JP7220782B2 - 環状ペプチド、細胞足場材、細胞分離材、及び培地 - Google Patents
環状ペプチド、細胞足場材、細胞分離材、及び培地 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7220782B2 JP7220782B2 JP2021526079A JP2021526079A JP7220782B2 JP 7220782 B2 JP7220782 B2 JP 7220782B2 JP 2021526079 A JP2021526079 A JP 2021526079A JP 2021526079 A JP2021526079 A JP 2021526079A JP 7220782 B2 JP7220782 B2 JP 7220782B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- amino acid
- acid residue
- residue
- cyclic
- cyclic peptide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/64—Cyclic peptides containing only normal peptide links
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M25/00—Means for supporting, enclosing or fixing the microorganisms, e.g. immunocoatings
- C12M25/14—Scaffolds; Matrices
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/02—Separating microorganisms from their culture media
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/06—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier attached to the carrier via a bridging agent
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/0068—General culture methods using substrates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0696—Artificially induced pluripotent stem cells, e.g. iPS
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/998—Proteins not provided for elsewhere
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2513/00—3D culture
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
- C12N2533/50—Proteins
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Immunology (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
上記環状セグメントの最もN末端側に位置するアミノ酸残基Xaと上記環状セグメントの最もC末端側に位置するアミノ酸残基Xbとの間でチオエーテル結合が形成されており、
ただし、上記アミノ酸残基Xaと上記アミノ酸残基Xbのうち一方がシステイン残基であるとき、上記アミノ酸残基Xaと上記アミノ酸残基Xbのうち他方のアミノ酸残基のα炭素と、上記システイン残基の硫黄原子とは、5個以上の原子により隔てられている、
環状ペプチド。
<2> 上記環状セグメントと上記環状ペプチドのN末端との間の第1のセグメント、及び上記環状セグメントと上記環状ペプチドのC末端との間の第2のセグメントのうち少なくとも一方をさらに含み、上記第1のセグメント及び上記第2のセグメントのうち少なくとも一方が、側鎖に固定化官能基を有するアミノ酸残基を含む、<1>に記載の環状ペプチド。
<3> 上記固定化官能基がアミノ基又はチオール基である、<2>に記載の環状ペプチド。
<4> 上記側鎖に固定化官能基を有するアミノ酸残基が、L-リシン残基、D-リシン残基、L-システイン残基、D-システイン残基、L-ホモシステイン残基及びD-ホモシステイン残基からなる群から選択される、<2>に記載の環状ペプチド。
<5> 上記第1のセグメント及び上記第2のセグメントの各々は、存在する場合、長さが1~20アミノ酸残基である、<2>~<4>のうちいずれか1つに記載の環状ペプチド。
<6> 上記アミノ酸残基Xaと上記アミノ酸残基Xbのうち一方が、以下の(p)又は(q)のアミノ酸残基であり、
ここで、式中、*は隣接するアミノ酸残基との結合部位であり、**はチオエーテル結合の相手方のアミノ酸残基の硫黄原子との結合部位であり、x1は0以上の整数であり、x1個の炭素原子及びβ位の炭素原子は、-NH2、-SH、-COOH、C1-C10のアルキル基、及びC6-C14のアリール基からなる群から選択される1つ以上の置換基によって置換されていてもよく、
**-Lは、**-(CH2)y1-C(=O)-又は**-(CH2)y1-C(=O)-NH-であり、y1は0以上10以下の整数を表し、
上記アミノ酸残基Xaと上記アミノ酸残基Xbのうち他方が、以下の(t)又は(u)の残基であり、
ここで、式中、*は隣接するアミノ酸残基との結合部位であり、***はチオエーテル結合の相手方のアミノ酸残基の炭素原子との結合部位であり、x2は0以上の整数であり、x2個の炭素原子及びβ位の炭素原子は、-NH2、-SH、-COOH、C1-C10のアルキル基、及びC6-C14のアリール基からなる群から選択される1つ以上の置換基によって置換されていてもよく、
ただし、上記アミノ酸残基Xaと上記アミノ酸残基Xbのうち一方が上記(p)又は(q)においてx1が0のアミノ酸残基であるとき、上記アミノ酸残基Xaと上記アミノ酸残基Xbのうち他方は、L-システイン残基又はD-システイン残基ではない、
<1>~<5>のうちいずれか1つに記載の環状ペプチド。
<7> アミノ酸残基Xaが、上記(p)又は(q)のアミノ酸残基である、<6>に記載の環状ペプチド。
<8> アミノ酸残基Xbが、上記(p)又は(q)のアミノ酸残基である、<6>に記載の環状ペプチド。
<9> 上記(p)又は(q)のアミノ酸残基が、以下の(a)~(h)から選択される残基であり、
ここで、式中、*は隣接するアミノ酸残基との結合部位であり、**はチオエーテル結合の相手方のアミノ酸残基の硫黄原子との結合部位であり、
上記(t)又は(u)のアミノ酸残基が、L-ホモシステイン残基、D-ホモシステイン残基、L-ペニシラミン残基、D-ペニシラミン残基、L-システイン残基及びD-システイン残基からなる群から選択され、
