JP7241019B2 - Scn9aアンチセンス鎮痛剤 - Google Patents
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Description
nは、10~25の整数であり;
式Iの化合物は、ヒトSCN9AプレmRNA内の[(5'→3')UGUUUAGGUACACU]の14量体プレmRNA配列と少なくとも10量体の相補的重複を有し;
式Iの化合物は、ヒトSCN9AプレmRNAに完全に相補的であるか、又は1つ若しくは2つのミスマッチによりヒトSCN9AプレmRNAに部分的に相補的であり;
S1、S2、...、Sn-1、Sn、T1、T2、...、Tn-1、及びTnは、独立して、デューテリド(deuterido)[D]、ヒドリド[H]、置換若しくは無置換アルキル、又は置換若しくは無置換アリール基を表し;
X及びYは、独立して、ヒドリド、ホルミル[H-C(=O)-]、アミノカルボニル[NH2-C(=O)-]、アミノチオカルボニル[NH2-C(=S)-]、置換若しくは無置換アルキル、置換若しくは無置換アリール、置換若しくは無置換アルキルアシル、置換若しくは無置換アリールアシル、置換若しくは無置換アルキルオキシカルボニル、置換若しくは無置換アリールオキシカルボニル、置換若しくは無置換アルキルアミノカルボニル、置換若しくは無置換アリールアミノカルボニル、置換若しくは無置換アルキルアミノチオカルボニル、置換若しくは無置換アリールアミノチオカルボニル、置換若しくは無置換アルキルオキシチオカルボニル、置換若しくは無置換アリールオキシチオカルボニル、置換若しくは無置換アルキルスルホニル、置換若しくは無置換アリールスルホニル、置換若しくは無置換アルキルホスホニル基、又は置換若しくは無置換アリールホスホニル基を表し;
Zは、ヒドリド、ヒドロキシ、置換若しくは無置換アルキルオキシ、置換若しくは無置換アリールオキシ、置換若しくは無置換アミノ、置換若しくは無置換アルキル、又は置換若しくは無置換アリール基を表し;
B1、B2、...、Bn-1及びBnは、独立して、アデニン、チミン、グアニン、シトシン及びウラシルを含む天然核酸塩基並びに非天然核酸塩基から選択され;
B1、B2、...、Bn-1及びBnのうちの少なくとも4つは、独立して、核酸塩基部分に共有結合されている置換又は無置換アミノ基を有する非天然核酸塩基から選択される]
を提供する。
nは、10~25の整数であり;
式Iの化合物は、ヒトSCN9AプレmRNA内の[(5'→3')UGUUUAGGUACACU]の14量体プレmRNA配列と少なくとも10量体の相補的重複を有し;
式Iの化合物は、ヒトSCN9AプレmRNAに完全に相補的であるか、又は1つ若しくは2つのミスマッチによりヒトSCN9AプレmRNAに部分的に相補的であり;
S1、S2、...、Sn-1、Sn、T1、T2、...、Tn-1、及びTnは、独立して、デューテリド[D]、ヒドリド[H]、置換若しくは無置換アルキル、又は置換若しくは無置換アリール基を表し;
X及びYは、独立して、ヒドリド、ホルミル[H-C(=O)-]、アミノカルボニル[NH2-C(=O)-]、アミノチオカルボニル[NH2-C(=S)-]、置換若しくは無置換アルキル、置換若しくは無置換アリール、置換若しくは無置換アルキルアシル、置換若しくは無置換アリールアシル、置換若しくは無置換アルキルオキシカルボニル、置換若しくは無置換アリールオキシカルボニル、置換若しくは無置換アルキルアミノカルボニル、置換若しくは無置換アリールアミノカルボニル、置換若しくは無置換アルキルアミノチオカルボニル、置換若しくは無置換アリールアミノチオカルボニル、置換若しくは無置換アルキルオキシチオカルボニル、置換若しくは無置換アリールオキシチオカルボニル、置換若しくは無置換アルキルスルホニル、置換若しくは無置換アリールスルホニル、置換若しくは無置換アルキルホスホニル基、又は置換若しくは無置換アリールホスホニル基を表し;
Zは、ヒドリド、ヒドロキシ、置換若しくは無置換アルキルオキシ、置換若しくは無置換アリールオキシ、置換若しくは無置換アミノ、置換若しくは無置換アルキル、又は置換若しくは無置換アリール基を表し;
B1、B2、...、Bn-1及びBnは、独立して、アデニン、チミン、グアニン、シトシン及びウラシルを含む天然核酸塩基並びに非天然核酸塩基から選択され;
B1、B2、...、Bn-1及びBnのうちの少なくとも4つは、独立して、核酸塩基部分に共有結合されている置換又は無置換アミノ基を有する非天然核酸塩基から選択される]
を提供する。
nが10~25の整数であり;
式Iの化合物が、ヒトSCN9AプレmRNA内の[(5'→3') UGUUUAGGUACACU]の14量体プレmRNA配列と少なくとも10量体の相補的重複を有し;
式Iの化合物が、ヒトSCN9AプレmRNAに完全に相補的であるか、又は1つ若しくは2つのミスマッチによりヒトSCN9AプレmRNAに部分的に相補的であり;
S1、S2、...、Sn-1、Sn、T1、T2、...、Tn-1、及びTnが、独立して、デューテリド、ヒドリド、置換若しくは無置換アルキル、又は置換若しくは無置換アリール基を表し;
X及びYが、独立して、ヒドリド、ホルミル、アミノカルボニル、アミノチオカルボニル、置換若しくは無置換アルキル、置換若しくは無置換アリール、置換若しくは無置換アルキルアシル、置換若しくは無置換アリールアシル、置換若しくは無置換アルキルオキシカルボニル、置換若しくは無置換アリールオキシカルボニル、置換若しくは無置換アルキルアミノカルボニル、置換若しくは無置換アリールアミノカルボニル、置換若しくは無置換アルキルアミノチオカルボニル、置換若しくは無置換アリールアミノチオカルボニル、置換若しくは無置換アルキルオキシチオカルボニル、置換若しくは無置換アリールオキシチオカルボニル、置換若しくは無置換アルキルスルホニル、置換若しくは無置換アリールスルホニル、置換若しくは無置換アルキルホスホニル基、又は置換若しくは無置換アリールホスホニル基を表し;
Zが、ヒドリド、ヒドロキシ、置換若しくは無置換アルキルオキシ、置換若しくは無置換アリールオキシ、置換若しくは無置換アミノ、置換若しくは無置換アルキル、又は置換若しくは無置換アリール基を表し;
B1、B2、...、Bn-1及びBnが、独立して、アデニン、チミン、グアニン、シトシン及びウラシルを含む天然核酸塩基並びに非天然核酸塩基から選択され;
B1、B2、...、Bn-1及びBnのうちの少なくとも4つが、独立して、式II、式III又は式IVによって表される非天然核酸塩基:
R1、R2、R3、R4、R5及びR6は、独立して、ヒドリド、及び置換又は無置換アルキル基から選択され;
L1、L2及びL3は、塩基性アミノ基を核酸塩基部分に共有結合している式V:
Q1及びQmは、置換又は無置換メチレン(-CH2-)基であり、Qmは、塩基性アミノ基に直接結合されており;
Q2、Q3、...及びQm-1は、独立して、置換又は無置換メチレン、酸素(-O-)、硫黄(-S-)、及び置換又は無置換アミノ基[-N(H)-、若しくは-N(置換)-]から選択され;
mは、1から15の整数である)
によって表される共有結合リンカーである]
から選択される、式IのPNA誘導体、又はそれらの薬学的に許容される塩である。
nが11~21の整数であり;
式Iの化合物が、ヒトSCN9AプレmRNA内の[(5'→3') UGUUUAGGUACACU]の14量体プレmRNA配列と少なくとも10量体の相補的重複を有し;
式Iの化合物が、ヒトSCN9AプレmRNAに完全に相補的であるか、又は1つ若しくは2つのミスマッチによりヒトSCN9AプレmRNAに部分的に相補的であり;
S1、S2、...、Sn-1、Sn、T1、T2、...、Tn-1及びTnがヒドリド基であり;
X及びYが、独立して、ヒドリド、置換若しくは無置換アルキル、置換若しくは無置換アリール、置換若しくは無置換アルキルアシル、置換若しくは無置換アリールアシル、置換若しくは無置換アルキルオキシカルボニル、置換若しくは無置換アリールオキシカルボニル、置換若しくは無置換アルキルアミノカルボニル、置換若しくは無置換アリールアミノカルボニル、置換若しくは無置換アルキルスルホニル、又は置換若しくは無置換アリールスルホニル基を表し;
Zが置換又は無置換アミノ基を表し;
B1、B2、...、Bn-1及びBnが、独立して、アデニン、チミン、グアニン、シトシン及びウラシルを含む天然核酸塩基並びに非天然核酸塩基から選択され;
B1、B2、...、Bn-1及びBnのうちの少なくとも4つが、独立して、式II、式III又は式IVによって表される非天然核酸塩基から選択され;
R1、R2、R3、R4、R5及びR6が、独立して、ヒドリド、及び置換又は無置換アルキル基から選択され;
Q1及びQmが置換又は無置換メチレン基であり、Qmが塩基性アミノ基に直接結合されており;
Q2、Q3、...及びQm-1が、独立して、置換又は無置換のメチレン、酸素及びアミノ基から選択され;
mが1~11の整数である、
式IのPNAオリゴマー、又はそれらの薬学的に許容される塩である。
nが11~19の整数であり;
式Iの化合物が、ヒトSCN9AプレmRNA内の[(5'→3') UGUUUAGGUACACU]の14量体プレmRNA配列と少なくとも10量体の相補的重複を有し;
式Iの化合物が、ヒトSCN9AプレmRNAに完全に相補的であり;
S1、S2、...、Sn-1、Sn、T1、T2、...、Tn-1及びTnがヒドリド基であり;
X及びYが、独立して、ヒドリド、置換若しくは無置換アルキル、置換若しくは無置換アリール、置換若しくは無置換アルキルアシル、置換若しくは無置換アリールアシル、置換若しくは無置換アルキルオキシカルボニル、置換若しくは無置換アルキルアミノカルボニル、置換若しくは無置換アルキルスルホニル、又は置換若しくは無置換アリールスルホニル基を表し;
Zが置換又は無置換アミノ基を表し;
B1、B2、...、Bn-1及びBnが、独立して、アデニン、チミン、グアニン、シトシン及びウラシルを含む天然核酸塩基並びに非天然核酸塩基から選択され;
B1、B2、...、Bn-1及びBnのうちの少なくとも4つが、独立して、式II、式III又は式IVによって表される非天然核酸塩基から選択され;
R1、R2、R3、R4、R5及びR6が、独立して、ヒドリド、及び置換又は無置換アルキル基から選択され;
Q1及びQmがメチレン基であり、Qmが塩基性アミノ基に直接結合されており;
Q2、Q3、...及びQm-1が、独立して、メチレン、酸素及びアミノ基から選択され;
mが1~9の整数である、
式IのPNA誘導体、又はそれらの薬学的に許容される塩である。
nが11~19の整数であり;
式Iの化合物が、ヒトSCN9AプレmRNA内の[(5'→3') UGUUUAGGUACACU]の14量体プレmRNA配列と少なくとも10量体の相補的重複を有し;
式Iの化合物が、ヒトSCN9AプレmRNAに完全に相補的であり;
S1、S2、...、Sn-1、Sn、T1、T2、...、Tn-1及びTnがヒドリド基であり;
X及びYが、独立して、ヒドリド、置換若しくは無置換アルキル、置換若しくは無置換アリール、置換若しくは無置換アルキルアシル、置換若しくは無置換アリールアシル、又は置換若しくは無置換アルキルオキシカルボニル基を表し;
Zが置換又は無置換アミノ基を表し;
B1、B2、...、Bn-1及びBnが、独立して、アデニン、チミン、グアニン、シトシン及びウラシルを含む天然核酸塩基並びに非天然核酸塩基から選択され;
B1、B2、...、Bn-1及びBnのうちの少なくとも4つが、独立して、式II、式III又は式IVによって表される非天然核酸塩基から選択され;
R1、R3、及びR5がヒドリド基であり、R2、R4及びR6が、独立して、ヒドリド、又は置換若しくは無置換アルキル基を表し;
Q1及びQmがメチレン基であり、Qmが塩基性アミノ基に直接結合されており;
Q2、Q3、...及びQm-1が、独立して、メチレン、酸素基から選択され;
mが1~8の整数である、
式IのPNA誘導体、又はそれらの薬学的に許容される塩である。
nが11~19の整数であり;
式Iの化合物が、ヒトSCN9AプレmRNA内の[(5'→3') UGUUUAGGUACACU]の14量体プレmRNA配列と少なくとも10量体の相補的重複を有し;
式Iの化合物が、ヒトSCN9AプレmRNAに完全に相補的であり;
S1、S2、...、Sn-1、Sn、T1、T2、...、Tn-1及びTnがヒドリド基であり;
X及びYが、独立して、ヒドリド、置換若しくは無置換アルキルアシル、置換若しくは無置換アリールアシル、又は置換若しくは無置換アルキルオキシカルボニル基を表し;
Zが置換又は無置換アミノ基を表し;
B1、B2、...、Bn-1及びBnが、独立して、アデニン、チミン、グアニン、シトシン、及び非天然核酸塩基から選択され;
B1、B2、...、Bn-1及びBnのうちの少なくとも5つが、独立して、式II、式III又は式IVによって表される非天然核酸塩基から選択され;
R1、R2、R3、R4、R5及びR6がヒドリド基であり;
Q1及びQmがメチレン基であり、Qmが塩基性アミノ基に直接結合されており;
Q2、Q3、...及びQm-1が、独立して、メチレン、酸素基から選択され;
mが1~8の整数である、
式IのPNA誘導体、又はそれらの薬学的に許容される塩である。
nが11~19の整数であり;
式Iの化合物が、ヒトSCN9AプレmRNA内の[(5'→3') UGUUUAGGUACACU]の14量体プレmRNA配列と少なくとも10量体の相補的重複を有し;
式Iの化合物が、ヒトSCN9AプレmRNAに完全に相補的であり;
S1、S2、...、Sn-1、Sn、T1、T2、...、Tn-1及びTnがヒドリド基であり;
Xがヒドリド基であり;
Yが置換若しくは無置換アルキルアシル、置換若しくは無置換アリールアシル、又は置換若しくは無置換アルキルオキシカルボニル基を表し;
Zが置換又は無置換アミノ基を表し;
B1、B2、...、Bn-1及びBnが、独立して、アデニン、チミン、グアニン、シトシン、及び非天然核酸塩基から選択され;
B1、B2、...、Bn-1及びBnのうちの少なくとも5つが、独立して、式II、式III又は式IVによって表される非天然核酸塩基から選択され;
R1、R2、R3、R4、R5及びR6がヒドリド基であり;
L1が-(CH2)2-O-(CH2)2-、-CH2-O-(CH2)2-、-CH2-O-(CH2)3-、-CH2-O-(CH2)4-、又は-CH2-O-(CH2)5-を表し、右端が塩基性アミノ基に直接結合しており;
L2及びL3が、独立して、-(CH2)2-、-(CH2)3-、-(CH2)4-、-(CH2)5-、-(CH2)6-、-(CH2)7-、-(CH2)8-、-(CH2)2-O-(CH2)2-、-(CH2)3-O-(CH2)2-、及び-(CH2)2-O-(CH2)3-から選択され、右端が塩基性アミノ基に直接結合している、
