JP7233149B2 - 眼咽頭型筋ジストロフィー(opmd)を治療するための試薬及びその使用 - Google Patents
眼咽頭型筋ジストロフィー(opmd)を治療するための試薬及びその使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7233149B2 JP7233149B2 JP2019532105A JP2019532105A JP7233149B2 JP 7233149 B2 JP7233149 B2 JP 7233149B2 JP 2019532105 A JP2019532105 A JP 2019532105A JP 2019532105 A JP2019532105 A JP 2019532105A JP 7233149 B2 JP7233149 B2 JP 7233149B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- seq
- set forth
- effector
- nucleic acid
- shmir
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 201000009110 Oculopharyngeal muscular dystrophy Diseases 0.000 title claims description 90
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title description 14
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 979
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 972
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 972
- 239000012636 effector Substances 0.000 claims description 720
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 577
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 558
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims description 246
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 167
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 110
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 101
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 101
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 98
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 claims description 74
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 65
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 claims description 61
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 39
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 38
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 38
- 101000609211 Homo sapiens Polyadenylate-binding protein 2 Proteins 0.000 claims description 30
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 29
- 238000012228 RNA interference-mediated gene silencing Methods 0.000 claims description 24
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 claims description 24
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 claims description 21
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 15
- 108020005065 3' Flanking Region Proteins 0.000 claims description 14
- 108020005029 5' Flanking Region Proteins 0.000 claims description 14
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 9
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 claims description 7
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 6
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 claims description 5
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 claims description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 2
- 102100039427 Polyadenylate-binding protein 2 Human genes 0.000 claims 15
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 219
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 199
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 195
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 description 174
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 139
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 93
- 238000000034 method Methods 0.000 description 45
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 42
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 32
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 26
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 24
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 23
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 22
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 22
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 20
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 20
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 19
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 18
- -1 2 nucleic acids Chemical class 0.000 description 17
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 16
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 15
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 15
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 15
- 241000894007 species Species 0.000 description 15
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 15
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 14
- 102000051773 human PABPN1 Human genes 0.000 description 14
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 14
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 13
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 13
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 12
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 11
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 11
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 11
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 11
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 11
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 10
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 10
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 description 10
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 10
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 9
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 9
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 9
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 8
- 238000012226 gene silencing method Methods 0.000 description 8
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 8
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 8
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 8
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 8
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 101150003773 pabpn1 gene Proteins 0.000 description 7
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 7
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 7
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 7
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 6
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 6
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 6
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 6
- 238000012761 co-transfection Methods 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 6
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 6
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 6
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 6
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 6
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 6
- 230000009747 swallowing Effects 0.000 description 6
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 5
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 5
- 108091036066 Three prime untranslated region Proteins 0.000 description 5
- 229920006317 cationic polymer Polymers 0.000 description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 238000003197 gene knockdown Methods 0.000 description 5
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 5
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 5
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 5
- 108010054442 polyalanine Proteins 0.000 description 5
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 5
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 4
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 4
- 208000010428 Muscle Weakness Diseases 0.000 description 4
- 206010028372 Muscular weakness Diseases 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 4
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 4
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 238000013461 design Methods 0.000 description 4
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 4
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 4
- 210000001739 intranuclear inclusion body Anatomy 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 4
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 4
- 108091007428 primary miRNA Proteins 0.000 description 4
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 description 4
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 4
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 4
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 3
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 3
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 3
- 208000019505 Deglutition disease Diseases 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 102100031780 Endonuclease Human genes 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 206010015995 Eyelid ptosis Diseases 0.000 description 3
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 3
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 3
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 3
- 241000242739 Renilla Species 0.000 description 3
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- 125000003295 alanine group Chemical class N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 3
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 3
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 3
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 3
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical group 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 3
- 201000003004 ptosis Diseases 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 3
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 3
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 3
- 230000002463 transducing effect Effects 0.000 description 3
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 3
- UKRWCEJTOPSTEC-RDTXWAMCSA-N (6ar,9r)-4-acetyl-n-ethyl-7-methyl-6,6a,8,9-tetrahydroindolo[4,3-fg]quinoline-9-carboxamide Chemical compound C1=CC(C=2[C@H](N(C)C[C@@H](C=2)C(=O)NCC)C2)=C3C2=CN(C(C)=O)C3=C1 UKRWCEJTOPSTEC-RDTXWAMCSA-N 0.000 description 2
- NRJAVPSFFCBXDT-HUESYALOSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC NRJAVPSFFCBXDT-HUESYALOSA-N 0.000 description 2
- 108020005075 5S Ribosomal RNA Proteins 0.000 description 2
- 239000013607 AAV vector Substances 0.000 description 2
- 241000702423 Adeno-associated virus - 2 Species 0.000 description 2