ただし、上記(a)又は(b)の残基と、L-システイン残基又はD-システイン残基との組み合わせは除く、
<6>~<8>のうちいずれか1つに記載の環状ペプチド。
<10> 上記環状セグメントを複数含み、各環状セグメントのアミノ酸配列は互いに同一でも異なっていてもよい、<1>~<9>のうちいずれか1つに記載の環状ペプチド。
<11> 上記複数の環状セグメント同士が、1~20アミノ酸残基長の連結部により互いに連結されている、<10>に記載の環状ペプチド。
<12> 総アミノ酸残基数が8~50である、<1>~<11>のうちいずれか1つに記載の環状ペプチド。
<13> 式IIによって表される、<1>~<9>のうちいずれか1つに記載の環状ペプチド:
RN-XV0-X6 t0-Xp0-Xa-Xm-R-G-D-Xn-Xb-Xq0-X7 u0-Xw0-Rc (式II)
式II中、
Xaはアミノ酸残基Xaを表し、Xbはアミノ酸残基Xbを表し、
Xは任意のアミノ酸残基を表し、Xが複数である場合は、複数のXは互いに同一でも異なっていてもよく、
RNはN末端基を表し、RCはC末端基を表し、
X6及びX7は、それぞれ独立に、側鎖に固定化官能基を有するアミノ酸残基を表し、X6又はX7が複数である場合は、複数のX6又はX7は互いに同一であっても異なっていてもよく、
m及びnは、0≦m≦9、0≦n≦9、及び3≦m+n≦9を同時に満たす整数であり、
p0及びq0は、それぞれ、0≦p0≦15、及び、0≦q0≦15を満たす整数であり、
t0及びu0は、それぞれ、0≦t0≦5、及び、0≦u0≦5を満たす整数であり、
v0及びw0は、それぞれ、0≦v0≦5、及び、0≦w0≦5を満たす整数であり、
さらに、p0、q0、t0、u0、v0、及びw0は、0≦p0+q0+t0+u0+v0+w0≦39を満たす。
<14> 式II中のXa-Xm-R-G-D-Xn-Xbが、Xa-Xt v5-X1-X2-R-G-D-X3-X4-X5 v6-Xt v7-Xbであり、
Xtは任意のアミノ酸残基を表し、Xtが複数存在する場合には、複数のXtは互いに同一でも異なっていてもよく、
X1はI、V、D、E、Y、L、T又はホモチロシンを表し、
X2はP、T又はSを表し、
X3はN、S、T、V、A又はホモセリンを表し、
X4はF、Y又はPを表し、
X5はR、D、E、A、T、S又はGを表し、
v5及びv7は、それぞれ独立に、0~6の整数を表し、
v6は0又は1を表す、
<13>に記載の環状ペプチド。
<15> 以下の(i)~(v)のうち少なくとも1つを満たす、<14>に記載の環状ペプチド:
(i)X1で表されるアミノ酸残基が、I、V又はTである;
(ii)X2で表されるアミノ酸残基が、Pである;
(iii)X3で表されるアミノ酸残基が、S又はTである;
(iv)X4で表されるアミノ酸残基が、Fである:
(v)v6が1を表し、X5で表されるアミノ酸基がAである。
<16> 上記アミノ酸残基Xaと上記アミノ酸残基Xbとによって挟まれる領域のアミノ酸配列が、IPRGDNFR(配列番号1)のアミノ酸配列と70%以上の配列同一性を有するか、あるいは、IPRGDSFA(配列番号170)、VPRGDTFA(配列番号171)、及びTPRGDTFA(配列番号172)のうちいずれかのアミノ酸配列と70%以上の配列同一性を有する、<1>~<15>のうちいずれか一項に記載の環状ペプチド。
<17> 基材及び<1>~<16>のうちいずれか1つに記載の環状ペプチドを含む、細胞足場材。
<18> 保持材及び<1>~<16>のうちいずれか1つに記載の環状ペプチドを含む、細胞分離材。
<19> 培養成分及び<1>~<16>のうちいずれか1つに記載の環状ペプチドを含む、培地。
本開示に段階的に記載されている数値範囲において、ある数値範囲で記載された上限値又は下限値は、他の段階的な記載の数値範囲の上限値又は下限値に置き換えてもよい。また、本開示に記載されている数値範囲において、ある数値範囲で記載された上限値又は下限値は、実施例に示されている値に置き換えてもよい。
本開示において、2以上の好ましい態様の組み合わせは、より好ましい態様である。
本開示において、各成分の量は、各成分に該当する物質が複数種存在する場合には、特に断らない限り、複数種の物質の合計量を意味する。
本開示において、「工程」との語は、独立した工程だけではなく、工程の所期の目的が達成される限りは、他の工程と明確に区別できない工程をも含む。
RGD配列を含みかつアミノ酸残基数が8~14である環状セグメントを含み、
上記環状セグメントの最もN末端側に位置するアミノ酸残基Xaと上記環状セグメントの最もC末端側に位置するアミノ酸残基Xbとの間でチオエーテル結合が形成されており、
ただし、上記アミノ酸残基Xaと上記アミノ酸残基Xbのうち一方がシステイン残基であるとき、上記アミノ酸残基Xaと上記アミノ酸残基Xbのうち他方のアミノ酸残基のα炭素と、上記システイン残基の硫黄原子とは、5個以上の原子により隔てられている。
本開示において、アミノ酸は、原則として、国際純正・応用化学連合と国際生化学・分子生物学連合による共同命名委員会(INTERNATIONAL UNION OF PURE AND APPLIED CHEMISTRY and INTERNATIONAL UNION OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY IUPAC-IUB Joint Commission on Biochemical Nomenclature (JCBN))で採用された名称、略号等を用いて表す。また、アミノ酸残基は、そのアミノ酸残基が由来するアミノ酸の略号を用いて表す。
RGD配列はインテグリンへの結合に必要な配列であるため、上記環状セグメントがRGD配列を含むように環状ペプチドを構成する。とはいえ、RGD配列がインテグリンへの結合能を十分に発揮するためには、RGD配列の周囲にもアミノ酸残基が存在することが必要であり、環状セグメントはアミノ酸残基数が8~14となるように構成されている。1つの環状セグメント内に存在するRGD配列の数は1つであってもよく、あるいは2つ、3つ若しくは4つのRGD配列が存在していてもよい。環状セグメント内におけるRGD配列の位置は、アミノ酸残基Xaともアミノ酸残基Xbとも隣接していない位置であることが好ましい。言い換えれば、RGD配列とアミノ酸残基Xaとの間には1つ以上のアミノ酸残基が存在していることが好ましく、RGD配列とアミノ酸残基Xbとの間にも1つ以上のアミノ酸残基が存在していることが好ましい。例えば、RGD配列は、アミノ酸残基Xaを1番目のアミノ酸残基としてC末端側へとアミノ酸残基をカウントしたときに、3~5番目のアミノ酸残基に相当する、又は4~6番目のアミノ酸残基に相当することが、インテグリンに対する結合性を高くする観点から好ましい。
Xa-Xt v5-X11-X21-R-G-D-X31-X41-X51 v6-Xt v7-Xb(式III)で表される環状セグメントであってもよい。式IIIにおいて、
Xaは環状セグメントの最もN末端側に位置するアミノ酸残基Xaを表し、Xbは環状セグメントの最もC末端側に位置するアミノ酸残基Xbを表し、
Xtは任意のアミノ酸残基を表し、Xtが複数存在する場合には、複数のXtは互いに同一でも異なっていてもよく、
X11、X21、X31、X41及びX51は、それぞれ独立に、任意の一つのアミノ酸残基を表し、
v5及びv7は、それぞれ独立に、0~6の整数を表し、
v6は0又は1を表し、
ただし、以下の(a)~(e)のうち少なくとも1つが満たされる。
(a)X11がI、V、D、E、Y、L、T又はホモチロシンを表す。
(b)X21がP、T又はSを表す。
(c)X31がN、S、T、V、A又はホモセリンを表す。
(d)X41がF、Y又はPを表す。
(e)v6が1であって、X51がR、D、E、A、T、S又はGを表す。
Xa-Xt v5-X1-X2-R-G-D-X3-X4-X5 v6-Xt v7-Xb(式IV)で表される環状セグメントであってもよい。式IVにおいて、
Xaは環状セグメントの最もN末端側に位置するアミノ酸残基Xaを表し、Xbは環状セグメントの最もC末端側に位置するアミノ酸残基Xbを表し、
Xtは任意のアミノ酸残基を表し、Xtが複数存在する場合には、複数のXtは互いに同一でも異なっていてもよく、
X1はI、V、D、E、Y、L、T又はホモチロシンを表し、
X2はP、T又はSを表し、
X3はN、S、T、V、A又はホモセリンを表し、
X4はF、Y又はPを表し、
X5はR、D、E、A、T、S又はGを表し、
v5及びv7は、それぞれ独立に、0~6の整数を表し、
v6は0又は1を表す。
環状セグメントにおいて、アミノ酸残基Xaとアミノ酸残基Xbとによって挟まれる領域のアミノ酸配列は、配列番号1のアミノ酸配列と比較した場合に、アミノ酸残基の付加、欠失及び置換のうち2種以上を含んでいてもよい。付加、欠失又は置換したアミノ酸残基の総数は、1~15であることが好ましく、1~10であることがより好ましく、1~5であることがさらに好ましく、1~3であることがいっそう好ましい。また、アミノ酸残基の付加又は欠失がある場合、配列番号1のアミノ酸配列の末端に付加又は欠失を有することが好ましい。後述の配列番号2~166のアミノ酸配列における環状セグメント中の2つの架橋アミノ酸残基(つまり、アミノ酸残基Xa及びXb)に挟まれた領域の配列についても同様である。
例えば、アミノ酸残基の欠失は、配列番号1のアミノ酸配列中のC末端のR残基において生じることが好ましい。
(i)2つのアミノ酸配列のアラインメントを行う。
たとえば初期設定で使用することができるFASTA、BLAST等のアラインメントアルゴリズム及び/又はプログラムを使用して、2つの配列間のアラインメントを行うことができる。
(ii)配列同一性を計算する。
得られたアラインメントに基づいて、次式により配列同一性を計算する。
配列同一性[%]=(一致ポジション数/全ポジション数)×100[%]
全ポジション数はアラインメントの長さであり、一致ポジション数はアミノ酸の種類が一致するポジションの数である。
例えば、次のアミノ酸配列を考える。
配列A AYHRGELVWE
配列B SAWHGELVW
これを、上記した条件の下でアラインメントすると、次のようになる。ここで、配列A、B間でアミノ酸(残基)の種類が一致する箇所には、見やすくするため、記号「|」を付けている。また、「-」は対応するアミノ酸が無い箇所を示す。
配列A -AYHRGELVWE
| | |||||
配列B SAWH-GELVW-
この例では、全ポジション数は11であり、一致ポジション数は7であるから、上記式に従って算出した配列同一性は、7/11×100=63.6%である。
環状セグメントにおいて、アミノ酸残基Xaとアミノ酸残基Xbとによって挟まれる領域のアミノ酸配列は、配列番号170~172のうちいずれかのアミノ酸配列と比較した場合に、アミノ酸残基の付加、欠失及び置換のうち2種以上を含んでいてもよい。付加、欠失又は置換したアミノ酸残基の総数は、1~15であることが好ましく、1~10であることがより好ましく、1~5であることがさらに好ましく、1~3であることがいっそう好ましい。また、アミノ酸残基の付加又は欠失がある場合、配列番号170~172のうちいずれかのアミノ酸配列の末端に付加又は欠失を有することが好ましい。
例えば、アミノ酸残基の欠失は、配列番号170~172のうちいずれかのアミノ酸配列中のC末端残基において生じることが好ましい。
RN-XV0-X6 t0-Xp0-Xa-Xm-R-G-D-Xn-Xb-Xq0-X7 u0-Xw0-Rc (式II)
式II中、
Xaは環状セグメントの最もN末端側に位置するアミノ酸残基を表し、Xbは環状セグメントの最もC末端側に位置するアミノ酸残基を表し、アミノ酸残基Xaとアミノ酸残基Xbとの間でチオエーテル結合が形成されており
Xは任意のアミノ酸残基を表し、Xが複数である場合は、複数のXは互いに同一でも異なっていてもよく、
RNはN末端基を表し、RCはC末端基を表し、
X6及びX7は、それぞれ独立に、側鎖に固定化官能基を有するアミノ酸残基を表し、X6又はX7が複数である場合は、複数のX6又はX7は互いに同一であっても異なっていてもよく、
m及びnは、0≦m≦9、0≦n≦9、及び3≦m+n≦9を同時に満たす整数であり、
p0及びq0は、それぞれ、0≦p0≦15、及び、0≦q0≦15を満たす整数であり、
t0及びu0は、それぞれ、0≦t0≦5、及び、0≦u0≦5を満たす整数であり、
v0及びw0は、それぞれ、0≦v0≦5、及び、0≦w0≦5を満たす整数であり、
さらに、p0、q0、t0、u0、v0、及びw0は、0≦p0+q0+t0+u0+v0+w0≦39を満たす。
式IIにおいて、X6及びX7は、それぞれ独立に、側鎖に固定化官能基を有するアミノ酸残基を表す。
X6又はX7が複数である場合は、複数のX6又はX7は互いに同一であっても異なっていてもよい。
上記「固定化官能基」とは、後述する基材又は保持材上の官能基と反応して共有結合を形成することができる官能基をいう。
固定化官能基としては、例えば、アミノ基、カルボキシ基、ヒドロキシ基、チオール基、アルデヒド基(ホルミル基)、カルバモイル基、アジド基、アルキニル基等が挙げられる。
本開示に係る環状ペプチドが有する固定化官能基と基材又は保持材上の官能基とが反応して共有結合を形成することにより、本開示に係る環状ペプチドが基材又は保持材に固定化される。なお、本開示に係る環状ペプチドが有する固定化官能基の少なくとも一部が基材又は保持材上の官能基と反応して共有結合を形成すればよく、すべての固定化官能基が基材又は保持材上の官能基と反応しなくてもよい。
上記側鎖に固定化官能基を有するアミノ酸は、好ましくは、L-リシン、D-リシン、L-システイン、D-システイン、L-ホモシステイン及びD-ホモシステインからなる群から選択される少なくとも1種のアミノ酸である。
t0は、好ましくは0≦t0≦3を満たし、より好ましくは0≦t0≦2を満たす。
u0は、好ましくは0≦u0≦3を満たし、より好ましくは0≦u0≦2を満たす。
Xp0、Xq0、Xv0、及びXw0におけるXは、任意のアミノ酸残基を表し、Xが複数である場合は、複数のXは互いに同一であっても異なっていてもよい。
Xは、アミノ酸残基であればよく、特に限定されないが、表1に示すアミノ酸(B、Z及びXを除く。)及び表2に示すアミノ酸からなる群から選択されるアミノ酸に由来するアミノ酸残基であることが好ましく、表1に示すアミノ酸(B、Z及びXを除く。)からなる群から選択されるアミノ酸に由来するアミノ酸残基であることがより好ましい。また、存在する場合には、これらのアミノ酸のエナンチオマー又はジアステレオマーに由来するアミノ酸残基であってもよい。
p0は、好ましくは0≦p0≦10を満たし、より好ましくは0≦p0≦5を満たし、さらに好ましくは0≦p0≦3を満たし、いっそう好ましくは0≦p0≦2を満たす。
q0は、好ましくは0≦q0≦10を満たし、より好ましくは0≦q0≦5を満たし、さらに好ましくは0≦q0≦3を満たし、いっそう好ましくは0≦q0≦2を満たす。
上記v0及び上記w0は、それぞれ、0≦v0≦5、及び、0≦w0≦5を満たす整数である。
v0は、好ましくは0≦v0≦3を満たし、より好ましくは0≦v0≦2を満たす。
w0は、好ましくは0≦w0≦3を満たし、より好ましくは0≦w0≦2を満たす。
Xm及びXnにおける各Xは、任意のアミノ酸残基であってよく、例えば、イソロイシン残基、バリン残基、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基、チロシン残基、ロイシン残基、トレオニン残基、ホモチロシン残基、プロリン残基、セリン残基、アスパラギン残基、アラニン残基、ホモセリン残基、フェニルアラニン残基、アルギニン残基、又はグリシン残基であってもよい。
上記m及び上記nは、0≦m≦9、0≦n≦9、及び3≦m+n≦9を同時に満たす整数である。
mは、好ましくは0≦m≦5を満たし、より好ましくは0≦m≦3を満たし、さらに好ましくは0≦m≦2を満たす。
nは、好ましくは1≦n≦5を満たし、より好ましくは2≦n≦4を満たす。nは、2≦n≦3を満たす整数であってもよい。
RNは、N末端基を表す。
上記N末端基としては、例えば、アミノ基が挙げられ、N末端基としてのアミノ基は、N-アセチル化、N-ホルミル化、N-アシル化、PEG化等のN末端修飾を受けていてもよい。
RCは、C末端基を表す。
上記C末端基としては、例えば、カルボキシ基が挙げられ、C末端基としてのカルボキシ基は、アミド化、PEG化等のC末端修飾を受けていてもよい。
式IIにおいて、RNはXV0の左側に記載されているが、例えば、V0、t0、及びp0がいずれも0であれば、RNはXaで表されるアミノ酸残基のアミノ基又は修飾アミノ基に相当する。同様に、式IIにおいて、RcはXw0の右側に記載されているが、例えば、q0、u0、及びw0がいずれも0であれば、RcはXbで表されるアミノ酸残基のカルボキシ基又は修飾カルボキシ基に相当する。
RN-XV0-X6 t0-Xp0-Xa-Xm-R-G-D-Xn-Xb-(Xe0-Xa-Xm-R-G-D-Xn-Xb)d0-Xq0-X7 u0-Xw0-Rc (式V)
式Vにおいて、RN、X、V0、X6、t0、p0、Xa、m、n、Xb、q0、X7、u0、w0、及びRcは、それぞれ、式(II)におけるRN、X、V0、X6、t0、p0、Xa、m、n、Xb、q0、X7、u0、w0、及びRcと同義であり、その好ましい例及び範囲も式IIにおけるものと同様である。
halogen-Lは、ハロゲン原子-(CH2)y1-C(=O)-又はハロゲン原子-(CH2)y1-C(=O)-NH-であり、y1は0以上10以下の整数を表す。x1は0~10の整数であってもよく、1~6の整数であってもよく、2~4の整数であってもよい。y1は0~10の整数であってもよく、1~6の整数であってもよく、1~3の整数であってもよい。C1-C10のアルキル基としては、メチル基、エチル基、n-プロピル基、i-プロピル基、n-ブチル基、i-ブチル基、t-ブチル基等が挙げられる。また、C6-C14のアリール基としては、フェニル基、ナフチル基、アントラニル基、フェナントレン基等が挙げられる。
ここで、式(p)及び式(q)中、*は隣接するアミノ酸残基との結合部位であり、**はチオエーテル結合の相手方のアミノ酸残基の硫黄原子との結合部位であり、x1は0以上の整数であり、x1個の炭素原子及びβ位の炭素原子は、-NH2、-SH、-COOH、C1-C10のアルキル基、及びC6-C14のアリール基からなる群から選択される1つ以上の置換基によって置換されていてもよく、
**-Lは、**-(CH2)y1-C(=O)-又は**-(CH2)y1-C(=O)-NH-であり、y1は0以上10以下の整数を表す。x1は0~10の整数であってもよく、1~6の整数であってもよく、2~4の整数であってもよい。y1は0~10の整数であってもよく、1~6の整数であってもよく、1~3の整数であってもよい。
C1-C10のアルキル基としては、メチル基、エチル基、n-プロピル基、i-プロピル基、n-ブチル基、i-ブチル基、t-ブチル基等が挙げられる。また、C6-C14のアリール基としては、フェニル基、ナフチル基、アントラニル基、フェナントレン基等が挙げられる。
ここで、式(t)及び式(u)中、*は隣接するアミノ酸残基との結合部位であり、***はチオエーテル結合の相手方のアミノ酸残基の炭素原子との結合部位であり、x2は0以上の整数であり、x2個の炭素原子及びβ位の炭素原子は、-NH2、-SH、-COOH、C1-C10のアルキル基、及びC6-C14のアリール基からなる群から選択される1つ以上の置換基によって置換されていてもよく、
ただし、上記アミノ酸残基Xaと上記アミノ酸残基Xbのうち一方が上記(p)又は(q)においてx1が0のアミノ酸残基であるとき、上記アミノ酸残基Xaと上記アミノ酸残基Xbのうち他方は、L-システイン残基又はD-システイン残基ではない。x2は0~10の整数であってもよく、0~6の整数であってもよく、1~4の整数であってもよい。
C1-C10のアルキル基としては、メチル基、エチル基、n-プロピル基、i-プロピル基、n-ブチル基、i-ブチル基、t-ブチル基等が挙げられる。また、C6-C14のアリール基としては、フェニル基、ナフチル基、アントラニル基、フェナントレン基等が挙げられる。
例えば、ペニシラミン残基は、α炭素と硫黄原子とが1つの炭素原子により隔てられている。ペニシラミン残基においては、以下の構造式に示すとおり、α炭素と硫黄原子とは、-C(CH3)2-により連結されているが、α炭素と硫黄原子とを結ぶ鎖に含まれていない2つのメチル基の炭素原子はカウントされないためである。システイン残基も、同様に、α炭素と硫黄原子とが1つの炭素原子により隔てられている。ホモシステイン残基においては、α炭素と硫黄原子とが2つの炭素原子により隔てられている。
なお、システイン及びペニシラミンは、ラセミ化傾向が、ホモシステイン等の他の硫黄原子含有アミノ酸よりも強い。このため、ホモシステイン残基等、炭素原子数についての上記規定を満たすアミノ酸を用いた方が、システイン、ペニシラミン等を用いた場合と比べて立体構造の制御上有利であり、インテグリン結合性が低い又はインテグリン活性を有しない立体異性体の割合を低減できるために単位量当たりのインテグリン結合性を向上できる傾向にある。
なお、以下の構造式において、*は隣接するアミノ酸残基との結合部位を表す。
例えば、本開示に係る環状ペプチド中の固定化官能基を、保持材中の官能基と反応させることにより、本開示に係る環状ペプチドを保持材に結合させることができる。例えば、本開示に係る環状ペプチドが固定化官能基としてリシン残基のアミノ基を有する場合、アミノ基を保持材上のカルボキシ基と反応させてアミド結合を形成することにより、環状ペプチドを保持材に固定できる。
また、保持材は好ましくは多孔質であり、より好ましくは多孔質膜又は多孔質粒子であり、さらに好ましくは多孔質粒子である。
本開示に係る環状ペプチドを固定化する際のpH条件は特に限定されず、酸性、中性、及び、アルカリ性のいずれでもよく、例えば、使用する溶媒(分散媒)に合わせて適宜設定することができる。
例えば、アルカリ性にする場合は、DBU(diazabicycloundecene;ジアザビシクロウンデセン)やTEA(triethylamine;トリエチルアミン)等の塩基をDMSO(dimethyl sulfoxide;ジメチルスルホキシド)又はアルコールに添加してもよい。
培養成分は、これらの成分のほか、D-グルコースなどの糖類、ピルビン酸ナトリウム、フェノールレッドなどのpH指示薬、プトレシン、抗生物質などを含んでいてもよい。
表3~表7に記載の環状ペプチド1~146、並びに以下の表8に記載の環状ペプチド147及び148を、それぞれ、全自動ペプチド合成装置(PSSM-8、(株)島津製作所製)を用いて合成した。なお、実施例において作製した環状ペプチドに含まれるアミノ酸残基について光学異性体が存在する場合、アミノ酸残基はいずれもL体である。つまり、例えば、実施例で作製したペプチド中におけるDの表記は、L-アスパラギン酸残基を表す。表8において、括弧内に記載されたアミノ酸残基は、チオエーテル結合による分子内架橋に関与しているアミノ酸残基を示す。
GEヘルスケア社製の表面プラズモン共鳴装置であるBiacore3000に市販のCM5(カルボキシメチルデキストラン導入タイプ、GEヘルスケア社製))センサーチップをセットし、SPR(surface plasmon resonance;表面プラズモン共鳴)用HEPES(4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid;ヘペス)緩衝液(20mM HEPES-HCl、150mM NaCl、pH7.4)を10μL/minの流速で安定させ、0.2MのEDC(1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide;1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド)と0.04MのNHS(N-Hydroxysuccinimide;N-ヒドロキシコハク酸イミド)混合水溶液を70μL添加した。ここで、濃度の単位Mはmol/Lを表し、以下同様である。その後、HEPES緩衝液にて0.2g/Lに希釈した上記の各環状ペプチドの試料液20μLをセンサーチップに供給し、その後、エタノールアミン溶液によってブロッキング処理を施し、水酸化ナトリウム水溶液にて洗浄して、固定化を行った。ただし、固定化官能基としてのアミノ基を有するリシン残基数が0である環状ペプチド125、126及び127についてのみ、センサーチップに供給する際の試料液の量を20μLではなく、500μLとした。さらに、同センサーチップの別流路には試料を固定化せずに、0.2MのEDCと0.04MのNHS混合水溶液を70μL添加した後、ブロッキング処理と洗浄処理を行った。得られた固定化センサーチップを、以下「固定化センサーチップA」という。
上記(1)で作製した固体化センサーチップAの各流路に、25℃にて、5mMとなるように塩化マグネシウムを加えたへぺス(HEPES)緩衝液を用いて30nMに希釈したヒトインテグリンαvβ5を10分間添加した後、上記ヘペス緩衝液(5mMの塩化マグネシウムを含有)をランニングバッファーとして30分間流し、Biacore3000による測定を行った。その後、0.5MのEDTA水溶液を10分間各流路に流すことにより、ヒトインテグリンαvβ5を除去する再生処理を行った。上記の、インテグリンを10分間添加すること、ランニングバッファーを30分間流すこと、Biacore3000により測定を行うこと、及び0.5MのEDTA水溶液により再生処理を行うことからなる測定処理を、さらに、100nMのヒトインテグリンαvβ5、300nMのヒトインテグリンαvβ5、及び1000nMのヒトインテグリンαvβ5についても同様にして行った。各濃度のヒトインテグリンαvβ5を流した際における環状ペプチド固定済みの流路におけるBiacore3000による測定値と環状ペプチド未固定の流路におけるBiacore3000による測定値の差分から、環状ペプチドとヒトインテグリンαvβ5との解離定数を算出し、下記の評価基準に従ってインテグリン結合性について評価した。評価基準A、B又はCであることが好ましい。
(解離定数の評価基準)
A・・・解離定数が50nM以下である。
B・・・解離定数が50nMを超え、100nM以下である。
C・・・解離定数が100nMを超え、200nM以下である。
D・・・解離定数が200nMを超える。
ランクA~Cのインテグリン結合性を示す環状ペプチドを用いることにより、環状ペプチドとインテグリンとの特異的結合が可能になり、より効率的な細胞制御が可能となる。
環状ペプチドの分子安定性は、アルカリ処理した環状ペプチド水溶液をLC/MS(Liquid Chromatography Mass Spectroscopy;液体クロマトグラフィー質量分析法)により分析することで評価した。
アルカリ処理は次の方法で行った。500μMの環状ペプチド水溶液を調製し、この水溶液に当量の1M水酸化ナトリウム水溶液を加え、15℃にて3時間インキュベートすることでアルカリ処理環状ペプチド水溶液を得た。アルカリ処理前の環状ペプチドのLC/MSにおける全ピークの総面積を100%とし、アルカリ処理環状ペプチド水溶液のLC/MSにおける全ピークの総面積の割合を求めることにより、環状ペプチド残存率を算出し、以下の評価基準に従って分子安定性を評価した。評価基準A、B又はCであることが好ましい。
A・・・環状ペプチドの残存率が70%以上である
B・・・環状ペプチドの残存率が50%以上70%未満である
C・・・環状ペプチドの残存率が30%以上50%未満である
D・・・環状ペプチドの残存率が30%未満である
・LC装置:Prominenceシリーズ(ポンプ、カラムオーブン、オートサンプラー、検出器)((株)島津製作所製)
・MS検出器:LC/MS2010EV((株)島津製作所製)
・カラム: Cadenza CD-C18、内径2.0mm×長さ250mm、粒子径3μm(インタクト(株)製)
・溶離液A:10mM ギ酸アンモニウムを溶質として含み、溶媒は水100%の溶液(pH3)
・溶離液B:10mM ギ酸アンモニウムを溶質として含み、溶媒はアセトニトリル/水=90/10の溶液(pH3)
・流速:0.2 mL/min
・注入量:4μL
・グラジエント:0-30%:溶離液B(0-30分)、100%:溶離液B(30-40分)、0%:溶離液B(40-60分)
・カラム温度:45℃
・イオン化法:ESI(Electrospray Ionization;エレクトロスプレーイオン化)ポジティブ、ESIネガティブ
ランクA~Cの分子安定性を示す環状ペプチドを用いることにより、環状ペプチドを長期間又は繰り返し用いても細胞と特異的に結合することが出来、長期間又は繰り返しのプロセスに用いた場合でも細胞を制御することが可能となり、コストをより低減することができる。
(ポリスチレンプレートの表面処理)
プラズマ処理装置((株)魁半導体社製SCB-106)を用いて、アンモニアガス中で、ガス圧力10Pa、出力700W、処理時間5分の条件で、ポリスチレン製6ウェルプレート(コーニング社製)の表面処理を実施した。
カルボキシメチルデキストランナトリウム(名糖産業(株)製、商品名:「CMD」、分子量:100万、以降「CMD」ともいう)0.5gに蒸留水9.5gを加え、攪拌することでCMDを十分に溶解させ、5重量%のCMD溶液を調製した。
次いで、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩(ナカライテスク株式会社製、以降「EDC」とも称する)383.4mgに蒸留水1mLを加えてEDC溶液を調製した。次いで、N-ヒドロキシこはく酸イミド(富士フイルム和光純薬(株)製、以降「NHS」とも称する)57.5mgに蒸留水1mLを加えてNHS溶液を調製した。
0.2mgの環状ペプチド92にHBS-Nバッファー(GEヘルスケアジャパン(株)製)1mLを加えて環状ペプチド溶液を調製した。次いで、76.7mgのEDCに蒸留水1mLを加えてEDC溶液を調製した。次いで、11.5mgのNHSに蒸留水1mLを加えてNHS溶液を調製した。次いで、エタノールアミン(BIO RAD社製、商品名「ProteOn エタノールアミン HCL」)1mLに蒸留水1mLを加えてエタノールアミン溶液を調製した。
上記で作製したリガンドコーティングウェルを滅菌バッグに密閉し、ラジエ工業(株)の照射施設1号機にて線量25kGyの条件でγ線滅菌処理を実施した。これにより、γ線照射済み細胞足場材(以下、「照射済み細胞足場材A」と称する)を得た。
iPS細胞はFujifilm Cellular Dynamics社によって樹立された01434クローンを使用した。iPS細胞を、照射済み細胞足場材Aを表面に有する培養ポリスチレンプレートにsplit rate = 1:6で播種し、フィーダーフリーのES及びiPS細胞培養用培地(Stem Cell Technologies社製、製品名:mTeSR1)中で3日間培養したのち、細胞解離試薬(Thermo Fisher社製、製品名TrypLE Select)による処理によりiPS細胞を単細胞剥離して回収した。得られた細胞懸濁液から、生死細胞オートアナライザー(ベックマンコールター社製、製品名:Vi-Cell XR)を用いて細胞数を計測し、細胞が増殖したか否かを判定した。得られた結果を、以下の判定基準に従って評価した。評価結果を表14に示す。なお、表14中、Hcyはホモシステイン残基を表し、Dab(acetyl)は、2-アミノ-4-アセチルアミノ-ブタン酸残基を表し、Dap(acetyl)は、2-アミノ-3-アセチルアミノ-プロパン酸残基を表す。
A: iPS細胞の増殖が確認された。
B: iPS細胞の増殖は確認されなかった。
本明細書に記載された全ての文献、特許出願、および技術規格は、個々の文献、特許出願、および技術規格が参照により取り込まれることが具体的かつ個々に記された場合と同程度に、本明細書中に参照により取り込まれる。
Claims (18)
- RGD配列を含みかつアミノ酸残基数が8~14である環状セグメントを含み、
前記環状セグメントの最もN末端側に位置するアミノ酸残基Xaと前記環状セグメントの最もC末端側に位置するアミノ酸残基Xbとの間でチオエーテル結合が形成されており、
ただし、上記アミノ酸残基Xaと上記アミノ酸残基Xbのうち一方がシステイン残基であるとき、上記アミノ酸残基Xaと上記アミノ酸残基Xbのうち他方のアミノ酸残基のα炭素と、上記システイン残基の硫黄原子とは、5個以上の原子により隔てられている、
環状ペプチドであって、
前記アミノ酸残基X a と前記アミノ酸残基X b のうち一方が、以下の(p)又は(q)のアミノ酸残基であり、
ここで、式中、*は隣接するアミノ酸残基との結合部位であり、**はチオエーテル結合の相手方のアミノ酸残基の硫黄原子との結合部位であり、x1は0以上の整数であり、x1個の炭素原子及びβ位の炭素原子は、-NH 2 、-SH、-COOH、C 1 -C 10 のアルキル基、及びC 6 -C 14 のアリール基からなる群から選択される1つ以上の置換基によって置換されていてもよく、
**-Lは、**-(CH 2 ) y1 -C(=O)-又は**-(CH 2 ) y1 -C(=O)-NH-であり、y1は0以上10以下の整数を表し、
前記アミノ酸残基X a と前記アミノ酸残基X b のうち他方が、以下の(t)又は(u)の残基であり、
ここで、式中、*は隣接するアミノ酸残基との結合部位であり、***はチオエーテル結合の相手方のアミノ酸残基の炭素原子との結合部位であり、x2は0以上の整数であり、x2個の炭素原子及びβ位の炭素原子は、-NH 2 、-SH、-COOH、C 1 -C 10 のアルキル基、及びC 6 -C 14 のアリール基からなる群から選択される1つ以上の置換基によって置換されていてもよく、
ただし、前記アミノ酸残基X a と前記アミノ酸残基X b のうち一方が上記(p)又は(q)においてx1が0のアミノ酸残基であるとき、前記アミノ酸残基X a と前記アミノ酸残基X b のうち他方は、L-システイン残基又はD-システイン残基ではない、環状ペプチド。 - 前記環状セグメントと上記環状ペプチドのN末端との間の第1のセグメント、及び前記環状セグメントと上記環状ペプチドのC末端との間の第2のセグメントのうち少なくとも一方をさらに含み、前記第1のセグメント及び前記第2のセグメントのうち少なくとも一方が、側鎖に固定化官能基を有するアミノ酸残基を含む、請求項1に記載の環状ペプチド。
- 前記固定化官能基がアミノ基又はチオール基である、請求項2に記載の環状ペプチド。
- 前記側鎖に固定化官能基を有するアミノ酸残基が、L-リシン残基、D-リシン残基、L-システイン残基、D-システイン残基、L-ホモシステイン残基及びD-ホモシステイン残基からなる群から選択される、請求項2に記載の環状ペプチド。
- 前記第1のセグメント及び前記第2のセグメントの各々は、存在する場合、長さが1~20アミノ酸残基である、請求項2~請求項4のうちいずれか一項に記載の環状ペプチド。
- 前記アミノ酸残基Xaが、前記(p)又は(q)のアミノ酸残基である、請求項1~請求項5のうちいずれか一項に記載の環状ペプチド。
- 前記アミノ酸残基Xbが、前記(p)又は(q)のアミノ酸残基である、請求項1~請求項5のうちいずれか一項に記載の環状ペプチド。
- 前記環状セグメントを複数含み、各環状セグメントのアミノ酸配列は互いに同一でも異なっていてもよい、請求項1~請求項8のうちいずれか一項に記載の環状ペプチド。
- 前記複数の環状セグメント同士が、1~20アミノ酸残基長の連結部により互いに連結されている、請求項9に記載の環状ペプチド。
- 総アミノ酸残基数が8~50である、請求項1~請求項10のうちいずれか一項に記載の環状ペプチド。
- 式IIによって表される、請求項1~請求項8のうちいずれか一項に記載の環状ペプチド:
RN-XV0-X6 t0-Xp0-Xa-Xm-R-G-D-Xn-Xb-Xq0-X7 u0-Xw0-Rc (式II)
式II中、
Xaはアミノ酸残基Xaを表し、Xbはアミノ酸残基Xbを表し、
Xは任意のアミノ酸残基を表し、Xが複数である場合は、複数のXは互いに同一でも異なっていてもよく、
RNはN末端基を表し、RCはC末端基を表し、
X6及びX7は、それぞれ独立に、側鎖に固定化官能基を有するアミノ酸残基を表し、X6又はX7が複数である場合は、複数のX6又はX7は互いに同一であっても異なっていてもよく、
m及びnは、0≦m≦9、0≦n≦9、及び3≦m+n≦9を同時に満たす整数であり、
p0及びq0は、それぞれ、0≦p0≦15、及び、0≦q0≦15を満たす整数であり、
t0及びu0は、それぞれ、0≦t0≦5、及び、0≦u0≦5を満たす整数であり、
v0及びw0は、それぞれ、0≦v0≦5、及び、0≦w0≦5を満たす整数であり、
さらに、p0、q0、t0、u0、v0、及びw0は、0≦p0+q0+t0+u0+v0+w0≦39を満たす。 - 式II中のXa-Xm-R-G-D-Xn-Xbが、Xa-Xt v5-X1-X2-R-G-D-X3-X4-X5 v6-Xt v7-Xbであり、
Xtは任意のアミノ酸残基を表し、Xtが複数存在する場合には、複数のXtは互いに同一でも異なっていてもよく、
X1はI、V、D、E、Y、L、T又はホモチロシンを表し、
X2はP、T又はSを表し、
X3はN、S、T、V、A又はホモセリンを表し、
X4はF、Y又はPを表し、
X5はR、D、E、A、T、S又はGを表し、
v5及びv7は、それぞれ独立に、0~6の整数を表し、
v6は0又は1を表す、
請求項12に記載の環状ペプチド。 - 以下の(i)~(v)のうち少なくとも1つを満たす、請求項13に記載の環状ペプチド:
(i)X1で表されるアミノ酸残基が、I、V又はTである;
(ii)X2で表されるアミノ酸残基が、Pである;
(iii)X3で表されるアミノ酸残基が、S又はTである;
(iv)X4で表されるアミノ酸残基が、Fである:
(v)v6が1を表し、X5で表されるアミノ酸基がAである。 - 前記アミノ酸残基Xaと前記アミノ酸残基Xbとによって挟まれる領域のアミノ酸配列が、IPRGDNFR(配列番号1)のアミノ酸配列と70%以上の配列同一性を有するか、あるいは、IPRGDSFA(配列番号170)、VPRGDTFA(配列番号171)、及びTPRGDTFA(配列番号172)のうちいずれかのアミノ酸配列と70%以上の配列同一性を有する、請求項1~請求項14のうちいずれか一項に記載の環状ペプチド。
- 基材及び請求項1~請求項15のうちいずれか一項に記載の環状ペプチドを含む、細胞足場材。
- 保持材及び請求項1~請求項15のうちいずれか一項に記載の環状ペプチドを含む、細胞分離材。
- 培養成分及び請求項1~請求項15のうちいずれか一項に記載の環状ペプチドを含む、培地。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2019108962 | 2019-06-11 | ||
JP2019108962 | 2019-06-11 | ||
PCT/JP2020/022558 WO2020250854A1 (ja) | 2019-06-11 | 2020-06-08 | 環状ペプチド、細胞足場材、細胞分離材、及び培地 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2020250854A1 JPWO2020250854A1 (ja) | 2020-12-17 |
JP7220782B2 true JP7220782B2 (ja) | 2023-02-10 |
Family
ID=73780900
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021526079A Active JP7220782B2 (ja) | 2019-06-11 | 2020-06-08 | 環状ペプチド、細胞足場材、細胞分離材、及び培地 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20220089647A1 (ja) |
EP (1) | EP3967704A4 (ja) |
JP (1) | JP7220782B2 (ja) |
CN (1) | CN113993882A (ja) |
WO (1) | WO2020250854A1 (ja) |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2011506273A (ja) | 2007-11-19 | 2011-03-03 | ジーイー・ヘルスケア・リミテッド | 新規イメージング法 |
US20130197189A1 (en) | 2010-06-11 | 2013-08-01 | The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate | Method For Synthesizing A Cyclic Multivalent Peptide Using A Thiol-Mediated Reaction |
WO2018115203A1 (en) | 2016-12-23 | 2018-06-28 | Bicyclerd Limited | Peptide derivatives having novel linkage structures |
JP2018527404A (ja) | 2015-06-26 | 2018-09-20 | スピベル テクノロジーズ アクティエボラーグ | 環状rgd細胞結合モチーフ及びその使用 |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2106314A1 (en) | 1991-04-05 | 1992-10-06 | John P. Burnier | Platelet aggregation inhibitors having high specification for gpiibiiia |
KR100932827B1 (ko) | 2001-07-10 | 2009-12-21 | 지이 헬스케어 에이에스 | 펩티드계 화합물 |
BRPI0417037A (pt) * | 2003-12-24 | 2007-02-06 | Pfizer Prod Inc | métodos de classificação de toxicidade retiniana |
JP7009200B2 (ja) | 2017-12-20 | 2022-01-25 | 三菱パワー株式会社 | スプレイパイプ、それを備えた脱硫装置およびその点検方法 |
-
2020
- 2020-06-08 EP EP20821877.6A patent/EP3967704A4/en active Pending
- 2020-06-08 WO PCT/JP2020/022558 patent/WO2020250854A1/ja unknown
- 2020-06-08 CN CN202080042693.4A patent/CN113993882A/zh active Pending
- 2020-06-08 JP JP2021526079A patent/JP7220782B2/ja active Active
-
2021
- 2021-12-09 US US17/643,533 patent/US20220089647A1/en active Pending
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2011506273A (ja) | 2007-11-19 | 2011-03-03 | ジーイー・ヘルスケア・リミテッド | 新規イメージング法 |
US20130197189A1 (en) | 2010-06-11 | 2013-08-01 | The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate | Method For Synthesizing A Cyclic Multivalent Peptide Using A Thiol-Mediated Reaction |
JP2018527404A (ja) | 2015-06-26 | 2018-09-20 | スピベル テクノロジーズ アクティエボラーグ | 環状rgd細胞結合モチーフ及びその使用 |
WO2018115203A1 (en) | 2016-12-23 | 2018-06-28 | Bicyclerd Limited | Peptide derivatives having novel linkage structures |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
IVANOV, B. et al.,Synthesis and Use of a New Bromoacetyl-Derivatized Heterotrifunctional Amino Acid for Conjugation of Cyclic RGD-Containing Peptides Derived from Human Bone Sialoprotein,Bioconjugate Chemistry,1995年,Vol. 6,P. 269-277 |
KOEHLER, K. C. et al.,Development of a Maleimide Amino Acid for Use as a Tool for Peptide Conjugation and Modification,International Journal of Peptide Research and Therapeutics,2013年,Vol. 19,P. 265-274 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3967704A1 (en) | 2022-03-16 |
US20220089647A1 (en) | 2022-03-24 |
WO2020250854A1 (ja) | 2020-12-17 |
JPWO2020250854A1 (ja) | 2020-12-17 |
EP3967704A4 (en) | 2022-08-31 |
CN113993882A (zh) | 2022-01-28 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US10266566B2 (en) | Protease-resistant peptide ligands | |
RU2007141625A (ru) | Вариантные формы уратоксидазы и их применение | |
WO2009141384A2 (en) | Process for the purification of factor vii polypeptides using affinity resins comprising specific ligands | |
JP7230197B2 (ja) | 環状ペプチド、細胞足場材、細胞分離材、及び、培地 | |
JP5681285B2 (ja) | 細胞培養コーティングのためのプレポリマー調製品 | |
US10703778B2 (en) | Cyclic peptide, affinity chromatography support, labeled antibody, antibody drug conjugate, and pharmaceutical preparation | |
JP7220782B2 (ja) | 環状ペプチド、細胞足場材、細胞分離材、及び培地 | |
WO2015064661A1 (ja) | ポリペプチド組成物およびこれを用いた多能性幹細胞の培養方法 | |
JP6906547B2 (ja) | ミックスモードアフィニティクロマトグラフィー用担体 | |
JP6024101B2 (ja) | 血液凝固因子又は細胞接着因子に対する吸着剤及び精製方法 | |
WO2017069269A1 (ja) | 環状ペプチド、アフィニティクロマトグラフィー担体、標識化抗体、抗体薬物複合体、および医薬製剤 | |
CN109790202A (zh) | 环肽、亲和层析载体、标记抗体、抗体药物复合体及药物制剂 | |
WO2013002311A1 (ja) | 幹細胞培養用基材及びそれを用いた培養方法 | |
CA2607863A1 (en) | Affinity adsorbents for fibrinogen | |
JPWO2015064453A1 (ja) | チオール基を有するd−体またはl−体アミノ酸誘導体の製造方法 | |
JP6588535B2 (ja) | 短鎖ペプチド固定化担体の製造方法および短鎖ペプチド固定化担体 | |
JP2008142004A (ja) | 肝細胞培養基質 | |
JP2007302584A (ja) | ケージドペプチド |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20211019 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220927 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20221111 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20230110 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20230131 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7220782 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |