルまたは複素環――O、SおよびNから選択される1個、2個または3個のヘテロ原子を有する――であり、
R3は、C3-6シクロアルキルであり、
または
式中、
R4は、H、-OH、C1-6アルキル、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C1-6ハロアルキル、ハロゲン、-CN、-OC1-6アルキルであり、
R5は、H;-OH;C1-6アルキル;C2-6アルケニル;C2-6アルキニル;C1-6ハロアルキル;ハロゲン;-CN;-OC1-6アルキル;C1-6アルキル-N-(X)(Y);5員もしくは6員のシクロアリール、シクロアルキルもしくは複素環――O、SおよびNから選択される1個、2個もしくは3個のヘテロ原子を有する――であって、前記シクロアリール、シクロアルキルもしくは複素環が、C1-3アルキルに任意に置換されている5員もしくは6員のシクロアリール、シクロアルキルもしくは複素環;または-OC1-6アルキル-N(X)(Y)であり、
式中、Xは、HまたはC1-6アルキルであり、Yは、HまたはC1-6アルキルであり、
式中、アルキル基は1個以上の-OH基に任意に置換され、
R6は、H、-OH、C1-6アルキル、C2-6アルケニル、C2-6アルキニル、C1-6ハロアルキル、ハロゲン、-CN、-OC1-6アルキルである。 - R2が、ベンゼン、モルホリニル、ピペリジン、又はピペラジンである、請求項20に記載の組成物。
- R3がシクロプロピルである、請求項20又は21に記載の組成物。
- R5がN-メチルピペラジニルである、請求項20~22のいずれかに記載の組成物。
- 少なくとも1つの他の治療剤をさらに含む、請求項20~23のいずれかに記載の組成物。
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