- 241000711404 Avian avulavirus 1 Species 0.000 description 2
- 241000713704 Bovine immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- 208000014644 Brain disease Diseases 0.000 description 2
- 101100297347 Caenorhabditis elegans pgl-3 gene Proteins 0.000 description 2
- 101710177611 DNA polymerase II large subunit Proteins 0.000 description 2
- 101710184669 DNA polymerase II small subunit Proteins 0.000 description 2
- 241000450599 DNA viruses Species 0.000 description 2
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 description 2
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 2
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 2
- 208000032274 Encephalopathy Diseases 0.000 description 2
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 2
- 241000713730 Equine infectious anemia virus Species 0.000 description 2
- 241000713800 Feline immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 2
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 2
- 102100034051 Heat shock protein HSP 90-alpha Human genes 0.000 description 2
- 101001016865 Homo sapiens Heat shock protein HSP 90-alpha Proteins 0.000 description 2
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 2
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 2
- 108020004684 Internal Ribosome Entry Sites Proteins 0.000 description 2
- 241000711408 Murine respirovirus Species 0.000 description 2
- 101100189100 Mus musculus Pabpn1 gene Proteins 0.000 description 2
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 2
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 2
- 238000009004 PCR Kit Methods 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 2
- 102000009572 RNA Polymerase II Human genes 0.000 description 2
- 108010009460 RNA Polymerase II Proteins 0.000 description 2
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 2
- 239000013614 RNA sample Substances 0.000 description 2
- 241000710961 Semliki Forest virus Species 0.000 description 2
- 108091081021 Sense strand Proteins 0.000 description 2
- 241000713311 Simian immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- 241000710960 Sindbis virus Species 0.000 description 2
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 2
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 2
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 2
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002298 density-gradient ultracentrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000010864 dual luciferase reporter gene assay Methods 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 2
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 2
- NBQNWMBBSKPBAY-UHFFFAOYSA-N iodixanol Chemical compound IC=1C(C(=O)NCC(O)CO)=C(I)C(C(=O)NCC(O)CO)=C(I)C=1N(C(=O)C)CC(O)CN(C(C)=O)C1=C(I)C(C(=O)NCC(O)CO)=C(I)C(C(=O)NCC(O)CO)=C1I NBQNWMBBSKPBAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004359 iodixanol Drugs 0.000 description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 229910052754 neon Inorganic materials 0.000 description 2
- GKAOGPIIYCISHV-UHFFFAOYSA-N neon atom Chemical compound [Ne] GKAOGPIIYCISHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 229920000729 poly(L-lysine) polymer Polymers 0.000 description 2
- 229920001606 poly(lactic acid-co-glycolic acid) Polymers 0.000 description 2
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 2
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical group O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 2
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 2
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 2
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 2
- 238000011870 unpaired t-test Methods 0.000 description 2
- IIBCJNSFAIYYJJ-UHFFFAOYSA-N 1,3-dichloro-7-hydroxy-9,9-dimethyl-9H-acridin-2-one Chemical compound C1=C(O)C=C2C(C)(C)C3=C(Cl)C(=O)C(Cl)=CC3=NC2=C1 IIBCJNSFAIYYJJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005345 3' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 1
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 101710169336 5'-deoxyadenosine deaminase Proteins 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001164825 Adeno-associated virus - 8 Species 0.000 description 1
- 102100036664 Adenosine deaminase Human genes 0.000 description 1
- 102100027211 Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 206010003497 Asphyxia Diseases 0.000 description 1
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 208000004130 Blepharoptosis Diseases 0.000 description 1
- 241000282832 Camelidae Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- 108010035563 Chloramphenicol O-acetyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 1
- 241000777300 Congiopodidae Species 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 238000012270 DNA recombination Methods 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 241000252212 Danio rerio Species 0.000 description 1
- 108090000204 Dipeptidase 1 Proteins 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 238000003718 Dual-Luciferase Reporter Assay System Methods 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 1
- 241000160765 Erebia ligea Species 0.000 description 1
- 101001091269 Escherichia coli Hygromycin-B 4-O-kinase Proteins 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical class OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102000053187 Glucuronidase Human genes 0.000 description 1
- 108010060309 Glucuronidase Proteins 0.000 description 1
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 208000035186 Hemolytic Autoimmune Anemia Diseases 0.000 description 1
- 102100034523 Histone H4 Human genes 0.000 description 1
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 description 1
- 101001138480 Homo sapiens Olfactory receptor 5AC2 Proteins 0.000 description 1
- 108010025815 Kanamycin Kinase Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241000254158 Lampyridae Species 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241000713869 Moloney murine leukemia virus Species 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 1
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 102100020806 Olfactory receptor 5AC2 Human genes 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241000701945 Parvoviridae Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000010292 Peptide Elongation Factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010077524 Peptide Elongation Factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 201000007902 Primary cutaneous amyloidosis Diseases 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000012083 RIPA buffer Substances 0.000 description 1
- 102000017143 RNA Polymerase I Human genes 0.000 description 1
- 108010013845 RNA Polymerase I Proteins 0.000 description 1
- 102000014450 RNA Polymerase III Human genes 0.000 description 1
- 108010078067 RNA Polymerase III Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000712907 Retroviridae Species 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 101001091268 Streptomyces hygroscopicus Hygromycin-B 7''-O-kinase Proteins 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 206010042566 Superinfection Diseases 0.000 description 1
- 108700026226 TATA Box Proteins 0.000 description 1
- 241000255588 Tephritidae Species 0.000 description 1
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 108090000848 Ubiquitin Proteins 0.000 description 1
- 102000044159 Ubiquitin Human genes 0.000 description 1
- 108091023045 Untranslated Region Proteins 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 241000711975 Vesicular stomatitis virus Species 0.000 description 1
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 1
- 208000010094 Visna Diseases 0.000 description 1
- 235000010724 Wisteria floribunda Nutrition 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 102000006646 aminoglycoside phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 201000000448 autoimmune hemolytic anemia Diseases 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-TXICZTDVSA-N beta-D-ribose Chemical group OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-TXICZTDVSA-N 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 102000006635 beta-lactamase Human genes 0.000 description 1
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 description 1
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N bis-tris Chemical compound OCCN(CCO)C(CO)(CO)CO OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 229910052792 caesium Inorganic materials 0.000 description 1
- TVFDJXOCXUVLDH-UHFFFAOYSA-N caesium atom Chemical compound [Cs] TVFDJXOCXUVLDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000002032 cellular defenses Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 229940097362 cyclodextrins Drugs 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000000326 densiometry Methods 0.000 description 1
- 238000010217 densitometric analysis Methods 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 238000007876 drug discovery Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 238000001839 endoscopy Methods 0.000 description 1
- 238000002580 esophageal motility study Methods 0.000 description 1
- SUPCQIBBMFXVTL-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-methylprop-2-enoate Chemical compound CCOC(=O)C(C)=C SUPCQIBBMFXVTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 210000000744 eyelid Anatomy 0.000 description 1
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 1
- 239000010419 fine particle Substances 0.000 description 1
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000012224 gene deletion Methods 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 102000054584 human Y acceptor Human genes 0.000 description 1
- 108700023876 human Y acceptor Proteins 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 description 1
- 238000011503 in vivo imaging Methods 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 108091043187 miR-30a stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 201000006938 muscular dystrophy Diseases 0.000 description 1
- 210000003098 myoblast Anatomy 0.000 description 1