式IのPNA誘導体、又はそれらの薬学的に許容される塩である。
(N → C) Fethoc-TA(5)A-A(5)AG(6)-TG(6)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)-NH2;
(N → C) Fethoc-TA(5)A-A(4)AG(6)-TG(6)T-A(5)CC(1O3)-TA(5)A-A-NH2;
(N → C) Fmoc-TA(5)A-A(4)AG(6)-TG(6)T-A(5)CC(1O3)-TA(5)A-A-NH2;
(N → C) Piv-Leu-TA(5)A-A(5)AG(3O2)-TG(6)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)-NH2;
(N → C) Fethoc-TA(5)T-A(5)AG(6)-TG(6)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)-NH2;
(N → C) ベンゾイル-Gly-TA(2O2)A-A(5)AG(6)-TG(6)T-A(5)CT-TA(5)A-Lys-NH2;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TG(6)T-A(5)CC(1O2)-TAA(5)-A-NH2;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-CG(6)T-A(5)CC(1O2)-TAA(5)-A-NH2;
(N → C) Fmoc-AA(5)G-TG(6)T-A(5)CC(1O2)-TAA(5)-A-NH2;
(N → C) ベンゼンスルホニル-AA(5)G-TG(6)T-A(5)CC(1O2)-TAA(5)-A-NH2;
(N → C) Ac-AA(5)G-TG(6)T-A(5)CC(1O2)-TAA(5)-A-NH2;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(3)A-A(5)-NH2;
(N → C) Fmoc-AA(5)G-TG(6)T-AC(1O2)C-TAA(5)-A-NH2;
(N → C) メチル-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(3)A-A(5)-Gly-Arg-NH2;
(N → C) Fethoc-A(5)AG-TG(6)T-A(5)CC(1O2)-TAA-A(5)-NH2;
(N → C) Ac-Val-A(5)AG-TG(6)T-A(5)CC(1O2)-TAA-A(5)-NH2;
(N → C) Fethoc-AAG(6)-TG(6)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A-NH2;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)-NH2;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)C-NH2;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TG(5)T-A(5)AC(1O2)-TA(5)T-A(5)C-NH2;
(N → C) H-AA(5)G-TG(2O2)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)C-NH2;
(N → C) Fethoc-Lys-Leu-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(2O2)A-A(5)C-Lys-NH2;
(N → C) [N-(2-フェニルエチル)アミノ]カルボニル-AA(3)G-TG(5)T-A(5)CC(1O5)-TA(5)A-A(5)C-NH2;
(N → C) N,N-フェニル-Me-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(4)C-NH2;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TA(5)T-A(5)CC(1O2)-TG(5)A-A(5)C-NH2;
(N → C) p-トルエンスルホニル-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)C-NH2;
(N → C) p-トルエンスルホニル-AA(5)G-TG(2O3)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)C-Lys-NH2;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TG(2O3)T-A(5)CC(1O3)-TA(7)A-A(5)C-NH2;
(N → C) n-プロピル-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O3)-TA(5)A-A(5)C-NH2;
(N → C) ベンゾイル-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)C-NH2;
(N → C) ベンジル-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O3)-TA(5)A-A(5)C-NH2;
(N → C) ベンゾイル-AA(5)G-TG(3)T-A(5)CC(2O2)-TA(5)A-A(5)C-NH2;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)C-Leu-Lys-NH2;
(N → C) Piv-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)C-NH2;
(N → C) Fethoc-TA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)C-NH2;
(N → C) Fethoc-AA(5)C-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)C-NH2;
(N → C) メチルスルホニル-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)C-NH2;
(N → C) n-ヘキシル-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)C-NH2;
(N → C) n-ヘキサノイル-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)C-NH2;
(N → C) n-ヘキサノイル-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(8)A-A(5)C-NH2;
(N → C) Fethoc-AA(3)G-TG(2O2)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)C-NH2;
(N → C) Fethoc-AA(3)G-TG(2O2)T-A(5)CC(1O3)-TA(5)A-A(5)C-NH2;
(N → C) Fethoc-AA(3)G-TG(2O2)T-A(5)CC(2O2)-TA(5)A-A(5)C-NH2;
(N → C) FAM-HEX-HEX-AA(3)G-TG(2O2)T-A(5)CC(2O2)-TA(5)A-A(5)C-NH2;
(N → C) Fethoc-A(5)GT-G(5)TA(5)-CC(1O2)T-A(5)AA(5)-C-NH2;
(N → C) Fethoc-AG(5)T-G(7)TA-CC(1O2)T-AA(6)A-C-NH2;
(N → C) Fethoc-AA(6)G-TG(5)T-A(6)CC(1O2)-TA(6)A-A(6)C-NH2;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(3)CA-C(1O5)AA-NH2;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TCT-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(3)CA-C(1O5)AA-NH2;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TCT-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(3)CA(3)-CTA-NH2;
(N → C) Fethoc-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(3)CA-CA(7)A-NH2;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(3)CA(5)-C-NH2;
(N → C) Fethoc-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(3)CA(5)-C-NH2;
(N → C) p-トルエンスルホニル-TG(2O3)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(3)CA-C-Lys-NH2;
(N → C) Fethoc-TG(5)T-A(5)CC(2O2)-TA(5)A-A(3)CA-CA(5)A-NH2;
(N → C) Piv-TG(5)T-A(5)CC(2O2)-TA(5)A-A(3)CA-CA(5)A-NH2;
(N → C) ベンゾイル-TG(5)T-A(5)CC(2O2)-TA(5)A-A(3)CA-CA(5)A-NH2;
(N → C) プロピオニル-TG(5)T-A(5)CC(2O2)-TA(5)A-A(3)CA-CA(5)A-NH2;
(N → C) Fethoc-TG(5)T-A(5)CC(2O2)-TA(5)A-A(3)CA-CA(5)A-Arg-Val-NH2;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)G-NH2;
(N → C) Fethoc-AG(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)G-NH2;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)CA-NH2;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)GG-NH2; 及び、
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TG(5)T-ACC(1O2)-TA(5)A-A(5)CA(5)-C-NH2:
式中、
A、G、T及びCは、それぞれ、アデニン、グアニン、チミン及びシトシンの天然核酸塩基を有するPNAモノマーであり;
C(pOq)、A(p)、A(pOq)、G(p)及びG(pOq)は、それぞれ、式VI、式VII、式VIII、式IX、及び式X
式中、p及びqは整数であり;
N末端及びC末端の置換基に関する略語は、特に以下のように定義される:「Fmoc-」は、「[(9-フルオレニル)メチルオキシ]カルボニル-」の略語であり;「Fethoc-」は、「[2-(9-フルオレニル)エチル-1-オキシ]カルボニル」の略語であり;「Ac-」は、「アセチル-」の略語であり;「n-ヘキサノイル-」は、「1-(n-ヘキサノイル)-」の略語であり;「ベンゾイル-」は、「ベンゼンカルボニル-」の略語であり;「Piv-」は、「ピバリル-」の略語であり;「n-プロピル-」は、「1-(n-プロピル)-」の略語であり;「n-ヘキシル-」は、「1-(n-ヘキシル)-」の略語であり;「H-」は、「ヒドリド-」の略語であり;「p-トルエンスルホニル」は、「(4-メチルベンゼン)-1-スルホニル-」の略語であり;「ベンゼンスルホニル」は、「ベンゼン-1-スルホニル-」の略語であり;「メチルスルホニル」は、「メチル-1-スルホニル-」の略語であり;「-Lys-」は、アミノ酸残基「リジン」の略語であり;「-Val-」は、アミノ酸残基「バリン」の略語であり;「-Leu-」は、アミノ酸残基「ロイシン」の略語であり;「-Arg-」は、アミノ酸残基「アルギニン」の略語であり;「-Gly-」は、アミノ酸残基「グリシン」の略語であり;「[N-(2-フェニルエチル)アミノ]カルボニル-」は、「[N-1-(2-フェニルエチル)-アミノ]カルボニル-」の略語であり;「ベンジル-」は、「1-(フェニル)メチル-」の略語であり;「フェニル-」は、「フェニル-」の略語であり;「Me-」は、「メチル-」の略語であり;「-HEX-」は、「6-アミノ-1-ヘキサノイル-」の略語であり;「FAM-」は、「5-又は6-フルオレセイン-カルボニル-」(異性体混合物)の略語であり;「-NH2」は、無置換の「-アミノ」基の略語である。
PNAオリゴマーを調製するための一般的手順
PNAオリゴマーは、先行技術[米国特許第6,133,444号;WO 96/40685]に開示されている方法に従って、必要ならばわずかな改変を行い、Fmoc化学に基づいた固相ペプチド合成(SPPS)によって合成した。この研究で使用した固体担体は、PCAS BioMatrix Inc. (Quebec, Canada)から購入したH-Rink Amide-ChemMatrixであった。修飾核酸塩基を有するFmoc-PNAモノマーは、先行技術[PCT/KR 2009/001256]に開示されているように、又はわずかな改変を行い合成した。修飾核酸塩基を有するそのようなFmoc-PNAモノマー及び天然核酸塩基を有するFmoc-PNAモノマーを使用して、本発明のPNA誘導体を合成した。修飾核酸塩基を有するFmoc-PNAモノマーは、図10に示している。しかし、当業者には、そのようなPNAモノマー上の保護基に対して多数のわずかな変形が明らかに可能であることは明白であろう。したがって、図10のFmoc-PNAモノマーは例示として理解されるべきであり、したがって、本発明の範囲を限定するものと理解すべきではない。PNAオリゴマーは、C18逆相HPLC(水/アセトニトリル又は0.1%のTFAを有する水/メタノール)によって精製し、ESI/TOF/MSを含む質量分析法により特性決定した。
1.5mLの20%ピペリジン/DMF中のChemMatrix樹脂の0.01mmol(約20mg樹脂)を20分間、libraチューブ中でボルテックスし、脱Fmoc溶液を濾過した。樹脂を、1.5mLの塩化メチレン(MC)、1.5mLのジメチルホルムアミド(DMF)、1.5mLのMC、1.5mLのDMF、及び1.5mLのMCで連続してそれぞれ30秒間洗浄した。得られた固体支持体上の遊離アミンを、Fmoc-PNAモノマー又はFmoc保護アミノ酸誘導体のいずれかとカップリングさせた。
樹脂を、1.5mLの20%ピペリジン/DMF中で7分間ボルテックスし、脱Fmoc溶液を濾過した。樹脂を、1.5mLのMC、1.5mLのDMF、1.5mLのMC、1.5mLのDMF、及び1.5mLのMCで連続してそれぞれ30秒間洗浄した。得られた固体支持体上の遊離アミンを、直ちにFmoc-PNAモノマーとカップリングさせた。
固体支持体上の遊離アミンを、以下のようにFmoc-PNAモノマーとカップリングさせた。0.04mmolのFmoc-PNAモノマー、0.05mmolのHBTU[2-(1H-ベンゾトリアゾール-1-イル)-1,1,3,3-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート]、及び10mmolのDIEA(N,N-ジイソプロピルエチルアミン)を、1mLの無水DMF中で2分間インキュベートし、遊離のアミンと共に樹脂に添加した。樹脂溶液を1時間ボルテックスし、反応媒体を濾過した。次いで、樹脂を、1.5mLのMC、1.5mLのDMF及び1.5mLのMCで連続してそれぞれ30秒間洗浄した。
カップリング反応後、未反応の遊離アミンを、1.5mLのキャッピング溶液(5%の無水酢酸及び6%の2,6-ルチジン(2,6-leutidine)を含むDMF)中で5分間振盪することによりキャッピングした。次いで、キャッピング溶液を濾過し、1.5mLのMC、1.5mLのDMF及び1.5mLのMCで連続してそれぞれ30秒間洗浄した。
「Fethoc-」基は、通常の塩基性カップリング条件下で、樹脂上の遊離アミンを「Fethoc-OSu」と反応させることによってN末端に導入した。「Fethoc-OSu」の化学構造[CAS番号第179337-69-0、C20H17NO5、MW 351.36]を以下に示す。
樹脂に結合されたPNAオリゴマーは、1.5mLの切断溶液(2.5%のトリイソプロピルシラン及び2.5%のトリフルオロ酢酸水)中で3時間振盪することによって樹脂から切断した。樹脂を濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。得られた残留物をジエチルエーテルで粉砕し、得られた沈澱物を濾過によって回収し、逆相HPLCにより精製した。
樹脂から切断した後、各PNA誘導体の粗製生成物を、0.1%のTFAを含有する水/アセトニトリル又は水/メタノール(勾配法)で溶出するC18-逆相HPLCにより精製した。図12A及び図12Bは、それぞれ、HPLC精製前後の「ASO 2」に関する例示的なHPLCクロマトグラムである。「ASO 2」のオリゴマー配列は、表1に示した通りである。
ヒトSCN9AプレmRNA内のイントロン3及びエクソン4の連結部にまたがる3'スプライス部位を相補的に標的とするために、本発明のPNA誘導体を、上記に示した合成法に従って、又はわずかに改変して調製した。ヒトSCN9AプレmRNAを標的とするそのようなPNA誘導体の提供は、式IのPNA誘導体を例示することであり、本発明の範囲を限定するものと解釈すべきではない。
表1のPNA誘導体を、PNAのN末端又はC末端のいずれかを相補的に標的とする10量体 DNAに対するそれらの結合親和性について評価した。結合親和性は、PNAと10量体の相補的DNAとの間の二本鎖に対するTm値によって評価した。表1のPNA誘導体と完全相補的DNAとの間の二本鎖は、水性緩衝液溶液中で確実に判定するにはあまりにも高いTm値を示すが、それは緩衝液がTm測定中に沸騰する傾向があったためである。
式IのPNA誘導体を、in vitro及びin vivoでの生物活性について評価した。以下に示した生物学的な例は、細胞内及び動物内における式IのPNA誘導体のアンチセンス活性を説明するものであり、したがって、本発明の範囲を表1に列挙した化合物に限定するものと解釈すべきではない。
PC3細胞における「ASO 7」によって誘導されたエクソンスキッピング(A)。
表1で指定した「ASO 7」は、ヒトSCN9AプレmRNA内のイントロン3及びエクソン4の連結部にまたがる3'スプライス部位の14量体配列に相補的に結合する14量体 ASOである。3'スプライス部位内の14量体標的配列は、[(5'→3') uuguguuuag┃GUACACUUUU]において「太字」及び「下線」でマークした通りである。「ASO 7」はイントロン3と6量体相補的重複を有し、エクソン4と8量体相補的重複を有する。
5mLのF-12K培地を入れた60mmの培養皿で増殖させたPC3細胞を、0(陰性対照)、1、10又は100zMの「ASO 7」で処理した。
「ASO 7」と5時間インキュベーションした後、全RNAを、「ユニバーサルRNA抽出キット」(カタログ番号9767、Takara)を使用して、製造業者の説明書に従い抽出した。200ngのRNA鋳型を、[エクソン2_フォワード: (5'→3') CTTTCTCCTTTCAGTCCTCT;及びエクソン9_リバース: (5'→3') CGTCTGTTGGTAAAGGTTTT]の1セットのエクソン特異的プライマーに対するPlatinum(登録商標)Taqポリメラーゼ(カタログ番号10928-042、Invitrogen)を含むSuper Script(登録商標)One-Step RT-PCRキットを使用し、以下のサイクル条件:30分間50℃及び2分間94℃、続いて30秒間94℃、30秒間55℃及び2分間72℃を15サイクルに従って、25μLの逆転写反応に供した。
次いで、1μLのcDNAを、以下のサイクル条件:2分間95℃、続いて30秒間95℃、30秒間55℃、1分間72℃を34サイクルに従って、[エクソン2n_フォワード: (5'→3') CCACCGGACTGGACCAAAAA;及びエクソン9n_リバース: (5'→3') GCTAAGAAGGC-CCAGCTGAA]の1セットのエクソン特異的プライマーに対する20μLのネスティッドPCR反応(カタログ番号K2612、Bioneer)に供した。
PCR産物を2%アガロースゲルでの電気泳動分離に供した。標的サイズのバンドを回収し、サンガーシーケンシングによって分析した。
PC3細胞における「ASO 7」によって誘導されたエクソンスキッピング(B)。
特記しない限り、「ASO 7」を、PC3細胞における「エクソン4」のスキッピングを誘導するその能力について、「実施例1」のように評価した。この実験において、PC3細胞を、0(陰性対照)、1、10、100及び1,000aMの「ASO 7」で24時間処理した。ネスティッドPCR反応は、エクソン3及びエクソン6の連結配列を有する産物を増幅するように設計された[エクソン3/6_フォワード: (5'→3') GGACCAAAAATGTCGAGCCT;及びエクソン9_リバース: (5'→3') GCTAAGAAGGCCCAGCTGAA]の1セットのプライマーに対して実施した。
「ASO 7」で処理したPC3細胞におけるSCN9A mRNAのqPCR(A)。
「ASO 7」を、SCN9AネスティッドのqPCRによって、下記のようにPC3細胞におけるヒトSCN9A mRNAレベルの変化を誘導するその能力について評価した。
PC3細胞を、0(陰性対照)、0.1、1又は10aMの「ASO 7」で処理した。(各ASO濃度につき2枚の培養皿)。
「ASO 7」と24時間インキュベーションした後、全RNAを抽出し、「実施例1」に述べたように、ワンステップPCR増幅に供した。
cDNA溶液を100倍希釈し、以下のサイクル条件:30秒95℃、続いて5秒95℃、及び30秒60℃の40サイクルに従って、それぞれの1μLの希釈PCR産物を、[エクソン3_フォワード: (5'→3') TGACCATGAATAACCCAC;及びエクソン4_リバース: (5'→3') GCAAGGATTTTTACAAGT]の1セットのエクソン特異的プライマーに対する20μLのリアルタイムPCR反応に供した。qPCR反応を、完全長SCN9A mRNA内のエクソン3及びエクソン4の連結部を標的とする[(5'→3') 5,6-FAM-GGACCAAAA-Zen-ATGTCGAGTACAC-3IABkFQ]のTaqManプローブを用いて追跡した。
「ASO 7」で処理したPC3細胞におけるSCN9A mRNAのqPCR(B)。
特記しない限り、「ASO 7」は、SCN9AネスティッドqPCRによって、「実施例3」のように、PC3細胞におけるヒトSCN9A mRNAレベルの変化を誘導するその能力について評価した。cDNAを、ランダムヘキサマーを使用して合成し、TaqManプローブに対するSCN9A qPCR反応に供した。
L5/L6脊髄神経結紮によるラットにおける脊髄神経障害の誘発。
脊髄神経結紮(SNL)は、後根神経節(DRG)及び脊髄において神経障害を誘発し、神経障害性疼痛のモデルとして広く使用されてきた。[Pain vol 50(3), 355~363 (1992)]。しかし、脊髄神経束をどのように結紮するかによって、SNLのいくつかの変様がある。DRGにおける神経障害の程度及び期間は、脊髄神経束をどのように結紮するかによって変わるようである。[Pain vol 43(2), 205~218 (1990)]。当社の経験によれば、L5及びL6の脊髄神経の2重結紮(すなわち「L5/L6結紮」)は、L5脊髄神経の単一結紮(すなわち「L5結紮」)よりも重症で持続の長い神経障害を誘発する。
オスSDラットをゾレチル/ロンプンで麻酔した。次いで、L5及びL6脊髄神経束(左側)を露出させ、固く結紮した。次いで、筋肉及び皮膚を閉じ、相応の無菌の手順に従ってクリッピングした。
SNL手術の6~7日後、結紮した側の足を、下記のように、電子フォンフレイ痛覚測定装置(モデル番号2390、IITC Inc. Life Science)を使用するフォンフレイスコアリングにより刺激した。フォンフレイスコアリングは、薬理学評価のための群分けまで毎日実施した。
フォンフレイスコアリング用にカスタマイズされたプラスチックケージ内の各動物を30分未満で安定化させた後、各動物の左後足を、スコアリングの間、数分間隔で6回、フォンフレイスコアリングに供した。動物が最初のスコアリング中安定化しなかったので、最初のスコアリングからスコアを除いた。残りの5つのスコアのうち、最高スコア及び最低スコアは除外した。次いで、残りの3つのスコアの平均を動物のフォンフレイスコアとして得た。
脊髄神経障害のラットにおける「ASO 7」によるアロディニアの転換。(1)
「ASO 7」は、標的配列の3'末端に単一のミスマッチを有する、ラットゲノムDNA[NCBI参照配列:NC_000002.12]から読み出されたラットSCN9AプレmRNAと部分的に相補的な14量体 SCN9A ASOである。ラットSCN9AプレmRNA内の「ASO 7」の標的13量体配列は、[(5'→3') uuuc"c"uuuag┃GUACACUUUU]の20量体 SCN9AプレmRNA配列においてマークしたように「太字」及び「下線」で明示されており、ここで、イントロン3で確認された単一ミスマッチは、引用符("")でマークされている。
-10日目に、オスSDラット(6週齢、Harlan Laboratories、Italy)を「L5/L6結紮」に供した。動物を、-4日目から毎日、フォンフレイスコアリングにより刺激した。0日目に、30匹の動物を0日目の個々のフォンフレイスコアに基づいて選択し、陰性対照群(すなわち、ASO処理なし)と1、3及び6pmole/kgの「ASO 7」の3つの処理群の4群に割り当てた。(1群当たり6又は9匹の動物)。
0、2、4、6、8及び10日目の午後に、0(陰性対照)、1、3又は6pmole/kgの「ASO 7」をラットに皮下投与した。アロディニアを、午前に、「実施例5」で述べた電子フォンフレイスコアリング法によってスコアリングした。ASOは「裸の」オリゴヌクレオチドとして、すなわち、PBSに溶解させて投与した。
図16Aに、観察されたフォンフレイスコアリングの結果を要約する。陰性対照群の動物は、群分け後、12日の期間にわたり、約6から7gの間で安定化した平均フォンフレイスコア(逃避反射閾値(withdrawal threshold))を示した。「ASO 7」は、4日目以降、アロディニアを有意に転換した(スチューデントt検定)。たとえ治療活性がすべての処理群において同程度であったとしても、6pmole/kgの群は、最初の投与後2日目から治療活性を示し始めた。
脊髄神経障害を有するラットにおける「ASO 2」によるアロディニアの転換。
表1で明示した「ASO 2」は、[(5'→3') uuguguuuag┃GUACACUUUU]において「太字」及び「下線」でマークしたように、ヒトSCN9AプレmRNA内のイントロン3及びエクソン4の連結部にまたがる3'スプライス部位に完全に相補的な13量体 ASOである。「ASO 2」はイントロン3と5量体の重複を有し、エクソン4と8量体の重複を有する。「ASO 2」の標的配列は、ラットSCN9AプレmRNAに保存されている。
オスSDラット(5週齢、Harlan Laboratories、Italy)は、-16日目にSNL手術を行った。0日目に、30匹のラットを選択し、陰性対照群(すなわち、ASO処理なし)と、20pmole/kg QD(すなわち、毎日1回)、100pmole/kg QD、500pmole/kg QD、及び100pmole/kg Q2D(すなわち、2日毎に1回)「ASO 2」の4つの処理群の5群へと割り当てた。(1群当たり動物6匹)。QD及びQ2Dの投与スケジュールに従って、0~13日の間、「ASO 2」を動物に皮下投与した。ASOは、「裸の」オリゴヌクレオチドとして、すなわち、PBSに溶解して投与した。
アロディニアは、「実施例5」に述べたように、フォンフレイ法に従って、0~14日の間スコアリングした。7日目に、右足(非結紮側)をフォンフレイスコアリングに供した。
図16Bに、観察されたフォンフレイスコアリングの結果を要約する。陰性対照群の動物は、群分け後、14日の期間にわたり約6から8gの間で安定化した平均フォンフレイ閾値スコアを示した。
L5/L6脊髄神経結紮で活性化されたラットL5 DRG細胞における「ASO 7」によるナトリウム電流の阻害。
細胞のナトリウム電流は、通常、パッチクランプによって測定される。ナトリウムイオンが細胞に取り込まれる場合、細胞内のナトリウムイオンレベルが上昇する。細胞内のナトリウムレベルは、ナトリウムイオン感受性染料を使用して評価することができる。「CoroNa Green」は、クラウンエーテルタイプのナトリウムイオン特異的キレート剤を含む染料である。ナトリウムイオンのキレート化の際、「CoroNa Green」は緑色蛍光を発する。「CoroNa Green」は、細胞内のナトリウムレベルを間接的に測定するために使用されてきた。「CoroNa Green」によって測定されたナトリウムレベルは、ナトリウムイオンパッチクランプによって測定されたナトリウムイオン電流と非常に相関することが分かった。[Proc. Natl. Acad. Sci. USA vol 106(38), 16145~16150 (2009)]。
0日目に、オスSDラット(6週齢、Harlan Laboratories、Italy)を「実施例5」に述べたように「L5/L6結紮」に供した。ラットは、4週間の期間をかけて、フォンフレイスコアリングに散発的にかけた。31日目に、低フォンフレイスコアを示すラットを安楽死させ、左側(結紮側)及び右側(非結紮側)の両方のL5 DRGを抽出した。DRGは、抽出直後に0.5mL PBSに浸漬した。
DRG細胞は、文献[Methods Mol Biol. vol 846, 179~187 (2012); PLoS One vol 8(4); e60558 (2013)]に開示されている手順に従って調製したが、以下に系列的に簡潔に述べる:(1) HBSS(ハンクス液、カタログ番号14025-092、Life Technologies)中に0.2mL 0.125%コラゲナーゼ(コラゲナーゼIV型、カタログ番号C5138-100MG、Sigma)を含む1.5mLのe-チューブにDRGを移し、鋏でできるだけ小片に切り刻み、5% CO2及び95% RHで、37℃のCO2インキュベーターにおいて20分インキュベートした;(2) 50μLの0.25%トリプシン/EDTAをe-チューブに加え、それをさらに10分間インキュベーター内で保持した;(3) e-チューブに1mLの完全DMEM培地を入れ、5分間600gでの遠心沈降にかけた;(4) 得られたペレットを、2X B-27(B-27(登録商標) Serum-Free Supplement、カタログ番号17504-044、Gibco)、1×ペニシリン-ストレプトマイシン、1×L-グルタミンを補充した、4mLのNeurobasal-A培地(Neurobasal(登録商標)培地、カタログ番号21103-049、Gibco)に懸濁し、細胞懸濁液1mLを、35mm培養皿内に置いたラミニン被覆カバーグラス(カタログ番号GG-25-1.5-laminin、Neuvitro)上に注意深く播種した;(5) 播種の1日後、皿に別の1mLの新鮮なNeurobasal-A培地を慎重に満たした;(6) 播種の2日後、DRG神経細胞以外の細胞の増殖を選択的に抑制するために、培地を、1μMのAra-C (シトシンβ-D-アラビノフラノシド、カタログ番号C1768-100MG、Sigma)を補充した2mLの新鮮なNeurobasal-A培地と交換した;(7) 播種の4日後、培地を、1μMのAra-Cを補充した2mLの新鮮なNeurobasal-A培地と再び交換した;(8) 播種の5日又は6日後、DRG神経細胞をASOで処理した。
「L5/L6結紮」あり、又は「L5/L6結紮」なしのいずれかのL5 DRG神経細胞を、0(陰性対照)、100又は1,000zMの「ASO 7」で処理した。30時間後、細胞を2mLのHBSSで洗浄し、次いで、新鮮な2mLのHBSSを入れた。次いで、細胞を37℃で5μMの「CoroNa Green」(カタログ番号C36676、Life Technologies)で処理した。30分後、細胞を、2mLのHBSSで2回洗浄し、2mLの新鮮なHBSSを入れた。細胞の緑色蛍光画像を連続的に捕らえるためのCCDカメラを装備したオリンパス蛍光顕微鏡(Model BX53、Olympus)に培養皿を載せた。細胞を10mMのNaClで速やかに処理し、次いで、細胞の蛍光強度の変化を300秒間にわたりデジタル的に記録した。フレーム当たり、すなわちASO濃度当たり4~5個の細胞であった。各個別細胞からの蛍光強度は、秒の解像力でトレースした。個別細胞からの細胞内蛍光強度のトレースは、ImageJプログラム(バージョン1.50i、NIH)を使用して平均化し、その平均トレースを、図13(A)及び図13(B)で、それぞれ、「L5/L6結紮」ありの細胞及び「L5/L6結紮」なしの細胞について提供する。平均蛍光強度トレースは、0(陰性対照)、100又は1,000zMの「ASO 7」で処理した細胞について、個々の細胞内ナトリウム濃度トレースとして得た。
「L5/L6結紮」で刺激したDRG神経細胞において[図17Aを参照]、100zM又は1aMの「ASO 7」による処理は、平均細胞蛍光強度を顕著に阻害した。例えば、150秒の時点で、平均細胞蛍光強度(すなわちナトリウム電流)は、ASOで処理した細胞において80~85%減少した。
DPNPを有するラットにおける「ASO 1」によるアロディニアの転換。
表1で明示した「ASO 1」は、[(5'→3') uuguguuuag┃GUACACUUUUACUGG]の25量体 SCN9AプレmRNA配列において「太字」及び「下線」でマークした、ヒトSCN9AプレmRNA内のイントロン3及びエクソン4の連結部にまたがる3'スプライス部位に完全に相補的な16量体 ASOである。「ASO 1」はイントロン3との5量体重複を有し、エクソン4との11量体重複を有する。「ASO 1」は、ラットSCN9AプレmRNAに完全に相補的である。
0日目に、クエン酸塩緩衝液(pH6)に溶解したストレプトゾトシンを、約200g体重のオスSDラットに60mg/kgで腹腔内投与し、I型糖尿病を誘発させた。[J. Ethnopharmacol. vol 72(1-2), 69~76 (2000)]。10日目に、DPNPを有するラットを、陰性対照(ビヒクル単独、PBS)及び100pmole/kgの「ASO 1」の2群に、下記で述べるフォンフレイ・マイクロフィラメントを使用して10日目に個々の動物のフォンフレイスコアに基づき、無作為に割り当てた。(1群当たりN=8)。
アロディニアは、「アップ&ダウン」法に従って、1セットのフォンフレイ・マイクロフィラメント(Touch Test(登録商標))でスコアリングした。[J Neurosci. Methods vol 53(1), 55~63 (1994)]。
「ASO 1」をPBSに溶解し、11、13、15、17及び19日目に、ラットに皮下投与した。アロディニアを、11、13、15、17及び19日目に、さらに21及び23日目に、投与後2時間スコアリングし、最終投与後の治療活性の期間を評価した。
図18Aに、観察されたフォンフレイスコアリングの結果を要約する。陰性対照群の動物は、10~23日の期間にわたり6~7gの間で安定化した平均フォンフレイ閾値を示した。100pmole/kgの「ASO 1」を投与された動物において、アロディニアは、最初の投与の2時間後、すなわち11日目に約80%有意に転換した(スチューデントt検定)。ASOが19日目まで繰り返し投与されるにつれて、治療活性は、わずかに、しかし徐々に約90%まで増加した。最終投与の2日後に、すなわち21日目に治療活性が完全にウォッシュアウトされたとすると、「ASO 1」は、2日に1回の投与スケジュール、すなわちQ2Dをサポートするのに十分な長い薬力学的半減期を有していない可能性がある。
DPNPを有するラットにおける「ASO 2」及び「ASO 6」によるアロディニアの転換。
「ASO 6」は[(5'→3') uuguguuuag┃GUACACUUUUACUGG]の25量体 SCN9AプレmRNA配列において「太字」及び「下線」でマークした、ヒトSCN9AプレmRNA内のイントロン3及びエクソン4の連結部にまたがる3'スプライス部位の13量体配列に相補的に結合する13量体 ASOである。「ASO 6」はイントロン3と5量体重複を有し、エクソン4と8量体重複を有する。「ASO 2」及び「ASO 6」はヒトSCN9AプレmRNA内の同一配列を標的とするが、「ASO 6」は「ASO 2」より相補的RNAに対して高い親和性を有すると考えられる。
図18Bに、観察されたフォンフレイスコアを要約する。陰性対照群の動物は、0~9日の期間にわたり、約10~12gで安定化した平均フォンフレイ閾値を示した。
糖尿病が続いたので、陰性対照群の動物は、フォンフレイスコアリング中に身体的衰弱の徴候を示した。処理群の動物はフォンフレイ負荷にはっきりと反応したが、それはASOの治療活性と一致している。
ラットホルマリン試験における「ASO 7」の鎮痛活性。
20μLの2%ホルマリン足底内注射によって誘発された疼痛は、SCN9A KOマウス全体において顕著に減少した。阻害の程度は、フェーズI(ホルマリン注射後0~10分)、及びフェーズII(ホルマリン注射後15~45分)について、それぞれ73%及び86%であった。[PLoS One vol 9(9), e105895 (Sep 2014)]。
-6日目に、24匹のオスSDラット(6週齢、Harlan Laboratories、Italy)を、陰性対照(ASO処理なし)と、10、30及び100pmole/kgの3つの「ASO 7」処理群の4群に無作為に割り当てた。(1群当たりN=6)。動物の各群に、0(陰性対照)、10、30又は100pmole/kgの「ASO 7」を-6及び-2日目に皮下投与した。「ASO 7」は注射用のPBSで希釈した。
0日目に、急性疼痛を、左後足に50μLの5%ホルマリンを足底内注射することによって誘発した。ホルマリン注射直後、各ラットをホルマリン注射後1時間、個別のビデオ録画に供した。ビデオを再生し、苦痛を与えた各動物について疼痛反応を視覚的にスコアリングした。
図19Aに、ホルマリン注射後の様々な時点での群毎に観察された疼痛スコアを要約する。フェーズIIの疼痛反応(10~40分のAUC)は、10、30及び100pmole/kgの処理群においてそれぞれ33%、36%及び32%有意に減少した(*スチューデントt検定によりp<0.05)。一方、フェーズIの疼痛反応(0~10分間のAUC)は、10、30及び100pmole/kgの処理群において、それぞれ、統計的有意差なしで14%、40%及び43%減少した。
ラットホルマリン試験における「ASO 10」の鎮痛活性。
表1に明示した「ASO 10」は、[(5'→3') uugu"g"uuuag┃GUACACUUUUACUGG]の25量体 SCN9AプレmRNA配列において「太字」及び「下線」でマークした、標的プレmRNA配列の5'末端に単一ミスマッチを有するヒトSCN9AプレmRNAに部分的に相補的な14量体 SCN9A ASOであり、ここで、イントロン3内の単一ミスマッチは引用符("")でマークしている。一方、「ASO 10」は、[(5'→3') uuuccuuuag┃GUACACUUUU]の20量体ラットSCN9AプレmRNA配列において「太字」及び「下線」でマークした、ラットSCN9AプレmRNA内のイントロン3及びエクソン4の連結部にまたがる3'スプライス部位に完全に相補的である。「ASO 10」はイントロン3と6量体重複を有し、エクソン4と8量体重複を有する。
36匹のオスSDラット(7週齢、Harlan Laboratories、Italy)を、陰性対照(ASO処理なし)と、15、50及び150pmole/kgの3つの「ASO 10」処理群の4群に無作為に割り当てた。(1群当たりN=9)。各群の動物に、0(陰性対照)、15、50又は150pmole/kgの「ASO 10」を-6及び-2日目に皮下投与した。ASOはPBSに溶解して投与した。
図19Bに、様々な時点での群毎に観察された疼痛スコアを要約する。フェーズIIの疼痛反応(10~40分のAUC)は、15及び50pmole/kgの処理群においてそれぞれ17%及び41%有意に減少した(スチューデントt検定)。一方、フェーズIの疼痛反応(0~10分間のAUC)は、15及び50pmole/kgの処理群において、それぞれ、38%及び50%有意に減少した。
足底内ホルマリン注射で苦痛を与えたラットにおける「ASO 7」によるL5 DRGでのNav1.7発現の阻害。
「ASO 7」を、以下のようにホルマリンの足底内注射で苦痛を与えたオスSDラットのL5 DRGでのNav1.7の発現を阻害するその能力について、IHC(免疫組織化学)により評価した。
-5日目に、オスSDラット(6週齢、Harlan Laboratories、Italy)を、陰性対照(ASO処理なし)と、1、6及び30pmole/kgの3つの「ASO 7」処理群の4群に無作為に割り当てた。動物の各群に、-5及び-1日目に、0(陰性対照)、1、6又は30pmole/kgの「ASO 7」を皮下投与した。「ASO 7」はPBSで希釈し、注射に使用した。0日目に、すべての動物に、50μLの5%ホルマリンを単回足底内注射で投与した。
8日目に、ラットにゾレチル/ロンプンで麻酔し、ホルマリン注射した側のL5 DRGのサンプリングを行った。(1群当たりN=2)。DRG試料を、下記で簡単に説明したようにNav1.7 IHCに供した。
図20Aに、群毎の代表的なNav1.7 IHC画像のセットを提供する。DRGにおけるNav1.7発現は、ASO処理群における発現と比較して、陰性対照群において顕著に高かった。
「ASO 10」による脊髄神経障害を有するラットにおけるアロディニアの転換(1)。
特記しない限り、「ASO 10」を、「実施例6」で述べたように、「L5/L6結紮」によって誘発された脊髄神経障害を有するラットにおけるアロディニアを転換するその能力について評価した。
-14日目に、オスSDラット(5週齢、Harlan Laboratories、Italy)に「L5/L6結紮」を行った。0日目に、36匹の動物を0日目のそれらの個別のフォンフレイスコアに基づいて選択し、陰性対照群(すなわち、ASO処理なし)と、1、3及び10pmole/kgの3つのASO処理群の4群に割り当てた。(1群当たりN=9)。
0、3及び7日目に、ラットに0(陰性対照)、3及び10pmole/kgの「ASO 10」を午後に皮下投与した。1pmole/kgの処理群において、用量は最初0日目に1pmole/kgであり、次いで、2及び3日目に1pmole/kgで治療活性がなかったため、3及び7日目に30pmole/kgに増やした。
図21Aに、観察されたフォンフレイスコアを要約する。陰性対照群の動物は、群分け後9日の期間にわたり約6~7gの間で安定化した平均フォンフレイスコア(逃避反射閾値)を示した。
「ASO 10」による脊髄神経障害を有するラットにおけるアロディニアの転換(2)。
特記しない限り、「ASO 10」を、「実施例6」で述べたように、「L5/L6結紮」によって誘発された脊髄神経障害を有するラットにおけるアロディニアを転換するその能力について評価した。
-10日目に、オスSDラット(6週齢、Harlan Laboratories、Italy)に「L5/L6結紮」を行った。0日目に、36匹の動物を0日目のそれらの個々のフォンフレイスコアに基づいて選択し、陰性対照群(すなわち、ASO処理なし)、100pmole/kgを4日又は5日毎に1回の2つのASO処理群、及びプレガバリン30mg/kgの陽性対照群の4群に無作為に割り当てた。(1群当たりN=9)
0日目に0(陰性対照)、100pmole/kg、並びに0及び5日目に4及び100pmole/kgの「ASO 10」を、ラットに午後皮下投与した。アロディニアを毎日午前中にスコアリングした。陽性対照群のラットには、フォンフレイスコアリングの1時間前にプレガバリン30mg/kgを経口投与した。ASOは、PBSに溶解させて投与した。
図21Bに、観察されたフォンフレイスコアを要約する。陰性対照群の動物は、最初のASO処理後7日間にわたり約6~7gの間で安定化した平均フォンフレイスコア(逃避反射閾値)を示した。プレガバリン30mg/kg群のラットは、約10~11gの平均フォンフレイスコアを示したが、7日目に観察されたスコアは鎮静のため約13gであった。
7日目に、動物にゾレチル/ロンプンで麻酔をかけ、脊髄の構造的完全性を保持するためにホルマリンを補充したPBSで潅流し、脊髄のサンプリングに供した。(1群当たりN=3)。脊髄試料をパラフィンブロックに加工し、Nav1.7抗体(カタログ番号ASC-008、Alomone)を用いるNav1.7発現(赤色染色)について、及びNeu抗体(カタログ番号Ab104224、Abcam)を用いる神経細胞体(緑色染色)について、連続してIHCを行った。核はDAPI(青色)で染色した。
「ASO 10」によるラットDRG神経細胞におけるNav1.7発現の阻害。
「ASO 10」を、下記で述べるように、ラットL5 DRG神経細胞においてNav1.7の発現を阻害するその能力について評価した。
オスSDラット(7週齢、Harlan Laboratories, Italy)に、「実施例5」で述べたようなきつい「L5/L6結紮」を行った。7日後、4匹のラットに、結紮側のL5 DRGを抽出するため、ゾレチル/ロンプンで麻酔をかけた。DRGをプールし、「実施例8」で述べたようにDRG神経細胞を調製するために処理した。
DRG神経細胞を、24時間、0(陰性対照)、10、100又は1,000zMの「ASO 10」で処理し、次いで、Nav1.7タンパク質のC末端をプローブするNav1.7抗体(カタログ番号ab85015、Abcam)に対するウエスタンブロットのため溶解させた。β-アクチンを参照のためプローブした。「ASO 10」ストック溶液をDDWに溶解し、培地に分注した。
図23Aは、0(陰性対照)、10、100又は1,000zMの「ASO 10」で処理したDRG神経細胞で得られたウエスタンブロットデータを示す。すべての溶解産物は170~200Kで強いバンドを生じたが、それはNav1.7タンパク質の代謝産物である。完全長Nav1.7タンパク質のバンドは、陰性対照及び10zMの「ASO 10」の溶解産物を用いた場合にのみ220~240Kで検出された。したがって、Nav1.7発現は、100~1,000zMの「ASO 10」で24時間インキュベーションした後、ラットDRG神経細胞において完全に阻害された。
ワンステップPCRによって合成したcDNAによる「ASO 10」で処理したラットDRG神経細胞におけるSCN9A mRNAに対するqPCR
「ASO 10」を、下記で述べるように、ラットDRG細胞においてラットSCN9A mRNAレベルの変化を誘導するその能力について、SCN9AネスティッドqPCRにより評価した。
オスSDラット(6週齢、Harlan Laboratories、Italy)にゾレチル/ロンプンで麻酔をかけ、L5 DRGを抽出した。L5 DRG試料は「実施例8」で述べたように処理し、L5 DRG神経細胞を調製した。
ラットL5 DRG神経細胞を、0(陰性対照)、10、30、100又は300zMの「ASO 10」で処理した。(各ASO濃度につき培養皿1枚)。「ASO 10」ストック溶液をDDWに溶解し、培地に分注した。
24時間「ASO 10」とインキュベーションした後、全RNAを、「ユニバーサルRNA抽出キット」(カタログ番号9767、Takara)を使用し、メーカーの説明書に従い、細胞から抽出した。200ngのRNA鋳型を、以下のサイクル条件: 50℃30分及び94℃2分、その後94℃で30秒、55℃で30秒、及び72℃で2分の15サイクルに従って、[エクソン2_フォワード: (5'→3') CAATCTTCCG-TTTCAACGCC、及びエクソン10_リバース: (5'→3') ACCACAGCCAGGATCAAGTT]の1セットのエクソン特異的プライマーに対してOne Step RT-PCRキット(Invitrogen、USA)を使用する25μL逆転写反応に供した。
cDNA溶液(ASO濃度につき2連)を100倍希釈し、希釈した各cDNA溶液の1μLを、以下のサイクル条件:95℃で30秒、続いて95℃で5秒及び60℃で30秒を40サイクルに従って、SCN9AプレmRNA内のエクソン3及びエクソン4の連結部を標的とするTaqManプローブ(カタログ番号Rn01514993_mH、ThermoFisher)を用いる20μLリアルタイムPCR反応に供した。
ランダムヘキサマーを用いるcDNA合成による「ASO 10」で処理したラットDRG神経細胞におけるSCN9A mRNAに対するqPCR。
「ASO 10」を、ラットL5 DRG神経細胞におけるSCN9A mRNAの発現を阻害するその能力について、SCN9A qPCRにより評価した。全RNAを「実施例17」で述べたように調製し、ランダムヘキサマーを使用してcDNA合成に供した。cDNA溶液(ASO濃度につき2連)を100倍希釈し、希釈した各PCR産物の1μLを、以下のサイクル条件:95℃で30秒、続いて95℃で5秒及び60℃で30秒を40サイクルに従って、SCN9Aエクソン3及びエクソン4の連結部を標的とするTaqManプローブを用いる20μLリアルタイムPCR反応に供した。
「ASO 10」によるL5 DRG神経細胞におけるナトリウム電流の阻害(1)。
「ASO 10」を、以下のように、ラットL5 DRG神経細胞におけるナトリウム電流を阻害するその能力について評価した。
オスSDラット(5週齢、Daehan Biolink、South Korea、www.dbl.co.kr)を、「実施例5」で述べたように、きつい「L5/L6結紮」に供した。結紮後の10~14日目に、結紮側のL5 DRGを抽出するため、ラットをゾレチル/ロンプンで麻酔した。L5 DRG神経細胞は、下記で述べるように調製した。
上記のように調製したL5 DRG神経細胞を0(陰性対照)、10、30、又は100zMの「ASO 10」で処理し、4時間インキュベーター内で保持した。ASOストック溶液は、0.1%(v/v)のTween80を補充したDDWで調製した。ストック溶液(陰性対照についてはビヒクルのみを含む)を、パッチクランプアッセイ用の0.0001%(v/v) Tween80を含むように、それぞれ培地に分注した。
次いで、DRG神経細胞を、ナトリウムパッチクランプ装置(Axopatch 200B Amplifier、Axon Instruments)で、ナトリウム電流手動パッチクランプアッセイにかけた。パッチクランプアッセイは、通常4時間かかった。したがって、細胞は、4~8時間(すなわち平均約6時間)、ASOで処理されたと考えられる。
ASO用量当たりの統計力を高めるため、上記の実験を数回の独立した機会にわたり繰り返した。TTX感受性細胞からのナトリウム電流データのみ、統計分析用のプールに含めた。
「ASO 10」によるL5 DRG神経細胞におけるナトリウム電流の阻害(2)。
多くの供給業者から得たラットの自社での評価は、L5 DRGにおけるNav1.7発現レベルが年齢及び供給業者で非常に異なることを示している。「ASO 10」を、特記しない限り、「実施例19」で述べたように、異なる供給元のラットL5 DRG神経細胞においてナトリウム電流を阻害するその能力について評価した。
オスSDラット(5週齢、Harlan Laboratories/Envigo、Denmark)を、「実施例5」で述べたように、きつい「L5/L6結紮」に供した。結紮後10~14日目に、結紮側のL5 DRGを抽出するため、ラットにゾレチル/ロンプンで麻酔をかけた。L5 DRG神経細胞は、下記で述べるように調製した。
上記のように調製したL5 DRG神経細胞を0(陰性対照)又は100zMの「ASO 10」で処理し、4時間インキュベーター内で保持した。ASOストック溶液は、DDWで調製した。
脊髄神経障害を有するラットにおける「ASO 7」によるアロディニアの転換。(2)
「ASO 7」を、特記しない限り、「実施例6」で述べたように、「L5/L6結紮」によって誘発された脊髄神経障害を有するラットにおけるアロディニアを転換するその能力について評価した。
-10日目に、オスSDラット(5週齢、Daehan Biolink、South Korea、www.dbl.co.kr)を「L5/L6結紮」に供した。0日目に、48匹の動物を0日目の最も低い個々のフォンフレイスコアに基づいて選択し、陰性対照群(すなわち、ASO処理なし)、プレガバリン30mg/kg、及び5、25、125及び625fmole/kgの「ASO 7」の4つの処理群の6群へ無作為に割り当てた。(1群当たり動物8匹)。
ラットに、0、3、6及び9日目の午後に0(陰性対照)、1、3又は6pmole/kgの「ASO 7」を皮下投与した。アロディニアは、午前中、「実施例5」で述べたエレクトロニックフォンフレイスコアリング法によってスコアリングした。プレガバリンは、各フォンフレットスコアリングの機会の1時間前に経口投与した。ASOは、0.1%のTween80を補充したPBSに溶解させて投与した。
図24Aに、観察されたフォンフレイスコアリングの結果を要約する。陰性対照群の動物は、4~8日にわたって約6gで安定化した平均フォンフレイスコア(逃避反射閾値)を示した。一方、プレガバリン30mg/kgの群(すなわち陽性対照群)は、約10gで安定化した平均フォンフレイスコアを示した。約21gの平均フォンフレイスコアがナイーブ動物(すなわち結紮及び処置なし)で観察されたとすれば、アロディニアは、プレガバリン処理群において2、4及び6日目に20~30%有意に転換された。
ラットにおける亜慢性炎症性疼痛に対する「ASO 2」の鎮痛活性。
「ASO 2」を、下記で述べるように、フロインド完全アジュバント(FCA)の足底内注射で苦痛を与えたラットにおける亜慢性炎症性疼痛を阻害するその能力について評価した。
-17日目に、オスSDラット(7週齢)に、100μLのFCA(カタログ番号F5881-6X10ML、Sigma)を左後足で足底内注射により投与した。
左後足の炎症性疼痛は、電子式Randall-Selitto装置[モデル2390、IITC Life sciences]を使用して、Randall-Selitto試験によってスコアリングした。ラットは、疼痛スコアリングの前に、10分間ハンモックで順応させた。(1群当たりN=5)。
処理群動物は、0日目の午後、及び1日目の午前に、100pmole/kgの「ASO 2」の投与を受けた。ASOをPBSに溶解し、皮下投与した。疼痛は、1日目に、及び4日目の午前に、投与2時間後に評価した。
図24Bに、観察した疼痛スコアを要約する。1日目のASO処理群の痛覚閾値は、0日目の値と比較して約27gに増加したが、陰性対照群の閾値は約3gに減少した。足浮腫誘発前の痛覚閾値は、約23gであった。したがって、ASO投与は、足浮腫のないレベルまで炎症性疼痛を完全に転換した。しかし、「ASO 2」の鎮痛活性は、4日目に完全にウォッシュアウトされた。
本発明は、以下の実施形態を包含する。
(実施形態1)
式Iによって表されるペプチド核酸誘導体、又はそれらの薬学的に許容される塩:
nは、10~25の整数であり;
式Iの化合物は、ヒトSCN9AプレmRNA内の[(5'→3') UGUUUAGGUACACU]の14量体プレmRNA配列と少なくとも10量体の相補的重複を有し;
式Iの化合物は、ヒトSCN9AプレmRNAに完全に相補的であるか、又は1つ若しくは2つのミスマッチによりヒトSCN9AプレmRNAに部分的に相補的であり;
S 1 、S 2 、...、S n-1 、S n 、T 1 、T 2 、...、T n-1 、及びT n は、独立して、デューテリド[D]、ヒドリド[H]、置換若しくは無置換アルキル、又は置換若しくは無置換アリール基を表し;
X及びYは、独立して、ヒドリド、ホルミル[H-C(=O)-]、アミノカルボニル[NH 2 -C(=O)-]、アミノチオカルボニル[NH 2 -C(=S)-]、置換若しくは無置換アルキル、置換若しくは無置換アリール、置換若しくは無置換アルキルアシル、置換若しくは無置換アリールアシル、置換若しくは無置換アルキルオキシカルボニル、置換若しくは無置換アリールオキシカルボニル、置換若しくは無置換アルキルアミノカルボニル、置換若しくは無置換アリールアミノカルボニル、置換若しくは無置換アルキルアミノチオカルボニル、置換若しくは無置換アリールアミノチオカルボニル、置換若しくは無置換アルキルオキシチオカルボニル、置換若しくは無置換アリールオキシチオカルボニル、置換若しくは無置換アルキルスルホニル、置換若しくは無置換アリールスルホニル、置換若しくは無置換アルキルホスホニル基、又は置換若しくは無置換アリールホスホニル基を表し;
Zは、ヒドリド、ヒドロキシ、置換若しくは無置換アルキルオキシ、置換若しくは無置換アリールオキシ、置換若しくは無置換アミノ、置換若しくは無置換アルキル、又は置換若しくは無置換アリール基を表し;
B 1 、B 2 、...、B n-1 及びB n は、独立して、アデニン、チミン、グアニン、シトシン及びウラシルを含む天然核酸塩基並びに非天然核酸塩基から選択され;
B 1 、B 2 、...、B n-1 及びB n のうちの少なくとも4つは、独立して、核酸塩基部分に共有結合されている置換又は無置換アミノ基を有する非天然核酸塩基から選択される]。
(実施形態2)
nが10~25の整数であり;
式Iの化合物が、ヒトSCN9AプレmRNA内の[(5'→3') UGUUUAGGUACACU]の14量体プレmRNA配列と少なくとも10量体の相補的重複を有し;
式Iの化合物が、ヒトSCN9AプレmRNAに完全に相補的であるか、又は1つ若しくは2つのミスマッチによりヒトSCN9AプレmRNAに部分的に相補的であり;
S 1 、S 2 、...、S n-1 、S n 、T 1 、T 2 、...、T n-1 、及びT n が、独立して、デューテリド、ヒドリド、置換若しくは無置換アルキル、又は置換若しくは無置換アリール基を表し;
X及びYが、独立して、ヒドリド、ホルミル、アミノカルボニル、アミノチオカルボニル、置換若しくは無置換アルキル、置換若しくは無置換アリール、置換若しくは無置換アルキルアシル、置換若しくは無置換アリールアシル、置換若しくは無置換アルキルオキシカルボニル、置換若しくは無置換アリールオキシカルボニル、置換若しくは無置換アルキルアミノカルボニル、置換若しくは無置換アリールアミノカルボニル、置換若しくは無置換アルキルアミノチオカルボニル、置換若しくは無置換アリールアミノチオカルボニル、置換若しくは無置換アルキルオキシチオカルボニル、置換若しくは無置換アリールオキシチオカルボニル、置換若しくは無置換アルキルスルホニル、置換若しくは無置換アリールスルホニル、置換若しくは無置換アルキルホスホニル基、又は置換若しくは無置換アリールホスホニル基を表し;
Zが、ヒドリド、ヒドロキシ、置換若しくは無置換アルキルオキシ、置換若しくは無置換アリールオキシ、置換若しくは無置換アミノ、置換若しくは無置換アルキル、又は置換若しくは無置換アリール基を表し;
B 1 、B 2 、...、B n-1 及びB n が、独立して、アデニン、チミン、グアニン、シトシン及びウラシルを含む天然核酸塩基並びに非天然核酸塩基から選択され;
B 1 、B 2 、...、B n-1 及びB n のうちの少なくとも4つが、独立して、式II、式III又は式IVによって表される非天然核酸塩基:
R 1 、R 2 、R 3 、R 4 、R 5 及びR 6 は、独立して、ヒドリド、及び置換又は無置換アルキル基から選択され;
L 1 、L 2 及びL 3 は、塩基性アミノ基を核酸塩基部分に共有結合している式V:
Q 1 及びQ m は、置換又は無置換メチレン(-CH 2 -)基であり、Q m は、塩基性アミノ基に直接結合されており;
Q 2 、Q 3 、...及びQ m-1 は、独立して、置換又は無置換メチレン、酸素(-O-)、硫黄(-S-)、及び置換又は無置換アミノ基[-N(H)-、若しくは-N(置換)-]から選択され;
mは、1から15の整数である)
によって表される共有結合リンカーである]
から選択される、
実施形態1に記載のペプチド核酸誘導体、又はそれらの薬学的に許容される塩。
(実施形態3)
S 1 、S 2 、...、S n-1 、S n 、T 1 、T 2 、...、T n-1 及びT n が、独立して、デューテリド又はヒドリド基を表し、Zが、ヒドリド、ヒドロキシ、置換若しくは無置換アルキルオキシ、置換若しくは無置換アリールオキシ、又は置換若しくは無置換アミノ基を表す、実施形態2に記載の方法。
(実施形態4)
S 1 、S 2 、...、S n-1 、S n 、T 1 、T 2 、...、T n-1 及びT n のうちの少なくとも1つが、独立して、置換若しくは無置換アルキル、又は置換若しくは無置換アリール基を表し、並びに/或いは、Zが置換若しくは無置換アルキル、又は置換若しくは無置換アリール基を表す、実施形態2に記載の方法。
(実施形態5)
nが11~21の整数であり;
式Iの化合物が、ヒトSCN9AプレmRNA内の[(5'→3') UGUUUAGGUACACU]の14量体プレmRNA配列と少なくとも10量体の相補的重複を有し;
式Iの化合物が、ヒトSCN9AプレmRNAに完全に相補的であるか、又は1つ若しくは2つのミスマッチによりヒトSCN9AプレmRNAに部分的に相補的であり;
S 1 、S 2 、...、S n-1 、S n 、T 1 、T 2 、...、T n-1 及びT n がヒドリド基であり;
X及びYが、独立して、ヒドリド、置換若しくは無置換アルキル、置換若しくは無置換アリール、置換若しくは無置換アルキルアシル、置換若しくは無置換アリールアシル、置換若しくは無置換アルキルオキシカルボニル、置換若しくは無置換アリールオキシカルボニル、置換若しくは無置換アルキルアミノカルボニル、置換若しくは無置換アリールアミノカルボニル、置換若しくは無置換アルキルスルホニル、又は置換若しくは無置換アリールスルホニル基を表し;
Zが置換又は無置換アミノ基を表し;
B 1 、B 2 、...、B n-1 及びB n が、独立して、アデニン、チミン、グアニン、シトシン及びウラシルを含む天然核酸塩基並びに非天然核酸塩基から選択され;
B 1 、B 2 、...、B n-1 及びB n のうちの少なくとも4つが、独立して、式II、式III又は式IVによって表される非天然核酸塩基から選択され;
R 1 、R 2 、R 3 、R 4 、R 5 及びR 6 が、独立して、ヒドリド、及び置換又は無置換アルキル基から選択され;
Q 1 及びQ m が置換又は無置換メチレン基であり、Q m が塩基性アミノ基に直接結合されており;
Q 2 、Q 3 、...及びQ m-1 が、独立して、置換又は無置換のメチレン、酸素及びアミノ基から選択され;
mが1~11の整数である、
実施形態1に記載のペプチド核酸誘導体、又はそれらの薬学的に許容される塩。
(実施形態6)
X及びYが、独立して、ヒドリド、置換若しくは無置換アルキル、置換若しくは無置換アリール、置換若しくは無置換アルキルアシル、置換若しくは無置換アリールアシル、置換若しくは無置換アルキルオキシカルボニル、又は置換若しくは無置換アリールオキシカルボニル基を表す、実施形態5に記載の方法。
(実施形態7)
X及びYのうちの少なくとも1つが、独立して、置換若しくは無置換アルキルアミノカルボニル、置換若しくは無置換アリールアミノカルボニル、置換若しくは無置換アルキルスルホニル、又は置換若しくは無置換アリールスルホニル基を表す、実施形態5に記載の方法。
(実施形態8)
nが11~19の整数であり;
式Iの化合物が、ヒトSCN9AプレmRNA内の[(5'→3') UGUUUAGGUACACU]の14量体プレmRNA配列と少なくとも10量体の相補的重複を有し;
式Iの化合物が、ヒトSCN9AプレmRNAに完全に相補的であり;
S 1 、S 2 、...、S n-1 、S n 、T 1 、T 2 、...、T n-1 及びT n がヒドリド基であり;
X及びYが、独立して、ヒドリド、置換若しくは無置換アルキル、置換若しくは無置換アリール、置換若しくは無置換アルキルアシル、置換若しくは無置換アリールアシル、置換若しくは無置換アルキルオキシカルボニル、置換若しくは無置換アルキルアミノカルボニル、置換若しくは無置換アルキルスルホニル、又は置換若しくは無置換アリールスルホニル基を表し;
Zが置換又は無置換アミノ基を表し;
B 1 、B 2 、...、B n-1 及びB n が、独立して、アデニン、チミン、グアニン、シトシン及びウラシルを含む天然核酸塩基並びに非天然核酸塩基から選択され;
B 1 、B 2 、...、B n-1 及びB n のうちの少なくとも4つが、独立して、式II、式III又は式IVによって表される非天然核酸塩基から選択され;
R 1 、R 2 、R 3 、R 4 、R 5 及びR 6 が、独立して、ヒドリド、及び置換又は無置換アルキル基から選択され;
Q 1 及びQ m がメチレン基であり、Q m が塩基性アミノ基に直接結合されており;
Q 2 、Q 3 、...及びQ m-1 が、独立して、メチレン、酸素及びアミノ基から選択され;
mが1~9の整数である、
実施形態1に記載のペプチド核酸誘導体、又はそれらの薬学的に許容される塩。
(実施形態9)
X及びYが、独立して、ヒドリド、置換若しくは無置換アルキルアシル、又は置換若しくは無置換アルキルオキシカルボニル基を表す、実施形態8に記載の方法。
(実施形態10)
X及びYのうちの少なくとも1つが、独立して、置換若しくは無置換アルキル、置換若しくは無置換アリール、置換若しくは無置換アリールアシル、置換若しくは無置換アルキルアミノカルボニル、置換若しくは無置換アルキルスルホニル、又は置換若しくは無置換アリールスルホニル基を表す、実施形態8に記載の方法。
(実施形態11)
nが11~19の整数であり;
式Iの化合物が、ヒトSCN9AプレmRNA内の[(5'→3') UGUUUAGGUACACU]の14量体プレmRNA配列と少なくとも10量体の相補的重複を有し;
式Iの化合物が、ヒトSCN9AプレmRNAに完全に相補的であり;
S 1 、S 2 、...、S n-1 、S n 、T 1 、T 2 、...、T n-1 及びT n がヒドリド基であり;
X及びYが、独立して、ヒドリド、置換若しくは無置換アルキル、置換若しくは無置換アリール、置換若しくは無置換アルキルアシル、置換若しくは無置換アリールアシル、置換若しくは無置換アルキルオキシカルボニル基を表し;
Zが置換又は無置換アミノ基を表し;
B 1 、B 2 、...、B n-1 及びB n が、独立して、アデニン、チミン、グアニン、シトシン及びウラシルを含む天然核酸塩基並びに非天然核酸塩基から選択され;
B 1 、B 2 、...、B n-1 及びB n のうちの少なくとも4つが、独立して、式II、式III又は式IVによって表される非天然核酸塩基から選択され;
R 1 、R 3 、及びR 5 がヒドリド基であり、R 2 、R 4 及びR 6 が、独立して、ヒドリド、又は置換若しくは無置換アルキル基を表し;
Q 1 及びQ m がメチレン基であり、Q m が塩基性アミノ基に直接結合されており;
Q 2 、Q 3 、...及びQ m-1 が、独立して、メチレン、酸素基から選択され;
mが1~8の整数である、
実施形態1に記載のペプチド核酸誘導体、又はそれらの薬学的に許容される塩。
(実施形態12)
X及びYが、独立して、ヒドリド、置換若しくは無置換アルキルアシル、又は置換若しくは無置換アルキルオキシカルボニル基を表す、実施形態11に記載の方法。
(実施形態13)
X及びYのうちの少なくとも1つが、独立して、置換若しくは無置換アルキル、置換若しくは無置換アリール、又は置換若しくは無置換アリールアシル基を表す、実施形態11に記載の方法。
(実施形態14)
nが11~19の整数であり;
式Iの化合物が、ヒトSCN9AプレmRNA内の[(5'→3') UGUUUAGGUACACU]の14量体プレmRNA配列と少なくとも10量体の相補的重複を有し;
式Iの化合物が、ヒトSCN9AプレmRNAに完全に相補的であり;
S 1 、S 2 、...、S n-1 、S n 、T 1 、T 2 、...、T n-1 及びT n がヒドリド基であり;
X及びYが、独立して、ヒドリド、置換若しくは無置換アルキルアシル、置換若しくは無置換アリールアシル、又は置換若しくは無置換アルキルオキシカルボニル基を表し;
Zが置換又は無置換アミノ基を表し;
B 1 、B 2 、...、B n-1 及びB n が、独立して、アデニン、チミン、グアニン、シトシン、及び非天然核酸塩基から選択され;
B 1 、B 2 、...、B n-1 及びB n のうちの少なくとも5つが、独立して、式II、式III又は式IVによって表される非天然核酸塩基から選択され;
R 1 、R 2 、R 3 、R 4 、R 5 及びR 6 がヒドリド基であり;
Q 1 及びQ m がメチレン基であり、Q m が塩基性アミノ基に直接結合されており;
Q 2 、Q 3 、...及びQ m-1 が、独立して、メチレン、及び酸素基から選択され;
mが1~8の整数である、
実施形態1に記載のペプチド核酸誘導体、又はそれらの薬学的に許容される塩。
(実施形態15)
X及びYが、独立して、ヒドリド、置換若しくは無置換アルキルアシル、又は置換若しくは無置換アルキルオキシカルボニル基を表す、実施形態14に記載の方法。
(実施形態16)
X及びYのうちの少なくとも1つが、独立して、置換若しくは無置換アリールアシルを表す、実施形態14に記載の方法。
(実施形態17)
nが11~19の整数であり;
式Iの化合物が、ヒトSCN9AプレmRNA内の[(5'→3') UGUUUAGGUACACU]の14量体プレmRNA配列と少なくとも10量体の相補的重複を有し;
式Iの化合物が、ヒトSCN9AプレmRNAに完全に相補的であり;
S 1 、S 2 、...、S n-1 、S n 、T 1 、T 2 、...、T n-1 及びT n がヒドリド基であり;
Xがヒドリド基であり;
Yが置換若しくは無置換アルキルアシル、置換若しくは無置換アリールアシル、又は置換若しくは無置換アルキルオキシカルボニル基を表し;
Zが置換又は無置換アミノ基を表し;
B 1 、B 2 、...、B n-1 及びB n が、独立して、アデニン、チミン、グアニン、シトシン、及び非天然核酸塩基から選択され;
B 1 、B 2 、...、B n-1 及びB n のうちの少なくとも5つが、独立して、式II、式III又は式IVによって表される非天然核酸塩基から選択され;
R 1 、R 2 、R 3 、R 4 、R 5 及びR 6 がヒドリド基であり;
L 1 が-(CH 2 ) 2 -O-(CH 2 ) 2 -、-CH 2 -O-(CH 2 ) 2 -、-CH 2 -O-(CH 2 ) 3 -、-CH 2 -O-(CH 2 ) 4 -、又は-CH 2 -O-(CH 2 ) 5 -を表し、右端が塩基性アミノ基に直接結合しており;
L 2 及びL 3 が、独立して、-(CH 2 ) 2 -、-(CH 2 ) 3 -、-(CH 2 ) 4 -、-(CH 2 ) 5 -、-(CH 2 ) 6 -、-(CH 2 ) 7 -、-(CH 2 ) 8 -、-(CH 2 ) 2 -O-(CH 2 ) 2 -、-(CH 2 ) 3 -O-(CH 2 ) 2 -、及び-(CH 2 ) 2 -O-(CH 2 ) 3 -から選択され、右端が塩基性アミノ基に直接結合している、
実施形態1に記載のペプチド核酸誘導体、又はそれらの薬学的に許容される塩。
(実施形態18)
Yが、置換若しくは無置換アルキルアシル、又は置換若しくは無置換アルキルオキシカルボニル基を表す、実施形態17に記載の方法。
(実施形態19)
Yが置換若しくは無置換アリールアシルを表す、実施形態17に記載の方法。
(実施形態20)
下記で提供されているペプチド核酸誘導体:
(N → C) Fethoc-TA(5)A-A(5)AG(6)-TG(6)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)-NH 2 ;
(N → C) Fethoc-TA(5)A-A(4)AG(6)-TG(6)T-A(5)CC(1O3)-TA(5)A-A-NH 2 ;
(N → C) Fmoc-TA(5)A-A(4)AG(6)-TG(6)T-A(5)CC(1O3)-TA(5)A-A-NH 2 ;
(N → C) Piv-Leu-TA(5)A-A(5)AG(3O2)-TG(6)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)-NH 2 ;
(N → C) Fethoc-TA(5)T-A(5)AG(6)-TG(6)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)-NH 2 ;
(N → C) ベンゾイル-Gly-TA(2O2)A-A(5)AG(6)-TG(6)T-A(5)CT-TA(5)A-Lys-NH 2 ;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TG(6)T-A(5)CC(1O2)-TAA(5)-A-NH 2 ;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-CG(6)T-A(5)CC(1O2)-TAA(5)-A-NH 2 ;
(N → C) Fmoc-AA(5)G-TG(6)T-A(5)CC(1O2)-TAA(5)-A-NH 2 ;
(N → C) ベンゼンスルホニル-AA(5)G-TG(6)T-A(5)CC(1O2)-TAA(5)-A-NH 2 ;
(N → C) Ac-AA(5)G-TG(6)T-A(5)CC(1O2)-TAA(5)-A-NH 2 ;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(3)A-A(5)-NH 2 ;
(N → C) Fmoc-AA(5)G-TG(6)T-AC(1O2)C-TAA(5)-A-NH 2 ;
(N → C) メチル-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(3)A-A(5)-Gly-Arg-NH 2 ;
(N → C) Fethoc-A(5)AG-TG(6)T-A(5)CC(1O2)-TAA-A(5)-NH 2 ;
(N → C) Ac-Val-A(5)AG-TG(6)T-A(5)CC(1O2)-TAA-A(5)-NH 2 ;
(N → C) Fethoc-AAG(6)-TG(6)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A-NH 2 ;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)-NH 2;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)C-NH 2 ;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TG(5)T-A(5)AC(1O2)-TA(5)T-A(5)C-NH 2 ;
(N → C) H-AA(5)G-TG(2O2)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)C-NH 2 ;
(N → C) Fethoc-Lys-Leu-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(2O2)A-A(5)C-Lys-NH 2 ;
(N → C) [N-(2-フェニルエチル)アミノ]カルボニル-AA(3)G-TG(5)T-A(5)CC(1O5)-TA(5)A-A(5)C-NH 2 ;
(N → C) N,N-フェニル-Me-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(4)C-NH 2 ;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TA(5)T-A(5)CC(1O2)-TG(5)A-A(5)C-NH 2 ;
(N → C) p-トルエンスルホニル-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)C-NH 2 ;
(N → C) p-トルエンスルホニル-AA(5)G-TG(2O3)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)C-Lys-NH 2 ;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TG(2O3)T-A(5)CC(1O3)-TA(7)A-A(5)C-NH 2 ;
(N → C) n-プロピル-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O3)-TA(5)A-A(5)C-NH 2 ;
(N → C) ベンゾイル-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)C-NH 2 ;
(N → C) ベンジル-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O3)-TA(5)A-A(5)C-NH 2 ;
(N → C) ベンゾイル-AA(5)G-TG(3)T-A(5)CC(2O2)-TA(5)A-A(5)C-NH 2 ;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)C-Leu-Lys-NH 2 ;
(N → C) Piv-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)C-NH 2 ;
(N → C) Fethoc-TA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)C-NH 2 ;
(N → C) Fethoc-AA(5)C-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)C-NH 2 ;
(N → C) メチルスルホニル-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)C-NH 2 ;
(N → C) n-ヘキシル-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)C-NH 2 ;
(N → C) n-ヘキサノイル-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)C-NH 2 ;
(N → C) n-ヘキサノイル-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(8)A-A(5)C-NH 2 ;
(N → C) Fethoc-AA(3)G-TG(2O2)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)C-NH 2 ;
(N → C) Fethoc-AA(3)G-TG(2O2)T-A(5)CC(1O3)-TA(5)A-A(5)C-NH 2 ;
(N → C) Fethoc-AA(3)G-TG(2O2)T-A(5)CC(2O2)-TA(5)A-A(5)C-NH 2 ;
(N → C) FAM-HEX-HEX-AA(3)G-TG(2O2)T-A(5)CC(2O2)-TA(5)A-A(5)C-NH 2 ;
(N → C) Fethoc-A(5)GT-G(5)TA(5)-CC(1O2)T-A(5)AA(5)-C-NH 2 ;
(N → C) Fethoc-AG(5)T-G(7)TA-CC(1O2)T-AA(6)A-C-NH 2 ;
(N → C) Fethoc-AA(6)G-TG(5)T-A(6)CC(1O2)-TA(6)A-A(6)C-NH 2 ;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(3)CA-C(1O5)AA-NH 2 ;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TCT-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(3)CA-C(1O5)AA-NH 2 ;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TCT-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(3)CA(3)-CTA-NH 2 ;
(N → C) Fethoc-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(3)CA-CA(7)A-NH 2 ;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(3)CA(5)-C-NH 2 ;
(N → C) Fethoc-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(3)CA(5)-C-NH 2 ;
(N → C) p-トルエンスルホニル-TG(2O3)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(3)CA-C-Lys-NH 2 ;
(N → C) Fethoc-TG(5)T-A(5)CC(2O2)-TA(5)A-A(3)CA-CA(5)A-NH 2 ;
(N → C) Piv-TG(5)T-A(5)CC(2O2)-TA(5)A-A(3)CA-CA(5)A-NH 2 ;
(N → C) ベンゾイル-TG(5)T-A(5)CC(2O2)-TA(5)A-A(3)CA-CA(5)A-NH 2 ;
(N → C) プロピオニル-TG(5)T-A(5)CC(2O2)-TA(5)A-A(3)CA-CA(5)A-NH 2 ;
(N → C) Fethoc-TG(5)T-A(5)CC(2O2)-TA(5)A-A(3)CA-CA(5)A-Arg-Val-NH 2 ;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)G-NH 2 ;
(N → C) Fethoc-AG(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)G-NH 2 ;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)CA-NH 2 ;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)GG-NH 2 ;及び、
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TG(5)T-ACC(1O2)-TA(5)A-A(5)CA(5)-C-NH 2 :
[式中、
A、G、T及びCは、それぞれ、アデニン、グアニン、チミン及びシトシンの天然核酸塩基を有するPNAモノマーであり;
C(pOq)、A(p)、A(pOq)、G(p)及びG(pOq)は、それぞれ、式VI、式VII、式VIII、式IX、及び式X
式中、p及びqは整数であり;
N末端及びC末端の置換基に関する略語は、特に以下のように定義される:「Fmoc-」は、「[(9-フルオレニル)メチルオキシ]カルボニル-」の略語であり;「Fethoc-」は、「[2-(9-フルオレニル)エチル-1-オキシ]カルボニル」の略語であり;「Ac-」は、「アセチル-」の略語であり;「n-ヘキサノイル-」は、「1-(n-ヘキサノイル)-」の略語であり;「ベンゾイル-」は、「ベンゼンカルボニル-」の略語であり;「Piv-」は、「ピバリル-」の略語であり;「n-プロピル-」は、「1-(n-プロピル)-」の略語であり;「n-ヘキシル-」は、「1-(n-ヘキシル)-」の略語であり;「H-」は、「ヒドリド-」の略語であり;「p-トルエンスルホニル」は、「(4-メチルベンゼン)-1-スルホニル-」の略語であり;「ベンゼンスルホニル」は、「ベンゼン-1-スルホニル-」の略語であり;「メチルスルホニル」は、「メチル-1-スルホニル-」の略語であり;「-Lys-」は、アミノ酸残基「リジン」の略語であり;「-Val-」は、アミノ酸残基「バリン」の略語であり;「-Leu-」は、アミノ酸残基「ロイシン」の略語であり;「-Arg-」は、アミノ酸残基「アルギニン」の略語であり;「-Gly-」は、アミノ酸残基「グリシン」の略語であり;「[N-(2-フェニルエチル)アミノ]カルボニル-」は、「[N-1-(2-フェニルエチル)-アミノ]カルボニル-」の略語であり;「ベンジル-」は、「1-(フェニル)メチル-」の略語であり;「フェニル-」は、「フェニル-」の略語であり;「Me-」は、「メチル-」の略語であり;「-HEX-」は、6-アミノ-1-ヘキサノイル-」の略語であり;「FAM-」は、「5-又は6-フルオレセイン-カルボニル-」(異性体混合物)の略語であり;「-NH 2 」は、無置換の「-アミノ」基の略語である]
の群から選択される、実施形態1に記載のペプチド核酸誘導体、又はそれらの薬学的に許容される塩。
(実施形態21)
実施形態1に記載のペプチド核酸誘導体を投与することによってNa v 1.7活性が関与する状態又は疼痛を処置する方法。
(実施形態22)
実施形態1に記載のペプチド核酸誘導体を投与することによって慢性的疼痛を処置する方法。
(実施形態23)
実施形態1に記載のペプチド核酸誘導体を投与することによって神経障害性疼痛を処置する方法。
(実施形態24)
実施形態1に記載のペプチド核酸誘導体を投与することによってNa v 1.7活性が関与する疼痛を処置する方法。
Claims (19)
- 式Iによって表されるペプチド核酸誘導体、又はそれらの薬学的に許容される塩:
nは、12~25の整数であり;
式Iの化合物は、ヒトSCN9AプレmRNA内の
の20量体プレmRNA配列と太字でマークした位置において少なくとも13量体の相補的重複を有し;
式Iの化合物は、ヒトSCN9AプレmRNAに完全に相補的であるか、又は1つ若しくは2つのミスマッチによりヒトSCN9AプレmRNAに部分的に相補的であり;
S1、S2、...、Sn-1、Sn、T1、T2、...、Tn-1、及びTnは、ヒドリド[H]基を表し;
X及びYは、独立して、ヒドリド、又は置換若しくは無置換アルキルオキシカルボニル基を表し;
Zは、アミノ基を表し;
B1、B2、...、Bn-1及びBnは、独立して、アデニン、チミン、グアニン、シトシン及びウラシルを含む天然核酸塩基並びに非天然核酸塩基から選択され;
B1、B2、...、Bn-1及びBnのうちの少なくとも4つは、独立して、非天然核酸塩基から選択され、非天然核酸塩基が、式II、式III又は式IV:
R 1 、R 2 、R 3 、R 4 、R 5 及びR 6 は、ヒドリド基であり;
L 1 、L 2 及びL 3 は、塩基性アミノ基を核酸塩基部分に共有結合している式V:
Q 1 及びQ m は、メチレン(-CH 2 -)基であり、Q m は、塩基性アミノ基に直接結合されており;
Q 2 、Q 3 、...及びQ m-1 は、独立して、メチレン、及び酸素(-O-)から選択され;
mは、1から15の整数である)
によって表される共有結合リンカーである]
によって表される]。 - nが12~21の整数であり;
式Iの化合物が、ヒトSCN9AプレmRNA内の
の20量体プレmRNA配列と太字でマークした位置において少なくとも13量体の相補的重複を有し;
式Iの化合物が、ヒトSCN9AプレmRNAに完全に相補的であるか、又は1つ若しくは2つのミスマッチによりヒトSCN9AプレmRNAに部分的に相補的であり;
S1、S2、...、Sn-1、Sn、T1、T2、...、Tn-1及びTnがヒドリド基であり;
X及びYが、独立して、ヒドリド、又は置換若しくは無置換アルキルオキシカルボニル基を表し;
Zがアミノ基を表し;
B1、B2、...、Bn-1及びBnが、独立して、アデニン、チミン、グアニン、シトシン及びウラシルを含む天然核酸塩基並びに非天然核酸塩基から選択され;
B1、B2、...、Bn-1及びBnのうちの少なくとも4つが、独立して、非天然核酸塩基から選択され、非天然核酸塩基が、式II、式III又は式IV:
[式中、
R1、R2、R3、R4、R5及びR6が、ヒドリド基であり;
Q1及びQmがメチレン基であり、Qmが塩基性アミノ基に直接結合されており;
Q2、Q3、...及びQm-1が、独立して、置換又は無置換のメチレン、及び酸素から選択され;
mが1~11の整数である]
によって表される、
請求項1に記載のペプチド核酸誘導体、又はそれらの薬学的に許容される塩。 - nが12~19の整数であり;
式Iの化合物が、ヒトSCN9AプレmRNA内の
の20量体プレmRNA配列と少なくとも13量体の相補的重複を有し;
式Iの化合物が、ヒトSCN9AプレmRNAに完全に相補的であり;
S1、S2、...、Sn-1、Sn、T1、T2、...、Tn-1及びTnがヒドリド基であり;
X及びYが、独立して、ヒドリド、又は置換若しくは無置換アルキルオキシカルボニル基を表し;
Zがアミノ基を表し;
B1、B2、...、Bn-1及びBnが、独立して、アデニン、チミン、グアニン、シトシン及びウラシルを含む天然核酸塩基並びに非天然核酸塩基から選択され;
B1、B2、...、Bn-1及びBnのうちの少なくとも4つが、独立して、非天然核酸塩基から選択され、非天然核酸塩基が、式II、式III又は式IV:
[式中、
R1、R2、R3、R4、R5及びR6が、ヒドリド基であり;
Q1及びQmがメチレン基であり、Qmが塩基性アミノ基に直接結合されており;
Q2、Q3、...及びQm-1が、独立して、メチレン、及び酸素から選択され;
mが1~9の整数である]
によって表される、
請求項1に記載のペプチド核酸誘導体、又はそれらの薬学的に許容される塩。 - nが12~19の整数であり;
式Iの化合物が、ヒトSCN9AプレmRNA内の
の20量体プレmRNA配列と少なくとも13量体の相補的重複を有し;
式Iの化合物が、ヒトSCN9AプレmRNAに完全に相補的であり;
S1、S2、...、Sn-1、Sn、T1、T2、...、Tn-1及びTnがヒドリド基であり;
X及びYが、独立して、ヒドリド、又は置換若しくは無置換アルキルオキシカルボニル基を表し;
Zがアミノ基を表し;
B1、B2、...、Bn-1及びBnが、独立して、アデニン、チミン、グアニン、シトシン及びウラシルを含む天然核酸塩基並びに非天然核酸塩基から選択され;
B1、B2、...、Bn-1及びBnのうちの少なくとも4つが、独立して、非天然核酸塩基から選択され、非天然核酸塩基が、式II、式III又は式IV:
[式中、
R1、R2、R3、R4、R5及びR6がヒドリド基であり;
Q1及びQmがメチレン基であり、Qmが塩基性アミノ基に直接結合されており;
Q2、Q3、...及びQm-1が、独立して、メチレン、及び酸素基から選択され;
mが1~8の整数である]
によって表される、
請求項1に記載のペプチド核酸誘導体、又はそれらの薬学的に許容される塩。 - nが12~19の整数であり;
式Iの化合物が、ヒトSCN9AプレmRNA内の
の20量体プレmRNA配列と少なくとも13量体の相補的重複を有し;
式Iの化合物が、ヒトSCN9AプレmRNAに完全に相補的であり;
S1、S2、...、Sn-1、Sn、T1、T2、...、Tn-1及びTnがヒドリド基であり;
X及びYが、独立して、ヒドリド、又は置換若しくは無置換アルキルオキシカルボニル基を表し;
Zがアミノ基を表し;
B1、B2、...、Bn-1及びBnが、独立して、アデニン、チミン、グアニン、シトシン、及び非天然核酸塩基から選択され;
B1、B2、...、Bn-1及びBnのうちの少なくとも5つが、独立して、非天然核酸塩基から選択され、非天然核酸塩基が、式II、式III又は式IV:
[式中、
R1、R2、R3、R4、R5及びR6がヒドリド基であり;
Q1及びQmがメチレン基であり、Qmが塩基性アミノ基に直接結合されており;
Q2、Q3、...及びQm-1が、独立して、メチレン、及び酸素基から選択され;
mが1~8の整数である]
によって表される、
請求項1に記載のペプチド核酸誘導体、又はそれらの薬学的に許容される塩。 - nが12~19の整数であり;
式Iの化合物が、ヒトSCN9AプレmRNA内の
の20量体プレmRNA配列と少なくとも13量体の相補的重複を有し;
式Iの化合物が、ヒトSCN9AプレmRNAに完全に相補的であり;
S1、S2、...、Sn-1、Sn、T1、T2、...、Tn-1及びTnがヒドリド基であり;
Xがヒドリド基であり;
Yが置換若しくは無置換アルキルオキシカルボニル基を表し;
Zがアミノ基を表し;
B1、B2、...、Bn-1及びBnが、独立して、アデニン、チミン、グアニン、シトシン、及び非天然核酸塩基から選択され;
B1、B2、...、Bn-1及びBnのうちの少なくとも5つが、独立して、非天然核酸塩基から選択され、非天然核酸塩基が、式II、式III又は式IV:
[式中、
R1、R2、R3、R4、R5及びR6がヒドリド基であり;
L1が-(CH2)2-O-(CH2)2-、-CH2-O-(CH2)2-、-CH2-O-(CH2)3-、-CH2-O-(CH2)4-、又は-CH2-O-(CH2)5-を表し、右端が塩基性アミノ基に直接結合しており;
L2及びL3が、独立して、-(CH2)2-、-(CH2)3-、-(CH2)4-、-(CH2)5-、-(CH2)6-、-(CH2)7-、-(CH2)8-、-(CH2)2-O-(CH2)2-、-(CH2)3-O-(CH2)2-、及び-(CH2)2-O-(CH2)3-から選択され、右端が塩基性アミノ基に直接結合している]
によって表される、
請求項1に記載のペプチド核酸誘導体、又はそれらの薬学的に許容される塩。 - 下記で提供されているペプチド核酸誘導体:
(N → C) Fethoc-TA(5)A-A(5)AG(6)-TG(6)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)-NH2;
(N → C) Fethoc-TA(5)A-A(4)AG(6)-TG(6)T-A(5)CC(1O3)-TA(5)A-A-NH2;
(N → C) Fmoc-TA(5)A-A(4)AG(6)-TG(6)T-A(5)CC(1O3)-TA(5)A-A-NH2;
(N → C) Fethoc-TA(5)T-A(5)AG(6)-TG(6)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)-NH2;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TG(6)T-A(5)CC(1O2)-TAA(5)-A-NH2;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-CG(6)T-A(5)CC(1O2)-TAA(5)-A-NH2;
(N → C) Fmoc-AA(5)G-TG(6)T-A(5)CC(1O2)-TAA(5)-A-NH2;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(3)A-A(5)-NH2;
(N → C) Fmoc-AA(5)G-TG(6)T-AC(1O2)C-TAA(5)-A-NH2;
(N → C) Fethoc-A(5)AG-TG(6)T-A(5)CC(1O2)-TAA-A(5)-NH2;
(N → C) Fethoc-AAG(6)-TG(6)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A-NH2;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)-NH2;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)C-NH2;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TG(5)T-A(5)AC(1O2)-TA(5)T-A(5)C-NH2;
(N → C) H-AA(5)G-TG(2O2)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)C-NH2 ;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TG(2O3)T-A(5)CC(1O3)-TA(7)A-A(5)C-NH2 ;
(N → C) Fethoc-AA(3)G-TG(2O2)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)C-NH2;
(N → C) Fethoc-AA(3)G-TG(2O2)T-A(5)CC(1O3)-TA(5)A-A(5)C-NH2;
(N → C) Fethoc-AA(3)G-TG(2O2)T-A(5)CC(2O2)-TA(5)A-A(5)C-NH2 ;
(N → C) Fethoc-AA(6)G-TG(5)T-A(6)CC(1O2)-TA(6)A-A(6)C-NH2;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(3)CA-C(1O5)AA-NH2 ;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(3)CA(5)-C-NH2 ;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)G-NH2 ;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)CA-NH2;
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TG(5)T-A(5)CC(1O2)-TA(5)A-A(5)GG-NH2;及び、
(N → C) Fethoc-AA(5)G-TG(5)T-ACC(1O2)-TA(5)A-A(5)CA(5)-C-NH2:
[式中、
A、G、T及びCは、それぞれ、アデニン、グアニン、チミン及びシトシンの天然核酸塩基を有するPNAモノマーであり;
C(pOq)、A(p)、A(pOq)、G(p)及びG(pOq)は、それぞれ、式VI、式VII、式VIII、式IX、及び式X
式中、p及びqは整数であり;
N末端及びC末端の置換基に関する略語は、特に以下のように定義される:「Fmoc-」は、「[(9-フルオレニル)メチルオキシ]カルボニル-」の略語であり;「Fethoc-」は、「[2-(9-フルオレニル)エチル-1-オキシ]カルボニル」の略語であり;「-NH2」は、無置換の「-アミノ」基の略語である]
の群から選択される、請求項1に記載のペプチド核酸誘導体、又はそれらの薬学的に許容される塩。 - 請求項1~7のいずれか一項に記載のペプチド核酸誘導体、又はそれらの薬学的に許容される塩を含む、該ペプチド核酸誘導体を投与することによってNav1.7活性が関与する状態又は疼痛を処置するための医薬。
- 請求項1~7のいずれか一項に記載のペプチド核酸誘導体、又はそれらの薬学的に許容される塩を含む、該ペプチド核酸誘導体を投与することによって慢性的疼痛を処置するための医薬。
- 請求項1~7のいずれか一項に記載のペプチド核酸誘導体、又はそれらの薬学的に許容される塩を含む、該ペプチド核酸誘導体を投与することによって神経障害性疼痛を処置するための医薬。
- 請求項1~7のいずれか一項に記載のペプチド核酸誘導体、又はそれらの薬学的に許容される塩を含む、該ペプチド核酸誘導体を投与することによってNav1.7活性が関与する疼痛を処置するための医薬。
- 請求項1~7のいずれか一項に記載のペプチド核酸誘導体、又はそれらの薬学的に許容される塩を含む、Nav1.7活性が関与する状態又は疼痛を処置するための医薬組成物。
- 請求項1~7のいずれか一項に記載のペプチド核酸誘導体、又はそれらの薬学的に許容される塩を含む、慢性的疼痛を処置するための医薬組成物。
- 請求項1~7のいずれか一項に記載のペプチド核酸誘導体、又はそれらの薬学的に許容される塩を含む、神経障害性疼痛を処置するための医薬組成物。
- 請求項1~7のいずれか一項に記載のペプチド核酸誘導体、又はそれらの薬学的に許容される塩を含む、Nav1.7活性が関与する疼痛を処置するための医薬組成物。
- Nav1.7活性が関与する状態又は疼痛を処置するための医薬の製造における、請求項1~7のいずれか一項に記載のペプチド核酸誘導体、又はそれらの薬学的に許容される塩の使用。
- 慢性的疼痛を処置するための医薬の製造における、請求項1~7のいずれか一項に記載のペプチド核酸誘導体、又はそれらの薬学的に許容される塩の使用。
- 神経障害性疼痛を処置するための医薬の製造における、請求項1~7のいずれか一項に記載のペプチド核酸誘導体、又はそれらの薬学的に許容される塩の使用。
- Nav1.7活性が関与する疼痛を処置するための医薬の製造における、請求項1~7のいずれか一項に記載のペプチド核酸誘導体、又はそれらの薬学的に許容される塩の使用。
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