- 210000000107 myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000001885 myotomy Methods 0.000 description 1
- RSILPKJOINTLOK-UJRRQQMQSA-N n-[2-[2-[(2r,3r,4r,5r,6r)-3-acetamido-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyethoxy]ethyl]-3-(4-methyl-2,5-dioxofuran-3-yl)propanamide Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OCCOCCNC(=O)CCC1=C(C)C(=O)OC1=O RSILPKJOINTLOK-UJRRQQMQSA-N 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 125000002347 octyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940021222 peritoneal dialysis isotonic solution Drugs 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 101150047627 pgk gene Proteins 0.000 description 1
- 101150079312 pgk1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150095149 pgkA gene Proteins 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 102000028499 poly(A) binding Human genes 0.000 description 1
- 108091023021 poly(A) binding Proteins 0.000 description 1
- 229920000962 poly(amidoamine) Polymers 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000000751 protein extraction Methods 0.000 description 1
- 230000004853 protein function Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000001698 pyrogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000003762 quantitative reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 1
- 238000009877 rendering Methods 0.000 description 1
- 238000009256 replacement therapy Methods 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000011477 surgical intervention Methods 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 1
- 239000005526 vasoconstrictor agent Substances 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 239000000277 virosome Substances 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
- C12N15/861—Adenoviral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
- C12N15/864—Parvoviral vectors, e.g. parvovirus, densovirus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
- C12N15/867—Retroviral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
- C12N2310/141—MicroRNAs, miRNAs
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/50—Physical structure
- C12N2310/53—Physical structure partially self-complementary or closed
- C12N2310/531—Stem-loop; Hairpin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2330/00—Production
- C12N2330/50—Biochemical production, i.e. in a transformed host cell
- C12N2330/51—Specially adapted vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/10043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/10041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2740/10043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/15011—Lentivirus, not HIV, e.g. FIV, SIV
- C12N2740/15041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2740/15043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
- C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2750/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
- C12N2830/008—Vector systems having a special element relevant for transcription cell type or tissue specific enhancer/promoter combination
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
本出願は、2016年12月14日出願の米国仮番号62/434,312に対する優先権を主張するものであり、その完全な内容はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
少なくとも17ヌクレオチド長のエフェクター配列、
エフェクター相補配列、
ステムループ配列、及び、
プライマリーマイクロRNA(pri-miRNA)骨格、
を含み、
エフェクター配列は、配列番号:1~13のいずれか1つに記載のRNA転写物内における対応する長さの領域に対して実質的に相補的である。エフェクター配列は30ヌクレオチド長未満であることが好ましい。例えば、好適なエフェクター配列は17~29ヌクレオチド長の範囲であってもよい。エフェクター配列は20ヌクレオチド長であることが好ましい。エフェクター配列が21ヌクレオチド長であり、エフェクター相補配列が20ヌクレオチド長であることがより好ましい。
(i)エフェクター配列が配列番号:14に記載の配列と二本鎖を形成可能である場合、1、2、3または4塩基のミスマッチを有すること以外は配列番号:14に記載の配列に対して実質的に相補的なエフェクター配列、及び、(ii)エフェクター配列に対して実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR2)、
(i)エフェクター配列が配列番号:16に記載の配列と二本鎖を形成可能である場合、1、2、3または4塩基のミスマッチを有すること以外は配列番号:16に記載の配列に対して実質的に相補的なエフェクター配列、及び、(ii)エフェクター配列に対して実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR3)、
(i)エフェクター配列が配列番号:18に記載の配列と二本鎖を形成可能である場合、1、2、3または4塩基のミスマッチを有すること以外は配列番号:18に記載の配列に対して実質的に相補的なエフェクター配列、及び、(ii)エフェクター配列に対して実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR4)、
(i)エフェクター配列が配列番号:20に記載の配列と二本鎖を形成可能である場合、1、2、3または4塩基のミスマッチを有すること以外は配列番号:20に記載の配列に対して実質的に相補的なエフェクター配列、及び、(ii)エフェクター配列に対して実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR5)、
(i)エフェクター配列が配列番号:22に記載の配列と二本鎖を形成可能である場合、1、2、3または4塩基のミスマッチを有すること以外は配列番号:22に記載の配列に対して実質的に相補的なエフェクター配列、及び、(ii)エフェクター配列に対して実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR6)、
(i)エフェクター配列が配列番号:24に記載の配列と二本鎖を形成可能である場合、1、2、3または4塩基のミスマッチを有すること以外は配列番号:24に記載の配列に対して実質的に相補的なエフェクター配列、及び、(ii)エフェクター配列に対して実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR7)、
(i)エフェクター配列が配列番号:26に記載の配列と二本鎖を形成可能である場合、1、2、3または4塩基のミスマッチを有すること以外は配列番号:26に記載の配列に対して実質的に相補的なエフェクター配列、及び、(ii)エフェクター配列に対して実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR9)、
(i)エフェクター配列が配列番号:28に記載の配列と二本鎖を形成可能である場合、1、2、3または4塩基のミスマッチを有すること以外は配列番号:28に記載の配列に対して実質的に相補的なエフェクター配列、及び、(ii)エフェクター配列に対して実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR11)、
(i)エフェクター配列が配列番号:30に記載の配列と二本鎖を形成可能である場合、1、2、3または4塩基のミスマッチを有すること以外は配列番号:30に記載の配列に対して実質的に相補的なエフェクター配列、及び、(ii)エフェクター配列に対して実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR13)、
(i)エフェクター配列が配列番号:32に記載の配列と二本鎖を形成可能である場合、1、2、3または4塩基のミスマッチを有すること以外は配列番号:32に記載の配列に対して実質的に相補的なエフェクター配列、及び、(ii)エフェクター配列に対して実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR14)、
(i)エフェクター配列が配列番号:34に記載の配列と二本鎖を形成可能である場合、1、2、3または4塩基のミスマッチを有すること以外は配列番号:34に記載の配列に対して実質的に相補的なエフェクター配列、及び、(ii)エフェクター配列に対して実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR15)、
(i)エフェクター配列が配列番号:36に記載の配列と二本鎖を形成可能である場合、1、2、3または4塩基のミスマッチを有すること以外は配列番号:36に記載の配列に対して実質的に相補的なエフェクター配列、及び、(ii)エフェクター配列に対して実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR16)、及び、
(i)エフェクター配列が配列番号:38に記載の配列と二本鎖を形成可能である場合、1、2、3または4塩基のミスマッチを有すること以外は配列番号:38に記載の配列に対して実質的に相補的なエフェクター配列、及び、(ii)エフェクター配列に対して実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR17)、
からなる群から選択されるshmiRをコードするDNA配列を含んでいてもよい。
配列番号:15に記載のエフェクター配列、及び、配列番号:15に記載の配列に対して実質的に相補的でありその配列と二本鎖を形成可能なエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR2)、
配列番号:17に記載のエフェクター配列、及び、配列番号:17に記載の配列に対して実質的に相補的でありその配列と二本鎖を形成可能なエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR3)、
配列番号:19に記載のエフェクター配列、及び、配列番号:19に記載の配列に対して実質的に相補的でありその配列と二本鎖を形成可能なエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR4)、
配列番号:21に記載のエフェクター配列、及び、配列番号:21に記載の配列に対して実質的に相補的でありその配列と二本鎖を形成可能なエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR5)、
配列番号:23に記載のエフェクター配列、及び、配列番号:23に記載の配列に対して実質的に相補的でありその配列と二本鎖を形成可能なエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR6)、
配列番号:25に記載のエフェクター配列、及び、配列番号:25に記載の配列に対して実質的に相補的でありその配列と二本鎖を形成可能なエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR7)、
配列番号:27に記載のエフェクター配列、及び、配列番号:27に記載の配列に対して実質的に相補的でありその配列と二本鎖を形成可能なエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR9)、
配列番号:29に記載のエフェクター配列、及び、配列番号:29に記載の配列に対して実質的に相補的でありその配列と二本鎖を形成可能なエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR11)、
配列番号:31に記載のエフェクター配列、及び、配列番号:31に記載の配列に対して実質的に相補的でありその配列と二本鎖を形成可能なエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR13)、
配列番号:33に記載のエフェクター配列、及び、配列番号:33に記載の配列に対して実質的に相補的でありその配列と二本鎖を形成可能なエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR14)、
配列番号:35に記載のエフェクター配列、及び、配列番号:35に記載の配列に対して実質的に相補的でありその配列と二本鎖を形成可能なエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR15)、
配列番号:37に記載のエフェクター配列、及び、配列番号:37に記載の配列に対して実質的に相補的でありその配列と二本鎖を形成可能なエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR16)、及び、
配列番号:39に記載のエフェクター配列、及び、配列番号:39に記載の配列に対して実質的に相補的でありその配列と二本鎖を形成可能なエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR17)、
からなる群から選択されるshmiRをコードするDNA配列を含んでいてもよい。
配列番号:15に記載のエフェクター配列及び配列番号:14に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR2)、
配列番号:17に記載のエフェクター配列及び配列番号:16に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR3)、
配列番号:19に記載のエフェクター配列及び配列番号:18に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR4)、
配列番号:21に記載のエフェクター配列及び配列番号:20に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR5)、
配列番号:23に記載のエフェクター配列及び配列番号:22に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR6)、
配列番号:25に記載のエフェクター配列及び配列番号:24に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR7)、
配列番号:27に記載のエフェクター配列及び配列番号:26に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR9)、
配列番号:29に記載のエフェクター配列及び配列番号:28に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR11)、
配列番号:31に記載のエフェクター配列及び配列番号:30に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR13)、
配列番号:33に記載のエフェクター配列及び配列番号:32に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR14)、
配列番号:35に記載のエフェクター配列及び配列番号:34に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR15)、
配列番号:37に記載のエフェクター配列及び配列番号:36に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR16)、及び、
配列番号:39に記載のエフェクター配列及び配列番号:38に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR17)、
からなる群から選択されるshmiRをコードするDNA配列を含んでいてもよい。
pri-miRNA骨格の5´隣接配列、
エフェクター相補配列、
ステムループ配列、
エフェクター配列、及び、
pri-miRNA骨格の3´隣接配列、
を含んでいてもよい。
pri-miRNA骨格の5´隣接配列、
エフェクター配列、
ステムループ配列、
エフェクター相補配列、及び、
pri-miRNA骨格の3´隣接配列、
を含んでいてもよい。
(a)本明細書に記載の少なくとも1種の核酸、及び、
(b)
(i)本明細書に記載の核酸による核酸、または、
(ii)少なくとも17ヌクレオチド長のエフェクター配列及びエフェクター相補配列を含むshmiRまたは低分子ヘアピンRNA(shRNA)をコードするDNA配列を含む核酸(エフェクター配列は、眼咽頭型筋ジストロフィー(OPMD)の原因となるPABPN1タンパク質に対応するRNA転写物に対して実質的に相補的である)、
から選択される少なくとも1種の更なる核酸、
を含み、
(a)の核酸がコードするshmiRと(b)の核酸がコードするshmiRまたはshRNAは、異なるエフェクター配列を含む、
ように提供される。
配列番号:15に記載のエフェクター配列、及び、配列番号:15に対して実質的に相補的でありその配列と二本鎖を形成可能なエフェクター相補配列、例えば、配列番号:14に記載のエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR2)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:17に記載のエフェクター配列、及び、配列番号:17に対して実質的に相補的でありその配列と二本鎖を形成可能なエフェクター相補配列、例えば、配列番号:16に記載のエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR3)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:21に記載のエフェクター配列、及び、配列番号:21に対して実質的に相補的でありその配列と二本鎖を形成可能なエフェクター相補配列、例えば、配列番号:20に記載のエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR5)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:27に記載のエフェクター配列、及び、配列番号:27に対して実質的に相補的でありその配列と二本鎖を形成可能なエフェクター相補配列、例えば、配列番号:26に記載のエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR9)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:31に記載のエフェクター配列、及び、配列番号:31に対して実質的に相補的でありその配列と二本鎖を形成可能なエフェクター相補配列、例えば、配列番号:30に記載のエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR13)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:33に記載のエフェクター配列、及び、配列番号:33に対して実質的に相補的でありその配列と二本鎖を形成可能なエフェクター相補配列、例えば、配列番号:32に記載のエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR14)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、及び、
配列番号:39に記載のエフェクター配列、及び、配列番号:39に対して実質的に相補的でありその配列と二本鎖を形成可能なエフェクター相補配列、例えば、配列番号:38に記載のエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR17)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
からなる群から選択される少なくとも2種の核酸を含む。
配列番号:56(shmiR2)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:57(shmiR3)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:59(shmiR5)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:62(shmiR9)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:64(shmiR13)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:65(shmiR14)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、及び、
配列番号:68(shmiR17)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
からなる群から選択される少なくとも2種の核酸を含む。
配列番号:17に記載のエフェクター配列、及び、配列番号:17に対して実質的に相補的でありその配列と二本鎖を形成可能なエフェクター相補配列、例えば、配列番号:16に記載のエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR3)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:31に記載のエフェクター配列、及び、配列番号:31に対して実質的に相補的でありその配列と二本鎖を形成可能なエフェクター相補配列、例えば、配列番号:30に記載のエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR13)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:33に記載のエフェクター配列、及び、配列番号:33に対して実質的に相補的でありその配列と二本鎖を形成可能なエフェクター相補配列、例えば、配列番号:32に記載のエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR14)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、及び、
配列番号:39に記載のエフェクター配列、及び、配列番号:39に対して実質的に相補的でありその配列と二本鎖を形成可能なエフェクター相補配列、例えば、配列番号:38に記載のエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR17)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
からなる群から選択される少なくとも2種の核酸を含む。
配列番号:57(shmiR3)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:64(shmiR13)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:65(shmiR14)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、及び、
配列番号:68(shmiR17)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
からなる群から選択される少なくとも2種の核酸を含む。
(a)配列番号:31に記載のエフェクター配列及び配列番号:30に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR13)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、及び、
(b)配列番号:39に記載のエフェクター配列及び配列番号:38に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR17)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
を含む。
(a)配列番号:64(shmiR13)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、及び、
(b)配列番号:68(shmiR17)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
を含んでいてもよい。
(a)配列番号:17に記載のエフェクター配列及び配列番号:16に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR3)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、及び、
(b)配列番号:33に記載のエフェクター配列及び配列番号:32に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR14)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
を含む。
(a)配列番号:57(shmiR3)に記載の配列を含むかまたはそれからなる核酸、及び、
(b)配列番号:65(shmiR14)に記載の配列を含むかまたはそれからなる核酸、
を含んでいてもよい。
配列番号:15に記載のエフェクター配列、及び、配列番号:15に対して実質的に相補的でありその配列と二本鎖を形成可能なエフェクター相補配列、例えば、配列番号:14に記載のエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR2)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、を含むddRNAi構築物、
配列番号:17に記載のエフェクター配列、及び、配列番号:17に対して実質的に相補的でありその配列と二本鎖を形成可能なエフェクター相補配列、例えば、配列番号:16に記載のエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR3)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、を含むddRNAi構築物、
配列番号:21に記載のエフェクター配列、及び、配列番号:21に対して実質的に相補的でありその配列と二本鎖を形成可能なエフェクター相補配列、例えば、配列番号:20に記載のエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR5)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、を含むddRNAi構築物、
配列番号:27に記載のエフェクター配列、及び、配列番号:27に対して実質的に相補的でありその配列と二本鎖を形成可能なエフェクター相補配列、例えば、配列番号:26に記載のエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR9)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、を含むddRNAi構築物、
配列番号:31に記載のエフェクター配列、及び、配列番号:31に対して実質的に相補的でありその配列と二本鎖を形成可能なエフェクター相補配列、例えば、配列番号:30に記載のエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR13)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、を含むddRNAi構築物、
配列番号:33に記載のエフェクター配列、及び、配列番号:33に対して実質的に相補的でありその配列と二本鎖を形成可能なエフェクター相補配列、例えば、配列番号:32に記載のエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR14)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、を含むddRNAi構築物、及び、
配列番号:39に記載のエフェクター配列、及び、配列番号:39に対して実質的に相補的でありその配列と二本鎖を形成可能なエフェクター相補配列、例えば、配列番号:38に記載のエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR17)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、を含むddRNAi構築物、
からなる群から選択される少なくとも2種のddRNAi構築物を含む。
配列番号:56(shmiR2)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、を含むddRNAi構築物、
配列番号:57(shmiR3)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、を含むddRNAi構築物、
配列番号:59(shmiR5)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、を含むddRNAi構築物、
配列番号:62(shmiR9)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、を含むddRNAi構築物、
配列番号:64(shmiR13)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、を含むddRNAi構築物、
配列番号:65(shmiR14)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、を含むddRNAi構築物、及び、
配列番号:68(shmiR17)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、を含むddRNAi構築物、
からなる群から選択される少なくともddRNAi構築物を含む。
配列番号:17に記載のエフェクター配列、及び、配列番号:17に対して実質的に相補的でありその配列と二本鎖を形成可能なエフェクター相補配列、例えば、配列番号:16に記載のエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR3)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、を含むddRNAi構築物、
配列番号:31に記載のエフェクター配列、及び、配列番号:31に対して実質的に相補的でありその配列と二本鎖を形成可能なエフェクター相補配列、例えば、配列番号:30に記載のエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR13)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、を含むddRNAi構築物、
配列番号:33に記載のエフェクター配列、及び、配列番号:33に対して実質的に相補的でありその配列と二本鎖を形成可能なエフェクター相補配列、例えば、配列番号:32に記載のエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR14)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、を含むddRNAi構築物、及び、
配列番号:39に記載のエフェクター配列、及び、配列番号:39に対して実質的に相補的でありその配列と二本鎖を形成可能なエフェクター相補配列、例えば、配列番号:38に記載のエフェクター相補配列、を含むshmiR(shmiR17)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、を含むddRNAi構築物、
からなる群から選択される少なくとも2種のddRNAi構築物を含む。
配列番号:57(shmiR3)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、を含むddRNAi構築物、
配列番号:64(shmiR13)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、を含むddRNAi構築物、
配列番号:65(shmiR14)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、を含むddRNAi構築物、及び、
配列番号:68(shmiR17)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、を含むddRNAi構築物、
からなる群から選択される。
(a)配列番号:31に記載のエフェクター配列及び配列番号:30に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR13)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、を含むddRNAi構築物、及び、
(b)配列番号:39に記載のエフェクター配列及び配列番号:38に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR17)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、を含むddRNAi構築物、
を含む。
(a)配列番号:64(shmiR13)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、を含むddRNAi構築物、及び、
(b)配列番号:68(shmiR17)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、を含むddRNAi構築物、
を含んでいてもよい。
(a)配列番号:17に記載のエフェクター配列及び配列番号:16に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR3)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、を含むddRNAi構築物、及び、
(b)配列番号:33に記載のエフェクター配列及び配列番号:32に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR14)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、を含むddRNAi構築物、
を含む。
(a)配列番号:57(shmiR3)に記載の配列を含むかまたはそれからなる核酸、を含むddRNAi構築物、及び、
(b)配列番号:65(shmiR14)に記載の配列を含むかまたはそれからなる核酸、を含むddRNAi構築物、
を含んでいてもよい。
(a)本明細書に記載のddRNAi構築物、及び、
(b)ddRNAi構築物がコードするshmiR(複数可)が標的としないmRNA転写物を有する機能性PABPN1タンパク質をコードするDNA配列を含むPABPN1構築物、
を含むDNA構築物を提供する。機能性PABPN1タンパク質をコードするDNA配列は、そのmRNA転写物がddRNAi構築物のshmiRによって標的とされないようにコドン最適化されることが好ましい。1つの例では、機能性PABPN1タンパク質は、例えば、配列番号:74に記載の配列を有する野生型ヒトPABPN1タンパク質である。1つの例では、機能性PABPN1タンパク質をコードするコドン最適化DNA配列は配列番号:73に記載されている。
(a)筋特異的プロモーター、例えば、Spc512、
(b)ddRNAi構築物がコードするshmiRが標的としないmRNA転写物を有する機能性PABPN1タンパク質をコードするDNA配列を含む本明細書に記載のPABPN1構築物、及び、
(c)本明細書に記載のshmiR13をコードするDNA配列を含む核酸及び本明細書に記載のshmiR17をコードするDNA配列を含む核酸を含む本開示のddRNAi構築物、
を含む。
(a)筋特異的プロモーター、例えば、Spc512、
(b)ddRNAi構築物がコードするshmiRが標的としないmRNA転写物を有する機能性PABPN1タンパク質をコードするDNA配列を含む本明細書に記載のPABPN1構築物、及び、
(c)本明細書に記載のshmiR3をコードするDNA配列を含む核酸及び本明細書に記載のshmiR14をコードするDNA配列を含む核酸を含む本開示のddRNAi構築物、
を含む。
(a)筋特異的プロモーター、例えば、本明細書に記載のshmiR13をコードするDNA配列を含む核酸及び本明細書に記載のshmiR17をコードするDNA配列を含む核酸を含む本開示のddRNAi構築物の上流に配置されるCK8プロモーター、及び、
(b)筋特異的プロモーター、例えば、ddRNAi構築物がコードするshmiRが標的としないmRNA転写物を有する機能性PABPN1タンパク質をコードするDNA配列を含む本明細書に記載のPABPN1構築物の上流に配置されるSpc512プロモーター、
を含む。
(a)筋特異的プロモーター、例えば、本明細書に記載のshmiR3をコードするDNA配列を含む核酸及び本明細書に記載のshmiR14をコードするDNA配列を含む核酸を含む本開示のddRNAi構築物の上流に配置されるCK8プロモーター、及び、
(b)筋特異的プロモーター、例えば、ddRNAi構築物がコードするshmiRが標的としないmRNA転写物を有する機能性PABPN1タンパク質をコードするDNA配列を含む本明細書に記載のPABPN1構築物の上流に配置されるSpc512プロモーター、
を含む。
(a)本開示の1種または複数種のddRNAi構築物を含む発現ベクター、及び、
(b)ddRNAi構築物がコードするshmiR(複数可)が標的としないmRNA転写物を有する機能性PABPN1タンパク質をコードするDNA配列を含むPABPN1構築物を含む発現ベクター、
を含む複数種の発現ベクターを提供する。
(a)OPMDの原因となるPABPN1タンパク質の発現を阻害するための1種または複数種の薬剤(上記薬剤(複数可)は、本明細書に記載の核酸、複数種の核酸、ddRNAi構築物、複数種のddRNAi構築物、DNA構築物、発現ベクター、複数種の発現ベクター、または組成物から選択される)、及び、
(b)(a)の薬剤により発現されるshmiRが標的としないmRNA転写物を有する機能性PABPN1タンパク質をコードするDNA配列を含む発現ベクター、
を含むキットを提供する。
配列番号:1: PABPN1 mRNA領域2と呼ばれる、PABPN1タンパク質に対応するmRNA転写物内の領域のRNA配列。
配列番号:2: PABPN1 mRNA領域3と呼ばれる、PABPN1タンパク質に対応するmRNA転写物内の領域のRNA配列。
配列番号:3: PABPN1 mRNA領域4と呼ばれる、PABPN1タンパク質に対応するmRNA転写物内の領域のRNA配列。
配列番号:4: PABPN1 mRNA領域5と呼ばれる、PABPN1タンパク質に対応するmRNA転写物内の領域のRNA配列。
配列番号:5: PABPN1 mRNA領域6と呼ばれる、PABPN1タンパク質に対応するmRNA転写物内の領域のRNA配列。
配列番号:6: PABPN1 mRNA領域7と呼ばれる、PABPN1タンパク質に対応するmRNA転写物内の領域のRNA配列。
配列番号:7: PABPN1 mRNA領域9と呼ばれる、PABPN1タンパク質に対応するmRNA転写物内の領域のRNA配列。
配列番号:8: PABPN1 mRNA領域11と呼ばれる、PABPN1タンパク質に対応するmRNA転写物内の領域のRNA配列。
配列番号:9: PABPN1 mRNA領域13と呼ばれる、PABPN1タンパク質に対応するmRNA転写物内の領域のRNA配列。
配列番号:10: PABPN1 mRNA領域14と呼ばれる、PABPN1タンパク質に対応するmRNA転写物内の領域のRNA配列。
配列番号:11: PABPN1 mRNA領域15と呼ばれる、PABPN1タンパク質に対応するmRNA転写物内の領域のRNA配列。
配列番号:12: PABPN1 mRNA領域16と呼ばれる、PABPN1タンパク質に対応するmRNA転写物内の領域のRNA配列。
配列番号:13: PABPN1 mRNA領域17と呼ばれる、PABPN1タンパク質に対応するmRNA転写物内の領域のRNA配列。
配列番号:14: shmiR2と呼ばれるshmiRのRNAエフェクター相補配列。
配列番号:15: shmiR2と呼ばれるshmiRのRNAエフェクター配列。
配列番号:16: shmiR3と呼ばれるshmiRのRNAエフェクター相補配列。
配列番号:17: shmiR3と呼ばれるshmiRのRNAエフェクター配列。
配列番号:18: shmiR4と呼ばれるshmiRのRNAエフェクター相補配列。
配列番号:19: shmiR4と呼ばれるshmiRのRNAエフェクター配列。
配列番号:20: shmiR5と呼ばれるshmiRのRNAエフェクター相補配列。
配列番号:21: shmiR5と呼ばれるshmiRのRNAエフェクター配列。
配列番号:22: shmiR6と呼ばれるshmiRのRNAエフェクター相補配列。
配列番号:23: shmiR6と呼ばれるshmiRのRNAエフェクター配列。
配列番号:24: shmiR7と呼ばれるshmiRのRNAエフェクター相補配列。
配列番号:25: shmiR7と呼ばれるshmiRのRNAエフェクター配列。
配列番号:26: shmiR9と呼ばれるshmiRのRNAエフェクター相補配列。
配列番号:27: shmiR9と呼ばれるshmiRのRNAエフェクター配列。
配列番号:28: shmiR11と呼ばれるshmiRのRNAエフェクター相補配列。
配列番号:29: shmiR11と呼ばれるshmiRのRNAエフェクター配列。
配列番号:30: shmiR13と呼ばれるshmiRのRNAエフェクター相補配列。
配列番号:31: shmiR13と呼ばれるshmiRのRNAエフェクター配列。
配列番号:32: shmiR14と呼ばれるshmiRのRNAエフェクター相補配列。
配列番号:33: shmiR14と呼ばれるshmiRのRNAエフェクター配列。
配列番号:34: shmiR15と呼ばれるshmiRのRNAエフェクター相補配列。
配列番号:35: shmiR15と呼ばれるshmiRのRNAエフェクター配列。
配列番号:36: shmiR16と呼ばれるshmiRのRNAエフェクター相補配列。
配列番号:37: shmiR16と呼ばれるshmiRのRNAエフェクター配列。
配列番号:38: shmiR17と呼ばれるshmiRのRNAエフェクター相補配列。
配列番号:39: shmiR17と呼ばれるshmiRのRNAエフェクター配列。
配列番号:40: shmiRのRNAステムループ配列
配列番号:41: pri-miRNA骨格の5´隣接配列。
配列番号:42: pri-miRNA骨格の3´隣接配列。
配列番号:43: shmiR2と呼ばれるshmiRのRNA配列。
配列番号:44: shmiR3と呼ばれるshmiRのRNA配列。
配列番号:45: shmiR4と呼ばれるshmiRのRNA配列。
配列番号:46: shmiR5と呼ばれるshmiRのRNA配列。
配列番号:47: shmiR6と呼ばれるshmiRのRNA配列。
配列番号:48: shmiR7と呼ばれるshmiRのRNA配列。
配列番号:49: shmiR9と呼ばれるshmiRのRNA配列。
配列番号:50: shmiR11と呼ばれるshmiRのRNA配列。
配列番号:51: shmiR13と呼ばれるshmiRのRNA配列。
配列番号:52: shmiR14と呼ばれるshmiRのRNA配列。
配列番号:53: shmiR15と呼ばれるshmiRのRNA配列。
配列番号:54: shmiR16と呼ばれるshmiRのRNA配列。
配列番号:55: shmiR17と呼ばれるshmiRのRNA配列。
配列番号:56: shmiR2と呼ばれるshmiRをコードするDNA配列。
配列番号:57: shmiR3と呼ばれるshmiRをコードするDNA配列。
配列番号:58: shmiR4と呼ばれるshmiRをコードするDNA配列。
配列番号:59: shmiR5と呼ばれるshmiRをコードするDNA配列。
配列番号:60: shmiR6と呼ばれるshmiRをコードするDNA配列。
配列番号:61: shmiR7と呼ばれるshmiRをコードするDNA配列。
配列番号:62: shmiR9と呼ばれるshmiRをコードするDNA配列。
配列番号:63: shmiR11と呼ばれるshmiRをコードするDNA配列。
配列番号:64: shmiR13と呼ばれるshmiRをコードするDNA配列。
配列番号:65: shmiR14と呼ばれるshmiRをコードするDNA配列。
配列番号:66: shmiR15と呼ばれるshmiRをコードするDNA配列。
配列番号:67: shmiR16と呼ばれるshmiRをコードするDNA配列。
配列番号:68: shmiR17と呼ばれるshmiRをコードするDNA配列。
配列番号:69: 筋特異的CK8プロモーターの制御下でshmiR3及びshmiR14を、Spc512の制御下でコドン最適化PABPN1をコードする二重構築物1型のDNA配列
配列番号:70: 筋特異的CK8プロモーターの制御下でshmiR17及びshmiR13を、Spc512の制御下でコドン最適化PABPN1をコードする二重構築物1型のDNA配列
配列番号:71: Spc512の制御下でcoPABPN1ならびにshmiR3及びshmiR14と呼ばれるshmiRをコードする二重構築物2型のDNA配列。
配列番号:72: Spc512の制御下でcoPABPN1ならびにshmiR17及びshmiR13と呼ばれるshmiRをコードする二重構築物2型のDNA配列。
配列番号:73 ヒトコドン最適化PABPN1 cDNA配列のDNA配列。
配列番号:74 コドン最適化ヒトPABPN1タンパク質のアミノ酸配列。
配列番号:75 FLAGタグを有する野生型ヒトPABPN1タンパク質のアミノ酸配列。
配列番号:76 FLAGタグを有するコドン最適化ヒトPABPN1タンパク質のアミノ酸配列。
配列番号:77 wtPABPN1-Fwdと呼ばれるプライマーのDNA配列。
配列番号:78 wtPABPN1-Revと呼ばれるプライマーのDNA配列
配列番号:79 wtPABPN1-Probeと呼ばれるプローブのDNA配列
配列番号:80 optPABPN1-Fwdと呼ばれるプライマーのDNA配列
配列番号:81 optPABPN1-Revと呼ばれるプライマーのDNA配列
配列番号:82 optPABPN1-Probeと呼ばれるプローブのDNA配列
配列番号:83 shmiR3-FWDと呼ばれるプライマーのDNA配列
配列番号:84 shmiR13-FWDと呼ばれるプライマーのDNA配列
配列番号:85 shmiR14-FWDと呼ばれるプライマーのDNA配列
配列番号:86 shmiR17-FWDと呼ばれるプライマーのDNA配列
本明細書の全体にわたり、特に明記しない限り、または、文脈上特に必要としない限り、単一の工程、物質の特性、組成物、工程の群、または、物質の特性もしくは組成物の群への言及は、これら工程、物質の特性、組成物、工程の群、または、物質の特性もしくは組成物の群のうちの1つ及び複数(すなわち、1つまたは複数)を包含すると解釈されるべきである。
「RNA」とは、少なくとも1つのリボヌクレオチド残基を含む分子のことを意味する。「リボヌクレオチド」とは、β-D-リボフラノース部分の2´位にヒドロキシル基を有するヌクレオチドのことを意味する。この用語は、二本鎖RNA、一本鎖RNA、単離されたRNA、例えば、部分的に精製されたRNA、実質的に純粋なRNA、合成RNA、組換え生成されたRNAなどに加えて、天然RNAとは1つまたは複数のヌクレオチドの付加、欠失、置換及び/または変異が異なる変異RNAを含む。このような変異としては、siRNAの末端(複数可)または内部、例えば、RNAの1つまたは複数のヌクレオチドなどへの非ヌクレオチド物質の付加を挙げることができる。本開示のRNA分子内のヌクレオチドはまた、非標準的なヌクレオチド、例えば、非天然ヌクレオチド、化学合成ヌクレオチドまたはデオキシヌクレオチドなどを含んでいてもよい。これらの変異RNAをアナログまたは天然RNAのアナログと呼ぶ場合もある。
1つの例では、本開示は、低分子ヘアピンマイクロRNA(shmiR)をコードするDNA配列を含む核酸を提供し、上記shmiRは、
少なくとも17ヌクレオチド長のエフェクター配列、
エフェクター相補配列、
ステムループ配列、及び、
プライマリーマイクロRNA(pri-miRNA)骨格、
を含み、
エフェクター配列は、配列番号:1~13のいずれか1つに記載のRNA転写物内における対応する長さの領域に対して実質的に相補的である。エフェクター配列は30ヌクレオチド長未満であることが好ましい。例えば、好適なエフェクター配列は17~29ヌクレオチド長の範囲であってもよい。特に好ましい例では、エフェクター配列は21ヌクレオチド長である。エフェクター配列が21ヌクレオチド長であり、エフェクター相補配列が20ヌクレオチド長であることがより好ましい。
pri-miRNA骨格の5´隣接配列、
エフェクター相補配列、
ステムループ配列、
エフェクター配列、及び、
pri-miRNA骨格の3´隣接配列、
を含んでいてもよい。
pri-miRNA骨格の5´隣接配列、
エフェクター配列、
ステムループ配列、
エフェクター相補配列、及び、
pri-miRNA骨格の3´隣接配列、
を含んでいてもよい。
(a)本明細書に記載の少なくとも1種の核酸、及び、
(b)
(i)本明細書に記載のshmiRをコードするDNA配列を含む核酸、または、
(ii)本明細書に記載のshmiRの同種のエフェクター配列とエフェクター相補配列を含む低分子ヘアピンRNA(shRNA)をコードするDNA配列を含む核酸、
から選択される少なくとも1種の更なる核酸、
を含み、
(a)の核酸がコードするshmiRと(b)の核酸がコードするshmiRまたはshRNAは、異なるエフェクター配列を含む、
ように提供される。
配列番号:15に記載のエフェクター配列及び配列番号:14に記載のエフェクター相補配列を含むshmiRをコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、例えば、配列番号:56(shmiR2)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:17に記載のエフェクター配列及び配列番号:16に記載のエフェクター相補配列を含むshmiRをコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、例えば、配列番号:57(shmiR3)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:21に記載のエフェクター配列及び配列番号:20に記載のエフェクター相補配列を含むshmiRをコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、例えば、配列番号:59(shmiR5)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:27に記載のエフェクター配列及び配列番号:26に記載のエフェクター相補配列を含むshmiRをコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、例えば、配列番号:62(shmiR9)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:31に記載のエフェクター配列及び配列番号:30に記載のエフェクター相補配列を含むshmiRをコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、例えば、配列番号:64(shmiR13)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:33に記載のエフェクター配列及び配列番号:32に記載のエフェクター相補配列を含むshmiRをコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、例えば、配列番号:65(shmiR14)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、及び、
配列番号:39に記載のエフェクター配列及び配列番号:38に記載のエフェクター相補配列を含むshmiRをコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、例えば、配列番号:68(shmiR17)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
からなる群から選択される。
配列番号:17に記載のエフェクター配列及び配列番号:16に記載のエフェクター相補配列を含むshmiRをコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、例えば、配列番号:57(shmiR3)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:31に記載のエフェクター配列及び配列番号:30に記載のエフェクター相補配列を含むshmiRをコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、例えば、配列番号:64(shmiR13)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:33に記載のエフェクター配列及び配列番号:32に記載のエフェクター相補配列を含むshmiRをコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、例えば、配列番号:65(shmiR14)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、及び、
配列番号:39に記載のエフェクター配列及び配列番号:38に記載のエフェクター相補配列を含むshmiRをコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、例えば、配列番号:68(shmiR17)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
からなる群から選択される。
(a)配列番号:31に記載のエフェクター配列及び配列番号:30に記載のエフェクター相補配列を含むshmiRをコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、例えば、配列番号:64(shmiR13)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、及び、
(b)配列番号:39に記載のエフェクター配列及び配列番号:38に記載のエフェクター相補配列を含むshmiRをコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、例えば、配列番号:68(shmiR17)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
を含んでいてもよい。
(a)配列番号:17に記載のエフェクター配列及び配列番号:16に記載のエフェクター相補配列を含むshmiRをコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、例えば、配列番号:57(shmiR3)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、及び、
(b)配列番号:33に記載のエフェクター配列及び配列番号:32に記載のエフェクター相補配列を含むshmiRをコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、例えば、配列番号:65(shmiR14)に記載の配列を含むかまたはそれからなる核酸、
を含んでいてもよい。
1つの例では、本開示の核酸またはそれぞれの核酸は、DNA特異的RNAi(ddRNAi)構築物の形態で提供されるかまたはその構築物内に含まれる。それゆえ、1つの例では、本開示は、本明細書に記載の核酸を含むddRNAi構築物を提供する。別の例では、本開示は、本明細書に記載の複数種の核酸を含むddRNAi構築物を提供する。更に別の例では、本開示は、本明細書に記載の複数種の核酸のうちの核酸をそれぞれが含む複数種のddRNAi構築物(すなわち、複数種のうちの核酸の全てが複数種のddRNAi構築物内において示されるように)を提供する。OPMDの原因となるPABPN1のmRNA転写物を標的とするエフェクター配列を含むshmiRまたはshRNAをコードする例示的な核酸は本明細書に記載されており、本開示のこの例に準用されると解釈されるべきである。
配列番号:15に記載のエフェクター配列及び配列番号:14に記載のエフェクター相補配列を含むshmiRをコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、例えば、配列番号:56(shmiR2)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:17に記載のエフェクター配列及び配列番号:16に記載のエフェクター相補配列を含むshmiRをコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、例えば、配列番号:57(shmiR3)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:21に記載のエフェクター配列及び配列番号:20に記載のエフェクター相補配列を含むshmiRをコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、例えば、配列番号:59(shmiR5)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:27に記載のエフェクター配列及び配列番号:26に記載のエフェクター相補配列を含むshmiRをコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、例えば、配列番号:62(shmiR9)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:31に記載のエフェクター配列及び配列番号:30に記載のエフェクター相補配列を含むshmiRをコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、例えば、配列番号:64(shmiR13)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:33に記載のエフェクター配列及び配列番号:32に記載のエフェクター相補配列を含むshmiRをコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、例えば、配列番号:65(shmiR14)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、及び、
配列番号:39に記載のエフェクター配列及び配列番号:38に記載のエフェクター相補配列を含むshmiRをコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、例えば、配列番号:68(shmiR17)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
からなる群から選択される少なくとも2種の核酸を含む。
配列番号:17に記載のエフェクター配列及び配列番号:16に記載のエフェクター相補配列を含むshmiRをコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、例えば、配列番号:57(shmiR3)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:31に記載のエフェクター配列及び配列番号:30に記載のエフェクター相補配列を含むshmiRをコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、例えば、配列番号:64(shmiR13)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:33に記載のエフェクター配列及び配列番号:32に記載のエフェクター相補配列を含むshmiRをコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、例えば、配列番号:65(shmiR14)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、及び、
配列番号:39に記載のエフェクター配列及び配列番号:38に記載のエフェクター相補配列を含むshmiRをコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、例えば、配列番号:68(shmiR17)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
からなる群から選択される少なくとも2種の核酸を含む。
(a)配列番号:31に記載のエフェクター配列及び配列番号:30に記載のエフェクター相補配列を含むshmiRをコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、例えば、配列番号:64(shmiR13)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、及び、
(b)配列番号:39に記載のエフェクター配列及び配列番号:38に記載のエフェクター相補配列を含むshmiRをコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、例えば、配列番号:68(shmiR17)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
を含んでいてもよい。
(a)配列番号:17に記載のエフェクター配列及び配列番号:16に記載のエフェクター相補配列を含むshmiRをコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、例えば、配列番号:57(shmiR3)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、及び、
(b)配列番号:33に記載のエフェクター配列及び配列番号:32に記載のエフェクター相補配列を含むshmiRをコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、例えば、配列番号:65(shmiR14)に記載の配列を含むかまたはそれからなる核酸、
を含んでいてもよい。
1つの例では、本開示のddRNAi構築物は発現ベクター内に含まれる。
細胞培養モデル
OPMDの細胞培養モデルとして有用な細胞株の1つの例は、正常Ala10-ヒトPABPN1-FLAG(Ala10)または変異Ala17-ヒトPABPN1-FLAG(Ala17)(後者はOPMDの特徴)を発現するベクターをトランスフェクションしたHEK293T細胞株(HEK293T、ATCC,Manassas,USA)である。
OPMDの研究に利用可能な小型動物モデルにはいくつかあり、その例については、Uyama et al.,(2005)Acta Myologica,24(2):84-88及びChartier and Simonelig(2013)Drug Discovery Today:technologies,10:e103-107に記載されている。例示的な動物モデルは、Davies et al.,(2005)Nature Medicine,11:672-677及びTrollet et al.,(2010)Human Molecular Genetics,19(11):2191-2207に以前記載されたA17.1トランスジェニックマウスモデルである。
1つの例では、本開示は、機能性PABPN1タンパク質を、例えば、細胞または動物に補充するための薬剤を提供する。機能性PABPN1タンパク質はOPMDの原因とはならず、本開示のshmiR(複数可)またはshRNA(複数可)が標的とするmRNA転写物によりコードされない。
細胞培養モデル
OPMDの例示的な細胞培養モデルについて、実施例、例えば、実施例4及び5を含む本明細書に記載している。内在性PABPN1を標的とする本開示のshmiRをコードする1種または複数種の核酸の存在下で、本開示の薬剤が機能性PABPN1タンパク質を補充する能力を評価するために、OPMDのこのような細胞培養モデルを使用してもよい。
OPMDを研究するための例示的な動物モデルについて説明してきた。
本開示はまた、本明細書に記載の機能性PABPN1タンパク質をコードする核酸及び本開示の1種または複数種のddRNAi構築物(複数可)を含む単一のDNA構築物を提供する。機能性PABPN1タンパク質をコードする核酸及び本開示のddRNAi構築物を含む例示的なDNA構築物については実施例7に記載されている。1つの例では、DNA構築物は、機能性PABPN1タンパク質をコードする核酸と組み合わせて、本明細書に記載の単一のddRNAi構築物を含んでいてもよい。別の例では、DNA構築物は、機能性PABPN1タンパク質をコードする核酸と組み合わせて、複数種のddRNAi構築物を含んでいてもよい。DNA構築物のそれぞれの例では、機能性PABPN1タンパク質をコードするDNA配列は、そのmRNA転写物がddRNAi構築物(複数可)のshmiR(複数可)によって標的とされないようにコドン最適化される。
(a)筋特異的プロモーター、例えば、Spc512、
(b)ddRNAi構築物がコードするshmiRが標的としないmRNA転写物を有する機能性PABPN1タンパク質をコードするDNA配列を含む本明細書に記載のPABPN1構築物、及び、
(c)本明細書に記載のshmiR17をコードするDNA配列を含む核酸及び本明細書に記載のshmiR13をコードするDNA配列を含む核酸を含む本開示のddRNAi構築物、
を含むpAAV発現ベクターである。
(a)筋特異的プロモーター、例えば、Spc512、
(b)ddRNAi構築物がコードするshmiRが標的としないmRNA転写物を有する機能性PABPN1タンパク質をコードするDNA配列を含む本明細書に記載のPABPN1構築物、及び、
(c)本明細書に記載のshmiR3をコードするDNA配列を含む核酸及び本明細書に記載のshmiR14をコードするDNA配列を含む核酸を含む本開示のddRNAi構築物、
を含むpAAV発現ベクターである。
(a)筋特異的プロモーター、例えば、本明細書に記載のshmiR17をコードするDNA配列を含む核酸及び本明細書に記載のshmiR13をコードするDNA配列を含む核酸を含む本開示のddRNAi構築物の上流に配置されるCK8プロモーター、及び、
(b)筋特異的プロモーター、例えば、ddRNAi構築物がコードするshmiRが標的としないmRNA転写物を有する機能性PABPN1タンパク質をコードするDNA配列を含む本明細書に記載のPABPN1構築物の上流に配置されるSpc512プロモーター、
を含むpAAV発現ベクターである。
(a)筋特異的プロモーター、例えば、本明細書に記載のshmiR3をコードするDNA配列を含む核酸及び本明細書に記載のshmiR14をコードするDNA配列を含む核酸を含む本開示のddRNAi構築物の上流に配置されるCK8プロモーター、及び、
(b)筋特異的プロモーター、例えば、ddRNAi構築物がコードするshmiRが標的としないmRNA転写物を有する機能性PABPN1タンパク質をコードするDNA配列を含む本明細書に記載のPABPN1構築物の上流に配置されるSpc512プロモーター、
を含むpAAV発現ベクターである。
一部の例では、本開示の核酸(複数可)、ddRNAi構築物(複数可)または発現ベクター(複数可)を組成物内に提供する。一部の例では、本開示の機能性PABPN1タンパク質をコードする核酸を組成物内に提供する。一部の例では、本開示の核酸(複数可)、ddRNAi構築物(複数可)または発現ベクター(複数可)を、本開示の機能性PABPN1タンパク質をコードする核酸と共に組成物内に提供する。一部の例では、1種または複数種の核酸(複数可)またはddRNAi構築物(複数可)及び機能性PABPN1タンパク質をコードする核酸を、組成物内における同一の発現ベクター内に提供する。
1つの例では、OPMDの原因となるPABPN1タンパク質を含む内在性PABPN1タンパク質の対象における発現を阻害するために、本明細書に記載の1種または複数種の核酸(複数可)、ddRNAi構築物(複数可)、発現ベクター(複数可)、またはそれらを含む組成物(複数可)を使用する。
本開示はまた、本開示の1種または複数種の核酸(複数可)、ddRNAi構築物(複数可)、発現ベクター(複数可)、またはそれらを含む組成物をキットの形態で提供する。キットは容器を含んでいてもよい。キットは通常、本開示の1種または複数種の核酸(複数可)、ddRNAi構築物(複数可)、発現ベクター(複数可)、またはそれらを含む組成物を、それまたはそれらを投与するための取扱説明書と共に含有する。一部の例では、キットは、本開示の2種以上の核酸、ddRNAi構築物、発現ベクター、またはそれらを含む組成物を含有する。1つの例では、キットは、(i)本開示の1種または複数種の核酸(複数可)、ddRNAi構築物(複数可)、発現ベクター(複数可)、またはそれらを含む組成物を含む、OPMDの原因となるPABPN1タンパク質の発現を抑制または阻害するための第1のキット構成成分、及び、(ii)第2のキット構成成分としての、本開示の機能性PABPN1タンパク質をコードするコドン最適化核酸を含む発現ベクター、またはその発現ベクターを含む組成物、を含む。第1のキット構成成分と第2のキット構成成分はキット内に共にパッケージ化されてもよい。
表1-PABPN1内における標的領域
一般に利用可能なsiRNA設計アルゴリズム(Ambion、Promega、Invitrogen、Origene及びMWGを含む)を使用して、siRNA構築物の設計に対する潜在的な標的を示す配列をPABPN1 mRNA配列から同定したが、選択した配列は、ヒト、非ヒト霊長類、ウシ及びマウス種に保存されていた。5´隣接領域(配列番号:41)、siRNAセンス鎖配列(エフェクター相補配列)、ステム/ループ接合部配列(配列番号:40)、siRNAアンチセンス鎖(エフェクター配列)及び3´隣接領域(配列番号:42)を含む低分子ヘアピンマイクロRNA(shmiR)をコードする配列を作製するために、候補siRNAをコードする配列をpre-miR30aスキャフォールドに組み込んだ。代表的なshmiRの予測二次構造を図1に示す。設計したshmiR用のPABPN1 mRNA転写物の標的領域を表1に示し、対応するshmiRエフェクター配列(アンチセンス鎖)を表2に示す。
本開示のshmiRがPABPN1転写物の発現をノックダウンする効果を試験するために、HEK293細胞を用いてデュアルルシフェラーゼレポーターアッセイを実施した。
上記のルシフェラーゼ活性アッセイを用いて測定したPABPN1発現の下方制御に基づいて、更なる解析用に、shmiR2、3、5、9、13、14、16及び17を選択した。それらがインビトロでPABPN1を下方制御する能力を検査するために、実施例2に記載のU6プロモーターが駆動するプラスミドを含有するshmiRを2種の別の発現プラスミドと共に使用した。一方はFLAGタグ付きヒトwtPABPN1(wt-PABPN1-FLAG、配列番号:75)をコードし、もう一方は、FLAGタグと共にヒトPABPN1をコードするコドン最適化配列(co-PABPN1-FLAG、配列番号:76)を含む。
20mMのHEPES、2mMのグルタミン、10%ウシ胎児血清(FBS)、1×Penstrepを含有するダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)内で、ヒト胎児腎臓細胞(HEK293T、ATCC,Manassas,USA)を増殖させた。
簡潔に説明すると、HEK293T細胞を1×106個の細胞/ウェルで播種し、翌日、野生型ヒトPABPN1(wt-PABPN1-FLAG)(配列番号:75)を発現するプラスミド(100ng/ウェル)またはコドン最適化PABPN1(co-PABPN1-FLAG)(配列番号:76)を発現するプラスミド(100 ng/ウェル)と共にまたはそれ無しで、上記shmiRプラスミドのうちの1種(300ng/ウェル)をトランスフェクションした。対照として、HEK293T細胞に非標的化siRNA配列を発現するpSilencer対照プラスミド(Thermo Fisher,USA)をトランスフェクションした。完全DMEM培地内でHEK293T細胞を37℃で72時間インキュベートし、その後、細胞を回収し、ウェスタンブロットで細胞溶解液を解析した。
NaCl 0.15M、0.1%SDS、50mMのトリス(pH8)、2mMのEDTA、及びプロテアーゼ阻害薬カクテル(Complete,Roche Diagnostics)を含む10%Triton-X-100を含有するRIPA緩衝液中で細胞をインキュベートすることにより細胞溶解液を調製した。
本実施例では、PABPN1 shmiRプラスミドがPABPN1の内在性発現をインビトロでノックダウンする能力を明らかにする。
20mMのHEPES、2mMのグルタミン、10%ウシ胎児血清(FBS)、1×Penstrepを含有するダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)内で、ヒト胎児腎臓細胞(HEK293T、ATCC,Manassas,USA)を増殖させた。
簡潔に説明すると、HEK293T細胞を1×106個の細胞/ウェルで播種し、翌日、実施例2に記載のshmiRプラスミドのうちの1種(300ng/ウェル)をトランスフェクションした。対照として、HEK293T細胞に非標的化siRNA配列を発現するpsilencerプラスミド(Thermo Fisher,USA)をトランスフェクションした。完全DMEM培地内でHEK293T細胞を37℃で72時間インキュベートし、その後、細胞を回収し、RNAを抽出、逆転写してから、qPCRで解析した。
上記のshmiRによるmRNAレベルにおけるPABPN1の阻害レベルを定量するために、抽出したRNA試料に対してqPCR解析を実施した。
wtPABPN1-Fwd 5´-ATGGTGCAACAGCAGAAGAG-3´(配列番号:77)
wtPABPN1-Rev 5´-CTTTGGGATGGCCACTAAAT-3´(配列番号:78)
wtPABPN1-Probe 5´-CGGTTGACTGAACCACAGCCATG-3´(配列番号:79)
optPABPN1-Fwd 5´-ACCGACAGAGGCTTCCCTA-3´(配列番号:80)
optPABPN1-Rev 5´-TTCTGCTGCTGTTGTAGTTGG-3´(配列番号:81)
optPABPN1-Probe 5´-TGGTCCGGGCTCTGTACCTAGCC-3´(配列番号:82)
qPCRで測定したHEK293細胞におけるPABPN1発現に対する例示的なshmiRによる低阻害率がPABPN1の遺伝子発現における細胞株の差異によるものかどうかを確認するために、OPMDに関連する解析用の別の細胞株、すなわち、C2C12マウス筋細胞及びARPE-19ヒト網膜細胞を選択した。
20mMのHEPES、2mMのグルタミン、10%ウシ胎児血清(FBS)、1×Penstrepを含有するダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)内で、C2C12マウス筋細胞を増殖させた。
簡潔に説明すると、Neonエレクトロポレーションシステム(パルス電圧:1650、パルス幅:10、パルス数:3)を使用して2×105個のC2C12細胞にエレクトロポレーションした。上記の単一のshmiRと2種のshmiRの組み合わせの両方(2μg/ウェル)を解析した。対照として、C2C12細胞に非標的化siRNA配列を発現するpSilencerプラスミド(Thermo Fisher,USA)をエレクトロポレーションした。完全DMEM培地内でC2C12細胞を37℃で24時間インキュベートし、その後、非トランスフェクト細胞の増殖を遅らせるために50ug/mLのヒグロマイシンを加え、続いて、エレクトロポレーションの48時間後に、更に100ug/mLを加えた。72時間時点で細胞を回収し、qPCR用にトータルRNAを抽出した。
実施例3で選択したshmiRによる阻害に応じた内在性PABPN1の発現を測定するのに使用したwtPABPN1プライマー及びプローブを用いて、実施例4のHEK293細胞用に記載したとおりに逆転写酵素qPCRを実施した。C2C12細胞におけるshmiR3、13、14、17について3連で、shmiR2、5、9、16について2連で、qPCRを実施した。ARPE-19細胞の2つの時点(48時間及び72時間)における単一の測定値を使用した。
上記の最も効果的なshmiRをトランスフェクションしたC2C12細胞において発現したshmiRの総数を測定するためにmiScriptアッセイを開発した。
shmiR3-FWD 5´-TTCATCTGCTTCTCTACCTCG-3´(配列番号:83)
shmiR13-FWD 5´-AGGGGAATACCATGATGTCGC-3´(配列番号:84)
shmiR14-FWD 5´-CTCATATTCATCTGCTTCTCT-3´(配列番号:85)
shmiR17-FWD 5´-ATTCATCTGCTTCTCTACCTC-3´(配列番号:86)
内在性野生型PABPN1(wtPABPN1)の遺伝子サイレンシングとコドン最適化PABPN1(coPABPN1)への置換を同時に誘導するために、optPABPN1配列と共に、選択したshmiRのうちの1種または複数種を発現する一本鎖アデノ随伴ウイルス2型(ssAAV2)プラスミドを作製する。2種の代替構築物を図12A及び図12Bに示す。
動物
OPMDの最も一般的なマウスモデル、A17マウスモデルで前臨床有効性試験を実施した。ウシ伸長(17アラニン残基)PABPN1を過剰発現させることにより、FvBバックグラウンドを用いてこのマウスモデルを作製した。骨格筋におけるこの変異PABPN1の発現をヒトαアクチン筋特異的プロモーター(HSA1)の制御下に置いた。両方の内在性マウスPABPN1対立遺伝子は機能的であり、正常なマウスPABPN1を発現する。それゆえ、マウスの表現型は、正常タンパク質よりも変異PABPN1の過剰発現に起因していた。最も重要なことに、A17マウスは、核内封入体(INI)の存在、線維症及び筋力低下を含むOPMDの臨床的徴候の多くを示す。インビボマウス有効性試験では、容易に扱うことが可能及び/またはマウスから容易に切除可能な最も大きな筋肉の1つである前脛骨筋(TA)への投薬及び解析に焦点を合わせたため、表現型改善を観察することがより容易となった。
局所筋肉注射による組換え発現構築物の投与用に、アデノ随伴ウイルス血清型9(AAV9)カプシドを選択した。AAV9に加え、AAV8、AAVRh74を含む多数の異なる血清型のAAVカプシドを試験した。Spc512合成筋肉プロモーターの制御下で蛍光タンパク質GFPを発現した組換えAAV9構築物(AAV9-eGFP)を使用して、筋肉の形質導入を評価した。両方の性別のマウスのそれぞれのTA筋に50μlの一本鎖ベクターを2e11総ベクターゲノムの用量で注射した。20日後、マウスを屠殺し、注射した四肢に対してインビボイメージングによる検査を行った。
図13に示すとおり、TA筋にAAV9-eGFP構築物を直接注射することにより、相当量の局所蛍光が四肢に検出されることになり、両方のベクターが筋細胞への形質導入に有効であり直接注射後に導入遺伝子発現がもたらされることを示唆している。
optPABPN1配列と共にshmiR17及びshmiR13(例えば、表3及び表4に記載されている)を発現する一本鎖アデノ随伴ウイルス2型(ssAAV2)プラスミドを作製した。
治療
OPMDの関連疾患モデルにおける実施例9に記載のSR-構築物のインビボ有効性を試験するために、10~12週齢のA17マウスのTA筋にSR-構築物を高用量及び低用量の筋肉注射で個別に投与した。低用量は筋肉あたり1×1010個のベクターゲノムに設定した。高用量は筋肉あたり6×1010個のベクターゲノムに設定した。FVB野生型マウスも健康な比較群に含まれるが、生理食塩水を注射した週齢が同じA17マウスを未治療群とした。SR-構築物の用量の違いが疾患に及ぼす影響を試験することに加え、治療後14週または20週のいずれかの時点で独立したコホートのマウスを屠殺し、異なる時点に関連する有効性を評価した。屠殺時にTA筋を採取してRNA及びタンパク質を抽出した。
PABPN1レベルのノックダウンを確認するために、TA筋から単離したRNAをQPCR解析で評価した。使用したQPCRプライマーは野生型PABPN1転写物と変異PABPN1転写物を識別不能であったが、コドン最適化PABPN1種に対応する配列を認識または増幅しなかった。高用量と低用量の両方のSR-構築物において強力なノックダウンが認められ、それぞれ88.3%と68.3%のPABPN1転写物抑制がもたらされた(図15)。これらの組織を用いた別の解析では、個別の投与ベクターレベルに一致した比率のshmiR導入遺伝子の存在が示された。
核内封入体(INI)の残存に対する動物におけるSR-構築物の影響について、14週目に試験を行った。図17から明らかなように、A17マウスにおける全TA筋細胞のほぼ35%が、INIを示す緑色の点状染色を示した。Red Laminin(筋細胞の細胞外マトリックスにおいて豊富なタンパク質)とBlue DAPIの対比染色剤を使用して、細胞形状と核をそれぞれはっきりとさせた(図18)。高用量と低用量の両方のSR-構築物で治療した一連の連続切片にわたり、INIの有意な抑制が認められた。
動物の筋肉量の回復に対するSR-構築物の影響についても、20週目に試験を行った。
最後に、動物の筋力の回復に対するSR-構築物の影響について、20週目に最大力測定による評価を行った。
以下、本発明の実施形態を示す。
(1)低分子ヘアピンマイクロRNA(shmiR)をコードするDNA配列を含む核酸であって、前記shmiRは、
少なくとも17ヌクレオチド長のエフェクター配列と、
エフェクター相補配列と、
ステムループ配列と、
プライマリーマイクロRNA(pri-miRNA)骨格と、
を含み、
前記エフェクター配列は、配列番号:1~13のいずれか1つに記載のRNA転写物内における対応する長さの領域に対して実質的に相補的である、
前記核酸。
(2)前記shmiRは、
配列番号:15に記載のエフェクター配列及び配列番号:14に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR、
配列番号:17に記載のエフェクター配列及び配列番号:16に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR、
配列番号:19に記載のエフェクター配列及び配列番号:18に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR、
配列番号:21に記載のエフェクター配列及び配列番号:20に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR、
配列番号:23に記載のエフェクター配列及び配列番号:22に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR、
配列番号:25に記載のエフェクター配列及び配列番号:24に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR、
配列番号:27に記載のエフェクター配列及び配列番号:26に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR、
配列番号:29に記載のエフェクター配列及び配列番号:28に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR、
配列番号:31に記載のエフェクター配列及び配列番号:30に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR、
配列番号:33に記載のエフェクター配列及び配列番号:32に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR、
配列番号:35に記載のエフェクター配列及び配列番号:34に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR、
配列番号:37に記載のエフェクター配列及び配列番号:36に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR、及び、
配列番号:39に記載のエフェクター配列及び配列番号:38に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR、
からなる群から選択される、
(1)に記載の核酸。
(3)前記shmiRは、5´→3´方向に、
前記pri-miRNA骨格の5´隣接配列と、
前記エフェクター相補配列と、
前記ステムループ配列と、
前記エフェクター配列と、
前記pri-miRNA骨格の3´隣接配列と、
を含む、
(1)または(2)に記載の核酸。
(4)前記ステムループ配列は配列番号:40に記載の配列である、(1)から(3)のいずれか1に記載の核酸。
(5)前記pri-miRNA骨格はpri-miR-30a骨格である、(1)から(4)のいずれか1に記載の核酸。
(6)前記pri-miRNA骨格の前記5´隣接配列は配列番号:41に記載されており、前記pri-miRNA骨格の前記3´隣接配列は配列番号:42に記載されている、(3)から(5)のいずれか1に記載の核酸。
(7)前記shmiRは、配列番号:43~55のいずれか1つに記載の配列を含む、(1)から(6)のいずれか1に記載の核酸。
(8)前記shmiRをコードする前記DNA配列は、配列番号:56~68のいずれか1つに記載されている、(1)から(7)のいずれか1に記載の核酸。
(9)(a)(1)から(8)のいずれか1に記載の少なくとも1種の核酸と、
(b)
(i)(1)から(8)のいずれか1に記載の核酸、または、
(ii)少なくとも17ヌクレオチド長のエフェクター配列及びエフェクター相補配列を含むshmiRまたは低分子ヘアピンRNA(shRNA)をコードするDNA配列を含む核酸であって、前記エフェクター配列は、眼咽頭型筋ジストロフィー(OPMD)の原因となるPABPN1タンパク質に対応するRNA転写物に対して実質的に相補的である、前記核酸、
から選択される少なくとも1種の更なる核酸と、
を含み、
(a)の前記核酸がコードする前記shmiRと(b)の前記核酸がコードする前記shmiRまたはshRNAは、異なるエフェクター配列を含む、
複数種の核酸。
(10)(1)から(8)のいずれか1に記載の核酸または(9)に記載の複数種の核酸を含むDNA特異的RNA干渉(ddRNAi)構築物。
(11)(1)から(8)のいずれか1に記載の少なくとも2種の核酸を含む(10)に記載のddRNAi構築物であって、前記核酸のそれぞれは異なるshmiRをコードする、前記ddRNAi構築物。
(12)前記少なくとも2種の核酸のそれぞれは、配列番号:1、2、4、7、9、10及び13のうちの1つに記載のRNA転写物内における対応する長さの領域に対して実質的に相補的なエフェクター配列を含むshmiRをコードする、(11)に記載のddRNAi構築物。
(13)前記少なくとも2種の核酸は、
配列番号:15に記載のエフェクター配列及び配列番号:14に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR2)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:17に記載のエフェクター配列及び配列番号:16に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR3)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:21に記載のエフェクター配列及び配列番号:20に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR5)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:27に記載のエフェクター配列及び配列番号:26に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR9)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:31に記載のエフェクター配列及び配列番号:30に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR13)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:33に記載のエフェクター配列及び配列番号:32に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR14)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、及び、
配列番号:39に記載のエフェクター配列及び配列番号:38に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR17)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
からなる群から選択される、
(11)または(12)に記載のddRNAi構築物。
(14)前記少なくとも2種の核酸は、
配列番号:56(shmiR2)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:57(shmiR3)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:59(shmiR5)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:62(shmiR9)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:64(shmiR13)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:65(shmiR14)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、及び、
配列番号:68(shmiR17)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
からなる群から選択される、
(13)に記載のddRNAi構築物。
(15)前記少なくとも2種の核酸のそれぞれは、配列番号:2、9、10及び13のうちの1つに記載のRNA転写物内における対応する長さの領域に対して実質的に相補的なエフェクター配列を含むshmiRをコードする、(11)から(14)のいずれか1に記載のddRNAi構築物。
(16)前記少なくとも2種の核酸は、
配列番号:17に記載のエフェクター配列及び配列番号:16に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR3)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:31に記載のエフェクター配列及び配列番号:30に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR13)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:33に記載のエフェクター配列及び配列番号:32に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR14)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、及び、
配列番号:39に記載のエフェクター配列及び配列番号:38に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR17)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
からなる群から選択される、
(11)から(15)のいずれか1に記載のddRNAi構築物。
(17)前記少なくとも2種の核酸は、
配列番号:57(shmiR3)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:64(shmiR13)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
配列番号:65(shmiR14)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、及び、
配列番号:68(shmiR17)に記載のDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸、
からなる群から選択される、
(16)に記載のddRNAi構築物。
(18)前記ddRNAi構築物は、
(a)配列番号:31に記載のエフェクター配列及び配列番号:30に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR13)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸と、
(b)配列番号:39に記載のエフェクター配列及び配列番号:38に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR17)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸と、
を含む、
(11)から(17)のいずれか1に記載のddRNAi構築物。
(19)前記ddRNAi構築物は、
(a)配列番号:64(shmiR13)に記載の前記DNA配列を含むかまたはそれからなる核酸と、
(b)配列番号:68(shmiR17)に記載の前記DNA配列を含むかまたはそれからなる核酸と、
を含む、
(18)に記載のddRNAi構築物。
(20)前記ddRNAi構築物は、
(a)配列番号:17に記載のエフェクター配列及び配列番号:16に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR3)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸と、
(b)配列番号:33に記載のエフェクター配列及び配列番号:32に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR14)をコードするDNA配列を含むかまたはそれからなる核酸と、
を含む、
(11)から(17)のいずれか1に記載のddRNAi構築物。
(21)前記ddRNAi構築物は、
(a)配列番号:57(shmiR3)に記載の配列を含むかまたはそれからなる核酸と、
(b)配列番号:65(shmiR14)に記載の配列を含むかまたはそれからなる核酸と、
を含む、
(20)に記載のddRNAi構築物。
(22)shmiRをコードする前記核酸またはそれぞれの核酸の上流にあるRNA pol IIIプロモーターを含む、(10)から(21)のいずれか1に記載のddRNAi構築物。
(23)前記RNA pol IIIプロモーターまたはそれぞれのRNA pol IIIプロモーターは、U6プロモーター及びH1プロモーターから選択される、(22)に記載のddRNAi構築物。
(24)前記RNA pol IIIプロモーターまたはそれぞれのRNA pol IIIプロモーターは、U6-9プロモーター、U6-1プロモーター及びU6-8プロモーターから選択されるU6プロモーターである、(22)または(23)に記載のddRNAi構築物。
(25)(a)(10)から(24)のいずれか1に記載のddRNAi構築物と、
(b)前記ddRNAi構築物がコードする前記shmiR(複数可)が標的としないmRNA転写物を有する機能性PABPN1タンパク質をコードするDNA配列を含むPABPN1構築物と、
を含む、
DNA構築物。
(26)前記機能性PABPN1タンパク質をコードする前記DNA配列は、そのmRNA転写物が前記ddRNAi構築物の前記shmiRによって標的とされないようにコドン最適化される、(25)に記載のDNA構築物。
(27)前記機能性PABPN1タンパク質をコードする前記DNA配列は配列番号:73に記載されている、(25)または(26)に記載のDNA構築物。
(28)前記機能性PABPN1タンパク質をコードする前記DNA配列は、前記PABPN1構築物内に含まれるプロモーターに機能的に連結し、前記機能性PABPN1タンパク質をコードする前記DNA配列の上流に配置される、(25)から(27)のいずれか1に記載のDNA構築物。
(29)前記PABPN1構築物内に含まれる前記プロモーターは筋特異的プロモーターである、(28)に記載のDNA構築物。
(30)前記DNA構築物は、5´→3´方向に、前記ddRNAi構築物と、前記PABPN1構築物と、を含む、(25)から(29)のいずれか1に記載のDNA構築物。
(31)前記DNA構築物は、5´→3´方向に、前記PABPN1構築物と、前記ddRNAi構築物と、を含む、(25)から(29)のいずれか1に記載のDNA構築物。
(32)(1)から(9)のいずれか1に記載の核酸、(10)から(24)のいずれか1に記載のddRNAi構築物、または、(25)から(31)のいずれか1に記載のDNA構築物、を含む、発現ベクター。
(33)(a)(10)から(24)のいずれか1に記載のddRNAi構築物を含む発現ベクターと、
(b)前記ddRNAi構築物がコードする前記shmiR(複数可)が標的としないmRNA転写物を有する機能性PABPN1タンパク質をコードするDNA配列を含むPABPN1構築物を含む発現ベクターと、
を含む、
複数種の発現ベクター。
(34)前記機能性PABPN1タンパク質をコードする前記DNA配列は、そのmRNA転写物が前記ddRNAi構築物の前記shmiRによって標的とされないようにコドン最適化される、(33)に記載の複数種の発現ベクター。
(35)前記機能性PABPN1タンパク質をコードする前記DNA配列は配列番号:73に記載されている、(33)または(34)に記載の複数種の発現ベクター。
(36)前記機能性PABPN1タンパク質をコードする前記DNA配列は、前記PABPN1構築物内に含まれるプロモーターに機能的に連結し、前記機能性PABPN1タンパク質をコードする前記DNA配列の上流に配置される、(33)から(35)のいずれか1に記載の複数種の発現ベクター。
(37)前記PABPN1構築物内に含まれる前記プロモーターは筋特異的プロモーターである、(36)に記載の複数種の発現ベクター。
(38)前記発現ベクターまたはそれぞれの発現ベクターは、プラスミドまたはミニサークルである、(32)に記載の発現ベクターまたは(33)から(37)のいずれか1に記載の複数種の発現ベクター。
(39)前記発現ベクターまたはそれぞれの発現ベクターは、アデノ随伴ウイルス(AAV)ベクター、レトロウイルスベクター、アデノウイルス(AdV)ベクター及びレンチウイルス(LV)ベクターからなる群から選択されるウイルスベクターである、(32)に記載の発現ベクターまたは(33)から(37)のいずれか1に記載の複数種の発現ベクター。
(40)(1)から(9)のいずれか1に記載の核酸、(10)から(24)のいずれか1に記載のddRNAi構築物、(25)から(31)のいずれか1に記載のDNA構築物、(32)、(38)または(39)のいずれか1に記載の発現ベクター、または、(33)から(39)のいずれか1に記載の複数種の発現ベクター、を含む、組成物。
(41)1種または複数種の薬学的に許容される担体を更に含む、(40)に記載の組成物。
(42)眼咽頭型筋ジストロフィー(OPMD)の原因となるPABPN1タンパク質の対象における発現を阻害するための方法であって、前記方法は、(1)から(9)のいずれか1に記載の核酸、(10)から(24)のいずれか1に記載のddRNAi構築物、(25)から(31)のいずれか1に記載のDNA構築物、(32)、(38)または(39)のいずれか1に記載の発現ベクター、(33)から(39)のいずれか1に記載の複数種の発現ベクター、または、(40)または(41)に記載の組成物を前記対象に投与すること、を含む、前記方法。
(43)眼咽頭型筋ジストロフィー(OPMD)を患う対象においてそれを治療するための方法であって、前記方法は、(1)から(9)のいずれか1に記載の核酸、(10)から(24)のいずれか1に記載のddRNAi構築物、(25)から(31)のいずれか1に記載のDNA構築物、(32)、(38)または(39)のいずれか1に記載の発現ベクター、(33)から(39)のいずれか1に記載の複数種の発現ベクター、または、(40)または(41)に記載の組成物を前記対象に投与すること、を含む、前記方法。
(44)前記方法は、(33)から(39)のいずれか1に記載の複数種の発現ベクターを共に、同時にまたは連続で前記対象に投与すること、を含む、(42)または(43)に記載の方法。
(45)(a)OPMDの原因となるPABPN1タンパク質の発現を阻害するための1種または複数種の薬剤であって、前記薬剤(複数可)は、(i)(1)から(9)のいずれか1に記載の核酸、(ii)(10)から(24)のいずれか1に記載のddRNAi構築物、(iii)(32)、(38)または(39)のいずれか1に記載の発現ベクター、または、(iv)(40)または(41)に記載の組成物から選択される、前記薬剤と、
(b)(a)の前記薬剤により発現されるshmiRが標的としないmRNA転写物を有する機能性PABPN1タンパク質をコードするDNA配列を含む発現ベクターと、
を含む、
キット。
(46)前記機能性PABPN1タンパク質をコードする前記DNA配列は、そのmRNA転写物が、(a)の前記薬剤がコードする前記shmiRによって標的とされないように、コドン最適化される、(45)に記載のキット。
(47)前記機能性PABPN1タンパク質をコードする前記DNA配列は配列番号:73に記載されている、(45)または(46)に記載のキット。
(48)前記機能性PABPN1タンパク質をコードする前記DNA配列は、前記発現ベクター内に含まれるプロモーターに機能的に連結し、前記機能性PABPN1タンパク質をコードする前記DNA配列の上流に配置される、(45)から(47)のいずれか1に記載のキット。
(49)(33)から(39)のいずれか1に記載の複数種の発現ベクターを含む(45)から(48)のいずれか1に記載のキットであって、前記複数種の発現ベクター内の(a)及び(b)は、前記キットの構成成分(a)及び(b)として提供される、前記キット。
(50)(42)から(44)のいずれか1に記載の方法によりOPMDを治療するために使用する際の、(45)から(49)のいずれか1に記載のキット。
Claims (24)
- (i)PABPN1の転写物を標的とする低分子ヘアピンマイクロRNA(shmiR)をコードするDNA配列を含む核酸を含むDNA特異的RNA干渉(ddRNAi)構築物であって、前記shmiRが、
少なくとも17ヌクレオチド長のエフェクター配列と、
エフェクター相補配列と、
ステムループ配列と、
プライマリーマイクロRNA(pri-miRNA)骨格と、
を含み、
前記エフェクター配列が、配列番号13に記載のRNA転写物内における対応する長さの領域に対して相補的である、
前記ddRNAi構築物と、
(ii)前記ddRNAi構築物における前記核酸によりコードされる前記shmiRによって標的とされないmRNA転写物を有する機能性PABPN1タンパク質をコードするDNA配列を含むPABPN1構築物であって、前記機能性PABPN1タンパク質をコードする前記DNA配列が、コドン最適化されたものである、前記PABPN1構築物と、
を含む、組成物。 - 前記shmiRが、配列番号39に記載のエフェクター配列及び配列番号38に記載のエフェクター相補配列を含む、請求項1記載の組成物。
- 前記shmiRが、5'→3'方向に、
(a) 前記pri-miRNA骨格の5'隣接配列、
前記エフェクター相補配列、
前記ステムループ配列、
前記エフェクター配列、及び
前記pri-miRNA骨格の3'隣接配列;又は、
(b) 前記pri-miRNA骨格の5'隣接配列、
前記エフェクター配列、
前記ステムループ配列、
前記エフェクター相補配列、及び
前記pri-miRNA骨格の3'隣接配列
を含む、請求項1又は2記載の組成物。 - 前記ステムループ配列が、配列番号40に記載の配列であり、
前記pri-miRNA骨格が、pri-miR-30a骨格であり、且つ/又は、
前記pri-miRNA骨格が、配列番号41に記載の5'隣接配列及び配列番号42に記載の3'隣接配列を含む、
請求項1~3のいずれか1項記載の組成物。 - 前記shmiRが、配列番号55に記載の配列を含み、且つ/又は、
前記shmiRをコードする前記DNA配列が、配列番号68に記載されるものである、
請求項1~4のいずれか1項記載の組成物。 - 前記ddRNAi構築物が、
PABPN1の転写物を標的とする更なるshmiRをコードするDNA配列を含む少なくとも1種の更なる核酸であって、
前記更なるshmiRが、
少なくとも17ヌクレオチド長のエフェクター配列と、
エフェクター相補配列と、
ステムループ配列と、
pri-miRNA骨格と、
を含み、
前記エフェクター配列が、配列番号1~12のいずれか1つに記載のRNA転写物内における対応する長さの領域に対して相補的である、
前記少なくとも1種の更なる核酸を含む、請求項1~5のいずれか1項記載の組成物。 - (a) 前記ddRNAi構築物内の前記更なる核酸が、配列番号1、2、4、7、9及び10のうちの1つに記載のRNA転写物内における対応する長さの領域に対して相補的である、エフェクター配列を含むshmiRをコードし、
(b) 前記ddRNAi構築物が、
(i) 配列番号39に記載のエフェクター配列及び配列番号38に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR17)をコードするDNA配列を含むか又はそれから成る核酸と、
(ii) 配列番号15に記載のエフェクター配列及び配列番号14に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR2)をコードするDNA配列を含むか又はそれから成る核酸、
配列番号17に記載のエフェクター配列及び配列番号16に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR3)をコードするDNA配列を含むか又はそれから成る核酸、
配列番号21に記載のエフェクター配列及び配列番号20に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR5)をコードするDNA配列を含むか又はそれから成る核酸、
配列番号27に記載のエフェクター配列及び配列番号26に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR9)をコードするDNA配列を含むか又はそれから成る核酸、
配列番号31に記載のエフェクター配列及び配列番号30に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR13)をコードするDNA配列を含むか又はそれから成る核酸、及び
配列番号33に記載のエフェクター配列及び配列番号32に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR14)をコードするDNA配列を含むか又はそれから成る核酸
から成る群より選択される更なる核酸と、
を含み、
且つ/又は、
(c) 前記ddRNAi構築物が、
(i) 配列番号68(shmiR17)に記載のDNA配列を含むか又はそれから成る核酸と、
(ii) 配列番号56(shmiR2)に記載のDNA配列を含むか又はそれから成る核酸、
配列番号57(shmiR3)に記載のDNA配列を含むか又はそれから成る核酸、
配列番号59(shmiR5)に記載のDNA配列を含むか又はそれから成る核酸、
配列番号62(shmiR9)に記載のDNA配列を含むか又はそれから成る核酸、
配列番号64(shmiR13)に記載のDNA配列を含むか又はそれから成る核酸、及び
配列番号65(shmiR14)に記載のDNA配列を含むか又はそれから成る核酸
から成る群より選択される更なる核酸と、
を含む、
請求項6記載の組成物。 - (a) 前記ddRNAi構築物内の前記更なる核酸が、配列番号2、9及び10のうちの1つに記載のRNA転写物内における対応する長さの領域に対して相補的である、エフェクター配列を含むshmiRをコードし、
(b) 前記ddRNAi構築物が、
(i) 配列番号39に記載のエフェクター配列及び配列番号38に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR17)をコードするDNA配列を含むか又はそれから成る核酸と、
(ii) 配列番号17に記載のエフェクター配列及び配列番号16に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR3)をコードするDNA配列を含むか又はそれから成る核酸、
配列番号31に記載のエフェクター配列及び配列番号30に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR13)をコードするDNA配列を含むか又はそれから成る核酸、及び
配列番号33に記載のエフェクター配列及び配列番号32に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR14)をコードするDNA配列を含むか又はそれから成る核酸
から成る群より選択される更なる核酸と、
を含み、
且つ/又は
(c) 前記ddRNAi構築物が、
(i) 配列番号68(shmiR17)に記載のDNA配列を含むか又はそれから成る核酸と、
(ii) 配列番号57(shmiR3)に記載のDNA配列を含むか又はそれから成る核酸、
配列番号64(shmiR13)に記載のDNA配列を含むか又はそれから成る核酸、及び
配列番号65(shmiR14)に記載のDNA配列を含むか又はそれから成る核酸
から成る群より選択される更なる核酸と、
を含む、
請求項7記載の組成物。 - 前記ddRNAi構築物が、
(a)配列番号31に記載のエフェクター配列及び配列番号30に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR13)をコードするDNA配列を含むか又はそれから成る核酸と、
(b)配列番号39に記載のエフェクター配列及び配列番号38に記載のエフェクター相補配列を含むshmiR(shmiR17)をコードするDNA配列を含むか又はそれから成る核酸と、
を含む、請求項7又は8記載の組成物。 - 前記ddRNAi構築物が、
(a)配列番号64(shmiR13)に記載の前記DNA配列を含むか又はそれから成る核酸と、
(b)配列番号68(shmiR17)に記載の前記DNA配列を含むか又はそれから成る核酸と、
を含む、請求項9記載の組成物。 - shmiRをコードする前記DNA配列若しくはshmiRをコードするそれぞれの前記DNA配列が、プロモーターに機能的に連結されるか、
機能性PABPN1タンパク質をコードする前記DNA配列が、プロモーターに機能的に連結されるか、又は
shmiRをコードする前記DNA配列若しくはshmiRをコードするそれぞれの前記DNA配列及び機能性PABPN1タンパク質をコードする前記DNA配列が、プロモーターに機能的に連結される、
請求項1~10のいずれか1項記載の組成物。 - shmiRをコードする前記DNA配列若しくはshmiRをコードするそれぞれの前記DNA配列及び機能性PABPN1タンパク質をコードする前記DNA配列が、同一のプロモーターに機能的に連結される、請求項11記載の組成物。
- 前記プロモーター又はそれぞれの前記プロモーターが、筋特異的プロモーターである、請求項11又は12記載の組成物。
- 前記機能性PABPN1タンパク質が、配列番号74に記載されるものであり、且つ/又は、
前記機能性PABPN1タンパク質をコードする前記DNA配列が、配列番号73に記載されるものである、
請求項1~13のいずれか1項記載の組成物。 - 前記ddRNAi構築物と前記PABPN1構築物とが、単一のDNA構築物で含まれる、請求項1~14のいずれか1項記載の組成物。
- 前記DNA構築物が、5'→3'方向に、前記ddRNAi構築物と前記PABPN1構築物とを含むか、又は
前記DNA構築物が、5'→3'方向に、前記PABPN1構築物と前記ddRNAi構築物とを含む、
請求項15記載の組成物。 - 前記DNA構築物が、発現ベクター内に含まれる、請求項15又は16記載の組成物。
- 前記発現ベクターが、プラスミド又はミニサークルであるか、又は
前記発現ベクターが、アデノ随伴ウイルス(AAV)ベクター、レトロウイルスベクター、アデノウイルス(AdV)ベクター及びレンチウイルス(LV)ベクターから成る群より選択されるウイルスベクターである、
請求項17記載の組成物。 - (a) 前記ddRNAi構築物を含む第1の発現ベクターと、
(b) 前記PABPN1構築物を含む第2の発現ベクターと、
を含む、請求項1~14のいずれか1項記載の組成物。 - 前記発現ベクターが、プラスミド又はミニサークルであるか、又は、
前記発現ベクターが、アデノ随伴ウイルス(AAV)ベクター、レトロウイルスベクター、アデノウイルス(AdV)ベクター及びレンチウイルス(LV)ベクターから成る群より選択されるウイルスベクターである、
請求項19記載の組成物。 - 1種又は複数種の薬学的に許容される担体を含む、請求項1~20のいずれか1項記載の組成物。
- 対象において眼咽頭型筋ジストロフィー(OPMD)の原因となるPABPN1タンパク質の発現を阻害するための、請求項1~21のいずれか1項記載の組成物。
- 眼咽頭型筋ジストロフィー(OPMD)を患うか、又はOPMDに罹患しやすい対象においてOPMDを治療又は予防するための、請求項22記載の組成物。
- 対象において眼咽頭型筋ジストロフィー(OPMD)を治療又は予防するための医薬の調製における、請求項1~21のいずれか1項記載の組成物の使用。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2023023159A JP7431359B2 (ja) | 2016-12-14 | 2023-02-17 | 眼咽頭型筋ジストロフィー(opmd)を治療するための試薬及びその使用 |
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201662434312P | 2016-12-14 | 2016-12-14 | |
US62/434,312 | 2016-12-14 | ||
PCT/AU2017/051385 WO2018107228A1 (en) | 2016-12-14 | 2017-12-14 | Reagents for treatment of oculopharyngeal muscular dystrophy (opmd) and use thereof |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2023023159A Division JP7431359B2 (ja) | 2016-12-14 | 2023-02-17 | 眼咽頭型筋ジストロフィー(opmd)を治療するための試薬及びその使用 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2020503014A JP2020503014A (ja) | 2020-01-30 |
JP2020503014A5 JP2020503014A5 (ja) | 2020-12-03 |
JP7233149B2 true JP7233149B2 (ja) | 2023-03-06 |
Family
ID=62557655
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2019532105A Active JP7233149B2 (ja) | 2016-12-14 | 2017-12-14 | 眼咽頭型筋ジストロフィー(opmd)を治療するための試薬及びその使用 |
JP2023023159A Active JP7431359B2 (ja) | 2016-12-14 | 2023-02-17 | 眼咽頭型筋ジストロフィー(opmd)を治療するための試薬及びその使用 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2023023159A Active JP7431359B2 (ja) | 2016-12-14 | 2023-02-17 | 眼咽頭型筋ジストロフィー(opmd)を治療するための試薬及びその使用 |
Country Status (13)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US11142765B2 (ja) |
EP (1) | EP3555294A4 (ja) |
JP (2) | JP7233149B2 (ja) |
KR (1) | KR102495222B1 (ja) |
CN (1) | CN110382698B (ja) |
AU (2) | AU2017377661B2 (ja) |
BR (1) | BR112019012312A8 (ja) |
CA (1) | CA3047154A1 (ja) |
IL (2) | IL267353B2 (ja) |
MX (1) | MX2019007110A (ja) |
RU (1) | RU2763319C2 (ja) |
WO (1) | WO2018107228A1 (ja) |
ZA (1) | ZA202106827B (ja) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
BR112019012312A8 (pt) * | 2016-12-14 | 2023-02-28 | Benitec Biopharma Ltd | Reagentes para tratamento da distrofia muscular oculofaríngea (opmd) e uso dos mesmos |
MX2021004225A (es) * | 2018-10-17 | 2021-05-27 | Benitec Ip Holdings Inc | Metodos para tratar distrofia muscular oculofaringea (dmof). |
SG11202108469XA (en) | 2019-02-28 | 2021-09-29 | Benitec Ip Holdings Inc | Compositions and methods for treating oculopharyngeal muscular dystrophy (opmd) |
Family Cites Families (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20040022449A (ko) * | 2001-07-12 | 2004-03-12 | 유니버시티 오브 매사추세츠 | 유전자 불활성화를 매개하는 소형 간섭 rna의 생체내제조 |
EP1783645A1 (en) * | 2005-11-08 | 2007-05-09 | Actigenics | Methods for the identification of microRNA and their applications in research and human health |
AR065121A1 (es) * | 2007-01-31 | 2009-05-20 | Basf Plant Science Gmbh | Plantas con rasgos aumentados relacionados con el rendimiento y/o resistencia incrementada al estres abiotico y un metodo para desarrollar las mismas |
US8258286B2 (en) * | 2007-04-26 | 2012-09-04 | University Of Iowa Research Foundation | Reduction of off-target RNA interference toxicity |
WO2010105372A1 (en) * | 2009-03-20 | 2010-09-23 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Compositions and methods for silencing hepatitis c virus expression |
NZ628126A (en) * | 2012-02-16 | 2016-10-28 | Atyr Pharma Inc | Histidyl-trna synthetases for treating autoimmune and inflammatory diseases |
WO2014077693A1 (en) * | 2012-11-16 | 2014-05-22 | Academisch Ziekenhuis Leiden H.O.D.N. Lumc | Means and methods for reducing an effect of aging in a mammalian cell |
CA2897342A1 (en) * | 2013-01-08 | 2014-07-17 | Benitec Biopharma Limited | Age-related macular degeneration treatment |
KR102353847B1 (ko) | 2016-04-14 | 2022-01-21 | 베니텍 바이오파마 리미티드 | 안구인두 근이영양증(opmd)의 치료용 시약 및 이의 용도 |
BR112019012312A8 (pt) | 2016-12-14 | 2023-02-28 | Benitec Biopharma Ltd | Reagentes para tratamento da distrofia muscular oculofaríngea (opmd) e uso dos mesmos |
-
2017
- 2017-12-14 BR BR112019012312A patent/BR112019012312A8/pt unknown
- 2017-12-14 AU AU2017377661A patent/AU2017377661B2/en active Active
- 2017-12-14 JP JP2019532105A patent/JP7233149B2/ja active Active
- 2017-12-14 CA CA3047154A patent/CA3047154A1/en active Pending
- 2017-12-14 MX MX2019007110A patent/MX2019007110A/es unknown
- 2017-12-14 CN CN201780086338.5A patent/CN110382698B/zh active Active
- 2017-12-14 WO PCT/AU2017/051385 patent/WO2018107228A1/en unknown
- 2017-12-14 RU RU2019121950A patent/RU2763319C2/ru active
- 2017-12-14 EP EP17882179.9A patent/EP3555294A4/en active Pending
- 2017-12-14 IL IL267353A patent/IL267353B2/en unknown
- 2017-12-14 KR KR1020197019981A patent/KR102495222B1/ko active IP Right Grant
- 2017-12-14 US US16/469,992 patent/US11142765B2/en active Active
-
2021
- 2021-09-01 US US17/463,923 patent/US11932852B2/en active Active
- 2021-09-17 ZA ZA2021/06827A patent/ZA202106827B/en unknown
-
2023
- 2023-02-17 JP JP2023023159A patent/JP7431359B2/ja active Active
- 2023-07-24 IL IL304674A patent/IL304674A/en unknown
- 2023-08-28 AU AU2023222827A patent/AU2023222827A1/en active Pending
Non-Patent Citations (8)
Title |
---|
Advanced Drug Delivery Reviews,2009年,Vol.61,p.650-664 |
AGING,2013年,Vol.5, No.6,p.412-426 |
Cell Reports,2013年,Vol.5,p.1704-1713 |
Cold Spring Harb Perspect Biol,2010年,Vol.2,a003640 |
French P.,BENITEC FEATURED AT CHI’S "DISCOVERY ON TARGET" CONFERENCE,BENITEC BIOPHARMA ASX ANNOUNCEMENT,2015年09月23日,https://blt.live.irmau.com/irm/PDF/1609_0 |
Human molecular genetics,2010年,Vol.19, No.6,p.1058-1065 |
Journal of Neuromuscular diseases,2014年,Vol.1,p.S222, PS2-220/#515 |
Molecular Therapy,2016年03月,Vol.24, Supplement 1,p.S199, 501 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
IL267353A (en) | 2019-08-29 |
US20190330629A1 (en) | 2019-10-31 |
JP7431359B2 (ja) | 2024-02-14 |
CN110382698A (zh) | 2019-10-25 |
JP2023062092A (ja) | 2023-05-02 |
JP2020503014A (ja) | 2020-01-30 |
IL267353B1 (en) | 2023-08-01 |
IL267353B2 (en) | 2023-12-01 |
EP3555294A1 (en) | 2019-10-23 |
KR20190104151A (ko) | 2019-09-06 |
US11142765B2 (en) | 2021-10-12 |
EP3555294A4 (en) | 2020-08-26 |
US11932852B2 (en) | 2024-03-19 |
CN110382698B (zh) | 2024-05-10 |
AU2017377661B2 (en) | 2023-07-27 |
ZA202106827B (en) | 2022-07-27 |
MX2019007110A (es) | 2019-12-05 |
IL304674A (en) | 2023-09-01 |
US20220056446A1 (en) | 2022-02-24 |
BR112019012312A2 (pt) | 2020-02-11 |
WO2018107228A1 (en) | 2018-06-21 |
AU2023222827A1 (en) | 2023-09-14 |
KR102495222B1 (ko) | 2023-02-09 |
RU2763319C2 (ru) | 2021-12-28 |
AU2017377661A1 (en) | 2019-07-18 |
BR112019012312A8 (pt) | 2023-02-28 |
RU2019121950A3 (ja) | 2021-01-18 |
KR20230020586A (ko) | 2023-02-10 |
CA3047154A1 (en) | 2018-06-21 |
RU2019121950A (ru) | 2021-01-18 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7431359B2 (ja) | 眼咽頭型筋ジストロフィー(opmd)を治療するための試薬及びその使用 | |
JP7191690B2 (ja) | B型肝炎ウイルス(hbv)感染を治療するための試薬及びその使用 | |
JP7236195B2 (ja) | 眼咽頭筋ジストロフィー(opmd)の処置のための試薬およびその使用 | |
US20220106594A1 (en) | Methods for Treating Oculopharyngeal Muscular Dystrophy (OPMD) | |
KR102667867B1 (ko) | 안구인두근위축증(opmd)의 치료제 및 이의 사용 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20190827 |
|
RD01 | Notification of change of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7426 Effective date: 20190827 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20201021 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20201021 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20211102 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220202 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20220202 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220607 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220907 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20221220 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20230119 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20230127 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20230127 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20230217 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7233149 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |